JPH09508040A - 移植用骨の調製 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 移植用骨を調製する一つの方法であって、前記骨は除去可能物質よりなる内部基質をそれ自身に含み、前記方法は大気圧以下の気圧に前記骨を接触させる段階よりなることを特徴とする方法。加えて前記気圧を前記骨と接触させる期間前記骨が除染剤あるいは洗浄剤との接触が維持されるも一つの段階よりなる前記の方法。更にあらかじめ確認された量の除去可能物質を含む骨内部基質を処理する一つの方法であって、前記基質はまた前記除去可能物質を基本的に固定するあらかじめ確認された量の脂質を含み、前記方法は前記脂質の量を前記あらかじめ確認された量以下に減少させるのに有効な時間前記基質を大気圧以下の気圧に接触させる段階よりなることを特徴とする骨内部基質を処理する方法。

Description

【発明の詳細な説明】 移植用骨の調製 この発明はアメリカ合衆国出願番号０７／８１５，３９４号を継承するもので あり、１９９１年１２月３１日出願のこの全明細書、請求の範囲および図面が全 体としてここに引用例として組込まれている。 発明の分野 この発明は移植用骨を処理する方法に関する。より詳細にはこの発明は、除染 骨の供給、汚染病原あるいは免疫性物質に対する被移植者の接触可能性を大幅に 出来る限り少なくする骨の移植に向けられる。 報告された成果 移植用ヒト骨の調達および処理は、供与者の家族、病院の職員、地元の調達グ ループ、血液標本処理研究所、骨処理研究所、被移植患者、および移植チームを 含むいくつのグループの努力を調整する必要のある複雑な仕事である。 最高に考慮されねばならないことは、組織被移植者に潜在的に有害な疾病を移 転する危険性を最小化することである。実際に、移植に対し安全な骨組織の供給 が免疫性物質としての非常に特殊な挑戦であり、また微生物およびウイルスが骨 内部基質試料の奥深くで見出されることがある。 この点において、血液試料は、例えば ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１） ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−２） ヒトＴ細胞リンパ栄養ウイルス（ＨＴＬＶ−１） Ｂ型肝炎 Ｃ型肝炎 サイトメガロウイルス（ＣＭＶ） 梅毒トレポネーマ（梅毒） を含む多種多様な既知の病原菌に対して加工処理研究所で分析される。汚染骨の 移植から生じる重大な臨床結果に関連しては、カケーヤ他、「組織移植−伝播感 染」輸血、３１巻（３号）、１２７７−１２８４ページ、１９９１年；シャトキ ン「冷凍骨−貯蔵骨の使用に伴う同種血清肝炎，事例報告」骨および関節手術ジ ャーナル、１６巻−Ａ（１）号、１６０−１６２ページ、１９５４年を参照され たい。骨同じく骨髄を経由するヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の伝播が同じよ うに報告された。「骨移植によるＨＩＶ伝播事例報告および公衆衛生勧告」Ｎｏ ｖｂｉｄ．死亡率ウイークリーレポート 、３７巻、５９７−５９９ページ、１９ ８８年；フルリーニ他、「骨髄移植感染後のヒト免疫不全ウイルスに対する抗体 応答」臨床微生物感染疾病ヨーロピアンジャーナル、７巻、５号、５５４−６６ ５ページ、１９９８年。ＨＩＶは新鮮かつ冷凍された骨および凍結乾燥骨から培 養された。バック他、「骨から培養されたヒト免疫不全ウイルス。移植の意味す るもの」臨床整形外科学、２５１巻、２４９−２５３ページ、１９９０年。更に 骨処理研究所での技術者の保護はＨＩＶおよびＢ型肝炎伝播の重大な可能性があ るため非常に重要である。 骨処理手順の設計に関連して更に非常に重要な考慮すべき事 柄は、移植骨に残存する供与者の高分子物質、例えば、膠原、および主要組織適 合性複合体あるいは他の糖タンパク質の細胞表面抗原などに対する被移植患者に おける免疫応答（移植拒絶を含む）を避け、あるいは最小化することである。例 えばフリードランダーおよびホロヴィッツ、整形外科学、１５巻、（１０号）、 １１７１−１１７５ページ（１９９２年）、およびマンキン、他、同書、１１４ ７−１１５４ページを参照されたい。 従って、移植骨の使用、および調製ならびに調達に関連する被移植者の免疫応 答あるいは疾病伝播のリスクを減少させることが骨処理方法にとって非常に必要 なこととなる。これに関して、たとえ最新技術の供与者スクリーニング手順が使 用される場合であっても、特定の供与者にある最近の感染は検出されず、そのた め潜在的な、あるいは未だに検出されない病原菌に対して予防措置を提供する改 善された洗浄および除染処理の重要性を強調するということの認識も重要である 。 骨処理加工中に採用される供与者スクリーニングおよび抗生物質処理の組合せ は、許容限度に限定されずに既知のウイルス汚染物および各種微生物の伝播のリ スクを減少する。例えば、スカボロ、Ｎ．Ｌ，整形外科学、１５巻（１０号）、 １１６１−１１６７ページ（１９９２年）、およびマリニン、Ｔ．Ｉ．、「骨同 種異系移植の獲得および貯蔵」骨移植および代用骨、ハバルおよびレッディ編、 第１９章、２０６−２２５ページ、ペンシルバニア、フィラデルフィア、Ｗ．Ｂ ．ソーンダースカンパニー（１９９２年）を参照されたい。前述の通 り、現在利用出来る方法は、ヒトあるいは病院環境下での一般的な微生物叢であ るウイルス、選択された細菌、および真菌からの予防的保護を提供しない。この ような病原に対するスクリーニングテストの感染性および特異性は高いものがあ るがスクリーニングテストは完全なものではなく、また偽陰性者が例えば低い抗 体水準（最近の感染あるいは免疫不全など）あるいは技術者のエラーから生じる こともある。更にスクリーニングテストは既知の病原菌を同定するためにのみ有 用である。また現在実用化されている前記の伝統的に用いられる抗生物質抗菌物 質混合液は容易にすべての細菌を殺菌しない。例えば、よく用いられるポリミキ シン／バシトラシン液（バシトラシン５０，０００単位／ポリミキシンＢ５００ ，００単位）はプロテウス種を不活性化しない。更に抗生物質混合液はウイルス あるいは真菌に著しい影響を与えない。 除染剤が骨基質にうまく浸透し除染する範囲には著しい限界がある。プロロお よびオクランド「化学品による骨の殺菌法」骨軟骨同種異系移植−生物学、貯蔵 および臨床利用 、フリードランダー他、編、第２２章、２３３−２３８ページ、 マサチューセッツ、ボストン、リトルブラウンアンドカンパニー（１９８３年） 。骨基質は前記の通り病原菌あるいは高分子物質が存在している骨基質に除染剤 が深く滲透して接近することを妨げる例えば骨髄、細胞および脂質などのような 潜在的に除去可能な物質を含んでいる。 １９６４年公告されたイギリス国特許明細書９６４，５４５号によれば、骨基 質から除去可能物質を抽出する際に出会うあ る種の困難が記述されている。 ’５４５明細書には骨を清浄化するために脂肪溶媒（例えばクロロホルム／メ タノール混合物）を使用する手順を記述している。被移植者に適切な大きさの供 与者の骨片を速やかに付合させるためなどのような望ましい骨貯蔵手順と矛盾す るかなり長い時間期間が含まれる。更にこの手順で固有のものであると述べられ た不利な点は、特別な順序で実施されねばならないことが特別な一連の段階に制 限されているように見えることである。もしこれが行われないとなると、免疫供 与者タンパク質は脂肪溶媒により生じる原位置変性に従って骨の中に残存すると 述べられている。 移植に適した除染骨の供給に関連するこれらおよびその他の問題は、この発明 の実施に従って解決される。 本発明の要約 本発明は、骨内部基質が洗浄およびもしくはその除染の期間中に影響を受ける 気圧の操作が、移植に適した骨の供給に特に有効であるという発見に関する。従 って、移植用骨を調製する一つの方法が提供され、前記骨は除去物質をそれ自身 に含む内部基質を含み、前記方法は前記骨を大気圧以下の気圧に接触させる段階 よりなる。望ましい見地において、前記方法は更に前記骨あるいはその前記基質 を除染剤あるいは洗浄剤よりなる溶液に接触させる段階を含む。 この発明に従って生産される除染骨で治療される臨床適応症の代表的なものと しては、膝および股関節部の手術であり、更に大腿骨頭、近位脛骨および遠位大 腿骨の移植である。 この展開の実施に従って、骨基質内の脂質が洗浄およびその除染に大幅に干渉 することが確認された。従ってこの発明の一つの重要な見地は、あらかじめ確認 された量の除去可能物質を含む骨内部基質を処理する一つの方法を提供し、前記 基質は更に前記除去可能物質を大幅に固定するあらかじめ確認された量の脂質を 含み、前記方法は前記脂質量を前記のあらかじめ確認された量以下に減少させる のに有効な時間大気圧以下の気圧に接触させる段階よりなる。 この発明のも一つの見地は、前記骨へのかなりの親和性を持つあらかじめ確認 された量の除去可能物質よりなるそれ自体に内部基質を含む骨を処理する方法を 提供し、前記方法は前記基質を大気圧以下の気圧に接触させ、次いであらかじめ 確認された値以下に前記除去可能物質の量を減少させるのに有効な時間接触させ ながら前記気圧を維持する段階よりなる。 加えてこの発明は、骨が大気圧以下の気圧で接触する前、その期間中、あるい はその後で温度上昇を受ける方法を提供する。 この発明のこれらの、また他の見地、特徴、および利点はこの直後に続く発明 の詳細な説明に従って説明される。 図面の簡単な説明 第１図は骨の中の除去可能物質への接近を容易にするのに適したドリル穴の部 位を示す大腿骨の図形である。 第２図は骨の中の除去可能物質への接近を容易にするのに適したドリル穴の部 位を示す大腿骨頭の図形である。 第３図は骨の中の除去可能物質への接近を容易にするのに適 したドリル穴の部位を示す大腿骨頭の図形である。 第４図は骨の中の除去可能物質への接近を容易にするのに適したドリル穴の部 位を示す右大腿骨頭の図形である。 第５図はこの発明の実施に従って生産される改良された骨を示す写真である。 本発明の詳細な説明 この発明に従って、骨を処理しそれを移植に適するようにする単純で安全かつ 有効な方法が提供され、この方法は、 ａ）前記骨を細菌、菌類、ウイルスおよび寄生生物を不活性化するのに有効な 汎用除染剤と接触させ、 ｂ）前記骨を洗浄し、また ｃ）前記洗浄された骨を細菌、菌類、ウイルスおよび寄生生物を不活性化する のに有効な汎用除染剤と接触させることにより前記洗浄された骨を最終的に除染 する、 ことよりなる方法が提供される。 前記の方法の（ｂ）の段階で使用出来る骨を洗浄し、温度を上昇させ高圧洗浄 条件下でこの骨を洗浄剤と接触させることを含む方法が提供される。 この開示の目的のために、「骨」という用語はもっとも一般的な意味で使用さ れ、すべての骨、骨片、靭帯および腱などの結合組織の付着した骨塊、ならびに 粉末化骨調製品および粉末化脱塩骨調製品を含むすべての種類のヒトあるいは動 物の骨組織を含む。 初期あるいは一次除染は、細菌、ウイルス、真菌および寄生生物を不活性化す るのに有効な汎用除染剤に骨を接触させるこ とにより達成される。 接触時間は病原菌を有効に不活性化させるのに十分なものでなければならない 。望ましくは骨は汎用除染液に少なくとも２分以上、望ましくは１０分以上およ びもっとも望ましくは少なくとも１時間以上浸漬される。この初期除染浸漬の間 に、骨は肉眼で見える外部組織や脂肪の挫減組織切除のため溶液からとり出され 、次いで更なる浸漬のために溶液に戻される。 汎用除染剤は細菌、ウイルス、菌類および寄生生物を不活性化するのに有効な ものでなければならない。望ましい除染剤はヨードフォアである。有用なヨード フォアはポリビニルピロリドン−ヨウ素（ＰＶＰ−Ｉあるいはポビドンヨウ素） 調製品を含み、これはパーデューフレデリックカンパニー（旧ＧＡＦ）、および ＢＡＳＦの各社から商業的に得られる。この発明の実施に有用なＰＶＰ−Ｉ調製 品は、ＢＡＳＦのＰＶＰ−ヨウ素１７／１２のように分子量２０，０００以下の ものを含む。 望ましいＰＶＰ−Ｉ調製品は１００，０００以下の分子量を持つものであり、 特に約３５，０００の平均分子量すなわち約２６−３２のＫ値を持つもの、例え ばＢＡＳＦ社のＰＶＤ−ヨウ素３０／０６である。 選択肢として、適切なヨードフォア液は、望ましい分子量を持つ錯化剤の溶液 （ＰＶＰ−Ｉの場合はポリビニルピロリドン）と分子ヨウ素を望ましい利用出来 るヨウ素濃度を与えるのに十分な量で混和することによって調製される。例えば 、重量で約１％の利用可能なヨウ素濃度は、ＰＶＰ ９０ｇを水に溶 解し、次いで攪拌しながらヨウ素１０ｇを加え、最後に全体の量が１リットルに なるように十分な量の水を加えることにより得られる。望ましい利用可能ヨウ素 濃度を供給するＰＶＰ−Ｉ液を得るために、ヨウ素に対するＰＶＰの比率の異な るものも使用することが出来る。適切な利用可能ヨウ素濃度は、溶液に対するヨ ウ素の割合が重量で０．０３乃至１％であり、望ましくは０．１％乃至０．５％ である。 多様な病原菌（細菌、菌類、寄生生物およびウイルスを含む）を不活性化する ことが確かめられた他の除染剤は、過酸化水素、エタノール、オゾン、エチレン オキシド、照射および前記のものを組合せ、およびＰＶＰ−Ｉと共用するものな どである。 汎用除染剤液は細菌、ウイルス、菌類および寄生生物を不活性化するのに有効 な濃度のものでなければならない。一次除染液のヨードフォア濃度は望ましくは 重量で０．５乃至１０％であり、もっとも望ましくは１乃至５％であり、利用出 来るヨウ素濃度は０．０５乃至１％で望ましくは重量で０．１乃至０．５％の範 囲内にある。ＰＶＰ−Ｉの濃度は望ましくはＰＶＰ−Ｉの重量で０．５乃至１０ ％、もっとも望ましくは１乃至５％の範囲内にあり、その場合利用出来るヨウ素 濃度は重量で０．０５乃至１％、望ましくは０．１乃至０．５の範囲内にある。 一次除染液は洗浄剤を含み、それは望ましくは重量で溶液の０．１乃至５％、 より望ましくは１乃至３％、またもっとも望ましくは０．１乃至１％の濃度であ る。陰イオン、陽イオン、 両性および非イオン性洗浄剤が適している。望ましい洗浄剤はポリエトキシエチ レンエーテル（例えばユニオンカーバイドに るもの）、あるいはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（いろいろの メーカーの中でもＩＣＩおよびシグマで市販されているトゥイーンシリーズ）な どの非イオン性洗浄剤である。もっとも望ましい洗浄剤はオクチルフェノキシポ リエトキ である。ポリオキシエチレンソルビタンの中では、ポリオキ ８０）がもっとも望ましい。有利なことには、一次除染は（重 １％の溶液に少なくとも２分もしくはそれ以上、望ましくは１０分もしくはそれ 以上で、もっとも望ましくは少なくとも１時間以上浸漬することで達成される。 もっとも有利な一次除染手順は、骨をＰＶＰ−Ｉの１乃至約５％溶液で洗浄剤 に少なくとも約１乃至２時間浸漬することを含むことが最近確認された。望まし くはＰＶＰ−Ｉの各種濃度で錯化ヨウ素に対する遊離ヨウ素の比率に従って、こ の段階のもっとも望ましい調節方法は、まず骨をＰＶＰ−Ｉ ５％のも ことが確認された。 実施例１で示すように、この発明の初期除染段階は従来の技術による抗生物質 混合液よりはるかに有効である。ＰＶＰ−Ｉ は、その速やかな作用、それが（ウイルス、細菌、菌類、および寄生生物を）不 活性化出来る病原菌の広いスペクトル、更にヒト組織に対する比較的低い毒性と いうことで望ましい除染剤である。更に、ＰＶＰ−ＩはＨＩＶを不活性化するこ とが発見された。初期除染段階は骨からの感染のリスクを著しく減少することに より骨被移植者を保護するのみならず、研究所の技術者をも保護する。ＰＶＰ− Ｉ、あるいはＰＶＰ−Ｉおよび洗浄剤を含んでいるかどうかを問わず、初期除染 液は軟組織、脂肪、および血液生成物を最初から緩めもしくは軟化させることで 骨の洗浄化をたやすく行わせる。 一次除染後の洗浄は従来の方法により行われるが、望ましくは脂肪、骨髄およ びその他のデブリを除去するように骨を洗浄剤に接触させることで実行される。 洗浄剤は細胞（例えば血球）を溶解し、脂肪を溶解し、骨髄を構成するタンパク 質を可溶化する。洗浄手順は撹拌およびもしくは温度上昇を含む。強い撹拌がも っとも望ましく、それは旋回撹拌器で行うことが出来る。このような洗浄は骨髄 、細胞、脂肪およびデブリがごくわずかしかない骨を生産し、かくして病原菌を 宿す細胞、およびもしくは免疫応答を起こす生体分子を除去することにより被移 植者に対し更なる安全の限度を増やすものとなる。 適切で望ましく、またもっとも望ましい洗浄剤は、一次除染段階のための前記 のものと同じである。洗浄剤の濃度は重量で約０．１乃至５％、より望ましくは １乃至３％でもっとも望ましくは約０．１乃至１％であることが推奨される。ヨ ードフォアは洗浄剤含有液に０．１乃至１０％の濃度で加えることが出 来るけれども、その追加は省略することが好ましいということが確認された。 もっとも有利な場合としては、骨は高温で高圧洗浄条件の下で洗浄液で洗浄さ れる。高圧洗浄条件は、洗浄液を骨内部基質に押し込むのに十分なる力を供給す る。このような高圧洗浄条件は、旋回ペンキ缶撹拌器を使った場合のような強い 撹拌、あるいは高圧（もしくは高速）液体ジェット流を使った場合のような高圧 洗浄を含む。適切なペンキ缶撹拌器はレッドデビルで製作されたもの、望ましく はモデル＃Ｏ−５４００−ＯＭ（６１５ｒｐｍおよび０．２５馬力）を含む。液 体ジェット流の圧力は望ましくは１００乃至３，０００ｐｓｉであり、もっとも 望ましくは５００乃至１，５００ｐｓｉである。もっとも望ましくは、液体ジェ ット流は無菌でありまた洗浄剤を含む。洗浄は、２０℃乃至８０℃の範囲、およ び望ましくは３７℃乃至８０℃の昇温で、もっとも望ましくは約５０℃乃至６５ ℃で実施されると著しく加速され、より十分に行き渡る。高圧洗浄は骨髄の密度 を効率よく粗くし、格子状骨基質内でデブリを連続的に除去する。この高圧洗浄 手順に続いて、骨は標準方法により処理された骨と比べて著しく清浄化され、よ り白くなる（第５図参照）。 洗浄を促進するために、洗浄操作の間に例えば骨を新鮮な液に移転することで 液はとり替えられる。望ましくは液は少なくとも２回とり替えられる。洗浄の後 、洗浄剤は無菌水で繰返し洗浄することにより最終的には除去される。エタノー ルなどの生物学的許容アルコールもまた洗浄剤を除去するために使用さ れる。アルコールが使用される場合、それは無菌水ですすぎ洗いされて除去され ねばならない。 付着結合組織を持つ骨塊が洗浄される場合には、（例えば腰、靭帯、半月など の）結合組織は洗浄剤との接触を避けるためにプラスチックラップあるいは無菌 掛け布のような無菌のおおいを掛けねばならない。 骨は更に殺菌性を持つ過酸化水素に接触させることにより洗浄され除染される 。洗浄剤での洗浄の後、骨は０．５乃至１０％、望ましくは３％の過酸化水素溶 液に更に白化および微量の脂肪の除去に十分な時間移される。撹拌も行われる。 保温時間は５乃至１２０分が適しており、望ましくは５乃至６０分であり、もっ とも望ましくは１５乃至３０分である。この処理の後、残存過酸化水素が無菌水 での微底的な洗浄により除去される。 洗浄の後、骨は包装に先立ち最終的に除染される。この最終除染は、骨を汎用 除染剤に少なくとも２分以上、望ましくは１０分以上、もっとも望ましくは３０ 乃至６０分あるいはそれ以上接触させることで実行される。もっとも望ましい汎 用除染剤は１％（重量／容積）でのポリビニルピロリドンヨウ素である。 軟骨あるいは結合組織が存在する場合には、除染剤および洗浄液は望ましくは 塩化ナトリウムあるいは他の生物学的許容塩を含み、その量は軟骨あるいは結合 組織内でＰＶＰ−Ｉが濃縮するのを妨げるのに十分な量である。望ましくは塩化 ナトリウム０．０１乃至０．７５Ｍ、またもっとも望ましくは塩化ナト リウム０．１５Ｍが使用される。 最終除染に使用される汎用除染剤は、無菌水での洗浄により骨から除去される か、もしくは骨を病原菌から更に守るために薄い被膜として残される。こうした 被膜骨は凍結乾燥される。 もっとも望ましくはＰＶＰ−Ｉ被膜が形成されることである。骨に付着するＰ ＶＰ−Ｉ溶液は豊かな黄金の琥珀色を与え、これは骨が処理されていることのイ ンジケータとして役立つ。望ましければ、琥珀色骨は直接凍結乾燥され、包装さ れ、室温で貯蔵され、望ましくはアンバージャーで貯蔵される。組織を凍結乾燥 させる各種の方法がこれまでにも知られているが、骨を凍結乾燥するのに適した 一つの方法は、約１０乃至１６８時間、望ましくは約２０乃至２８時間凍結乾燥 するものである。凍結乾燥骨にある残存ＰＶＰ−Ｉは洗浄によるかあるいは移植 後の体液により除去されるまでたえず保護を続ける。同様に、骨は他の適切な汎 用除染剤、ＰＶＰ−Ｉ、あるいはその混合物により被膜される。 選択肢としては、残存汎用除染剤は無菌水ですすぎ洗いされるかもしくは化学 反応で不活性化される。かくしてもともと灰色がかった白色の骨の色は元に戻る 。ヨードフォアは、必要とされる浸漬時間が経過した後に、アスコルビン酸ナト リウムあるいはチオ硫酸ナトリウムなどの還元剤を浸漬液に追加することにより 化学的に不活性化される。還元液は残存分子ヨウ素を不活性化するのに十分なモ ル濃度および量のものでなければならない。例えばアスコルビン酸ナトリウム１ Ｍの５０乃至 １００マイクロリットルはＰＶＰ−Ｉ、１％の１０ｍｌを不活性するのに十分な ものとなる。この処理は溶液を暗褐色から明るい色に戻し、骨を自然色に返す。 最終除染段階の後、骨は貯蔵のため冷凍乾燥あるいは冷凍保存もしくは新鮮凍 結される。 ここで開示された方法で処理された骨が、例えば骨移植、股関節部手術および 膝手術などの骨が必要とされるすべての治療用途に適している。 本発明提唱の詳細な説明 現在行われている移植手順に関連して、感染能および免疫原性の重大なリスク を効果的に最小化する移植用骨を供給することのできる技術の必要性が認識され ている。不幸なことに、移植目的のための骨の調製が非常に困難であることが判 明したが、それは骨の構造が骨の洗浄および除染に有用な物質の有効量の骨への 浸透を防ぐ構造（内部基質）の存在によるものであった。 骨はその硬さを無機質の柔らかい有機物基質への沈着に負っている結合組織の 特殊な形態である。骨内部基質は、従来の技術では、その構造に組織されるもの として典型的に見出される（目の詰んだ）皮質型あるいは（海綿状）（小柱）格 子状型の骨内部で見出される物質を引用するものと理解されており、例えば骨液 、血管外および血管内液、石灰質化骨基質、（赤色あるいは脂肪骨髄を含む）骨 髄および骨髄細胞、骨形成原細胞、細胞外および細胞内脂質、および赤血球を含 む。このような物質（但し一般的に硬質化骨基質を除く）は従来の技術では除去 可能物質である。つまりそれらのものは望ましくはその洗浄およびもしくは除染 の際に骨から除去されると認識され、しかし一方このような物質は骨およびそれ が占めている空隙に対して親和性、典型的には基本的親和性を持つものとしても 認識されている。この発明の目的のために基質の除去可能部分は、水を主成分と する洗浄あるいは除染液が水流で室温で標準家庭用管口圧での水源から約１乃至 ５分間供給される場合、骨試料と接触された前記液は前記物質を取り除くことが 出来ない時には前記骨試料に対し基本的親和性を持つと言われる。 この発明の親実施例で提供されるように、内部基質の前記物質は骨の洗浄およ び除染を基本的に妨げる。明白に示されているように、この発明の本実施例の展 開は、移植を意図する骨からの直接あるいは間接的なそのように基質物質の除去 を大幅に促進し、骨試料が大気圧以下の気圧に接触（あるいは設置）される環境 下にそれを置くことによりそれが行われる。この発明の実施に従って、大気圧は ガス圧力の約１．０気圧を意味するものと理解される。 基質内で細胞外あるいは細胞内脂質として見出される脂質が、基質の除去可能 成分（例えば骨髄、細胞、抗原高分子、あるいはそのいずれかのデブリおよび脂 質それ自身）を基本的に固定する傾向があり、更にまたここで親実施例に記述さ れるもののように、洗浄および除染手順によるこのような成分の除去を妨げある いは制限するということが発見された。理論通りに制限されることなしに、水性 洗浄あるいは除染液は骨髄の詰め込まれた細胞の存在および脂質の疎水性障 害のため、骨内部基質に効果的に浸透出来ないということが考えられる。 この効果は基本的なものである。というのは、例えば脂肪細胞は骨基質の重要 な構成要素であり、黄色骨髄はほぼ完全に脂肪細胞で構成されている（例えばタ ナカ，Ｙ．およびグッドマン，Ｖ．Ｒ、「ヒト血球の電子顕微鏡検査」第７章、 ３８０ページ、ニューヨーク、ニューヨーク、ハーパーアンドロー、１９７２年 ）。従ってこの発明の本実施例の望ましい一つの見地はあらかじめ確認された量 の除去可能物質を含む骨内部基質を含み、前記基質は更に前記除去可能物質を基 本的に固定するあらかじめ確認された量の脂質を含み、前記方法は前記のあらか じめ確認された量以下に前記脂質の量を減少させるのに有効な時間で大気圧以下 の気圧に前記基質を接触させる段階を含む。 水を主成分とする洗浄液あるいは除染液が標準家庭用管口圧近くで、水源から 室温で水流として約１乃至５分骨試料に接触される場合その液が前記物質を取り 除くことが出来ない時には、一定量の脂質は骨基質の除去可能物質を基本的に固 化するものと述べられている。 この発明の目的のために、「脂質」は、例えばトリグリセライド、遊離脂肪酸 、コレステロールおよびそのエステル類、およびレシチンおよびスフィンゴミエ リンなどのような「極性を持つ」脂質を含む従来の技術によりそのようなものと して認識されるすべての物質を含む。 移植可能な骨の調製 移植に適した骨は、骨を大気圧以下の気圧と接触させる段階、および前記接触 の前あるいは後のいずれかで骨を洗浄剤もしくは除染剤よりなる溶液にも接触さ せることを含む少なくともも一つの追加段階よりなる方法を利用して調製される 。望ましくは少なくともも一つの追加段階は、脂質の除去による基質への流路開 口を利用するために、低圧の気圧と接触させた後に行われる。この発明の親実施 例は、数多くの追加の洗浄および除染段階を明確に記述しているが、それは特殊 な洗浄あるいは除染手順を定義するために連続して組合わされ昇温で行われた。 望ましい除染剤は前にも述べたように、エチルアルコール、過酸化水素、クロル ヘキシジン、次亜塩素酸塩およびＰＶＰ−Ｉ（とりわけ約１００，０００以下の 分子量を持つもの）のようなヨードフォアを含む。これと関連し、昇温は、約３ ７℃以上を、望ましくは約３７℃から約８０℃を、もっとも望ましくは約５０℃ 乃至約６５℃を意味するが、最適温度は個別の試料により決定される。洗浄およ び除染段階もまたこの発明の親実施例および本実施例の実施に従って３７℃以下 で行われる。 この発明の現行の展開の実施にもとづき使用される「骨」という用語は、もっ とも一般的な意味で使用され、すべての型のヒトあるいは動物の骨組織を含み、 全骨、骨片、靭帯および腱のような付着結合組織を伴う骨塊を含み、その試料は 患者に自然な骨の完全性を取り戻すことが出来るようにし、また移植の部位で重 量を支えることが出来、その骨片は典型的には少なくとも一つの寸法が約１０ｍ ｍもしくはそれ以上である。この発 明の実施に有用なものとして代表的な骨の試料はジョージア，マリエッタ，クイ オライフ オルソペーディスク，インコーポレイテッドより入手出来る以下の製 品である（典型的には、登録商標ＶＩＰ，ウイルス不活性化プロセス（の略称） の名称で販売されている）：格子状ブロック（塊）；格子状キューブ（立方体） ；顆、全体；皮質細片および支柱；ダウエル，二皮質クロワード；ダウエル，二 皮質クロック；ダウエル、腸骨三皮質クロック；ダウエル、膝蓋骨三皮質クロッ ク；大腿骨、遠位；大腿骨頭；腓骨、全体；上腕骨頭；腸骨、全体；腸骨板；下 顎骨、半分；骨盤、全体；助骨、中間物；回旋筋蓋；および尺骨、全体。ここで 骨の定義から除かれているものは、粉末化骨調製、粉末化脱塩骨調製および骨切 削であり、これらの除外されたものすべてのものは共通して次のような特性を有 している：（１）これらのものは重量支持骨構造ではなく、そこで例えば患者の 脛骨あるいは大腿骨の皮質骨の厚さが約５ｍｍ以下であるため治療関係において 重量を支えることが出来ない。（２）また切削あるいは粉末化骨試料の量当り表 面積の比率が非常に高いため、その脂質はそこにある除去可能物質の固定化には 事実上関係しない。 大気圧値以下のいずれかの気圧の利用はこの発明の実施の範囲内にあるが、（ 以下の実施例６から１０を参照し）０．７ａｔｍあるいはそれ以下の気圧が一般 に有効な効果を得るために必要とされ、約０．３ａｔｍ乃至約０．１ａｔｍの気 圧が一般にはもっとも望ましい。大きな骨片（例えば大腿骨頭、遠位大腿骨およ び近位脛骨など）はかなり大きい格子状領域 を持ち、約０．２乃至０．１３ａｔｍの気圧で最良に処理される。特定の骨片を 使用する最適気圧は特定の用途に応じて決定され、１乃至それより低い気圧接触 段階より先行する他の洗浄あるいは除染段階の特異な配列および組合せに依存す る。骨の大気圧以下の気圧との接触を実施する最適温度は一般に約２０℃乃至６ ０℃である。同じように大気圧以下の気圧を維持する最適時間は一般に３０分乃 至６０分の範囲内にあるが、血液および脂質抽出の進行状態を監視することによ り、各用途で決定することが出来る（実施例１０参照）。２分以内で大気圧以下 のガス圧力を利用することは一般に効果がなく、また、５時間以上になる利用も 無益である。 しかしこの発明の実施と関連し、またそれに有用な低大気圧の条件を最適化す ることと関連して、あまりにも低い圧力の利用もまた一般に効果のないことが確 認された。あまりにも低い圧力の利用は乾燥凍結設備で見られるものとは異なる 凍結効果を生じる、つまり骨の除去可能物質は最初は速やかに骨を残すが次いで その後の洗浄あるいは除染が脂質を含む物質の原位置での凍結により行えなくな る。このような失敗が生じる的確な低い圧力は、脂質、血液および骨髄、また骨 表面域などを含む数多くのパラメータの関数として変化するが、０．００１ａｔ ｍが受け入れられない圧力の代表例である。受け入れられない低い圧力の範囲は 骨試料および設備のいずれか特別な組合せで決定される。 更に、骨内部基質試料への１．０ａｔｍ気圧以下の気圧の直接あるいは間接的 な接触が試料への十分な深さを持つ１個もし くはそれ以上の穴をあけることで促進されることが発見された（例えば下記実施 例７から１０、および図１から４を参照）。この発明のこの見地と関連して、以 下の事項がガイドラインとして役立つ。 （１）従来の技術で認められているように、穴は最小量の重さに耐える骨試料の 区域に出来るだけ穴があけられねばならない。例えば、大腿骨の場合には図１か ら４までを参照のこと。 （２）望ましくは骨試料の性質にも依存するが、穴は５ｍｍから１００ｍｍの深 さであり、ヒト大腿骨を含む多くのヒト骨試料では約１０ｍｍから約３０ｍｍの 深さのものが望ましい（実施例７から１０までを参照のこと）。穴の数、大きさ 、深さおよび位置は専門家の幅広い自由裁量に任されるけれども望ましくは穴は 口径約０．５ｍｍから約３ｍｍの間にある。 下記の代表的な実施例はこの発明の親実施例および本実施例を説明しより詳細 に記述するのに役立つであろう。 実施例１ 段階１：一次除染 ヒト骨が採取され、培養され、下記の各種細菌および菌類で汚染された。 ブドウ球菌属（コアグラーゼ陰性） 腸球菌属 鵞口瘡カンジダ アシネトバクター属アニトラトゥス 肺炎杆菌 腸骨はＰＶＰ−Ｉ（ポリビニルピロリドン−ヨウ素，ＧＡＦ（ゼネラルアニリ ンアンドフィルム）よりのＣ１５複合体）の５％溶液に浸漬された。粗い外部組 織および脂肪は除去され、骨はＰＶＰ−Ｉ ５％に１時間戻されそれから残存汚 染を（５回の反復実験で）検査された。 下記の表は食塩水、正の対照、およびバシトラシン／ポリミキシン混合液で保 温した現在の方法での比較を示したものである。 溶 液 全微生物数／骨 処理前 8,700 処理後 食塩水 11,000 抗生物質混合物 4,300 ＰＶＰ−Ｉ ５％ 330 この結果は病原菌の数を減少するのにＰＶＰ−Ｉが抗生物質処理よりも優れて いることを示している。 段階２：洗浄 骨は３７℃でオクチルフェノキシポリエトキシエタノール プジャーに移され、ペンキ缶シェーカー（レッドデビルで製造されたモデル番号 ０−５４００−ＯＭ）で１０分間激しく振り を移した後、骨は一晩（約１５乃至１８時間３７℃−４２℃で）保温され、それ から１０分激しく振り混ぜられた。骨は新 く振り混ぜられた。残存骨髄は無菌水の洗浄により除去された。 次に、骨は過酸化水素 ３％内に置かれ、１０分振り混ぜられ、全部で６０分 保温された。 洗浄骨は洗浄により無菌水で十分に洗われ、洗剤泡の徴候がなくなるまですす ぎ洗いされた。 段階３：最終除染 洗浄骨は室温でＰＶＰ−Ｉ、１％内に置かれ、１０分激しく振り混ぜられ、次 いで合計３０分保温され、溶液から取り出された。 段階４：貯蔵 望ましければ、ＶＰＶ−Ｉは骨の上で乾燥することが出来、それにより骨に豊 かな黄金色および病原菌に対する更なる保護を与えることが出来る。被膜骨は次 いで凍結乾燥される。同様にもし望ましければ、骨はＰＶＰを用いて骨の上で乾 燥し、ＰＶＰで被覆することが出来る。 実施例２ 段階１．一次除染 ヒト膝が一体として地方調達局により採取され、包装され、濕潤氷にのせて、 骨処理研究所に運ばれた。 処理研究所において、膝はＰＶＰ−Ｉ、１−５％、酸化ナトリウム０．１５Ｍ 内に１０乃至６０分置かれる。 段階２．組織の調製および洗浄 下記の膝組織が隣接する骨塊と共に取り出される。 膝蓋骨腱 後十字靭帯 前十字靭帯 半月 これら各組織片は余分の組織および脂肪を除去するため刈り込まれる。靭帯あ るいは腱は無菌外被（例えばプラスチックラップあるいは無菌掛け布）で包まれ 、一方骨塊は温かい り、次いで無菌水あるいは食塩水による十分なすすき洗いにより洗浄される。 段階３．最終滅菌 組織はＰＶＰ−Ｉ、１％、塩化ナトリウム０．１５Ｍに置かれ、室温で１時間 ゆっくり振り混ぜられ、無菌水あるいは食塩水で十分にすすぎ洗いされる。各片 は冷凍保存され、包装され、液体窒素で貯蔵される。 実施例２（補足） 関連して、０．１％がその望ましい濃度であることが確認された。 実施例３ 段階１．一次除染 ヒト骨幹骨が地方調達局により採取され、包装され、濕潤氷にのせて骨処理研 究所に運ばれた。 骨処理研究所はこの骨をＰＶＰ−Ｉ、５％、トリトンＸ− 段階２．組織調製および洗浄 骨は余分の組織および脂肪を除くために挫滅組織切除さ れた。次いで骨は洗浄および温かい（４０−６５℃）トリトン すすぎ洗いにより洗浄された。 骨は骨ミル（摩砕機）でチップにされ、無菌水ですすき洗いされ、凍結乾燥さ れた。チップはテクマーミルで更に細かいサイズにすりつぶされた。 段階３。脱塩 骨粉は冷却した塩酸０．６Ｎで脱塩され、無菌水ですすぎ洗いされた。 段階４．最終除染 脱塩粉はＰＶＰ−Ｉ １％内に１時間置かれ、無菌水で十分にすすぎ洗いされ た。骨粉はガラス容器に移され、凍結乾燥され、包装され、室温で貯蔵された。 実施例４ ＰＶＰ−Ｉの不活性化に伴う最終除染 実施例１の骨と同様に処理された骨がＰＶＰ−Ｉ，１％、２０ｍｌ内に置かれ 、１時間保温された。保温に引き続き、０．９１アスコルビン酸ナトリウム０． １３２ｍｌが加えられた。この溶液は直ちに清浄化され、１０分後に骨は自然の 灰白色を取り戻した。 実施例５ この実施例は高圧／昇温洗浄剤洗浄法で得られた結果を、標準法により得られ たものと比較する。洗浄後、大腿骨頭は洗浄 の度合をよりよく示すために分裂された。 右側（図５）に示される大腿骨頭は６０℃でトウィーン８０、１％（容積）で ２日間保温され、その間ペンキ缶シェーカー（レッドデビルで製造されたモデル 番号０−５４００−ＯＭ）を使って１０分毎に撹拌された。大腿骨頭は次いで温 水で洗浄され、過酸化水素３％で２０分保温され、その後過酸化水素を除去する ために再び温水で洗浄された。 左側に示される大腿骨頭は標準方法に従って洗浄された。それは６０℃の温水 で１５分洗浄され、過酸化水素３％で１５−２０分間保温され、過酸化水素を除 去するために６０℃の温水で再び洗浄され、エタノール７０％で１時間保温され 、エタノールを除去するために６０℃の温水で再び洗浄された。図５はこのよう な洗浄骨の写真である。 実施例６ 大気圧以下の気圧を用いるヒト大腿骨の処理 ヒト供与者からの大腿骨が挫滅組織切除され、遠位端部から約１５ｃｍの所で 切断された。遠位部は真空乾燥器内の垂直位置に置かれ、大腿骨の頭部が最上部 に、主軸は最下部の位置に来るようにされた。真空（０．１５ａｔｍのチャンバ 圧で生じる水銀柱約２５インチ）が工業用真空ポンプ（ガスト、モデルＤＯＡ− Ｐ１０４−ＡＡ）を使用して１時間適用された。骨の温度は処理の時間中２０乃 至２５℃に維持された。約３７ｍｌの脂質が採取された。 溶液に６０℃で置かれ、次いで撹拌器（工業用ペンキシェー カー、レッドデビル、モデル５４００−ＣＭ）で１０分激しく振り混ぜられた。 保温は６０℃で約３時間続けられた。骨は次いで無菌水ですすぎ洗いされた。 実施例７ 多重骨内部基質試料から除去可能物質の置換を促進する大気圧以下の気圧の使 用 ヒト骨は挫滅組織切除され、近位大腿骨、近位脛骨、格子状ダウエル、および 腸骨ウェッジを含む骨片に切断された。骨試料は次いでヨードフォア５％（ＰＶ Ｐ−１、前記のＢＡＳＦ製品３０／０６）で５０分保温され、次いで前記ヨード フォア１％に移され３０分から６０分間保温された。穴（円筒形で１ｍｍ×１０ ｍｍ）が図１−４で示されるように大腿骨および脛骨片に開けられた（ダウエル は除く）。すべての骨片は次いで骨試料が脂質の受入れコンテナの上に配設され るように真空乾燥器内に置かれた。真空は１時間行われ、ガスト、モデルＤＯＡ −Ｐ１０４−ＡＡポンプを用いて水銀柱２５インチ（０．１６ａｔｍ）のチャン バ圧を生じ、骨はこの間約２３℃を維持された。脂質約３７ｍｌおよび血液７． ５ｍｌが採取された。 実施例８ 腸骨ウェッジからの除去可能物質の置換を促進する大気圧以下の気圧の使用 実施例７の手順に従って調製された腸骨ウェッジ（長さ約１．５インチ、横０ ．７５インチ）が６０℃の温水でのトリト 時々ゆっくり振り混ぜられ、次いで５０ｍｌの収集管に移された。真空が８０分 （水銀柱６２０ｍｍ）行われ、チャンバ圧は０．１５ａｔｍに導かれた（骨の温 度は２３℃に維持された）。脂質約０．８ｍｌが３０分の間に収集された。 実施例９ ヒト大腿骨試料の処理 この手順のために、ヒト供与者の左右の遠位大腿骨の試料が遠位端部から約５ ．５インクの所で切断された。右側大腿骨試料はポリミキシン／バシトラシン溶 液を用いる前記の従来認知された方法で処理されたが、一方左側大腿骨試料はこ の直後に記載されたウイルス不活性化法により処理された（実施例１も参照のこ と）。 従って、左側大腿骨試料はヨードフォア溶液５％（ＰＶＰ−Ｉ、５％、ＢＡＳ Ｆ製品３０／０６）に約１時間浸漬され、次いで新鮮ヨードフォア溶液（ＰＶＰ −Ｉ、１％、ＢＡＳＦ製品３０／０６）の１／２リットル量に移され、約１時間 後に挫滅組織切除された。約５個の穴（幅１−２ｍｍ、深さ１０−２０ｍｍ）が 次いで図４で示されるようにその皮質骨更には格子状骨域両方にわたり開けられ た。 温水でのすすぎ洗いおよび乾燥の後、骨は真空乾燥器に置かれ、水銀柱約２６ ｍｍが適用され、ガスト、モデルＤＡＡ−Ｖ１７５−Ｅ８ポンプを３０分使用し て０．１３２ａｔｍの圧が骨全体に加えられた。骨の温度は約２３乃至３５℃あ るいは若干それより上の温度であった。脂質約３０ｍｌが真空処理で除去された 。 ５分間温水洗浄の後、骨は次いで界面活性剤液０．１％内に置かれ、実施例８ で行われたように１０分撹拌された。新鮮界面活性剤液が次いで加えられ、溶液 がかなり清浄化されるまでこの方法が繰返された。骨は次いで界面活性剤液が加 えられ、６０℃で３時間保温された。水ですすぎ洗いした後、骨は過酸化水素３ ％水溶液に５−１５分移され、次いで水すすぎ洗いされた。洗浄骨は次いでヨー ドフォア液（ＰＶＰ−１）１％に１時間移され、水すすぎ洗いされ、その後コン テナは水を補充された。還元剤チオ硫酸ナトリウムが残存ヨウ素をヨウ化物に転 換するために加えられ、骨は貯蔵のため水で十分に洗われた。 この発明の移植可能な骨を従来の方法で利用出来た骨と比較するために、右側 大腿骨試料が前記の通り従来認知のポリミキシン／バシトラシン法に従って処理 された。従って、右側大腿骨試料は挫減組織切除され、温水のコンテナに置かれ た。コンテナは手で振り動かされ、脂質含有水は除去され、新鮮な温水が加えら れた。この方法は水の中の脂質の量が最小（約０．５時間）となるまで繰返され た。従来の方法から生じた骨は、例えば残存血液による赤茶色および残存脂質に よる油性残渣のように臨床利用水準の低さを証明する特性を残していた。 実施例１０ 気圧（大気圧以下）の効用としての大腿骨からの血液および脂質流の実例 単一の骨片（図４で示されるように１乃至２ｍｍで開けられた穴を持つ遠位ヒ ト大腿骨）のために有効な気圧が決定 された。手動真空ポンプが水銀柱２．５インチ（それぞれ約０．０８ａｔｍ）の 一定数で気圧を下げるために使用された。骨は各真空調節装置で５分間維持され 、生産された血液およびもしくは脂質滴量数は各時間期間で測定された。この結 果は以下の表１で示される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．移植用骨を調製する一つの方法であって、前記骨は除去可能物質よりなるそ れ自身に内部基質を含み、前記方法は前記骨を大気圧以下の気圧に接触させる段 階よりなることを特徴とする一つの方法。 ２．請求の範囲第１項記載の方法であって、ここで前記骨が前記気圧と接触して いる間除染剤あるいは洗浄剤との接触を維持されることを特徴とする方法。 ３．請求の範囲第１項記載の方法であって、更に前記骨あるいは前記骨基質を洗 浄剤あるいは除染剤よりなる液と接触させる段階を含むことを特徴とする方法。 ４．請求の範囲第３項記載の方法であって、前記気圧との前記接触に先立ち前記 骨あるいは前記骨基質を洗浄剤あるいは除染剤と接触させる段階を含み、更に前 記気圧との接触に続き前記骨あるいは前記骨基質を洗浄剤あるいは除染剤と接触 させる段階を含むことを特徴とする方法。 ５．請求の範囲第３項記載の方法であって、ここで前記除染剤が細菌、菌類、ウ イルス、プリオン、あるいは寄生生物の１個もしくはそれ以上の種あるいは菌株 を不活性化する能力を持つことを特徴とする方法。 ６．請求の範囲第１項記載の方法であって、ここで前記骨が前記気圧との接触の 前あるいは後で高圧洗浄条件を受けることを特徴とする方法。 ７．請求の範囲第６項記載の方法であって、ここで前記高圧洗浄条件が高速液流 での洗浄を含むことを特徴とする方法。 ８．請求の範囲第６項記載の方法であって、ここで前記高圧洗浄条件が激しい撹 拌を含むことを特徴とする方法。 ９．請求の範囲第１項記載の方法であって、ここで前記骨が前記気圧との接触の 前、接触中、あるいは接触後に昇温を受けることを特徴とする方法。 １０．請求の範囲第９項記載の方法であって、ここで前記昇温が約３７℃および 約８０℃の間にあることを特徴とする方法。 １１．請求の範囲第１０項記載の方法であって、ここで前記昇温が約５０℃およ び約６５℃の間にあることを特徴とする方法。 １２．請求の範囲第３項記載の方法であって、ここで前記除染剤がエチルアルコ ール、過酸化水素、クロルヘキシジン、次亜塩素酸塩、およびヨードフォアより なるグループから選択されることを特徴とする方法。 １３．請求の範囲第１２項記載の方法であって、ここで前記除染剤がヨードフォ アであることを特徴とする方法。 １４．請求の範囲第１３項記載の方法であって、ここで前記ヨードフォアが約１ ００，０００以下の分子量を持つポリビニルピロリドン−ヨウ素であることを特 徴とする方法。 １５．請求の範囲第１項記載の方法であって、ここで前記気圧の前記基質への接 触が前記骨に１個もしくはそれ以上の穴を開けることにより促進されることを特 徴とする方法。 １６．請求の範囲第１５項記載の方法であって、ここで前記１個もしくはそれ以 上の穴が最小の重量を支える前記骨の領域 に開けられることを特徴とする方法。 １７．請求の範囲第１６項記載の方法であって、ここで前記穴が口径約０．５ｍ ｍおよび約３ｍｍの間にあることを特徴とする方法。 １８．請求の範囲第１７項記載の方法であって、ここで前記穴の奥行きが約１０ ｍｍおよび約３０ｍｍの間にあることを特徴とする方法。 １９．請求の範囲第１項記載の方法であって、ここで前記気圧が約０．７ａｔｍ あるいはそれ以下の圧を持ち、また約２分および約５時間の間前記骨と接触を維 持されることを特徴とする方法。 ２０．請求の範囲第１９項記載の方法であって、ここで前記気圧が約０．３ａｔ ｍあるいはそれ以下の圧を持ち、また約３０分および約６０分の間前記骨と接触 を維持されることを特徴とする方法。 ２１．請求の範囲第１９項記載の方法であって、ここで前記気圧が約０．２ａｔ ｍあるいはそれ以下の圧を持ち、また約３０分および約６０分の間前記骨試料と 接触を維持されることを特徴とする方法。 ２２．請求の範囲第１項記載の方法であって、ウイルスの不活性化を促進するこ とを特徴とする方法。 ２３．骨を処理する一つの方法であって、前記骨に対し基本的な親和性を持つあ らかじめ確認された量の除去可能物質よりなる内部基質を前記骨がそれ自身に含 み、前記方法は大気圧以下の気圧に前記基質を接触させる段階よりなり、前記の 量の除去 可能物質を前記あらかじめ確認された値以下に減少させるのに有効な時間接触さ せる前記気圧を維持することを特徴とする一つの方法。 ２４．あらかじめ確認された量の除去可能物質を含む骨内部基質を処理する一つ の方法であって、前記基質は更に前記除去可能物質を固定するあらかじめ確認さ れた量の脂質を含み、前記方法は前記脂質の量を前記あらかじめ確認された量以 下に減少させるのに有効な時間前記基質を大気圧以下の気圧に接触させる段階を 含むことを特徴とする一つの方法。 ２５．骨を処理する一つの方法であって、前記骨は大気圧の下でまたその定めら れた空間内にあらかじめ定められた量の除去可能物質を持つ内部基質の部分を有 し、前記方法は前記定められた空間内に残存する除去可能物質の量を前記あらか じめ確認された量以下に減少させるのに有効な時間前記基質を大気圧以下の気圧 で外部空間を持ち接触させることよりなることを特徴とする一つの方法。 ２６．請求の範囲第１項記載の方法に従って生産される患者に移植するのに適切 な骨。 ２７．請求の範囲第２４項記載の方法に従って生産される患者に移植するのに適 切な骨。