RU2705721C1

RU2705721C1 - Кристалл соединения, обладающего jak1 ингибирующей активностью

Info

Publication number: RU2705721C1
Application number: RU2018134041A
Authority: RU
Inventors: Фуми ХИГУТИ
Original assignee: Ниппон Синяку Ко., Лтд.
Priority date: 2016-03-01
Filing date: 2017-02-28
Publication date: 2019-11-11
Also published as: KR102653231B1; WO2017150477A1; EP3424930B1; US20190048023A1; TWI712604B; JPWO2017150477A1; EP3424930A4; PL3424930T3; ES2844978T3; LT3424930T; SI3424930T1; HRP20210062T1; TW201731855A; CA3015464C; BR112018016523B1; CN108699082B; US10822350B2; CY1123607T1; EP3424930A1; BR112018016523A2

Abstract

Изобретение относится к органической химии и фармацевтике, а именно к моногидрату метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата, моногидрату метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата, моногидрату метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбаматтозилата и их кристаллам. Изобретение также относится к кристаллу этил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбамата, кристаллу N-(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида и кристаллу N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-диметилбутан-2-ил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида. Описаны также фармацевтические композиции, обладающие ингибирующей JAK1 активностью, на основе указанных соединений. Технический результат – получены новые соединения и фармацевтические композиции на их основе, которые могут найти применение в медицине при лечении заболеваний, таких как ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, псориаз, васкулит, бронхиальная астма, хроническая обструктивная болезнь легких, эозинофильный гайморит и носовой полип. 12 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл, 6 ил., 6 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

[0001]

Настоящее изобретение относится к новому соединению с ингибирующей JAK1 активностью.

Предпосылки создания изобретения

[0002]

Тирозинкиназы представляют собой группу ферментов, которые конкретно фосфорилируют остатки тирозина в белках. Данные ферменты играют существенную роль в пути передачи внутриклеточного сигнала и имеют отношение к самым разнообразным биологическим функциям, включая выживание клеток, дифференциацию, пролиферацию и секрецию. Семейство янус-киназы (также называемой как JAK) известно в силу того, что внутриклеточная тирозинкиназа вовлечена в цитокиновые сигналы. Семейство JAK включает четыре типа ферментов: JAK1, JAK2, JAK3 и тирозинкиназу 2 (также называемую как Tyk2). После того, как цитокин связывается с его соответствующим цитокиновым рецептором, JAK фосфорилируется, и затем фосфорилируется тирозиновый остаток данного рецептора. Затем преобразователь сигнала и активатор транскрипции (также называемый как "STAT"), который существует в клетках, будут ассоциироваться с фосфорилированным тирозиновым остатком рецептора, и тирозиновый остаток STAT фосфорилируется при помощи JAK. Фосфорилированные STAT формируют димер, и данный димер транслоцируется в ядро и активирует транскрипцию гена-мишени, что приводит к активации клеток. JAK/STAT пути являются ключевыми внутриклеточными путями передачи сигналов цитокинов в иммунокомпетентных клетках (непатентная литература 1). Около 40 типов передачи сигналов цитокинов опосредованы комбинацией четырех JAK и семью STAT, и нарушения продуцирования цитокинов и цитокиновых сигналов, как полагают, имеет тесное участие не только в различных иммунных и воспалительных заболеваниях, таких как аутоиммунные заболевания и аллергические заболевания, но и в заболеваниях, имеющих различные патологии, такие как рак. Соединения, подавляющие активацию этих JAK/STAT путей, привлекают внимание в качестве новых средств для лечения этих заболеваний, и, на самом деле, JAK ингибиторы уже были утверждены в Соединенных Штатах и Японии в качестве терапевтических средств для лечения миелофиброза, полицитемии вера и ревматоидного артрита. Далее, эффекты таких соединений ожидаются при лечении других аутоиммунных заболеваний (таких как псориатический артрит, ювенильный артрит, болезнь Каслмэна, системная красная волчанка, синдром Шегрена, рассеянный склероз, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Бехчета, миастения гравис, сахарный диабет типа 1, иммуноглобулин-нефропатия, аутоиммунные заболевания щитовидной железы, псориаз, склеродермия, волчаночный нефрит, сухость глаз, васкулит (такой как синдром Такаясу, гигантоклеточный артерит, микроскопический полиангиит, грануломатоз с полиангиитом и эозинофильный грануломатоз с полиангиитом), дерматомиозит, полимиозит и нейромиелит зрительного нерва), воспалительных заболеваний (таких как атопический дерматит, контактный дерматит, экзема, прурит, пищевые аллергии, бронхиальная астма, эозинофильная пневмония, хроническая обструктивная болезнь легких, аллергический ринит, хронический синусит, эозинофильный гайморит, носовой полип, аллергический конъюнктивит, остеоартрит, анкилозирующий спондилоартрит, болезнь Кавасаки, болезнь Бюргера, узелковый полиартерит и IgA васкулит), пролиферативных заболеваний (таких как солидные типы рака, рак крови, злокачественные опухоли лимфатических узлов, миелопролиферативные заболевания, множественная миелома, фиброз легких и эозинофилия), внезапной потери слуха, диабетической нефропатии, очаговой алопеции, отторжения трасплантата костного мозга или отторжения трасплантата органа. В настоящее время, проходят клинические испытания некоторых, перечисленных выше заболеваний в Европе, Японии и Соединенных Штатах Америки.

[0003]

В частности, различные биологические исследования продемонстрировали важную роль JAK1 в передаче сигнала многими цитокинами (см. непатентную литературу 2, 3 и 4), показывая, что ингибиторы JAK1 полезны при лечении заболеваний, таких как аутоиммунные заболевания: псориатический артрит (см. непатентную литературу 5), ювенильный артрит (см. непатентную литературу 6), болезнь Каслмэна (см. непатентную литературу 6), системная красная волчанка (см. непатентную литературу 7), синдром Шегрена (см. непатентную литературу 8), рассеянный склероз (см. непатентную литературу 9), воспалительное заболевание кишечника (см. непатентную литературу 10), болезнь Бехчета (см. непатентную литературу 11), миастения гравис (см. непатентную литературу 12), сахарный диабет типа 1 (см. непатентную литературу 9), иммуноглобулин-нефропатия (см. непатентную литературу 13), аутоиммунные заболевания щитовидной железы (см. непатентную литературу 14), псориаз (см. непатентную литературу 15), склеродермия (см. непатентную литературу 16), волчаночный нефрит (см. непатентную литературу 17), сухость глаз (см. непатентную литературу 18), васкулит (см. непатентную литературу 19, 20, 21, 22 и 23), дерматомиозит (см. непатентную литературу 24), полимиозит (см. непатентную литературу 24), нейромиелит зрительного нерва (см. непатентную литературу 25), воспалительных заболеваний: атопический дерматит (см. непатентную литературу 26), контактный дерматит (см. непатентную литературу 27), экзема (см. непатентную литературу 28), прурит (см. непатентную литературу 29), пищевые аллергии (см. непатентную литературу 30), бронхиальная астма (см. непатентную литературу 31), эозинофильная пневмония (см. непатентную литературу 32), хроническая обструктивная болезнь легких (см. непатентную литературу 33), аллергический ринит (см. непатентную литературу 31), хронический синусит (см. непатентную литературу 34), эозинофильный гайморит, носовой полип (см. непатентную литературу 35), аллергический конъюнктивит (см. непатентную литературу 36), остеоартрит (см. непатентную литературу 37), анкилозирующий спондилоартрит (см. непатентную литературу 6), болезнь Кавасаки (см. непатентную литературу 38), болезнь Бюргера (см. непатентную литературу 39), узелковый полиартерит (см. непатентную литературу 40), IgA васкулит (см. непатентную литературу 41), пролиферативные заболевания: солидные типы рака, рак крови, злокачественные опухоли лимфатических узлов, миелопролиферативные заболевания, множественная миелома (см. непатентную литературу 42, 43 и 44), внезапная потеря слуха (см. непатентную литературу 45), диабетическая нефропатия (см. непатентную литературу 46), очаговая алопеция (см. непатентную литературу 47), отторжение трасплантата костного мозга или отторжение трасплантата органа, и т.д. Например, в настоящее время проводятся следующие клинические испытания.

(1) Ревматоидный артрит (https://clinicaltrials.gov/ NCT01888874 и NCT02049138),

(2) болезнь Крона (https://clinicaltrials.gov/ NCT02365649),

(3) немелкоклеточный рак легких (https://clinicaltrils.gov/ NCT02257619),

(4) рак поджелудочной железы (https://clinicaltrials.gov/ NCT01858883),

(5) миелофиброз (https://clinicaltrials.gov/ NCT01633372) и

(6) псориаз (https://clinicaltrials.gov/ NCT02201524).

[0004]

Кроме того, среди сигнальных цитокинов, связанных с JAK1, ингибиторы для следующих цитокинов уже запущены в производство.

(1) IL-6 (также называемый как интерлейкин-6): терапевтические средства против ревматоидного артрита, ювенильного артрита и болезни Каслмэна (см. непатентную литературу 48, 49 и 50).

(2) IL-2: терапевтическое средство против острого отторжения после трансплантации почки (см. непатентную литературу 51).

Кроме того, находятся в процессе клинических испытаний следующие ингибиторы цитокина.

(3) IL-4 и IL-13: терапевтическое средство против бронхиальной астмы, атопического дерматита, эозинофильного гайморита, носового полипа и эозинофильного эзофагита (см. непатентную литературу 31).

(4) IL-13: терапевтическое средство против фиброза легких (см. https://clinicaltrials.gov/ NCT02036580).

(5) IL-5: терапевтическое средство против бронхиальной астмы, хронической обструктивной болезни легких, эозинофилии, эозинофильного грануломатоза с полиангиитом, эозинофильного эзофагита, эозинофильного гайморита/носового полипа и атопического дерматита (см. непатентную литературу 31 и непатентную литературу 52).

(6) IFNα (также называемый как интерферон-α): терапевтическое средство против системной красной волчанки (см. непатентную литературу 7).

(7) IL-31: терапевтическое средство против атопического дерматита (https://clinicaltrials.gov/ NCT01986933).

(8) TSLP (также называемый как тимусный стромальный лимфопоэтин): терапевтические средства против бронхиальной астмы (https://clinicaltrials.gov/ NCT02054130) и атопического дерматита (https://clinicaltrials.gov/ NCT00757042).

Таким образом, ингибирование сигнала JAK1 является предпочтительным средством для профилактики таких заболеваний, как аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания и пролиферативные заболевания.

[0005]

В качестве ингибитора JAK1 сообщалось о [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиридинах (см. патентную литературу 1 и 2), трициклических пиразинонах (см. патентную литературу 3), пирролопиримидинах (см. патентную литературу 4-7), фталазинах (см. патентную литературу 8), имидазопирролопиридинах (см. патентную литературу 9 и непатентную литературу 53), диамино-1,2,4-триазолах (см. непатентную литературу 54), пиразоло[1,5-a]пиридинах (см. патентную литературу 10), имидазо[1,2-a]пиридинах (см. патентную литературу 11 и 12), бензимидазолах (см. патентную литературу 13), 7-азаиндолах (см. патентную литературу 14). Однако, ни в одном из указанных документов не описаны соединения пиразоло[5,1-b][1,3]тиазола.

Документы предшествующего уровня

Непатентная литература

[0006]

[Непатентная литература 1] O'Shea et al., Immunity, 2012, 36, 542-550.

[Непатентная литература 2] O'Sullivan et al., Mol. Immunol., 2007, 44, 2497-2506.

[Непатентная литература 3] Quintás-Cardama et al., Nat. Rev. Drug Discov., 2011, 10, 127-140.

[Непатентная литература 4] Haan et al., Chem. Biol., 2011, 18, 314-323.

[Непатентная литература 5] Gan et al., BioDrugs, 2013, 27, 359-373.

[Непатентная литература 6] Mihara et al., Clin. Sci. (Lond.), 2012, 122, 143-159.

[Непатентная литература 7] Wallace et al., 71st Ann. Meet. Am. Coll. Rheumatol., 2007, Abs. 1315.

[Непатентная литература 8] Gliozzi et al., J. Autoimmun., 2013, 40, 122-133.

[Непатентная литература 9] Neurath et al., Cytokine Growth Factor Rev., 2011, 22, 83-89.

[Непатентная литература 10] Vuitton et al., Curr. Drug Targets, 2013, 14, 1385-1391.

[Непатентная литература 11] Akdeniz et al., Ann. Acad. Med. Singapore, 2004, 33, 596-599.

[Непатентная литература 12] Dalakas, Ann. N.Y. Acad. Sci., 2012, 1274, 1-8.

[Непатентная литература 13] Goto et al., Clin. Immunol., 2008, 126, 260-269.

[Непатентная литература 14] Nanba et al., Thyroid, 2009, 19, 495-501.

[Непатентная литература 15] Strober et al., Br. J. Dermatol., 2013, 169, 992-999.

[Непатентная литература 16] Christner et al., Curr. Opin. Rheumatol., 2004, 16, 746-752.

[Непатентная литература 17] Dong et al., Lupus, 2007, 16, 101-109.

[Непатентная литература 18] Lim et al., Cornea, 2015, 34, 248-252.

[Непатентная литература 19] Saadoun et al., Arthritis Rheumatol., 2015, 67, 1353-1360.

[Непатентная литература 20] Kieffer et al., Rev. Med. Interne., 2014, 35, 56-59.

[Непатентная литература 21] Takenaka et al., Clin. Rheumatol., 2014, 33, 287-289.

[Непатентная литература 22] Kobold et al., Clin. Exp. Rheumatol., 1999, 17, 433-440.

[Непатентная литература 23] Vaglio et al., Allergy, 2013, 68, 261-273.

[Непатентная литература 24] Gono et al., Rheumatology, 2014, 53, 2196-2203.

[Непатентная литература 25] Araki et al., Neurology, 2014, 82, 1302-1306.

[Непатентная литература 26] Bao et al., JAKSTAT, 2013, 2, e24137.

[Непатентная литература 27] Takanami-Ohnishi et al., J. Biol. Chem., 2002, 277, 37896-37903.

[Непатентная литература 28] Antoniu, Curr. Opin. Investig. Drugs, 2010, 11, 1286-1294.

[Непатентная литература 29] Sokołowska-Wojdyło et al., J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol., 2013, 27, 662-664.

[Непатентная литература 30] Brown et al., Eur. Food Res. Technol., 2012, 235, 971-980.

[Непатентная литература 31] Legrand et al., J. Allergy Clin. Immunol. Pract., 2015, 3, 167-174.

[Непатентная литература 32] Kita et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 1996, 153, 1437-1441.

[Непатентная литература 33] Southworth et al., Br. J. Pharmacol., 2012, 166, 2070-2083.

[Непатентная литература 34] Van Zele et al., Allergy, 2006, 61, 1280-1289.

[Непатентная литература 35] Nabavi et al., Allergol. Immunopathol. (Madr.), 2014, 42, 465-471.

[Непатентная литература 36] Sakai et al., Curr. Eye Res., 2013, 38, 825-834.

[Непатентная литература 37] Beekhuizen et al., Eur. Cell Mater., 2013, 26, 80-90.

[Непатентная литература 38] Abe, Nihon Rinsho, 2014, 72, 1548-1553.

[Непатентная литература 39] Slavov et al., Clin. Exp. Rheumatol., 2005, 23, 219-226.

[Непатентная литература 40] Kawakami et al., Acta. Derm. Venereol, 2012, 92, 322-323.

[Непатентная литература 41] Gülhan et al., Pediatr. Nephrol., 2015, 30, 1269-1277.

[Непатентная литература 42] Costa-Pereira et al., Am. J. Cancer Res., 2011, 1, 806-816.

[Непатентная литература 43] Vainchenker et al., Semin. Cell Dev. Biol., 2008, 19, 385-393.

[Непатентная литература 44] Li et al., Neoplasia, 2010, 12, 28-38.

[Непатентная литература 45] Masuda et al., Otol. Neurotol., 2012, 33, 1142-1150.

[Непатентная литература 46] Donate-Correa et al., J. Diabetes Res., 2015, 948417.

[Непатентная литература 47] Zhang et al., Arch. Dermatol. Res., 2015, 307, 319-331.

[Непатентная литература 48] Nishimoto et al., J. Rheumatol., 2003, 30, 1426-1435.

[Непатентная литература 49] Yokota et al., LANCET, 2008, 371, 998-1006.

[Непатентная литература 50] Nishimoto et al., Blood, 2000, 95, 56-61.

[Непатентная литература 51] Nashan et al., LANCET, 1997, 350, 1193-1198.

[Непатентная литература 52] Kouro et al., Int. Immunol., 2009, 21, 1303-1309.

[Непатентная литература 53] Kulagowski et al., Journal of Medicinal Chemistry, 2012, 55, 5901-5921.

[Непатентная литература 54] Malerich et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2010, 20, 7454-7457.

Патентная литература

[0007]

[Патентная литература 1] WO 2010/149769

[Патентная литература 2] WO 2010/010190

[Патентная литература 3] WO 2012/085176

[Патентная литература 4] WO 2009/114512

[Патентная литература 5] WO 2011/075334

[Патентная литература 6] WO 2012/022045

[Патентная литература 7] WO 2012/054364

[Патентная литература 8] WO 2012/037132

[Патентная литература 9] WO 2011/086053

[Патентная литература 10] WO 2011/101161

[Патентная литература 11] WO 2011/076419

[Патентная литература 12] JP 2011/136925

[Патентная литература 13] WO 2005/066156

[Патентная литература 14] WO 2007/084557

Сущность изобретения

Задача, решаемая изобретением

[0008]

Задачей настоящего изобретения является предоставление соединения с отличной ингибирующей JAK1 активностью.

Средства для решения данной задачи

[0009]

Настоящее изобретение основано на открытии настоящих авторов, что соединение, показанное ниже (здесь и далее называемое как "соединение настоящего изобретения"), имеет отличную ингибирующую JAK1 активность.

[0010]

Настоящее изобретение включает следующие объекты (I)-(III).

(I) Соединение, описанное в любом из следующих пунктов (1)-(6):

(1) Моногидрат метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата;

(2) Моногидрат метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата;

(3) Моногидрат метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбаматтозилата;

(4) Этил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбамат;

(5) N-(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамид и

(6) N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-диметилбутан-2-ил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамид.

[0011]

(II) Кристалл, описанный в любом их следующих пунктов (1)-(6):

(1) Кристалл моногидрата метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,6°, 13,3°, 17,3°, 20,0°, 20,4°, 21,3° и 22,3°;

(2) Кристалл моногидрата метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,6°, 13,3°, 17,3°, 20,0°, 20,4°, 21,3° и 22,3°;

(3) Кристалл моногидрата метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбаматтозилата, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,6°, 13,3°, 17,2°, 20,6° и 21,8°;

(4) Кристалл этил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбамата, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,0°, 13,8°, 15,0°, 16,0°, 19,4°, 20,9° и 21,9°;

(5) Кристалл N-(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 11,1°, 12,9°, 15,4°, 17,8°, 21,2° и 22,3°; и

(6) Кристалл N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-диметилбутан-2-ил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 10,6°, 13,0°, 14,6°, 17,4°, 17,7°, 21,3° и 21,7°.

[0012]

(III) Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, описанное в пункте (I) или (II), в качестве активного ингредиента.

[0013]

При указании угла дифракции (2θ) для дифракционного пика в рабочих примерах или в пунктах формулы изобретения, следует понимать, что указанный угол дифракции возможно имеет ошибку в диапазоне±0,2°, предпочтительно в диапазоне±0,1°.

[0014]

Кристалл по настоящему изобретению обладает высокой чистотой и прост в обращении. Поэтому, кристалл по настоящему изобретению полезен качестве источника при промышленном получении медицинских препаратов, т.е. JAK ингибиторов.

Краткое описание фигур

[0015]

Фиг.1 представляет собой порошковую рентгеновскую дифрактограмму кристалла моногидрата метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,6°, 13,3°, 15,2°, 17,3°, 18,3°, 19,1°, 20,0°, 20,4°, 21,3°, 22,3°, 23,8°, 26,8° и 27,4°. На вертикальной оси указана интенсивность пика (имп.с), и на горизонтальной оси указан угол дифракции (2θ [°]).

[0016]

Фиг.2 представляет собой порошковую рентгеновскую дифрактограмму кристалла моногидрата метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,6°, 13,3°, 15,2°, 17,3°, 18,3°, 19,2°, 20,0°, 20,4°, 21,3°, 22,3°, 23,8°, 26,8° и 27,4°. На вертикальной оси указана интенсивность пика (имп.с), и на горизонтальной оси указан угол дифракции (2θ [°]).

[0017]

Фиг.3 представляет собой порошковую рентгеновскую дифрактограмму кристалла моногидрата метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбаматтозилата, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,6°, 13,3°, 15,2°, 17,2°, 19,1°, 20,1°, 20,6°, 21,8°, 23,0°, 24,0°, 26,9° и 27,2°. На вертикальной оси указана интенсивность пика (имп.с), и на горизонтальной оси указан угол дифракции (2θ [°]).

[0018]

Фиг.4 представляет собой порошковую рентгеновскую дифрактограмму кристалла этил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбамата, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,0°, 13,8°, 15,0°, 16,0°, 17,7°, 18,6°, 19,4°, 19,6°, 20,2°, 20,9°, 21,9°, 22,7° и 24,1°. На вертикальной оси указана интенсивность пика (имп.с), и на горизонтальной оси указан угол дифракции (2θ [°]).

[0019]

Фиг.5 представляет собой порошковую рентгеновскую дифрактограмму кристалла N-(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 11,1°, 11,5°, 12,9°, 15,4°, 17,8°, 18,3°, 18,5°, 21,2°, 22,3°, 24,3° и 25,2°. На вертикальной оси указана интенсивность пика (имп.с), и на горизонтальной оси указан угол дифракции (2θ [°]).

[0020]

Фиг.6 представляет собой порошковую рентгеновскую дифрактограмму кристалла N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-диметилбутан-2-ил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 10,6°, 13,0°, 14,6°, 17,4°, 17,7°, 20,8°, 21,3°, 21,7°, 22,7°, 25,0° и 26,5°. На вертикальной оси указана интенсивность пика (имп.с), и на горизонтальной оси указан угол дифракции (2θ [°]).

[0021]

Термины, использованные в данном описании, описаны ниже.

[0022]

Термин "алкил" включает, например, алкил с прямой или разветвленной цепью, имеющей 1-10 атомов углерода, предпочтительно 1-8 атомов углерода, более предпочтительно 1-6 атомов углерода. В частности, данный термин может включать, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, втор-пентил, 1-этилпропил, 1,2-диметилпропил, трет-пентил, 2-метилбутил, изопентил, неопентил, н-гексил, втор-гексил, 1-этилбутил, изогексил, неогексил, 1,1-диметилбутил, тексил, 2-этилбутил, 1,2,2-триметилпропил, 2,2-диметилбутил, гептил, изогептил, октил и изооктил.

[0023]

Термин "циклоалкил" может включать, например, (моно-) - трициклическую насыщенную углеводородную группу, имеющую 3-10 атомов углерода. Моноциклический циклоалкил, имеющий 3-6 атомов углерода, является предпочтительным. В частности, данный термин может включать циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, бицикло[2.1.0]пентил, бицикло[2.2.1]гептил и бицикло[2.2.2]октил.

[0024]

Термин "арил" относится, например, к (моно-) -трициклической ароматической углеводородной группе, имеющей 6-14 атомов углерода. В частности, данный термин может включать фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, 1-антрил, 2-антрил, 9-антрил, 1-фенантрил, 2-фенантрил, 3-фенантрил, 4-фенантрил и 10-фенантрил. В частности, фенил является предпочтительным.

Способы осуществления изобретения

[0025]

Соединение настоящего изобретения может быть получено согласно, например, следующим методикам и примерам, как описано ниже, или способами, известными в данной области, с использованием соединения или полупродукта, который является доступным или может быть легко получен. В случае, когда исходное соединение имеет функциональную группу, которая может эффективно взаимодействовать в ходе процесса получения соединения настоящего изобретения, исходные вещества должны быть заранее защищены соответствующими защитными группами согласно известным методам. Защитная группа может быть удалена известным способом после завершения реакции.

[0026]

Схема 1

(где R¹ представляет собой алкил или циклоалкил, замещенный алкилом, R² представляет собой алкил или арил, необязательно замещенный алкилом, и R³ представляет собой алкил или циклоалкил, замещенный алкилом.)

[0027]

Стадия 1

На данной стадии, соединение 1 восстанавливают, с получением соединения 2.

Примеры восстанавливающих агентов для использования в данной реакции включают борогидрид натрия, триацетоксиборогидрид натрия и тому подобное. Такой восстанавливающий агент предпочтительно используют в количестве в диапазоне от 0,25 до 3 молярных эквивалентов соединения 1.

Растворитель для использования в данной реакции не ограничивается до тех пор, пока он не принимает участия в данной реакции, при этом его примеры включают простые эфиры, такие как тетрагидрофуран (здесь и далее называемое как "ТГФ"), диэтиловый эфир; спирты, такие как метанол и этанол; и их смешанные растворители.

Температура реакции может находиться в диапазоне от -78°C до 100°C, предпочтительно от -30°C до 20°C.

Время реакции варьируется в зависимости от температуры реакции и тому подобное, но, как правило, составляет интервал от 10 минут до 24 часов.

[0028]

Стадия 2

На данной стадии, соединение 2 подвергают дегидратации при помощи кислоты и затем подвергают реакции циклизации с соединением 3 с получением соединения 4.

Примеры кислоты для использования в данной реакции включают серную кислоту, метансульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту и тому подобное. Такую кислоту предпочтительно используют в количестве в диапазоне от 1 до 3 молярных эквивалентов соединения 2.

Растворитель для использования в данной реакции не ограничивается до тех пор, пока он не принимает участия в данной реакции, при этом его примеры включают спирты, такие как 2-пропанол и этанол; нитрилы, такие как ацетонитрил и пропионитрил; и их смешанные растворители.

Температура реакции может находиться в диапазоне от 0°C до 100°C, предпочтительно от 20°C до 70°C.

Время реакции варьируется в зависимости от температуры реакции и тому подобное, но, как правило, составляет интервал от 10 минут до 2 часов для дегидратации, и обычно составляет интервал от 30 минут до 5 часов для циклизации.

[0029]

Стадия 3

Данная стадия представляет собой конверсию нитрильного соединения 4 в соответствующее имидатное соединение 5 в присутствии основания, такого как алкоксид щелочного металла, или кислоты, такой как хлористый водород, в подходящем растворителе при перемешивании.

Примеры основания для использования в данной реакции включают алкоксиды, такие как метоксид натрия и этоксид натрия, и примеры кислоты включают газообразный хлористый водород. Хлористый водород может быть получен из хлорангидридов кислот, таких ацетилхлорид, и спиртов, таких как метанол и этанол. Такое основание и кислоту предпочтительно используют в количестве в диапазоне от 1 до 100 молярных эквивалентов соединения 4.

Растворитель для использования в данной реакции не ограничивается до тех пор, пока он не принимает участия в данной реакции, при этом его примеры включают спирты, такие как метанол, этанол; простые эфиры, такие как ТГФ; и их смешанные растворители.

Температура реакции может находиться в диапазоне от -20°C до 150°C, предпочтительно от 0°C до 100°C.

Время реакции варьируется в зависимости от температуры реакции и тому подобное, но, как правило, составляет интервал от 30 минут до 48 часов.

[0030]

Стадия 4

Данная стадия представляет собой конверсию имидатного соединения 5 в соответствующее амидиновое соединение 6 путем взаимодействия имидатного соединения 5 с аммиаком или аммонийной солью.

Примеры аммонийной соли для использования в данной реакции включают ацетат аммония, хлорид аммония и тому подобное. Такую аммонийную соль или аммиак предпочтительно используют в количестве в диапазоне от 1 до 10 молярных эквивалентов имидатного соединения 5.

При необходимости, данную реакцию осуществляют в присутствии основания. Примеры такого основания включают органические основания, такие как триэтиламин (здесь и далее называемый как "TEA"), диизопропилэтиламин (здесь и далее называемый как "DIPEA") и тому подобное.

Растворитель для использования в данной реакции не ограничивается до тех пор, пока он не принимает участия в данной реакции, при этом его примеры включают спирты, такие как метанол, этанол и тому подобное.

[0031]

Стадия 5

На данной стадии, амидиновое соединение 6 подвергают взаимодействию с диэтилоксалацетатом 7 или его солью в присутствии основания в соответствующем растворителе, с получением пиримидинового соединения 8.

Примеры основания для использования включают неорганические основания, такие как гидроксид натрия, гидроксид калия, карбонат натрия и тому подобное; алкоксиды, такие как метоксид натрия, этоксид натрия и тому подобное. Основание предпочтительно используют в количестве в диапазоне от 1 до 50 молярных эквивалентов амидинового соединения 6.

Растворитель для использования в данной реакции для использования в данной реакции не ограничивается до тех пор, пока он не принимает участия в данной реакции, при этом его примеры включают простые эфиры, такие как ТГФ, диметоксиэтан (здесь и далее называемый как "DME"); спирты, такие как метанол и этанол; вода; и их смешанные растворители.

Температура реакции может находиться в диапазоне от 0°C до 200°C, предпочтительно от 0°C до 100°C.

Время реакции варьируется в зависимости от температуры реакции и тому подобное, но, как правило, составляет интервал от 30 минут до 24 часов.

[0032]

Стадия 6

На данной стадии, карбоновую кислоту 8 подвергают реакции сочетания с аминным соединением 9 в соответствующем растворителе, с получением соединения 10. Альтернативно, активированное производное карбоновой кислоты 8 может быть подвергнуто взаимодействию с соединением 9, с получением соединения 10.

Примеры такого активированного производного включают галоидангидриды кислот, такие как хлорангидрид кислоты, смешанные ангидриды кислот, имидазолиды, активные амиды и тому подобное, как традиционно используется для реакции конденсации амидов.

В случае использования карбоновой кислоты 8, может быть использован конденсирующий агент, примеры которого включают 1,1'-карбонилдиимидазол (здесь и далее называемый как "CDI"), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (здесь и далее называемый как "EDCI"), гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (здесь и далее называемый как "HATU"), дифенилфосфорилазид и тому подобное. Подходящее количество конденсирующего агента для использования в данной реакции составляет 1-3 молярных эквивалентов карбоновой кислоты 8.

При необходимости, данную реакцию осуществляют в присутствии основания. Примеры такого основания включают органические основания, такие как TEA, DIPEA, пиридин и тому подобное.

Растворитель для использования в данной реакции не ограничивается до тех пор, пока он не принимает участия в данной реакции, при этом его примеры включают простые эфиры, такие как ТГФ и DME; амиды, такие как диметилформамид (здесь и далее называемый как "ДМФА"), N-метилпирролидон (здесь и далее называемый как "NMP"), нитрилы, такие как ацетонитрил и пропионитрил, и их смешанные растворители.

Температура реакции может находиться в диапазоне от -78°C до 200°C, предпочтительно от -20°C до 50°C.

[0033]

Стадия 7

На данной стадии, соединение 10 подвергают взаимодействию с сульфонилхлоридом 11 в соответствующем растворителе, с получением соединения 12.

Примеры сульфонилхлорида 11 для использования включают метансульфонилхлорид, п-толуолсульфонилхлорид, бензолсульфонилхлорид и тому подобное. Количество сульфонилхлорида 11 для использования предпочтительно составляет 1-3 молярных эквивалентов соединения 10.

Растворитель для использования в данной реакции не ограничивается до тех пор, пока он не принимает участия в данной реакции, при этом его примеры включают простые эфиры, такие как ТГФ и DME; нитрилы, такие как ацетонитрил и пропионитрил; амиды, такие как ДМФА и NMP; и их смешанные растворители.

Температура реакции может находиться в диапазоне от -20°C до 200°C, предпочтительно от 0°C до 100°C.

[0034]

Стадия 8

На данной стадии, соединение 12 подвергают взаимодействию с аминным соединением 13 в соответствующем растворителе, с получением соединения 14.

Подходящее количество аминного соединения 13 для использования в данной реакции составляет 1-10 молярных эквивалентов соединения 12.

При необходимости, данную реакцию осуществляют в присутствии основания. Примеры такого основания включают органические основания, такие как TEA, DIPEA, пиридин; неорганические основания, такие как гидроксид натрия, бикарбонат натрия, карбонат калия и тому подобное.

Растворитель для использования в данной реакции не ограничивается до тех пор, пока он не принимает участия в данной реакции, при этом его примеры включают простые эфиры, такие как ТГФ и DME; нитрилы, такие как ацетонитрил и пропионитрил; амиды, такие как ДМФА и NMP; спирты, такие как этанол, изопропиловый спирт; и их смешанные растворители.

Температура реакции может находиться в диапазоне от 0°C до 200°C, предпочтительно от 20°C до 150°C. Данную реакцию осуществляют с использованием микроволн и/или в герметичных условиях, при необходимости.

[0035]

Соединение настоящего изобретения, которое является моногидратом тозилата, может быть получено путем добавления моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты к раствору свободного основания данного соединения.

[0036]

Соединение настоящего изобретения обладает ингибирующей JAK1 активностью, как показано в следующих примерах тестирования. Далее, соединение настоящего изобретения также проявляет противовоспалительное, иммунодепрессивное и антипролиферативное воздействие и т.д., основанные на его ингибирующей JAK1 активности.

[0037]

Соответственно, соединение настоящего изобретения может быть использовано в качестве профилактического или терапевтического средства, например, против заболеваний, связанных с JAK1, а также заболеваний, на которые ожидается воздействие данного соединения с точки зрения его противовоспалительного, иммунодепрессивного и антипролиферативного эффектов, и т.д.

[0038]

Примеры конкретных заболеваний, против которых соединение настоящего изобретения может применяться, включают аутоиммунные заболевания (такие как ревматоидный артрит, псориатический артрит, ювенильный артрит, болезнь Каслмэна, системная красная волчанка, синдром Шегрена, рассеянный склероз, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Бехчета, миастения гравис, сахарный диабет типа 1, иммуноглобулин-нефропатия, аутоиммунные заболевания щитовидной железы, псориаз, склеродермия, волчаночный нефрит, сухость глаз, васкулит (например, синдром Такаясу, гигантоклеточный артерит, микроскопический полиангиит, грануломатоз с полиангиитом и эозинофильный грануломатоз с полиангиитом), дерматомиозит и полимиозит, и нейромиелит зрительного нерва), воспалительные заболевания (такие как, атопический дерматит, контактный дерматит, экзема, прурит, пищевые аллергии, бронхиальная астма, эозинофильная пневмония, хроническая обструктивная болезнь легких, аллергический ринит, хронический синусит, эозинофильный гайморит, носовой полип, аллергический конъюнктивит, остеоартрит, анкилозирующий спондилоартрит, болезнь Кавасаки, болезнь Бюргера, узелковый полиартерит и IgA васкулит), пролиферативные заболевания (такие как солидные типы рака, рак крови, злокачественные опухоли лимфатических узлов, миелопролиферативные заболевания, множественная миелома, фиброз легких и эозинофилия), внезапную потерю слуха, диабетическую нефропатию, очаговую алопецию, отторжение трасплантата костного мозга или отторжение трасплантата органа.

[0039]

Соединение настоящего изобретения может быть введено в качестве медицинского препарата млекопитающим, включая человека, как таковое или в виде фармацевтической композиции, содержащей такое количество, как, например, 0,001%-99,5%, предпочтительно 0,1%-90%, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми нетоксичными и инертными носителями.

[0040]

Носитель для использования может быть один или выбран из нескольких твердых, полутвердых или жидких разбавителей, наполнителей и других добавок для фармацевтического формулирования. Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может вводиться в единичной дозированной форме. Фармацевтическая композиция может вводиться путем интерстициального, перорального, внутривенного, местного (например, трансдермальным, глазной инстилляцией, внутрибрюшинным или внутригрудным введением) или трансректального введения. Данная композиция должна вводиться в лекарственной форме, подходящей для этих методов введения.

[0041]

Доза данного соединения должна быть скорректирована с учетом состояний пациента, таких как возраст, масса тела и подвергаемое лечению заболевание, и стадии заболевания, пути введения и соединения, которое вводится, и т.д. В случае перорального введения взрослому, обычная дневная доза соединения настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемой соли может составлять от 0,01 мг до 5 г, и предпочтительно от 1 мг до 500 мг. В некоторых случаях, может быть достаточна пониженная доза, или наоборот, может потребоваться повышение дозы. В целом, дозу дают один раз в день или несколько раз в день в виде разделенной на части, или в случае внутривенного введения, лекарственный препарат может быть введен болюсной инъекцией или непрерывным введением в течение 24 часов.

Примеры

[0042]

Настоящее изобретение описано более подробно со ссылкой на следующие примеры, примеры тестирования и пример композиций, которые не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

[0043]

Порошковую рентгеновскую дифрактометрию определяли с использованием Rigaku Corporation's SmartLab (цель: Cu, напряжение: 45 кВ, ток: 200 мА, скорость сканирования: 47,3 градус/мин).

[0044]

Масс-спектрометрию определяли с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии. В качестве метода ионизации использовали метод ионизации с электронным распылением. Измерения масс-спектрометрии показаны в виде m/z.

[0045]

Условия измерения для высокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии были следующими.

Анализатор: система ACQUITY UPLC MS/PDA (Waters)

Масс-спектрометр: детектор Waters 3100 MS

Диодно-матричный детектор: детектор ACQUITY PDA (УФ волны детектирования: 210-400 нм)

Колонка: Acquity BEH C₁₈, 1,7 мкМ, 2,1 × 50 мм

Скорость потока: 0,5 мл/мин

Температура колонки: 40°C

Растворитель:

Растворитель A: 0,1% муравьиная кислота/H₂O (об./об.; то же далее)

Растворитель B: 0,1% муравьиная кислота/ацетонитрил

[0046]

Оптическую чистоту определяли с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в следующих условиях измерения.

Анализатор: SHIMADZU LC-10AS (SHIMADZU)

Детектор: SPD-10A (SHIMADZU, УФ волны детектирования: 254 нм)

Колонка: Chiralcel AD-H, Φ4,6 мм × 250 мм (Daicel)

Скорость потока: 1 мл/мин

Температура колонки: 40°C

Растворитель: Гексан/Этанол/Диэтиламин=850/150/1 (об./об./об.)

[0047]

Аббревиатуры, использованные в примерах, являются следующими.

ДМФА: диметилформамид

ДМСО: диметилсульфоксид

DIPEA: N,N-диизопропилэтиламин

TEA: триэтиламин

ТГФ: тетрагидрофуран

ТФУК: трифторуксусная кислота

NMP: N-метилпирролидон

HATU: гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония

МС: масс-спектрометрия

ЖХМС: высокоэффективная жидкостная хроматографии-масс-спектрометрия

ESI: ионизация с электрораспылением

M: молярная концентрация

об./об.: объем/объем

[0048]

Ссылочный пример 1: Пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-карбонитрил

Стадия 1: Получение 2-(тиазол-2-ил)ацетонитрила

При охлаждении льдом, 60% гидрид натрия (7,9 г) порциями добавляли к раствору трет-бутилцианоацетата (28 г) в ДМФА (100 мл), и полученную смесь перемешивали в течение 10 минут. К полученной смеси добавляли 2-бромтиазол (25 г), с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 15 минут и затем при 120°C в течение 2 часов. К полученной смеси добавляли 1M водную хлористоводородную кислоту, с последующей экстракцией этилацетатом. Органический слой промывали водой, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаток промывали гексаном и затем суспендировали в толуоле (200 мл). К полученной суспензии добавляли моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (2,0 г), и полученную смесь перемешивали при 105°C в течение 2 часов. Смесь разбавляли этилацетатом и промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (7,0 г).

МС (m/z): 125 [M+H]⁺

Стадия 2: Получение пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-карбонитрила

При охлаждении льдом, к раствору 2-(тиазол-2-ил)ацетонитрила (5 г), полученного на стадии 1, в дихлорметане (50 мл) добавляли раствор O-(мезитилсульфонил)гидроксиамина (полученного, как описано в Organic Process Research & Development, 2009, 13, 263-267) в дихлорметане (20 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, и к полученной смеси добавляли диэтиловый эфир при охлаждении льдом. Выпавшее в осадок твердое вещество отделяли фильтрованием, и полученное таким образом твердое вещество суспендировали в триэтилортоформиате (35 мл). Полученную смесь перемешивали при 120°C в течение 1 часа и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (2,5 г).

МС (m/z): 150 [M+H]⁺

[0049]

Ссылочный пример 2: 6-Гидрокси-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновая кислота

К раствору пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-карбонитрила (6 г), полученного в ссылочном примере 1, в метаноле (150 мл) добавляли 28% метоксид натрия в метаноле (24,6 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли хлорид аммония (12,9 г), и полученную смесь перемешивали при 90°C в течение 1 часа. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли диэтилоксалацетат натрия (33,8 г) в 5M водном гидроксиде натрия (200 мл), и полученную смесь перемешивали при 100°C в течение ночи. Полученную смесь подкисляли конц. хлористоводородной кислотой, и выпавшее в осадок твердое вещество отделяли фильтрованием. Полученное таким образом твердое вещество растворяли в 5M водном растворе гидроксида калия и промывали хлороформом. Водный слой подкисляли конц. хлористоводородной кислотой, и выпавшее в осадок твердое вещество отделяли фильтрованием и сушили, с получением указанного в заголовке соединения (10 г).

МС (m/z): 263 [M+H]⁺

[0050]

Ссылочный пример 3: Метил 6-хлор-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоксилат

6-Гидрокси-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновую кислоту (1,4 г), полученную в ссылочном примере 2, суспендировали в оксихлориде фосфора (20 мл). Добавляли диэтиланилин (1,6 г), и полученную смесь перемешивали при 130°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и добавляли метанол (100 мл) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали в течение 10 минут. Смесь разбавляли хлороформом и промывали водой. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (910 мг).

МС (m/z): 297 [M+H]⁺

[0051]

Ссылочный пример 4: Метил(1-{[6-хлор-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбамат

6-Гидрокси-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновую кислоту (820 мг), полученную в ссылочном примере 2, суспендировали в оксихлориде фосфора (5,0 мл). Добавляли диэтиланилин (0,47 г), и полученную смесь перемешивали при 110°C в течение 2 часов. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении и растворяли в дихлорметане (40 мл) при охлаждении льдом. Добавляли DIPEA (5,4 мл) и метилпиперидин-4-илкарбамат (594 мг), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Смесь разбавляли хлороформом и промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (910 мг).

МС (m/z): 421, 423 [M+H]⁺

[0052]

Ссылочный пример 5: N-(1-{[6-хлор-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали, как описано в ссылочном примере 4, из 6-гидрокси-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновой кислоты (8 г), полученной в ссылочном примере 2, с использованием N-(пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида (5,65 г, полученного, как описано в Journal of Medicinal Chemistry, 2010, 53, 6386-6397), вместо метилпиперидин-4-илкарбамата, с получением указанного в заголовке соединения (6,65 г).

МС (m/z): 431, 433 [M+H]⁺

[0053]

Ссылочный пример 6: 6-{[(1S)-1-Циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновая кислота

Стадия 1: Получение метил 6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоксилата

К раствору метил 6-хлор-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоксилата, полученного в ссылочном примере 3 (1,0 г), в ДМФА (10 мл) добавляли DIPEA (1,8 мл) и (1S)-1-циклопропилэтанамин (320 мг), и полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 3 часов. Полученную смесь очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (1,1 г).

МС (m/z): 344 [M+H]⁺

Стадия 2: Получение 6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновой кислоты

К раствору метил 6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоксилата, полученного на стадии 1 (600 мг), в ТГФ (15 мл) и воде (5 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (100 мг), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Полученную смесь подкисляли 1М хлористоводородной кислотой, с последующей отгонкой ТГФ при пониженном давлении, и экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (470 мг).

МС (m/z): 330 [M+H]⁺

[0054]

Ссылочный пример 7: 3-Амино-4-гидрокси-1,3-тиазолидин-2-тион

Борогидрид натрия (19,1 г) добавляли к ТГФ (750 мл), и порциями добавляли суспензию N-аминороданина (250 г) в ТГФ (500 мл) при ниже 5°C. После перемешивания в течение 30 минут при ниже 5°C, по каплям добавляли метанол (111 мл), и полученную смесь перемешивали в течение 2 часов. Конц. хлористоводородную кислоту (44 мл) разбавляли водой (500 мл) и по каплям добавляли к полученной смеси, затем по каплям добавляли воду (1000 мл), и полученную смесь перемешивали в течение 1 часа при ниже 10°C. Выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывали, промывали водой (600 мл) и сушили при 40°C при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (209,1 г).

МС (m/z): 151 [M+H]⁺

[0055]

Ссылочный пример 8: 2-хлор-2-цианоэтен-1-олат натрия

К суспензии метоксида натрия (14,3 г) в циклопентилметиловом эфире (300 мл) по каплям добавляли метилформиат (17,5 г) при ниже 20°C и затем хлорацетонитрил (20 г), и полученную смесь перемешивали в течение 3 часов при ниже 30°C. После завершения реакции, выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывали, промывали циклопентилметиловым эфиром (40 мл) и сушили при 40°C при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (29,2 г).

[0056]

Ссылочный пример 9: Гидрохлорид метилпиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-карбоксимидата

К суспензии 3-амино-4-гидрокси-1,3-тиазолидин-2-тиона (50 г) в 2-пропаноле (250 мл) добавляли конц. серную кислоту (48,97 г), и полученную смесь перемешивали при нагревании при 80°C в течение 1 часа. После охлаждения до ниже 40°C, добавляли ацетонитрил (500 мл) и 2-хлор-2-цианоэтен-1-олат натрия (62,65 г), полученный в ссылочном примере 8, и полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 4 часов. После охлаждения, добавляли активированный уголь (10 г), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Полученную смесь фильтровали для удаления нерастворившихся веществ и промывали три раза ацетонитрилом (100 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и затем три раза азеотропно перегоняли с метанолом (100 мл) для удаления ацетонитрила. Метанол (150 мл) и ТГФ (150 мл) добавляли к концентрату, который затем добавляли к раствору ацетилхлорида (209 г) в метаноле (350 мл) при ниже 20°C. После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре, добавляли ТГФ (350 мл), и полученную смесь перемешивали при ниже 10°C в течение 1 часа. Выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывали, промывали ТГФ (300 мл) и сушили при 50°C при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (45,5 г).

МС (m/z): 182 [M+H]⁺

[0057]

Ссылочный пример 10: Ацетатная соль пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-карбоксимидамида

К суспензии гидрохлорида метилпиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-карбоксимидата (200 г) в метаноле (1000 мл) добавляли ацетат аммония (85,15 г) и затем DIPEA (142,82 г), и полученную смесь перемешивали при 65°C в течение 1 часа. После завершения реакции, смесь охлаждали, и по каплям добавляли ацетонитрил (2000 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 1 часа при ниже 10°C, выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывали, промывали ацетонитрилом (400 мл) и сушили при 50°C при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (185,12 г).

Элементный анализ для C₆H₆N₄S•C₂H₄O₂

Вычислено (%) C: 42,47, H: 4,46, N: 24,76

Найдено (%) C: 42,18, H: 4,25, N: 24,41

[0058]

Ссылочный пример 11: 6-Гидрокси-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновая кислота

К водному раствору (900 мл) гидроксида натрия (39,08 г) добавляли диэтилоксалацетат натрия (130,65 г) при ниже 10°C, и полученную смесь перемешивали в течение 1 часа. К смеси добавляли пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-карбоксимидамидацетат (90 г), и полученную смесь перемешивали при нагревании при 50°C в течение 3 часов. После охлаждения до ниже 30°C, полученную смесь подкисляли до pH 1-2 конц. хлористоводородной кислотой (138 г), и затем перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшие в осадок кристаллы отделяли фильтрованием, промывали водой (360 мл) и сушили при 60°C, с получением указанного в заголовке соединения (107,17 г).

МС (m/z): 263 [M+H]⁺

[0059]

Ссылочный пример 12: Метил{1-[6-гидрокси-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбонил]пиперидин-4-ил}карбамат

К суспензии 6-гидрокси-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновой кислоты (238 г) в ДМФА (714 мл) добавляли TEA (275,51 г), и полученную смесь перемешивали при 50°C в течение 30 минут. После охлаждения до ниже 20°C, добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (323,76 г). После перемешивания в течение 30 минут, добавляли метилпиперидин-4-илкарбаматтозилат (449,79 г), и полученную смесь перемешивали в течение 30 минут. После завершения реакции, по каплям добавляли ацетонитрил (3570 мл) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывали, промывали ацетонитрилом (480 мл) и сушили при 60°C при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (377,79 г).

МС (m/z): 403 [M+H]⁺

[0060]

Ссылочный пример 13: 6-{4-[(Метоксикарбонил)амино]пиперидин-1-карбонил}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил 4-метилбензол-1-сульфонат

К суспензии метил{1-[6-гидрокси-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбонил]пиперидин-4-ил}карбамата (365 г) в ацетонитриле (1825 мл) добавляли TEA (275,33 г) и затем 4-толуолсульфонилхлорид (259,36 г), и полученную смесь перемешивали при нагревании при 50°C в течение 1 часа. После завершения реакции, смесь охлаждали, и по каплям добавляли воду (3650 мл) при комнатной температуре. После перемешивания смеси в течение 1 часа при ниже 10°C, выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывали, промывали водой (730 мл) и сушили при 60°C при пониженном давлении, с получением указанного в заголовке соединения (442,08 г).

МС (m/z): 557 [M+H]⁺

[0061]

Пример 1: Моногидрат метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата

Стадия 1: Получение метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбамата

К раствору 6-{4-[(метоксикарбонил)амино]пиперидин-1-карбонил}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил 4-метилбензол-1-сульфоната, полученного в ссылочном примере 13 (1,0 г), в ацетонитриле (7,0 мл) добавляли DIPEA (0,67 г) и (2S)-бутан-2-амин (0,4 г), и полученную смесь герметизировали и нагревали при перемешивании при 100°C в течение 2 часов. После завершения реакции, смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой (30 мл) и насыщенным раствором соли (30 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом магния, концентрировали при пониженном давлении, и очищали колоночной хроматографией, с получением указанного в заголовке соединения (650 мг). Оптическая чистота полученного таким образом указанного в заголовке соединения равнялась или была выше, чем 99%, как было подтверждено высокоэффективной жидкостной хроматографией (время удерживания: 35,7 минут).

МС (m/z): 458 [M+H]⁺

Стадия 2: Получение моногидрата метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата

К метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбамату, полученному на стадии 1 примера 1 (202 мг), добавляли ацетонитрил (5 мл), и полученную смесь нагревали при 50°C. Добавляли моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (83 мг), и полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшие в осадок кристаллы отделяли фильтрованием и сушили при пониженном давлении, с получением кристаллов указанного в заголовке соединения (210 мг). Спектр порошковой дифракции рентгеновских лучей показан на фиг.1. Элементный анализ показал, что полученный таким образом кристалл представляет собой моногидрат.

Элементный анализ для C₂₁H₂₇N₇O₃S•C₇H₈O₃S•1,0H₂O

Вычислено (%) C: 51,92, H: 5,76, N: 15,14

Найдено (%) C: 51,54, H: 5,92, N: 15,03

[0062]

Пример 2: Моногидрат метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата

Стадия 1: Получение метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбамата

К раствору 6-{4-[(метоксикарбонил)амино]пиперидин-1-карбонил}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил 4-метилбензол-1-сульфоната, полученного в ссылочном примере 13 (1,5 г), в ацетонитриле (10 мл) добавляли DIPEA (1,0 г) и (2R)-бутан-2-амин (0,59 г), и полученную смесь герметизировали и нагревали при перемешивании при 100°C в течение 2 часов. После завершения реакции, смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой (50 мл) и насыщенным раствором соли (30 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом магния, концентрировали при пониженном давлении, и очищали колоночной хроматографией, с получением указанного в заголовке соединения (0,93 г). Оптическая чистота полученного таким образом указанного в заголовке соединения равнялась или была выше, чем 99%, как было подтверждено высокоэффективной жидкостной хроматографией (время удерживания: 29,1 минут).

МС (m/z): 458 [M+H]⁺

Стадия 2: Получение моногидрата метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата

К метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбамату, полученному на стадии 1 примера 2 (140 мг), добавляли ацетонитрил (3,5 мл), и полученную смесь нагревали при 50°C. Добавляли моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (58 мг), и полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшие в осадок кристаллы отделяли фильтрованием и сушили при пониженном давлении, с получением кристаллов указанного в заголовке соединения (152 мг). Спектр порошковой дифракции рентгеновских лучей показан на фиг.2. Элементный анализ показал, что полученный таким образом кристалл представляет собой моногидрат.

Вычислено (%) C: 51,92, H: 5,76, N: 15,14

Найдено (%) C: 51,72, H: 5,84, N: 15,14

[0063]

Пример 3: Моногидрат метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбаматтозилата

Стадия 1: Получение метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбамата

К раствору 6-{4-[(метоксикарбонил)амино]пиперидин-1-карбонил}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил 4-метилбензол-1-сульфона, полученного в ссылочном примере 13 (1,0 г), в ацетонитриле (7,0 мл) добавляли DIPEA (0,69 г) и (1S)-1-циклопропилэтанамин (460 мг), и полученную смесь герметизировали и нагревали при перемешивании при 100°C в течение 2 часов. После завершения реакции, смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой (50 мл) и насыщенным раствором соли (30 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом магния, концентрировали при пониженном давлении, и очищали колоночной хроматографией, с получением указанного в заголовке соединения (720 мг).

Стадия 2: Получение моногидрата метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбаматтозилата

К метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбамату, полученному на стадии 1 примера 3 (201 мг), добавляли ацетонитрил (5 мл), и полученную смесь нагревали при 50°C. Добавляли моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (81 мг), и полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Выпавшие в осадок кристаллы отделяли фильтрованием и сушили при пониженном давлении, с получением кристаллов указанного в заголовке соединения (237 мг). Спектр порошковой дифракции рентгеновских лучей показан на фиг.3. Элементный анализ показал, что полученный таким образом кристалл представляет собой моногидрат.

Элементный анализ для C₂₂H₂₇N₇O₃S•C₇H₈O₃S•1,0H₂O

Вычислено (%) C: 52,79, H: 5,65, N: 14,86

Найдено (%) C: 52,72, H: 5,54, N: 14,82

Конкретное оптическое вращение [α]_D ²⁵=-44,4 (c=1,00, ДМСО)

[0064]

Пример 4: Этил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил] карбонил}пиперидин-4-ил)карбамат

К раствору 6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновой кислоты, полученной в ссылочном примере 6 (640 мг), в ДМФА (5,0 мл) добавляли этилпиперидин-4-илкарбамат (310 мг, полученный, как описано в US4918073), DIPEA (730 мкл) и HATU (1,1 г), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (410 мг). К указанному в заголовке соединению (350 мг) добавляли этилацетат (7 мл), и полученную смесь нагревали для растворения соединения и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Выпавшие в осадок кристаллы отделяли фильтрованием и сушили при пониженном давлении, с получением кристаллов указанного в заголовке соединения (280 мг). Спектр порошковой дифракции рентгеновских лучей показан на фиг.4.

МС (m/z): 484 [M+H]⁺

Элементный анализ для C₂₃H₂₉N₇O₃S

Вычислено (%) C: 57,12, H: 6,04, N: 20,27

Найдено (%) C: 56,81, H: 6,12, N: 20,28

Конкретное оптическое вращение [α]_D ²⁵=-44,2 (c=1,00, ДМСО)

[0065]

Пример 5: N-(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамид

К раствору 6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-карбоновой кислоты, полученной в ссылочном примере 6 (350 мг), в ДМФА (8,0 мл) добавляли N-(пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамид (268 мг), DIPEA (552 мкл) и HATU (606 мг), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Полученную смесь очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (410 мг). К указанному в заголовке соединению (350 мг) добавляли этилацетат (7 мл), и полученную смесь нагревали для растворения соединения и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Выпавшие в осадок кристаллы отделяли фильтрованием и сушили при пониженном давлении, с получением кристаллов указанного в заголовке соединения (280 мг). Спектр порошковой дифракции рентгеновских лучей показан на фиг.5.

Элементный анализ для C₂₄H₂₉N₇O₂S

Вычислено (%) C: 60,12, H: 6,09, N: 20,44

Найдено (%) C: 59,89, H: 6,37, N: 20,22

МС (m/z): 480 [M+H]⁺

Конкретное оптическое вращение [α]_D ²⁵=-45,2 (c=1,00, ДМСО)

[0066]

Пример 6: N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-диметилбутан-2-ил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамид

В атмосфере аргона к раствору N-(1-{[6-хлор-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида, полученного в ссылочном примере 5 (550 мг), в трет-бутаноле (20 мл) добавляли TEA (534 мкл) и (2R)-3,3-диметилбутан-2-амин (258 мг), и полученную смесь перемешивали при 90°C в течение ночи. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с получением указанного в заголовке соединения (570 мг). К указанному в заголовке соединению (100 мг) добавляли этилацетат (2 мл), и полученную смесь нагревали для растворения соединения и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Выпавшие в осадок кристаллы отделяли фильтрованием и сушили при пониженном давлении, с получением кристаллов указанного в заголовке соединения (70 мг). Спектр порошковой дифракции рентгеновских лучей показан на фиг.6.

Элементный анализ для C₂₅H₃₃N₇O₂S

Вычислено (%) C: 60,58, H: 6,71, N: 19,78

Найдено (%) C: 60,20, H: 6,96, N: 19,53

МС (m/z): 496 [M+H]⁺

Конкретное оптическое вращение [α]_D ²⁵=+14,0 (c=1,00, ДМСО)

[0067]

Пример тестирования 1: Ингибирующий эффект на тирозинкиназу JAK

1. Получение тестируемого соединения

Тестируемое соединение растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до 10 мМ и дополнительно разводили ДМСО до концентраций 1000, 100, 10, 1, 0,1 и 0,01 мкМ, соответственно. Для JAK1 данные растворы тестируемого соединения использовали в шести концентрациях 10 мМ, 1000 мкМ, 100 мкМ, 10 мкМ, 1 мкМ и 0,1 мкМ. Для JAK2 и JAK3 растворы тестируемого соединения использовали в шести концентрациях 1000 мкМ, 100 мкМ, 10 мкМ, 1 мкМ, 0,1 мкМ и 0,01 мкМ. Растворы тестируемых соединений далее 20-кратно разводили аналитическим буфером для получения раствора пробы. В качестве аналитического буфера использовали 15 мМ Трис-HCl (pH7,5), 0,01% (об./об.) Tween-20 и 1 мМ дитиотреитол. ДМСО 20-кратно разводили аналитическим буфером и использовали в качестве отрицательного контроля.

2. Ингибирующая активность JAK тирозинкиназы в присутствии 1 мМ ATP

Данную активность определяли при помощи анализа ELISA. Каждый из растворов проб добавляли в покрытый стрептавидином 96-луночный планшет (DELFIA Strip Plate 8×12 well, PerkinElmer) при 10 мкл/лунка (n=2). Раствор субстрата, содержащий биотинилированный пептидный субстрат (1250 нМ для JAK1, 625 нМ для JAK2 и JAK3), 2,5 мМ ATP (конечная концентрация 1 мМ), 25 мМ MgCl₂, 15 мМ Трис-HCl (pH 7,5), 0,01% (об./об.) Tween-20 и 1 мМ дитиотреитол, добавляли в планшет при 20 мкл/лунка. Наконец, JAK тирозинкиназу (Carna Biosciences, Inc.), которую предварительно разводили аналитическим буфером до 7,5 нМ для JAK1 и 0,75 нМ для JAK2 и JAK3, добавляли в планшет при 20 мкл/лунка, и планшет инкубировали при 30°C в течение 1 часа. Планшет промывали четыре раза буфером (50 мМ Трис-HCl (pH 7,5), 150 мМ NaCl, 0,02% (об./об.) Tween-20). Блокирующий буфер (0,1% бычий сывороточный альбумин, 50 мМ Трис-HCl (pH 7,5), 150 мМ NaCl, 0,02% (об./об.) Tween-20) добавляли в планшет при 150 мкл/лунка, и планшет блокировали при 30°C в течение 1 часа. Блокирующий буфер удаляли, и антитела антифосфорилированного тирозина, меченные пероксидазой хрена (BD Biosciences, Inc.) (10000-кратное разведение блокирующим буфером) добавляли в планшет при 100 мкл/лунка, и планшет инкубировали при 30°C в течение 30 мин. Планшет четыре раза промывали промывочным буфером, и в планшет добавляли раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (Nacalai Tesque) при 100 мкл/лунка до появления цвета в течение 10 минут. Для остановки реакции в планшет добавляли 0,1M серную кислоту при 100 мкл/лунка. Поглощение при 450 нМ измеряли с использованием микропланшет-ридера (BIO-RAD).

3. Результаты анализов

Анализ нелинейной регрессии с использованием системы SAS (SAS Institute Inc.) проводили для измерения поглощающей способности, и вычисляли концентрацию тестируемого соединения, которую выражали в 50% ингибирования соответствующей активности тирозинкиназы (IC₅₀). Результаты показаны в следующей таблице 1.

[0068]

Таблица 1
Тестируемое соединение (Пример)	Ингибирующая JAK1 активность (IC50: нМ)	Ингибирующая JAK2 активность (IC50: нМ)	Ингибирующая JAK3 активность (IC50: нМ)
1	310	3700	3900
2	470	5700	6000
3	270	2600	1900
4	120	2100	>10000
5	52	3400	3400
6	53	2200	2200

С использованием соединений показанных в примере тестирования 1, проводили следующие тесты (примеры тестирования 2, 3 и 4).

[0069]

Пример тестирования 2: Ингибирующий эффект на модели Aspergillus -индуцированного воспаления дыхательных путей

Aspergillus fumigatus экстракты (Greer laboratories, Inc.) доводили до 400 мкг/мл при помощи PBS. Полученные таким образом растворы Aspergillus fumigatus вводили мышам в виде назальных капель (50 мкл) в день 0, день 1, день 7 и день 8. Назальные капли вводили спустя один час после введения тестируемых соединений по утрам. Тестируемое соединение вводили дважды в день утром и вечером в день 0 по день 9. Тестируемое соединение суспендировали в 0,5% метилцеллюлозе при 10 мг/мл, вводили перорально в дозе 10 мл/кг. Жидкость бронхоальвеолярного лаважа (BALF) отбирали в день 10, и измеряли общее количество белых кровяных клеток в BALF с использованием Celltac (NIHON KOHDEN). Вычисляли коэффициент содержания эозинофилов в общем количестве белых кровяных клеток с использованием ADVIA 120 (Siemens Healthcare Diagnostics), и коэффициент умножали на общее количество белых кровяных телец для определения числа эозинофилов в BALF. Определяли степень ингибирования тестируемого соединения, принимая степень ингибирования при обработке экстрактом Aspergillus fumigatus и 0,5% метилцеллюлозой за 0%, и степень ингибирования без обработки экстрактом Aspergillus fumigatus, но с 0,5% метилцеллюлозой за 100%.

[0070]

Пример тестирования 3: Ингибирующий эффект на стимулированное IL-4 фосфорилирование STAT6

1. Получение тестируемого соединения

Тестируемое соединение растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до 10 мМ, и дополнительно разводили ДМСО до концентраций 300 и 100 мкМ. Полученный раствор дополнительно 100-кратно разводили RPMI 1640 средой с получением раствора пробы. Также ДМСО 100-кратно разводили RPMI 1640 средой и использовали в качестве отрицательного контроля.

2. Активность фосфорилированного STAT6

Раствор проб или раствор отрицательного контроля (50 мкл) смешивали с раствором DND39 клеток (400 мкл) (количество клеток: 10⁵ клеток) и встряхивали при 37°C в течение 30 мин. Добавляли 50 мкл интерлейкина-4 (10 нг/мл) в качестве стимулятора, и полученную смесь встряхивали в течение 15 мин. К полученной смеси добавляли 500 мкл фиксирующего буфера (BD Biosciences, Inc.), и полученную смесь встряхивали в течение 10 мин для остановки реакции. После центрифугирования и удаления супернатанта, к остатку добавляли 500 мкл агента для проницаемости мембран Perm буфер III (BD Biosciences, Inc.), и инкубировали при 4°C в течение 30 мин. После двойной промывки красящим буфером (BD Biosciences, Inc.), добавляли Alexa Fluor 647 мышиное анти-Stat6 антитело (pY641) (BD Biosciences, Inc.) и инкубировали в прохладном темном месте в течение 30 мин. Полученный раствор клеток подвергали проточной цитометрии. Рассчитывали ингибирующую активность тестируемого соединения, принимая геометрическое среднее значение интенсивности флуоресценции в группе отрицательного контроля, стимулированного интерлейкиным-4, в качестве коэффициента ингибирования за 0%, и геометрическое среднее значение интенсивности флуоресценции в группе нестимулированного отрицательного контроля, в качестве коэффициента ингибирования за 100%. Из приведенных результатов следует подтверждение того, что тестируемые соединения подавляют передачу сигнала IL-4.

[0071]

Пример тестирования 4: Ингибирующий эффект на стимулированное IL-7 фосфорилирование STAT5

1. Получение тестируемого соединения

Тестируемое соединение растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до 10 мМ и дополнительно 100-кратно разводили RPMI 1640 средой для получения раствора проб. Также ДМСО 100-кратно разводили RPMI 1640 средой и использовали в качестве отрицательного контроля.

2. Активность фосфорилированного STAT5

К 100 мкл свежеотобранной крови человека добавляли 10 мкл раствора проб или раствора отрицательного контроля, и встряхивали при 37°C в течение 30 мин. Добавляли 10 мкл интерлейкина-7 (100 нг/мл) в качестве стимулятора, и полученную смесь встряхивали в течение 15 мин. К реакционной системе добавляли 1,4 мл лизирующего/фиксирующего буфера (BD Biosciences, Inc.), который 5-кратно разводили дистиллированной водой. Полученную смесь встряхивали в течение 10 мин, и центрифугировали для отделения клеток. После удаления супернатанта, добавляли 1 мл PBS. После центрифугирования для удаления PBS, добавляли 500 мкл Perm буфера III (BD Biosciences, Inc.) и инкубировали при 4°C в течение 30 мин. После двойной промывки красящим буфером (BD Biosciences, Inc.), добавляли Alexa Fluor 647 мышиное анти-Stat5 антитело (pY694) (BD Biosciences, Inc.) и инкубировали в прохладном темном месте в течение 30 мин. Полученный раствор клеток подвергали проточной цитометрии. Рассчитывали ингибирующую активность тестируемого соединения, принимая геометрическое среднее значение интенсивности флуоресценции в группе отрицательного контроля, стимулированного IL-7, в качестве коэффициента ингибирования за 0%, и геометрическое среднее значение интенсивности флуоресценции в группе нестимулированного отрицательного контроля, в качестве коэффициента ингибирования за 100%. Из приведенных результатов следует подтверждение того, что тестируемые соединения подавляют передачу сигнала IL-7.

[0072]

Как показано в примерах тестирования 1-4, соединение настоящего изобретения показало ингибирующую JAK1 активность, и, таким образом, является эффективным против смоделированного in vivo воспаления.

Промышленная применимость

[0073]

Учитывая тот факт, что соединение настоящего изобретения проявляет ингибирующую JAK1 активность, оно является полезным в качестве терапевтического средства против аутоиммунного заболевания (такого как, ревматоидный артрит, псориатический артрит, ювенильный артрит, болезнь Каслмэна, системная красная волчанка, синдром Шегрена, рассеянный склероз, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Бехчета, миастения гравис, сахарный диабет типа 1, иммуноглобулин-нефропатия, аутоиммунные заболевания щитовидной железы, псориаз, склеродермия, волчаночный нефрит, сухость глаз, васкулит (например, синдром Такаясу, гигантоклеточный артерит, микроскопический полиангиит, грануломатоз с полиангиитом и эозинофильный грануломатоз с полиангиитом), дерматомиозит, полимиозит и нейромиелит зрительного нерва), воспалительных заболеваний (таких как атопический дерматит, контактный дерматит, экзема, прурит, пищевые аллергии, бронхиальная астма, эозинофильная пневмония, хроническая обструктивная болезнь легких, аллергический ринит, хронический синусит, эозинофильный гайморит, носовой полип, аллергический конъюнктивит, остеоартрит, анкилозирующий спондилоартрит, болезнь Кавасаки, болезнь Бюргера, узелковый полиартерит и IgA васкулит), пролиферативных заболеваний (таких как солидные типы рака, рак крови, злокачественные опухоли лимфатических узлов, миелопролиферативные заболевания, множественная миелома, фиброз легких и эозинофилия), внезапной потери слуха, диабетической нефропатии, очаговой алопеции, отторжения трасплантата костного мозга или отторжения трасплантата органа.

[0074]

Пример композиции 1

Таблетка (пероральная таблетка)

В 80 мг таблетки содержится:

Соединение примера 15,0 мг

Кукурузный крахмал 46,6 мг

Кристаллическая целлюлоза 24,0 мг

Метилцеллюлоза 4,0 мг

Стеарат магния 0,4 мг

Согласно традиционному способу, смешанный порошок указанных компонентов таблетировали с формированием пероральной таблетки.

Claims

1. Моногидрат метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата.

2. Кристалл соединения по п.1, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,6°, 13,3°, 17,3°, 20,0°, 20,4°, 21,3° и 22,3°.

3. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей JAK1 активностью, содержащая эффективное количество соединения по п.1 или 2 в качестве активного ингредиента в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемым(и) нетоксичным(и) и инертным(и) носителем(ями).

4. Моногидрат метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата.

5. Кристалл соединения по п.4, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,6°, 13,3°, 17,3°, 20,0°, 20,4°, 21,3° и 22,3°.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей JAK1 активностью, содержащая эффективное количество соединения по п.4 или 5 в качестве активного ингредиента в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемым(и) нетоксичным(и) и инертным(и) носителем(ями).

7. Моногидрат метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбаматтозилата.

8. Кристалл соединения по п.7, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,6°, 13,3°, 17,2°, 20,6° и 21,8°.

9. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей JAK1 активностью, содержащая эффективное количество соединения по п.7 или 8 в качестве активного ингредиента в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемым(и) нетоксичным(и) и инертным(и) носителем(ями).

10. Кристалл этил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбамата, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 12,0°, 13,8°, 15,0°, 16,0°, 19,4°, 20,9° и 21,9°.

11. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей JAK1 активностью, содержащая эффективное количество кристалла по п.10 в качестве активного ингредиента в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемым(и) нетоксичным(и) и инертным(и) носителем(ями).

12. Кристалл N-(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 11,1°, 12,9°, 15,4°, 17,8°, 21,2° и 22,3°.

13. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей JAK1 активностью, содержащая эффективное количество кристалла по п.12 в качестве активного ингредиента в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемым(и) нетоксичным(и) и инертным(и) носителем(ями).

14. Кристалл N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-диметилбутан-2-ил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)циклопропанкарбоксамида, характеризуемый порошковой рентгеновской дифрактограммой, полученной с использованием Kα излучения меди, которая включает дифракционные пики при углах дифракции (2θ) 10,6°, 13,0°, 14,6°, 17,4°, 17,7°, 21,3° и 21,7°.

15. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей JAK1 активностью, содержащая эффективное количество кристалла по п.14 в качестве активного ингредиента в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемым(и) нетоксичным(и) и инертным(и) носителем(ями).