RU2743381C2 - Способы лечения множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза посредством т-клеточной терапии - Google Patents
Способы лечения множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза посредством т-клеточной терапии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2743381C2 RU2743381C2 RU2018112526A RU2018112526A RU2743381C2 RU 2743381 C2 RU2743381 C2 RU 2743381C2 RU 2018112526 A RU2018112526 A RU 2018112526A RU 2018112526 A RU2018112526 A RU 2018112526A RU 2743381 C2 RU2743381 C2 RU 2743381C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- allogeneic
- cells
- population
- cell population
- human patient
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 181
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 title claims abstract description 164
- 208000031223 plasma cell leukemia Diseases 0.000 title claims abstract description 129
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 title claims abstract description 125
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 title description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims abstract description 613
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 608
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 206
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 186
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 148
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims abstract description 91
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 claims abstract description 72
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 claims abstract description 72
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims abstract description 62
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims abstract description 36
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 98
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 98
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 claims description 56
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 claims description 56
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 claims description 37
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 claims description 35
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 33
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 30
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 29
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 29
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 24
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 claims description 23
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 claims description 22
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 21
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 19
- 238000009093 first-line therapy Methods 0.000 claims description 18
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 claims description 18
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 17
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 17
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 16
- 230000008901 benefit Effects 0.000 claims description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 12
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 10
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 10
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 claims description 9
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 claims description 8
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 claims description 7
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 claims description 6
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 claims description 6
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 claims description 6
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 claims description 6
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 5
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 claims description 4
- 108010081208 RMFPNAPYL Proteins 0.000 claims description 4
- 101710127857 Wilms tumor protein Proteins 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 34
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 34
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 abstract description 19
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 abstract description 9
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 abstract description 9
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 41
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 41
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 37
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 26
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 25
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 24
- 230000004044 response Effects 0.000 description 18
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 11
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 11
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 11
- 238000009096 combination chemotherapy Methods 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 8
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 8
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 7
- 229960001467 bortezomib Drugs 0.000 description 7
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 7
- 102000015094 Paraproteins Human genes 0.000 description 6
- 108010064255 Paraproteins Proteins 0.000 description 6
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 6
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 229960004942 lenalidomide Drugs 0.000 description 6
- GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N lenalidomide Chemical compound C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 6
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 5
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000979735 Homo sapiens NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 beta subcomplex subunit 8, mitochondrial Proteins 0.000 description 4
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 4
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 4
- 102100024975 NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 beta subcomplex subunit 8, mitochondrial Human genes 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 229960000688 pomalidomide Drugs 0.000 description 4
- UVSMNLNDYGZFPF-UHFFFAOYSA-N pomalidomide Chemical compound O=C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UVSMNLNDYGZFPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 4
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 3
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 3
- 102100032965 Myomesin-2 Human genes 0.000 description 3
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 3
- 230000010782 T cell mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 3
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000003339 best practice Methods 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 2
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 102000046004 human WT1 Human genes 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 206010035485 plasmacytosis Diseases 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000001562 sternum Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1H-isoindole-1,3(2H)-dione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061819 Disease recurrence Diseases 0.000 description 1
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 108010088729 HLA-A*02:01 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010035452 HLA-A1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 208000002774 Paraproteinemias Diseases 0.000 description 1
- 102000004503 Perforin Human genes 0.000 description 1
- 108010056995 Perforin Proteins 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010038486 Renal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025700 Wilms Tumor Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 1
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940112133 busulfex Drugs 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000002435 cytoreductive effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 210000002568 pbsc Anatomy 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000009118 salvage therapy Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000011255 standard chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 229960003433 thalidomide Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940107955 thymoglobulin Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464452—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/464453—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для лечения WT1(белок опухоли Вильмса 1)-положительной множественной миеломы у пациента-человека. Способ включает введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, в анализе цитотоксичности in vitro и где популяция аллогенных клеток рестриктирована по аллелю HLA, общему с пациентом-человеком. Группа изобретений также относится к способу лечения WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза. Использование данной группы изобретений обеспечивает противоопухолевую активность линий T-клеток, вызывая WT1-специфичные T-клеточные ответы, ассоциированные с повышением CD8+ и CD4+ WT1-специфичных T-клеток в крови и костном мозге этих пациентов. 2 н. и 104 з.п. ф-лы, 2 пр., 4 табл., 6 ил.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] По настоящей заявке испрашивается приоритет временных заявок на патент США № 62/216525, поданной 10 сентября 2015 года, и № 62/220641, поданной 18 сентября 2015 года, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
1. ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] Настоящее изобретение относится к способам лечения множественной миеломы у пациента-человека, включающим введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки. Настоящее изобретение также относится к способам лечения плазмоклеточного лейкоза у пациента-человека, включающим введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки.
2. УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Плазмоклеточный лейкоз (PCL) является редким и агрессивным вариантом множественной миеломы с очень неблагоприятным прогнозом (Jaffe et al., 2001, Ann Oncol 13:490-491). Вторичный и первичный плазмоклеточный лейкоз (pPCL) являются наиболее агрессивными формами плазмоклеточных дискразий. Первичный плазмоклеточный лейкоз определяют по наличию >2×109 плазматических клеток/л периферической крови или плазмоцитоза, составляющего >20% дифференциальной лейкоцитарной формулы, и он не развивается из уже существующей множественной миеломы (MM) (Jaffe et al., 2001, Ann Oncol 13:490-491; Hayman and Fonseca, 2001, Curr Treat Options Oncol 2:205-216). Однако вторичный PCL (sPCL) представляет собой лейкозную трансформацию конечной стадии MM. pPCL является редким, он присутствует лишь у 1-4% пациентов с MM (Gertz, 2007, Leuk Lymphoma 48:5-6; Noel and Kyle, 1987, Am J Med 83:1062-1068; Pagano et al., 2011, Ann Oncol 22:1628-1635; Tiedemann et al., 2008, Leukemia 22:1044-1052). Прогноз при pPCL является очень неблагоприятным с медианой общей выживаемости (OS) лишь 7 месяцев, при этом до 28 процентов пациентов умирают в течение первого месяца после постановки диагноза при стандартной химиотерапии. В случае рефрактерной или рецидивирующей множественной миеломы (sPCL) медиана общей выживаемости является даже меньшей (1,3 месяцев) (Tiedemann et al., 2008, Leukemia 22:1044-1052). Не существует излечивающих схем лечения для первичного или вторичного PCL. Из-за отсутствия крупных проспективных исследований лечение PCL основано на эмпирических рекомендациях или экстраполяции данных из литературы о множественной миеломе. Сообщают, что медиана выживаемости у пациентов с первичным PCL, которым проводят аутологичную трансплантацию стволовых клеток, составляет 28 месяцев. Аутологичную трансплантацию стволовых клеток (ауто-SCT) считают основным лечением при PCL. При ретроспективном анализе CIBMTR (Center for International Blood and Marrow Transplant Research) исход для 97 пациентов, которым проводили ауто-SCT, сравнивали с 50 пациентами, которым проводили аллогенную трансплантацию стволовых клеток (алло-SCT) с 1995 по 2006 год (Attal et al., 1996, N Engl J Med 335:91-97; Perez-Simon et al., 1998, Blood 91:3366-3371; Saccaro et al., 2005, Am J Hematol 78:288-294). Хотя кумулятивная частота рецидивов через 3 года была значимо ниже в группе аллогенной трансплантации (алло-SCT по сравнению с ауто-SCT, 38% по сравнению с 61%), TRM (связанная с трансплантацией смертность) через 3 года была значительно выше у пациентов, которым проводили аллогенную трансплантацию (алло-SCT по сравнению с ауто-SCT, 41% по сравнению с 5%). Это приводила к 3-летней OS 64% и 39% в группах ауто-SCT и алло-SCT, соответственно (Attal et al., 1996, N Engl J Med 335:91-97; Perez-Simon et al., 1998, Blood 91:3366-3371; Saccaro et al., 2005, Am J Hematol 78:288-294). Таким образом, для лечения pPCL и sPCL необходимы инновационные подходы, включающие новые способы улучшения исхода.
[0004] Лечение рецидивирующей/рефрактерной множественной миеломы (RRMM) представляет собой особую терапевтическую задачу из-за гетерогенности заболевания при рецидивировании и отсутствия четких биологически-обоснованных рекомендаций, касающихся выбора терапии спасения в различные моменты прогрессирования заболевания. Согласно критериям Международной группы по изучению множественной миеломы прогрессирующее заболевание (PD) определяют по по меньшей мере 25%-ному повышению парапротеина в сыворотке относительно низшего предела (абсолютное повышение должно составлять ≥0,5 г/дл), или парапротеина в моче (абсолютное повышение должно составлять ≥200 мг/24 часа), или по разнице уровней вовлеченной и невовлеченной свободной легкой цепи (FLC) (с аномальным соотношением FLC и разницей FLC >100 мг/л). У пациентов с отсутствием измеримых уровней парапротеина (олиго- или несекреторная миелома) для определения прогрессирования заболевания используют повышение плазматических клеток в костном мозге (повышение ≥10%), или новые очаги повреждения костей/мягких тканей, увеличивающие размер существующих повреждений, или необъяснимую концентрацию кальция в сыворотке >11,5 мг/дл. Рецидивирующую и рефрактерную множественную миелому определяют как прогрессирование заболевания во время терапии у пациентов, достигших минимального ответа (MR) или лучшего результата или прогрессирующих в течение 60 дней после последней терапии. Пациентов, никогда не достигавших, по меньшей мере, MR на исходную индукционную терапию и прогрессирующих во время терапии, определяют как "первично рефрактерных". Рецидивирующую множественную миелому определяют как заболевание у пациента с миеломой, которого ранее подвергали лечению, и у которого наблюдали PD, как определено выше, и который на момент рецидива не соответствует критериям рецидивирующей и рефрактерной или первичной рефрактерной множественной миеломы. Кроме того, цитогенетические признаки высоко риска, такие как del(17p) и t(4;14), коррелируют со сниженной выживаемостью.
[0005] Пациенты с рефрактерной или рецидивирующей и рефрактерной множественной миеломой, исчерпавшие возможности новых средств, имеют ограниченные варианты лечения и небольшую ожидаемую выживаемость. Хотя в недавнем исследовании фазы 3 MM-003 наблюдали значительные благоприятные эффекты отсутствия прогрессирования и общей выживаемости в случае помалидомида с низкими дозами дексаметазона по сравнению с высокими дозами дексаметазона у пациентов, которым не помогает бортезомиб и леналидомид. Но при медиане последующего наблюдения 15,4 месяцев выживаемость без прогрессирования составляла лишь 4,0 по сравнению с 1,9 месяцами (HR, 0,50; P<0,001), и медиана общей выживаемости составляла лишь 13,1 по сравнению с 8,1 месяцами (HR, 0,72; P=0,009) для этой выборки пациентов. В группе высокого риска помалидомид с низкими дозами дексаметазона по сравнению с высокими дозами дексаметазона улучшал выживаемость без прогрессирования у пациентов с del(17p) (4,6 по сравнению с 1,1 месяцами; HR, 0,34; P<0,001), t(4;14) (2,8 по сравнению с 1,9 месяцами; HR, 0,49; P=0,028) и стандартный риск (4,2 по сравнению с 2,3 месяцами; HR, 0,55; P<0,001). Общая выживаемость в случае лечения помалидомидом с низкими дозами дексаметазона по сравнению с высокими дозами дексаметазона составляла 12,6 по сравнению с 7,7 месяцами (HR, 0,45; P=0,008) у пациентов с del(17p), 7,5 по сравнению с 4,9 месяцами (HR, 1,12; P=0,761) при t(4;14), и 14,0 по сравнению с 9,0 месяцами (HR, 0,85; P=0,380) при стандартном риске. Частота объективного ответа была выше в случае помалидомида с низкими дозами дексаметазона, чем в случае высоких доз дексаметазона при стандартном риске (35,2% по сравнению с 9,7%) и del(17p) (31,8% по сравнению с 4,3%), и схожей при t(4;14) (15,9% по сравнению с 13,3%) (Dimopoulos et al., 2015, Haematologica pii: haematol.2014,117077, опубликованная он-лайн 6 августа 2015 года).
[0006] Пациентов с рецидивирующей множественной миеломой лечат инфузиями донорских лимфоцитов после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток, истощенных по аллогенным T-клеткам (Tyler et al., 2013, Blood 121:308-317).
[0007] Протокол исследования фазы I пациентов с рецидивирующей/рефрактерной множественной миеломой и пациентов с плазмоклеточным лейкозом, которым после аллогенной трансплантации стволовых клеток вводят WT1-специфичные T-клетки, полученные от донора (из трансплантата стволовых клеток), доступен на веб-сайте clinicaltrials.gov (NCT01758328).
[0008] Ген опухоли Вильмса 1 (WT1) исходно идентифицировали у пациентов с неоплазией почек детского возраста, опухолью Вильмса (Call et al., 1990, Cell 60:509-520). Немутантную форму WT1 исходно классифицировали как ген опухолевого супрессора, играющий роль в транскрипционной регуляции ранних промоторов генов факторов роста. Недавно WT1 описали как онкоген. WT1 гиперэкспрессирован при ряде гемобластозов, включая до 70% случаев острого миелогенного лейкоза (AML), острого лимфобластного лейкоза (ALL), хронического миелогенного лейкоза (CML) и миелодиспластического синдрома (Miwa et al., 1992, Leukemia 6:405-409). Высокий уровень WT1 в лейкобластах при AML ассоциирован с плохим ответом на химиотерапию, более высоким риском рецидивирования заболевания и меньшей вероятностью продолжительной безрецидивной выживаемости. По этим причинам экспрессия WT1 служит прогностическим маркером. Несколько исследовательских группа используют способы количественной ПЦР для мониторинга ответа заболевания и минимальной остаточной болезни (Miwa et al., 1992, Leukemia 6:405-409; Inoue et al., 1994, Blood 84:3071-3079).
[0009] Также недавно показано, что клетки MM гиперэкспрессируют WT1. Экспрессия WT1 в костном мозге коррелирует со множеством прогностических факторов, включая стадию заболевания и соотношение M-белка (Hatta et al., 2005, J Exp Clin Cancer Res 24:595-599). Клетки MM очень восприимчивы к перфорин-опосредованной цитотоксичности WT1-специфичных цитотоксических T-лимфоцитов (CTL), и экспрессии WT1 достаточно для индукции WT1-специфичной продукции ИФНγ CTL (Azuma et al., 2004, Clin Cancer Res 10:7402-7412). Также наблюдают клинические ответы при использовании иммунотерапии на основе пептида WT1. После иммунизации с помощью синтетического пептида WT1 наблюдали значительное снижение миеломной нагрузки в костном мозге и уровня M-белка в моче вместе с улучшением остеосцинтиграммы. Этот частичный ответ на вакцинацию коррелировал с экспансией функциональных WT1-специфичных CTL (цитотоксических T-лимфоцитов) и миграцией WT1-специфичных T-клеток в костный мозг (Azuma et al., 2004, Clin Cancer Res 10:7402-7412).
[0010] Цитирование ссылок в настоящем описании не следует истолковывать как признание того, что они представляют собой предшествующий уровень техники для настоящего изобретения.
3. СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0011] Настоящее изобретение относится к способам лечения WT1 (белок опухоли Вильмса 1)-положительной множественной миеломы у пациента-человека. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам лечения WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза у пациента-человека.
[0012] Настоящее изобретение относится к способам лечения WT1-положительной множественной миеломы у пациента-человека, включающим введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки.
[0013] В одном из аспектов способы лечения WT1-положительной множественной миеломы у пациента-человека включают введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где у популяции аллогенных клеток отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0014] В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0015] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0016] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0017] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0018] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro, и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0019] В некоторых вариантах осуществления популяция аллогенных клеток дополнительно демонстрирует лизис 20% или более антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, в анализе цитотоксичности in vitro. В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток дополнительно демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro. В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток дополнительно демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1 антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro. В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток дополнительно демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, и демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1 антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro.
[0020] В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы.
[0021] В различных вариантах осуществления перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку проводят терапию множественной миеломы, отличающуюся от указанной популяции аллогенных клеток. Терапия может являться аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (HSCT), аллогенной HSCT, химиотерапией злокачественных новообразований, индукционной терапией, лучевой терапией или их комбинацией для лечения множественной миеломы. В конкретном варианте осуществления аутологичная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В конкретном варианте осуществления аллогенная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. Популяцию аллогенных клеток можо получать от донора аллогенных HSCT или стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT.
[0022] В некоторых вариантах осуществления терапия является HSCT.
[0023] В конкретном варианте осуществления терапия является аутологичной HSCT. В конкретном варианте осуществления аутологичная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аутологичной HSCT.
[0024] В другом конкретном варианте осуществления терапия является аллогенной HSCT. В конкретном варианте осуществления аллогенная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В конкретном варианте осуществления популяцию аллогенных клеток получают от донора аллогенных HSCT. В другом конкретном варианте осуществления популяцию аллогенных клеток получают от или стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аллогенной HSCT.
[0025] В различных вариантах осуществления пациент-человек не получал пользу от терапии до указанного введения популяции аллогенных клеток. В конкретных вариантах осуществления, множественная миелома является рефрактерной к терапии или рецидивирует после терапии. В конкретном варианте осуществления множественная миелома является первичной рефрактерной множественной миеломой. В другом конкретном варианте осуществления множественная миелома является рецидивирующей множественной миеломой. В другом конкретном варианте осуществления множественная миелома является рецидивирующей и рефрактерной множественной миеломой. В конкретных вариантах осуществления пациент-человек прекращает терапию по причине непереносимости терапии.
[0026] В различных других вариантах осуществления перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку не проводят терапию множественной миеломы. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы.
[0027] В конкретных вариантах осуществления способов лечения WT1-положительной множественной миеломы, описанных выше, введение популяции аллогенных клеток не приводит к какой-либо реакции "трансплантат против хозяина" (GvHD) у пациента-человека.
[0028] Настоящее изобретение также относится к способам лечения WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза у пациента-человека, включающим введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки.
[0029] В одном из аспектов способы лечения WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза у пациента-человека включают введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где у популяции аллогенных клеток отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0030] В некоторых вариантах осуществления плазмоклеточный лейкоз является первичным плазмоклеточным лейкозом. В других вариантах осуществления плазмоклеточный лейкоз является вторичным плазмоклеточным лейкозом.
[0031] В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0032] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0033] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0034] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0035] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro, и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0036] В некоторых вариантах осуществления популяция аллогенных клеток дополнительно демонстрирует лизис 20% или более антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, в анализе цитотоксичности in vitro. В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток дополнительно демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro. В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток дополнительно демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1 антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro. В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток дополнительно демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, и демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1 антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro.
[0037] В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза.
[0038] В различных вариантах осуществления перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку проводят терапию плазмоклеточного лейкоза, отличающуюся от указанной популяции аллогенных клеток. Терапия может являться аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (HSCT), аллогенной HSCT, химиотерапией злокачественных новообразований, индукционной терапией, лучевой терапией или их комбинацией для лечения плазмоклеточного лейкоза. В конкретном варианте осуществления аутологичная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В конкретном варианте осуществления аллогенная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. Популяцию аллогенных клеток можно получать от донора аллогенных HSCT или стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT.
[0039] В некоторых вариантах осуществления терапия является HSCT.
[0040] В конкретном варианте осуществления терапия является аутологичной HSCT. В конкретном варианте осуществления аутологичная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аутологичной HSCT.
[0041] В другом конкретном варианте осуществления терапия является аллогенной HSCT. В конкретном варианте осуществления аллогенная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В конкретном варианте осуществления популяцию аллогенных клеток получают от донора аллогенных HSCT. В другом конкретном варианте осуществления популяцию аллогенных клеток получают из или стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аллогенной HSCT.
[0042] В различных вариантах осуществления пациент-человек не получал пользу от терапии до указанного введения популяции аллогенных клеток. В конкретных вариантах осуществления, плазмоклеточный лейкоз является рефрактерным к терапии или рецидивирует после терапии. В конкретных вариантах осуществления пациент-человек прекращает терапию по причине непереносимости терапии.
[0043] В различных других вариантах осуществления перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку не проводят терапию плазмоклеточного лейкоза. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза.
[0044] В конкретных вариантах осуществления способов лечения WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза, описанных выше, введение популяции аллогенных клеток не приводит к какой-либо реакции "трансплантат против хозяина" (GvHD) у пациента-человека.
[0045] В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток, которую вводят пациенту-человеку, рестриктирована по аллелю HLA, общему с пациентом-человеком.
[0046] В конкретных вариантах осуществления популяция аллогенных клеток, содержащая WT1-специфичные аллогенные T-клетки, имеет общие по меньшей мере 2 из 8 аллелей HLA (например, два аллеля HLA-A, два аллеля HLA-B, два аллеля HLA-C и два аллеля HLA-DR) с пациентом-человеком.
[0047] В конкретных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию определения по меньшей мере одного аллеля HLA пациента-человека посредством типирования высокого разрешения.
[0048] В различных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза перед стадией введения дополнительно включают стадию получения популяции аллогенных клеток in vitro.
[0049] В некоторых вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию (т.е. стимуляцию) аллогенных клеток к одному или нескольким WT1, где аллогенные клетки содержат аллогенные T-клетки.
[0050] В конкретном варианте осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает стадию обогащения T-клеток перед указанной сенсибилизацией.
[0051] В конкретных вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro после сенсибилизации дополнительно включает криоконсервацию аллогенных клеток.
[0052] В конкретных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию размораживания криоконсервированных, сенсибилизированных пептидом WT1 аллогенных клеток и экспансию аллогенных клеток in vitro для получения популяции аллогенных клеток.
[0053] В конкретных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию размораживания криоконсервированной формы популяции аллогенных клеток.
[0054] В некоторых вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток с использованием дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов, мононуклеарных клеток периферической крови или клеток EBV-BLCL (EBV-трансформированной линии B-лимфоцитов). В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов, мононуклеарных клеток периферической крови или клеток EBV-BLCL включает нагрузку дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов, мононуклеарных клеток периферической крови или клеток EBV-BLCL по меньшей мере одним иммуногенным пептидом, полученным из WT1. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов, мононуклеарных клеток периферической крови или клеток EBV-BLCL включает нагрузку дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов, мононуклеарных клеток периферической крови или клеток EBV-BLCL совокупностью перекрывающихся пептидов, полученных из одного или нескольких пептидов WT1.
[0055] В некоторых вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток с использованием искусственных антигенпрезентирующих клеток (AAPC). В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных T-клеток с использованием AAPC включает нагрузку AAPC по меньшей мере одним иммуногенным пептидом, полученным из WT1. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных T-клеток с использованием AAPC включает нагрузку AAPC совокупностью перекрывающихся пептидов, полученных из одного или нескольких пептидов WT1. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием AAPC включает конструирование AAPC для экспрессии по меньшей мере одного иммуногенного пептида WT1 в AAPC.
[0056] В конкретном варианте осуществления совокупность перекрывающихся пептидов является совокупностью перекрывающихся пентадекапептидов.
[0057] В различных вариантах осуществления популяцию аллогенных клеток получают из линии T-клеток. В некоторых вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию селекции линии T-клеток из банка множества криоконсервированных линий T-клеток. В некоторых вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию размораживания криоконсервированной формы линии T-клеток. В конкретных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию экспансии линии T-клеток in vitro.
[0058] В конкретных вариантах осуществления WT1-специфичные аллогенные T-клетки, вводимые способами, представленными в настоящем описании, распознают эпитоп RMFPNAPYL WT1.
[0059] В некоторых вариантах осуществления введение осуществляют посредством инфузии популяции аллогенных клеток. В некоторых вариантах осуществления инфузия является болюсной внутривенной инфузией. В некоторых вариантах осуществления введение включает введение пациенту-человеку по меньшей мере приблизительно 1×105 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу. В некоторых вариантах осуществления введение включает введение пациенту-человеку от приблизительно 1×106 до приблизительно 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу. В конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку приблизительно 1×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку приблизительно 3×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку приблизительно 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу.
[0060] В некоторых вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают введение пациенту-человеку по меньшей мере 2 доз популяции аллогенных клеток. В конкретных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают введение пациенту-человеку 2, 3, 4, 5 или 6 доз популяции аллогенных клеток. В конкретном варианте осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают введение пациенту-человеку 3 доз популяции аллогенных клеток.
[0061] В некоторых вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают период вымывания между двумя последовательными дозами, где в течение периода вымывания не вводят популяцию аллогенных клеток. В конкретных вариантах осуществления период вымывания составляет приблизительно 1, 2, 3 или 4 недели. В конкретном варианте осуществления период вымывания составляет приблизительно 4 недели.
[0062] В конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм, и где 3 дозы вводят с интервалом приблизительно 4 недели. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, де каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм, и где 3 дозы вводят с интервалом приблизительно 3 недели. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм, и где 2 дозы вводят с интервалом приблизительно 3 недели. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм, и где 3 дозы вводят с интервалом приблизительно 1 неделя.
[0063] Настоящее изобретение также относится к способам лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, дополнительно включающим после введения пациенту-человеку популяции аллогенных клеток введение пациенту-человеку второй популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки; где вторая популяция аллогенных клеток рестриктирована по другому аллелю HLA, общему с пациентом-человеком.
4. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0064] Фигура 1. Ответы WT1-специфичных T-клеток и оценка заболевания после адоптивного переноса WT1-специфичных T-клеток, полученных от донора, пациенту с вторичным плазмоклеточным лейкозом. (A) M-белок и (B) соотношение каппа:лямбда представлены в качестве маркеров заболевания после TCD HSCT. Абсолютные количества CD3+CD8+ и CD3+CD4+ после адоптивного переноса WT1-специфичных T-клеток. Количества CD4+ и CD8+ WT1-специфичных T-клеток в периферической крови пациента определяли посредством анализа внутриклеточного ИФНγ, и они представлены в отдельные моменты времени. Пациент достигал CR после 2 циклов, каждый из которых состоял из 3 инфузий с 4 недельными интервалами, WT1-специфичных CTL, полученных от донора.
[0065] Фигура 2. Ответы WT1-специфичных T-клеток и оценка заболевания после адоптивного переноса WT1-специфичных T-клеток, полученных от донора, пациенту с первичным плазмоклеточным лейкозом. Свободная легкая каппа-цепь представлена в качестве маркера заболевания после TCD HSCT. Абсолютные количества CD3+CD8+ и CD3+CD4+ после адоптивного переноса WT1-специфичных T-клеток. Количества CD4+ и CD8+ WT1-специфичных T-клеток в периферической крови пациента определяли посредством анализа внутриклеточного ИФНγ, и они представлены в отдельные моменты времени. Пациент достигал CR после 1 цикла, состоящего из 3 инфузий WT1-специфичных CTL, полученных от донора, с 4 недельными интервалами.
[0066] Фигура 3. Цитогенетический анализ обогащенной популяции плазматических клеток из костного мозга.
[0067] Фигура 4. Опухолевая нагрузка всего организма в случае ортометастатической модели мыши H929, которой вводили стороннюю линию T-клеток из ATA 520 (** указано p<0,01 по результатам ANOVA в группах низких и высоких доз по сравнению с группой, которой вводили наполнитель). Средние значения и распределение индивидуальных опухолевых масс в группе представлены на фигуре 5 в случае больных животных с H929 в последний день, день 28, после введения дозы.
[0068] Фигура 5. Опухолевая масса в день 28 в виде среднего значения и индивидуальных значений в случае больных животных с H929, которым вводили линии T-клеток из ATA 520 (**указано p<0,01 по результатам одностороннего ANOVA с поправкой по сравнению с группой, которой вводили наполнитель; *** указано p<0,001 по всем группам по результатам одностороннего ANOVA; ns=статистически незначимо по результатам ANOVA с поправкой).
[0069] Фигура 6. Опухолевая масса в день 21 в виде среднего значения и индивидуальных значений в случае модельных мышей L363, которым вводили линию T-клеток из ATA 520 (* указано p<0,05 по результатам одностороннего ANOVA с поправкой по сравнению с группой, которой вводили наполнитель; ** указано p<0,01 по результатам одностороннего ANOVA с поправкой по сравнению с группой, которой вводили наполнитель; ns=статистически незначимо по результатам ANOVA с поправкой).
5. ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0070] Настоящее изобретение относится к способам лечения WT1 (белок опухоли Вильмса 1)-положительной множественной миеломы у пациента-человека. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам лечения WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза у пациента-человека. Изобретение относится к способу T-клеточной терапии, являющейся эффективной в лечении WT1-положительной множественной миеломы и WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза у пациента-человека при низкой токсичности или без нее.
5.1. Способы лечения множественной миеломы
[0071] Настоящее изобретение относится к способам лечения WT1-положительной множественной миеломы у пациента-человека, включающим введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки.
[0072] В одном из аспектов способы включают введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где у популяции аллогенных клеток отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1. Таким образом, популяция аллогенных клеток не обладает значительными уровнями аллореактивности, что проявляется, как правило, в отсутствии реакции "трансплантат против хозяина" (GvHD) у пациента-человека. В конкретных вариантах осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15%, 10%, 5% или 1% или менее антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1. В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1. В некоторых вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают от пациента-человека, например, немодифицированные, стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты (т.е. стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты, не нагруженные одним или несколькими пептидами WT1 и генетически сконструированные для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1), полученные от пациента-человека. В других вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают от донора популяции аллогенных клеток, например, немодифицированные стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты (т.е. стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты, не нагруженные одним или несколькими пептидами WT1 и генетически сконструированные для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1), полученные от донора популяции аллогенных клеток. В других вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают из немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток из линии B-лимфоцитов, трансформированных с использованием вируса Эпштейна-Барр (EBV BLCL) (т.е. клеток EBV BLCL, не нагруженных одним или несколькими пептидами WT1 и не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1, и они не совпадают по HLA с популяцией аллогенных клеток).
[0073] В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0074] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0075] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0076] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0077] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro, и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0078] Во втором аспекте способы включают введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где популяция аллогенных клеток демонстрирует значительную цитотоксичность in vitro (например, демонстрирует значительный лизис) в отношении антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1. В конкретных вариантах осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20%, 25%, 30%, 35% или 40% или более антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, в анализе цитотоксичности in vitro. В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, в анализе цитотоксичности in vitro. В некоторых вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают от пациента-человека, например, стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты, полученные от пациента-человека. В других вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают от донора популяции аллогенных клеток, например, стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты, полученные от донора популяции аллогенных клеток.
[0079] В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более нагруженных пептидом WT1 (например, нагруженные совокупностью пептидов WT1), стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro.
[0080] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более нагруженных пептидом WT1 (например, нагруженных совокупностью пептидов WT1) антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro.
[0081] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более нагруженных пептидом WT1 (например, нагруженных совокупностью пептидов WT1), стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro и демонстрирует лизис 20% или более нагруженных пептидом WT1 (например, нагруженных совокупностью пептидов WT1) антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro.
[0082] В конкретных вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки нагружены совокупностью пептидов WT1. Совокупность пептидов WT1 может являться, например, совокупностью перекрывающихся пептидов (например, пентадекапептидов), охватывающих последовательность WT1. В конкретном варианте осуществления совокупность пептидов WT1 является такой, как описано в примере из раздела 6.
[0083] В третьем аспекте способы включают введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где у популяции аллогенных клеток отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1, как описано выше, и демонстрирует значительную цитотоксичность in vitro (например, демонстрирует значительный лизис) в отношении антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, как описано выше.
[0084] Цитотоксичность популяции аллогенных клеток в отношении антигенпрезентирующих клеток можно определять посредством любого анализа, известного в этой области для измерения опосредованной T-клетками цитотоксичности. В конкретном варианте осуществления цитотоксичность определяют посредством стандартного анализа высвобождения 51Cr, как описано в примере в разделе 6 или в Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801.
[0085] Антигенпрезентирующие клетки, которые можно использовать в анализе цитотоксичности in vitro с популяцией аллогенных клеток, включают, в качестве неограничивающих примеров, дендритные клетки, стимулированные фитогемагглютинином (PHA) лимфобласты, макрофаги, B-клетки, продуцирующие антитела, клетки EBV BLCL и искусственные антигенпрезентирующие клетки (AAPC).
[0086] В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после постановки диагноза множественной миеломы.
[0087] В различных вариантах осуществления перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку проводят терапию множественной миеломы, отличающуюся от указанной популяции аллогенных клеток. Терапия может являться аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (HSCT), аллогенной HSCT, химиотерапией злокачественных новообразований, индукционной терапией, лучевой терапией или их комбинацией для лечения множественной миеломы. Если проводят индукционную терапию, она зачастую является первой фазой лечения множественной миеломы, и ее целью является снижение количества плазматических клеток в костном мозге и белков, продуцируемых плазматическими клетками. Индукционная терапия может являться любой индукционной терапией, известной в этой области для лечения множественной миеломы, и может являться, например, химиотерапией, направленной терапией, лечением с использованием кортикостероидов или их комбинацией. Аутологичная HSCT и/или аллогенная HSCT может являться трансплантацией костного мозга, трансплантацией пуповинной крови или, предпочтительно, трансплантацией стволовых клеток периферической крови. Популяцию аллогенных клеток можно получать от донора аллогенных HSCT или стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT. Химиотерапия злокачественного новообразования может являться любой химиотерапией, известной в этой области для лечения множественной миеломы. Лучевая терапия также может являться любой лучевой терапией, известной в этой области для лечения множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день окончания последней такой терапии или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после окончания последней такой терапии. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после окончания последней такой терапии. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после окончания последней такой терапии. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после окончания последней такой терапии. В некоторых конкретных вариантах осуществления последняя такая терапия является аутологичной HSCT. В других конкретных вариантах осуществления последняя такая терапия является аллогенной HSCT. Например, последняя такая терапия является аллогенной HSCT, которую проводят после аутологичной HSCT, которую проводят после индукционной терапии (например, индукционной химиотерапии).
[0088] В некоторых вариантах осуществления терапия является HSCT. В некоторых вариантах осуществления терапия включает HSCT.
[0089] В конкретном варианте осуществления терапия является аутологичной HSCT. В конкретном варианте осуществления терапия включает аутологичную HSCT. Аутологичная HSCT может являться трансплантацией стволовых клеток периферической крови, трансплантацией костного мозга и трансплантацией пуповинной крови. В конкретном варианте осуществления аутологичная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аутологичной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после аутологичной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после аутологичной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после аутологичной HSCT.
[0090] В другом конкретном варианте осуществления терапия является аллогенной HSCT (например, аллогенной HSCT с истощением T-клеток). В другом конкретном варианте осуществления терапия включает аллогенную HSCT (например, аллогенную HSCT с истощением T-клеток). Аллогенная HSCT может являться трансплантацией стволовых клеток периферической крови, трансплантацией костного мозга и трансплантацией пуповинной крови. В конкретном варианте осуществления аллогенная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. Популяцию аллогенных клеток можно получать от донора аллогенных HSCT или стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аллогенной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после аллогенной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после аллогенной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после аллогенной HSCT.
[0091] В различных вариантах осуществления пациент-человек не получает пользу от терапии до указанного введения популяции аллогенных клеток. Пациента-человека считают неполучающим пользу от терапии множественной миеломы, если множественная миелома является рефрактерной к терапии, рецидивирует после терапии, и/или если пациент-человек прекращает терапию по причине непереносимости терапии (например, токсичности терапии в контексте возраста или состояния пациента). Если терапия является аллогенной HSCT или включает ее, непереносимость может являться результатом реакции "трансплантат против хозяина" (GvHD), вызываемой аллогенной HSCT. В конкретных вариантах осуществления множественная миелома является рецидивирующей/рефрактерной множественной миеломой (RRMM), которая может являться, например, первичной рефрактерной множественной миеломой, рецидивирующей множественной миеломой или рецидивирующей и рефрактерной множественной миеломой. В конкретном варианте осуществления множественная миелома является первичной рефрактерной множественной миеломой. В другом конкретном варианте осуществления множественная миелома является рецидивирующей множественной миеломой. В другом конкретном варианте осуществления множественная миелома является рецидивирующей и рефрактерной множественной миеломой. Рецидивирующую и рефрактерную множественную миелому определяют как прогрессирование заболевания во время терапии у пациентов, достигших минимального ответа (MR) или лучшего результата, или у которых наблюдают прогрессирование в течение 60 дней их последней терапии. Пациентов, которые никогда не достигали, по меньшей мере, MR на исходную индукционную терапию, и у которых наблюдают прогрессирование во время терапии, определяют как "первичных рефрактерных". Рецидивирующую множественную миелому определяют как заболевание у пациента с миеломой, которого ранее подвергали лечению, достигшего ремиссии, имеющего признаки PD (прогрессирующего заболевания), как определено ниже, и который на момент рецидива не соответствует критериям рецидивирующей и рефрактерной или первичной рефрактерной множественной миеломы в соответствии с критериями Международной группы по изучению множественной миеломы, PD определяют по по меньшей мере 25% повышению относительно низшего предела парапротеина в сыворотке (абсолютное повышение должно составлять ≥0,5 г/дл), или парапротеина в моче (абсолютное повышение должно составлять ≥200 мг/24 часа), или по разнице уровней вовлеченной и невовлеченной свободной легкой цепи (FLC) (при аномальном соотношении FLC и разнице FLC >100 мг/л). У пациентов с отсутствием измеримых уровней парапротеина (олиго- или несекреторная миелома) для определения прогрессирования заболевания используют повышение плазматических клеток в костном мозге (повышение ≥10%), или новые очаги повреждения костей/мягких тканей, увеличивающие размер существующих повреждений, или необъяснимую концентрацию кальция в сыворотке >11,5 мг/дл. В конкретном варианте осуществления комбинированная химиотерапия (например, комбинированная химиотерапия, включающая лечение леналидомидом и бортезомибом) не приносит пользу пациенту-человеку. В конкретном варианте осуществления пациенту-человеку не приносит пользу множество линий лечения, включая комбинированную химиотерапию (например, комбинированную химиотерапию, включающая лечение леналидомидом и бортезомибом) и аутологичную HSCT.
[0092] В различных других вариантах осуществления перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку не проводят терапию множественной миеломы. В таких вариантах осуществления популяцию аллогенных клеток вводят в качестве терапии множественной миеломы первой линии. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после постановки диагноза множественной миеломы. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после постановки диагноза множественной миеломы.
[0093] В конкретных вариантах осуществления способов лечения WT1-положительной множественной миеломы, описанных вые выше, введение популяции аллогенных клеток не приводит к какой-либо реакции "трансплантат против хозяина" (GvHD) у пациента-человека.
5.2. Способы лечения плазмоклеточного лейкоза
[0094] Настоящее изобретение также относится к способам лечения WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза у пациента-человека, включающим введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки.
[0095] В одном из аспектов способы включают введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где у популяции аллогенных клеток отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1. Таким образом, популяция аллогенных клеток не обладает значительными уровнями аллореактивности, что, как правило, проявляется в отсутствии реакции "трансплантат против хозяина" (GvHD) у пациента-человека. В конкретных вариантах осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15%, 10%, 5% или 1% или менее антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1. В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1. В некоторых вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают от пациента-человека, например, немодифицированные, стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты (т.е. стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты, не нагруженные одним или несколькими пептидами WT1 и генетически сконструированные для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1), полученных от пациента-человека. В других вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают от донора популяции аллогенных клеток, например, немодифицированные, стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты (т.е. стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты, не нагруженные одним или несколькими пептидами WT1 и генетически сконструированные для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1), полученные от донора популяции аллогенных клеток. В других вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают из немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток из линии B-лимфоцитов, трансформированных с использованием вируса Эпштейна-Барр (EBV BLCL) (т.е. клеток EBV BLCL, не нагруженных одним или несколькими пептидами WT1 и не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1, и несовпадающих по HLA относительно популяции аллогенных клеток).
[0096] В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0097] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0098] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0099] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0100] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro, и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro, таким образом, у нее отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT или не сконструированных генетически для экспрессии одного или нескольких пептидов WT1.
[0101] Во втором аспекте способы включают введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где популяция аллогенных клеток демонстрирует значительную цитотоксичность in vitro (например, демонстрирует значительный лизис) в отношении антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1. В конкретных вариантах осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20%, 25%, 30%, 35% или 40% или более антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, в анализе цитотоксичности in vitro. В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, в анализе цитотоксичности in vitro. В некоторых вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают от пациента-человека, например, стимулированных фитогемагглютинином лимфобласты, полученных от пациента-человека. В других вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки получают от донора популяции аллогенных клеток, например, стимулированные фитогемагглютинином лимфобласты, полученные от донора популяции аллогенных клеток.
[0102] В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более нагруженных пептидом WT1 (нагруженных совокупностью пептидов WT1), стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro.
[0103] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более нагруженных пептидом WT1 (например, нагруженных совокупностью пептидов WT1) антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro.
[0104] В другом конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более нагруженных пептидом WT1 (например, нагруженных совокупностью пептидов WT1), стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro, и демонстрирует лизис 20% или более нагруженных пептидом WT1 (например, нагруженных совокупностью пептидов WT1) антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro.
[0105] В конкретных вариантах осуществления антигенпрезентирующие клетки нагружены совокупностью пептидов WT1. Совокупность пептидов WT1 может являться, например, совокупностью перекрывающихся пептидов (например, пентадекапептидов), охватывающих последовательность WT1. В конкретном варианте осуществления совокупность пептидов WT1 является такой, как описано в примере в разделе 6.
[0106] В третьем аспекте способы включают введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где у популяции аллогенных клеток отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1, как описано выше, и демонстрирует значительную цитотоксичность in vitro (например, демонстрирует значительный лизис) в отношении антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, как описано выше.
[0107] Цитотоксичность популяции аллогенных клеток в отношении антигенпрезентирующих клеток можно определять посредством любого анализа, известного в этой области для измерения опосредованной T-клетками цитотоксичности. В конкретном варианте осуществления цитотоксичность определяют посредством стандартного анализа высвобождения 51Cr, как описано в примере в разделе 6 или в Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801.
[0108] Антигенпрезентирующие клетки, которые можно использовать в анализе цитотоксичности in vitro с популяцией аллогенных клеток, включают, в качестве неограничивающих примеров, дендритные клетки, стимулированные фитогемагглютинином (PHA) лимфобласты, макрофаги, B-клетки, продуцирующие антитела, и искусственные антигенпрезентирующие клетки (AAPC).
[0109] В некоторых вариантах осуществления плазмоклеточный лейкоз является первичным плазмоклеточным лейкозом. В других вариантах осуществления плазмоклеточный лейкоз является вторичным плазмоклеточным лейкозом. Первичный плазмоклеточный лейкоз определяют по наличию >2×109 плазматических клеток/л периферической крови или плазмоцитоза составляющего >20% дифференциальной лейкоцитарной формулы, и он не развивается из уже существующей множественной миеломы (MM) (Jaffe et al., 2001, Ann Oncol 13:490-491; Hayman and Fonseca, 2001, Curr Treat Options Oncol 2:205-216). Однако, вторичный PCL (sPCL) является лейкозной трансформацией терминальной стадии MM.
[0110] В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза.
[0111] В различных вариантах осуществления перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку проводят терапию плазмоклеточного лейкоза, отличающуюся от указанной популяции аллогенных клеток. Терапия может являться аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (HSCT), аллогенной HSCT, химиотерапией злокачественных новообразований, индукционной терапией, лучевой терапией или их комбинацией для лечения плазмоклеточного лейкоза. Если проводят индукционную терапию, она зачастую является первой фазой лечения плазмоклеточного лейкоза, и ее целью является снижение количества плазматических клеток в костном мозге и белков, продуцируемых плазматическими клетками. Индукционная терапия может являться любой индукционной терапией, известной в этой области для лечения плазмоклеточного лейкоза, и может являться, например, химиотерапией, направленной терапией, лечением с использованием кортикостероидов или их комбинацией. Аутологичная HSCT и/или аллогенная HSCT может являться трансплантацией костного мозга, трансплантацией пуповинной крови или, предпочтительно, трансплантацией стволовых клеток периферической крови. Популяцию аллогенных клеток можно получать от донора аллогенных HSCT или стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT. Химиотерапия злокачественного новообразования может являться любой химиотерапией, известной в этой области для лечения плазмоклеточного лейкоза. Лучевая терапия также может являться любой лучевой терапией, известной в этой области для лечения плазмоклеточного лейкоза. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день окончания последней такой терапии или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после окончания последней такой терапии. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после окончания последней такой терапии. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после окончания последней такой терапии. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после окончания последней такой терапии. В некоторых конкретных вариантах осуществления, последняя такая терапия является аутологичной HSCT. В других конкретных вариантах осуществления, последняя такая терапия является аллогенной HSCT. Например, последняя такая терапия является аллогенной HSCT, которую проводят после аутологичной HSCT, которую проводят после индукционной терапии (например, индукционной химиотерапии).
[0112] В некоторых вариантах осуществления терапия является HSCT. В некоторых вариантах осуществления терапия включает HSCT.
[0113] В конкретном варианте осуществления терапия является аутологичной HSCT. В конкретном варианте осуществления терапия включает аутологичную HSCT. Аутологичная HSCT может являться трансплантацией стволовых клеток периферической крови, трансплантацией костного мозга и трансплантацией пуповинной крови. В конкретном варианте осуществления аутологичная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аутологичной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после аутологичной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после аутологичной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после аутологичной HSCT.
[0114] В другом конкретном варианте осуществления терапия является аллогенной HSCT (например, аллогенной HSCT с истощением T-клеток). В другом конкретном варианте осуществления терапия включает аллогенную HSCT (например, аллогенную HSCT с истощением T-клеток). Аллогенная HSCT может являться трансплантацией стволовых клеток периферической крови, трансплантацией костного мозга и трансплантацией пуповинной крови. В конкретном варианте осуществления аллогенная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови. Популяцию аллогенных клеток можно получать от донора аллогенных HSCT или стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT. В некоторых вариантах осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аллогенной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после аллогенной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после аллогенной HSCT. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после аллогенной HSCT.
[0115] В различных вариантах осуществления пациент-человек не получает пользу от терапии до указанного введения популяции аллогенных клеток. Пациента-человека считают неполучающим пользу от терапии плазмоклеточного лейкоза, если плазмоклеточный лейкоз является рефрактерным к терапии, рецидивирует после терапии, и/или если пациент-человек прекращает терапию по причине непереносимости терапии (например, токсичности терапии в контексте возраста или состояния пациента). Если терапия является аллогенной HSCT или включает ее, непереносимость может являться результатом реакции "трансплантат против хозяина" (GvHD), вызываемой аллогенной HSCT. Т.к. плазмоклеточный лейкоз является очень агрессивным заболеванием с коротким периодом выживаемости без прогрессирования, почти все пациенты являются рефрактерными. Плазмоклеточный лейкоз считают рефрактерным к терапии, если плазмоклеточный лейкоз не демонстрирует ответа, или наблюдают остаточную болезнь, или он прогрессирует во время терапии. В конкретном варианте осуществления пациент-человек не получает пользу от комбинированной химиотерапии (например, VDT-PACE, RVD, или их комбинации). VDT-PACE является схемой комбинированной химиотерапии с использованием бортезомиба, дексаметазона, талидомида, цисплатина, доксорубицина, циклофосфамида и этопозида. RVD является схемой комбинированной химиотерапии с использованием леналидомида, бортезомиба и дексаметазона. В конкретном варианте осуществления пациенту-человеку не приносит пользу множество линий лечения, включая комбинированную химиотерапию (например, VDT-PACE, RVD, или их комбинация) и аутологичную HSCT.
[0116] В различных других вариантах осуществления перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку не проводят терапию плазмоклеточного лейкоза. В таких вариантах осуществления популяцию аллогенных клеток вводят в качестве терапии плазмоклеточного лейкоза первой линии. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 10 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза. В другом конкретном варианте осуществления первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 6 до 8 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза.
[0117] В конкретных вариантах осуществления способов лечения WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза, описанных выше, введение популяции аллогенных клеток не приводит к какой-либо реакции "трансплантат против хозяина" (GvHD) у пациента-человека.
5.3. Популяция аллогенных клеток, рестриктированная по аллелю HLA, общему с пациентом-человеком
[0118] В рамках изобретения, пациенту-человеку вводят популяцию аллогенных клеток, содержащую WT1-специфичные аллогенные T-клетки. В конкретном варианте осуществления популяция аллогенных клеток, которую вводят пациенту-человеку, рестриктирована по аллелю HLA, общему с пациентом-человеком. Это рестриктирование по аллелю HLA можно обеспечивать посредством определения профиля HLA пациента-человека (например, с использованием клеток или ткани пациента-человека) и селекции популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки (или линии T-клеток, из которой будут получать популяцию аллогенных клеток), рестриктированные по аллелю HLA пациента-человека.
[0119] В некоторых вариантах осуществления определения профиля HLA типируют по меньшей мере 4 локуса HLA (предпочтительно, HLA-A, HLA-B, HLA-C и HLA-DR). В некоторых вариантах осуществления определения профиля HLA типируют 4 локуса HLA (предпочтительно, HLA-A, HLA-B, HLA-C и HLA-DR). В некоторых вариантах осуществления определения профиля HLA типируют 6 локусов HLA. В некоторых вариантах осуществления определения профиля HLA типируют 8 локусов HLA.
[0120] В некоторых вариантах осуществления, предпочтительно, помимо того, что популяция аллогенных клеток, содержащая WT1-специфичные аллогенные T-клетки, рестриктирована по аллелю HLA, общему с пациентом-человеком, она имеет по меньшей мере 2 аллеля HLA, общих с пациентом-человеком. В конкретных вариантах осуществления популяция аллогенных клеток, содержащая WT1-специфичные аллогенные T-клетки, имеет общие по меньшей мере 2 из 8 аллелей HLA (например, два аллеля HLA-A, два аллеля HLA-B, два аллеля HLA-C и два аллеля HLA-DR) с пациентом-человеком. Наличие этих общих аллелей можно обеспечивать посредством определения профиля HLA пациента-человека (например, с использованием клеток или ткани пациента-человека) и селекции популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки (или линии T-клеток, из которой будут получать популяцию аллогенных клеток), имеющей по меньшей мере 2 общих (например, по меньшей мере 2 из 8) аллеля HLA с пациентом-человеком.
[0121] Профиль HLA (т.е. тип локусов HLA) можно определять (т.е. типировать) любым известным в этой области способом. Неограничивающие примеры способов определения профиля HLA можно найти в ASHI Laboratory Manual, Edition 4.2 (2003), American Society for Histocompatibility and Immunogenetics; ASHI Laboratory Manual, Supplements 1 (2006) and 2 (2007), American Society for Histocompatibility and Immunogenetics; Hurley, "DNA-based typing of HLA for transplantation." в Leffell et al., eds., 1997, Handbook of Human Immunology, Boca Raton: CRC Press; Dunn, 2011, Int J Immunogenet 38:463-473; Erlich, 2012, Tissue Antigens, 80:1-11; Bontadini, 2012, Methods, 56:471-476; и Lange et al., 2014, BMC Genomics 15: 63.
[0122] В целом, типирование высокого разрешения является предпочтительным для типирования HLA. Типирование высокого разрешения можно осуществлять любым известным в этой области способом, например, как описано в ASHI Laboratory Manual, Edition 4.2 (2003), American Society for Histocompatibility and Immunogenetics; ASHI Laboratory Manual, Supplements 1 (2006) and 2 (2007), American Society for Histocompatibility and Immunogenetics; Flomenberg et al., Blood, 104:1923-1930; Kögler et al., 2005, Bone Marrow Transplant, 36:1033-1041; Lee et al., 2007, Blood 110:4576-4583; Erlich, 2012, Tissue Antigens, 80:1-11; Lank et al., 2012, BMC Genomics 13:378; или Gabriel et al., 2014, Tissue Antigens, 83:65-75. В конкретных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию определения по меньшей мере одного аллеля HLA пациента-человека посредством типирования высокого разрешения.
[0123] Аллель HLA, по которому рестриктирована популяция аллогенных клеток, можно определять любым известным в этой области способом, например, как описано в Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801; Barker et al., 2010, Blood 116:5045-5049; Hasan et al., 2009, J Immunol, 183:2837-2850; или Doubrovina et al., 2012, Blood 120:1633-1646.
[0124] Предпочтительно, аллель HLA, по которому рестриктирована популяция аллогенных клеток, и являющийся общим с пациентом-человеком, определяют посредством типирования высокого разрешения. Предпочтительно, аллели HLA, общие между популяцией аллогенных клеток и пациентом-человеком, определяют посредством типирования высокого разрешения. Наиболее предпочтительно, аллель HLA, по которому рестриктирована популяция аллогенных клеток, и являющийся общим с пациентом-человеком, и аллели HLA, общие между популяцией аллогенных клеток и пациентом-человеком, определяют посредством типирования высокого разрешения.
5.4. Получение популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки
[0125] Популяцию аллогенных клеток, содержащую WT1-специфичные аллогенные T-клетки, которые вводят пациенту-человеку, можно получать известным в этой области способом или можно выбирать из уже существующего банка (коллекции) криоконсервированных линий T-клеток (где каждая линия T-клеток содержит WT1-специфичные аллогенные T-клетки), полученных известным в этой области способом, размороженных и, предпочтительно, подвергнутых экспансии перед введением. Предпочтительно, уникальный идентификатор для каждой линии T-клеток в банке связан с информацией о том, по каким аллелям HLA рестриктирована соответствующая линия T-клеток, о профиле HLA соответствующей линии T-клеток и/или цитотоксической активности против WT1 соответствующей линии T-клеток, измеряемой известным в этой области способом (например, как описано в Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801; или Hasan et al., 2009, J Immunol 183: 2837-2850). Популяцию аллогенных клеток и линии T-клеток в банке, предпочтительно, получают способами, описанными ниже.
[0126] В различных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза перед стадией введения дополнительно включают стадию получения популяции аллогенных клеток.
[0127] В конкретных вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток включает активируемую флуоресценцией сортировку клеток в отношении WT1-специфичных T-клеток из популяции клеток крови. В конкретном варианте осуществления популяция клеток крови представляет собой мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC), выделенные из образцов крови, полученных от донора-человека. Активируемую флуоресценцией сортировку клеток можно осуществлять любым известным в этой области способом, как правило, включающим окрашивание популяции клеток крови с использованием антитела, распознающего по меньшей мере один эпитоп WT1, перед стадией сортировки.
[0128] В конкретных вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток включает получение популяции аллогенных клеток in vitro. Популяцию аллогенных клеток можно получать in vitro любым известным в этой области способом. Неограничивающие примеры способов получения популяции аллогенных клеток можно найти в Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801; Hasan et al., 2009, J Immunol 183: 2837-2850; Koehne et al., 2015, Biol Blood Marrow Transplant S1083-8791(15)00372-9, опубликованной он-лайн 29 мая 2015 года; O'Reilly et al., 2007, Immunol Res 38:237-250; Doubrovina et al., 2012, Blood 120:1633-1646; и O' Reilly et al., 2011, Best Practice & Research Clinical Haematology 24:381-391.
[0129] В некоторых вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию (т.е. стимуляцию) аллогенных клеток (включающих аллогенные T-клетки) к одному или нескольким пептидам WT1 таким образом, чтобы получать WT1-специфичные аллогенные T-клетки. Пептид WT1 может являться полноразмерным белком WT1 (например, полноразмерным белком WT1 человека) или его фрагментом (например, фрагментом пентадекапептида WT1). В конкретных вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток к одному или нескольким пептидам WT1, презентируемым антигенпрезентирующими клетками. В конкретном варианте осуществления сенсибилизацию осуществляют посредством культивирования аллогенных клеток с антигенпрезентирующими клетками в течение периода времени, достаточного для сенсибилизации и снижения аллореактивности. Это можно осуществлять, например, посредством культивирования аллогенных клеток с антигенпрезентирующими клетками в течение от 6 до 8 недель.
[0130] Аллогенная клетки, используемые для получения популяции аллогенных клеток in vitro, можно выделять из донора аллогенных клеток любым известным в этой области способом, например, как описано в Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801; Hasan et al., 2009, J Immunol 183: 2837-2850; или O'Reilly et al., 2007, Immunol Res. 38:237-250.
[0131] В конкретном варианте осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает стадию обогащения T-клеток перед указанной сенсибилизацией. T-клетки можно обогащать, например, из лимфоцитов периферической крови, отделенных от PBMC донора аллогенных клеток. В конкретном варианте осуществления T-клетки обогащают из лимфоцитов периферической крови, отделенных от PBMC донора аллогенных клеток посредством истощения прикрепленных моноцитов с последующим истощением естественных киллеров. В конкретном варианте осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает стадию очистки T-клеток перед указанной сенсибилизацией. T-клетки можно очищать, например, посредством приведения PBMC в контакт с антителами, распознающими специфичные для T-клеток маркеры.
[0132] В различных вариантах осуществления аллогенные клетки подвергают криоконсервации для хранения. В конкретном варианте осуществления, где аллогенные клетки подвергают криоконсервации, криоконсервированные аллогенные клетки размораживают и подвергают экспансии in vitro перед сенсибилизацией. В конкретном варианте осуществления, где аллогенные клетки подвергают криоконсервации, криоконсервированные аллогенные клетки размораживают, а затем сенсибилизируют, но не подвергают экспансии in vitro перед сенсибилизацией, а затем, необязательно, подвергают экспансии. В конкретных вариантах осуществления аллогенные клетки подвергают криоконсервации после сенсибилизации (при сенсибилизации получают WT1-специфичные аллогенные клетки). В конкретном варианте осуществления, где аллогенные клетки подвергают криоконсервации после сенсибилизации, криоконсервированные аллогенные клетки размораживают и подвергают экспансии in vitro для получения популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки. В другом конкретном варианте осуществления, где аллогенные клетки подвергают криоконсервации после сенсибилизации, криоконсервированные аллогенные клетки размораживают, но не подвергают экспансии in vitro для получения популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки. В различных других вариантах осуществления аллогенные клетки не подвергают криоконсервации. В конкретном варианте осуществления, где аллогенные клетки не подвергают криоконсервации, аллогенные клетки подвергают экспансии in vitro перед сенсибилизацией. В конкретном варианте осуществления, где аллогенные клетки не подвергают криоконсервации, аллогенные клетки не подвергают экспансии in vitro перед сенсибилизацией. В конкретных вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro дополнительно включает криоконсервацию аллогенных клеток после сенсибилизации.
[0133] В конкретных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании перед стадией введения дополнительно включают стадии размораживания криоконсервированных, сенсибилизированных пептидом WT1 аллогенных клеток и экспансии аллогенных клеток in vitro для получения популяции аллогенных клеток.
[0134] В некоторых вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток с использованием дендритных клеток (предпочтительно, дендритные клетки получают от донора аллогенных клеток). В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием дендритных клеток включает нагрузку дендритных клеток по меньшей мере одним иммуногенным пептидом, полученным из WT1. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием дендритных клеток включает нагрузку дендритных клеток совокупностью перекрывающихся пептидов, полученных из одного или нескольких пептидов WT1.
[0135] В некоторых вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных T-клеток с использованием активированных цитокинами моноцитов (предпочтительно, активированные цитокинами моноциты получают от донора аллогенных клеток). В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием активированных цитокинами моноцитов включает нагрузку активированных цитокинами моноцитов по меньшей мере одним иммуногенным пептидом, полученным из WT1. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием активированных цитокинами моноцитов включает нагрузку активированных цитокинами моноцитов совокупностью перекрывающихся пептидов, полученных из одного или нескольких пептидов WT1.
[0136] В некоторых вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток с использованием мононуклеарных клеток периферической крови (предпочтительно, мононуклеарные клетки периферической крови получают от донора аллогенных клеток). В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием мононуклеарных клеток периферической крови включает нагрузку мононуклеарных клеток периферической крови по меньшей мере одним иммуногенным пептидом, полученным из WT1. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием мононуклеарных клеток периферической крови включает нагрузку мононуклеарных клеток периферической крови совокупностью перекрывающихся пептидов, полученных из одного или нескольких пептидов WT1.
[0137] В некоторых вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток с использованием EBV-трансформированной линии B-лимфоцитов (EBV-BLCL), например, трансформированной штаммом B95.8 EBV линии B-лимфоцитов (предпочтительно, EBV-BLCL получают от донора аллогенных T-клеток). Клетки EBV-BLCL можно получать любым известным в этой области способом или как описано ранее в Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801 или Hasan et al., 2009, J Immunol 183:2837-2850. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием клеток EBV-BLCL включает нагрузку клеток EBV-BLCL по меньшей мере одним иммуногенным пептидом, полученным из WT1. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием клеток EBV-BLCL включает нагрузку клеток EBV-BLCL совокупностью перекрывающихся пептидов, полученных из одного или нескольких пептидов WT1.
[0138] В некоторых вариантах осуществления стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток с использованием искусственных антигенпрезентирующих клеток (AAPC). В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных T-клеток с использованием AAPC включает нагрузку AAPC по меньшей мере одним иммуногенным пептидом, полученным из WT1. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных T-клеток с использованием AAPC включает нагрузку AAPC совокупностью перекрывающихся пептидов, полученных из одного или нескольких пептидов WT1. В конкретных вариантах осуществления стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием AAPC включает конструирование AAPC для экспрессии по меньшей мере одного иммуногенного пептида WT1 в AAPC.
[0139] В различных вариантах осуществления совокупность пептидов является совокупностью перекрывающихся пептидов, охватывающих WT1 (например, WT1 человека). В конкретном варианте осуществления совокупность перекрывающихся пептидов является совокупностью перекрывающихся пентадекапептидов.
[0140] В конкретных вариантах осуществления популяцию аллогенных клеток подвергают криоконсервации для хранения перед введением. В конкретных вариантах осуществления популяцию аллогенных клеток не подвергают криоконсервации для хранения перед введением. В некоторых вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию размораживания криоконсервированной формы популяции аллогенных клеток.
[0141] В различных вариантах осуществления популяцию аллогенных клеток получают из линии T-клеток. Линия T-клеток содержит T-клетки, но процентная доля T-клеток может составлять менее 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% или 10%. В конкретных вариантах осуществления линию T-клеток подвергают криоконсервации для хранения перед введением. В конкретных вариантах осуществления линию T-клеток не подвергают криоконсервации для хранения перед введением. В некоторых вариантах осуществления линию T-клеток подвергают экспансии in vitro для получения популяции аллогенных клеток. В других вариантах осуществления линию T-клеток не подвергают экспансии in vitro для получения популяции аллогенных клеток. Линию T-клеток можно сенсибилизировать к одному или нескольким пептидам WT1 (таким образом, чтобы получать WT1-специфичные аллогенные T-клетки, например, посредством стадии сенсибилизация, описанной выше) до или после криоконсервации (если линию T-клеток подвергают криоконсервации) и до или после экспансии in vitro (если линию T-клеток подвергают экспансии in vitro). В некоторых вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию селекции линии T-клеток из банка множества криоконсервированных линий T-клеток (предпочтительно, каждая из них содержит WT1-специфичные аллогенные T-клетки). Предпочтительно, уникальный идентификатор для каждой линии T-клеток в банке связан с информацией о том, по каким аллелям HLA рестриктирована соответствующая линия T-клеток, а также, необязательно, о профиле HLA соответствующей линии T-клеток. В некоторых вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию размораживания криоконсервированной формы линии T-клеток. В конкретных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, перед стадией введения дополнительно включают стадию экспансии линии T-клеток (например, после размораживания криоконсервированной формы линии T-клеток) in vitro. Линию T-клеток и множества криоконсервированных линий T-клеток можно получать любым известным в этой области способом, например, как описано в Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801; Hasan et al., 2009, J Immunol 183: 2837-2850; Koehne et al., 2015, Biol Blood Marrow Transplant S1083-8791(15)00372-9, опубликованной он-лайн 29 мая 2015 года; O'Reilly et al., 2007, Immunol Res 38:237-250; или O' Reilly et al., 2011, Best Practice & Research Clinical Haematology 24:381-391, или как описано выше для получения популяции аллогенных клеток in vitro.
[0142] Популяция аллогенных клеток, содержащая WT1-специфичные аллогенные T-клетки, которые вводят пациенту-человеку, содержит CD8+ T-клетки, а в конкретном варианте осуществления также содержит CD4+ T-клетки.
[0143] WT1-специфичные аллогенные T-клетки, вводимые способами, представленными в настоящем описании, распознают по меньшей мере один эпитоп WT1. В конкретных вариантах осуществления WT1-специфичные аллогенные T-клетки, вводимые способами, представленными в настоящем описании, распознают эпитоп RMFPNAPYL WT1. В конкретном варианте осуществления WT1-специфичные аллогенные T-клетки, вводимые способами, представленными в настоящем описании, распознают эпитоп RMFPNAPYL, презентируемый HLA-A0201.
5.5. Введение и доза
[0144] Путь введения популяции аллогенных клеток и количество, подлежащее введению пациенту-человеку, можно определять с учетом состояния пациента-человека и навыков врача. Как правило, введение является внутривенным.
[0145] В некоторых вариантах осуществления введение осуществляют посредством инфузии популяции аллогенных клеток. В некоторых вариантах осуществления инфузия является болюсной внутривенной инфузией. В некоторых вариантах осуществления введение включает введение пациенту-человеку по меньшей мере приблизительно 1×105 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу. В некоторых вариантах осуществления введение включает введение пациенту-человеку от приблизительно 1×106 до приблизительно 10×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу. В некоторых вариантах осуществления введение включает введение пациенту-человеку от приблизительно 1×106 до приблизительно 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу. В конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку приблизительно 1×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку приблизительно 3×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку приблизительно 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу.
[0146] В некоторых вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают введение пациенту-человеку по меньшей мере 2 доз популяции аллогенных клеток. В конкретных вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают введение пациенту-человеку 2, 3, 4, 5, или 6 доз популяции аллогенных клеток. В конкретном варианте осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают введение пациенту-человеку 3 доз популяции аллогенных клеток.
[0147] В некоторых вариантах осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают период вымывания между двумя последовательными дозами, где в течение периода вымывания не вводят популяцию аллогенных клеток. В конкретных вариантах осуществления период вымывания составляет приблизительно 1-8 недель. В конкретных вариантах осуществления, период вымывания составляет приблизительно 1-4 недели. В конкретных вариантах осуществления период вымывания составляет приблизительно 4-8 недель. В конкретном варианте осуществления период вымывания составляет приблизительно 1 неделю. В другом конкретном варианте осуществления период вымывания составляет приблизительно 2 недели. В другом конкретном варианте осуществления период вымывания составляет приблизительно 3 недели. В другом конкретном варианте осуществления период вымывания составляет приблизительно 4 недели.
[0148] В конкретном варианте осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают введение пациенту-человеку 3 доз приблизительно 1×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу и период вымывания 4 недели между двумя последовательными дозами, где в течение периода вымывания не вводят популяцию аллогенных клеток. В другом конкретном варианте осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают введение пациенту-человеку 3 доз приблизительно 3×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу и период вымывания 4 недели между двумя последовательными дозами, где в течение периода вымывания не вводят популяцию аллогенных клеток. В другом конкретном варианте осуществления способы лечения WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза, представленные в настоящем описании, включают введение пациенту-человеку 3 доз приблизительно 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу и период вымывания 4 недели между двумя последовательными дозами, где в течение периода вымывания не вводят популяцию аллогенных клеток.
[0149] В конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм, и где 3 дозы вводят с интервалом приблизительно 4 недели. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм, и где 3 дозы вводят приблизительно с интервалом 3 недели. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм, и где 2 дозы вводят с интервалом приблизительно 3 недели. В другом конкретном варианте осуществления введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм, и где 3 дозы вводят с интервалом приблизительно 1 неделя.
[0150] В некоторых вариантах осуществления первый режим дозирования, представленный в настоящем описании, используют в течение первого периода времени, а затем второй и отличающийся режим дозирования, представленный в настоящем описании, используют в течение второго периода времени, где первый период времени и второй период времени, необязательно, разделены периодом вымывания (например, приблизительно три недели). Предпочтительно, второй режим дозирования используют, только если при первом режиме дозирования не наблюдают токсичность (например, без серьезных побочных эффектов степени 3-5 в соответствии с NCI CTCAE 4.0).
[0151] Термин "приблизительно" необходимо истолковывать так, чтобы была возможна нормальная вариация.
5.6. Последовательное лечение разными популяциями клеток
[0152] Настоящее изобретение также относится к способам лечения WT1-положительной множественной миеломы или плазмоклеточного лейкоза, после введения пациенту-человеку популяции аллогенных клеток дополнительно включающим введение пациенту-человеку второй популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки; где вторая популяция аллогенных клеток рестриктирована по другому аллелю HLA, общему с пациентом-человеком. В конкретном варианте осуществления у второй популяции аллогенных клеток отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT-1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1, так же, как описано выше для популяции аллогенных клеток. В другом конкретном варианте осуществления вторая популяция аллогенных клеток демонстрирует значительную цитотоксичность in vitro (например, демонстрирует значительный лизис) в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT-1, так же, как описано выше для популяции аллогенных клеток. В другом конкретном варианте осуществления у второй популяции аллогенных клеток отсутствует значительная цитотоксичность in vitro в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT-1 или не сконструированных генетически для (рекомбинантной) экспрессии одного или нескольких пептидов WT1, так же, как описано выше для популяции аллогенных клеток, и демонстрирует значительную цитотоксичность in vitro (например, демонстрирует значительный лизис) в отношении антигенпрезентирующих клеток, не нагруженных пептидом WT-1, так же, как описано выше для популяции аллогенных клеток.
[0153] Вторую популяцию аллогенных клеток можно вводить любым путем и с использованием любой схемы дозирования/введения, как описано в разделе 5.5.
[0154] В некоторых вариантах осуществления пациент-человек не имеет ответа, имеет неполный ответ или субоптимальный ответ (т.е. пациент-человек все равно может получать значительную пользу от продолжающегося лечения, но имеет меньшие шансы на оптимальный долговременный исход) после введения популяции аллогенных клеток и до введения второй популяции аллогенных клеток.
[0155] В конкретных вариантах осуществления две популяции аллогенных клеток, содержащие WT1-специфичные аллогенные T-клетки, каждая из которых рестриктирована по разным аллелям HLA, общим с пациентом-человеком, вводят последовательно. В конкретных вариантах осуществления три популяции аллогенных клеток, содержащие WT1-специфичные аллогенные T-клетки, каждая из которых рестриктирована по разным аллелям HLA, общим с пациентом-человеком, вводят последовательно. В конкретных вариантах осуществления четыре популяции аллогенных клеток, содержащие WT1-специфичные аллогенные T-клетки, каждая из которых рестриктирована по разным аллелям HLA, общим с пациентом-человеком, вводят последовательно. В конкретных вариантах осуществления более четырех популяций аллогенных клеток, содержащих WT1-специфичные аллогенные T-клетки, каждая из которых рестриктирована по разным аллелям HLA, общим с пациентом-человеком, вводят последовательно.
6. ПРИМЕРЫ
[0156] Конкретные варианты осуществления, представленные в настоящем описании, проиллюстрированы с помощью следующих неограничивающих примеров, в которых показано, что терапия с использованием популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки по изобретению, эффективна при лечении WT1-положительной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза с низкой токсичностью или без нее.
6.1. Пример 1. Клиническое исследование фазы I лечения множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза с использованием WT1-специфичных цитотоксических T-клеток
6.1.1. Введение
[0157] Авторы настоящего изобретения разрабатывали клиническое исследование фазы I (IRB# 12-175), спланированное для лечения пациентов с pPCL, sPCL и рефрактерной миеломой с использованием аллогенной TCD HSCT (трансплантации гемопоэтических стволовых клеток с истощением T-клеток) с последующим введением WT1-специфичных цитотоксических T-клеток (WT1 CTL) донорского происхождения. WT1 CTL можно вводить уже, например, через 6 недель после TCD HSCT, т.к. у этих линий T-клеток отсутствует аллореактивность, и, таким образом, их можно вводить гораздо раньше, чем немодифицированные донорские лимфоциты без индуцирования GvHD. Раннее введение этих клеток после аллогенной HSCT у пациентов с плазмоклеточным лейкозом является предпочтительным, т.к. медиана выживаемости без прогрессирования и общая выживаемость составляет всего 9-12 недель после аллогенной HSCT. Первые результаты и соответствующие данные о пациентах, которых лечили с использованием этого подхода, являются многообещающими, и в случае раннего введения (6-8 недель после аллогенной HSCT) WT1-специфичных T-клеток донорского происхождения у 7 пациентов, которых лечили с использованием этих CTL, не наблюдали побочных эффектов, включая отсутствие GvHD в течение до 7 месяцев после аллогенной HSCT.
6.1.2. Способы и материалы:
[0158] Получение WT1-специфичных CTL
[0159] Для выделения T-клеток для сенсибилизации и экспансии in vitro мононуклеарные клетки сначала выделяли из гепаринизированной крови или лейкаферезных препаратов лейкоцитов посредством центрифугирования в градиенте плотности фиколл-гипак. После промывки T-клетки обогащали, исходно истощая моноциты посредством адгезии к стерильным пластиковым флаконам для тканевых культур или с помощью микрочастиц CD14 клинической категории (Miltenyi), если эксперимент начинают с замороженных/размороженных PBMC (мононуклеарных клеток периферической крови). NK-клетки также подвергают истощению посредством инкубации с реагентом, содержащим микрочастицы против CD56 клинической категории (Miltenyi Biotech). Затем CD56+ и CD14+ клетки удаляют посредством адгезии частиц в намагниченной стерильной колонке. Затем обогащенные T-клетками фракции промывают и суспендируют в среде, содержащей 5% предварительно подвергнутой скринингу, термически инактивированной сыворотки AB, в препарате для сенсибилизации.
[0160] Для сенсибилизации in vitro аутологичные активированные цитокинами моноциты (CAM) и аутологичные EBV BLCL, полученные, как описано ранее (Doubrovina et al., 2004, Clin Cancer Res 10:7207-7219), нагружали совокупностью 141 перекрывающегося 15-мера, охватывающего последовательность WT1, где каждый 15-мер находится в концентрации 0,35 мкг/мл. Пептиды синтезированы Invitrogen и сертифицированы как на 95% чистые и микробиологически стерильные. Для нагрузки двух типов антигенпрезентирующих клеток (APC) совокупность нонапептидов, солюбилизированных в DMSO, добавляли к промытым DC (дендритным клеткам) или EBV BLCL (линиям B-лимфоцитов, трансформированных с использованием вируса Эпштейна-Барр), суспендированным в бессывороточной среде в концентрации 1×106 клеток/мл. Эти смеси клеток инкубировали в течение 3 часов, затем промывали бессывороточной средой и добавляли к T-клеткам, суспендированным в концентрации 2×106 T-клеток/мл в среде, содержащей 5% термически инактивированной сыворотки AB человека, при соотношении эффекторных T-клеток и APC 20:1. Культуры поддерживали при 37°C в атмосфере 5% CO2 в воздухе. Сначала культуры сенсибилизировали, а затем ресенсибилизировали 7 днями позже с использованием нагруженных пептидами CAM. Затем нагруженные пептидами EBV BLCL использовали для ресенсибилизации. Ресенсибилизацию осуществляли каждую неделю при соотношении T-клеток и APC 4:1. Через 7 дней начального культивирования добавляли ИЛ-2 с 3-дневными интервалами до концентрации 10 МЕ/мл. Также к средам для культивирования CTL еженедельно добавляли ИЛ-15 в концентрации 10 нг/мл.
[0161] Через 28-35 дней сенсибилизации, если T-клетки являлись цитотоксическими и специфичными, их подвергали экспансии, при необходимости, в крупномасштабных культурах с ИЛ-2 и OKT3 с помощью модификации способа Dudley и Rosenberg (Dudley and Rosenberg, 2007, Semin Oncol 34:524-531) с использованием облученных, аутологичных, нагруженных пептидом WT1 EBV BLCL в качестве облученных фидеров.
[0162] Оценка качества сенсибилизированных пептидом WT1 T-клеток перед выпуском для использования в адоптивной T-клеточной терапии
[0163] Сенсибилизированные T-клетки оценивали на специфичность и реактивность в отношении пептидов WT1 1) посредством подсчета с помощью FACS CD3+, CD8+ и CD4+ T-клеток и 2) посредством оценки их цитотоксичности в отношении немодифицированных и нагруженных пептидом аутологичных и аллогенных антигенпрезентирующих клеток (APC) (таких как PHA-стимулированные бласты, полученные от донора или пациента, полученные от донора дендритные клетки и полученные от донора EBV-трансформированные B-клетки). Опосредованную T-клетками цитотоксичность измеряли с использованием стандартных анализов высвобождения 51Cr, как описано ранее (Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801).
[0164] Для криоконсервации и последующего использования для адоптивной иммунотерапии отбирали культуры T-клеток, содержащие необходимую дозу сенсибилизированных пептидом WT1 T-клеток, у которых отсутствуют ответы на ненагруженные клетки донора и реципиента, превышающие фоновые значения. Их также тестировали на микробиологическую стерильность посредством стандартного культивирования. Также осуществляли тесты на микоплазму и уровни эндотоксина.
[0165] T-клетки считали приемлемыми для введения, если:
[0166] 1. Жизнеспособность клеток составляет >70%;
[0167] 2. Идентичность T-клеток, как полученных из донорского трансплантата пациента, подтверждают посредством типирования HLA;
[0168] 3. T-клеточный продукт является микробиологически стерильным, не содержит микоплазму и содержит <5 ЕЭ эндотоксина/мл культуры T-клеток при конечной заморозке;
[0169] 4. T-клетки могут специфически лизировать >20% WT-1 всех аутологичных донорских APC, нагруженных совокупностью пептидов, и/или всех стимулированных PHA бластов, нагруженных совокупностью пептидов WT-1, с генотипом пациента;
[0170] 5. T-клетки лизируют <15% немодифицированных стимулированных PHA бластов реципиента трансплантата донорских (аутологичных) или аллогенных донорских T-клеток, подлежащего лечению;
[0171] 6. T-клетки лизируют <15% несовпадающих по HLA EBV BLCL; и
[0172] 7. Препараты T-клеток содержат <2% CD19+ B-клеток.
[0173] Количественный анализ функциональных WT1-специфичных T-клеток с помощью анализов внутриклеточного ИФНγ
[0174] Количества WT1-специфичных T-клеток определяли в различные моменты времени до и после инфузий CTL посредством количественного анализа WT1-специфичной продукции ИФНγ. Анализ продукции внутриклеточного ИФНγ осуществляли, как описано ранее (Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801; Tyler et al., 2013, Blood 121:308-317). В кратком изложении, мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC; 106) смешивали с ненагруженными аутологичными PBMC или PBMC, нагруженными совокупностями перекрывающихся пентадекапептидов WT1 и/или пептидов-аналогов, при соотношении эффекторных-стимуляторных клеток 5:1 (Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801; Tyler et al., 2013, Blood 121:308-317). Контрольные пробирки, содержащие эффекторные клетки, инкубировали отдельно до окрашивания. К нестимулированным и стимулированным образцам добавляли брефелдин A (Sigma, St Louis, MO) в концентрации 10 мкг/мл. После инкубации в течение ночи во влажной камере при 5% CO2 и 37°C осуществляли окрашивание и анализ, как описано ранее (Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801; Tyler et al., 2013, Blood 121:308-317). Клетки окрашивали с использованием конъюгированного с аллофикоцианином (APC) антитела против CD3, меченого фикоэритрином (PE) антитела против CD8, конъюгированного с белком хлорофиллов перидином (PerCP) антитела против CD4, фиксировали/пермеабилизовали, а затем окрашивали с помощью антитела против ИФНγ с флуоресцеинизотиоцианатом (FITC) (все от BD Pharmingen, San Jose, CA). Сбор данных осуществляли с помощью проточного цитометра FACSCalibur с тройными лазерами для поддержки 10 цветов с использованием программного обеспечения BD FACSDiva (BD Biosciences). Анализ данных о количествах T-клеток осуществляли с использованием программного обеспечения FlowJo (Tree Star Inc, Ashland, OR).
[0175] Для определения полученного из WT1 эпитопа авторы настоящего изобретения оценивали способность T-клеток продуцировать внутриклеточный ИФНγ в ответ на PBMC, в которые вводили одну из 22 совокупностей пентадекапептидов. Затем отдельные пентадекапептиды из положительных совокупностей тестировали на индукцию внутриклеточного ИФНγ. Затем рестриктирование по HLA анализировали по цитотоксичности T-клеток, определяемой по их способности лизировать клетки-мишени с введенным пептидом или контрольные клетки-мишени с использованием стандартного анализа цитотоксичности с 51Cr, как описано ранее (Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801). Клетки-мишени включали полученный от пациента образец, содержащий плазматические клетки (периферическая кровь или костный мозг), стимулированные PHA бласты пациента и EBV-BLCL с известным типом HLA, в которые вводили соответствующие или несоответствующие пептиды, как описано ранее (Trivedi et al., 2005, Blood 105:2793-2801; Dudley and Rosenberg, 2007, Semin Oncol 34:524-531).
[0176] Определение количеств WT1-специфичных клеток посредством анализа тетрамеров MHC
[0177] Количества WT1-специфичных T-клеток определяли в те же моменты времени у пациентов, экспрессирующих аллели HLA A*0201 и A*0301, посредством окрашивания с использованием соответствующих тетрамеров главного комплекса гистосовместимости (MHC) A*0201/RMF и A*0301/RMF, как описано ранее. В кратком изложении, PBMC окрашивали с использованием 25 мкг/мл PE-меченого тетрамерного комплекса, 3 мкл моноклонального антитела против CD3 с фикоэритринцианином-7 (PE-Cy7), 5 мкл антитела против CD8 PerCP, 5 мкл антитела против CD45RA APC и 5 мкл антитела против CD62L FITC (все от BD Bioscience) в течение 20 минут при 4°C. Также осуществляли соответствующие контрольные окрашивания с несовпадающими по HLA тетрамерами. Затем окрашенные клетки промывали, ресуспендировали в буфере для активируемой флуоресценцией сортировки клеток (FACS) (PBS++ с 1% BSA и 0,1% азида натрия). Сбор данных осуществляли с помощью проточного цитометра FACSCalibur с тройными лазерами для поддержки 10 цветов с использованием программного обеспечения BD FACSDiva (BD Biosciences). Анализ данных о количествах T-клеток осуществляли с использованием программного обеспечения FlowJo (Tree Star Inc, Ashland, OR).
[0178] Анализ цитотоксичности in vitro
[0179] Для оценки эффективности in vitro использовали стандартный 4-часовой анализ цитотоксичности с меткой 51Cr. Клетки-мишени для лизиса включали HLA-A*02-положительные линии миеломных клеток человека (ранее идентифицированные посредством проточной цитометрии) и аутологичные и совпадающие по HLA (в случае полученных от донора T-клеток) CD138 миеломные клетки, подвергнутые положительной селекции с использованием магнитных частиц. В качестве отрицательных контролей использовали HLA-A*02-отрицательные линии миеломных клеток человека и аутологичные (или клетки совпадающего хозяина в случае полученных от донора T-клеток) мононуклеарные клетки периферической крови.
[0180] Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток с истощением T-клеток
[0181] Всех пациентов подготавливали к аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток с истощением T-клеток (TCD HSCT) с использованием бусульфана (Busulfex®) (0,8 мг/кг/дозу Q6H, 10 доз), мелфалана (70 мг/м2/сутки, 2 дозы) и флударабина (25 мг/м2/сутки, 5 доз). Дозы бусульфана и мелфалана корректировали в соответствии с идеальной массой тела, дозу бусульфана корректировали в соответствии с фармакокинетическими исследованиями первой дозы и дозы флударабина корректировали в соответствии с измеренным клиренсом креатинина. Пациентам также вводили ATG (Thymoglobulin®) перед трансплантацией для стимуляции приживления и профилактики реакции "трансплантат против хозяина" после трансплантации.
[0182] Предпочтительным источником стволовых клеток являлись стволовые клетки периферической крови (PBSC), мобилизованные посредством введения донору Г-КСФ в течение 5-6 дней. Выделяли PBSC и T-клетки подвергали истощению посредством положительной селекции CD34+ клеток-предшественников с использованием системы селекции клеток CliniMACS. Затем CD34+ клетки-предшественники периферической крови, истощенные по T-клеткам, вводили пациентам после завершения циторедукции. Медикаментозную профилактику GvHD после трансплантации не проводили. Всем пациентам после трансплантации также вводили Г-КСФ для стимуляции приживления. Пациенты также имели донора трансплантата гемопоэтических стволовых клеток, давшего согласие сдавать дополнительную кровь для получения WT1-специфичных цитотоксических T-клеток.
6.1.3. Результаты:
[0183] В исследование включали пациентов с первичным плазмоклеточным лейкозом (pPCL) или вторичным плазмоклеточным лейкозом (sPCL) и рецидивирующей/рефрактерной множественной миеломой. По протоколу пациентов подвергали аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток с истощением T-клеток (TCD HSCT) с последующим внутривенным введением WT1-специфичных цитотоксических T-клеток, полученных от донора (WT1 CTL). WT1 CTL вводили уже через 6 недель после аллогенной TCD HSCT, т.к. эти линии T-клеток утрачивали аллореактивность, несмотря на сенсибилизацию при культивировании, и авторы настоящего изобретения предполагали, что эти клетки, таким образом, можно вводить гораздо раньше, чем немодифицированные донорские лимфоциты без индуцирования GvHD. Осуществляли раннее введение этих клеток пациентам с PCL или рецидивирующей/рефрактерной MM, т.к. медиана выживаемости без прогрессирования и общая выживаемость является небольшой.
[0184] Авторы настоящего изобретения включали в протокол 11 пациентов и 7 пациентам вводили WT1-специфичные CTL донорского происхождения после аллогенной TCD HSCT. Учитывая агрессивную природу PCL, у 4 пациентов наблюдали прогрессирование и их исключали из исследования до введения WT1-специфичных CTL. Для настоящего исследования WT1-специфичные T-клетки получали в отделении GMP посредством сенсибилизации лимфоцитов доноров с использованием антигенпрезентирующих клеток, в которые вводили совокупность перекрывающихся пентадекапептидов, охватывающих белок WT1. WT1 CTL вводили в количестве 1×106/кг/неделю, 3×106/кг/неделю или 5×106/кг/неделю в 3 дозах на каждом уровне доз и с 4 недельными интервалами, начиная через 6-8 недель после трансплантации. У этих пациентов не наблюдали побочных эффектов, включая GvHD. Авторы настоящего изобретения наблюдали впечатляющие клинические ответы у этих пациентов и анализировали WT1-специфичные T-клеточные ответы, ассоциированные с повышением CD8+ и CD4+ WT1-специфичных T-клеток в крови и костном мозге этих пациентов. Два примера представлены на фигурах 1 и 2.
[0185] Пациента, которого лечили, как показано на фигуре 1, подвергали аллогенной TCD HSCT по причине sPCL, рефрактерного к химиотерапии спасения с использованием VDT-PACE (схемы комбинированной химиотерапии с использованием бортезомиба, дексаметазона, талидомида, цисплатина, доксорубицина, циклофосфамида и этопозида). Как показано, у пациента все равно наблюдали значительное заболевание после TCD HSCT с концентрацией M-белка 0,8 г/дл и соотношением каппа:лямбда 24. Авторы настоящего изобретения анализировали количества WT1-специфичных T-клеток посредством анализа внутриклеточного ИФНγ, как описано выше, и строили график абсолютных количеств CD8+ и CD4+ WT1-специфичных T-клеток после инфузий WT1-специфичных T-клеток. Как показано на фигуре 1, маркеры заболевания снижались, в то время как абсолютные количества CD8+ и CD4+ WT1-специфичных CTL значительно повышались. У этого пациента развивалась полная ремиссия, длившаяся более 2 лет.
[0186] На фигуре 2 показаны результаты, полученные после аллогенной TCD HSCT и последующей инфузии WT1-специфичных CTL, полученных от донора, у пациента с pPCL, рефрактерным к предыдущему лечению, включая 5 циклов RVD (схемы комбинированной химиотерапии с использованием леналидомида, бортезомиба и дексаметазона), 2 циклов VDT-PACE и аутологичную трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток с использованием схемы кондиционирования 200 мг/м2 мелфалана. У этого пациента все равно наблюдали остаточную болезнь, измеряемую по свободным легким каппа-цепям после аутологичной трансплантации стволовых клеток, и, как показано, его специфический маркер заболевания все равно находился на повышенном уровне после аллогенной TCD HSCT, но снижался до нормального уровня после введения 3 доз WT1-специфичных CTL, при этом он достигал количеств CD8+ и CD4+ WT1-специфичных T-клеток, измеряемых посредством анализа внутриклеточного ИФНγ, после инфузий CTL. У этого пациента наблюдали CR (полный ответ) в течение >1,5 лет. Примечательно, что, как показано на фигуре 3, высокий риск по данным цитогенетического анализа, проводимого на обогащенной популяции плазматических клеток из его костного мозга, также снижался после инфузий WT1-специфичных CTL.
[0187] Лечению подвергали другого пациента, и он достигал полной ремиссии после индукционной химиотерапии с последующей аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток. 3 месяцами позже этого пациента подвергали аллогенной TCD HSCT с использованием неродственного донора, а затем вводили 3 дозы WT1-специфичных CTL донорского происхождения. Этот пациент с sPCL находится в полной ремиссии в течение 2 лет.
[0188] Кроме того, 4 пациентов с рецидивирующей/рефрактерной множественной миеломой подвергали лечению с использованием аллогенной TCD HSCT с последующим введением WT1-специфичных CTL, полученных от донора. Все эти пациенты не отвечали на множество линий лечения, включая комбинированное лечение леналидомидом и бортезомибом и аутологичную трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток. У одного из этих пациентов развивался частичный ответ, и этот частичный ответ продолжали наблюдать через 18 месяцев после аллогенной HSCT. У двоих из этих пациентов развивалось стабильное заболевание в течение 19 месяцев после аллогенной HSCT. Только у одного из этих пациентов наблюдали агрессивное прогрессирование заболевание с развитием sPCL через 7 месяцев после аллогенной HSCT и 5 месяцев после введения WT1-специфичных CTL, впоследствии он умер от sPCL, рефрактерного к дальнейшей комбинированной химиотерапии.
6.2. Пример 2. Оценка эффективности сторонних WT1-специфичных цитотоксических T-клеток с использованием моделей H929 и L363 множественной миеломы/плазмоклеточного лейкоза
6.2.1. Краткое изложение
6.2.1.1. Период исследования
[0189] Более 3 месяцев.
6.2.1.2. Цель
[0190] Оценка эффективности ATA 520 против множественной миеломы (MM)/плазмоклеточного лейкоза (PCL) в моделях диссеминированного заболевания на мышах при использовании схемы со сторонним донором.
6.2.1.3. Животные
[0191] Самки мышей NOD/Shi-scid/IL-2Rγnull (NOG) возрастом 5-6 недель.
6.2.1.4. Исследуемые препараты
[0192] Библиотека линий T-клеток: ATA 520. Линии T-клеток из ATA 520, выбранные по рестриктированию по аллелю HLA, общему с линией клеток-мишеней MM.
[0193] Линия клеток-мишеней MM H929, совпадающая по HLA A03:01 с линией T-клеток, обозначенная как лот № 3 из ATA 520.
[0194] Линия клеток-мишеней MM L363, совпадающая по HLA C07:01 с линией T-клеток, обозначенная как лот № 4 из ATA 520.
6.2.1.5. Способы
[0195] Линии клеток MM типировали по HLA, и они совпадали с соответствующим образом рестриктированными линиями T-клеток из ATA 520, как указано в информации об исследуемых препаратах. Осуществляли два исследования эффективности in vivo в 3 группах с помощью выбранных моделей множественной миеломы (ксенотрансплантатов, полученных из линий клеток, "CDX") с использованием линий клеток L363 и H929. Оценку противоопухолевой активности внутривенно инъецируемых T-клеток в двух разных недельных дозах (2×106 клеток на мышь и 10×106 клеток на мышь, соответственно) в виде монотерапии осуществляли с помощью витальной визуализации с использованием флуоресцентно меченого антитела против CD138.
[0196] Эксперименты включали 8 животных/группу, которым внутривенно вводили опухолевые имплантаты (инъекция 5×106 клеток на животное). Минимальный размер группы при рандомизации составлял 7 животных/группу. Запланированный период исследования составлял 5 недель. В качестве референса включали контрольную группу, которой вводили наполнитель (наполнитель: фосфатно-солевой буфер).
[0197] Осуществляли определение массы тела (дважды в неделю) и визуализацию заболевания in vivo ("IVI", один раз в неделю с использованием антитела против CD138).
[0198] По возможности, получали образцы грудины, задних конечностей, печени и селезенки для дальнейших анализов.
6.2.1.6. Результаты и выводы
[0199] После циклов введения 5 доз линий T-клеток из ATA 520 мышам, больным MM/PCL, лечение приводило к максимальному ингибированию роста заболевания на 51,9% в моделях H929 и 18,2% в моделях L363 по сравнению с контрольной группой, которой вводили наполнитель, в течение периода исследования (p<0,002 и p<0,01, соответственно, по данным одностороннего ANOVA). Уровень контроля заболевания в группах низких и высоких доз не отличался значимо в этих двух исследованиях.
[0200] Используя эти две модели в качестве доклинической модели для выпуска ATA 520 с использованием стороннего донора (ATA 520 частично совпадает по HLA с неродственными клетками-мишенями), в этом исследовании определяли способность ATA 520 значительно ингибировать рост опухоли диссеминированной множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза.
6.2.2. Список некоторых сокращений и определения
| Сокращение | Расширенный термин |
| NOG | NOD/Shi-scid/IL-2Rγnull |
| TGI | Ингибирование роста опухоли |
| ANOVA | Дисперсионный анализ |
| IACUC | Комитет по содержанию и использованию лабораторных животных |
| IV | Внутривенно |
| MM | Множественная миелома |
| QD | Один раз в сутки |
| SEM | Стандартная ошибка среднего |
| MM/PCL | Множественная миелома/Плазмоклеточный лейкоз |
| HLA | Лейкоцитарный антиген человека |
6.2.3. Введение
[0201] ATA 520 является библиотекой различных линий T-клеток, специфичных к эпитопам WT-1, презентируемым специфичным HLA. Если используют линию T-клеток из ATA 520, рестрирктированную так, что она совпадает по эпитопу WT-1, презентируемому аллелем HLA, обнаруживаемым на аллогенных клетках-мишенях, линия T-клеток облегчает дегрануляцию и индуцируемую T-клетками элиминацию клеток-мишеней. WT1 является фактором транскрипции, как правило, встречающимся в ядерных областях клеток при его экспрессии. Экспрессия WT1 распространена при многих солидных злокачественных новообразованиях и гемобластозах. Существуют клинические данные об использовании линий T-клеток из ATA 520 в аллогенных условиях после трансплантации в группах пациентов с MM и PCL.
[0202] Для моделирования использования линий клеток из ATA 520 в условиях использования стороннего донора в схожей исследуемой группе в этом исследовании использовали мышей NOD/Shi-scid/IL-2Rγnull (NOG), несущих ксенотрансплантаты клеток MM/PCL человека в качестве модели пациента с MM/PCL. Пораженные клетки в этой модели подвергали полному типированию HLA и сравнивали с линиями T-клеток из ATA 520 с рестриктированием по одному аллелю HLA. Учитывая совпадение по одному аллелю HLA, обнаруживаемому на клетках-мишенях, выбирали линии T-клеток из ATA 520, представляющие собой модель использования стороннего донора для выбора лечения.
[0203] Таким образом, настоящее исследование осуществляли для анализа противоопухолевой эффективности ATA 520 при использовании в условиях использования стороннего донора в моделях MM/PCL in vivo.
6.2.4. Цели
[0204] Настоящее исследование осуществляли для анализа противоопухолевой эффективности ATA 520 при использовании в сторонних условиях в моделях MM/PCL in vivo.
6.2.5. Лабораторные животные
[0205] Модели H929
[0206] 24 самок мышей NOG
[0207] Источник: Taconic
[0208] Диапазон возраста на начало исследования: 5-6 недель
[0209] Модели L363
[0210] 24 самок мышей NOG
[0211] Источник: Taconic
[0212] Диапазон возраста на начало исследования: 5-6 недель
6.2.6. Содержание лабораторных животных
[0213] Самок мышей NOG возрастом 5-6 недель содержали в виварии Oncotest/CRL. Мышей содержали в барьерной системе с контролируемой температурой (70°±10°F), влажностью (50%±20%) и циклом 12 ч. освещения/12 ч. темноты. Мышей держали в клетках-изоляторах (5 мышей на клетку), и они имели свободный доступ к стандартному гранулированному корму и воде в течение эксперимента. Всех мышей содержали в соответствии с рекомендациями Комитета по содержанию и использованию лабораторных животных (IACUC) Oncotest/CRL.
6.2.7. Исследуемые материалы
[0214] Линии T-клеток из ATA 520 (включая лот № 3 и лот № 4) получали в Memorial Sloan Kettering Cancer Center (MSKCC), поддерживали в виде концентрированных растворов и хранили в жидком азоте до использования. ATA 520 получали способами, описанными в разделе 6.1.2.
6.2.8. Дизайн исследования
[0215] Протокол исследования представлен в таблице 1.
[0216] Самкам мышей NOG возрастом 5-6 недель внутривенно (IV) имплантировали 5×106 клеток H929 или L363. Еженедельную визуализацию осуществляли с использованием IV введение hCD138Ab-Alexa750 для отслеживания состояния приживления с использованием системы визуализации IVIS®. После получения средних значений при измерения всего тела (~14-17 дней после инокуляции) мышей распределяли по трем группам для нормализации получаемого среднего сигнала на группу. Минимальный размер группы при рандомизации составлял 7 животных/группу. Затем мышам вводили 10 мл/кг наполнителя (т.е. фосфатно-солевого буфера) или линию T-клеток из ATA 520 в количестве 2×106 или 10×106 клеток/мышь (т.е. 5×106 клеток/мл или 25×106 клеток/мл в объеме 0,4 мл на мышь) по схеме Q7D (т.е. один раз каждые 7 дней) 5 раз. Визуализацию мышей проводили каждые 7 дней в течение периода введения доз для оценки опухолевой массы. Массу тела определяли дважды в неделю. По возможности, получали образцы грудины, задних конечностей, печени и селезенки для дальнейших анализов.
[0217] Таблица 1. Дизайн исследования
| № группы | Tx | Доза ATA 520 | Объем дозыb | Дни введения доз | Путь | Наполнитель | n | Мониторинг |
| 1 | Наполнитель | - | 20 мл/кг | Q7Dx5 | IV | PBS | 8 | IVI Q7Dx6a |
| 2 | Низкая доза ATA 520 | 2×106 клеток/мышь | 20 мл/кг | Q7Dx5 | IV | PBS | 8 | IVI Q7Dx6 |
| 3 | Высокая доза ATA 520 | 10×106 клеток/мышь | 20 мл/кг | Q7Dx5 | IV | PBS | 8 | IVI Q7Dx6 |
a Q7Dx6 означает один раз каждые 7 дней всего 6 раз.
b В целях вычисления дозы массу мышей принимали за 20 граммов.
6.2.9. Экспериментальные способы
6.2.9.1. Тестирование HLA и селекция линий клеток из ATA 520
[0218] Замороженные клеточные осадки линий клеток-мишеней H929 и L363 типировали по HLA с использованием секвенирования высокого разрешения Tier 1 (таблица 2). В целом, препараты gDNA получали из клеточных осадков с использованием наборов Qiagen. Затем осуществляли типирование с помощью ПЦР с сиквенс-специфичными олигонуклеотидами (ПЦР-SSOP) для определения основных групп аллелей до 4 знаков с некоторой вырожденностью (например, HLA-A*23:01/03/05/06).
[0219] Геномную ДНК амплифицировали с использованием ПЦР, затем инкубировали с панелью различных олигонуклеотидных зондов с использованием технологии Luminex xMAP®; каждый олигонуклеотид имеет особенную реакционную способность в отношении разных типов HLA.
[0220] Затем полученные характеристики HLA для каждой из двух линий клеток-мишеней сравнивали с характеристиками рестриктирования в библиотеке AT-520 для идентификации совпадающих линий T-клеток для каждой линии клеток-мишеней (таблица 3). Затем одну совпадающую линию T-клеток использовали в схеме исследования для мышей, несущих мишене-специфичное заболевание MM/PCL, для каждой из двух линий клеток-мишеней.
6.2.9.2. Состав дозы и введение
[0221] Замороженные сосуды с концентрированными выбранными линиями T-клеток из ATA 520 осторожно размораживали на водяной бане при 37°C. Концентрированный раствор осторожно перемешивали и делали однородным посредством повторного пипетирования с использованием пипетки на 1 мл. Затем линии T-клеток из ATA 520 разводили в PBS +10% альбумина человека, получая сток с концентрацией 25×106 клеток/мл для группы высоких доз или 5×106 клеток/мл для группы низких доз. Делали свежие стоки в каждый день введения дозы.
[0222] Животным вводили дозы еженедельно в течение 5 недель (Q7Dx5) посредством внутривенной инъекции.
6.2.9.3. Противоопухолевая эффективность
In Vivo
[0223] 5×106 клеток MM/PCL имплантировали мышам NOG за 12-17 дней до начала исследования. В день 0 самкам мышей NOG вводили наполнитель или линию T-клеток из ATA 520 в двух разных дозах (согласно таблице 1) в течение 5 недельных циклов. Опухолевую массу подвергали мониторингу посредством введения hCD138-Alexa750 IV и измерения флуоресценции всего тела в качестве модели опухолевой массы в течение периода исследования. Анализировали изображения, вычисляли и регистрировали сумму дорзальных и вентральных сигналов. Вычисляли среднее и стандартную ошибку для сигналов всего тела для каждой исследуемой группы для каждого сеанса визуализации. Строили график сигналов всего тела ± стандартная ошибка среднего (SEM) относительно дня исследования для представления кинетики роста опухоли для каждой группы в течение исследования. Для вычисления ингибирования роста опухоли (TGI) в конце исследования вычисляли процент ингибирования сигнала всего тела для каждой мыши по сравнению с контрольной группой, которой вводили наполнитель. Получали средний процент ингибирования ± SEM для каждой группы. Указанные выше вычисления с отслеживанием стандартных ошибок осуществляли с использованием GraphPad Prism v.6.0c. Полученные значения TGI в группах анализировали посредством одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) и критерия множественного сравнения Тьюки.
6.2.9.4. Статистические способы
[0224] Все сравнения интенсивностей и вычисления TGI осуществляли с использованием GraphPad Prism v6.0c. Значения TGI в группах анализировали посредством одностороннего ANOVA и критерия множественного сравнения Тьюки.
6.2.10. Данные и результаты
6.2.10.1. Типирование HLA и рестриктирование ATA 520
[0225] Результаты типирования HLA уровня Tier 1 клеток-мишеней MM/PCL посредством ПЦР представлено в таблице 2.
[0226] Таблица 2. Типирование HLA клеток-мишеней L363 и H929*
| Семейство аллелей | L363 | H929 |
| HLA-A | *02:01/01Q/01L/09/43N/66/75/83N/89/97/132/134/140/241/252/256/266/291/294/305N/327/329/356N/357/397/411/446/455/468N/469/48-483/491/501N/502/525N/530/533/538/539/542/552 | *03:01/01N/20/21N/26/37/45/78/112/118/129N/132/134/162N/182/184/188/195/197N/209 |
| HLA-A1 | *31:01/14N/23/46/48/55/56/59/71/72/81/83/6 | *24:02/02Q/09N/11N/40N/76/79/83N/144/150/153/154/155N/163N/183N/231/249-251/263-272/275/276/279/280/282/283/287/292 |
| HLA-B | *07:02/44/49N/58/59/61/104/120/128-130/156/161N/169/212/217/221/224/230/231N/233/240/241 | *07:02/07/44/49N/58/59/61/104/120/128-130/156/161N/169/212/217/221/224/230/231N/233/234/240/241 |
| HLA-B1 | *40:01/55/141/150/151/179/221/236/241/247/264/272/273/277/278/286N | *18:01/14/53/73/81/89/99/100/103 |
| HLA-C | *03:04/100/101/105/106/186/193/208N/211/212-213/218/219/235/236/239/252/256/257/259 | *07:01/06/18/19/52/103/131/153/166/301/303/310/311/313/331/337/343/362/366/369/371/377/385/386/407/408 |
| HLA-C1 | *07:02/50/66/74/159/160/167/195/245/305/306/308/319-321/327/334/339-341/344/345/348/349/350N/359/363/368/374/381-384/389/391/392/393N/398/400/401/405 | *07:02/27/50/66/74/159/160/167/195/245/305/306/308/312/316/319-321/325/327/333/334/339-341/344/345/347N/348/349/350N/359/363/368/372/374/376/381-384/388/389/392/393N/396-398/400/401/405/409 |
*(Представлены данные для класса I; данные для класса II не представлены)
[0227] Данные о типировании HLA в таблице 2 соотносили с рестриктированием по HLA WT-1-специфичных CTL в библиотеке ATA 520 для идентификации линий T-клеток из ATA 520, совместимых с профилями аллелей HLA клеток-мишеней, посредством сопоставления рестриктирования по одному аллелю, обнаруживаемому на клетках-мишенях. Линии T-клеток из библиотеки ATA 520 с совпадением рестриктирования по одному аллелю по меньшей мере с одной из линий клеток-мишеней представлены в таблице 3.
[0228] Таблица 3. T Линии клеток из ATA 520, совместимые с профилями HLA клеток-мишеней
| Уникальный ID лота | Рестриктирование WT-1 по HLA (только CTL) | Совпадающее семейство аллелей | |
| H929 | L363 | ||
| Лот № 1 | A 0201 | A | |
| Лот № 2 | A 0201 | A | |
| Лот № 3 | A 0301/01N | A | |
| Лот № 4 | C 0701/06/18 | C | C |
| Лот № 5 | A 2402 B 3503 | A | |
| Лот № 6 | C 0701/06/18 | C | C |
| Лот № 7 | A 0201 C 0401 | A | |
| Лот № 8 | A 0201 C 1203 DRB1 1302 DRB1 1104 | A | |
[0229] В таблице 3 приведен ряд линий T-клеток из ATA 520 (идентификаторы линий клеток приведены в первой колонке), рестриктирование которых совпадает по меньшей мере по одному аллелю HLA, экспрессируемому на клетках-мишенях H929 или L363. Рестриктирование линий клеток из ATA 520 приведено в 4-ой колонке, и в правых двух колонках указано, какое семейство аллелей, обнаруживаемое в клетках-мишенях, совпадает с указанным рестриктированием для каждой линии T-клеток из ATA 520. Две линии T-клеток из ATA 520, выбранные для этого исследования на мышах, указаны серым цветом. Линию T-клеток W01-D1-136-10 выбирали для введения больным мышам с H929 с учетом совпадающего рестриктирования по аллелю HLA A03:01, обнаруживаемому в H929. Линию T-клеток W01-D1-088-10 выбирали для введения больным мышам с L363 с учетом совпадающего рестриктирования по аллелю HLA C07:01, обнаруживаемому в L363.
6.2.10.2. Клинические наблюдения
[0230] На всем протяжении периода введения доз животных наблюдали на наличие каких-либо клинически значимых отклонений и необычного поведения и реакций. Не отмечено неблагоприятных клинических наблюдений в течение прижизненной части настоящего исследования.
6.2.10.3.
Эффективность
in vivo
[0231] Опухолевая масса в группе MM у мышей, несущих H929 представлена в
[0232] таблице 4, а также приведена в виде графика с исходной энергетической яркостью для каждой группы, приведенной на фигуре 4. На фигуре 5 также представлен анализ групп в день 28.
[0233] Таблица 4. Кратное изменение опухолевой массы MM всего тела и SEM в случае H929
| Наполнитель | Низкая доза | Высокая доза | ||||
| Дни после введения | Среднее | SEM | Среднее | SEM | Среднее | SEM |
| 0 | 9,066E+07 | 5,597E+06 | 9,176E+07 | 2,512E+06 | 8,893E+07 | 1,983E+06 |
| 7 | 1,859E+08 | 9,940E+06 | 1,818E+08 | 3,318E+06 | 1,770E+08 | 5,189E+06 |
| 14 | 2,992E+08 | 1,069E+07 | 2,736E+08 | 8,160E+06 | 2,721E+08 | 1,237E+07 |
| 21 | 4,118E+08 | 2,195E+07 | 3,065E+08 | 2,181E+07 | 2,908E+08 | 1,157E+07 |
| 28 | 4,653E+08 | 3,413E+07 | 2,238E+08 | 1,957E+07 | 2,310E+08 | 1,599E+07 |
[0234] Опухолевая масса в группе MM в случае мышей, несущих L363, в день 21 в виде средних и отдельных значений представлена на фигуре 6.
[0235] После циклов из 5 доз выбранной линии T-клеток из ATA 520 у мышей, больных MM/PCL, введение приводило к максимальному ингибированию роста заболевания на 51,9% в моделях H929 и 18,2% в моделях L363 по сравнению с контрольной группой, которой вводили наполнитель, в течение периода исследования (p<0,002 и p<0,01, соответственно, по результатам одностороннего ANOVA). В этих двух исследованиях уровень контроля заболевания в группах низких и высоких доз не отличался значимо.
6.2.11. Выводы
[0236] Противоопухолевую эффективность библиотеки линий T-клеток, обозначенной как ATA 520, исследовали на двух ортометастатических моделях ксенотрансплантатов множественной миеломы/плазмоклеточного лейкоза, исследуемых в условиях использования стороннего донора. Клетки-мишени типировали по HLA и независимо сопоставляли с двумя отдельными линиями T-клеток из ATA 520 с учетом рестриктирования линии T-клеток по аллелю HLA, экспрессируемому на клетках-мишенях. В двух моделях стороннего лечения MM/PCL с помощью ATA 520 в случае монотерапии ATA 520 наблюдали значительное ингибирование роста опухоли в схемах с использованием высоких и низких доз. В обоих исследованиях не наблюдали значимых различий в эффективности в схемах с использованием высоких и низких доз. Две независимые линии T-клеток из ATA 520, каждая из которых рестриктирована по разным аллелям HLA, значимо ингибировали рост соответствующим образом совпадающих клеток-мишеней заболевания в двух моделях лечения с использованием стороннего донора.
[0237] Эти результаты свидетельствуют о мощной противоопухолевой активности линий T-клеток из ATA 520 в усовершенствованных моделях MM/PCL и возможности использования схожего подхода для лечения с использованием сторонних линий T-клеток из ATA 520, совпадающих с пациентами по рестриктированию по аллелю линии T-клеток из ATA 520 (ассоциированному с их активностью).
7. Включение в качестве ссылки
[0238] Все цитируемые в настоящем описании ссылки включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме и для всех целей до той степени, как если бы каждая отдельная публикация, или патент, или патентная заявка были специально и конкретно указаны как включенные в настоящее описание в полном объеме в качестве ссылки для всех целей.
[0239] Можно осуществлять множество модификаций и вариантов настоящего изобретения без отклонения от его сущности и объема, как это будет очевидно специалистам в этой области. Конкретные варианты осуществления, представленные в настоящем описании, предложены исключительно в качестве примера, и настоящее изобретение ограничено исключительно формулой изобретения вместе с полным объемом эквивалентов, к которым относится такая формула изобретения.
Claims (106)
1. Способ лечения WT1(белок опухоли Вильмса 1)-положительной множественной миеломы у пациента-человека, включающий введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, в анализе цитотоксичности in vitro и где популяция аллогенных клеток рестриктирована по аллелю HLA, общему с пациентом-человеком.
2. Способ по п.1, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro.
3. Способ по п.1, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro.
4. Способ по п.1, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток из линии B-лимфоцитов, трансформированных с использованием вируса Эпштейна - Барр (EBV BLCL), в анализе цитотоксичности in vitro.
5. Способ по п.1, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro.
6. Способ по п.1, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro.
7. Способ по п.1, где антигенпрезентирующие клетки являются нагруженными совокупностью пептидов WT1, стимулированными фитогемагглютинином лимфобластами, полученными от пациента-человека.
8. Способ по п.1, где антигенпрезентирующие клетки являются нагруженными совокупностью пептидов WT1 антигенпрезентирующими клетками, полученными от донора популяции аллогенных клеток.
9. Способ по п.1, где популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, и демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1 антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток.
10. Способ по п.1, где перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку проводят терапию множественной миеломы, отличающуюся от указанной популяции аллогенных клеток.
11. Способ по п.10, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день окончания указанной терапии или вплоть до 12 недель после.
12. Способ по п.10, где терапия является аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (HSCT), аллогенной HSCT, химиотерапией злокачественного новообразования, индукционной терапией, лучевой терапией или их комбинацией для лечения множественной миеломы.
13. Способ по п.10, где терапия является HSCT.
14. Способ по п.13, где терапия является аутологичной HSCT.
15. Способ по п.14, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже.
16. Способ по п.15, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аутологичной HSCT.
17. Способ по п.14, где аутологичная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови.
18. Способ по п.13, где терапия является аллогенной HSCT.
19. Способ по п.18, где популяцию аллогенных клеток получают от донора аллогенных HSCT.
20. Способ по п.18, где популяцию аллогенных клеток получают от стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT.
21. Способ по п.18, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже.
22. Способ по п.21, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аллогенной HSCT.
23. Способ по п.18, где аллогенная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови.
24. Способ по п.10, где пациент-человек не получает пользу от терапии до указанного введения популяции аллогенных клеток.
25. Способ по п.24, где множественная миелома является рефрактерной к терапии или рецидивирует после терапии.
26. Способ по п.25, где множественная миелома является первичной рефрактерной множественной миеломой.
27. Способ по п.25, где множественная миелома является рецидивирующей множественной миеломой.
28. Способ по п.25, где множественная миелома является рецидивирующей и рефрактерной множественной миеломой.
29. Способ по п.24, где пациент-человек прекращает терапию по причине непереносимости терапии.
30. Способ по п.1, где перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку не проводят терапию множественной миеломы.
31. Способ по п.1, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы.
32. Способ по п.31, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза множественной миеломы.
33. Способ по п.1, где указанное введение популяции аллогенных клеток не приводит к какой-либо реакции "трансплантат против хозяина" (GvHD) у пациента-человека.
34. Способ лечения WT1-положительного плазмоклеточного лейкоза у пациента-человека, включающий введение пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более антигенпрезентирующих клеток, нагруженных пептидом WT1, в анализе цитотоксичности in vitro, и где популяция аллогенных клеток рестриктирована по аллелю HLA, общему с пациентом-человеком.
35. Способ по п.34, где плазмоклеточный лейкоз является первичным плазмоклеточным лейкозом.
36. Способ по п.34, где плазмоклеточный лейкоз является вторичным плазмоклеточным лейкозом.
37. Способ по п.34, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro.
38. Способ по п.34, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro.
39. Способ по п.34, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro.
40. Способ по п.34, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, в анализе цитотоксичности in vitro и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro.
41. Способ по п.34, где популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от донора популяции аллогенных клеток, в анализе цитотоксичности in vitro и популяция аллогенных клеток лизирует 15% или менее немодифицированных, несовпадающих по HLA клеток EBV BLCL в анализе цитотоксичности in vitro.
42. Способ по п.34, где антигенпрезентирующие клетки являются нагруженными совокупностью пептидов WT1, стимулированными фитогемагглютинином лимфобластами, полученными от пациента-человека.
43. Способ по п.34, где антигенпрезентирующие клетки являются нагруженными совокупностью пептидов WT1 антигенпрезентирующими клетками, полученными от донора популяции аллогенных клеток.
44. Способ по п.34, где популяция аллогенных клеток демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1, стимулированных фитогемагглютинином лимфобластов, полученных от пациента-человека, и демонстрирует лизис 20% или более нагруженных совокупностью пептидов WT1 антигенпрезентирующих клеток, полученных от донора популяции аллогенных клеток.
45. Способ по п.34, где перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку проводят терапию плазмоклеточного лейкоза, отличающуюся от указанной популяции аллогенных клеток.
46. Способ по п.45, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день окончания указанной терапии или вплоть до 12 недель после.
47. Способ по п.45, где терапия является аутологичной HSCT, аллогенной HSCT, химиотерапией злокачественного новообразования, индукционной терапией, лучевой терапией или их комбинацией для лечения плазмоклеточного лейкоза.
48. Способ по п.45, где терапия является HSCT.
49. Способ по п.48, где терапия является аутологичной HSCT.
50. Способ по п.49, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже.
51. Способ по п.50, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аутологичной HSCT.
52. Способ по п.49, где аутологичная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови.
53. Способ по п.48, где терапия является аллогенной HSCT.
54. Способ по п.53, где популяцию аллогенных клеток получают от донора аллогенных HSCT.
55. Способ по п.53, где популяцию аллогенных клеток получают от стороннего донора, отличающегося от донора аллогенных HSCT.
56. Способ по п.53, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в день аутологичной HSCT или до 12 недель позже.
57. Способ по п.56, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после аллогенной HSCT.
58. Способ по п.53, где аллогенная HSCT является трансплантацией стволовых клеток периферической крови.
59. Способ по п.45, где пациент-человек не получает пользу от терапии.
60. Способ по п.59, где плазмоклеточный лейкоз является рефрактерным к терапии или рецидивирует после терапии.
61. Способ по п.59, где пациент-человек прекращает терапию по причине непереносимости терапии.
62. Способ по п.34, где перед введением популяции аллогенных клеток пациенту-человеку не проводят терапию плазмоклеточного лейкоза.
63. Способ по п.34, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в течение 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза.
64. Способ по п.63, где первую дозу популяции аллогенных клеток вводят в период от 5 до 12 недель после постановки диагноза плазмоклеточного лейкоза.
65. Способ по п.34, где указанное введение популяции аллогенных клеток не приводит к какой-либо GvHD у пациента-человека.
66. Способ по любому из пп. 1-65, перед указанной стадией введения дополнительно включающий стадию определения по меньшей мере одного аллеля HLA пациента-человека посредством типирования высокого разрешения.
67. Способ по любому из пп. 1-65, где популяция аллогенных клеток имеет по меньшей мере 2 из 8 аллелей HLA, общих с пациентом-человеком.
68. Способ по п.67, где 8 аллелей HLA являются двумя аллелями HLA-A, двумя аллелями HLA-B, двумя аллелями HLA-C и двумя аллелями HLA-DR.
69. Способ по любому из пп. 1-65, где WT1-специфичные аллогенные T-клетки распознают эпитоп RMFPNAPYL WT1.
70. Способ по любому из пп. 1-65, перед указанной стадией введения дополнительно включающий стадию получения популяции аллогенных клеток in vitro.
71. Способ по п.70, где стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток к одному или более пептидам WT1, где аллогенные клетки содержат аллогенные T-клетки.
72. Способ по п.71, где стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает стадию обогащения T-клеток перед указанной сенсибилизацией.
73. Способ по п.71, где стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток с использованием дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов, мононуклеарных клеток периферической крови или клеток EBV-BLCL (EBV-трансформированной линии B-лимфоцитов).
74. Способ по п.73, где стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов или мононуклеарных клеток периферической крови включает нагрузку дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов, мононуклеарных клеток периферической крови или клеток EBV-BLCL по меньшей мере одним иммуногенным пептидом, полученным из WT1.
75. Способ по п.73, где стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов или мононуклеарных клеток периферической крови включает нагрузку дендритных клеток, активированных цитокинами моноцитов, мононуклеарных клеток периферической крови или клеток EBV-BLCL совокупностью перекрывающихся пептидов, полученных из WT1.
76. Способ по п.71, где стадия получения популяции аллогенных клеток in vitro включает сенсибилизацию аллогенных клеток с использованием искусственных антигенпрезентирующих клеток (AAPC).
77. Способ по п.76, где стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием AAPC включает нагрузку AAPC по меньшей мере одним иммуногенным пептидом, полученным из WT1.
78. Способ по п.76, где стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием AAPC включает нагрузку AAPC совокупностью перекрывающихся пептидов, полученных из WT1.
79. Способ по п.76, где стадия сенсибилизации аллогенных клеток с использованием AAPC включает конструирование AAPC для экспрессии по меньшей мере одного иммуногенного пептида WT1 в AAPC.
80. Способ по п.75, где совокупность перекрывающихся пептидов является совокупностью перекрывающихся пентадекапептидов.
81. Способ по п.78, где совокупность перекрывающихся пептидов является совокупностью перекрывающихся пентадекапептидов.
82. Способ по п.71, дополнительно включающий криоконсервацию аллогенных клеток после сенсибилизации.
83. Способ по любому из пп. 1-65, перед стадией введения дополнительно включающий стадии размораживания криоконсервированных, сенсибилизированных пептидом WT1 аллогенных клеток и экспансии аллогенных клеток in vitro для получения популяции аллогенных клеток.
84. Способ по любому из пп. 1-65, перед стадией введения дополнительно включающий стадию размораживания криоконсервированной формы популяции аллогенных клеток.
85. Способ по любому из пп. 1-65, где популяцию аллогенных клеток получают из линии T-клеток.
86. Способ по п.85, перед стадией введения дополнительно включающий стадию селекции линии T-клеток из банка множества криоконсервированных линий T-клеток.
87. Способ по п.85, перед стадией введения дополнительно включающий стадию размораживания криоконсервированной формы линии T-клеток.
88. Способ по п.85, перед стадией введения дополнительно включающий стадию экспансии линии T-клеток in vitro.
89. Способ по любому из пп. 1-65, где введение осуществляют посредством инфузии популяции аллогенных клеток.
90. Способ по п.89, где инфузия является болюсной внутривенной инфузией.
91. Способ по п.89, где введение включает введение пациенту-человеку по меньшей мере приблизительно 1×105 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу.
92. Способ по п.89, где введение включает введение пациенту-человеку от приблизительно 1×106 до приблизительно 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу.
93. Способ по п.89, где введение включает введение пациенту-человеку приблизительно 1×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу.
94. Способ по п.89, где введение включает введение пациенту-человеку приблизительно 3×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу.
95. Способ по п.89, где введение включает введение пациенту-человеку приблизительно 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм на дозу.
96. Способ по п.91, где введение включает введение пациенту-человеку по меньшей мере 2 доз популяции аллогенных клеток.
97. Способ по п.96, где введение включает введение пациенту-человеку 2, 3, 4, 5 или 6 доз популяции аллогенных клеток.
98. Способ по п.96, где введение включает введение пациенту-человеку 3 доз популяции аллогенных клеток.
99. Способ по п.96, где введение включает период вымывания между двумя последовательными дозами, где в течение периода вымывания не вводят популяцию аллогенных клеток.
100. Способ по п.99, где период вымывания составляет приблизительно 1, 2, 3 или 4 недели.
101. Способ по п.99, где период вымывания составляет приблизительно 4 недели.
102. Способ по п.89, где введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм и где указанные 3 дозы вводят с интервалом приблизительно 4 недели.
103. Способ по п.89, где введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм и где указанные 3 дозы вводят с интервалом приблизительно 3 недели.
104. Способ по п.89, где введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм и где указанные 3 дозы вводят с интервалом приблизительно 2 недели.
105. Способ по п.89, где введение включает введение пациенту-человеку 3 доз, где каждая доза находится в диапазоне от 1×106 до 5×106 клеток из популяции аллогенных клеток на килограмм и где указанные 3 дозы вводят с интервалом приблизительно 1 неделя.
106. Способ по п.1, дополнительно включающий, после введения пациенту-человеку популяции аллогенных клеток, введение пациенту-человеку второй популяции аллогенных клеток, содержащей WT1-специфичные аллогенные T-клетки, где вторая популяция аллогенных клеток рестриктирована по другому аллелю HLA, общему с пациентом-человеком.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562216525P | 2015-09-10 | 2015-09-10 | |
| US62/216,525 | 2015-09-10 | ||
| US201562220641P | 2015-09-18 | 2015-09-18 | |
| US62/220,641 | 2015-09-18 | ||
| PCT/US2016/050857 WO2017044678A1 (en) | 2015-09-10 | 2016-09-09 | Methods of treating multiple myeloma and plasma cell leukemia by t cell therapy |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018112526A RU2018112526A (ru) | 2019-10-10 |
| RU2018112526A3 RU2018112526A3 (ru) | 2020-01-31 |
| RU2743381C2 true RU2743381C2 (ru) | 2021-02-17 |
Family
ID=57068181
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018112526A RU2743381C2 (ru) | 2015-09-10 | 2016-09-09 | Способы лечения множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза посредством т-клеточной терапии |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20190381098A1 (ru) |
| EP (1) | EP3347028A1 (ru) |
| JP (1) | JP6947720B2 (ru) |
| KR (1) | KR20180048992A (ru) |
| CN (1) | CN108348552A (ru) |
| AU (1) | AU2016320877A1 (ru) |
| CA (1) | CA2997757A1 (ru) |
| HK (1) | HK1257882A1 (ru) |
| IL (1) | IL257929B1 (ru) |
| MX (1) | MX2018002816A (ru) |
| RU (1) | RU2743381C2 (ru) |
| TW (1) | TWI759270B (ru) |
| WO (1) | WO2017044678A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201801656B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2773740C2 (ru) * | 2020-10-09 | 2022-06-08 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства" (ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России) | Способ снижения токсических и инфекционных осложнений при лечении больных с множественной миеломой |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2017415310B2 (en) | 2017-05-25 | 2023-08-03 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Use of the IL-15/IL-15Rα complex in the generation of antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy |
| CA3074516A1 (en) | 2017-10-23 | 2019-05-02 | Atara Biotherapeutics, Inc. | Methods of managing tumor flare in adoptive immunotherapy |
| EP3765602A1 (en) | 2018-03-14 | 2021-01-20 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Methods of selecting t cell line for adoptive cellular therapy |
| CN111643525A (zh) * | 2020-06-16 | 2020-09-11 | 济宁医学院 | 引发免疫排斥反应在肿瘤治疗中的应用及其方法 |
| CN113881632B (zh) * | 2021-09-29 | 2023-09-29 | 四川省医学科学院·四川省人民医院 | 一种提高dc细胞活性的细胞培养基及培养方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013106834A2 (en) * | 2012-01-13 | 2013-07-18 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU4932199A (en) * | 1998-07-31 | 2000-02-21 | Haruo Sugiyama | Cancer antigens based on tumor suppressor gene wt1 product |
| MXPA01003344A (es) * | 1998-09-30 | 2004-04-21 | Corixa Corp | Composiciones y metodos para inmunoterapia especifica de wt1. |
| US20080070835A1 (en) * | 2003-11-05 | 2008-03-20 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc | Hla-Dr-Binding Antigen Peptide Derived From Wt1 |
| FR2931163B1 (fr) * | 2008-05-16 | 2013-01-18 | Ets Francais Du Sang | Lignee de cellules dendritiques plasmacytoides utilisee en therapie cellulaire active ou adoptive |
| EP2365823B1 (en) * | 2008-10-30 | 2016-11-30 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Anti third party central memory t cells, methods of producing same and use of same in transplantation and disease treatment |
-
2016
- 2016-09-09 EP EP16775897.8A patent/EP3347028A1/en not_active Withdrawn
- 2016-09-09 AU AU2016320877A patent/AU2016320877A1/en not_active Abandoned
- 2016-09-09 WO PCT/US2016/050857 patent/WO2017044678A1/en active Application Filing
- 2016-09-09 JP JP2018512945A patent/JP6947720B2/ja active Active
- 2016-09-09 IL IL257929A patent/IL257929B1/en unknown
- 2016-09-09 RU RU2018112526A patent/RU2743381C2/ru active
- 2016-09-09 US US15/758,566 patent/US20190381098A1/en not_active Abandoned
- 2016-09-09 KR KR1020187009368A patent/KR20180048992A/ko active Search and Examination
- 2016-09-09 TW TW105129257A patent/TWI759270B/zh not_active IP Right Cessation
- 2016-09-09 CA CA2997757A patent/CA2997757A1/en active Pending
- 2016-09-09 CN CN201680064239.2A patent/CN108348552A/zh active Pending
- 2016-09-09 MX MX2018002816A patent/MX2018002816A/es unknown
-
2018
- 2018-03-09 ZA ZA2018/01656A patent/ZA201801656B/en unknown
-
2019
- 2019-01-08 HK HK19100243.4A patent/HK1257882A1/zh unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013106834A2 (en) * | 2012-01-13 | 2013-07-18 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| Azuma T. et al. Myeloma cells are highly sensitive to the granule exocytosis pathway mediated by WT1-specific cytotoxic T lymphocytes // Clin Cancer Res. 2004 Nov 1; 10(21): 7402-12. * |
| Azuma T. et al. Myeloma cells are highly sensitive to the granule exocytosis pathway mediated by WT1-specific cytotoxic T lymphocytes // Clin Cancer Res. 2004 Nov 1; 10(21): 7402-12. Tyler E. et al. WT1-specific T-cell responses in high-risk multiple myeloma patients undergoing allogeneic T cell-depleted hematopoietic stem cell transplantation and donor lymphocyte infusions // Blood. 2013 Jan 10; 121(2): 308-17. * |
| Chapuis A.G. et al. Transferred WT1-reactive CD8+ T cells can mediate antileukemic activity and persist in post-transplant patients //Sci Transl Med. 2013 Feb 27; 5(174): 174ra27. * |
| Chapuis A.G. et al. Transferred WT1-reactive CD8+ T cells can mediate antileukemic activity and persist in post-transplant patients //Sci Transl Med. 2013 Feb 27; 5(174): 174ra27. Nonami A. et al. Successful treatment of primary plasma cell leukaemia by allogeneic stem cell transplantation from haploidentical sibling //Jpn J Clin Oncol. 2007 Dec; 37(12): 969-72. Flavio Albarracina Plasma cell leukemia // Blood Rev. 2011 May; 25(3): 107-112. * |
| Flavio Albarracina Plasma cell leukemia // Blood Rev. 2011 May; 25(3): 107-112. * |
| Nonami A. et al. Successful treatment of primary plasma cell leukaemia by allogeneic stem cell transplantation from haploidentical sibling //Jpn J Clin Oncol. 2007 Dec; 37(12): 969-72. * |
| Tyler E. et al. WT1-specific T-cell responses in high-risk multiple myeloma patients undergoing allogeneic T cell-depleted hematopoietic stem cell transplantation and donor lymphocyte infusions // Blood. 2013 Jan 10; 121(2): 308-17. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2773740C2 (ru) * | 2020-10-09 | 2022-06-08 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства" (ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России) | Способ снижения токсических и инфекционных осложнений при лечении больных с множественной миеломой |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TWI759270B (zh) | 2022-04-01 |
| JP2018530534A (ja) | 2018-10-18 |
| ZA201801656B (en) | 2022-12-21 |
| AU2016320877A1 (en) | 2018-04-19 |
| JP6947720B2 (ja) | 2021-10-13 |
| US20190381098A1 (en) | 2019-12-19 |
| TW201714619A (zh) | 2017-05-01 |
| IL257929A (en) | 2018-05-31 |
| HK1257882A1 (zh) | 2019-11-01 |
| CA2997757A1 (en) | 2017-03-16 |
| RU2018112526A (ru) | 2019-10-10 |
| KR20180048992A (ko) | 2018-05-10 |
| EP3347028A1 (en) | 2018-07-18 |
| IL257929B1 (en) | 2024-02-01 |
| CN108348552A (zh) | 2018-07-31 |
| MX2018002816A (es) | 2018-06-08 |
| WO2017044678A1 (en) | 2017-03-16 |
| RU2018112526A3 (ru) | 2020-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2743381C2 (ru) | Способы лечения множественной миеломы и плазмоклеточного лейкоза посредством т-клеточной терапии | |
| Pai et al. | Clonal deletion of tumor-specific T cells by interferon-γ confers therapeutic resistance to combination immune checkpoint blockade | |
| US20230002730A1 (en) | Improved targeted t-cell therapy | |
| US20180193384A1 (en) | Anti third party central memory t cells, methods of producing same and use of same in transplantation and disease treatment | |
| JP5525689B2 (ja) | 過剰増殖性障害を処置するための組成物および方法 | |
| KR20190130624A (ko) | 세포 면역치료요법 전 세포독성 사전컨디셔닝의 대체 | |
| US8598125B2 (en) | CDCA1 peptide and pharmaceutical agent comprising the same | |
| Handlos Grauslund et al. | Therapeutic cancer vaccination with a peptide derived from the calreticulin exon 9 mutations induces strong cellular immune responses in patients with CALR-mutant chronic myeloproliferative neoplasms | |
| US20210213066A1 (en) | Improved cell therapy compositions for hematopoietic stem cell transplant patients | |
| KR20220066165A (ko) | 조절 t 세포를 포함하는 조성물 및 그의 제조 및 사용 방법 | |
| US20180161366A1 (en) | Methods of obtaining mononuclear blood cells and uses thereof | |
| US20220064598A1 (en) | Ex vivo activated t-lymphocytic compositions and methods of using the same | |
| JP2015133982A (ja) | 特異抗原に活性化したｃｄ４＋、ｃｄ２５＋ｔ細胞 | |
| Tanaka et al. | Adoptive transfer of neoantigen-specific T-cell therapy is feasible in older patients with higher-risk myelodysplastic syndrome | |
| Amoozgar et al. | Combined blockade of VEGF, Angiopoietin-2, and PD1 reprograms glioblastoma endothelial cells into quasi-antigen-presenting cells | |
| WO2023159088A1 (en) | Compositions and methods for antigen-specific t cell expansion | |
| US20100129390A1 (en) | Dkk1 as a universal tumor vaccine for immunotherapy of cancers | |
| US20160375060A1 (en) | Methods of Treating Glioblastoma Multiforme by T Cell Therapy | |
| US20200115684A1 (en) | Hla-a2 subtype-specific plk1-derived epitope inducing antigen-specific t cell immune response to plk1 protein | |
| Tentori et al. | Antitumor and antimetastatic effects of dacarbazine combined with cyclophosphamide and interleukin-2 in Lewis lung carcinoma (3LL) | |
| US11925663B2 (en) | Methods of managing tumor flare in adoptive immunotherapy | |
| US20170216419A1 (en) | Compositions and methods for cancer immunotherapy | |
| Corbetta | Refining strategies for dendritic cell (DC)–immunotherapy in glioblastoma patients | |
| TW202023570A (zh) | 用於治療癌症的自然殺手細胞與環磷醯胺的組合 | |
| JP2008536511A (ja) | ＣＤ８Ｔ細胞の活性化方法｛ＭｅｔｈｏｄＦｏｒＡｃｔｉｖａｔｉｎｇＣＤ８ＴＣｅｌｌｓ｝ |