RU2667960C2 - Способы лечения диабета и/или улучшения выживания панкреатических островков после трансплантации - Google Patents

Способы лечения диабета и/или улучшения выживания панкреатических островков после трансплантации Download PDF

Info

Publication number
RU2667960C2
RU2667960C2 RU2014146170A RU2014146170A RU2667960C2 RU 2667960 C2 RU2667960 C2 RU 2667960C2 RU 2014146170 A RU2014146170 A RU 2014146170A RU 2014146170 A RU2014146170 A RU 2014146170A RU 2667960 C2 RU2667960 C2 RU 2667960C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
seq
smad7
diabetes
cells
antisense oligonucleotide
Prior art date
Application number
RU2014146170A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2014146170A (ru
Inventor
Джованни Монтелеоне
Петер БУКВАЛД
Лука ИНВЕРАРДИ
Антонелло ПИЛЕДЖИ
Камилло Рикорди
Аличе ТОМЕИ
Original Assignee
Ногра Фарма Лимитед
Юниверсити Оф Майами
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ногра Фарма Лимитед, Юниверсити Оф Майами filed Critical Ногра Фарма Лимитед
Publication of RU2014146170A publication Critical patent/RU2014146170A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2667960C2 publication Critical patent/RU2667960C2/ru

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10Type of nucleic acid
    • C12N2310/11Antisense
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/33Chemical structure of the base
    • C12N2310/334Modified C
    • C12N2310/33415-Methylcytosine
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00Applications; Uses
    • C12N2320/30Special therapeutic applications

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к медицине и касается способа лечения и/или предотвращения диабета посредством предотвращения разрушения β-клеток панкреатических островков, где указанный способ включает введение нуждающемуся в нем пациенту эффективного количества антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, или его фармацевтически приемлемой соли. Группа изобретений также касается способа улучшения выживания клеток панкреатических островков после трансплантации. Также касается способа предотвращения гипергликемии посредством предотвращения разрушения β-клеток панкреатических островков. Группа изобретений обеспечивает предотвращение разрушения β-клеток панкреатических островков. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 3 пр., 7 ил.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Данная заявка испрашивает приоритет по патентной заявке США 61/625904, поданной 18 апреля 2012 г., полное содержание которой включено сюда посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение в общем смысле относится к антисмысловым олигонуклеотидам к SMAD7 и их применениям для лечения и/или предотвращения диабета и/или для улучшения выживания клеток панкреатических островков после трансплантации.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Диабет является метаболическим заболеванием, характеризующимся высокими уровнями сахара в крови. Двумя наиболее распространенными типами диабета являются сахарный диабет 1 типа и сахарный диабет 2 типа. Диабет 1 типа, или инсулинозависимый сахарный диабет, представляет собой хроническое аутоиммунное заболевание, характеризующееся распространяющейся потерей бета-клеток панкреатических островков, которые вырабатывают инсулин. Диабет 2 типа или инсулиннезависимый сахарный диабет, развивается, когда клетки мышц, жира и печени не могут нормально отвечать на инсулин (инсулинорезистентность). В частности, диабет 2 типа стал эпидемией, обусловленной увеличением ожирения и малоподвижного образа жизни и общим старением популяции во многих странах. В недавней клинической практике стало все труднее отличить сахарный диабет 1 типа от сахарного диабета 2 типа, поскольку многие дети с сахарным диабетом 1 типа имеют избыточный вес при диагностике, и у значительной части молодых людей с диагностируемым терапевтом сахарным диабетом 2 типа есть признаки аутоиммунного заболевания поджелудочной железы (Badaru, A. and Pihoker, C. “Type 2 diabetes in childhood: clinical characteristics and role of beta-cell autoimmunity,” Curr. Diab. Rep., 2012, 12, 75-81). В 2011 г. более 346 миллионов человек по всему миру болели диабетом.
Недавние исследования показали, что TGF-β (Трансформирующий фактор роста β, transforming growth factor β (TGF-β)) играет роль в функционировании панкреатических островков и развитии диабета (Moritani, M. et al. “Abrogation of autoimmune diabetes in nonobese diabetic mice and protection against effector lymphocytes by transgenic paracrine TGF-β1,” J. Clin. Invest., 1998, 102, 499-506; Olivieri, A. et al. “Serum transforming growth factor β1 during diabetes development in non-obese diabetic mice and humans,” Clin. Exp. Immunol., 2010, 162, 407-414). Например, было показано, что специфичная для островков импульсная экспрессия TGF-β на протяжении одной недели откладывает развитие диабета у мышей NOD (Wållberg, M. et al. “An islet-specific pulse of TGF-β abrogates CTL function and promotes β cell survival independent of Foxp3+ T cells,” J. Immunol., 2011, 186, 2543-2551), широко применяемой животной модели диабета 1 типа (Roep, B.O. et al. “Satisfaction (not) guaranteed: re-evaluating the use of animal models of type 1 diabetes,” Nat. Rev. Immunol., 2004, 4, 989-997). TGF-β1 был эффективным не только в лечении диабета у мышей NOD с диабетом и в ингибировании деструктивного аутоиммунного заболевания островков, но также в стимуляции регенерации островков (Luo, X. et al. “Systemic transforming growth factor-β1 gene therapy induces Foxp3+ regulatory cells, restores self-tolerance, and facilitates regeneration of beta cell function in overtly diabetic nonobese diabetic mice,” Transplantation, 2005, 79, 1091-1096). Следовательно, терапевтические вмешательства по ходу данного пути способны не только остановить прогрессию заболевания, но могут даже восстановить функцию (т.е. адекватный уровень выработки инсулина) после начала гипергликемии.
TGF-β 1-3 участвуют в разнообразных биологических функциях, включающих рост клеток, развитие органов, фиброгенез и регуляцию иммунных клеток. TGF-β1 является доминирующим среди экспрессирующихся в клетках иммунной системы, и в настоящее время он считается определяющим регулятором иммунных ответов, которые могут угнетать Т-клеточный ответ (Li, M.O. and Flavell, R.A. “TGF-beta: a master of all T cell trades,” Cell, 2008, 134, 392-404). В частности, TGF-β1 связывается с гетеродимерным трансмембранным серин/треониновым киназным рецептором, содержащим две субъединицы, TGF-β1 R1 и TGF-β1 R2. При связывании лиганда рецептор TGF-β1 R1 фосфорилируется конститутивно активным рецептором TGF-β1 R2, и сигнал передается в ядро белками, относящимися к семейству SMAD. Активированный TGF-β1 R1 напрямую фосфорилирует белки SMAD2 и SMAD3, которые затем взаимодействуют с SMAD4. Комплекс SMAD2/SMAD3/SMAD4 перемещается в ядро и регулирует транскрипцию определенных генов. SMAD7 является другим членом этого белкового семейства, который действует как общий антагонист TGF-β по механизмам отрицательной обратной связи (Yan, X. and Chen, Y.G. “Smad7: not only a regulator, but also a cross-talk mediator of TGF-beta signalling,” Biochem. J., 2011, 434, 1-1).
Исследования показали, что SMAD7 играет роль в диабете и функционировании β-клеток. Было показано, что внутриклеточный белок SMAD7 мешает связыванию SMAD2/SMAD3 с TGF-β R1, предотвращая фосфорилирование и активацию этих белков, приводя к ингибированию TGF-β1-опосредованной передачи сигнала. Было показано, что экспрессия SMAD7 в β-клетках поджелудочной железы нарушает передачу сигнала через TGF-β и вызывает обратимый сахарный диабет (Smart, N.G. et al. “Conditional expression of Smad7 in pancreatic beta cells disrupts TGF-beta signaling and induces reversible diabetes mellitus,” PLoS Biol., 2006, 4, e39). Более того, результаты, полученные на мышах NOD, тоже указывают на участие путей передачи сигнала через Smad2 и TGF-β в активированных дендритных клетках при развитии диабета, и существуют свидетельства, полученные в полногеномных исследованиях ассоциаций у человека, подтверждающие роль Smad7 в диабете 1 типа человека (Hook, S.M. et al. “Smad2: A candidate gene for the murine autoimmune diabetes locus Idd21.1,” J. Clin. Endocrinol. Metab., 2011, 96, E2072-E2077). Поскольку было показано, что TGF-β1 вносит вклад в подавление выработки цитокинов, ингибирование Т-клеточного ответа и индукцию регуляторных Т-клеток (Трег) (Kawamoto, K. et al. “Transforming growth factor beta 1 (TGF-β1) and rapamycin synergize to effectively suppress human T cell responses via upregulation of FoxP3+ Tregs,” Transpl. Immunol., 2010, 23, 28-33), регуляция SMAD7 также может способствовать трансплантации островков, поддерживая функцию трансплантата, ограничивая токсичность и предотвращая иммунное отторжение.
Таким образом, существует нереализованная потребность в новых видах терапии диабета и трансплантации панкреатических островков.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Раскрытые способы частично основаны на открытии специфических ингибиторов экспрессии или функции SMAD7, например, антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7, которые ингибируют SMAD7 и таким образом восстанавливают передачу сигнала через TGF-β. Примеры антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7 включают, например, SEQ ID No: 5 или SEQ ID NO: 6, которые можно применять в фармацевтической композиции. Описанные ингибиторы SMAD7 можно применять для лечения и/или предотвращения диабета, например, диабета 1 типа, диабета 2 типа и гестационного диабета. Антисмысловые олигонуклеотиды к SMAD7 также можно применять для улучшения выживания клеток панкреатических островков после трансплантации.
Вышеизложенные аспекты и варианты применения настоящего изобретения можно более полно понять, обратившись к следующим фигурам, подробному описанию и формуле изобретения. В данном контексте «включая» означает «без ограничений», и приведенные примеры не являются ограничивающими.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 (А) представляет нуклеотидную последовательность SMAD7 (SEQ ID NO: 1) и (B) представляет аминокислотную последовательность SMAD7 (SEQ ID NO: 2).
Фиг. 2 (А) представляет собой график, показывающий эффекты TGFβ и GED-0301 (антисмыслового нуклеотида к SMAD7, SEQ ID NO: 6) на активацию NF-κB в TNF-α-сенсорных клетках HEK-Blue, и (B) представляет собой график, показывающий эффекты TGFβ и GED-0301 на активацию NF-κB в CD40L-сенсорных клетках HEK-Blue, обработанных TNF-α и CD40L, соответственно.
Фиг. 3 (А) представляет собой панель, показывающую способ установки дискриминационного окна, применяющийся для анализа результатов проточной цитометрии по органоспецифичному поглощению флуоресцентно меченого GED-0301 после введения мышам разными путями, и Фиг. 3 (В) показывает соответствующий процент поглощения (FITC+) в живых клетках в тканях указанных органов.
Фиг. 4 представляет собой многоканальное микроскопическое изображение высокого разрешения, показывающее срезы поджелудочной железы контрольной мыши и мыши, которой подкожно вводили меченный флуоресцеином GED-0301 (через 4 часа после введения). Цветовое обозначение: зеленый - флуоресцентный GED-0301, серый - DAPI (маркер клеточного ядра), красный - инсулин (указывающий на вырабатывающие инсулин β-клетки) и синий - CD45 (указывающий на CD45 или общий лейкоцитарный антиген, LCA, маркер лейкоцитов, элементов кровеносной системы, которые включают клетки иммунитета и воспаления).
Фиг. 5 (А) представляет собой график, показывающий уровни глюкозы в крови у мышей NOD, обработанных антисмысловым олигонуклеотидом к SMAD7 GED-0301 (АС GED-0301), соответствующим смысловым контролем (С контроль) и физиологическим раствором (Контроль) (125 мкг/животное, подкожно (п/к), ежедневно) после начала гипергликемии, и Фиг. 5 (В) представляет собой соответствующую кривую выживаемости Каплана-Мейера, показывающую процент животных, остающихся без диабета, в зависимости от времени.
Фиг. 6 представляет собой график, сравнивающий результаты перорального глюкозотолерантного теста, проведенного у обработанных GED-0301 мышей NOD, которые не заболели диабетом к концу исследования (день 150), и у контрольных мышей.
Фиг. 7 показывает многоканальные Z-стопки конфокально-микроскопических изображений высокого разрешения, сравнивая репрезентативные содержащие островки срезы поджелудочной железы из обработанных GED-0301 мышей NOD, которые не заболели диабетом к концу исследования (день 150), и соответствующих контролей. Цветовое обозначение: синий - DAPI (маркер клеточного ядра), красный - инсулин (указывающий на вырабатывающие инсулин β-клетки) и зеленый - глюкагон (указывающий на вырабатывающие глюкагон α-клетки).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее раскрытие изобретения в общем смысле относится к антисмысловым нуклеотидам к SMAD7 и их применению для лечения и/или предотвращения диабета и/или улучшения выживания клеток панкреатических островков после трансплантации.
Анти-SMAD7 терапия
Описанные способы относятся к применению специфичного ингибитора SMAD7, выбранного из группы, состоящей из малых связывающих молекул, например, естественных или синтетических соединений, антител, аптамеров, интрамеров, антисмысловых молекул для РНК-интерференции (двухцепочечных РНК, киРНК (коротких интерферирующих РНК)) и анти-SMAD7 антисмысловых молекул для лечения и/или предотвращения диабета и/или для улучшения выживания клеток панкреатических островков после трансплантации. Ингибиторы SMAD7 также могут включать укороченные и/или мутантные молекулы SMAD7, которые влияют на с SMAD7 и которые таким образом ингибируют функцию SMAD7.
Например, анти-SMAD7 терапия включает целевые терапии против SMAD7 (например, анти-SMAD7 антисмысловые терапии, т.е. антисмысловые олигонуклеотиды к SMAD7 и антитела против SMAD7). Антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой короткие синтетические олигонуклеотидные последовательности комплементарные матричной РНК (мРНК), которая кодирует целевой белок (например, SMAD7). Антисмысловые олигонуклеотидные последовательности гибридизуются с мРНК, образуя двухцепочечный гибрид, который может привести к активации широко распространенных каталитических ферментов, таких как РНКаза Н, которая деградирует гибридные цепи ДНК/РНК, препятствуя таким образом трансляции белка.
В определенных вариантах применения настоящего изобретения антисмысловой олигонуклеотид анти-SMAD7 может действовать на сайты 403, 233, 294, 295, 296, 298, 299 и/или 533 (т.е. нуклеотиды 403, 233, 294, 295, 296, 298, 299 и/или 533, соответственно) в мРНК SMAD7 человека (например, из SEQ ID NO: 1) (см. Фиг. 1). В примере варианта применения настоящего изобретения антисмысловой олигонуклеотид анти-SMAD7 действует на нуклеотиды 403-423 мРНК SMAD7 человека.
В определенных вариантах применения настоящего изобретения антисмысловой олигонуклеотид можно получить из следующего антисмыслового олигонуклеотида анти-SMAD7 5'-GTCGCCCCTTCTCCCCGCAGC-3' (SEQ ID NO: 3).
Настоящее изобретение предусматривает, что антисмысловой олигонуклеотид, действующий на SMAD7, может включать смешанный остов, в котором остатки цитозина а паре CpG заменены на 5'-метилцитозин (кратко обозначаемый как Me-dC). Метилфосфонатные связи также можно поместить на 5'- и/или 3'-концы антисмыслового олигонуклеотида (кратко обозначаемые как MeP). Фосфонатный остов предполагаемых настоящим изобретением антисмыслового олигонуклеотида анти-SMAD7 может при необходимости включать 1, 2, 3, 4 или более тиофосфатных связей (например, тиофосфатные связи заменяют фосфодиэфирные связи). В одном варианте применения настоящего изобретения все фосфонатные связи могут быть тиофосфатными связями.
Примеры терапии антисмысловыми олигонуклеотидами, действующими на SMAD7, включают, но не ограничиваются следующими:
5'-GTXYCCCCTTCTCCCXYCAG-3' (SEQ ID NO: 4), в котором X представляет собой нуклеотид, содержащий азотистое основание, выбранное из группы, состоящей из цитозинового и 5-метилцитозинового или 2'-O-метилцитозинового нуклеозида, и где Y представляет собой нуклеотид, содержащий азотистое основание, выбранное из группы, состоящей из гуанинового и 5-метилгуанинового или 2'-O-метилгуанинового нуклеозида, при условии, что по меньшей мере один из нуклеотидов X или Y включает метилированное азотистое основание;
5'-GTXGCCCCTTCTCCCXGCAG-3' (SEQ ID NO: 5), в котором X представляет собой 5-метил-2'-дезоксицитидин-5'-монофосфат;
5'-GTXGCCCCTTCTCCCXGCAGC-3' (SEQ ID NO: 6), в котором X представляет собой 5-метил-2'-дезоксицитидин-5'-монофосфат;
5'-ZTXGCCCCTTCTCCCXGCAZ-3' (SEQ ID NO: 7), в котором X представляет собой 5-метил-2'-дезоксицитидин-5'-монофосфат и Z представляет собой 2'-дезоксигуанозинметилфосфонат;
5'-ZTXGCCCCTTCTCCCXGCAZC-3' (SEQ ID NO: 8), в котором X представляет собой 5-метил-2'-дезоксицитидин-5'-монофосфат и Z представляет собой 2'-дезоксигуанозинметилфосфонат.
В частном случае применения настоящего изобретения предполагаемая изобретением антисмысловая последовательность к SMAD7 может быть последовательностью, включающей один из:
5'-GTXGCCCCTTCTCCCXGCAG-3' (SEQ ID NO: 9), в котором X представляет собой 5-метил-2'-дезоксицитидин-5'-монотиофосфат;
5'-GTXGCCCCTTCTCCCXGCAGC-3' (SEQ ID NO: 10), в котором X представляет собой 5-метил-2'-дезоксицитидин-5'-монотиофосфат;
5'-ZTXGCCCCTTCTCCCXGCAZ-3' (SEQ ID NO: 11), в котором X представляет собой 5-метил-2'-дезоксицитидин-5'-монотиофосфат и Z представляет собой 2'-дезоксигуанозинметилтиофосфат;
5'-ZTXGCCCCTTCTCCCXGCAZC-3' (SEQ ID NO: 12), в котором X представляет собой 5-метил-2'-дезоксицитидин-5'-монотиофосфат и Z представляет собой 2'-дезоксигуанозинметилтиофосфат.
Например, SEQ ID NO. 9-12 включают 1, 2, 3, 4 или более тиофосфатных связей. В одном варианте применения настоящего изобретения все O,O фосфонатные связи в SEQ ID NO. 9-12 представляют собой тиофосфатные связи.
Способы лечения
Здесь представлены способы улучшения выживания органа и/или клетки, например, клетки панкреатического островка, после трансплантации, включающие введение нуждающемуся в них пациенту эффективного количества специфичного ингибитора экспрессии или функции SMAD7, например, антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7.
Также здесь представлены способы лечения и/или предотвращения диабета, например, диабета 1 типа и диабета 2 типа, включающие введение нуждающемуся в них пациенту эффективного количества специфичного ингибитора экспрессии или функции SMAD7, например, антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7.
Диабет включает группу метаболических заболеваний, характеризующихся высоким уровнем сахара в крови или кетоацидозом, а также хронические, общие метаболические нарушения, вызванные длительным повышением уровня сахара в крови или снижением толерантности к глюкозе. Диабет включает обе формы заболевания, диабет 1 типа и диабет 2 типа, гестационный диабет и другие состояния инсулиновой недостаточности.
Следует принимать во внимание, что описанные способы также применимы к лечению и предотвращению латентного аутоиммунного диабета (т.е. диабета 1,5 типа), метаболических нарушений, преддиабетического состояния, метаболического синдрома, нарушений, связанных с липидами или глюкозой, например, гиперлипидемии и/или гиперхолестеринемии и других связанных заболеваний.
Метаболические нарушения могут включать любое нарушение или заболевание или состояние, которые ассоциированы с повышенным уровнем глюкозы в плазме крови. Метаболическое нарушение, например, включает сахарный диабет, гестационный диабет, генетические нарушения функции β-клеток, генетические дефекты действия инсулина, заболевания экзокринной части поджелудочной железы, эндокринопатии, инфекции, вызванные лекарственными препаратами или химическими веществами, прочие генетические синдромы, ассоциированные с диабетом, преддиабетическое состояние и метаболический синдром.
Метаболический синдром характеризуется группой метаболических факторов риска у одного человека, как описано Американской кардиологической ассоциацией. Метаболический синдром также известен как метаболический синдром Х, синдром Х, синдром инсулиновой резистентности, синдром Ривена или «заболевание коронарных артерий, гипертензия, атеросклероз, ожирение и инсульт». Факторы риска включают, но не ограничиваются абдоминальным ожирением, атерогенной дислипидемией, гипертензией, инсулиновой резистентностью или непереносимостью глюкозы, протромботическим состоянием (высоким уровнем фибриногена или ингибитора активатора плазминогена 1) и провоспалительным состоянием (повышенным уровнем С-реактивного белка).
Термины «обрабатывать», «лечение», «лечить» и подобные применяют здесь для общего обозначения достижения желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Эффект может быть профилактическим в смысле полного или частичного предотвращения заболевания или его симптома и/или может быть терапевтическим в смысле частичного или полного излечения заболевания и/или нежелательного эффекта, относящегося к заболеванию. Термин «лечение» в данном контексте распространяется на любое лечение заболевания у млекопитающих, особенно у людей, и включает: (а) предотвращение возникновения заболевания у объекта, который может быть предрасположен к данному заболеванию, но у которого еще не было диагностировано данное заболевание; (б) подавление заболевания, т.е. прекращение его развития; или (в) облегчение заболевания, т.е. индукция регрессии заболевания.
В частных случаях применения настоящего изобретения ответ объекта на проведение анти-SMAD7 терапии можно интерпретировать относительно контрольного образца (описанного ниже), полученного у данного объекта перед лечением. Пациента можно определить как отвечающего на проведение анти-SMAD7 терапии при снижении экспрессии SMAD7; при повышении общего содержания инсулина поджелудочной железы; при поддержании и/или восстановлении функции β-клеток (например, по оценке с помощью стандартных способов, таких как внутривенный глюкозотолерантный тест, ВВГТТ); и/или при нормогликемии, т.е. при поддержании и/или восстановлении нормального уровня глюкозы в крови. В других вариантах применения настоящего изобретения объект, который получил трансплантат островка, например, аллогенный трансплантат островка, можно определить как отвечающий на проведение анти-SMAD7 терапии, если наблюдается предотвращение отторжения и/или более продолжительное выживание островков.
Опытный образец можно получить от пациента, например, на неделе 1, на неделе 2, на неделе 4, на неделе 8, на неделе 10 или позже после начала лечения, для определения чувствительности к терапии. В некоторых вариантах применения настоящего изобретения опытный образец можно получить, например, через одну неделю, две недели, три недели, четыре недели, пять недель, шесть недель, семь недель, восемь недель, девять недель, десять недель, одиннадцать недель, двенадцать недель, пять месяцев, шесть месяцев и/или один год или более после начала терапии для контроля чувствительности к лечению.
Контрольный образец может включать образец (например, образец крови или ткани), полученный от объекта перед проведением анти-SMAD7 терапии. Контрольный образец представляет собой исходный уровень для наблюдения за прогрессом пациента в ответ на лечение. Контрольный образец можно получить от пациента в первый день введения анти-SMAD7 терапии (например, в день 1 курса лечения). В других вариантах применения настоящего изобретения контрольный образец можно получить от пациента за один день до начала анти-SMAD7 терапии (например, в день 0 курса лечения). В качестве альтернативы контрольный образец можно получить от пациента за 2, 3, 4, 5, 6, 7 или более дней до начала анти-SMAD7 терапии. Например, повышенную или пониженную регуляцию определенных клеточных образцов можно измерить перед лечением (например, контрольного образца), во время лечения и/или после лечения для контроля ответа пациента на терапию, например, на анти-SMAD7 терапию.
Контрольный образец может включать, например, образец для наблюдения за уровнем глюкозы у объекта, в котором образец получали от объекта перед проведением анти-SMAD7 терапии.
В некоторых вариантах применения настоящего изобретения контрольный уровень для объекта можно установить на основании длительного наблюдения за определенными клеточными популяциями у объекта. В таких случаях считается, что объект может пройти много курсов лечения с помощью анти-SMAD7 терапии. Количество определенных клеточных популяций, определенное после проведения множества раундов терапии, можно сравнить с предыдущим контрольным уровнем у данного объекта, чтобы определить, отвечает ли объект на терапию и/или склонен ответить на последующее проведение анти-SMAD7 терапии. В других вариантах применения настоящего изобретения контрольный или исходный уровень для объекта можно установить на основании среднего измерений определенной клеточной популяции, определенного по множеству исходных образцов, полученных в течение времени (например, полученных в течение недель, месяцев или лет). В соответствии с этим, любой тест или анализ, проведенный, как описано здесь, можно сравнить с предшествующим или с установленным контрольным уровнем, и получение от объекта нового контрольного образца может не понадобиться для сравнения, например, если объект получает более одного курса лечения с помощью анти-SMAD7 терапии.
Введение и формула
В некоторых вариантах применения настоящего изобретения, здесь предусмотрены фармацевтические композиции, включающие предполагаемый изобретением антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 и фармацевтически приемлемый носитель. Например, фармацевтическую композицию можно вводить подкожно. В качестве альтернативы, фармацевтическую композицию можно вводить перорально.
В данном контексте «фармацевтически приемлемый носитель» обозначает буферы, носители и вспомогательные вещества, подходящие для применения при контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергического ответа и прочих проблем или осложнений, соответствующие разумному соотношению пользы и рисков. Носитель(и) должен быть «приемлемым» в смысле совместимым с другими ингредиентами в формулах и не вредным для реципиента. Фармацевтически приемлемые носители включают буферы, растворители, диспергирующие среды, вещества оболочки, изотонические и задерживающие адсорбцию агенты и подобные, которые совместимы с фармацевтическим введением. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ известно в данной области техники.
В одном варианте применения настоящего изобретения предусмотренный настоящим изобретением антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 и его фармацевтическую композицию можно вводить одним из способов, включающим пероральный, местный, парентеральный, например, подкожную инъекцию, ингаляцию спрея или ректальное введение. Термин парентеральный в данном контексте включает подкожные инъекции, введение в поджелудочную железу, внутривенную, внутримышечную, внутрибрюшинную, интрастернальную инъекцию или инфузионные способы. Например, антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 можно ввести объекту подкожно. В другом примере антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 можно ввести пациенту перорально.
Фармацевтические композиции, содержащие антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7, такие как описанные здесь, могут быть представлены в виде стандартной лекарственной формы и получены любым подходящим способом. Фармацевтическая композиция должна быть составлена так, чтобы быть совместимой с предполагаемым способом введения. Пригодные формулы можно приготовить с помощью способов, широко известных в фармацевтике. Например, см. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing Company, 1990).
Предпочтительно, чтобы фармацевтические формулы были стерильными. Стерилизацию можно провести, например, посредством фильтрации через стерильные фильтровальные мембраны. В случае лиофилизации композиции стерилизацию фильтрованием можно провести до или после лиофилизации и растворения.
В примере варианта применения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для подкожного введения антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7 включает антисмысловой олигонуклеотид, такой как представленный в SEQ ID NO: 6, или его фармацевтически приемлемую соль (такую как натриевая соль) и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом варианте применения настоящего изобретения таблетированная фармацевтическая формула для перорального введения антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7 включает интрагранулярную фазу, в которой интрагранулярная фаза включает антисмысловой олигонуклеотид, такой как представленный SEQ ID NO: 6, или его фармацевтически приемлемую соль (такую как натриевая соль) и фармацевтически приемлемый наполнитель, и которая может также включать экстрагранулярную фазу, которая может включать фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, такое как диспергирующее вещество. Например, фармацевтически приемлемая таблетка для перорального применения может включать интрагранулярную фазу, содержащую приблизительно от 5 до 10% по весу антисмыслового олигонуклеотида, представленного SEQ ID NO: 6, или его фармацевтически приемлемой соли, около 40% по весу маннитола, около 8% по весу микрокристаллической целлюлозы, около 5% по весу гидропропилметилцеллюлозы и около 2% по весу натрия крахмала гликолята; экстрагранулярную фазу, включающую около 17% по весу микрокристаллической целлюлозы, около 2% по весу натрия крахмала гликолята, около 0,4% по весу стеарата магния; и кишечнорастворимую оболочку таблетки, включающую около 13% по весу AcrylEZE® (см., например, публикация Договора Патентной Кооперации № WO/2010/054826, которая полностью включена в данный документ посредством ссылки).
Примеры формул включают лекарственные формы, которые включают или состоят в основном из приблизительно от 35 мг до 500 мг антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7. Например, здесь предусмотрены формулы, которые включают около 35 мг, 40 мг, 50 мг, 60 мг, 70 мг, 80 мг, 90 мг, 100 мг, 110 мг, 120 мг, 130 мг, 140 мг, 150 мг, 160 мг, 170 мг, 180 мг, 190 мг, 200 мг или 250 мг антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7. В одном варианте применения настоящего изобретения формула может включать около 40 мг, 80 мг или 160 мг антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7. Вводимое количество будет зависеть от таких переменных как тип и распространенность заболевания или показания, которое подлежит лечению, общего состояния здоровья пациента, активности антител in vivo, фармацевтической композиции и способа введения. Исходную дозу можно повысить выше верхнего уровня для быстрого достижения желаемого уровня в крови или ткани. В качестве альтернативы исходная доза может быть меньше оптимальной и дозировку можно постепенно увеличивать на протяжении курса терапии. Дозировку для человека можно оптимизировать, например, в стандартном исследовании с увеличением дозы фазы I, спланированном в интервале от 40 мг до 160 мг. Частота приема лекарственного средства может варьировать в зависимости от таких факторов, как способ введения, величина дозы и заболевание, которое подлежит лечению. Примеры частоты приема лекарственных препаратов включают один раз в сутки, один раз в неделю и один раз в две недели. В некоторых случаях применения настоящего изобретения дозировка составляет один раз в 7 дней. Предпочтительным способом введения является подкожный.
В некоторых вариантах применения настоящего изобретения способы, представленные здесь, могут дополнительно включать введение по меньшей мере одного агента, который предназначен для лечения заболеваний и нарушений, описанных здесь. В одном варианте применения настоящего изобретения другие предполагаемые агенты можно вводить совместно (например, последовательно или одновременно).
Предполагаемые агенты включают имууносупрессорные агенты, включающие глюкокортикоиды, цитостатики, антитела, агенты, действующие на иммунофилины, интерфероны, опиодиды, TNF-связывающие белки, микофенолат и малые биологические агенты. Например, предполагаемые иммуносупрессорные агенты включают, но не ограничиваются такролимусом, циклоспорином, пимерколимусом, сиролимусом, эверолимусом, микофеноловой кислотой, финголимодом, дексаметазоном, флударабином, циклофосфамидом, метотрексатом, азатиоприном, лефлуномидом, терифлуномидом, анакинрой, антитимоцитовым глобулином, антилимфоцитарным глобулином, муромонабом-CD3, афутузумабом, ритуксимабом, теплизумабом, эфализумабом, даклизумабом, базиликсимабом, адалимумабом, инфликсимабом и этанерцептом.
Предполагаемые агенты включают лекарственные терапии для регуляции уровня сахара в крови, включающие пероральные терапии гипогликемическими агентами и/или пероральными антидиабетическими агентами, инъекционные терапии и подобные. Безмедикаментозная терапия для регуляции уровня сахара в крови включает, но не ограничивается мерами по контролю диеты и/или физической нагрузки.
Пероральные лекарственные терапии для регуляции уровня сахара в крови включают гипогликемические агенты, которые могут включать, но не ограничиваются акарбозой, ацетогексамидом, хлорпропамидом, дарглитазоном натрия, глимепиридом, глипизидом, глибуридом, репаглинидом, троглитазоном, толазамидом и толбутамидом.
Пероральные лекарственные терапии для регуляции уровня сахара в крови включают антидиабетические агенты, которые могут включать, но не ограничиваются акарбозом, ацетогексамидом, буформином, гидрохлоридом бутоксамина, камиглибозом, хлорпропамидом, циглитазоном, энглитазоном натрия, гидгохлоридом этоформина, глиамилидом, глиборнуридом, глицетанилом глицлазидом натрия, глифлумидом, инсулин изофаном, человеческим инсулином с цинком, расширенным инсулином, инсулином лизпро, линоглиридом, Фуматаром линоглирида, метформином, метилпальмоксиратом, пальмоксиратом натрия, гидрохлоридом пиоглитазона, тартратом пироглирида, человеческим проинсулином, репаглинидом, ацетатом сеглитида, толазамидом, толбутамидом, толпиррамидом, троглитазоном и зополрестатом.
Инъекционные терапии для регуляции уровня сахара в крови могут включать, но не ограничиваются быстродействующим инсулином, инсулином длительного действия и родственный инсулин. Быстродействующий инсулин включает простой инсулин, быстродействующую суспензию инсулина с цинком и инсулин Semilente®, инъекцию Humalog®, Humulin® R, Iletin II, Novolin R, простой очищенный свиной инсулин и человеческий инсулин Velosulin BR. Инсулин длительного действия включает суспензию протамин-цинк-инсулин, расширенную суспензию инсулина с цинком, инсулин Ultralente® и Humulin® U. Прочие инсулины включают суспензию инсулина изофана, нейтральный протамин Хагедорна инсулин, инсулин изофан; суспензию инсулина с цинком Lente® инсулин, суспензию человеческого инсулина изофана/инъекцию человеческого инсулина, Humulin® 50/50, Humulin® 70/30 и Novolin® 70/30.
ПРИМЕРЫ
Настоящее изобретение ниже иллюстрирует следующие примеры. Примеры представлены исключительно в целях иллюстрации и ни коем образом не должны интерпретироваться как ограничивающие масштаб или содержание изобретения.
Пример 1: Действие антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7 на активацию NF-κB
TNF-α/IL-1β-сенсорные клетки HEK-Blue™ (InvitroGen) созданы для детектирования биоактивных TNF-α (Tumor Necrosis Factor α , фактор некроза опухоли α) и IL-1β (InterLeukine 1β, интерлейкин 1β) посредством наблюдения за активацией NF-κB пути. Эти клетки были созданы посредством стабильной трансфекции клеток эмбриональной почки человека HEK293 репортерным геном SEAP (секретируемая эмбриональная щелочная фосфатаза) под контролем минимального промотора INF-β (Interferon β, интерферон-β), слитого с пятью сайтами связывания NF-κB и пятью сайтами связывания AP-1. CD40L-сенсорные клетки HEK-Blue™ (InvitroGen) применяют для измерения биоактивности CD154 (CD40L) посредством секреции эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP) при активации NF-κB после стимуляции CD40. Эти клетки были созданы посредством стабильной трансфекции клеток HEK293 человеческим геном CD40 и NF-κB-индуцируемой конструкцией SEAP. Таким образом, клетки HEK-Blue™ измеряют биоактивность TNF-α/CD40 посредством секреции эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP) при активации NF-κB после стимуляции TNFR/CD40. Фактор некроза опухоли альфа (TNF-α) представляет собой известный цитокин, вовлеченный в системное воспаление и регуляцию иммунных клеток. CD40L представляет собой костимулирующий белок, вовлеченный в активацию Т-клеток и развитие эффективных иммунных ответов, и считается вовлеченным в развитие аутоиммунных заболеваний, включающих сахарный диабет 1 типа (Margolles-Clark, E. et al. “Small molecule costimulatory blockade: organic dye inhibitors of the CD40-CD154 interaction,” J. Mol. Med., 2009, 87, 1133-1143).
TNFα- и CD40L-сенсорные клетки HEK-Blue (Invitrogen) (50000/лунка) инкубировали с антисмысловым (АС) олигонуклеотидом GED-0301 или с контрольным смысловым (С) олигонуклеотидом (ОГН; 4 мкг/мл) в течение 6 ч в присутствии липофектамина (ЛПФ), а затем среды, на протяжении 18 ч после обработки TNFα (1 нг/мл) или CD40L (25 нг/мл) в присутствии или в отсутствие TGF-β (200 нг/мл; 24 ч, среда DMEM (Dulbecco modified Eagle's medium, среда Игла, модифицирована по способу Дульбекко), пенициллин/стрептомицин, 2% сыворотка). GED-0301 представляет собой антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 (GTXGCCCCTTCTCCCXGCAGC, в котором X представляет собой 5-метил-2'-дезоксицитидин-5'-монофосфат (5-Me-dC) (SEQ ID NO: 6)). Секрецию SEAP, индуцированную TNFα или CD40L в этих клетках, количественно определяли, применяя QUANTI-Blue™, колориметрический ферментный тест, предоставленный производителем и специально разработанный для данной цели, со средой, которая меняет цвет на багрово-синий в присутствии SEAP, что можно количественно оценить, измеряя оптическую плотность при 625-655 нм. Данные представляют собой среднее из трех независимых экспериментов, проведенных в четырех повторах в каждой плашке, с применением значений, нормализованных к простимулированному ответу (только TNFα или CD40L) в необработанных контрольных клетках.
Эффекты TGF-β и GED-0301 на активацию NF-κB в клетках HEK-Blue посредством TNFα и CD40L, соответственно, показаны на Фиг. 2А и 2B. Результаты показывают, что и TNFα, и CD40L вызывали значительную активацию NF-κB (по измерению экспрессии SEAP) и что оба белка подавлялись TGF-β. Такое подавление значительно усиливалось при дальнейшей обработке антисмысловым олигонуклеотидом к SMAD7 GED-0301, что указывало на то, что данная обработка способна усиливать и/или восстанавливать эффекты TGF-β. В клеточных системах TGF-β может либо усиливать, либо ингибировать активацию NF-κB в зависимости от применяемого типа клеток (Hong, S. et al. “Smad7 sensitizes tumor necrosis factor induced apoptosis through the inhibition of antiapoptotic gene expression by suppressing activation of the nuclear factor-kappaB pathway,” Cancer Res., 2007, 67, 9577-9583 и ссылки в данной публикации). TGF-β был негативным регулятором NF-κB в B-клетках и в мононуклеарных клетках собственной пластинки (МКСП) слизистой оболочки кишечника человека. Результаты, полученные для трансфицированных клеток HEK, схожи с таковыми, полученными на клетках МКСП, на которых было показано, что TGF-β1 отрицательно регулирует активацию NF-κB в нормальных МКСП (поскольку предварительная обработка TGF-β1 подавляла TNF-α-индуцированную активацию NF-κB), и что лечение воспалительного заболевания кишечника МКСП специфичными к Smad7 антисмысловыми олигонуклеотидами приводило к ингибированию активации NF-κB (Monteleone, G. et al. “A failure of transforming growth factor-β1 negative regulation maintains sustained NF-κB activation in gut inflammation,” J. Biol. Chem., 2004, 279, 3925-3932).
Для доказательства того, что GED-0301 может проникать в исследуемые клетки сенсорные клетки HEK Blue (50000/лунка) инкубировали с меченым флуоресцеином GED-0301 АС ОГН в течение 48 ч в присутствии или в отсутствие липофектамина (ЛПФ, Invitrogen), а затем анализировали на предмет захвата клетками. Микроскопия подтвердила, что сенсорные клетки HEK Blue, которые инкубировали с меченым флуоресцеином GED-0301 в присутствии липофектамина, захватывали меченый флуоресцеином GED-0301 лучше, чем клетки, не обработанные липофектамином.
Пример 2: исследование распределения антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7 у мышей
Обычным мышам В6 (6 недель, самцы; Jackson Lab.) с диабетом, индуцированным многократными низкими дозами стрептозотоцина (СТЗ, специфичного β-клеточного токсина; 40 мг/кг в/б в течение 5 дней подряд), вводили меченые флуоресцеином антисмысловые олигонуклеотиды GED-0301 (TriLink) тремя разными способами: перорально (п/о), внутрибрюшинно (в/б) и подкожно (п/к) (125 мкг/мышь = 5 мг/кг; п/о посредством принудительного перорального кормления, применяя 500 мкл раствора бикарбоната, рН 9,5, для защиты от деградации в желудке). В две временные точки (4 ч и 24 ч) собирали и обрабатывали органы у двух различных животных: поджелудочную железу, печень, почки, селезенку, тимус, кишечник, головной мозг, кровь, лимфатические узлы поджелудочной железы, плечевые лимфатические узлы, лимфоидную ткань, ассоциированную с кишечником. Для анализа с помощью проточной цитометрии органы переваривали коллагеназой D (Roche), пропускали через приспособление для окрашивания клеток (70 мкм; BD Falcon), ресуспендировали в HBSS (Hanks balanced salt solution, сбалансированный солевой раствор Хенкса) и окрашивали живые клетки (набор реактивов LIVE/DEAD® fixable violet dead cell stain kit; Invitrogen) и лейкоциты (антимышиные антитела к CD45 с аллофикоцианином; eBioscience). Затем их анализировали на содержание флуоресцеина в живых клетках при помощи проточного цитометра BD LSR II (BD Biosciences, Сан-Джозе, штат Калифорния) и программного обеспечения FlowJo версия 7.2.2 (Ашланд, штат Орегон). Фиг. 3А показывает пример, иллюстрирующий способ установки дискриминационного окна для анализа результатов проточной цитометрии. Фиг. 3В включает иллюстративные результаты проточной цитометрии, полученные для соответствующего процента захвата красителя живыми клетками в специфичных органах, которые показывают значительный уровень захвата антисмыслового олигонуклеотида (процент FITC+) поджелудочной железой, лимфатическими узлами поджелудочной железы и другими органами (как лейкоцитами, CD45+/FITC+, так и другими клетками, CD45-/FITC+), особенно после п/к введения. Данные результаты подтверждают, что GED-0301 может доставляться в специфичные органы при применении клинически приемлемых способов введения, включающих подкожное введение.
Многоканальные микроскопические изображения высокого разрешения (Фиг. 4) подтвердили распределение GED-0301 в поджелудочную железу после подкожного введения флуоресцентно меченого антисмыслового олигонуклеотида в соответствии с результатами проточной цитометрии (Фиг. 3В). Цветовое обозначение: зеленый - флуоресцентный GED0301, серый - DAPI (маркер клеточного ядра), красный - инсулин (показывающий образующие инсулин β-клетки) и синий - CD45 (показывающий CD45 или общий лейкоцитарный антиген, LCA, маркер элементов кровеносной системы, которые включают клетки иммунитета и воспаления).
Пример 3: In vivo исследования с помощью антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7
Следующие in vivo исследования можно применять для определения эффекта лечения на животных моделях
Исследование антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7 по обращению гипергликемии у мышей NOD
Не страдающие ожирением мыши с диабетом (NOD), например, мыши NOD, применяли в интервенционном исследовании по предотвращению диабета, где лечение начинали только после начала гипергликемии. Мыши NOD представляют собой широко применяемую животную модель диабета 1 типа (Roep, B.O. et al. Satisfaction (not) guaranteed: re-evaluating the use of animal models of type 1 diabetes. Nat. Rev. Immunol., 2004, 4, 989-997), и применяются для оценки большого числа возможных лечений (Shoda, L. K. et al. “A comprehensive review of interventions in the NOD mouse and implications for translation,” Immunity, 2005, 23, 115-126). Доставляли восьминедельных преддиабетных самок мышей (Taconic) и, начиная с недели 10 (после акклиматизации), наблюдали за глюкозурией два раза в неделю. У животных, которые оказывались положительными, отслеживали уровень глюкозы в крови (гликемию) три раза в неделю. Животные с повышенным уровнем глюкозы (гликемия не натощак >200 мг/дл) в течение двух дней подряд получали один имплант капсулы медленно высвобождающегося инсулина (LinBit, LinShin Canada, Inc.) для предотвращения тяжелой формы гипергликемии и истощения/перегрузки оставшихся β-клеток и начинали получать лечение. Препараты вводили п/к, поскольку данный способ введения является клинически значимым и исследования распределения, описанные выше, показали, что он является эффективным для распределения в поджелудочную железу, лимфатические узлы поджелудочной железы и другие органы представляющие возможный интерес. Животных распределяли в одну из трех групп лечения в соответствии с предварительно определенной схемой чередования в порядке развития у них гипергликемии. Препараты (GED-0301 = Smad7 АС ОГН; 125 мкг/мышь) и соответствующие контроли (С ОГН и только физиологический раствор) вводили ежедневно. За животными наблюдали два раза в неделю и оценивали их способность поддерживать нормогликемию. После исчезновения эффектов имплантированных инсулиновых капсул (около 25 дней) животных с тремя последовательными значениями уровня глюкозы >250 мг/дл считали заболевшими диабетом, их умерщвляли и отбирали репрезентативные органы (поджелудочную железу, лимфатические узлы поджелудочной железы). У животных, не заболевших диабетом, ежедневное лечение прекращали через 10 недель, и наблюдали их в течение дополнительных 12 недель (всего до 150 дней), чтобы определить, существует ли продолжительный эффект. В конце всех животных умерщвляли и отбирали репрезентативные органы (поджелудочную железу, лимфатические узлы поджелудочной железы и другие).
Результаты исследования показаны на Фиг. 5 с данными об уровне глюкозы в крови на Фиг. 5А и соответствующей кривой выживаемости Каплана-Мейера, показывающей процент животных, остающихся без диабета, в зависимости от времени, на Фиг. 5В. Лечение начинали после начала гипергликемии, когда уже произошло повреждение β-клеток. Соответственно, тяжелая форма гипергликемии может развиться очень быстро. У всех животных, обработанных физиологическим раствором или контрольным смысловым олигонуклеотидом, развивался диабет (n=7 и 6, соответственно), о чем свидетельствует гипергликемия (уровень глюкозы в крови >250 мг/дл) после истощения импланта LinBit с медленно высвобождающимся инсулином ко дню 20-25. Среди животных, обработанных активным антисмысловым олигонуклеотидом GED-0301, у 6 из 11 обработанных животных не развивалась гипергликемия, и они оставались без диабета до окончания исследования (дня 150), в течение длительного времени после прекращения лечения (день 70).
Для проверки глюкозного ответа у животных без диабета в конце исследования (день 150) проводили пероральный глюкозотолерантный тест (ПОГТТ) у нескольких обработанных GED-0301 мышей, а также у контрольных мышей. Глюкозу в дозировке 150 мг вводили посредством принудительного перорального кормления мышам после 16 часового голодания и отбирали образцы крови в заранее определенные временные интервалы продолжительностью до 150 мин. Результаты, показанные на Фиг. 6, подтверждают, что глюкозный ответ и, следовательно, способность секретировать инсулин, был сравним с таковым у здоровых животных. Уровень глюкозы в крови возвращался к норме в течение 150 мин после перорального введения у всех животных.
Конфокальную микроскопию высокого разрешения со срезами поджелудочной железы обработанных GED-0301 мышей NOD, которые не заболели диабетом к концу исследования (день 150), проводили, чтобы подтвердить наличие образующих инсулин β-клеток. Фиг. 7 показывает серию многоканальных Z-стопок изображений репрезентативных содержащих островки срезов поджелудочной железы из обработанных GED-0301 мышей и соответствующих контролей. Различные цвета (столбики) обозначают следующее: синий - DAPI (маркер клеточного ядра), красный - инсулин (указывающий на вырабатывающие инсулин β-клетки) и зеленый - глюкагон (указывающий на вырабатывающие глюкагон α-клетки). Масштабная линейка 100 мкм. В то время как у нормальных контрольных мыши без диабета были нормальные островки, содержащие как инсулин- так и глюкагон-образующие клетки (верхний ряд), мыши NOD, которые заболели диабетом во время исследования, утратили вырабатывающие инсулин β-клетки из островков (нижний ряд; из обработанных смысловым олигонуклеотидом мышей, у которых не восстановилась нормогликемия). У животных, обработанных антисмысловым (АС) олигонуклеотидом GED-0301, которые не заболели диабетом после лечения, начатом при начале гипергликемии, было несколько островков, которые утратили образующие инсулин клетки (второй ряд сверху, показывающий наличие глюкагона, но не инсулина), но у них также были островки с сохраненными инсулин-образующими клетками (третий ряд сверху). Следовательно, обработка GED-0301, начатая в начале гипергликемии, по-видимому, противодействует действию аутоиммунной атаки у мышей NOD и сохраняет вырабатывающие инсулин β-клетки в количестве, достаточном для поддержания нормального глюкозного ответа в крови и предотвращения начала гипергликемии.
Исследование антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7 при трансплантации островков
Восстановление передачи сигнала через TGF-β в локальном микроокружении оказалось перспективным в экспериментальной модели аллогенной трансплантации островков, в том числе при наличии лежащего в основе аутоиммунного заболевания. Обработку GED-0301 можно провести для определения эффекта антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7 на выживание и/или толерантность к аллогенным трансплантатам островков. В частности, можно определить эффект GED-0301 по предотвращению отторжения и/или увеличению продолжительности выживания островков в модели аллогенной трансплантации у грызунов, заболевших диабетом при введении специфичного для бета-клеток токсина (СТЗ). Первичные конечные точки могут включать выживание аллотрансплантата островков, маркеры активации на Т-лимфоцитах, дендритных клетках, частоту и супрессорную функцию Трег и других супрессорных клеток в виде корреляции с экспрессией/регуляцией Smad7 в месте трансплантации.
Исследование антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7 и неспецифичного воспаления при диабете 2 типа
Поскольку неспецифичное системное и местное воспаление характеризует преддиабетическое состояние и диабет 2 типа, можно определить потенциальную роль SMAD7 в развитии неспецифичного воспаления внутри панкреатического островка. Более того, можно изучить роль SMAD7 при сосудистых осложнениях при диабете.
Исследование антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7 при диабетической нефропатии
При диабетической нефропатии человека и других протеинурических гломерулярных болезнях Smad7 сильно повышен. Это повышение происходит в первую очередь в подоцитах, гломерулярных клетках, отвечающих за целостность гломерулярного фильтрационного барьера и за предотвращение альбуминурии, независимого предиктора кардиоваскулярного исхода в общей популяции. Действие на TGF-β является предметом интенсивного прикладного исследования (исследование с пирфенидоном). В этих исследованиях результаты, касающиеся вылечивания диабетической нефропатии и других хронических заболеваний почек, неожиданно оказались отрицательными. Восстановление полноценной передачи сигнала через TGF-β посредством ингибирования Smad7 может быть перспективным и новым подходом к лечению данных состояний. Установленные экспериментальные модели диабетической нефропатии, разработанные Консорциумом по диабетическим осложнениям Национальных Институтов Здравоохранения, можно применять для получения предварительных in vivo данных по мягким и тяжелым почечным исходам (альбуминурии, уровне гломерулярной фильтрации, гламерулосклерозе). Последующие клинические исследования можно разработать в Клинике диабетической нефропатии в Институте исследования диабета.
Исследование действия антисмысловых олигонуклеотидов к SMAD7 на стимулированную глюкозой секрецию инсулина
Мыши с β-клетками поджелудочной железы со сверхэкспрессией Smad7 характеризуются нарушением выделения инсулина и повышенным уровнем глюкозы натощак. Таким образом, ингибирование Smad7 могло бы привести к улучшению функции β-клеток поджелудочной железы. Можно провести эксперименты по стимулированной глюкозой выработке инсулина в островках человека, генетически измененных для экспрессии SMAD7 на разном уровне. В дальнейших исследованиях можно изучать пациентов для определения роли ингибирования Smad7 в непереносимости глюкозы у объектов с преддиабетическим состоянием.
Включение сведений посредством ссылки
Полное изложение содержания каждого из патентных документов и научных статей, процитированных здесь, включено посредством ссылки в любых целях.
Эквиваленты
Настоящее изобретение может быть осуществлено в других специфичных формах с выходом за пределы его существенных характеристик. Таким образом, вышеизложенные варианты осуществления настоящего изобретения следует считать скорее иллюстративными, чем ограничивающими изобретение, описанное здесь. Объем изобретения указан скорее в прилагаемой формуле изобретения, чем в вышеизложенном описании, и предполагается, что все изменения в пределах значения и диапазона эквивалентности формулы изобретения включены в нее.

Claims (26)

1. Способ лечения и/или предотвращения диабета посредством предотвращения разрушения β-клеток панкреатических островков, где указанный способ включает введение нуждающемуся в нем пациенту эффективного количества антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, или его фармацевтически приемлемую соль.
2. Способ по п. 1, в котором диабет выбирают из группы, состоящей из диабета 1 типа, диабета 2 типа и гестационного диабета.
3. Способ улучшения выживания клеток панкреатических островков после трансплантации посредством предотвращения разрушения β-клеток панкреатических островков, где указанный способ включает введение нуждающемуся в нем пациенту эффективного количества антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, или его фармацевтически приемлемой соли.
4. Способ лечения и/или предотвращения гипергликемии посредством предотвращения разрушения β-клеток панкреатических островков, где указанный способ включает введение нуждающемуся в нем пациенту эффективного количества антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, или его фармацевтически приемлемой соли.
5. Способ по любому из пп. 1, 3 или 4, в котором антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 10.
6. Способ по любому из пп. 1, 3 или 4, в котором антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 вводят парентерально.
7. Способ по п. 6, в котором антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 вводят подкожно.
8. Способ по любому из пп. 1, 3 или 4, в котором антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 10.
9. Способ по п. 8, в котором две или более межнуклеозидных связей антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 10, представляют собой тиофосфатные связи.
10. Способ по п. 8, в котором все межнуклеозидные связи антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 10, представляют собой тиофосфатные связи.
11. Способ лечения и/или предотвращения диабета посредством предотвращения разрушения β-клеток панкреатических островков, где указанный способ включает введение нуждающемуся в нем пациенту фармацевтической композиции, содержащей:
эффективное количество антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, или его фармацевтически приемлемую соль; и
фармацевтически приемлемый носитель.
12. Способ улучшения выживания клеток панкреатических островков после трансплантации посредством предотвращения разрушения β-клеток панкреатических островков, где указанный способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту фармацевтической композиции, содержащей:
эффективное количество антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, или его фармацевтически приемлемую соль; и
фармацевтически приемлемый носитель.
13. Способ лечения и/или предотвращения гипергликемии посредством предотвращения разрушения β-клеток панкреатических островков, где указанный способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту фармацевтической композиции, содержащей:
эффективное количество антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, или его фармацевтически приемлемую соль; и
фармацевтически приемлемый носитель.
14. Способ по любому из пп. 11-13, в котором антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 10.
15. Способ по любому из пп. 11-13, в котором фармацевтическую композицию вводят парентерально.
16. Способ по п. 15, в котором фармацевтическую композицию вводят подкожно.
17. Способ по любому из пп. 11-13, в котором антисмысловой олигонуклеотид к SMAD7 содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 10.
18. Способ по п. 17, в котором две или более межнуклеозидных связей антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 10, представляют собой тиофосфатные связи.
19. Способ по п. 17, в котором все межнуклеозидные связи антисмыслового олигонуклеотида к SMAD7, содержащего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 10, представляют собой тиофосфатные связи.
20. Способ по п. 11, в котором диабет выбран из группы, состоящей из диабета 1 типа, диабета 2 типа и гестационного диабета.
RU2014146170A 2012-04-18 2013-04-18 Способы лечения диабета и/или улучшения выживания панкреатических островков после трансплантации RU2667960C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261625904P 2012-04-18 2012-04-18
US61/625,904 2012-04-18
PCT/US2013/037150 WO2013158868A1 (en) 2012-04-18 2013-04-18 Methods of treating diabetes and/or promoting survival of pancreatic islets after transplantation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2014146170A RU2014146170A (ru) 2016-06-10
RU2667960C2 true RU2667960C2 (ru) 2018-09-25

Family

ID=48326412

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014146170A RU2667960C2 (ru) 2012-04-18 2013-04-18 Способы лечения диабета и/или улучшения выживания панкреатических островков после трансплантации

Country Status (15)

Country Link
US (3) US10081809B2 (ru)
EP (1) EP2839004B1 (ru)
JP (2) JP6348484B2 (ru)
KR (1) KR20150003824A (ru)
CN (2) CN104487574B (ru)
AU (1) AU2013249191B2 (ru)
CA (1) CA2870547A1 (ru)
DK (1) DK2839004T3 (ru)
ES (1) ES2732252T3 (ru)
HK (1) HK1207117A1 (ru)
IN (1) IN2014DN08158A (ru)
MX (1) MX370149B (ru)
NZ (1) NZ630914A (ru)
RU (1) RU2667960C2 (ru)
WO (1) WO2013158868A1 (ru)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITRM20030149A1 (it) 2003-04-02 2004-10-03 Giuliani Spa Oligonucleotidi (odn) antisenso per smad7 e loro usi in campo medico
SI2364360T1 (sl) 2008-11-13 2017-08-31 Nogra Pharma Limited Protismiselni sestavki in postopki za njihovo izdelavo in uporabo
ES2617200T3 (es) 2011-09-15 2017-06-15 Nogra Pharma Limited Procedimientos para supervisar la capacidad de respuesta al tratamiento anti-SMAD7
IN2014DN08158A (ru) 2012-04-18 2015-05-01 Nogra Pharma Ltd
US10006029B2 (en) 2013-03-15 2018-06-26 Nogra Pharma Limited Methods of treating colorectal cancer
EP2940115B1 (en) * 2014-04-30 2018-10-17 The Procter and Gamble Company Cleaning composition
JP2017515896A (ja) 2014-05-09 2017-06-15 ノグラ ファーマ リミテッド 炎症性腸疾患の処置の方法
CN107406851A (zh) 2014-10-17 2017-11-28 诺格尔制药有限公司 利用smad7反义寡核苷酸治疗受试者的方法和组合物
EP3165593B1 (en) * 2015-10-29 2019-01-23 The Procter and Gamble Company Liquid detergent composition
EP3162878A1 (en) * 2015-10-29 2017-05-03 The Procter and Gamble Company Liquid detergent composition
WO2017147276A1 (en) 2016-02-23 2017-08-31 Celgene Corporation Methods of treating intestinal fibrosis using smad7 inhibition
JP7495126B2 (ja) * 2018-05-08 2024-06-04 ユニヴァーシティー オブ マイアミ 組織への治療用核酸の送達のための材料および方法
JP7137696B2 (ja) 2019-05-14 2022-09-14 プロヴェンション・バイオ・インコーポレイテッド 1型糖尿病を予防するための方法および組成物
AU2021287998A1 (en) 2020-06-11 2023-02-02 Benaroya Research Institute At Virginia Mason Methods and compositions for preventing type 1 diabetes

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003037368A2 (en) * 2001-11-02 2003-05-08 Klinikum Der Universität Regensburg Smad7 inhibitors for the treatment of cns diseases
WO2009129544A1 (en) * 2008-04-18 2009-10-22 Baxter International Inc. Microsphere-based composition for preventing and/or reversing new-onset autoimmune diabetes
RU2434942C2 (ru) * 2004-09-28 2011-11-27 Кварк Фармасьютикалс, Инк. Олигорибонуклеотиды и способы их применения для лечения острой почечной недостаточности и других заболеваний

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6656475B1 (en) * 1997-08-01 2003-12-02 The Johns Hopkins University School Of Medicine Growth differentiation factor receptors, agonists and antagonists thereof, and methods of using same
ITRM20030149A1 (it) 2003-04-02 2004-10-03 Giuliani Spa Oligonucleotidi (odn) antisenso per smad7 e loro usi in campo medico
EP3604537B1 (en) 2003-06-13 2021-12-08 Alnylam Europe AG Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism
ITRM20030393A1 (it) * 2003-08-11 2005-02-12 Giuliani Spa Uso di oligonucleotidi (odn) antisenso per smad7 per il trattamento delle patologie mediate dal fattore di trascrizione nucleare nf-kb.
GB0326778D0 (en) * 2003-11-18 2003-12-24 Imp College Innovations Ltd Biological materials and uses thereof
JP4991547B2 (ja) 2004-09-28 2012-08-01 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 脱毛症、急性腎不全および他の疾患の治療のためのオリゴリボヌクレオチドおよびその使用の方法
WO2007039151A1 (en) 2005-09-28 2007-04-12 Universität Zürich Blockers of transforming growth factor beta and its receptors for the treatment of infectious diseases
SI2364360T1 (sl) 2008-11-13 2017-08-31 Nogra Pharma Limited Protismiselni sestavki in postopki za njihovo izdelavo in uporabo
ES2617200T3 (es) 2011-09-15 2017-06-15 Nogra Pharma Limited Procedimientos para supervisar la capacidad de respuesta al tratamiento anti-SMAD7
IN2014DN08158A (ru) 2012-04-18 2015-05-01 Nogra Pharma Ltd
US10006029B2 (en) 2013-03-15 2018-06-26 Nogra Pharma Limited Methods of treating colorectal cancer
CA2903597C (en) 2013-03-15 2023-04-04 Nogra Pharma Limited Methods of treating colorectal cancer
JP2017515896A (ja) 2014-05-09 2017-06-15 ノグラ ファーマ リミテッド 炎症性腸疾患の処置の方法
CN107406851A (zh) 2014-10-17 2017-11-28 诺格尔制药有限公司 利用smad7反义寡核苷酸治疗受试者的方法和组合物
US20170233736A1 (en) 2014-10-17 2017-08-17 Nogra Pharma Limited Methods for dosing and monitoring smad7 antisense oligonucleotide treatment using biomarker levels
JP2018531936A (ja) 2015-09-30 2018-11-01 ノグラ ファーマ リミテッド バイオマーカー発現に基づいてsmad7アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用する方法
CA3014383A1 (en) 2016-02-24 2017-08-31 Nogra Pharma Limited Methods of treating celiac disease using smad7 inhibition
JP2020503327A (ja) 2016-12-30 2020-01-30 ノグラ ファーマ リミテッド Smad7アンチセンスオリゴヌクレオチドの組成物および乾癬を処置するまたは予防する方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003037368A2 (en) * 2001-11-02 2003-05-08 Klinikum Der Universität Regensburg Smad7 inhibitors for the treatment of cns diseases
RU2434942C2 (ru) * 2004-09-28 2011-11-27 Кварк Фармасьютикалс, Инк. Олигорибонуклеотиды и способы их применения для лечения острой почечной недостаточности и других заболеваний
WO2009129544A1 (en) * 2008-04-18 2009-10-22 Baxter International Inc. Microsphere-based composition for preventing and/or reversing new-onset autoimmune diabetes

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MIZOBUCHI T., et al., Differential expression of Smad7 transcripts identifies the CD4+CD45RChigh regulatory T cells that mediate type V collagen-induced tolerance to lung allografts.J Immunol. 2003 Aug 1;171(3):1140-7. *
MIZOBUCHI T., et al., Differential expression of Smad7 transcripts identifies the CD4+CD45RChigh regulatory T cells that mediate type V collagen-induced tolerance to lung allografts.J Immunol. 2003 Aug 1;171(3):1140-7. SMART NG., et al., Conditional expression of Smad7 in pancreatic beta cells disrupts TGF-beta signaling and induces reversible diabetes mellitus.PLoS Biol. 2006 Feb;4(2):e39. Epub 2006 Jan 31. *
SMART NG., et al., Conditional expression of Smad7 in pancreatic beta cells disrupts TGF-beta signaling and induces reversible diabetes mellitus.PLoS Biol. 2006 Feb;4(2):e39. Epub 2006 Jan 31. *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2839004A1 (en) 2015-02-25
US20150315573A1 (en) 2015-11-05
AU2013249191B2 (en) 2019-01-03
CN107252492A (zh) 2017-10-17
ES2732252T3 (es) 2019-11-21
US20200239884A1 (en) 2020-07-30
CN104487574A (zh) 2015-04-01
NZ630914A (en) 2017-01-27
US10443056B2 (en) 2019-10-15
DK2839004T3 (da) 2019-07-01
AU2013249191A1 (en) 2014-10-09
US10081809B2 (en) 2018-09-25
US20190136237A1 (en) 2019-05-09
HK1207117A1 (en) 2016-01-22
IN2014DN08158A (ru) 2015-05-01
MX2014012650A (es) 2015-04-08
RU2014146170A (ru) 2016-06-10
MX370149B (es) 2019-12-03
WO2013158868A1 (en) 2013-10-24
EP2839004B1 (en) 2019-06-12
CA2870547A1 (en) 2013-10-24
JP2015514778A (ja) 2015-05-21
KR20150003824A (ko) 2015-01-09
JP6348484B2 (ja) 2018-06-27
CN104487574B (zh) 2017-07-07
JP2018131468A (ja) 2018-08-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2667960C2 (ru) Способы лечения диабета и/или улучшения выживания панкреатических островков после трансплантации
KR101800333B1 (ko) 아포지방단백질 ciii (apociii) 발현의 조정
CN103429739A (zh) 制备产生和分泌胰岛素的肠内分泌细胞的方法
US20190100758A1 (en) Methods of Treating Colorectal Cancer
KR20150118180A (ko) 지질단백질 리파제 결핍 (lpld) 모집단에서 아포지질단백질 c-iii (apociii) 발현의 조절
AU2014229985A1 (en) Methods of treating colorectal cancer
JP2021106625A (ja) Il−34アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびその使用方法
US20180113139A1 (en) Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disorders
KR20170122769A (ko) 지방이상증 집단에서 아포지단백질 C-III (ApoCIII) 발현의 조절
JP2015509095A (ja) ペプチドおよびその使用
EP3906041A1 (en) Co-administration of inhibitors to produce insulin producing gut cells
WO2000037089A1 (en) Cyclic adenosine diphosphate ribose analogues for modulating t cell activity

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200419