RU2736352C1 - Способ получения ребаудиозида j с применением ферментативного способа - Google Patents
Способ получения ребаудиозида j с применением ферментативного способа Download PDFInfo
- Publication number
- RU2736352C1 RU2736352C1 RU2019112426A RU2019112426A RU2736352C1 RU 2736352 C1 RU2736352 C1 RU 2736352C1 RU 2019112426 A RU2019112426 A RU 2019112426A RU 2019112426 A RU2019112426 A RU 2019112426A RU 2736352 C1 RU2736352 C1 RU 2736352C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rebaudioside
- ugt
- udp
- reaction
- glycosyltransferase
- Prior art date
Links
- HINSNOJRHFIMKB-DJDMUFINSA-N [(2S,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl] (1R,4S,5R,9S,10R,13S)-13-[(2S,3R,4S,5R,6R)-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-3,4-bis[[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy]oxan-2-yl]oxy-5,9-dimethyl-14-methylidenetetracyclo[11.2.1.01,10.04,9]hexadecane-5-carboxylate Chemical compound [H][C@@]1(O[C@@H]2[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]2OC(=O)[C@]2(C)CCC[C@@]3(C)[C@]4([H])CC[C@@]5(C[C@]4(CC5=C)CC[C@]23[H])O[C@]2([H])O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O[C@]3([H])O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)[C@H]2O[C@]2([H])O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O HINSNOJRHFIMKB-DJDMUFINSA-N 0.000 title claims abstract description 31
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 23
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000001512 FEMA 4601 Substances 0.000 claims abstract description 11
- HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N Rebaudioside A Natural products O=C(O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@]1(C)[C@@H]2[C@](C)([C@H]3[C@@]4(CC(=C)[C@@](O[C@H]5[C@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)(C4)CC3)CC2)CCC1 HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N 0.000 claims abstract description 11
- HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N entered according to Sigma 01432 Natural products C1CC2C3(C)CCCC(C)(C(=O)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C3CCC2(C2)CC(=C)C21OC(C1OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)OC(CO)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 235000019203 rebaudioside A Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Natural products CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 claims description 9
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 claims description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 8
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 239000008191 permeabilizing agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 239000000386 donor Substances 0.000 claims description 4
- 239000000348 glycosyl donor Substances 0.000 claims description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 claims description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 235000019202 steviosides Nutrition 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 244000228451 Stevia rebaudiana Species 0.000 description 4
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- DRDCJEIZVLVWNC-SLBWPEPYSA-N UDP-beta-L-rhamnose Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 DRDCJEIZVLVWNC-SLBWPEPYSA-N 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 235000021096 natural sweeteners Nutrition 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000209094 Oryza Species 0.000 description 1
- 235000006092 Stevia rebaudiana Nutrition 0.000 description 1
- UEDUENGHJMELGK-HYDKPPNVSA-N Stevioside Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UEDUENGHJMELGK-HYDKPPNVSA-N 0.000 description 1
- 239000008122 artificial sweetener Substances 0.000 description 1
- 235000021311 artificial sweeteners Nutrition 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 235000015173 baked goods and baking mixes Nutrition 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000019534 high fructose corn syrup Nutrition 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 229930188195 rebaudioside Natural products 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229940013618 stevioside Drugs 0.000 description 1
- OHHNJQXIOPOJSC-UHFFFAOYSA-N stevioside Natural products CC1(CCCC2(C)C3(C)CCC4(CC3(CCC12C)CC4=C)OC5OC(CO)C(O)C(O)C5OC6OC(CO)C(O)C(O)C6O)C(=O)OC7OC(CO)C(O)C(O)C7O OHHNJQXIOPOJSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
- A23L27/30—Artificial sweetening agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12Y204/01017—Glucuronosyltransferase (2.4.1.17)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/185—Escherichia
- C12R2001/19—Escherichia coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/84—Pichia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/85—Saccharomyces
- C12R2001/865—Saccharomyces cerevisiae
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения ребаудиозида J с применением ферментативного способа, включающий использование ребаудиозида А в качестве субстрата и применение субстрата в присутствии донора рамнозила в реакции в условиях катализа содержащими UDP-гликозилтрансферазу рекомбинантными клетками и/или полученной из них UDP-гликозилтрансферазой. Изобретение позволяет получить ребаудиозид J высокой чистоты с меньшими затратами и более коротким циклом производства. 10 з.п. ф-лы, 4 пр.
Description
Область техники
Настоящее изобретение относится к способу получения ребаудиозида J и, в частности, относится к биологическому способу получения ребаудиозида J.
Предпосылки создания изобретения
Подсластители представляют собой класс пищевых добавок, которые широко применяют в производстве продуктов питания, таких как напитков и конфет. Их можно добавлять в процессе производства продуктов питания или, в альтернативном варианте осуществления, можно использовать при соответствующем разбавлении в качестве заменителя сахарозы в домашней выпечке. Подсластители включают натуральные подсластители, например сахарозу, кукурузный сироп с высоким содержанием фруктозы, мед и т.п., и искусственные подсластители, например аспартам, сахарин и т.п. Стевиозиды представляют собой класс натуральных подсластителей, экстрагируемых из растения Stevia rebaudiana, и в настоящее время их широко используют в продуктах питания и напитках. Экстракт Stevia rebaudiana содержит разнообразные стевиозиды, включая ребаудиозид. Экстрагируемые естественным путем стевиозиды значительно различаются по ингредиентам между разными партиями и требуют последующей очистки.
Содержание ребаудиозида J, обнаруживаемого в стевиозидах листьев стевии, не превышает 0,5%; поэтому получить экстракт ребаудиозида J высокой чистоты стандартным способом чрезвычайно сложно. Таким образом, углубленные исследования ребаудиозида J ограничены, а коммерческое применение ребаудиозида J затруднительно.
ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая задача, которую предстоит решить с помощью настоящего изобретения, состоит в устранении недостатков предшествующего уровня техники. В настоящем изобретении это достигается путем разработки способа получения ребаудиозида J с применением ферментативного способа. При таком способе продукт ребаудиозид J высокой чистоты может быть получен с меньшими затратами и более коротким циклом производства.
Для решения описанной выше технической задачи в настоящем изобретении использовано следующее техническое решение.
Предложен способ получения ребаудиозида J с применением ферментативного способа, в котором в качестве субстрата используют ребаудиозид А; и в присутствии донора гликозила получают ребаудиозид J посредством реакции в условиях катализа содержащими UDP-гликозилтрансферазу рекомбинантными клетками и/или полученной из них UDP-гликозилтрансферазой. UDP-гликозилтрансфераза (т.е. уридиндифосфогликозилтрансфераза), также называемая UGT, уже хорошо известна.
Предпочтительно донор гликозила представляет собой донор рамнозила.
Более предпочтительно донор рамнозила представляет собой UDP-рамнозу.
Предпочтительно UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGT-B из Oryza sativa (риса).
Аминокислотная последовательность UGT-B из Oryza sativa предпочтительно по меньшей мере на 60% соответствует последовательности 2, как показано в перечне последовательностей.
Более предпочтительно аминокислотная последовательность UGT-B из Oryza sativa по меньшей мере на 70% соответствует последовательности 2, как показано в перечне последовательностей.
Более предпочтительно аминокислотная последовательность UGT-B из Oryza sativa по меньшей мере на 80% соответствует последовательности 2, как показано в перечне последовательностей.
Еще более предпочтительно аминокислотная последовательность UGT-B из Oryza sativa по меньшей мере на 90% соответствует последовательности 2, как показано в перечне последовательностей.
В соответствии с одним из примеров аминокислотная последовательность UGT-B из Oryza sativa полностью идентична последовательности 2, как показано в перечне последовательностей.
В соответствии с настоящим изобретением реакцию проводят в водной системе при температуре 4-50°С и рН от 5,0 до 9,0. Предпочтительно реакцию проводят в водной системе при температуре 35-45°С и рН от 7,5 до 8,5. Более предпочтительно реакцию проводят при температуре ниже 40°С и рН ниже 8,0.
Более предпочтительно реакцию проводят в фосфатном буферном растворе.
Более предпочтительно реакционная система содержит рекомбинантные клетки, содержащие UDP-гликозилтрансферазу, и пермеабилизирующий клетку агент, и реакцию проводят в присутствии пермеабилизирующего клетку агента. Кроме того, пермеабилизирующий клетку агент представляет собой толуол, и объемная концентрация толуола в реакционной системе составляет 1-3%. Более того, объемная концентрация толуола составляет 2%.
Более предпочтительно все исходные материалы, используемые в реакции, добавляют в реактор для однородного смешивания и затем оставляют при заданной температуре для реакции при перемешивании. После завершения реакции продукт ребаудиозид J, который может удовлетворять требованиям к применению, может быть получен посредством процесса очистки. Конкретный способ очистки представляет собой последующую обработку, включая выделение на смоле; и продукт ребаудиозид J может быть получен с чистотой до 95%.
Рекомбинантная клетка предпочтительно представляет собой клетку микроорганизма.
Более предпочтительно микроорганизм представляет собой Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae или Pichia pastoris.
За счет вышеупомянутых технических решений настоящее изобретение имеет следующие преимущества по сравнению с предшествующим уровнем техники:
Предложенный в настоящем изобретении способ получения ребаудиозида J с применением ферментативного способа имеет важное прикладное значение. Поскольку с применением ферментативного способа субстрат ребаудиозид А можно получить в больших количествах, производство ребаудиозида J уже не ограничено количеством сырьевых материалов. Таким образом, затраты на производство значительно сокращаются. Кроме того, ввиду низкого количества стевиозидов с различными структурами довольно сложно экстрагировать продукт высокой чистоты. По сравнению с предшествующим уровнем техники, в котором экстрагируют ребаудиозид J из листьев стевии, в настоящем изобретении предложен продукт более высокой чистоты, полученный путем применения способа ферментативного синтеза, который будет способствовать исследованию и применению нового стевиозида ребаудиозида J.
Подробное описание изобретения
Структурные формулы ребаудиозида А и ребаудиозида J представлены в виде формул I и II соответственно.
Основной путь синтеза ребаудиозида J, предложенный в соответствии с настоящим изобретением, описан ниже:
UGT-B, применяемый в настоящем изобретении, может существовать в форме порошка лиофилизированного фермента или в рекомбинантных клетках.
Способ получения UGT-B описан ниже:
рекомбинантный штамм Escherichia coli (или других микроорганизмов), экспрессирующий UGT-B, получают с использованием методов молекулярного клонирования и генной инженерии; впоследствии рекомбинантный штамм Escherichia coli ферментируют для получения содержащих UGT-B рекомбинантных клеток или для приготовления и получения лиофилизированного порошка UGT-B из вышеупомянутых рекомбинантных клеток.
Оба метода молекулярного клонирования и генной инженерии, описанные в настоящем изобретении, уже хорошо известны. Метод молекулярного клонирования описан в руководстве Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd Edition) (J. Sambrook, 2005).
Стадии экспрессии описанного в настоящем документе рекомбинантного штамма, сконструированного методом генной инженерии, описаны ниже:
(1) (в соответствии с последовательностью1 и последовательностью 2, как показано в перечне последовательностей) необходимый фрагмент гена синтезируют генетическим путем, лигируют в векторе pUC57, соответственно присоединяя сайты ферментов рестрикции NdeI и BamHI на обоих концах;
(2) каждый фрагмент гена встраивают в сайт соответствующего фермента рестрикции экспрессионного вектора рЕТ30а посредством двойного расщепления и лигирования так, чтобы каждый ген был помещен под контроль промотора Т7;
(3) рекомбинантную плазмиду трансформируют в штамм Escherichia coli BL21 (DE3); экспрессию целевого белка индуцируют с использованием изопропилтиогалактозида (ИПТГ); и впоследствии получают рекомбинантные штаммы Escherichia coli, экспрессирующие UGT-B.
Стадии получения содержащих UGT-B рекомбинантных клеток и лиофилизированного порошка UGT-B с использованием рекомбинантных экспрессионных штаммов Escherichia coli, содержащих UGT-B, описаны ниже:
рекомбинантные экспрессионные штаммы Escherichia coli, содержащие UGT-B, инокулируют в 4 мл жидкой среды Лурия-Бертани (LB) в соответствии с долей 1%; проводят культивирование при встряхивании при 37°С (при 200 об/мин) в течение ночи; отбирают вещество из ночной культуры и инокулируют в 50 мл LB жидкой среды в соответствии с долей 1%; проводят культивирование при встряхивании при 37°С (при 200 об/мин) в течение ночи, пока значение OD600 не достигнет 0,6-0,8; затем добавляют ИПТГ до конечной концентрацией 0,4 ммоль/л при 20°С для культивирования в течение ночи при встряхивании. После завершения индукции клетки собирают центрифугированием (8000 об/мин в течение 10 мин); затем клетки ресуспендируют в 5 мл фосфатного буферного раствора 2 ммоль/л (рН 7,0) для получения рекомбинантных клеток; затем клетки разрушают ультразвуком на ледяной бане; гомогенат центрифугируют (8000 об/мин, 10 мин); и супернатант собирают и лиофилизируют в течение 24 ч для получения лиофилизированного порошка.
Настоящее изобретение дополнительно подробно описано в сочетании со следующими конкретными примерами.
Пример 1. Получение рекомбинантных клеток Escherichia coli, содержащих UGT-B
В соответствии с последовательностью 3 и последовательностью 4 фрагмент гена UGT-B был генетически синтезирован с присоединением соответствующих сайтов ферментов рестрикции NdeI и BamHI на обоих концах и лигирован в векторе pUC57 (производства компании Suzhou Genewiz Biotech. Co., Ltd.). Сегмент гена UGT подвергали ферментативному расщеплению эндонуклеазами рестрикции NdeI и BamHI; а затем сегменты выделяли и очищали; добавляли лигазу Т4 для лигирования сегментов в сайтах соответствующих ферментов рестрикции рЕТ30а с целью трансформации в штамм BL21 (DE3).
Штаммы UGT инокулировали в 4 мл жидкой среды LB в соответствии с долей 1%; проводили культивирование при встряхивании при 37°С (при 200 об/мин) в течение ночи; отбирали вещество из ночной культуры и инокулировали в 50 мл жидкой среды LB в соответствии с долей 1%; проводили культивирование при встряхивании при 37°С (при 200 об/мин) в течение ночи, пока значение OD600 не достигало 0,6-0,8; затем добавляли ИПТГ до конечной концентрацией 0,4 ммоль/л при 20°С для культивирования в течение ночи при встряхивании. После завершения индукции клетки собирали центрифугированием (8000 об/мин, 10 мин); и собранные клетки ресуспендировали в 5 мл фосфатного буфера 2 моль/л (рН 7,0) для получения содержащих UGT-B рекомбинантных клеток для катализа.
Пример 2. Получение лиофилизированного порошка из UGT-B
Рекомбинантные клетки, содержащие UGT-B, полученные в примере 1, разрушали ультразвуком на ледяной бане; гомогенат центрифугировали (8000 об/мин, 10 мин); и супернатант собирали и лиофилизировали в течение 24 ч для получения лиофилизированного порошка UGT-B.
Пример 3. Синтез ребаудиозида J в условиях катализа UDP-гликозилтрансферазой с ребаудиозидом А в качестве субстрата
В данном примере для катализа и синтеза ребаудиозида J использовали лиофилизированный порошок UGT-B, полученный в соответствии со способом примера 2.
1 л фосфатного буферного раствора 0,05 моль/л (рН 8,0), 2 г UDP-рамнозы, 1 г ребаудиозида А, 10 г лиофилизированного порошка UGT-B последовательно добавляли в реакционную систему и после равномерного смешивания помещали на водяную баню при 40°С.Реакцию проводили при перемешивании при 300 об/мин в течение 24 часов. После завершения реакции 500 мкл реакционной смеси добавляли в безводный метанол равного объема для однородного смешивания; затем его центрифугировали при 8000 об/мин в течение 10 мин; и использовали высокоэффективную жидкостную хроматографию для обнаружения супернатанта после его фильтрации через мембрану для фильтрования (хроматографические условия: колонка: Agilent eclipse sb C18 4,6×150 мм; длина волны детектирования: 210 нм; подвижная фаза : ацетонитрил : деионизированная вода = 24% : 76%; объемный расход: 1,0 мл/мин; температура колонки: 30°С). Скорость преобразования ребаудиозида А составляла более 90%. После очистки супернатанта последующей обработкой, такой как выделение на силикагелевой смоле и кристаллизация, получили 0,52 г ребаудиозида J с чистотой свыше 95%.
Пример 4. Синтез ребаудиозида J в условиях катализа рекомбинантными клетками с UDP-гликозилтрансферазой с ребаудиозидом А в качестве субстрата
В данном примере для катализа и синтеза ребаудиозида J использовали содержащие UGT-B рекомбинантные клетки, полученные в соответствии со способом примера 1.
1 л фосфатного буферного раствора 0,05 моль/л (рН 8,0), 2 г UDP-рамнозы, 1 г ребаудиозида А, 20 мл толуола, 40 г целых клеток UGT-B последовательно добавляли в реакционную систему и после однородного смешивания помещали на водяную баню при 40°С.Реакцию проводили при перемешивании при 300 об/мин в течение 24 часов. После завершения реакции отбирали и центрифугировали 500 мкл реакционной смеси. К супернатанту добавляли безводный метанол равного объема для однородного смешивания; затем его центрифугировали при 8000 об/мин в течение 10 мин; и использовали высокоэффективную жидкостную хроматографию для обнаружения супернатанта после его фильтрации через мембрану для фильтрования (хроматографические условия: колонка: Agilent eclipse sb C18 4,6×150 мм; длина волны детектирования: 210 нм; подвижная фаза : ацетонитрил : деионизированная вода = 24% : 76%; объемный расход: 1,0 мл/мин; температура колонки: 30°С). Скорость преобразования ребаудиозида А составляла более 90%. После очистки супернатанта последующей обработкой, такой как выделение на силикагелевой смоле и кристаллизация, получили 0,49 г ребаудиозида J с чистотой свыше 95%.
Описанные выше примеры приведены только для иллюстрации технической концепции и признаков настоящего изобретения. Цель приведения примеров заключается только в том, чтобы дать возможность специалистам в данной области понять настоящее изобретение и реализовать его соответствующим образом; объем настоящего изобретения не ограничен ими. Любые эквивалентные вариации или модификации, производные от сущности настоящего изобретения, входят в объем защиты настоящего изобретения.
Claims (11)
1. Способ получения Ребаудиозида J с применением ферментативного способа, включающий реакцию ребаудиозида А в реакционной системе с донором гликозила в присутствии i) UDP-гликозилтрансферазы или ii) рекомбинантной клетки, содержащей UDP-гликозилтрансферазу, с образованием Ребаудиозида J, при этом UDP-гликозилтрансфераза в i) и ii) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и при этом донор гликозила представляет собой донор рамнозила.
2. Способ по п. 1, в котором донор рамнозила представляет собой UDP-рамнозу.
3. Способ по п. 1, в котором UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGT-B из Oryza sativa.
4. Способ по п. 1, в котором реакционная система содержит систему водной фазы с температурой 35-45°С и рН от 7,5 до 8,5.
5. Способ по п. 4, в котором система водной фазы представляет собой фосфатный буферный раствор.
6. Способ по п. 4, в котором реакционная система дополнительно содержит пермеабилизирующий клетку агент.
7. Способ по п. 6, в котором пермеабилизирующий клетку агент представляет собой толуол, и при этом толуол имеет объемную концентрацию 1-3%.
8. Способ по п. 1, в котором рекомбинантная клетка представляет собой клетку микроорганизма.
9. Способ по п. 8, в котором микроорганизм представляет собой Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae или Pichia pastoris.
10. Способ по п. 1, дополнительно содержащий очистку ребаудиозида J посредством выделения на смоле.
11. Способ по п. 10, в котором ребаудиозид J, очищенный посредством выделения на смоле, имеет чистоту более 95%.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/CN2016/102942 WO2018072211A1 (zh) | 2016-10-21 | 2016-10-21 | 一种酶法制备瑞鲍迪甙j的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2736352C1 true RU2736352C1 (ru) | 2020-11-16 |
Family
ID=62018306
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019112426A RU2736352C1 (ru) | 2016-10-21 | 2016-10-21 | Способ получения ребаудиозида j с применением ферментативного способа |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11359222B2 (ru) |
| EP (1) | EP3543346A4 (ru) |
| JP (1) | JP6842800B2 (ru) |
| CN (2) | CN116574775A (ru) |
| AU (1) | AU2016427128C1 (ru) |
| BR (1) | BR112019007882A2 (ru) |
| CA (1) | CA3041147A1 (ru) |
| MX (1) | MX2019004630A (ru) |
| RU (1) | RU2736352C1 (ru) |
| WO (1) | WO2018072211A1 (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109890973B (zh) | 2016-10-21 | 2023-05-23 | 百事可乐公司 | 一种酶法制备瑞鲍迪甙n的方法 |
| AU2016427120B2 (en) | 2016-10-21 | 2022-08-18 | Pepsico, Inc. | Method for preparing rebaudioside C using enzymatic method |
| WO2019178116A1 (en) | 2018-03-12 | 2019-09-19 | Conagen Inc. | Biosynthetic production of steviol glycosides rebaudioside j and rebaudioside n |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103397064A (zh) * | 2013-08-14 | 2013-11-20 | 苏州汉酶生物技术有限公司 | 一种酶法制备瑞鲍迪甙m的方法 |
| WO2015113231A1 (zh) * | 2014-01-28 | 2015-08-06 | 苏州汉酶生物技术有限公司 | 一种酶法制备瑞鲍迪甙m的方法 |
| US9243273B2 (en) * | 2012-05-22 | 2016-01-26 | Purecircle Sdn Bhd | Method for making rebaudioside X |
| US20160186225A1 (en) * | 2013-02-06 | 2016-06-30 | Evolva Sa | Methods for improved production of rebaudioside d and rebaudioside m |
| RU2596190C2 (ru) * | 2009-10-15 | 2016-08-27 | ПЬЮСЁРКЛ ЭсДиЭн БиЭйчДи | Ребаудиозид d высокой степени чистоты и его применение |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2918593A1 (en) | 2007-01-22 | 2008-07-31 | Cargill, Incorporated | Method of producing purified rebaudioside a compositions using solvent/antisolvent crystallization |
| CN101225424B (zh) | 2007-09-13 | 2013-05-29 | 天津药物研究院 | 环黄芪醇的单葡萄糖苷、其制备方法、药物组合物和应用 |
| KR20200000478A (ko) * | 2008-10-03 | 2020-01-02 | 모리타 가가쿠 고교 가부시키가이샤 | 신규 스테비올 배당체 |
| SG10201709458QA (en) | 2010-06-02 | 2017-12-28 | Evolva Inc | Recombinant production of steviol glycosides |
| US8962698B2 (en) | 2011-01-28 | 2015-02-24 | Tate & Lyle Ingredients Americas Llc | Rebaudioside-mogroside V blends |
| SG10201606565XA (en) * | 2011-08-08 | 2016-10-28 | Evolva Sa | Recombinant production of steviol glycosides |
| CN103031283B (zh) | 2011-10-08 | 2015-07-08 | 成都华高瑞甜科技有限公司 | 甜叶菊酶vi及莱鲍迪苷a转化为莱鲍迪苷d的方法 |
| CN103159808B (zh) | 2011-12-09 | 2017-03-29 | 上海泓博智源医药股份有限公司 | 一种制备天然甜味剂的工艺方法 |
| DK3009010T3 (da) | 2011-12-19 | 2020-05-11 | Purecircle Sdn Bhd | Fremgangsmåder til oprensning af steviolglycosider |
| CA2862980A1 (en) | 2012-01-23 | 2013-08-01 | Dsm Ip Assets B.V. | Diterpene production |
| US9752174B2 (en) | 2013-05-28 | 2017-09-05 | Purecircle Sdn Bhd | High-purity steviol glycosides |
| WO2014086890A1 (en) | 2012-12-05 | 2014-06-12 | Evolva Sa | Steviol glycoside compositions sensory properties |
| CN103088041B (zh) | 2013-01-29 | 2015-01-07 | 江南大学 | 一种可用于高效生产角质酶的角质酶基因及其应用 |
| US9717267B2 (en) * | 2013-03-14 | 2017-08-01 | The Coca-Cola Company | Beverages containing rare sugars |
| SG2013092820A (en) | 2013-12-16 | 2015-07-30 | Ngee Ann Polytechnic | Xylose isomerase genes for xylose-fermenting yeast construction |
| CN103757074B (zh) * | 2014-01-16 | 2015-12-02 | 苏州汉酶生物技术有限公司 | 一种酶法制备瑞鲍迪甙m的方法 |
| US9522929B2 (en) | 2014-05-05 | 2016-12-20 | Conagen Inc. | Non-caloric sweetener |
| US20170275666A1 (en) | 2014-08-19 | 2017-09-28 | The Coca-Cola Company | Methods for Preparing Rebaudioside I and Uses |
| EP3201211B1 (en) * | 2014-10-03 | 2021-09-29 | Conagen Inc. | Non-caloric sweeteners and methods for synthesizing |
| BR112017025705B1 (pt) | 2015-05-29 | 2022-05-10 | Cargill, Incorporated | Método de liberação de glicosídeos de esteviol de uma célula hospedeira |
| CN105200098A (zh) | 2015-06-30 | 2015-12-30 | 苏州汉酶生物技术有限公司 | 一种利用酿酒酵母酶法制备瑞鲍迪甙m的方法 |
| WO2017031424A1 (en) | 2015-08-20 | 2017-02-23 | Pepsico, Inc. | Preparation of rebaudioside m in a single reaction vessel |
| AU2016427120B2 (en) | 2016-10-21 | 2022-08-18 | Pepsico, Inc. | Method for preparing rebaudioside C using enzymatic method |
| CN109890973B (zh) | 2016-10-21 | 2023-05-23 | 百事可乐公司 | 一种酶法制备瑞鲍迪甙n的方法 |
-
2016
- 2016-10-21 BR BR112019007882A patent/BR112019007882A2/pt active Search and Examination
- 2016-10-21 CN CN202310493375.5A patent/CN116574775A/zh active Pending
- 2016-10-21 CA CA3041147A patent/CA3041147A1/en active Pending
- 2016-10-21 WO PCT/CN2016/102942 patent/WO2018072211A1/zh unknown
- 2016-10-21 US US16/343,340 patent/US11359222B2/en active Active
- 2016-10-21 AU AU2016427128A patent/AU2016427128C1/en active Active
- 2016-10-21 MX MX2019004630A patent/MX2019004630A/es unknown
- 2016-10-21 CN CN201680089970.0A patent/CN110177881B/zh active Active
- 2016-10-21 EP EP16919379.4A patent/EP3543346A4/en active Pending
- 2016-10-21 JP JP2019521072A patent/JP6842800B2/ja active Active
- 2016-10-21 RU RU2019112426A patent/RU2736352C1/ru active
-
2022
- 2022-06-06 US US17/805,626 patent/US11952604B2/en active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2596190C2 (ru) * | 2009-10-15 | 2016-08-27 | ПЬЮСЁРКЛ ЭсДиЭн БиЭйчДи | Ребаудиозид d высокой степени чистоты и его применение |
| US9243273B2 (en) * | 2012-05-22 | 2016-01-26 | Purecircle Sdn Bhd | Method for making rebaudioside X |
| US20160186225A1 (en) * | 2013-02-06 | 2016-06-30 | Evolva Sa | Methods for improved production of rebaudioside d and rebaudioside m |
| CN103397064A (zh) * | 2013-08-14 | 2013-11-20 | 苏州汉酶生物技术有限公司 | 一种酶法制备瑞鲍迪甙m的方法 |
| WO2015113231A1 (zh) * | 2014-01-28 | 2015-08-06 | 苏州汉酶生物技术有限公司 | 一种酶法制备瑞鲍迪甙m的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2016427128C1 (en) | 2023-01-05 |
| AU2016427128B2 (en) | 2022-08-18 |
| CA3041147A1 (en) | 2018-04-26 |
| US11952604B2 (en) | 2024-04-09 |
| WO2018072211A1 (zh) | 2018-04-26 |
| JP6842800B2 (ja) | 2021-03-17 |
| MX2019004630A (es) | 2019-07-15 |
| AU2016427128A1 (en) | 2019-05-30 |
| CN110177881A (zh) | 2019-08-27 |
| CN110177881B (zh) | 2023-06-02 |
| US20190338332A1 (en) | 2019-11-07 |
| EP3543346A1 (en) | 2019-09-25 |
| EP3543346A4 (en) | 2020-07-22 |
| US11359222B2 (en) | 2022-06-14 |
| JP2019536444A (ja) | 2019-12-19 |
| CN116574775A (zh) | 2023-08-11 |
| US20230022453A1 (en) | 2023-01-26 |
| BR112019007882A2 (pt) | 2019-07-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10428364B2 (en) | Enzymatic method for preparing rebaudioside M | |
| RU2737118C2 (ru) | Способ получения ребаудиозида n с применением ферментативного способа | |
| US11952604B2 (en) | Enzymatic method for preparing Rebaudioside J | |
| US11976312B2 (en) | Enzymatic method for preparing Rebaudioside C | |
| JP2019532650A5 (ru) | ||
| JP7210626B2 (ja) | 酵素的方法を使用してレバウディオサイドｊを調製するための方法 |