RU2730577C1 - Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae - Google Patents

Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae Download PDF

Info

Publication number
RU2730577C1
RU2730577C1 RU2019130121A RU2019130121A RU2730577C1 RU 2730577 C1 RU2730577 C1 RU 2730577C1 RU 2019130121 A RU2019130121 A RU 2019130121A RU 2019130121 A RU2019130121 A RU 2019130121A RU 2730577 C1 RU2730577 C1 RU 2730577C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
glucanase
strain
kurtzmanii
komagataella
yeast strain
Prior art date
Application number
RU2019130121A
Other languages
English (en)
Inventor
Лариса Николаевна Борщевская
Татьяна Леонидовна Гордеева
Анна Николаевна Калинина
Александр Сергеевич Федоров
Сергей Павлович Синеокий
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика)
Priority to RU2019130121A priority Critical patent/RU2730577C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2730577C1 publication Critical patent/RU2730577C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2448—Licheninase (3.2.1.73)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01073—Licheninase (3.2.1.73)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii, способный продуцировать β-глюканазу. Штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii содержит ген bgl26, кодирующий эндо-1,3-1,4-β-глюканазу из Paenibacillus jamilae. Указанный штамм депонирован под номером ВКПМ Y-4621. Изобретение позволяет расширить арсенал рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих β-глюканазу. 2 пр., 3 ил.

Description

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения штамма дрожжей Komagataella kurtzmanii, способного продуцировать бета-глюканазу (β-глюканазу).
β-глюканы представляют собой семейство полисахаридов, состоящих из мономеров D-глюкозы, соединенных посредством β-гликозидных связей и являются естественным компонентом клеточных стенок бактерий, грибов, дрожжей и злаков, таких как овес и ячмень. β-глюканы различного происхождения различаются структурой, уровнем разветвления и молекулярной массой, а также физико-химическими свойствами.
β-глюканазы - группа ферментов, катализирующих расщепление β-глюканов с β-1,2-, β-1,3-, β-1,4- и β-1,6-связями.
Важное значение среди ферментов, относящихся к этой группе имеют β-1,3-1,4-глюканазы, которые находят широкое применение, в частности, при производстве пищевых добавок [FEBS Lett., 1975, 52, 202-207], где их используют в качестве добавки к кормам сельскохозяйственных животных с однокамерным желудком. Корм для домашних животных, смешанный с ферментами β-1,3-1,4-глюканазы и ксиланазы, усиливает увеличение веса, потребление корма и усвояемость азота (+5,6%) и липидов (+6,2%), а также уменьшает образование липкого помета, что существенно уменьшает санитарные проблемы [Trends in Biotechnology, 1993, 11(10), 424-430].
Природными источниками β-глюканаз являются различные микроорганизмы: бактерии, грибы, дрожжи и актиномицеты
Большинство кормовых ферментных препаратов, в состав которых входят β-глюканазы, имеют грибное происхождение. Однако, большой интерес представляет разработка рекомбинантных продуцентов ферментов на основе дрожжей, поскольку они более удобны для проведения генно-инженерных работ и быстрее накапливают целевой фермент в сравнении с грибными продуцентами.
Существенным преимуществом дрожжевых продуцентов является также то, что на их основе значительно легче создавать продуценты моноферментов, тогда как грибные продуценты обычно синтезируют комплексы целлюлитических ферментов. Промышленное получение моноферментов позволяет более эффективно решать задачи составления оптимальной композиции ферментов при использовании различных субстратов.
В настоящее время наиболее перспективным является создание продуцентов на основе рекомбинантных штаммов метилотрофных дрожжей рода Pichia, Komagataella или Hansenula [J Ind Microbiol Biotechnol 2009, 36: 1435-1438].
Использование метилотрофных дрожжей позволяет достичь высоких скоростей экспрессии гетерологичных белков с высокой плотностью клеток, а также высокого уровня и качества N-гликозилирования белков.
Особенно часто для высокоуровневой экспрессии геретологичных белков используют метилотрофные дрожжи Pichia pastoris [FEMS Microbiol.Rev., 2000, 24,45-66].
Показано [J. Ind. Microbiol. Biotechnol., 2012 39(6), 869-876], что ген bgl16C1 из Penicillium pinophilum, кодирующий эндо-1,3(4)-β-D-глюканазу, эффективно экспрессируется в клетках дрожжей Pichia pastoris, при этом активность рекомбинантной β-глюканазы в культуральной жидкости при культивировании в 15-литровом ферментере составляет 28721 U/ml.
Известны также рекомбинантные штаммы Pichia pastoris, продуцирующие термостабильную β-1,3-1,4-глюканазу из Bacillus amyloliquefaciens. [CN 101899458]
Поиск новых высокоактивных β-глюканаз, обладающих свойствами, необходимыми для их индустриального использования и способных эффективно выражаться в дрожжах, а также создание на их основе промышленно значимых продуцентов, является актуальной задачей.
В работе [Биотехнология, 2019, 35, 4, 15-23] описан ген
Figure 00000001
из Paenibacillus jamilae, кодирующий β-глюканазу, относящуюся к классу эндо-1,3-1,4-β-глюканазу (ЕС 3.2.1.73).
Komagataella kurtzmanii - новый вид метилотрофных дрожжей, выделенный из Pichia pastoris [Antonie van Leeuwenhoek, 2013, 104(3), Published online, DOI 10.1007/s10482-013-9956-7].
В работе [Тюрин O.B. Разработка системы экспрессии генов на основе метилотрофных дрожжей Komagataella kurtzmanii: диссертация, канд. биол. наук. ГосНИИгенетика, Москва, 2014.] описана система экспрессии для данных дрожжей и на модельных штаммах показана ее эффективность для продукции гетерологических белков.
Задачей заявляемого изобретения является расширение арсенала рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих β-глюканазу
Задача решена путем получения рекомбинантного штамма дрожжей Komagataella kurtzmanii Bg3 ВКПМ Y-4621, продуцирующего β-глюканазу, содержащего ген
Figure 00000001
кодирующий эндо-1,3-1,4-β-глюканазу из Paenibacillus jamilae.
Заявляемый рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii Bg3 получен путем интеграции в состав хромосомы штамма K, kurtzmanii 727Δ His4 ВКПМ Y-4462 экспрессионной кассеты, в состав которой входит ген
Figure 00000001
из Paenibacillus jamilae.
Штамм является продуцентом эндо-1,3-1,4-β-глюканазы из Paenibacillus jamilae и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика как Komagataella kurtzmanii Bg3 ВКПМ Y-4621.
Культурально-морфологические характеристики заявляемого штамма: При культивировании при температуре 28°С в течение 48 часов на агаризованной среде YP ((мас. %): пептон-2, дрожжевой экстракт -1, агар -2, вода - остальное), с добавлением глюкозы (2 мас. %) клетки имеют овальную форму, 3-4 мкм в диаметре. Клетки почкуются, при этом почкование истинное, многостороннее. Истинного мицелия не образуют.
Споруляция происходит при инкубации культуры на агаризованной среде следующего состава (мас. %): хлорид калия - 1.0, ацетат натрия - 0.5, глюкоза - 1.0, агар - 2.0, вода - остальное. Аски имеют тетраэдрическую форму, включают 4 аскоспоры.
На агаризованной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) колонии светло-бежевого цвета с ровным краем, матовой поверхностью, линзовидным профилем и пастообразной консистенцией.
При росте в жидкой среде YP (мас. %: пептон-2, дрожжевой экстракт -1, вода - остальное) с добавлением глюкозы (2 мас. %), при 28°С в течение 24 ч культивирования - жидкость мутная, осадок белый, коагуляции не наблюдается, пристеночных пленок не образует.
Физиолого-биохимические признаки:
Штамм способен к росту как в аэробных, так и в анаэробных условиях.
В качестве единственного источника углерода способен использовать метанол, этанол, глюкозу, глицерин, лактат, сукцинат, не способен ассимилировать мальтозу, сахарозу, ацетат, крахмал, лактозу.
Штамм не способен к росту при 35°С.
Штамм не способен к ассимиляции трегалозы.
При культивировании в присутствии метанола штамм способен синтезировать β-глюканазу.
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами:
Фиг. 1 Экспрессионная кассета 1
Фиг. 2 Электрофорез гена
Figure 00000002
Paenibacillus jamilae
Фиг. 3 Фингерпринт штамма Komagataella kurtzmanii Bg3 Y-4621
Изобретение подтверждается следующими примерами.
Пример 1. Получение штамма дрожжей Komagataella kurtzmanii. несущего ген
Figure 00000002
из Paenibacillus jamilae
В качестве источника гена
Figure 00000002
используют тотальную геномную ДНК штамма Paenibacillus jamilae Bgl ВКПМ В-13193 [Биотехнология, 2019, 35, 4, 15-23]. Синтезируют ДНК гена
Figure 00000002
методом ПЦР с использованием праймеров BglP.jam-f (5'-aaagaattcgcggggaatgttttttgggaa-3') и BglP.jam-r (5'-aaagcggccgcttaattgctcgtgtattttacc-3% содержащих на 5'-концах сайты рестрикции для клонирования - EcoRI и NotI Полученный фрагмент ДНК обрабатывают рестриктазами EcoRI и NotI и клонируют в состав экспрессионного вектора рРIС9 (http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/V17520).
В состав экспрессионного плазмидного вектора pPIC-bg/Pum входят следующие генетические элементы:
1. Ген
Figure 00000002
_Paenibacillus jamilae, встроенный в единую рамку считывания с нуклеотидной последовательностью сигнального пептида α-фактора, под контролем АОХ1 промотора
2. Терминатор транскрипции ТТАОХ1
3. Дрожжевой селективный маркер His4
4. Область интеграции - нуклеотидная последовательность гена АОХ1
5. Селективный маркер для клеток E.coli - ген bla, кодирующий β-лактамазу, придающий клеткам устойчивость к ампициллину.
6. Бактериальный pUC origin.
Для получения интегративной экспрессионной кассеты 1 (фиг. 1) плазмиду pPIC-
Figure 00000003
обрабатывают эндонуклеазой рестрикции BglII и используют для трансформации клеток дрожжей.
Указанную интегративную экспрессионную кассету трансформируют в клетки Komagataella kurtzmanii 727Δ His4 ВКПМ Y-4462 полученного на основе штамма К. kurtzmanii ВКПМ Y-727 [Тюрин О.В. Разработка системы экспрессии генов на основе метилотрофных дрожжей Komagataella kurtzmanii: диссертация… канд. биол. наук. ГосНИИгенетика, Москва, 2014.] путем делеции гена His4.
Процедуру трансформации осуществляют методом электропорации, как описано в [Тюрин О.В. Разработка системы экспрессии генов на основе метилотрофных дрожжей Komagataella kurtzmanii: диссертация канд. биол. наук. ГосНИИгенетика, Москва, 2014.].
Селекцию трансформантов ведут на агаризованной среде YNB (HiMedia Laboratories Pvt. Limited, Индия) с добавлением глюкозы (2 мас. %) в течение 5 суток при температуре 30°С.
В результате получают набор трансформантов Y727-Bgl26, в геном каждого из которых оказывается интегрировано различное число копий целевой экспрессионной кассеты, включающей ген β-глюканазы Paenibacillus jamilae.
Для отбора наиболее продуктивных трансформантов проводят их культивирование в жидкой ферментационной питательной среде YP с добавлением метанола (3 мас. %) в 96-луночных планшетах при 30°С в течение 72 ч на качалке (250 об/мин). В качестве контроля используют штамм Komagataella kurtzmanii 727Δ. His4 ВКПМ Y-4462.
Определение активности β-глюканазы в культуральной жидкости проводят с использованием динитросалициловой кислоты (ДНС - метод) [Anal. Chem., 1959, 31 (3), 426-428] в 96-луночном планшете следующим образом. В каждой лунке смешивают 25 мкл1% раствора субстрата β-глюкана ячменя в 0,5 М ацетатном буфере (рН 7) и 25 мкл культуральной жидкости. Инкубацию проводят при50°С 10 минут, после чего добавляют в лунку 50 мкл раствора ДНС. Планшет прогревают при 99°С 10 минут и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора при длине волны 546 нм. В качестве стандарта используют раствор глюкозы.
По результатам ферментации отбирают наиболее продуктивный трансформант Bg3, который при культивировании в планшете синтезирует β-глюканазу в количестве 229 ед/мл культуральной жидкости.
Трансформант депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт»
ГосНИИгенетика как Komagataella kurtzmanii_Bg3 ВКПМ Y-4621.
Для подтверждения наличия в хромосоме полученного штамма вставки гена
Figure 00000004
Paenibacillus jamilae методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) используют хромосомальную ДНК, выделенную из клеток этого штамма и специфические праймеры BglP.j-f и BglP.j-r.
BglP.j-f 5'-gcggggaatgttttttgggaa-3',
BglP.j-r 5'-ttaattgctcgtgtattttacc-3'
Режим реакции ПЦР:
95°С - 3 мин - 1 цикл
30 циклов:
95°С - 30 сек.
57°С-30 сек.
72°С - 60 сек.
72°С - 5 мин. - 1 цикл
Для контроля величины амплифицированного фрагмента ДНК при электрофорезе использован молекулярный маркер GeneRuler 1 kb DNA Ladder (Fermentas) (линия 2, фиг. 2, размер фрагментов снизу вверх 10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п.н.). Наработка фрагмента ДНК размером 642 п.н. (линия 1 фиг. 2) свидетельствует о присутствии в хромосоме штамма вставки гена
Figure 00000003
Paenibacillus jamilae.
На фиг. 3 представлены результаты ПЦР-фингерпринта (Applied and Environmental Microbiology, Oct, 1999, 4351-4356) штамма Komagataella kurtzmanii Bg3 ВКПМ Y-4621.
Фингерпринт проведен методом полимеразной цепной реакции (PCR) с использованием неспецифических праймеров М13 (линия 2 фиг. 3) и 1254 (линия 3 фиг. 3).
Праймер М13 gagggtggcggttct
режим реакции:
1 цикл
95°С – 3 мин.
39 циклов
95°С - 30 сек.
45°С - 30 сек.
72°С - 2 мин.
1 цикл
72°С - 5 мин.
Праймер 1254 ccgcagccaa
режим реакции:
1 цикл
95°С - 3 мин.
39 циклов
95°С - 30 сек.
48°С - 30 сек.
72°С - 1 мин.
1 цикл 72°С - 5 мин.
Для контроля величины фрагментов ДНК при электрофорезе использован молекулярный маркер 1kb DNA GeneRuler (Fermentas) (линия 1, фиг. 3 размер фрагментов снизу вверх 10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п.н.).
Пример 2. Продукция фермента β-глюканазы заявляемым штаммом Komagataella kurtzmanii ВКПМ Y-4621.
Посевную культуру выращивают в пробирках (50 мл) с 10 мл жидкой питательной среды YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) при 30°С в течение 24 ч на качалке (250 об/мин). Посев ферментационной среды осуществляют в соотношении 1/10.
Ферментацию проводят при 30°С на качалке (250 об/мин) в питательной среде состава (мас. %): дрожжевой экстракт - 0,5, пептон - 1, вода - остальное с добавлением глюкозы (1 мас. %) в пробирках (50 мл) с рабочим объемом 5 мл. Через 18 часов добавляют метанол (1 мас. %) Ферментацию продолжают в течение 72 часов, добавляя метанол (1 мас. %) через каждые 24 часа. После окончания ферментации определяют количество фермента β-глюканазы в культуральной жидкости с использованием ДНС метода.
Через 72 часа ферментации количество фермента составила 987 ед/мл культуральной жидкости.

Claims (1)

  1. Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii ВКПМ Y-4621, содержащий ген bgl26, кодирующий эндо-1,3-1,4-β-глюканазу из Paenibacillus jamilae - продуцент β-глюканазы.
RU2019130121A 2019-09-25 2019-09-25 Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae RU2730577C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019130121A RU2730577C1 (ru) 2019-09-25 2019-09-25 Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019130121A RU2730577C1 (ru) 2019-09-25 2019-09-25 Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2730577C1 true RU2730577C1 (ru) 2020-08-24

Family

ID=72237723

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019130121A RU2730577C1 (ru) 2019-09-25 2019-09-25 Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2730577C1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101134949B (zh) * 2006-08-30 2010-05-12 中国农业科学院饲料研究所 β-葡聚糖酶、其编码基因、重组质粒和菌株及其应用
CN101899458A (zh) * 2009-12-24 2010-12-01 江南大学 一株高产耐温性β-葡聚糖酶毕赤酵母及其构建

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101134949B (zh) * 2006-08-30 2010-05-12 中国农业科学院饲料研究所 β-葡聚糖酶、其编码基因、重组质粒和菌株及其应用
CN101899458A (zh) * 2009-12-24 2010-12-01 江南大学 一株高产耐温性β-葡聚糖酶毕赤酵母及其构建

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NAUMOV G.I. et al. Komagataella kurtzmanii sp. nov., a new sibling species of Komagataella (Pichia) pastoris based on multigene sequence analysis. Antonie Van Leeuwenhoek. 2013 Sep;104(3):339-47. *
YANG P. ET AL. Cloning and Overexpression of a Paenibacillus β-Glucanase in Pichia pastoris: Purification and Characterization of the Recombinant Enzyme. J. Microbiol. Biotechnol. (2007), 17(1), 58-66. *
YANG P. ET AL. Cloning and Overexpression of a Paenibacillus β-Glucanase in Pichia pastoris: Purification and Characterization of the Recombinant Enzyme. J. Microbiol. Biotechnol. (2007), 17(1), 58-66. NAUMOV G.I. et al. Komagataella kurtzmanii sp. nov., a new sibling species of Komagataella (Pichia) pastoris based on multigene sequence analysis. Antonie Van Leeuwenhoek. 2013 Sep;104(3):339-47. *
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. М., 2014, с. 1-24. *
БОРЩЕВСКАЯ Л. Н. И ДР. Экспрессия гена β-глюканазы из Paenibacillus jamilae Bg1 в Pichia pastoris и характеристика рекомбинантного белка. Биотехнология, 2019, Т.35, N 4, С. 15-23. *
БОРЩЕВСКАЯ Л. Н. И ДР. Экспрессия гена β-глюканазы из Paenibacillus jamilae Bg1 в Pichia pastoris и характеристика рекомбинантного белка. Биотехнология, 2019, Т.35, N 4, С. 15-23. ТЮРИН О.В. Разработка системы экспрессии генов на основе метилотрофных дрожжей Komagataella kurtzmanii. АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. М., 2014, с. 1-24. *
ТЮРИН О.В. Разработка системы экспрессии генов на основе метилотрофных дрожжей Komagataella kurtzmanii. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2015500041A (ja) 混合培養物から調製された酵素カクテル
Zhao et al. Expression and characterization of GH3 β-Glucosidase from Aspergillus niger NL-1 with high specific activity, glucose inhibition and solvent tolerance
CN109295031B (zh) 一种抗真菌蛋白β-1,3-葡聚糖酶和含有该基因的工程菌及其应用
Seok et al. Construction of an expression system for the secretory production of recombinant α-agarase in yeast
RU2701642C1 (ru) Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы
RU2701308C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы
RU2730577C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae
EP2062967A1 (en) Genetically engineered aspergillus
RU2736441C1 (ru) Штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий бета-глюканазу из Bacillus pumilus и бета-глюканазу из Paenibacillus jamilae
CN114107359B (zh) 一种通过调控细胞代谢提高里氏木霉表达纤维素酶能力的方法
RU2701494C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент бета-глюканазы
RU2701640C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы
CN109161489B (zh) 一种高产酸性蛋白酶的黑曲霉菌株
RU2736440C1 (ru) Дрожжи Komagataella kurtzmanii - рекомбинантный продуцент бета-глюканазы
CN114736881A (zh) 酸稳定性提高的葡萄糖氧化酶GoxM10突变体A4D及其衍生突变体和应用
CN109251867B (zh) 一种酸性蛋白酶高产菌株及其应用
RU2747782C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Ogataea haglerorum, продуцирующий бета-маннаназу Bacillus subtilis
KR101412468B1 (ko) 활성이 증진된 변이 베타-글루코시다제 및 이를 이용한 바이오 에탄올의 제조방법
RU2764793C1 (ru) Трансформант дрожжей Ogataea haglerorum, продуцирующий бета-маннаназу, содержащий в составе хромосомы синтетический ген MANS
Guo et al. Heterologous expression of the multi-functional cellulase gene (mfc) from the mollusc Ampullaria crossean, in Volvariella volvacea
Lim et al. Recombinant production of an inulinase in a Saccharomyces cerevisiae gal80 strain
RU2728243C1 (ru) Штамм дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2722563C1 (ru) Трансформант дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий бета-глюканазу
Youxi et al. High level expression of Saccharomyces cerevisiae chitinase (ScCTS1) in Pichia pastoris for degrading chitin
Yin et al. Construction of a shuttle vector for heterologous expression of a novel fungal α-amylase gene in Aspergillus oryzae

Legal Events

Date Code Title Description
QZ41 Official registration of changes to a registered agreement (patent)

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200828

Effective date: 20210125