RU2729389C1 - Способ получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл - Google Patents

Способ получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл Download PDF

Info

Publication number
RU2729389C1
RU2729389C1 RU2019145570A RU2019145570A RU2729389C1 RU 2729389 C1 RU2729389 C1 RU 2729389C1 RU 2019145570 A RU2019145570 A RU 2019145570A RU 2019145570 A RU2019145570 A RU 2019145570A RU 2729389 C1 RU2729389 C1 RU 2729389C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
legionella
minutes
growth
hours
medium
Prior art date
Application number
RU2019145570A
Other languages
English (en)
Inventor
Георгий Давидович Харабаджахян
Елена Павловна Ульрих
Алексей Борисович Мазрухо
Александр Иванович Шелохович
Ирина Константиновна Савельева
Сергей Анатольевич Иванов
Original Assignee
Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека filed Critical Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority to RU2019145570A priority Critical patent/RU2729389C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2729389C1 publication Critical patent/RU2729389C1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для изготовления питательных сред в лабораторной диагностике легионеллеза. Способ получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл предусматривает отмывание фарша селезенки в дистиллированной воде в соотношении 1:3. Перемешивают вручную в течение 30 минут. После этого отделяют осадок центрифугированием при 2500 об/мин в течение 10 мин при температуре 20-25°С. Надосадочную жидкость сливают, а осадок ресуспендируют в соотношении 1:2 дистиллированной водой. Затем корректируют реакцию смеси до рН 3,0 и проводят автолиз в термостате при температуре 45-50°С в течение 96 часов с периодическим перемешиванием не более одного-двух раз в сутки. После этого автолизат осветляют центрифугированием при 2500 об/мин в течение 10 мин. Разливают в стеклянные баллоны объемом с завинчивающейся полиэтиленовой крышкой и сохраняют в холодильнике под 1%-ным хлороформом при температуре 2-8°С. изобретение позволяет повысить выход биомассы легионелл. 10 табл., 9 пр.

Description

Предлагаемое изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для изготовления питательных сред в лабораторной диагностике легионеллеза.
В настоящее время легионелезная инфекция является актуальной медицинской проблемой, которая существует в лабораторной диагностике. Несмотря на широкий арсенал питательных сред с использованием основ животного происхождения, есть необходимость в разработке новых сред, которые обеспечивают ростовые свойства легионелл в присутствии факторов селективности, подавляющих рост посторонней микрофлоры.
Известна питательная среда для культивирования легионелл [1], в состав которой входят: ферментативный гидролизат легкого свиньи, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, активированный уголь, L-цистеин гидрохлорид, эмбриональный стимулятор роста микроорганизмов (из куриных зародышей 9-ти дневных), агар микробиологический.
Недостатком известной среды является многокомпонентность питательной основы из сырья животного (из натуральных компонентов), что изначально делает ее мало стандартной. Авторы не предлагают вариант среды для выделения легионелл, питательная основа которой, как правило, обладает более высокими ростовыми свойствами.
Известна питательная среда для выращивания легионелл [2], основой которой является мясная вода до 1000 мл, пептон ферментативный 10,0 г, натрия хлорид 5,0 г, кровь 10,0 мл, агар-агар 15,0-20,0 г при рН 7,3.
Однако среда имеет низкую эффективность и относительно высокую себестоимость.
Известна также питательная среда плотная для выращивания легионелл [3], содержащая ферментативный гидролизат желтка куриного яйца, дигидрофосфат калия, активированный уголь (АУ), L-цистеин гидрохлорид, агар-агар и дистиллированную вода.
Недостатком известной среды является многокомпонентность питательной основы из сырья животного что изначально делает ее мало стандартной.
Наиболее известной является импортная питательная среда угольно-дрожжевой агар
Figure 00000001
(УДА) [4]. Ее недостаток - дороговизна не производимого в РФ препарата и использование нестабильной ростовой добавки.
За прототип выбран способ получения питательной основы микробиологических сред [5], заключающийся в использовании в качестве субстрата селезенку крупного рогатого скота (КРС), которую подвергают автолизу при рН 3,4-3,8 и смесь выдерживают в течение трех-четырех суток при 42-45°С с корректировкой рН на том же уровне.
Однако в данном способе фарш селезенки разводят водой, доводят соляной кислотой рН 3,4-3,7, добавляют хлороформ (до 2%) и при температуре 42-45°С проводят автолиз с периодическим перемешиванием и коррекцией рН до исходного уровня. По истечении 3 суток смесь кипятят, фильтруют через бельтинг или ватно-марлевый фильтр и доводят рН до 7,0. Полученная данным способом питательная основа - автолизат селезенки (АС) обладает хорошими ростовыми свойствами в отношении кишечной группы микробов и возбудителей ООИ.
Недостатком способа является то, что для легионелл данный препарат оказался малопригоден из-за низких ростовых свойств сред на его основе, что указывает на наличие токсических для легионелл компонентов.
Технической задачей предполагаемого изобретения является разработка нового способа получения основы питательной среды для выделения и культивирования легионелл имеющих высокие ростовые свойства, пониженное содержание различных токсичных примесей угнетающих рост легионелл.
Поставленная задача достигается тем, что в способе получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл, включающем основу в виде гомогенизованной селезенки крупных сельскохозяйственных животных с последующим автолизом, фарш селезенки в количестве 5 кг перед автолизом предварительно отмывают в емкости с 15 л дистиллированной воды в соотношении 1:3, перемешивают вручную в течение 30 минут, после этого отделяют осадок центрифугированием при 2500 об/мин в течение 10 мин при температуре (20-25)°С, надосадочную жидкость сливают, а осадок ресуспендируют в соотношении 1:2 дистиллированной водой в количестве 10 л, затем корректируют реакцию смеси до рН 3,0, вносят 2% хлороформа, 0,5 г/л активированного угля и проводят автолизат в термостате при температуре (45-50)°С в течение 96 часов с периодическим перемешиванием не более одного, двух раз в сутки, после этого автолизат осветляют центрифугированием при 2500 об/мин в течение 10 мин, разливают в стеклянные баллоны объемом 25 л с завинчивающейся полиэтиленовой крышкой и сохраняют в холодильнике под 1% хлороформом при температуре (2-8)°С
Технология осуществления способа показана в примерах 1-9.
Данные о ростовых свойствах среды СЭЛ на основе (АСО) осветленного автолизата в сравнении с АС (прототипом) представлены в таблицах (пример 1-9). Контрольной средой служил угольно-дрожжевой агар
Figure 00000001
(УДА) Oxoid.
Пример 1.
Изучение ростовых свойств СЭЛ с АСО на L. pneumophila Philadelphia 1 (вариант 1).
Для получения основы субстрат селезенки (фарш) в количестве 5 кг смешивают вручную в течение 30 минут с дисциллированной водой 15 л в соотношении 1:1. Осадок отделяют центрифугированием при 2500 об/мин в течение 10 минут при температуре (20-25)°С. Надосадочную жидкость сливают. Осадок ресуспендируют в соотношении 1:2 дистиллированной водой в количестве 10 л с последующим перемешиванием. Затем доводят смесь до рН 3,0, вносят 2% хлороформа, 0,2 г/л активированного угля перемешивают в течение 1 мин. Автолизат проводят в термостате при температуре (45-50)°С в течение 96 часов с периодическим (1 раз в сутки) перемешиванием.
После этого автолизат осветляляют центрифугированием при 2500 об/мин в течение 10 мин., разливают в стеклянные баллоны объемом 25 л с завинчивающейся полиэтиленовой крышкой и сохраняют в холодильнике под 1% хлороформом при температуре (2-8)°С
Полученный осветленный автолизат (АСО) вносят в состав среды СЭЛ [6], в дозе 7,0 г/л (по сухим веществам), добавляют активированный уголь - 4,0 г/л, агар микробиологический 12,0 г/л, мезоинозит - 2,5 г/л, корректировали рН до 7,1. Смесь расплавляют кипячением в течение 50 мин, после чего разливают по флаконам 400 мл, укупоривают резиновыми пробками, герметизируют алюминиевыми колпачками и стерилизуют автоклавированием.
Применяют основу в составе СЭЛ для культивирования легионелл следующим образом: среду расплавляют на водяной бане, а затем в охлажденную до температуре 45-50°С среду стерильно добавлялют L-цистеин гидрохлорид 0,4 г/л, соль Мора 0,75 г/л. В качестве селективной добавки вносят полимиксин 2,5-2,9 мг/л, ванкомицин 2,0-4,0 мг/л и амфотерицин 25,0-30,0 мг/л. Сформированную таким образом среду культивирования разливают по 30 мл в чашки Петри. На среду засевают по 0,1 мл взвеси вирулентного штамма L. pneumophila Philadelphia 1 с концентрацией 104, 103 и 102 КОЕ/мл и культивируют 120 часов при температуре 36°С. Средой сравнения была СЭЛ с автолизатом селезенки (АС), полученным по методу прототипа в той же концентрации - 7,0 г/л по сухим веществам. Контрольной средой выбрана среда
Figure 00000001
OXOID с ростовыми добавками и селективными добавками [4], смотри таблицу 1.
Figure 00000002
Figure 00000003
Как видно из таблицы 1, АСО - вариант 1 с основой, полученной при соотношении субстрат-жидкость 1:1 и автолиза в присутствии 0,2 г/л активированного угля не дал заметного эффекта, рост единичных колоний легионелл на опытной среде и варианте-прототипа был отмечен только при посеве 1000 КОЕ через 96 часов инкубации. На контроле рост из 10 КОЕ через 72 часа культивирования.
Пример 2. Изучение ростовых свойств СЭЛ с АСО на L. pneumophila Philadelphia! (вариант 2).
Для получения основы, субстрат селезенки смешивают с дисциллированной водой в соотношении 1:2, перемешивают 30 мин. Осадок отделяют центрифугированием при 2500 об/мин в течение 10 минут, доводят объем дисциллированной водой до исходного, вносят активированный уголь в дозе 0,3 г/л, устанавливают рН 4,0. Затем проводят автолиз при температуре (45-50)°С в течение 96 часа. Осадок отделяют центрифугированием, автолизат сохраняют в холодильнике под хлороформом при температуре(2-8)°С.
Полученный осветленный автолизат - АСО вариант 2 вносят в состав среды СЭЛ в дозе 7,0 г/л (по сухим веществам), добавляют активированный уголь - 4,0 (2,0) г/л, агар микробиологический 12,0 г/л, мезоинозит - 2,5 г/л, корректировали рН до 7,0 г/л. Смесь расплавляют кипячением в течение 50 мин, после чего разливают по флаконам объемом 400 мл, укупоривают резиновыми пробками, герметизируют алюминиевыми колпачками и стерилизовали автоклавированием.
К данной основе питательной среды при температуре 45-50°С добавляют ростовые и селективные добавки по варианту 1 и засевают тест-штаммом легионелл по варианту 1. В качестве контрольной среды использовали среду
Figure 00000001
OXOID с ростовыми и селективными добавками (см. таблицу 2).
Figure 00000004
Figure 00000005
Как видно из таблицы 2, предлагаемая технология позволила получить видимый рост легионелл на среде СЭЛ через 96 часов из посевной дозы 1000 КОЕ/мл. На основе-прототипа рост наблюдался только через 120 часов из дозы 1000 КОЕ/мл в сравнении с контрольной средой, которая обеспечила рост единичных колоний из 10 м.к. уже через 72 часа.
Пример 3.
Изучение ростовых свойств СЭЛ с АСО на L. pneumophila Philadelphia 1 (вариант 3).
Для получения основы субстрат селезенки смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:3, суспендируют 30 мин. Осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость удаляют. Осадок ресуспендируют до исходного объема с дистиллированной водой, корректируют рН 3,0, вносят хлороформ и автолизовали известным способом в присутствии 0,3 г/л активированного угля. Из автолизата удаляют осадок и готовят осветленный автолизат АСО вариант 3, затем изготавливают и контролируют питательную среду СЭЛ по примеру 1(см. таблицу 3).
Figure 00000006
Как видно из таблицы 3 предлагаемый вариант технологии позволяет получать видимый рост легионелл на среде СЭЛ уже через 72 часов из посевной дозы 100 м.к. и через 96 часа из 10 м.к. на основе-прототипа рост из 1000 м.к. наблюдался через 120 часов. Контрольная среда обеспечила рост легионелл из 10 м.к. такж е через 72 часа.
Пример 4.
Изучение ростовых свойств СЭЛ с АСО на L. pneumophila Philadelphia 1 (вариант4).
Для получения основы субстрат селезенки смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:3, суспендируют 30 мин. Осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость удаляют. Осадок ресуспендируют до исходного объема с дистиллированной водой, корректируют рН 3,0, вносят хлороформ и автолизуют известным способом в присутствии 0,4 г/л активированного угля. Из автолизата удаляют осадок и готовят АСО вариант 4(см. таблицу 4). Изготавливали и контролировали среду СЭЛ по примеру 1.
Figure 00000007
Как видно из таблицы 4 уже через 72 часа предлагаемый вариант технологии позволил получить видимый рост легионелл на среде СЭЛ из посевной дозы 10 и 100 м.к. На основе - прототипа рост из 1000 м.к. наблюдался через 120 часов. Контрольная среда обеспечивала рост легионелл из 10, 100 и 1000 м.к. через 72 часа.
Пример 5.
Изучение ростовых свойств СЭЛ с АСО на L. pneumophila Philadelphia 1 (вариант5).
Для получения основы субстрат селезенки смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:3, перемешивают в течение 30 мин. Осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость удаляют. Осадок ресуспендируют до исходного объема с дистиллированной водой, корректируют рН 3,0, вносят хлороформ и автолизуют известным способом в присутствии 0,5 г/л АУ. Из автолизата удаляют осадок и готовят АСО вариант 5. Изготавливали и контролировали среду СЭЛ по примеру 1 (см. таблицу 5).
Figure 00000008
Как видно из таблицы 5 предлагаемый вариант технологии позволил получить видимый рост легионелл на среде СЭЛ уже через 48 часов из посевной дозы 100 м.к. и через 72 часа из 10 м.к. на основе-прототипа рост из 1000 м.к. наблюдался через 120 часов. Контрольная среда обеспечивала рост легионелл из 10 м.к. через 72 часа.
Пример 6.
Изучение ростовых свойств СЭЛ с АСО на L. pneumophila Philadelphia 1 (вариант 6).
Для получения основы субстрат селезенки смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:3, перемешивают 30 мин. Осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость удаляют. Осадок ресуспендируют до исходного объема с водой дистиллированной, корректируют рН 3,0, вносят хлороформ и автолизуют известным способом в присутствии 0,6 г/л активированного угля. Из автолизата удаляют осадок и готовят АСО вариант 6 (см. таблицу 6). Изготавливали и контролировали среду СЭЛ по примеру 1.
Figure 00000009
Как видно из таблицы 6 предлагаемый вариант технологии позволил получить видимый рост легионелл на среде СЭЛ уже через 48 часов из посевной дозы 100 м.к. и через 72 часа из 10 м.к. на основе-прототипа рост из 1000 м.к. наблюдался через 120 часов. Контрольная среда обеспечивала рост легионелл из 10 м.к. через 72 часа.
Изучение ростовых свойств СЭЛ с АСО на L. pneumophila Philadelphia 1 (вариант 6).
Пример 7.
Изучение ростовых свойств СЭЛ с АСО на L. pneumophila Philadelphia 1 (вариант 7).
Для получения основы субстрат селезенки смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:3, суспендируют 30 мин. Осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость удаляют. Осадок ресуспендируют до исходного объема с водой, корректируют рН 3,5, вносят хлороформ и автолизуют известным способом в присутствии 0,7 г/л активированного угля. Из автолизата удаляют осадок и готовят АСО вариант 7 (см. таблицу 7). Изготавливали и контролировали среду СЭЛ по примеру 1.
Figure 00000010
Как видно из таблицы 7 предлагаемый вариант технологии позволил получить видимый рост легионелл на среде СЭЛ только через 72 часа из посевной дозы 100 м.к., через 72 часа из 10 м.к. роста не было. На основе-прототипа рост из 1000 м.к. наблюдался через 120 часов. Контрольная среда обеспечивала рост легионелл из 10 м.к. через 72 часа.
Пример 8.
Изучение ростовых свойств СЭЛ с АСО на L. pneumophila Philadelphia 1 (вариант 8).
Для получения основы субстрат селезенки смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:4 и далее осуществляют получение автолизата АСО вариант 8 в присутствии активированного угля 0,5 г/л. Изготавливали и контролировали среду СЭЛ по примеру 1 (см. таблицу 8).
Figure 00000011
Как видно из таблицы 8 предлагаемый вариант технологии позволил получить на опытной среде видимый рост через 72 часа из 100 м.к. Рост из 10 м.к. наблюдался только через 96 часов. На основе-прототипа рост из 1000 м.к. обнаруживали через 120 часов инкубации. Контрольная среда обеспечивала рост легионелл из 10 м.к. через 72 часа.
Пример 9.
Представлены данные по испытанию селективной среды СЭЛ на основе АСО используя вариант 5 в сравнении с
Figure 00000001
и средой-прототипом на АС на наборе штаммов из коллекции «Музея живых культур» ФКУЗ Ростовского-на-Дону противочумного института, включая тест-штаммы и штаммы легионелл, выделенные из объектов окружающей среды Южного федерального округа (посев 100 м.к. учет через 72 часа). На среду-протопит сеяли 1000 м.к. и учитывали через 120 часов.
Figure 00000012
Как видно из таблицы 9 предлагаемый вариант технологии позволил получить видимый рост (от 1,0 мм) легионелл всех серогрупп на среде СЭЛ на АСО стабильно через 72 часа из посевной дозы 100 м.к. На основе-прототипе рост из 1000 м.к. наблюдался не всех серогрупп при среднем диаметре колоний 0,1-0,3 мм. Рост легионелл на контрольной среде незначительно превышал рост всех серогрупп легионелл на искомой среде.
Таким образом результаты проверки селективных свойств среды СЭЛ на основе прототипа и искомого автолизата (см. таблицу 10) показывают, что основа полученная по предложенному способу обеспечивает возможность выделения легионелл при посеве 10 м.к. через 72 ч. инкубации при практически полном подавлении роста контаминантов- кишечные палочки, антракоида и вульгарного протея и соответствует по этому показателю референтной среде
Figure 00000001
. Среда на основе прототипа позволяет обнаруживать рост легионелл только через 120 ч. при отсутствии ингибирующего эффекта в отношении антракоида и вульгарного протея.
Figure 00000013
Использование предполагаемого изобретения позволяет за счет процесса отмывки и современного процесса осветления субстрата после автолиза понизить содержание натрия хлора в конечном продукте с токсичных для легионелл 0,9% до индифферентных 0,2%, а отказ от кипячения при завершении автолиза позволяет минимизировать образование в готовом продукте перекисных радикалов, одним из показателей присутствия которых является удельная цветность готовой продукции, последняя достигается с 2-х и 3-х кратным сокращением срока осветления при абсолютной прозрачности полученного субстрата.
Таким образом предложенная новая технология получения основы питательной среды для выделения и культивирования легионелл имеет высокие ростовые свойства, пониженное содержание различных токсичных примесей угнетающих рост легионелл.
Источники информации
1. Ковтун Ю.С., Катунина Л.С., Таран А.В. и др. Питательная среда для культивирования легионелл. Патент. RU №2412240 10.09.2006.
2. Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб. 2008. с. 64-65.
3. Катунина Л.С., Темежникова Н.Д., Куличенко А.Н. и др. Питательная среда плотная для выращивания легионелл. Патент. 2460768 10.09.2012.
5. Милютин В.Н., Копылов В.А., Буряков Б.Г., Шеремет О.В., Пасхалова Л.В., Хазан М.А., Борисов Б.И. Способ получения питательной основы микробиологических сред). Патент №1222676. 8.12.1985.
6. Шелохович А.И., Харабаджахян Г.Д., Савельева И.К., Терентьев А.Н., Ульрих Е.П. Питательная среда для выделения Legionella pneumophila. Патент №2580227 от 14.03.2016 г.
7. Нестерин М.Ф., Скурихин И.М. Химический состав пищевых продуктов. М. Пищевая промышленность. 1979. 247 с.
8. Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза. Методические указания. МУ 3.3.2.2124-06, М., - 2006.
9. Темежникова Н.Д., Тартаковский И.С.«Легионеллезная инфекция.» М. 2007. 260 С.

Claims (1)

  1. Способ получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл, включающий основу в виде гомогенизованной селезенки крупных сельскохозяйственных животных с последующим автолизом, отличающийся тем, что фарш селезенки в количестве 5 кг перед автолизом предварительно отмывают в емкости с 15 л дистиллированной воды в соотношении 1:3, перемешивают вручную в течение 30 минут, после этого отделяют осадок центрифугированием при 2500 об/мин в течение 10 мин при температуре 20-25°С, надосадочную жидкость сливают, а осадок ресуспендируют в соотношении 1:2 дистиллированной водой в количестве 10 л, затем корректируют реакцию смеси до рН 3,0, вносят 2% хлороформа, 0,5 г/л активированного угля и проводят автолиз в термостате при температуре 45-50°С в течение 96 часов с периодическим перемешиванием не более одного-двух раз в сутки, после этого автолизат осветляют центрифугированием при 2500 об/мин в течение 10 мин, разливают в стеклянные баллоны объемом 25 л с завинчивающейся полиэтиленовой крышкой и сохраняют в холодильнике под 1%-ным хлороформом при температуре 2-8°С.
RU2019145570A 2019-12-30 2019-12-30 Способ получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл RU2729389C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019145570A RU2729389C1 (ru) 2019-12-30 2019-12-30 Способ получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019145570A RU2729389C1 (ru) 2019-12-30 2019-12-30 Способ получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2729389C1 true RU2729389C1 (ru) 2020-08-06

Family

ID=72085469

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019145570A RU2729389C1 (ru) 2019-12-30 2019-12-30 Способ получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2729389C1 (ru)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1222676A1 (ru) * 1984-07-11 1986-04-07 Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт Способ получени питательной основы микробиологических сред
RU2040539C1 (ru) * 1992-01-28 1995-07-25 Инна Георгиевна Ермишина Питательная среда для культивирования бифидобактерий и лактобации "гидроселат"
RU2542390C1 (ru) * 2014-01-09 2015-02-20 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ Legionella pneumophila
RU2580227C1 (ru) * 2015-04-22 2016-04-10 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Питательная среда для выделения legionella pneumophila

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1222676A1 (ru) * 1984-07-11 1986-04-07 Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт Способ получени питательной основы микробиологических сред
RU2040539C1 (ru) * 1992-01-28 1995-07-25 Инна Георгиевна Ермишина Питательная среда для культивирования бифидобактерий и лактобации "гидроселат"
RU2542390C1 (ru) * 2014-01-09 2015-02-20 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ Legionella pneumophila
RU2580227C1 (ru) * 2015-04-22 2016-04-10 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Питательная среда для выделения legionella pneumophila

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
КАТУНИНА Л.С., КУРИЛОВА А.А. и др. Экспериментальная плотная питательная среда для культивирования легионелл. Проблемы особо опасных инфекций, 2013, вып. 1, с.88-90. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105347511B (zh) 一种水产养殖用复合微生物制剂及方法
CN106688999A (zh) 一种南美白对虾的养殖方法
AU2016297403A1 (en) Use of Bacillus coagulans strain in increasing egg production of laying hen
CN105152355A (zh) 一种养殖水体用中药微生物发酵防病净水剂及制备方法
RU2580028C1 (ru) Питательная среда плотная для культивирования бруцелл
CN110484467A (zh) 一株多粘芽孢杆菌及其产生的抗菌肽和应用
RU2412240C1 (ru) Питательная среда для выращивания легионелл
RU2729389C1 (ru) Способ получения питательной основы сред для выделения и культивирования легионелл
RU2681285C1 (ru) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ ВИДА Brucella neotomae
RU2626568C1 (ru) Питательная среда плотная для культивирования и сбора биомассы чумного микроба вакцинного штамма Y.pestis EV
RU2407786C1 (ru) Питательная среда для выращивания deinococcus radiodurans
RU2688335C1 (ru) Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза
RU2702174C1 (ru) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И СБОРА БИОМАССЫ ВАКЦИННОГО ШТАММА ЧУМНОГО МИКРОБА Y.pestis EV
RU2041947C1 (ru) Питательная среда для выделения дифтерийного микроба
RU2722071C1 (ru) Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079
RU2360962C2 (ru) Способ получения питательной основы и питательная среда для культивирования микроорганизмов рода yersinia и vibrio
RU2644248C2 (ru) Питательная среда плотная для культивирования и выращивания туляремийного микроба
Al-Azzauy et al. The beetroot juice as a bacterial growth and maintenance medium for many pathogenic bacteria
RU2580227C1 (ru) Питательная среда для выделения legionella pneumophila
RU2800127C1 (ru) Питательная среда для культивирования микроорганизмов
RU2460768C1 (ru) Питательная среда плотная для выращивания легионелл
RU2484141C1 (ru) Элективно-дифференциальная питательная среда для выделения холерных вибрионов (варианты)
RU2022008C1 (ru) Способ приготовления основы для питательных сред для выращивания микроорганизмов
RU2711914C1 (ru) Питательная среда для выделения и идентификации парагемолитических вибрионов (варианты) и способ её получения (варианты)
RU2681116C2 (ru) Питательная среда плотная для хранения микроба чумы