RU2722044C2 - Способ консервации клеток, тканей или органов посредством гипотермии - Google Patents

Способ консервации клеток, тканей или органов посредством гипотермии Download PDF

Info

Publication number
RU2722044C2
RU2722044C2 RU2017140605A RU2017140605A RU2722044C2 RU 2722044 C2 RU2722044 C2 RU 2722044C2 RU 2017140605 A RU2017140605 A RU 2017140605A RU 2017140605 A RU2017140605 A RU 2017140605A RU 2722044 C2 RU2722044 C2 RU 2722044C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
hypothermia
hypoxic
atmosphere
preceding paragraphs
Prior art date
Application number
RU2017140605A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2017140605A3 (ru
RU2017140605A (ru
Inventor
Жоран ИВАНОВИЧ
Сенди ГЕРБИ
Мария ВЛАСКИ-ЛАФАРДЖ
Original Assignee
Этаблиссман Франсе Дю Сан
Университе Де Бордо
Сантр Насьональ Де Ля Решерш Сьентифик
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Этаблиссман Франсе Дю Сан, Университе Де Бордо, Сантр Насьональ Де Ля Решерш Сьентифик filed Critical Этаблиссман Франсе Дю Сан
Publication of RU2017140605A publication Critical patent/RU2017140605A/ru
Publication of RU2017140605A3 publication Critical patent/RU2017140605A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2722044C2 publication Critical patent/RU2722044C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0278—Physical preservation processes
    • A01N1/0284—Temperature processes, i.e. using a designated change in temperature over time
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0236—Mechanical aspects
    • A01N1/0242—Apparatuses, i.e. devices used in the process of preservation of living parts, such as pumps, refrigeration devices or any other devices featuring moving parts and/or temperature controlling components
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0236—Mechanical aspects
    • A01N1/0242—Apparatuses, i.e. devices used in the process of preservation of living parts, such as pumps, refrigeration devices or any other devices featuring moving parts and/or temperature controlling components
    • A01N1/0252—Temperature controlling refrigerating apparatus, i.e. devices used to actively control the temperature of a designated internal volume, e.g. refrigerators, freeze-drying apparatus or liquid nitrogen baths
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0236—Mechanical aspects
    • A01N1/0263—Non-refrigerated containers specially adapted for transporting or storing living parts whilst preserving, e.g. cool boxes, blood bags or "straws" for cryopreservation

Abstract

Изобретение относится к способу консервации клеток. Для консервации in vitro или ex vivo клеток животных, предпочтительно человека, проводят этап выдержки указанных клеток при умеренной гипотермии в гипоксической и/или гиперкапнической атмосфере в течение от 12 до 72 часов до их консервации глубокой гипотермией. Изобретение позволяет повысить выживаемость клеток и способность к пролиферации. 4 н. и 14. з.п. ф-лы, 5 ил., 2 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новому способу средне- и долгосрочной консервации клеток, тканей или органов. Данный способ предназначен, в частности, для консервации трансплантатов до их пересадки реципиенту.
Уровень техники
До настоящего времени криоконсервация является единственно возможным методом средне- и долгосрочного хранения трансплантатов в виде гемопоэтических клеток. Действительно без охлаждения до температуры 4°С отмечено, что количество и функциональная способность клеток-предшественников в трансплантатах резко снижаются уже через трое суток хранения (Hechler и др., 1996 г.).
Однако криоконсервации присущи значительные недостатки, в частности, способность к агглюцинации при размораживании или опасность анафилактической реакции, вызываемой присутствием криопротекторов. Также этот метод не может применяться для всех типов клеток.
Предшествующие исследования доказали, что краткосрочное хранение при 4°С стволовых гемопоэтических клеток CD34+ улучшается при изменении атмосферных условий содержания культур, в частности, при понижении содержания кислорода и повышении содержания диоксида углерода (Vlaski и др., 2014 г.). И хотя эти улучшения значительны, однако они остаются недостаточными для обеспечения выживания и поддержания функциональной способности клеток, в частности, клеток-предшественников, при долгосрочном хранении при 4°С.
Оптимальный способ позволил бы хранить долгосрочно трансплантаты в состоянии гипотермии без замораживания и таким образом упростил бы обеспеченность и процессы пересадки при улучшении результатов, достигаемых у реципиентов.
Раскрытие изобретения
Авторы изобретения доказали, что предварительная инкубация клеток в состоянии умеренной гипотермии в гипоксической и/или гиперкапнической атмосфере до момента хранения при глубокой гипотермии позволяет существенно повысить выживаемость и способность к пролиферации отмеченных клеток, в частности, стволовых клеток.
Следовательно согласно первому аспекту настоящее изобретение относится к способу консервации in vitro или ex vivo клеток животных, предпочтительно клеток человека, при глубокой гипотермии, включающему этап выдержки упомянутых клеток при умеренной гипотермии в гипоксической и/или гиперкапнической атмосфере в течение от около 12 до около 72 часов до их хранения при глубокой гипотермии.
Клетки могут храниться при глубокой гипотермии при температуре от около 1 до около 12°С, предпочтительно около 4°С.
Клетки могут выдерживаться при умеренной гипотермии при температуре от около 20 до около 35°С, предпочтительно около 30°С.
Клетки могут выдерживаться при умеренной гипотермии в гипоксической и/или гиперкапнической атмосфере в течение от около 24 до около 48 часов, предпочтительно в течение около 48 часов.
В гипоксической атмосфере может содержаться от около 0,5 до около 10% молекулярного кислорода, предпочтительно около 5%.
В гиперкапнической атмосфере может содержаться от около 5 до около 20% диоксида углерода, предпочтительно около 9%.
Предпочтительно клетки выдерживаются при умеренной гипотермии в гипоксической и/или гиперкапнической атмосфере.
Сохраняемые способом согласно изобретению клетки могут быть клетками кожи, клетками хряща, костными клетками, эндотелиальными клетками, мышечными клетками, невральными клетками, ретинальными клетками, панкреатическими клетками, кровяными клетками или стволовыми клетками или клетками-предшественниками, способными дифференцироваться на перечисленные клетки.
Указанные клетки могут быть объединены, в частности, в виде ткани, предпочтительно отобранной из группы, состоящей из кожи, роговицы, сухожилия, костной ткани, кровеносного сосуда, нерва, сердечного клапана, амниотической мембраны, хрящевой ткани, панкреатического островка и мышечной ткани, или объединены в виде цельного или частичного органа, предпочтительно отобранного из группы, состоящей из почки, печени, сердца, пуповины, плаценты, кишечника, лёгкого и поджелудочной железы.
Предпочтительно сохраняемыми клетками являются гемопоэтические стволовые клетки, мезенхимальные стволовые клетки или их комбинация, предпочтительно гемопоэтические стволовые клетки.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к набору, содержащему среду для консервации клеток, первый стерильный контейнер для размещения клеток, тканей или органов и среды для консервации клеток, и устройство для создания гипоксической и/или гиперкапнической атмосферы в первом контейнере, содержащем клетки, ткани или органы, а также факультативно второй контейнер для выдержки первого контейнера и/или клеток, тканей или органов при контролируемой температуре.
В качестве альтернативы набор может содержать стерильный контейнер для размещения клеток, тканей или органов и среды для консервации клеток, содержащей гипоксическую и/или гиперкапническую атмосферу, при этом стерильный контейнер факультативно может предварительно заполняться средой для консервации клеток.
Согласно ещё одному аспекту настоящее изобретение относится к применению набора по изобретению для осуществления способа согласно изобретению, т.е. для консервации клеток животных при глубокой гипотермии.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 – клетки CD34+ плацентарной крови. Выход жизнеспособных клеток по сравнению с t=0. Воздух: 21% О2, 0,01% СО2; гипоксическая и/или гиперкапническая атмосфера: 9% СО2, 5% О2; гипоксическая атмосфера: 5% О2, 0,001 СО2; гиперкапническая атмосфера: 20% О2, 20% СО2. *: р < 0,5; **: р < 0,01; ***: р < 0,001.
Фиг. 2 – клетки CD34+ плацентарной крови. Выход клеток-предшественников клонального происхождения по сравнению с t=0. Воздух: 21% О2, 0,01% СО2; гипоксическая и/или гиперкапническая атмосфера: 9% СО2, 5% О2; гипоксическая атмосфера: 5% О2, 0,001 СО2; гиперкапническая атмосфера: 20% О2, 20% СО2. *: р < 0,5; **: р < 0,01; ***: р < 0,001.
Фиг. 3 – мезенхимальные клетки человека. Выход жизнеспособных клеток по сравнению с t=0. Воздух: 21% О2, 0,01% СО2; гипоксическая и/или гиперкапническая атмосфера: 9% СО2, 5% О2; гипоксическая атмосфера: 5% О2, 0,001 СО2; гиперкапническая атмосфера: 20% О2, 20% СО2. *: р < 0,5; **: р < 0,01; ***: р < 0,001.
Фиг. 4 - мезенхимальные клетки человека. Выход клеток-предшественников клонального происхождения по сравнению с t=0. Воздух: 21% О2, 0,01% СО2; гипоксическая и/или гиперкапническая атмосфера: 9% СО2, 5% О2; гипоксическая атмосфера: 5% О2, 0,001 СО2; гиперкапническая атмосфера: 20% О2, 20% СО2. *: р < 0,5; **: р < 0,01; ***: р < 0,001.
Фиг. 5 - клетки FDCPmix. Выход жизнеспособных клеток по сравнению с t=0. Воздух: 21% О2, 0,01% СО2; гипоксическая и/или гиперкапническая атмосфера: 9% СО2, 5% О2; гипоксическая атмосфера: 5% О2, 0,001 СО2; гиперкапническая атмосфера: 20% О2, 20% СО2. *: р < 0,5; **: р < 0,01; ***: р < 0,001.
Осуществление изобретения
Во время предыдущих исследований авторами данного изобретения было отмечено, что гипоксия и гиперкапния способствуют консервации гемопоэтических стволовых клеток по сравнению с выдержкой их на воздухе (Jeanne и др., 2009 г.; Ivanovic и др., 2010 г., Vlaski и др. 2014 г.).
В экспериментальной части данной заявки авторы изобретения доказали, что предварительная инкубация стволовых клеток в течение двух суток при умеренной гипертермии (30°С) до момента их перевода на хранения при 4°С очень заметно повышает выживание данных клеток и функциональную способность клеток-предшественников по сравнению с непосредственным хранением при 4°С. Полученные результаты тем более примечательны в том случае, когда предварительная инкубация проводится в сочетании с гипоксической и/или гиперкапнической атмосферой. Эти результаты, подтверждённые на трёх разных типах клеток, а именно гемопоэтических клетках CD34+, мезенхимальных клетках и клетках линии FDCPmix, указывают на то, что данный способ может использоваться для улучшения консервации клеток, тканей или органов при гипотермии, в частности, предназначенных для трансплантации.
Таким образом согласно первому аспекту данная заявка касается способа консервации in vitro или ex vivo клеток животных при глубокой гипотермии, включающего в себя этап содержания клеток при умеренной гипотермии в течение короткого периода до их консервации глубокой гипотермией.
Целью способа согласно изобретению является усовершенствование консервации клеток животных при их хранении при глубокой гипотермии без замораживания. Термин «глубокая гипотермия» в том виде, как он здесь применяется, предполагает температуры выше 0°С и ниже 15°С. Предпочтительно этот термин предполагает температуры от около 1°С до около 12°С, а именно около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12°С, предпочтительно от около 1 до около 8°С, в частности, от около 2 до около 8°С. Более предпочтительно состояние глубокой гипотермии соответствуют температуре от около 1 до около 6°С, предпочтительно около 4°С.
В том виде, как применяется здесь выражение «около», оно означает диапазон значений ± 5% от номинального значения, предпочтительно ± 2% от номинального значения. Так, например, «около 20» содержит в себе ± 5% от 20 или от 19 до 21. Само собой разумеется, что приведённые выше показатели с выражением «около» должны также считаться специфически описанными в рамках настоящей заявки. Например, выражение «температура от около 1 до около 12°С» должна считаться температурой, означающей «температуру от 1 до 12°С». Таким же образом выражение «температура около 4°С» должна также считаться «температурой 4°С».
До приведения в состояние глубокой гипотермии клетки выдерживаются при умеренной гипотермии в течении короткого периода. В том виде, как использован термин «умеренная гипотермия» в данном случае, он указывает на температуры от около 20 до около 35°С, а именно около 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 или 35°С, предпочтительно от около 25 до около 32°С, более предпочтительно от около 27 до около 32°С. Ещё более предпочтительно умеренная гипотермия соответствует температуре около 30°С.
При осуществлении способа согласно изобретению клетки подвергают умеренной гипотермии в течение от около 12 до около 72 часов, предпочтительно от около 24 до около 60 часов или от около 36 до около 60 часов, до их приведения в состояние глубокой гипотермии с целью консервации на более длительный срок. Предпочтительно фаза умеренной гипотермии длится от около 24 до около 48 часов, совершенно предпочтительно около 48 часов.
Согласно предпочтительному варианту выполнения клетки приводят в состояние глубокой гипотермии непосредственно после этапа умеренной гипотермии.
При осуществлении способа согласно изобретению клетки могут храниться при глубокой гипотермии в течение длительного периода, например, в течение от нескольких суток до нескольких месяцев, до момента своего применения. В частности, клетки могут храниться при глубокой гипотермии в течении более 24 часов, в частности, от 1 до 120 суток, предпочтительно от 1 суток до 1 месяца, более предпочтительно в течение от 1 до 15 суток, особо предпочтительно от 5 до 10 суток.
Клетками, хранящимися способом согласно изобретению, являются предпочтительно клетки, которые были отобраны у животного или донора, предпочтительно млекопитающего, особо предпочтительно, человека. В частности, такие клетки позднее могут быть введены реципиенту в рамках трансплантации.
Согласно предпочтительному варианту выполнения клетки не подвергаются ни замораживанию, ни хранению в состоянии глубокой гипотермии, сопровождаемой умеренной гипотермией. Предпочтительно клетки подвергаются умеренной гипотермии в течение не более 4 часов после отбора у донора. Совершенно предпочтительно клетки приводятся в состояние умеренной гипотермии сразу после их отбора, т.е. во время после отбора.
Перед консервацией клетки могут подвергаться разным анализам, таким, как серология, типирование антигена главного локуса (HLA), фенотипические, морфологические (в частности, для клеток, объединённых в виде тканей или органов) или бактериологические исследования.
Как показано в экспериментальной части, предварительный этап в виде умеренной гипотермии является достаточным для улучшения консервации клеток. Однако согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения данный этап комбинируется с упорядочением атмосферных условий культуры для создания гипоксической и/или гиперкапнической или гипоксической/гиперкапнической атмосферы, предпочтительно гипоксической/гиперкапнической атмосферы.
Гипоксической атмосферой служит атмосфера с пониженным содержанием молекулярного кислорода по сравнению с его содержанием в воздухе, составляющим обычно от 20 до 21%. В том виде, как употреблён здесь термин «гипоксическая атмосфера», он предполагает атмосферу с содержанием менее 10% О2. Следовательно гипоксическая атмосфера может содержать, например, от около 0,5 до около 10% О2, т.е. около 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10%. Согласно отдельным предпочтительным способам выполнения в гипоксической атмосфере содержится кислород в количестве от около 1 до около 5%. Совершенно предпочтительно в гипоксической атмосфере содержится около 5% О2. В гипоксической атмосфере концентрация диоксида углерода предпочтительно соответствует его концентрации в окружающем воздухе, а именно составляет около 0,05%. Дополнением к газовой смеси служит, как правило, диоксид азота.
Гиперкапнической атмосферой является атмосфера с содержанием диоксида углерода, превышающим его содержание в воздухе, составляющее обычно менее 0,05%. И том виде, как термин «гиперкапническая атмосфера» употреблён здесь, он означает предпочтительно атмосферу с содержанием свыше 5% СО2. Таким образом в гиперкапнической атмосфере может содержаться СО2, например, в количестве от около 5 до около 20%, т.е. около 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20%. Согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения в гиперкапнической атмосфере содержится от около 5 до около 10% СО2, предпочтительно от около 6 или 7 до около 10% СО2. Согласно другим предпочтительным вариантам выполнения в гиперкапнической атмосфере содержится от около 6 до около 20% СО2, предпочтительно от около 9 до около 20% СО2. Совершенно предпочтительно в гиперкапнической атмосфере содержится около 9% СО2. В гиперкапнической атмосфере концентрация молекулярного кислорода соответствует предпочтительно его концентрации в окружающем воздухе, а именно 20 – 21%. Дополнением к газовой смеси служит, как правило, диоксид азота.
Гипоксической/гиперкапнической атмосферой служит атмосфера с пониженным содержанием молекулярного кислорода и повышенным содержанием диоксида углерода по сравнению с их обычным содержанием в окружающем воздухе. Более специфично, как это употреблено здесь, термин гипоксическая/гиперкапническая атмосфера означает атмосферу с содержанием менее 10% О2 и более 5% СО2. Предпочтительными диапазонами значений О2 и СО2 являются такие, как они охарактеризованы выше для гипоксических и гиперкапнических условий. Особо предпочтительно гипоксическая/гиперкапническая атмосфера содержит в себе около 5% О2 и около 9% СО2. Дополнением к газовой смеси служит, как правило, диоксид азота.
Каждая из этих специальных газовых смесей может быть получена способами, которые хорошо известны специалисту, в частности, в инкубационных камерах с контролируемой атмосферой, предлагаемых многочисленными торговцами.
Клетки, законсервированные способом согласно изобретению, могут быть любой клеткой животного, для которой требуется консервация посредством глубокой гипотермии.
Предпочтительно клетками являются клетки млекопитающих, особо предпочтительно человека.
Согласно предпочтительному варианту выполнения клетками являются клетки для трансплантации реципиенту, которые предпочтительно отобраны у донора. Донор и реципиент могут быть одним лицом (аутогенная трансплантация) или же разными лицами (гомотрансплантация).
Клетки могут быть отдельно взятыми или объединёнными в виде тканей или органов.
Согласно варианта выполнения сохраняемые клетки являются отдельными. Эти клетки могут быть отобраны, например, из группы, состоящей из клеток кожи, клеток хряща, костных клеток, эндотелиальных клеток, мышечных клеток, невральных клеток, клеток сетчатки, панкреатических клеток, кровяных клеток или стволовых клеток или клеток-предшественников, способных дифференцироваться на названные клетки.
Стволовыми клетками могут быть стволовые плюрипотентные клетки (способные дифференцироваться на любые типы клеток организма), стволовые мультипотентные клетки (способные дифференцироваться на любые типы клеток разных тканей) или унипотентные клетки (способные дифференцироваться на типы клеток одной ткани). Клетками-предшественниками являются клетки, способные дифференцироваться на разные типы клеток одной ткани. Они могут быть олигопотентными (способными дифференцироваться на небольшое число типов клеток, например, клетки-предшественники CFU-GEMM), бипотентными (способными дифференцироваться на два типа клеток, например, клетки-предшественники CFU-GM) или унипотентными (способными дифференцироваться на один тип клеток, например, клетки-предшественники CFU-G, CFU-M, CFU-MK, BFU-E, CFU-E). В отличие от клеток-предшественников стволовые клетки обладают реальной способностью к самообновлению и способностью к значительно более высокой пролиферации.
Согласно варианта выполнения стволовыми клетками являются плюрипотентные стволовые клетки, выбранные из эмбриональных стволовых клеток, взрослых мультипотентных клеток-предшественников (или MAPC) или индуктированных плюрипотентных стволовых клеток.
Эмбриональные стволовые клетки происходят из внутренней клеточной массы бластоцисты и обладают способностью образовывать любые ткани организма (мезодерму, эндодерму, эктодерму), в т.ч. клетки зародышевой линии. Плюрипотенцию эмбриональных стволовых клеток можно определить по присутствию маркеров, таких, как факторы транскрипции ОСТ4 и NANOG, и поверхностных маркеров, таких, как SSEA3/4, Tra-1-60 и Tra-1-81. Эмбриональные стволовые клетки могут быть получены без разрушения эмбриона, из которого они извлекаются, например, с помощью приёма, описанного Chung и др. (2008 г.). Согласно частному варианту выполнения эмбриональные стволовые клетки, по правовым или этическим нормам, не являются эмбриональными клетками человека. В целом согласно частному варианту выполнения клетки, сохраняемые способом по изобретению, не являются эмбриональными стволовыми клетками человека.
Взрослые мультипотентные клетки-предшественники могут дифференцироваться, подобно эмбриональным стволовым клеткам, на клетки, происходящие из любого из трёх зародышевых листков, и выражают факторы транскрипции ОСЕ4 и NANOG. Эти клетки могут быть выделены из разных органов, в частности, из костного мозга (Schwartz и др. 2002 г.).
Индуктированными плюрипотентными стволовыми клетками являются плюрипотентные клетки, полученные генетическим перепрограммированием дифференцированных соматических клеток. Помимо их морфологии, потенциала самообновления и плюрипотенции, которые схожи с этими же показателями эмбриональных стволовых клеток, плюрипотентные стволовые клетки обладают также эпигенетическим перепрограммированием с общим профилем метилирования гистонов и экспрессии генов, очень близким профилю эмбриональных стволовых клеток. В частности, эти клетки являются положительными для маркеров плюрипотенции, в частности, окрашивание в щелочную фосфатазу и экспрессия протеинов NANOG, SOX2, OCT4, SSEA3/4. Способы, позволяющие получать индуктированные плюрипотентные стволовые клетки, среднему специалисту хорошо известны и описаны, в частности, в статьях Yu и др. (2007 г.), Takahashi и др. (2007) и Nakagawa и др. (2008 г.).
Согласно другому варианту выполнения стволовыми клетками выступают мультипотентные стволовые клетки. Не ограничивающие примеры на мультипотентные стволовые клетки включают в себя гемопоэтические клетки, способные дифференцироваться на кровяные и иммунные клетки, которыми являются лейкоциты, эритроциты и тромбоциты, в частности, гемопоэтические стволовые клетки, выражающие антиген CD34, или мезенхимальные стволовые клетки, способные дифференцироваться на хрящевые клетки (хондроциты), костные клетки (остеобласты) и жировые клетки (адипоциты). Гемопоэтические стволовые клетки CD34+ и мезенхимальные стволовые клетки могут быть выделены из костного мозга любым приёмом, известным среднему специалисту, например, с помощью иммуно-магнитной системы или фильтрационной системы.
Согласно другому варианту выполнения стволовыми клетками являются унипотентные стволовые клетки. Не ограничивающие примеры на унипотентные стволовые клетки включают в себя стволовые клетки кожи, печени и слизистой оболочки кишечника.
Согласно предпочтительному варианту выполнения сохраняемые клетки являются стволовыми клетками или содержат их, предпочтительно гемопоэтическими или мезенхимальными стволовыми клетками или их комбинацией. Особо предпочтительно сохраняемые клетки являются гемопоэтическими стволовыми клетками.
Согласно некоторым вариантам выполнения сохраняемые клетки могут быть объединены в виде тканей или органов.
Не ограничивающие примеры на ткани, способные храниться способом согласно изобретению, включают в себя кожу, роговицу, сухожилие, костную ткань, кровеносный сосуд, нерв, сердечный клапан, амниотическую мембрану, хрящевую ткань, панкреатический островок и мышечную ткань.
Сохраняемые органы способом согласно изобретению могут быть цельными, например, цельная почка или печень, или частичными, например, часть печени. Не ограничивающие примеры на органы, которые могут храниться способом согласно изобретению, включают в себя почку, печень, сердце, пуповину, плаценту, кишечник, лёгкое и поджелудочную железу.
Согласно способу по изобретению клетки, ткани или органы могут храниться в любой пригодной для этого среде, предпочтительно жидкой. Существует множество сред, пригодных для консервации клеток, тканей или органов. Средний специалист может легко выбрать соответствующую среду с учётом консервируемого типа клеток, тканей или органов. Такие среды описаны, например, в международных заявках на патент WO 2014/057220, WO 2014/120014, WO 2012/129538, WO 2011/159359, WO 06/052133, WO 97/33978, WO 00/02572. Также многочисленные коммерсанты предлагают соответствующие среды, такие, как, например, среды HP01 и HP02 Macopharma, среды Stem alpha A и Stem alpha S3 Stemcell или среда Viaspan (или “University of Wisconsin solution”).
Предпочтительно среда обеспечивает выживание клеток без стимуляции их пролиферации.
Одним из преимуществ способа согласно изобретению является то, что он не требует применения криопротекторов в среде для консервации. Она может вводиться непосредственно, в частности, при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток или требуется лаваж трансплантата перед применением.
В случае применения органов или тканей они могут быть погружены в объём среды с полным покрытием.
Перед применением клеток, в частности, при трансплантации могут быть проведены разные тесты для проверки качества трансплантата, например, замер апоптоза или тест на клональное происхождение клеток-предшественников CFU-GM (Colony Forming Unit – Granulocyte Macrophage) или CFC-GM (Colony Forming Cells-Granuloсyte Macrophage), проводимый в рамках контроля за качеством гемопоэтических трансплантатов.
Согласно другому аспекту настоящая заявка относится также к набору.
По первому варианту выполнения в него входят:
- среда для консервации клеток,
- первый стерильный контейнер для размещения клеток, тканей или органов и среды для консервации клеток,
- устройство для создания гипоксической/гиперкапнической атмосферы в первом контейнере, содержащем клетки, ткани или органы.
Факультативно первый стерильный контейнер может предварительно заполняться средой для консервации клеток.
Гипоксическая и/или гиперкапническая атмосфера может создаваться в первом контейнере после размещения в нём клеток, тканей или органов.
Согласно частному варианту выполнения упомянутый контейнер имеет вход и выход, обеспечивающие газовые обмены, при этом устройство, позволяющее создавать гипоксическую и/или гиперкапническую атмосферу, используется для впуска требуемой атмосферы в этот контейнер. Эти вход и выход затем закрываются для выдержки клеток, тканей или органов в указанной атмосфере. Устройство, позволяющее создавать гипоксическую и/или гиперкапническую атмосферу, является преимущественно устройством под давлением, таким, как сменный газовый баллон.
Согласно другому частному варианту выполнения стерильный контейнер, содержащий клетки, ткани или органы, может быть помещён в инкубационную камеру с контролируемой атмосферой, позволяющую создать гипоксическую и/или гиперкапническую атмосферу.
Согласно второму способу выполнения набор может содержать стерильный контейнер для размещения клеток, тканей или органов и среды для консервации клеток, содержащую гипоксическую и/или гиперкапническую атмосферу. Факультативно этот стерильный контейнер может быть предварительно заполнен средой для консервации клеток.
Набор согласно изобретению может содержать дополнительно второй контейнер для выдержки первого контейнера и/или клеток, тканей или органов при контролируемой температуре.
Этот второй контейнер позволяет выдерживать клетки, ткани или органы при умеренной гипотермии предпочтительно сразу после их отбора. Этот же контейнер может затем использоваться для размещения клеток, тканей или органов при глубокой гипотермии. В качестве альтернативы для клеток, тканей или органов контейнер может быть заменён при размещении на хранение при глубокой гипотермии.
Средой для консервации клеток может служить любая среда для консервации, например, как описанная ниже, и адаптирована к подлежащим консервации клеткам, тканям или органам.
Набор согласно изобретению приспособлен особенно для транспортировки и консервации клеток, тканей или органов донора для реципиента при трансплантации.
Факультативно набор может также содержать другие ёмкости, такие, как ёмкость для размещения пробы крови донора с целью определения её группы или ёмкость для размещения пробы селезёнки или ганглия для типирования антигена главного локуса.
Также настоящее изобретение относится к применению набора, описанного выше и предназначенного для осуществления способа согласно изобретению.
Все приведённые в данном описании ссылки указаны в библиографии к настоящей заявке. Другие признаки и преимущества изобретения подробнее поясняются примерами, приведёнными в качестве иллюстрации и не являющимися ограничивающими.
Примеры
Пример 1. Клетки CD34+ плацентарной крови
Технические средства и методы
После отделения клеток CD34+ посредством иммуно-магнитной системы их инкубировали в течение ночи в культуре при 37°С в среде НР01 (Macopharma) в присутствии SCF (Stem Cell Factor – ген стволовой клетки) (100 нг/мл), тромбопоэтина (20 нгг/мл) и IL 3 (1 нг/мл) при концентрации около 105 клеток на 1 мл. Эта среда обеспечила выживание клеток CD34+ без стимуляции их пролиферации. Данную культуру распределили между 8 герметичными колбами (в 2 из них с учётом атмосферного состояния: i) воздух (21% О2, 0,01% СО2), ii) гипоксическая/гиперкапническая атмосфера (9% СО2, 5% О2), iii) гипоксическая атмосфера (5% О2, 0,001% СО2), iv) гиперкапническая атмосфера (20% О2, 20 СО2)). Все колбы выдержали в течение ночи (около 16 ч.) при 37°С, затем в течение 1 ч. в изменённой атмосфере согласно приведённым состояниям при 37°С. Одну колбу с учётом состояния выдерживали непосредственно при +4°С в течение 13 суток, другую – при 30°С в течение 2 суток и затем при +4°С в течение 11 суток (всего в течение 13 суток). В конце этого периода клетки подогревали до 37°С в течение 2 ч. и оценивали с точки зрения жизнеспособности/апоптоза путём анализа экспрессии аннексина V и фиксации йодида пропидия, а также посредством функционального теста на способность образовывать колонии полутвёрдой культуры (Duchez и др., 2013 г.).
Результаты
На фиг. 1 показан выход жизнеспособных и не поражённых апоптозом клеток. Представленные на этой фигуре результаты говорят о том, что непосредственное нахождение в состоянии глубокой гипотермии при +4°С и хранение клеток в течение 13 суток на воздухе привели к потере всего количества жизнеспособных клеток.
Если суспензии непосредственно подверглись действию температуры +4°С в гипоксической/гиперкапнической атмосфере, то после 13 суток выжило около 10% клеток. Этот положительный эффект гипоксии/гиперкапнии возрастает в 4 раза в том случае, когда клетки были предварительно инкубированы в течение 2 суток при умеренной гипотермии (30°С).
Только одна гипоксия в сочетании с предварительной инкубацией при 30°С увеличивает выживание клеток умеренно, в то время как без такой предварительной инкубации она вообще не имеет положительного эффекта.
Только одна гиперкапния проявила себя благоприятной с или без предварительной инкубации, однако эффект с применением предварительной инкубации в состоянии умеренной гипотермии возрастает в 6 раз.
Совершенно схожие результаты получены в отношении клеток-предшественников клонального происхождения в исследованных условиях (фиг. 2). Следовательно эти данные отчётливо показывают, что сочетание гиперкапнии и гипоксии с предварительной инкубацией при умеренной гипотермии существенно повышает выживаемость клеток CD34+, а также клеток-предшественников плацентарной крови, имеющих клональное происхождение. Период наблюдения (13 суток) был чрезвычайно длительным, но уровень выживания клеток и клеток-предшественников (40 – 65%) превзошёл все ожидания.
Пример 2. Мезенхимальные клетки
Технические средства и методы
Для большей ясности в данном примере рассмотрены только мезенхимальные клетки, способные образовывать колонии слипшихся фибробластоидных клеток (CFU-F).
Мезенхимальные клетки, произведённые из предварительно замороженного костного мозга человека (клетки, задержанные фильтрами при фильтрации костного мозга перед трансплантацией), были разморожены и обработаны (α МЕМ, 10% SVF, β FGF (1 нг/мл), глютамин L (2 мМ), 0,5% пенициллин-стрептомицина) при 37°С и 5% СО2 в 9 колбах и подвергнуты амплификации до слияния. Затем колбы аэрировали при 37°С следующим образом: i) воздух (21% О2, 0,01% СО2), ii) гипоксия/гиперкапния (9% СО2, 5% О2), iii) гипоксия (5% О2, 0,001% СО2), iv) гиперкапния (20% О2, 20% СО2) (две колбы с учётом состояния; 9-я колба использовалась для анализа на жизнеспособность/апоптоз и для тестирование на клональное происхождение перед консервацией гипотермией). По каждому состоянию первую колбу подвергли непосредственно воздействию температуры +4°С и хранили при ней 5 суток, вторую колбу выдержали в течение 48 часов при 30°С, затем в течение 3 суток при 4°С. Через 5 суток клетки подогрели в течение 2 часов до 37°С и анализировали (на жизнеспособность/апоптоз и способность к клональному происхождению под действием культур CFU-F, см. пример 1).
Результаты
Как показано на фиг. 3, пребывание в течение 48 часов в состоянии умеренной гипотермии резко увеличило выживание мезенхимальных клеток, даже на воздухе, где смертность клеток является полной, если они были инкубированы в течение 5 суток при +4°С.
Гипоксия/гиперкапния повышают выживание мезенхимальных клеток, подвергнутых непосредственно воздействию температуры +4°С, этот эффект возрастает в три раза при прохождении через температуру 30°С.
При прохождении через умеренную гипотермию, гипоксию и гиперкапнию каждая из них обеспечивает максимальное сохранение мезенхимальных клеток (в районе 70%). Совершенно схожие результаты получены для мултипотентных стволовых клеток (CFU-F) (фиг. 4).
Пример 3. Клетки линии FDCPmix
Технические средства и методы
Клетки FDCPmix были подвергнуты амплификации при 37°С и 5% СО2 в среде RPMI c добавкой 20% конской сыворотки и 8% кондиционированной среды WEHI – источник интерлейкина 3. Затем клетки распределили по двум колбам с учётом состояния при следующих условиях: i) воздух (21% О2, 0,01% СО2), ii) гипоксия/гиперкапния (9% СО2, 5% О2), iii) гипоксия (5% О2, 0,001% СО2), iv) гиперкапния (20% О2, 20% СО2). Последующий протокол был тот же, что и для мезенхимальных клеток в примере 2.
Результаты
Сохранность клеток FDCPmix оказалась посредственной на воздухе и в состоянии гипоксии/гиперкапнии (непосредственно при +4°С) без прохождения через умеренную гипотермию.
Зато сочетание гипоксии/гиперкапнии или только гиперкапнии с прохождением через умеренную гипотермию обеспечивает очень хорошую сохранность, составляющую около 60% клеток FDCPmix (фиг. 5).
Библиография
Chung и др. Сell Stem Cell., 7 февраля 2008 г., 2(2) :113-7
Duchez и др. Transfusion. Cентябрь 2013 г., 53(9):2012-9
Hechler и др. Ann Hematol, 1996 г., 72 : 303-6
Ivanovic и др. Transfusion. Январь 2010 г., 50(1):120-7
Jeanne и др. Transfusion. Август 2009 г., 49(8):1738-46
Nakagawa и др. Nat Biotechnol. Январь 2008 г., 26(1):101-6
Schwartz и др. J. Clin Invest. Май 2002 г.; 109(10):1291-302
Takahashi и др. 2007 г., Cell 131 (5):861-872
Vlaski и др. J Cell Physiol., 2014 г., 229: 2153-2165
Yu и др., 2007 г.Science 318 (5858): 1917-1920.

Claims (18)

1. Способ консервации in vitro или ex vivo клеток животных, предпочтительно человека, при глубокой гипотермии, включающий в себя этап выдержки указанных клеток при умеренной гипотермии и в гипоксической и/или гиперкапнической атмосфере в течение от 12 до 72 часов до их консервации глубокой гипотермией.
2. Способ по п. 1, в котором клетки хранятся в состоянии глубокой гипотермии при температуре от 1 до 12°С, предпочтительно 4°С.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором клетки выдерживаются в состоянии умеренной гипотермии при температуре от 20 до 35°С.
4. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором клетки выдерживаются в состоянии умеренной гипотермии при температуре от 27 до 32°С.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором клетки выдерживаются в состоянии умеренной гипотермии при температуре 30°С.
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором клетки выдерживаются при умеренной гипотермии и в гипоксической и/или гиперкапнической атмосфере в течение от 24 до 48 часов, предпочтительно в течение 48 часов.
7. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором клетки хранятся при глубокой гипотермии в течение от 1 до 15 суток.
8. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором в гипоксической атмосфере содержится от 0,5 до 10% молекулярного кислорода, предпочтительно 5%.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором в гиперкапнической атмосфере содержится от 5 до 20% диоксида углерода, предпочтительно 9%.
10. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором клетки выдерживаются при умеренной гипотермии в гипоксической и гиперкапнической атмосфере.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором клетками являются клетки кожи, клетки хряща, костные клетки, эндотелиальные клетки, мышечные клетки, невральные клетки, ретинальные клетки, панкреатические клетки, кровяные клетки или стволовые клетки или клетки-предшественники, способные дифференцироваться на эти клетки.
12. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором клетки объединены в ткань, предпочтительно отобранную из группы, состоящей из кожи, роговицы, сухожилия, костной ткани, кровеносного сосуда, нерва, сердечного клапана, амниотической мембраны, хрящевой ткани, панкреатического островка и мышечной ткани, или объединены в виде целостного или частичного органа, предпочтительно отобранного из группы, состоящей из почки, печени, сердца, пуповины, плаценты, кишечника, лёгкого и поджелудочной железы.
13. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором клетками являются гемопоэтические стволовые клетки, мезенхимальные стволовые клетки или их комбинация, предпочтительно гемопоэтические стволовые клетки.
14. Набор для консервации клеток животных, состоящий из среды для консервации клеток, первого стерильного контейнера для размещения клеток, тканей или органов и среды для консервации клеток, устройства для создания гипоксической и/или гиперкапнической атмосферы в первом контейнере, содержащем клетки, ткани или органы.
15. Набор по п. 14, дополнительно содержащий второй контейнер для выдержки первого контейнера и/или клеток, тканей или органов при умеренной или глубокой гипотермии.
16. Набор для консервации клеток животных, состоящий из стерильного контейнера для размещения клеток, тканей или органов и среды для консервации клеток, содержащей гипоксическую и/или гиперкапническую атмосферу.
17. Набор по п. 16, в котором указанный стерильный контейнер предварительно заполняется средой для консервации клеток.
18. Применение набора по любому из пп. 14-17 для консервации клеток животных способом по любому из пп. 1-13.
RU2017140605A 2015-04-23 2016-04-22 Способ консервации клеток, тканей или органов посредством гипотермии RU2722044C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1553659A FR3035407B1 (fr) 2015-04-23 2015-04-23 Procede de conservation de cellules, tissus ou organes en hypothermie
FR1553659 2015-04-23
PCT/FR2016/050948 WO2016170281A1 (fr) 2015-04-23 2016-04-22 Procede de conservation de cellules, tissus ou organes en hypothermie

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017140605A RU2017140605A (ru) 2019-05-23
RU2017140605A3 RU2017140605A3 (ru) 2019-05-30
RU2722044C2 true RU2722044C2 (ru) 2020-05-26

Family

ID=53674114

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017140605A RU2722044C2 (ru) 2015-04-23 2016-04-22 Способ консервации клеток, тканей или органов посредством гипотермии

Country Status (9)

Country Link
US (1) US10660329B2 (ru)
EP (1) EP3285576B1 (ru)
CN (1) CN107872954B (ru)
CA (1) CA2983366A1 (ru)
ES (1) ES2813728T3 (ru)
FR (1) FR3035407B1 (ru)
HK (1) HK1246087A1 (ru)
RU (1) RU2722044C2 (ru)
WO (1) WO2016170281A1 (ru)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3040860B1 (fr) 2015-09-10 2020-05-15 Universite de Bordeaux Milieu de conservation injectable pour la conservation de cellules du sang placentaire, de la moelle osseuse et du sang peripherique
US11697799B2 (en) 2019-04-15 2023-07-11 Ossium Health, Inc. System and method for extraction and cryopreservation of bone marrow
EP4181675A4 (en) 2020-07-18 2024-04-24 Ossium Health Inc PERMEATION OF WHOLE VERTEBRAL BODY WITH CRYOPROTECTIVE USING VACUUM-ASSISTED DIFFUSION
EP4228406A1 (en) 2020-10-14 2023-08-23 Ossium Health, Inc. Systems and methods for extraction and cryopreservation of bone marrow
CN117279650A (zh) 2020-12-18 2023-12-22 奥瑟姆健康公司 细胞治疗方法
CN114600872A (zh) * 2022-04-13 2022-06-10 西安北光医学生物技术有限公司 一种细胞、组织或器官的抗损伤保存的方法及保存系统

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2079273C1 (ru) * 1989-07-27 1997-05-20 И.Джост Леонора Транспортабельный контейнер закрытой системы для хранения биологического материала
RU2310327C1 (ru) * 2006-03-24 2007-11-20 Владимир Николаевич Канюков Способ консервации донорских тканей для офтальмохирургии
US20080089947A1 (en) * 2006-08-18 2008-04-17 Knox Clayton D Calcium Influx Inhibitors in the Treatment of Ischemia
US20100050073A1 (en) * 2008-08-20 2010-02-25 Konica Minolta Business Technologies, Inc. Information processing program, information processing method, and information processing device
RU2482674C1 (ru) * 2011-11-28 2013-05-27 МБУЗ Городская клиническая больница №3 им. М.А. Подгорбунского (МБУЗ ГКБ №3) Способ консервации печени при трансплантации

Family Cites Families (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4904259A (en) 1988-04-29 1990-02-27 Samuel Itay Compositions and methods for repair of cartilage and bone
US5543316A (en) 1994-04-20 1996-08-06 Diacrin, Inc. Injectable culture medium for maintaining viability of myoblast cells
US6294383B1 (en) 1994-11-08 2001-09-25 The Mclean Hospital Corporation Porcine neural cells and their use in treatment of neurological deficits due to neurodegenerative diseases
JP2000507812A (ja) 1996-03-12 2000-06-27 ライフ テクノロジーズ，インコーポレイテッド 造血細胞培養栄養補充成分
AU6486096A (en) 1996-05-08 1997-11-26 Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Pharmaceutical compositions containing alpha-keto carboxylates
US6045990A (en) 1998-07-09 2000-04-04 Baust; John M. Inclusion of apoptotic regulators in solutions for cell storage at low temperature
US6153582A (en) 1998-11-05 2000-11-28 Bausch & Lomb Surgical, Inc. Defined serumfree medical solution for ophthalmology
JP5230042B2 (ja) 1999-06-02 2013-07-10 株式会社ビーエムジー 動物の細胞または臓器の保存剤およびその保存方法。
US6632666B2 (en) 2000-01-14 2003-10-14 Biolife Solutions, Inc. Normothermic, hypothermic and cryopreservation maintenance and storage of cells, tissues and organs in gel-based media
GB0001172D0 (en) 2000-01-20 2000-03-08 Res Del International Limited Physiological medium for perfusing, preserving and storing isolated cell tissue and organ samples
AU2002214443B2 (en) 2000-11-03 2005-12-15 Vitrolife Ab Evaluation and preservation solution
US20050053912A1 (en) * 2001-06-11 2005-03-10 Roth Mark B. Methods for inducing reversible stasis
US20030054331A1 (en) 2001-09-14 2003-03-20 Stemsource, Inc. Preservation of non embryonic cells from non hematopoietic tissues
CA2474141A1 (en) 2002-01-14 2003-07-24 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Novel mammalian multipotent stem cells and compositions, methods of preparation and methods of administration thereof
MXPA04007732A (es) 2002-02-13 2004-10-15 Anthrogenesis Corp Celulas madre similares a las embrionarias, derivadas de la placenta de mamiferos despues del parto y usos y metodos de tratamiento usando dichas celulas.
US20080292677A1 (en) 2004-12-09 2008-11-27 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Engineered lung tissue, hydrogel/somatic lung progenitor cell constructs to support tissue growth, and method for making and using same
US20050136125A1 (en) 2003-10-22 2005-06-23 Roth Mark B. Methods, compositions and devices for inducing stasis in cells, tissues, organs, and organisms
WO2005072523A2 (en) 2004-02-02 2005-08-11 I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. Biological material and methods and solutions for preservation thereof
JP2008501320A (ja) 2004-06-02 2008-01-24 イーエス・セル・インターナショナル・プライヴェート・リミテッド 細胞保存方法
CN2708316Y (zh) * 2004-06-21 2005-07-06 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 待移植器官体外保存试验平台
EP1809101B1 (en) 2004-11-12 2016-11-02 Organoflush B.V. Composition for cold preservation and perfusion of organs
US8900804B2 (en) 2004-11-22 2014-12-02 Cedars-Sinai Medical Center Methods and solutions for tissue preservation
WO2007015252A2 (en) 2005-08-03 2007-02-08 I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. Somatic cells for use in cell therapy
DE102005049226B4 (de) 2005-10-14 2007-08-02 Technische Universität München Probenahmesystem für fluide Proben
WO2007058929A2 (en) 2005-11-12 2007-05-24 Regenetech, Inc. Composition for reducing problems associated with sickle cell disease using low temperature storage
ES2672205T3 (es) 2005-12-21 2018-06-13 Université Catholique de Louvain Células madre hepáticas aisladas
CA2909053C (en) 2006-05-11 2021-02-09 Cord Blood Science Inc. Methods for collecting and using placenta cord blood stem cells
WO2008024194A2 (en) 2006-08-18 2008-02-28 Regenerx Biopharmaceuticals, Inc. Method of conserving and preparing tissue or cells for transfer, transplant, re-implantation, further study or the like
KR20080037883A (ko) 2006-10-27 2008-05-02 세원셀론텍(주) 메디컬 키트 및 이의 사용방법
CA2674795C (en) 2007-01-11 2016-08-23 University Of Pittsburgh Muscle derived cells for the treatment of urinary tract pathologies and methods of making and using the same
AU2008243302A1 (en) 2007-04-26 2008-11-06 Medinnova As Transplant storage
US8114668B2 (en) 2007-05-14 2012-02-14 Cardiac Pacemakers, Inc. Composition for cold storage of stem cells
WO2009121002A1 (en) 2008-03-27 2009-10-01 Biolife Solutions, Inc. Materials and methods for hypothermic collection of whole blood
JP2009247276A (ja) 2008-04-04 2009-10-29 Erii Kk 生体供給用、生体移植用、生体添加用、生体投与用の解凍器官若しくは組織または解凍細胞群とその製造方法及びそれらに用いる過冷却液並びに製造装置
WO2010050073A1 (ja) * 2008-10-31 2010-05-06 デンタルサポート株式会社 再生医療に利用する生体組織などの低酸素滅菌・保存・運搬・管理用システム
GB0822246D0 (en) 2008-12-05 2009-01-14 Reneuron Ltd Composition
US20130323708A1 (en) 2009-07-01 2013-12-05 Massachusetts Institute Of Technology Isolated adult cells, artificial organs, rehabilitated organs, research tools, organ encasements, organ perfusion systems, and methods for preparing and utilizing the same
WO2011037913A2 (en) 2009-09-24 2011-03-31 Emory University Methods for preventing oxidative stress injury of a tissue by a folate-tempol conjugate
EP2582788A4 (en) 2010-06-17 2014-03-19 Stemrd Inc SERUM-FREE CHEMICALLY DEFINED CELL CULTURE MEDIUM
US8367059B2 (en) 2010-07-15 2013-02-05 Florida State University Research Foundation, Inc. Materials and methods for cryopreserved bone constructs
JP2014508540A (ja) 2011-03-24 2014-04-10 ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ 正常ヒト管状卵巣上皮およびヒト管状卵巣腫瘍由来の細胞を培養するための組成物および方法
CN102754642B (zh) 2011-04-27 2014-04-16 张宁坤 一种原始间充质干细胞储存转运的方法
JP5938753B2 (ja) * 2011-06-09 2016-06-22 ライフライン サイエンティフィック インコーポレイテッドＬｉｆｅｌｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ． バイオマーカーと事象情報とを含む、臓器搬送及び／又は保管のためのデータレコード
CN102550542B (zh) 2011-08-09 2014-06-25 臻景生物技术（上海）有限公司 用于脂肪干细胞的无血清冻存液及脂肪干细胞库的建立
CN103103162B (zh) * 2011-11-15 2015-09-30 复旦大学附属华山医院 一种分离培养人脑膜瘤细胞的方法
FR2996413B1 (fr) 2012-10-10 2014-12-05 Maco Pharma Sa Procede pour conserver le sang placentaire
NL2010225C2 (en) 2013-02-01 2014-08-04 Conradus Ghosal Gho Composition and method for preserving, transporting and storing living biological materials.
FR3040860B1 (fr) 2015-09-10 2020-05-15 Universite de Bordeaux Milieu de conservation injectable pour la conservation de cellules du sang placentaire, de la moelle osseuse et du sang peripherique

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2079273C1 (ru) * 1989-07-27 1997-05-20 И.Джост Леонора Транспортабельный контейнер закрытой системы для хранения биологического материала
RU2310327C1 (ru) * 2006-03-24 2007-11-20 Владимир Николаевич Канюков Способ консервации донорских тканей для офтальмохирургии
US20080089947A1 (en) * 2006-08-18 2008-04-17 Knox Clayton D Calcium Influx Inhibitors in the Treatment of Ischemia
US20100050073A1 (en) * 2008-08-20 2010-02-25 Konica Minolta Business Technologies, Inc. Information processing program, information processing method, and information processing device
RU2482674C1 (ru) * 2011-11-28 2013-05-27 МБУЗ Городская клиническая больница №3 им. М.А. Подгорбунского (МБУЗ ГКБ №3) Способ консервации печени при трансплантации

Also Published As

Publication number Publication date
FR3035407B1 (fr) 2022-06-17
RU2017140605A3 (ru) 2019-05-30
CN107872954B (zh) 2021-02-19
ES2813728T3 (es) 2021-03-24
EP3285576A1 (fr) 2018-02-28
US10660329B2 (en) 2020-05-26
EP3285576B1 (fr) 2020-06-24
US20180116206A1 (en) 2018-05-03
WO2016170281A1 (fr) 2016-10-27
HK1246087A1 (zh) 2018-09-07
FR3035407A1 (fr) 2016-10-28
CA2983366A1 (fr) 2016-10-27
CN107872954A (zh) 2018-04-03
RU2017140605A (ru) 2019-05-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2722044C2 (ru) Способ консервации клеток, тканей или органов посредством гипотермии
US20200208104A1 (en) Cell Preservation Method for Pluripotent Stem Cells
Moon et al. Successful vitrification of human amnion-derived mesenchymal stem cells
Shivakumar et al. DMSO‐and serum‐free cryopreservation of Wharton's jelly tissue isolated from human umbilical cord
EP2885969B1 (en) Cryopreservation tools and methods
Seo et al. Cryopreservation of amniotic fluid-derived stem cells using natural cryoprotectants and low concentrations of dimethylsulfoxide
WO2008056779A1 (fr) Procédé destiné à la culture et au passage d&#39;une cellule souche embryonnaire de primate, et procédé destiné à induire la différenciation de la cellule souche embryonnaire
KR101321144B1 (ko) 줄기세포 초자화 동결보존액 및 이를 이용하는 줄기세포 초자화 동결보존방법
Di et al. Development and evaluation of a trehalose‐contained solution formula to preserve HUC‐MSCs at 4 C
Zavatti et al. Development of a novel method for amniotic fluid stem cell storage
Buchanan et al. Cryopreservation of human hematopoietic stem and progenitor cells loaded with trehalose: transient permeabilization via the adenosine triphosphate-dependent P2Z receptor channel
Zhang et al. Cryopreservation of human induced pluripotent stem cells by using a new CryoLogic vitrification method
Munévar et al. Evaluation of two human dental pulp stem cell cryopreservation methods
Zhu et al. Survivable potential of germ cells after trehalose cryopreservation of bovine testicular tissues
Eberle et al. Engineered MSCs from patient-specific iPS cells
WO2021040543A1 (es) Protocolo de criopreservacion para celulas espermatogoniales
Maghen et al. Human umbilical perivascular cells (HUCPVCs): a novel source of mesenchymal stromal-like (MSC) cells to support the regeneration of the testicular niche
Kaufman et al. Embryonic Stem Cells: Unique Potential to Treat Autoimmune Diseases
Canciello et al. Amniotic Membrane and Amniotic Epithelial Cell Culture
JP2022103137A (ja) 多能性幹細胞を含む細胞画分の製造方法
Mohammed Defining The Role Of Oxygen Tension In Human Pluripotent Stem Cell Fate Decisions
Espinha Bioprocess engineering of induced pluripotent stem cells for application in cell therapy and pre-clinical research
Kelley et al. Collection and Expansion of Stem Cells
Volkova Study of morphological characteristics of cryopreserved cell cultures of stromal origin
Kaufman et al. Embryonicmaintainedlines, of yet human retain stem indefinitely embryonic (ES) their cells ability in are stem culture pluripotent to cells form as provides undifferentiated any cells cell a that new type. can model The cell