RU2686309C1 - Способ изготовления остеопластического материала из костной ткани - Google Patents
Способ изготовления остеопластического материала из костной ткани Download PDFInfo
- Publication number
- RU2686309C1 RU2686309C1 RU2018139204A RU2018139204A RU2686309C1 RU 2686309 C1 RU2686309 C1 RU 2686309C1 RU 2018139204 A RU2018139204 A RU 2018139204A RU 2018139204 A RU2018139204 A RU 2018139204A RU 2686309 C1 RU2686309 C1 RU 2686309C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- water
- washed
- saline
- minutes
- Prior art date
Links
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 82
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 title claims abstract description 41
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 43
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 43
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 29
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 27
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 23
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000005115 demineralization Methods 0.000 claims abstract description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000010606 normalization Methods 0.000 claims abstract description 8
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 8
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 81
- 230000002328 demineralizing effect Effects 0.000 claims description 20
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 17
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 9
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 26
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 abstract description 24
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 abstract description 7
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 abstract description 7
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 abstract description 7
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 abstract description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000004133 Sodium thiosulphate Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 31
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 description 5
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 3
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000002138 osteoinductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 101710167839 Morphogenetic protein Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethanol Chemical compound CCO.ClC(Cl)Cl UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WGXZDYPGLJYBJW-UHFFFAOYSA-N chloroform;propan-2-ol Chemical compound CC(C)O.ClC(Cl)Cl WGXZDYPGLJYBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000000278 osteoconductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 2
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 2
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-N sulfurothioic S-acid Chemical compound OS(O)(=O)=S DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N Sudan III Chemical compound OC1=CC=C2C=CC=CC2=C1N=NC(C=C1)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 239000000819 hypertonic solution Substances 0.000 description 1
- 229940021223 hypertonic solution Drugs 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000007112 pro inflammatory response Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/24—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/28—Bones
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D11/00—Solvent extraction
- B01D11/02—Solvent extraction of solids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу изготовления коллагенового остеопластического материала из костной ткани, заключающемуся в том, что после механической очистки и фрагментации материал отмывают нагретым до 45-50°С физраствором в течение 30 мин, выполняют обработку раствором 3% пероксида водорода в воде в виде 3 циклов по 10 минут с отмывкой физраствором при 45-50°С, а вместо обработки папаином выполняют обработку раствором 0.1-0.5% липазы в забуференном физиологическом растворе при рН 8.0 в течение 2 суток, затем промывают физиологическим раствором, обрабатывают смесью хлороформа с водой (1:1) в течение 1-3 суток с периодической заменой смеси по мере ее помутнения, отмывают хлороформ раствором 20-30% этанола в воде в течение 6-12 часов, а затем физиологическим раствором при пятикратной смене растворов, выполняют деминерализацию материала раствором 0.6 М соляной кислоты в воде в течение 0,25-1 часа при температуре 4-6°С в условиях перемешивания и смене раствора на свежий каждые 15 мин, затем обрабатывают раствором 5% тиосульфата натрия в воде в течение 3 ч, промывают 10-кратной сменой дистиллированной воды, и нормализуют в забуференном физиологическом растворе рН7.4 в течение 7 суток при комнатной температуре и при смене раствора на свежий 3 раза в сутки, причем соотношение объемов костной ткани и смесей или растворов для обработки или отмывки составляет 1:4-1:6, обработку и отмывку выполняют в условиях перемешивания при 40-50°С, если не указана другая температура, а деминерализацию выполняют при периодическом вакуумировании до 10-30 мм рт.ст. и нормализации давления газовой фазы над материалом с периодом 2-10 мин. Способ позволяет получить материал с высокой степенью сохранения структуры коллагенового матрикса, биосовместимости, биоинтеграции, и остеопластического потенциала. 3 ил., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области регенеративной медицины и предназначено для хирургического лечения дефектов костной ткани в травматологии, ортопедии, челюстно-лицевой хирургии и стоматологии в качестве способа изготовления коллагенового остеопластического материала.
Известно, что кость обладает ограниченным регенеративным потенциалом, особенно в дефектах большого, критического, размера, и поэтому для хирургического восстановления утраченной костной ткани используют остеопластические материалы. Остеопластические материалы должны обладать набором характеристик, обеспечивающих их биосовместимость и биоинтеграцию, остеокондуктивные свойства, миграцию мезенхимальных клеток в материал и сбалансированное построение костной ткани, процессы ее ремоделирования, а также остеоиндуктивными свойствами, вызывая дифференцировку прогениторных клеток, мигрирующих в материал, в остеогенные (остеобласты, остеокласты). Остеопластические материалы не должны вызывать бурной провоспалительной реакции, быстрой резорбции. В настоящее время недостаточно знаний для точного расчета характеристик остеопластических материалов, и поэтому они разрабатываются на основе общих принципов.
Одним из наиболее распространенных остеопластических материалов является деминерализованный костный матрикс аллогенного и ксеногенного происхождения. Для изготовления таких материалов из донорской кости удаляют жировые клеточные компоненты, протеогликаны, чтобы исключить провоспалительную реакцию, а также проводят частичную или полную деминерализацию, полагая, что гидроксиапатит, с одной стороны является важным компонентом в индукции остеогенных свойств, а с другой стороны большое количество гидроксиапатита может сильно затормозить остеогенез в материале. Способы получения остеопластических материалов на основе деминерализованного костного матрикса должны эффективно удалять провоспалительные компоненты, а с другой стороны, сохранять остеоиндуктивные факторы, такие как морфогенетические белки, ассоциированные с матриксом костной ткани, не нарушать пространственную структуру коллагенового матрикса, поскольку ее повреждение способно инициировать быструю резорбцию материала и провоспалительную реакцию. К настоящему времени предложен ряд способов получения остеопластического материала на основе деминерализованной костной ткани различной формы (крошка, блоки, пластины), направленных на решение этой комплексной задачи.
Известен способ получения деминерализованного костного матрикса в виде крошки (патент РФ №2456003, опубл. 20.07.2012), в котором после механической очистки и фрагментации костной ткани проводят ее обработку водным раствором 2% неионного детергента Tween-80 в течение 12-24 ч, затем материал обрабатывают 24-48 ч смесью изопропанол-хлороформ (1:1) в ультразвуковой ванне, отмывают водой, выполняют деминерализацию раствором 0.6 М соляной кислоты, в течение 30-90 мин, и далее материал промывают дистиллированной водой, этиловым спиртом, высушивают и дополнительно измельчают до необходимых размеров.
Недостатком этого способа является то, что удаление жировой компоненты костной ткани путем обработки смесью изопропанол-хлороформ вызывает удаление воды из матрикса, его избыточное высушивание, делает его хрупким, нарушая его межмолекулярную структуру и тем самым усиливает реакцию организма против имплантата, ускоряет его резорбцию, нарушает остеокондуктивные свойства материала.
Известен способ получения остеопластического материала (патент РФ №6092012, опубл. 30.01.2017), согласно которому губчатую костную ткань после механической обработки и фрагментации обрабатывают гипертоническим раствором хлористого натрия (1-10%) 1-8 суток, затем выполняют глубокую очистку путем удаления жировых компонент неколлагеновых белков методом сверхкритической флюидной экстракции, а после этого выполняют деминерализацию раствором соляной кислоты (0.5-4 М) 15-300 мин и лиофилизацию в течение 1-48 ч.
Недостатком этого способа является то, что обработка в сверхкритической жидкости двуокиси углерода способна обеспечить глубокую очистку материала, но при этом происходит значительное повреждение структуры коллагенового матрикса. Обработка в сверхкритической жидкости вызывает даже стерилизацию материала, повреждая микроорганизмы и вирусы. Механизм повреждения субмолекулярных структур (вирусы, бактерии, коллагеновый матрикс) связан, в частности, с градиентами давления, возникающими в процессе установления сверхкритических условий (Суслов А.В. и др. Инактивация микроорганизмов в среде сверхкритического СО2. Сверхкритические флюиды. Теория и практика, 2008, т. 3 №3, с. 3-11), что особенно значимо может проявляться в неоднородных средах, к которым можно отнести и костную ткань. Кроме того, глубокая очистка в сверхкритических условиях будет удалять из материала остеоиндуктивные факторы, такие как морфогенетические белки, ростовые факторы, и тем самым подавлять остеопластические свойства материала. Другой недостаток способа состоит в том, что обработка раствором 0.6 М HCl будет усиливать повреждения коллагенового матрикса, вызванные обработкой костной ткани в сверхкритической среде СО2, и тем самым усиливать реакцию организма против имплантата, ускорять его резорбцию, нарушать остеопластические свойства материала.
Наиболее близким, принятым за прототип, является способ получения биоматериалов из костной ткани и полученный этим способом материал для остеопластики и тканевой инженерии (патент РФ №2342162, опубл. 27.12.2008), в котором костную ткань после механической очистки и фрагментации отмывают нагретым до 65°С 0,1 М фосфатным буфером с рН 5,8-6,0, затем обрабатывают в растворе 0.1-0.4% папаина при 65°С в течение 24 часов, затем промывают водой при 40-80°С, обрабатывают раствором 0.4 М щелочи в течение 10-24 часов, отмывают в проточной воде, высушивают и обезжиривают в смесях этанол-хлороформ, проводят частичную или полную декальцинацию в кислотной среде, обрабатывают раствором пероксида водорода, отмывают водой, высушивают, упаковывают и стерилизуют.
Недостатком известного способа, принятого за прототип, является то, что обработка в растворе 0.1-0.4% папаина при 65°С в течение 24 часов повреждает коллагеновый матрикс материала, переваривает его, нарушая тем самым его структуру и усиливая реакцию организма на материал, снижая его остеопластический потенциал. Еще одним недостатком является длительная обработка в растворе 0.4 М щелочи, способном вызывать повреждение коллагенового матрикса. Другим недостатком является то, что обработка в смесях этанол-хлороформ вызывает удаление воды из матрикса, высушивает его, делает более хрупким и более чувствительным к повреждающему действию кислотных растворов в последующем процессе деминерализации и в целом усиливает реакцию организма на материал, ускоряет резорбцию материала и снижает его остеопластические свойства.
Задачей настоящего изобретения является создание способа изготовления остеопластического материала из костной ткани на основе разработки щадящих методов очистки от жира и неколлагеновых белков, деминерализации, обеспечивающих сохранение структуры коллагенового матрикса, его биосовместимость, биоинтеграцию и остеопластические свойства материала.
Решение поставленной задачи и технический результат достигаются тем, что в известном способе, включающем механическую очистку, фрагментацию, удаление жировых и белковых неколлагеновых составляющих, ее деминерализацию, сопровождающихся отмывками реагентов, после механической очистки и фрагментации материал отмывают нагретым до 45-50°С физраствором, выполняют обработку раствором 3% пероксида водорода в воде в виде 3 циклов по 10 минут в течение 30 мин, далее выполняют обработку раствором 0.1-0.5% липазы в забуференном физиологическом растворе при рН 8.0 в течение 2 суток, затем промывают физиологическим раствором, обрабатывают смесью хлороформа с водой (1:1) в течение 1-3 суток с периодической заменой смеси по мере ее помутнения, отмывают хлороформ раствором 20-30% этанола в воде в течение 6-12 часов, а затем физиологическим раствором при пятикратной смене растворов, выполняют деминерализацию материала раствором 0.6 М соляной кислоты в воде в течение 0,25-1 часа при температуре 4-6°С в условиях перемешивания и смене раствора на свежий каждые 15 мин, затем обрабатывают раствором 5% тиосульфата натрия в воде в течение 3 ч, промывают 10-кратной сменой дистиллированной воды, и нормализуют в забуференном физиологическом растворе рН7.4 в течение 7 суток при комнатной температуре и при смене раствора на свежий 3 раза в сутки, причем соотношение объемов костной ткани и смесей или растворов для обработки или отмывки составляет 1:4-1:6, а обработку и отмывку выполняют в условиях перемешивания при 40-50°С, если не указана другая температура, и обработку пероксидом водорода и деминерализацию выполняют при периодическом вакуумировании до 50-100 мм рт.ст. и нормализации давления газовой фазы над материалом с периодом 2-10 мин.
Первичная обработка раствором при 45-50°С в течении 0.5 ч обеспечивает вытекание легкоплавких жиров, а последующая обработка раствором пероксида водорода в условиях вакуумирования и нормализации давления над обрабатываемым материалом и отмывкой физраствором при 45-50°С позволяет быстро и эффективно очистить поверхность и убрать жир из приповерхностных областей материала и обеспечить его первичную стерилизацию. Указанное время является оптимальным и определено экспериментально. Снижение температуры раствора до 45-50°С также является фактором, способствующим сохранению структуры коллагенового матрикса, поскольку известно, что обработка при 65°С и рН 5.8-6.0, как предложено в прототипе, способна вызывать повреждение коллагена. Использование раствора липазы в физрастворе рН 8.0 при 45-50°С позволяет сочетать удаление легкоплавких жиров и расщепление жиров на глицерин и высшие жирные кислоты, ускоряя их выход из толщи ткани, и эмульгирование в растворе без повреждения коллагенового матрикса. Последующая обработка материала в двухфазной смеси хлороформа и воды (1:1) при 45-50°С позволяет извлекать расщепленные жирные кислоты из материала без пересушивания и повреждения его матрикса, как это происходит при обработке в смесях хлороформа с этанолом или пропанолом в прототипе. Быстрая (15-60 мин) деминерализация при 4-6°С также является важной составляющей предложенного способа, обеспечивает эффективное удаление минеральной составляющей при сохранении структуры коллагенового матрикса даже во фрагментах кости толщиной 1 см, длиной/шириной 3-5 см. При такой температуре происходит меньшее повреждение коллагена в растворе кислоты. Варьируя время обработки раствором HCl можно регулировать частичную или полную деминерализацию материала. Последующая обработка тиосульфатом обеспечивает первичную нейтрализацию хлора, который имеет высокое сродство к коллагену и связывается с ним в ходе деминерализации. Именно поэтому, в отличие от прототипа, в предлагаемом способе используется обработка тиосульфатом натрия в течение 4 часов. Последующая многосуточная отмывка определена экспериментально под контролем тестов изменений рН отмывочной, а также токсикологических тестов материала после отмывок. Важное значение для изготовления материала имеет порядок и временные характеристики способа, в том числе и заключительной отмывки, а также выполнение обработки растворами пероксида водорода и соляной кислоты в условиях периодического вакуумирования и нормализации давления газа и паров растворов над материалом, поскольку это значительно повышает эффективность процессов очистки и деминерализации материала, и снижает время воздействия, например, соляной кислоты, на коллагеновый матрикс.
Способ изготовления остеопластического материала из костной ткани осуществляется следующим образом.
Ксеногенный костный материал полученный от сельскохозяйственных животных, прошедших ветеринарный контроль, или донорскую кость человека после необходимых анализов механически очищают от мышц и сухожилий, фрагментируют путем распиливания на блоки толщиной 1 см, шириной и длиной в диапазоне от 1 до 10 см, либо путем дробления на частицы 0,3-2 мм в условиях охлаждения в диапазоне 0-6°С. Полученные фрагменты промывают нагретым до 45-50°С физраствором в течение 0.5 часа, затем обрабатывают раствором 3% пероксида водорода в воде, 3 цикла по 10 минут с отмывкой физраствором при 45-50°С в условиях периодического вакуумирования до 50-100 мм рт.ст и нормализации давления газовой фазы над материалом до 1 атм, после этого выполняют обработку раствором 0.1-0.5% липазы в забуференном физиологическом растворе при рН 8.0 в течение
2 суток при температуре 40-50°С, затем промывают физиологическим раствором, обрабатывают смесью хлороформа с водой (1:1) в течение 1-3 суток при 45-50°С с периодической заменой смеси по мере ее помутнения, отмывают хлороформ раствором 20-30% этанола в воде в течение 6-12 часов, а затем физиологическим раствором при пятикратной смене растворов при 45-50°С, затем выполняют деминерализацию материала раствором 0.6 М соляной кислоты в воде в течение 0,25-1 часа при температуре 4-6°С в условиях периодического вакуумирования - нормализации давления и смены раствора на свежий каждые 15 мин, затем обрабатывают раствором 5% тиосульфата натрия в воде в течение 3 ч, промывают 10-кратной сменой дистиллированной воды, и нормализуют в забуференном физиологическом растворе рН7.4 в течение 5-9 суток при комнатной температуре и при смене раствора на свежий 3 раза в сутки, причем соотношение объемов костной ткани и смесей или растворов для обработки или отмывки составляет 1:4-1:6. После этого обработанные фрагменты подвергают сушке, лиофилизации, упаковывают и стерилизуют.
После обработки материал подвергают тестированию на содержание минерализованного кальция, гликозаминогликанов и жиров спектрофотометрическими способами, на биосовместимость, биоинтеграцию и остеопластические свойства методами культуры клеток животных и гетеротопической имплантации экспериментальным животным с последующим гистологическим анализом эксплантированных образцов.
Представленный способ обеспечивает получение остеопластического материала, характеризующегося высокой степенью очистки от жировых компонентов, протеогликанов, сохранением структуры коллагенового матрикса, низкой степенью иммуногенности, высокой степенью биосовместимости, биоинтеграции и остеогенности.
Ниже представлены примеры реализации способа изготовления остеопластического материала из костной ткани.
Пример 1. Получение деминерализованной костной крошки размером 0.3 мм - 2 мм из костей крупного рогатого скота.
Кости крупного рогатого скота, на которую имеются документы ветеринарного контроля, получают в течение 24 часов после забоя. Полученные кость механически очищают от мягких тканей (мышц, сухожилий), на фрагменты размерами 2-5 см и дробят их в условиях охлаждения до 4-6°С на фрагменты размером 0.3-2 мм. Полученные фрагменты помещают в сосуд, заливают физиологическим раствором (0.9% хлористого натрия) при соотношении объемов кости и раствора 1:5, нагретого до 50°С и инкубируют при этой температуре в условиях перемешивания 15 мин, затем физраствор меняют на свежий и повторяют цикл обработки. После этого физраствор сливают, заливают раствор 3% пероксида водорода в воде, нагретый до 45°С, подключают к системе вакуумирования, вакуумируют до 70 мм рт.ст., инкубируют 10 мин при 45°С, нормализуют давление до 1 атм, сливают раствор пероксида водорода, промывают физраствором, заливают свежий раствор пероксида водорода и повторяют такой цикл обработки еще 1 раз. После этого фрагменты ткани заливают раствором 0.25% липазы в забуференном физиологическом растворе при рН 8.0, при соотношении объемов фрагментов и раствора 1:5 и инкубируют в условиях перемешивания в течение 1 суток при температуре 45°С, затем промывают физиологическим раствором при 50°С, физраствор удаляют и наливают в сосуд с фрагментами смесь хлороформа и воды (соотношение объемов 1:1), инкубируют в течение 1 суток с периодической заменой смеси по мере ее помутнения, отмывают хлороформ раствором 20% этанола в воде в течение 6 часов, а затем промывают физиологическим раствором при пятикратной смене растворов при 50°С. Затем к фрагментам материала добавляют раствор 0.6 М соляной кислоты, в воде, охлажденный до 4°С, подключают к системе вакуумирования, вакуумируют до 100 мм.рт.ст., инкубируют условиях перемешивания 10 мин при 4°С, нормализуют давление, удаляют раствор, заливают свежий и повторяют этот цикл деминерализации 1 раз. После этого фрагменты промывают физраствором при комнатной температуре, заливают раствором 5% тиосульфата натрия (соотношение объемов кости и раствора 1:1), инкубируют в условиях перемешивания 10 мин при комнатной температуре, сливают раствор, ополаскивают дистиллированной водой, затем заливают свежий раствор тиосульфата натрия и повторяют это цикл обработки еще 4 раза. Затем фрагменты заливают физраствором (0.9% хлористого натрия, соотношение объемов материала и раствора 1:5) и инкубируют при комнатной температуре, в условиях перемешивания, при смене раствора 3 раза в сутки, контролируя величину рН раствора после каждой инкубации и оценивая таким образом нормализацию материала. После этого фрагменты высушивают в лиофильной сушке 1 сут, упаковывают и подвергают стерилизации.
Окраска Суданом 3 показывает полное удаление липидов из фрагментов. Количественная оценка, выполненная по методу, описанному в патенте РФ №2456003, показала наличие 0,2 мг.липидов/г.материала, что в 8 раза меньше чем в материале изготовленном способом, предложенном в прототипе. Спектрофотометрический анализ с использованием набора Арсеназо III (Диакон, Москва), показал полное удаление минерализованного кальция (0,5±0,4 мг кальция /г сухого веса материала). Остаточная влага (оценивали по методу, описанному в пат. РФ №2456003) составляла 4%. Сканирующая электронная микроскопия свидетельствует о сохранение структуры коллагенового матрикса после обработки. Анализ цитотоксичности материала, выполненный на основе изучения роста культуры клеток пульпы зуба человека в питательной среде, предварительно инкубированной в течении суток с материалом, при соотношении объемов материала и среды 1:1, показал сохранение пролиферации клеток на уровне 100 в сравнении с ростом клеток в контрольной питательной среде (без инкубации с материалом). Гистологическое исследование после подкожной имплантации материала экспериментальным животным (окраски по Мак Ги Расселу, гематоксилином Майера и эозином, Голднера-Масона), свидетельствует о высокой биосовместимости, биоинтеграции материала, об отсутствии резорбции материала, о построении структурированного неоколлагенового матрикса после 6 и 13 недель имплантации.
На фиг 1. Представлена структура деминерализованного трабекулярного матрикса изготовленной костной крошки, указывающие на высокую степень очистки и сохранение структуры матрикса. На фиг. 2 представлен спектральный состав полученного коллагенового матрикса. На фиг. 3 представлены микрофотографии гистологических препаратов материала после 13 недель гетеротопической имплантации экспериментальным животным, свидетельствующий о высоком остеопластическом потенциале материала (построение неоколлагенового структурированного матрикса).
Пример 2. Получение деминерализованных фрагментов губчатой кости быка размером 1 см × 1 см × 1 см
Кость крупного рогатого скота получают при наличии документов ветеринарного контроля в течение 24 часов после забоя. Полученную кость механически очищают от мягких тканей (мышц, сухожилий), распиливают таким образом, что получают фрагменты губчатой кости размером 1 см × 1 см × 1 см. Полученные фрагменты помещают в сосуд, заливают физиологическим раствором (0.9% хлористого натрия) при соотношении объемов кости и раствора 1:5, нагретого до 50°С и инкубируют при этой температуре в условиях перемешивания в термошейкере Biosun 100 при 100 об. /ми 15 мин, затем физраствор меняют на свежий и повторяют цикл обработки. После этого физраствор сливают, заливают раствор 3% пероксида водорода в воде, нагретый до 45°С, подключают к системе вакуумирования, вакуумируют до 70 мм рт.ст., инкубируют 10 мин при 45°С, нормализуют давление до 1 атм, сливают раствор пероксида, промывают физраствором, заливают свежий раствор пероксида и повторяют такой цикл обработки еще 2 раза. После этого фрагменты ткани заливают раствором 0.25% липазы в забуференном физиологическом растворе при рН 8.0, при соотношении объемов фрагментов и раствора 1:5 и инкубируют в термошейкере в течение 2 суток при температуре 45°С, затем промывают физиологическим раствором при 50°С, физраствор удаляют и наливают в сосуд с фрагментами смесь хлороформа и воды (соотношение объемов 1:1), инкубируют в течение 1 суток с периодической заменой смеси по мере ее помутнения, отмывают хлороформ раствором 20% этанола в воде в течение 6 часов, а затем промывают физиологическим раствором при пятикратной смене растворов при 50°С. Затем к фрагментам материала добавляют раствор 0.6 М соляной кислоты, в воде, охлажденный до 4°С, подключают к системе вакуумирования, вакуумируют до 100 мм.рт.ст., инкубируют 15 мин при 4°С, нормализуют давление, удаляют раствор, заливают свежий и повторяют этот цикл деминерализации еще 1 раз. После этого фрагменты промывают физраствором при комнатной температуре, заливают раствором 5% тиосульфата натрия (соотношение объемов кости и раствора 1:1), инкубируют при комнатной температуре 10 мин, сливают раствор, ополаскивают дистиллированной водой, затем заливают свежий раствор тиосульфата натрия и повторяют этот цикл обработки еще 10 раз. Затем фрагменты заливают физраствором (0.9% хлористого натрия, соотношение объемов материала и раствора 1:5) и инкубируют при комнатной температуре, в условиях перемешивания на шейкере, при смене раствора 3 раза в сутки, в течение 5 суток, контролируя величину рН раствора после каждой инкубации и оценивая таким образом нормализацию материала. После этого фрагменты высушивают в лиофильной сушке 1 сут, упаковывают и подвергают стерилизации.
Характеристики материала по степени очистки от жиров, деминерализации, а также цитологический анализ на отсутствие цитотоксичности на высокую степень биосовместимости, биоинтеграции и остеопластических свойств в моделях имплантации экспериментальным животным показал характеристики сравнимые с тем, что описаны в примере 1.
Пример 3. Получение деминерализованных фрагментов губчатой кости быка размером 1 см × 2 см × 5 см
Изменения способа изготовления фрагментов такого размера в сравнении с фрагментами в примере 1 касаются в первую очередь временных режимов обработки и связаны с осложнением удаления жиров и деминерализации по мере увеличения размером фрагментов кости. Начальный этап выполняют, как и в примере 1, включая механическую очистку, распиливание образцов на фрагменты 1 см × 2 см × 5 см, обработку физиологическим раствором и раствором пероксида водорода при 45°С. Последующая обработка раствором липазы выполняется также, как и в примере 1, но время обработки увеличено до 2 суток в связи с увеличением размеров фрагментов. Также увеличено время обработки смесью флороформа и воды с 1 суток до 3 суток в сравнении с примером 1, время деминерализации с 30 до 60 мин., и время нормализации материала путем окончательного удаления реагентов из него с 5 суток до 7 суток. Химический анализ показал высокую степень удаления жиров, минерализованного кальция, протеогликанов. Цитологический анализ показал высокую степень биосовместимости и отсутствие токсичности. Гистологический анализ после гетеротопической имплантации материала экспериментальным животным, как и в примере 1, свидетельствует о высокой биосовместимости, биоинтеграции материала, об отсутствии резорбции материала, о построении структурированного неоколлагенового матрикса.
Таким образом, приведенные примеры показывают, что заявляемый способ обеспечивает высокую степень очистки от жиров и провоспалительных факторов, высокую эффективность деминерализации при сохранении пространственной структуры коллагенового костного матрикса материала, высокую степень биосовместимости, биоинтеграции, высокий остеопластический потенциал получаемого этим способом материала в различных формах (блочные фрагменты различного размера, крошка).
Claims (1)
- Способ изготовления остеопластического материала из костной ткани путем ее механической очистки, фрагментации, удаления жировых и белковых неколлагеновых составляющих, ее деминерализации, сопровождающихся отмывками реагентов, отличающийся тем, что после механической очистки и фрагментации материал отмывают нагретым до 45-50°С физраствором в течение 30 мин, выполняют обработку раствором 3% пероксида водорода в воде в виде 3 циклов по 10 минут с отмывкой физраствором при 45-50°С, а вместо обработки папаином выполняют обработку раствором 0.1-0.5% липазы в забуференном физиологическом растворе при рН 8.0 в течение 2 суток, затем промывают физиологическим раствором, обрабатывают смесью хлороформа с водой (1:1) в течение 1-3 суток с периодической заменой смеси по мере ее помутнения, отмывают хлороформ раствором 20-30% этанола в воде в течение 6-12 ч, а затем физиологическим раствором при пятикратной смене растворов, выполняют деминерализацию материала раствором 0.6 М соляной кислоты в воде в течение 0,25-1 ч при температуре 4-6°С в условиях перемешивания и при смене раствора на свежий каждые 15 мин, затем обрабатывают раствором 5% тиосульфата натрия в воде в течение 3 ч, промывают 10-кратной сменой дистиллированной воды и нормализуют в забуференном физиологическом растворе рН 7.4 в течение 5-9 суток при комнатной температуре и при смене раствора на свежий 3 раза в сутки, причем соотношение объемов костной ткани и смесей или растворов для обработки или отмывки составляет 1:4-1:6, обработку и отмывку выполняют в условиях перемешивания при 40-50°С, если не указана другая температура, а деминерализацию выполняют при периодическом вакуумировании до 50-100 мм рт.ст. и нормализации давления газовой фазы над материалом с периодом 2-10 мин.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018139204A RU2686309C1 (ru) | 2018-11-07 | 2018-11-07 | Способ изготовления остеопластического материала из костной ткани |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018139204A RU2686309C1 (ru) | 2018-11-07 | 2018-11-07 | Способ изготовления остеопластического материала из костной ткани |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2686309C1 true RU2686309C1 (ru) | 2019-04-25 |
Family
ID=66314811
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018139204A RU2686309C1 (ru) | 2018-11-07 | 2018-11-07 | Способ изготовления остеопластического материала из костной ткани |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2686309C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2721604C1 (ru) * | 2019-06-07 | 2020-05-21 | Юрасова Юлия Борисовна | Способ получения остеопластических биоматериалов из костной ткани |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005082432A1 (fr) * | 2004-02-13 | 2005-09-09 | Biobank | Procede de traitement de tissus osseux et biomateriaux implantables |
RU2342162C1 (ru) * | 2005-10-27 | 2008-12-27 | Саващук Дмитрий Алексеевич | Способ получения биоматериалов из костной ткани и полученный этим способом материал для остеопластики и тканевой инженерии |
RU2609201C1 (ru) * | 2015-08-14 | 2017-01-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Кардиоплант" | Способ получения остеопластического материала |
-
2018
- 2018-11-07 RU RU2018139204A patent/RU2686309C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005082432A1 (fr) * | 2004-02-13 | 2005-09-09 | Biobank | Procede de traitement de tissus osseux et biomateriaux implantables |
RU2342162C1 (ru) * | 2005-10-27 | 2008-12-27 | Саващук Дмитрий Алексеевич | Способ получения биоматериалов из костной ткани и полученный этим способом материал для остеопластики и тканевой инженерии |
RU2609201C1 (ru) * | 2015-08-14 | 2017-01-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Кардиоплант" | Способ получения остеопластического материала |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Кирилова И.А. КОСТНАЯ ТКАНЬ КАК ОСНОВА ОСТЕОПЛАСТИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ ВОССТАНОВЛЕНИЯ КОСТНОЙ СТРУКТУРЫ. "Хирургия позвоночника". 2011; (1):068-074., doi.org/10.14531/ss2011.1.68-74. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2721604C1 (ru) * | 2019-06-07 | 2020-05-21 | Юрасова Юлия Борисовна | Способ получения остеопластических биоматериалов из костной ткани |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2665962C1 (ru) | Биорезорбируемый биологический матрикс для замещения дефектов костной ткани и способ его получения | |
RU2609201C1 (ru) | Способ получения остеопластического материала | |
JP5865382B2 (ja) | 歯牙骨移植材の製造方法 | |
KR20040048403A (ko) | 조직 복구 조성물 및 이들의 제조 방법 및 용도 | |
JPH09508040A (ja) | 移植用骨の調製 | |
RU2342162C1 (ru) | Способ получения биоматериалов из костной ткани и полученный этим способом материал для остеопластики и тканевой инженерии | |
WO2020258828A1 (zh) | 组织工程骨支架及其制备方法 | |
RU2686309C1 (ru) | Способ изготовления остеопластического материала из костной ткани | |
CN112755247B (zh) | 一种脱细胞真皮基质及其制备方法 | |
RU2526429C1 (ru) | Способ изготовления костных имплантов | |
CN111001040A (zh) | 一种生物组织细胞外基质材料的制备方法 | |
KR20210072266A (ko) | 지방조직 유래 세포외기질을 이용한 지지체 및 그 제조방법 | |
Eagle et al. | Development of an improved bone washing and demineralisation process to produce large demineralised human cancellous bone sponges | |
RU2721604C1 (ru) | Способ получения остеопластических биоматериалов из костной ткани | |
CN1216651C (zh) | 一种用于生物源性人工骨去抗原的制备方法 | |
CN113750293A (zh) | 骨修复材料的制备方法 | |
CN107485730A (zh) | 一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法 | |
RU2456003C1 (ru) | Способ получения деминерализованного костного матрикса в виде крошки | |
RU2619870C1 (ru) | Способ получения биологически активных имплантатов | |
RU2223104C2 (ru) | Способ получения костного трансплантата | |
RU2317109C1 (ru) | Способ камерной стерилизации биологических трансплантатов низкотемпературной плазмой пероксида водорода | |
RU2769248C1 (ru) | Способ получения ацеллюлярного дермального матрикса | |
RU2693606C1 (ru) | Способ получения и применения высокоочищенного минерального матрикса в виде сегментов и гранул с остеоиндуктивными свойствами для замещения костных дефектов | |
RU2273489C1 (ru) | Способ получения коллагена из костной ткани | |
UA156831U (uk) | Спосіб виготовлення біоматеріалу із кісткової тканини сільськогосподарських тварин |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201108 |