RU2749424C1 - Способ получения лекарственного средства, обладающего антикоагулянтной активностью - Google Patents
Способ получения лекарственного средства, обладающего антикоагулянтной активностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2749424C1 RU2749424C1 RU2020119196A RU2020119196A RU2749424C1 RU 2749424 C1 RU2749424 C1 RU 2749424C1 RU 2020119196 A RU2020119196 A RU 2020119196A RU 2020119196 A RU2020119196 A RU 2020119196A RU 2749424 C1 RU2749424 C1 RU 2749424C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sodium chloride
- chloride solution
- heparin
- sodium
- solution
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу получения активной фармацевтической субстанции гепарина натрия. Способ включает экстракцию измельченной слизистой оболочки тонкого кишечника свиней 0,5-0,6 М раствором натрия хлорида, добавление субтилизина до конечной концентрации 0,2-0,4 об.%, ферментативный гидролиз при 50-70°С и рН 7,0-9,0 в течение 6 ч с последующей инактивацией фермента при 90°С в течение 30 мин. Осуществляют центрифугирование экстракта и осаждение балластных примесей при рН 2,5-4,5 и 70°С в течение 30 мин. Осуществляют сепарацию и сорбцию полупродукта гепарина из осветленного экстракта на анионообменном хроматографическом сорбенте, предварительно уравновешенном 0,6 М раствором натрия хлорида, промывку 0,6 М раствором натрия хлорида, удаление балластных веществ с сорбента 0,9 М раствором натрия хлорида и десорбцию раствором натрия хлорида с концентрацией 1,4 М. Элюат диафильтруют водой для инъекций, ультрафильтруют на кассетах с пределом отсечения 5 кДа с добавлением ацетата натрия до содержания последнего 3,0-6,0 мас.%. Раствор полупродукта после ультрафильтрации подвергают стерилизующей фильтрации и осаждению метанолом до окончательной массовой доли последнего - 35-38%. Полупродукт выдерживают при температуре 5±3°C в течение 18±0,5 ч, центрифугируют и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Изобретение позволяет увеличить выход фракций гепарина натрия, обладающих антикоагулятной активностью. 3 пр., 2 ил.
Description
Настоящее изобретение относится к области медицины, к области получения лекарственного средства, обладающего антикоагулянтной активностью, а именно к способу получения гепарина натрия из слизистой оболочки тонкого кишечника сельскохозяйственных парнокопытных животных.
Гепарин натрия представляет собой вещество, содержащее натриевую соль сульфатированного гликозаминогликана из тканей млекопитающих. При полном гидролизе вещества образуется D-глюкозамин, D-глюкуроновая кислота, L-идуроновая кислота, уксусная кислота и серная кислота (Onishi A, St Ange K, Dordick JS, Linhardt RJ. Heparin and anticoagulation. Front Biosci (Landmark Ed). 2016 Jun 1; 21: 1372-92).
Антикоагуляционный эффект гепарина связан с прямым действием на систему свертывания крови за счет образования комплексов с многими факторами гемокоагуляции и проявляется в торможении I, II и III фаз свертывания. Сам гепарин активируется только в присутствии антитромбина III.
Гепарин натрия широко используется в медицине в качестве лекарственного средства, при этом являясь сырьем для производства низкомолекулярных гепаринов. Показаниями к применению гепарина натрия являются тромбозы, тромбоэмболии (профилактика и лечение), предупреждение свертывания крови (в сердечно-сосудистой хирургии), тромбозы коронарных сосудов, диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови, послеоперационный период у больных с тромбоэмболиями в анамнезе. Профилактика свертывания крови во время операций с использованием экстракорпоральных методов кровообращения, заболевания поверхностных вен: варикозное расширение вен, хроническая венозная недостаточность и связанные с ней осложнения (тромбофлебит, перифлебит), тупые травмы и ушибы мягких тканей, подкожные гематомы, в том числе гематомы после операций на венах, флебэктомии, локализованные инфильтраты и отеки мягких тканей.
Изобретение может использоваться при получении лекарственного средства гепарина натрия в промышленных масштабах, в том числе для использования в качестве исходного сырья для производства лекарственных средств из группы низкомолекулярных гепаринов.
Гепарин получают из различных органов сельскохозяйственных животных - печень, легкие, но предпочтительно получают из слизистой оболочки тонкого кишечника свиней, ввиду отсутствия риска контаминации инфекционными агентами, вызывающими нейродегенеративные прионные болезни.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ получения гепарина из слизистой оболочки тонкого кишечника (мукозы) свиней (RU 2612813, опубл. 13.03.2017). Способ получения гепарина заключается в следующем. Замороженную слизистую оболочку тонкого кишечника свиней (мукозу), которая хранится не более 6 месяцев при температуре -20°С, размораживают, гомогенизируют, заливают 0,6 М раствором натрия хлорида, добавляют протеолитический фермент - алкалазу до конечной концентрации 0,1-0,5% и ведут ферментативный гидролиз при температуре 65°С и рН 8,5-8,6 в течение 6 часов, по истечении ферментативного гидролиза проводят инактивацию фермента при температуре 90°С в течение 15 минут, гидролизат охлаждают до температуры 15-20°С и центрифугируют, для дополнительной очистки гидролизата от балластных веществ белковой природы к надосадочной жидкости добавляют концентрированную соляную кислоту до рН 3,0, нагревают до температуры 70°С и выдерживают в течение 30 минут, образовавшийся осадок удаляют центрифугированием, после этого ведут сорбцию целевого продукта в динамическом режиме из надосадочной жидкости на анионите YMC-BioPro Q75, анионит предварительно уравновешивают 0,6 М раствором натрия хлорида, после завершения сорбции анионит промывают 0,6 М раствором натрия хлорида, удаление балластных веществ с анионита проводят 0,9 М раствором натрия хлорида, гепарин с анионита десорбируют раствором натрия хлорида с концентрацией 1,4 М с последующей ультрафильтрацией.
Недостатком указанного способа получения гепарина является присутствие родственных примесей антикоагулятно неактивного гепарина, что существенно повышает суммарную антикоагулятную активность на единицу массы вещества и, в свою очередь, не позволяет его использование его в качестве сырья для производства низкомолекулярных гепаринов, без проведения дополнительных операций очистки. Таким образом, данный способ позволяет получить гепарин натрия, который, тем не менее, не соответствует требованиям, предъявляемым к активной фармацевтической субстанции. Также к существенным недостаткам указанного способа получения гепарина является использование дорогостоящего фермента Alcalase® 2,5L. Вышеуказанные недостатки значительно сокращают эффективность и экономичность технологического процесса.
Задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить способ получения лекарственного средства гепарина натрия из слизистой оболочки тонкого кишечника сельскохозяйственных парнокопытных животных с использованием высокоэффективного и недорогого бактериального фермента субтилизин на стадии экстракции, редукции антикоагулянтно неактивных фракций гепарина натрия путем добавления ацетата натрия в пермеат с последующим осаждением метанолом и получением активной фармацевтической субстанции гепарина натрия.
Техническим результатом настоящего изобретения является: увеличение выхода фракций гепарина натрия, обладающих абсолютной антикоагулятной активностью, и, таким образом, в том числе, возможностью использования его в качестве сырья для производства лекарственных средств из группы низкомолекулярных гепаринов.
Согласно настоящему изобретению предложен способ получения гепарина с использованием бактериальной сериновой протеиназы - субтилизина, хроматографической очисткой на сильном анионообменном сорбенте. На финальных стадиях получения концентрируют элюат ультрафильтрацией с добавлением ацетата натрия. Раствор полупродукта после ультрафильтрации подвергают стерилизующей фильтрации и осаждению метанолом с выдерживанием смеси на холоде, центрифугированием и высушиванием осадка полупродукта в вакуум-сушильном шкафу.
С целью достижения указанного результата предложен способ, который включает следующие стадии:
Замороженную или жидкую слизистую оболочку тонкого кишечника сельскохозяйственных парнокопытных животных гомогенизируют и экстрагируют 0,5-0,6 М раствором натрия хлорида, добавление бактериального субтилизина до конечной концентрации 0,2-0,4% по объему. Ведут ферментативный гидролиз при температуре 50-70°С и рН 7,0-9,0 в течение 4-6 часов, после чего фермент инактивируют при температуре 90°С в течение 15-30 минут. Экстракт центрифугируют. Балластные примеси из осветленного экстракта удаляют осаждением при рН 2,5-4,0 и температуре 50-70°С в течение 30 минут. Образовавшийся осадок удаляют сепарацией. После этого ведут сорбцию целевого продукта из освобожденного от балластных примесей осветленного экстракта на анионообменном хроматографическом сорбенте. Могут быть использованы любые коммерчески доступные аниониты. Сорбент предварительно уравновешивают 0,6 М раствором натрия хлорида. После завершения сорбции сорбент промывают 0,6 М раствором натрия хлорида, удаляют балластные вещества с сорбента 0,9 М раствором натрия хлорида, гепарин с сорбента десорбируют раствором натрия хлорида с концентрацией 1,4 М. Элюат диафильтруют водой для инъекций и концентрируют ультрафильтрацией с добавлением ацетата натрия до содержания последнего 3,0-6,0% по массе. Раствор полупродукта после ультрафильтрации подвергают стерилизующей фильтрации и осаждению метанолом до окончательной массовой доли последнего - 35-38%. После чего смесь выдерживается при температуре 5±3°С в течение 18±0,5 часов и центрифугируется. Полученный полупродукт высушивается в вакуум-сушильном шкафу.
Использование бактериальной сериновой протеиназы - субтилизина, хроматографического разделения на анионообменном сорбенте и дополнительных стадий очистки элюата осаждением метанолом при добавлении ацетата натрия позволяют эффективно фракционировать полупродукт от родственных примесей антикоагулятно неактивного гепарина, что существенно повышает суммарную антикоагулятную активность на единицу массы вещества, тем самым позволяя снизить себестоимость готового продукта и получить лекарственное средство гепарин натрия высокой степени чистоты, полностью соответствующее требованиям Государственной Фармакопеи Российской Федерации.
Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами
Пример 1
297,2 кг измельченной слизистой оболочки тонкого кишечника свиней, экстрагируют 0,5 М раствором натрия хлорида с рН 7,0, гомогенизируют и добавляют порошок субтилизина до конечной концентрации 0,2 об.%. Ферментативный гидролиз ведут 6 ч при температуре 50°С. По завершении гидролиза смесь нагревают до 90°С и выдерживают в течение 30 минут. Гидролизат центрифугируют. Получают 1033,4 л экстракта. В экстракт добавляют концентрированную хлористоводородную кислоту до достижения раствором экстракта рН=2,5, нагревают до 70°С и выдерживают 30 минут. Выпавший осадок отделяют центрифугированием. Фугат пропускают через хроматографический сорбент TOSOH TOYOPEARL GigaCap Q-650, уравновешенный 0,6 М раствором натрия хлорида. По завершении сорбции анионит промывают 0,6 М раствором натрия хлорида. Для удаления балластных примесей анионит промывают 0,9 М раствором натрия хлорида. Элюцию гепарина проводят раствором натрия хлорида с концентрацией 1,4 М. Элюат отбирают фракциями. Фракции, содержащие гепарин, объединяют. Получают 21,25 л элюата.
Элюат очищают от низкомолекулярных примесей, включая избыток натрия хлорида, в режиме диаультрафильтрации с добавлением ацетата натрия до содержания последнего 3,0 мас. % на кассетах с пределом отсечения по молекулярной массе 5 кДа.
Раствор полупродукта после ультрафильтрации подвергают стерилизующей фильтрации и осаждению метанолом до окончательной массовой доли последнего - 35%. После чего смесь выдерживается при температуре 4°С в течение 18±0.5 часов и центрифугируется. Полученный полупродукт высушивается в вакуум-сушильном шкафу.
Получают 0,063 кг активной фармацевтической субстанции гепарина натрия с антикоагулянтной активностью 262 МЕ/мг.
Пример 2
265,1 кг измельченной слизистой оболочки тонкого кишечника свиней, экстрагируют 0,56 М раствором натрия хлорида с рН 8,1, гомогенизируют и добавляют порошок субтилизина до конечной концентрации 0,3 об.%. Ферментативный гидролиз ведут 6 ч при температуре 60°С. По завершении гидролиза смесь нагревают до 90°С и выдерживают в течение 30 минут. Гидролизат центрифугируют. Получают 924,3 л экстракта. В экстракт добавляют концентрированную хлористоводородную кислоту до достижения раствором экстракта рН=3,5, нагревают до 70°С и выдерживают 30 минут. Выпавший осадок отделяют центрифугированием. Фугат пропускают через хроматографический сорбент Bio Rad UNOsphere™ Q Media, уравновешенный 0,6 M раствором натрия хлорида. По завершении сорбции анионит промывают 0,6 М раствором натрия хлорида. Для удаления балластных примесей анионит промывают 0,9 М раствором натрия хлорида. Элюцию гепарина проводят раствором натрия хлорида с концентрацией 1,4 М. Элюат отбирают фракциями. Фракции, содержащие гепарин, объединяют. Получают 20,73 л элюата.
Элюат очищают от низкомолекулярных примесей, включая избыток натрия хлорида, в режиме диаультрафильтрации с добавлением ацетата натрия до содержания последнего 4,4 мас.% на кассетах с пределом отсечения по молекулярной массе 5 кДа.
Раствор полупродукта после ультрафильтрации подвергают стерилизующей фильтрации и осаждению метанолом до окончательной массовой доли последнего - 36%. После чего смесь выдерживается при температуре 6°С в течение 18±0,5 часов и центрифугируется. Полученный полупродукт высушивается в вакуум-сушильном шкафу.
Получают 0,0586 кг активной фармацевтической субстанции гепарина натрия с антикоагулянтной активностью 279 МЕ/мг.
Пример 3
284,5 кг измельченной слизистой оболочки тонкого кишечника свиней, экстрагируют 0,6 М раствором натрия хлорида с рН 9,0, гомогенизируют и добавляют порошок субтилизина до конечной концентрации 0,4 об.%. Ферментативный гидролиз ведут 6 ч при температуре 70°С. По завершении гидролиза смесь нагревают до 90°С и выдерживают в течение 30 минут. Гидролизат центрифугируют. Получают 990,7 л экстракта. В экстракт добавляют концентрированную хлористоводородную кислоту до достижения раствором экстракта рН=4,5, нагревают до 70°С и выдерживают 30 минут. Выпавший осадок отделяют центрифугированием. Фугат пропускают через хроматографический сорбент TOSOH TOYOPEARL GigaCap Q-650, уравновешенный 0,6 М раствором натрия хлорида. По завершении сорбции анионит промывают 0,6 М раствором натрия хлорида. Для удаления балластных примесей анионит промывают 0,9 М раствором натрия хлорида. Элюцию гепарина проводят раствором натрия хлорида с концентрацией 1,4 М. Элюат отбирают фракциями. Фракции, содержащие гепарин, объединяют. Получают 21,13 л элюата.
Элюат очищают от низкомолекулярных примесей, включая избыток натрия хлорида, в режиме диаультрафильтрации с добавлением ацетата натрия до содержания последнего 6,0 мас.% на кассетах с пределом отсечения по молекулярной массе 5 кДа.
Раствор полупродукта после ультрафильтрации подвергают стерилизующей фильтрации и осаждению метанолом до окончательной массовой доли последнего - 38%. После чего смесь выдерживается при температуре 5°С в течение 18±0,5 часов и центрифугируется. Полученный полупродукт высушивается в вакуум-сушильном шкафу.
Получают 0,062 кг активной фармацевтической субстанции гепарина натрия с антикоагулянтной активностью 268 МЕ/мг.
На фиг. 1 представлена типичная хроматограмма гепарина натрия с родственной примесью антикоагулянтно неактивной фракции; на фиг. 2 представлена типичная хроматограмма лекарственного средства гепарин натрия, полученного по способу, предложенному в настоящем изобретении.
Claims (1)
- Способ получения активной фармацевтической субстанции гепарина натрия, включающий экстракцию измельченной слизистой оболочки тонкого кишечника свиней 0,5-0,6 М раствором натрия хлорида, добавление субтилизина до конечной концентрации 0,2-0,4 об.%, ферментативный гидролиз при температуре 50-70°С и рН 7,0-9,0 в течение 6 часов с последующей инактивацией фермента при температуре 90°С в течение 30 минут, центрифугирование экстракта и осаждение балластных примесей при рН 2,5-4,5 и температуре 70°С в течение 30 минут, сепарацию и сорбцию полупродукта гепарина из осветленного экстракта на анионообменном хроматографическом сорбенте, предварительно уравновешенном 0,6 М раствором натрия хлорида, промывку 0,6 М раствором натрия хлорида, удаление балластных веществ с сорбента 0,9 М раствором натрия хлорида и десорбцию раствором натрия хлорида с концентрацией 1,4 М, диафильтрацию водой для инъекций, ультрафильтрацию на кассетах с пределом отсечения 5 кДа с добавлением ацетата натрия до содержания последнего 3,0-6,0 мас.%, стерилизующую фильтрацию, осаждение метанолом до окончательной массовой доли последнего - 35-38%, выдерживание при температуре 5±3°C в течение 18±0,5 часов, центрифугирование и сушку в вакуум-сушильном шкафу.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020119196A RU2749424C1 (ru) | 2020-06-10 | 2020-06-10 | Способ получения лекарственного средства, обладающего антикоагулянтной активностью |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020119196A RU2749424C1 (ru) | 2020-06-10 | 2020-06-10 | Способ получения лекарственного средства, обладающего антикоагулянтной активностью |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2749424C1 true RU2749424C1 (ru) | 2021-06-10 |
Family
ID=76301583
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020119196A RU2749424C1 (ru) | 2020-06-10 | 2020-06-10 | Способ получения лекарственного средства, обладающего антикоагулянтной активностью |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2749424C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2828847C1 (ru) * | 2023-12-20 | 2024-10-21 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Дженгуро" | Способ получения гепарина |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102040671A (zh) * | 2009-10-13 | 2011-05-04 | 北京贯虹科技有限公司 | 一种超低分子量肝素的制备及纯化工艺 |
| CN105237657A (zh) * | 2015-10-30 | 2016-01-13 | 山东大学 | 一种新物种来源低分子肝素的制备方法 |
| RU2612813C1 (ru) * | 2015-12-07 | 2017-03-13 | Павел Андреевич Канаев | Способ получения гепарина |
-
2020
- 2020-06-10 RU RU2020119196A patent/RU2749424C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102040671A (zh) * | 2009-10-13 | 2011-05-04 | 北京贯虹科技有限公司 | 一种超低分子量肝素的制备及纯化工艺 |
| CN105237657A (zh) * | 2015-10-30 | 2016-01-13 | 山东大学 | 一种新物种来源低分子肝素的制备方法 |
| RU2612813C1 (ru) * | 2015-12-07 | 2017-03-13 | Павел Андреевич Канаев | Способ получения гепарина |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| VAN DER MEER J.Y. ET AL. From Farm to Pharma: An Overview of Industrial Heparin Manufacturing Methods. Molecules. 2017;22(6):1025. Published 2017 Jun 21. VOLPI N. Purification of heparin, dermatan sulfate and chondroitin sulfate from mixtures by sequential precipitation with various organic solvents. J Chromatogr B Biomed Appl. 1996 Oct 11;685(1):27-34. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2828847C1 (ru) * | 2023-12-20 | 2024-10-21 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Дженгуро" | Способ получения гепарина |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101447123B1 (ko) | 헤파린의 추출 방법 | |
| Cheng et al. | Identification and inhibitory activity against α-thrombin of a novel anticoagulant peptide derived from oyster (Crassostrea gigas) protein | |
| US4081431A (en) | Blood fractionation | |
| US4170590A (en) | Ion exchanger treatment of citrate-stabilized plasma | |
| CN108329405B (zh) | 一种树脂吸附状态下保护及纯化肝素钠的方法 | |
| JPS62502116A (ja) | 沈殿による血液凝固８因子の精製 | |
| CN1749275A (zh) | 水解鱼皮胶原蛋白的加工方法 | |
| CN1111171C (zh) | 一种肝素及其制备方法 | |
| CN107163138B (zh) | 一种人血浆蛋白α1-抗胰蛋白酶的分离纯化方法 | |
| DK163107B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et koncentrat af antihaemofilisk faktor med hoej renhed | |
| JPH0238601B2 (ru) | ||
| JPH03243601A (ja) | 血液凝固の制御能をもつムコ多糖組成物およびその製造方法 | |
| JPH0240681B2 (ru) | ||
| RU2749424C1 (ru) | Способ получения лекарственного средства, обладающего антикоагулянтной активностью | |
| DK144023B (da) | Fremgangsmaade til ekstraktion af aktive forbindelser af plasminogentypen fra placenta | |
| KR102055628B1 (ko) | 돼지 부산물을 이용한 헤파린 나트륨의 제조방법 | |
| JPH06505494A (ja) | Ｉｘ因子の調製 | |
| KR101780643B1 (ko) | 효소분해를 이용한 헤파린의 정제 방법 | |
| JPS61189228A (ja) | 血液凝固第８因子製剤の製法 | |
| KR20190061322A (ko) | 비분획 헤파린의 제조방법 | |
| CN113652414B (zh) | 一种高纯人凝血酶的制备方法 | |
| CN104725532B (zh) | 一种精确定量控制肝素/类肝素中硫酸软骨素及硫酸皮肤素含量的方法 | |
| WO2022035334A2 (en) | Method of obtaining aprotinin and product obtained thereby | |
| CN110835626A (zh) | 一种凝血酶的制备方法 | |
| US3627642A (en) | Lysozyme salts |