RU2663110C2 - Олигонуклеотиды для введения изменения в последовательность молекулы целевой рнк в живой клетке - Google Patents
Олигонуклеотиды для введения изменения в последовательность молекулы целевой рнк в живой клетке Download PDFInfo
- Publication number
- RU2663110C2 RU2663110C2 RU2015104763A RU2015104763A RU2663110C2 RU 2663110 C2 RU2663110 C2 RU 2663110C2 RU 2015104763 A RU2015104763 A RU 2015104763A RU 2015104763 A RU2015104763 A RU 2015104763A RU 2663110 C2 RU2663110 C2 RU 2663110C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oligonucleotide
- nucleotides
- sequence
- rna
- seq
- Prior art date
Links
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 259
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 37
- 230000008859 change Effects 0.000 title description 32
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims abstract description 29
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 claims abstract description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 83
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 77
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 67
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 42
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 26
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 21
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 claims description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- PURKAOJPTOLRMP-UHFFFAOYSA-N ivacaftor Chemical compound C1=C(O)C(C(C)(C)C)=CC(C(C)(C)C)=C1NC(=O)C1=CNC2=CC=CC=C2C1=O PURKAOJPTOLRMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 13
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 12
- 229960004508 ivacaftor Drugs 0.000 claims description 12
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 11
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 11
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 11
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 claims description 10
- UFSKUSARDNFIRC-UHFFFAOYSA-N lumacaftor Chemical compound N1=C(C=2C=C(C=CC=2)C(O)=O)C(C)=CC=C1NC(=O)C1(C=2C=C3OC(F)(F)OC3=CC=2)CC1 UFSKUSARDNFIRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000076 hypertonic saline solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 8
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 claims description 7
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 claims description 7
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 7
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 7
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 7
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 6
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 claims description 6
- LUCHPKXVUGJYGU-XLPZGREQSA-N 5-methyl-2'-deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 LUCHPKXVUGJYGU-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 5
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 claims description 5
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 5
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 claims description 5
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 5
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 claims description 5
- 150000003432 sterols Chemical group 0.000 claims description 5
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 abstract description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 40
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 38
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 description 30
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 26
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 26
- -1 2'-fluorribose Chemical compound 0.000 description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 description 18
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 17
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 17
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 17
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 13
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 11
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 9
- 108091027075 5S-rRNA precursor Proteins 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 102000012605 Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Human genes 0.000 description 8
- 108010079245 Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Proteins 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- CAAULPUQFIIOTL-UHFFFAOYSA-N methyl dihydrogen phosphate Chemical compound COP(O)(O)=O CAAULPUQFIIOTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920001601 polyetherimide Polymers 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 108010067035 Pancrelipase Proteins 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 5
- 229960000998 lumacaftor Drugs 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 4
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 4
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 4
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000032770 biofilm formation Effects 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 229940092125 creon Drugs 0.000 description 4
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 4
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108091093094 Glycol nucleic acid Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 3
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 3
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 description 2
- IHNKQIMGVNPMTC-RUZDIDTESA-N 1-stearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C IHNKQIMGVNPMTC-RUZDIDTESA-N 0.000 description 2
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 2
- IPPYUXVFNVMHCP-UHFFFAOYSA-N 2-propylpurin-2-amine Chemical compound CCCC1(N)N=CC2=NC=NC2=N1 IPPYUXVFNVMHCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 5-(hydroxymethyl)cytosine Chemical compound NC=1NC(=O)N=CC=1CO RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 2
- XRHVZWWRFMCBAZ-UHFFFAOYSA-L Endothal-disodium Chemical compound [Na+].[Na+].C1CC2C(C([O-])=O)C(C(=O)[O-])C1O2 XRHVZWWRFMCBAZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010053177 Epidermolysis Diseases 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010558 Gene Alterations Effects 0.000 description 2
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 2
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 101000907783 Homo sapiens Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator Proteins 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 description 2
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 208000005980 beta thalassemia Diseases 0.000 description 2
- 230000003851 biochemical process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N cadaverine Chemical compound NCCCCCN VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 2
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- JJJFUHOGVZWXNQ-UHFFFAOYSA-N enbucrilate Chemical compound CCCCOC(=O)C(=C)C#N JJJFUHOGVZWXNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950010048 enbucrilate Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XDZLHTBOHLGGCJ-UHFFFAOYSA-N hexyl 2-cyanoprop-2-enoate Chemical compound CCCCCCOC(=O)C(=C)C#N XDZLHTBOHLGGCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000056427 human CFTR Human genes 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000037427 ion transport Effects 0.000 description 2
- HRLIOXLXPOHXTA-UHFFFAOYSA-N medetomidine Chemical compound C=1C=CC(C)=C(C)C=1C(C)C1=CN=C[N]1 HRLIOXLXPOHXTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002140 medetomidine Drugs 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 2
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 2
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N orotic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(=O)NC(=O)N1 PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940045258 pancrelipase Drugs 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- XUYJLQHKOGNDPB-UHFFFAOYSA-N phosphonoacetic acid Chemical compound OC(=O)CP(O)(O)=O XUYJLQHKOGNDPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920000962 poly(amidoamine) Polymers 0.000 description 2
- 229920000333 poly(propyleneimine) Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 2
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 2
- ALPWRKFXEOAUDR-GKEJWYBXSA-M sodium;[(2r)-2,3-di(octadecanoyloxy)propyl] hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)([O-])=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC ALPWRKFXEOAUDR-GKEJWYBXSA-M 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- AKVIWWJLBFWFLM-UHFFFAOYSA-N (2-amino-2-oxoethyl)phosphonic acid Chemical compound NC(=O)CP(O)(O)=O AKVIWWJLBFWFLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical compound COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 1
- NSMOSDAEGJTOIQ-CRCLSJGQSA-N (2r,3s)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-ol Chemical compound OC[C@H]1OCC[C@@H]1O NSMOSDAEGJTOIQ-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- KZVAAIRBJJYZOW-LMVFSUKVSA-N (2r,3s,4s)-2-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@H]1OC[C@H](O)[C@@H]1O KZVAAIRBJJYZOW-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N (3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-methoxyoxolane-2,4-diol Chemical compound CO[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N 0.000 description 1
- WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 0.000 description 1
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 1
- MZLSNIREOQCDED-UHFFFAOYSA-N 1,3-difluoro-2-methylbenzene Chemical compound CC1=C(F)C=CC=C1F MZLSNIREOQCDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUOBCSGIAFXNKP-KWXKLSQISA-N 1-[2,2-bis[(9z,12z)-octadeca-9,12-dienyl]-1,3-dioxolan-4-yl]-n,n-dimethylmethanamine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCCC1(CCCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC)OCC(CN(C)C)O1 BUOBCSGIAFXNKP-KWXKLSQISA-N 0.000 description 1
- OIRGECPALSUGBI-UHFFFAOYSA-N 1-iminopropan-2-one Chemical compound CC(=O)C=N OIRGECPALSUGBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 2,3-di(tetradecoxy)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCO)OCCCCCCCCCCCCCC WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KDWYBFCNTYIRFX-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2-amino-6-oxo-3h-purin-9-yl)ethoxy]ethylphosphonic acid Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2CCOCCP(O)(O)=O KDWYBFCNTYIRFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001731 2-cyanoethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C([H])([H])C#N 0.000 description 1
- BCGYGWYRGHQYML-UHFFFAOYSA-N 2-cyclopentylpurin-2-amine Chemical compound N1=CC2=NC=NC2=NC1(N)C1CCCC1 BCGYGWYRGHQYML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VWSLLSXLURJCDF-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-4,5-dihydro-1h-imidazole Chemical compound CC1=NCCN1 VWSLLSXLURJCDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJHUFZQMNTWHBO-UHFFFAOYSA-N 5-(aminomethyl)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound NCC1=CNC(=O)NC1=O YJHUFZQMNTWHBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JDBGXEHEIRGOBU-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxymethyluracil Chemical compound OCC1=CNC(=O)NC1=O JDBGXEHEIRGOBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CC1=CNC(=S)NC1=O ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVICROIWXBFQEL-UHFFFAOYSA-N 6-(ethylamino)-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound CCNC1=CC=NC(=O)N1 TVICROIWXBFQEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOHFTRWZZPGYIS-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-(aminomethyl)-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound NCC1=CNC(=O)N=C1N ZOHFTRWZZPGYIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)N=C1N QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical class NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001557 Albinism Diseases 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 244000105975 Antidesma platyphyllum Species 0.000 description 1
- 108700020463 BRCA1 Proteins 0.000 description 1
- 102000036365 BRCA1 Human genes 0.000 description 1
- 101150072950 BRCA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100022548 Beta-hexosaminidase subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010006458 Bronchitis chronic Diseases 0.000 description 1
- CPAJYCKJILOUHF-UHFFFAOYSA-N C1(CCCC1)C1(NC(C2=NC=NC2=N1)=O)N Chemical compound C1(CCCC1)C1(NC(C2=NC=NC2=N1)=O)N CPAJYCKJILOUHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QONMWBKVOZNAPI-UHFFFAOYSA-N COP(O)(O)=S.COP(=O)(O)O Chemical compound COP(O)(O)=S.COP(=O)(O)O QONMWBKVOZNAPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 208000010693 Charcot-Marie-Tooth Disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025678 Ciliary Motility disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 125000000824 D-ribofuranosyl group Chemical group [H]OC([H])([H])[C@@]1([H])OC([H])(*)[C@]([H])(O[H])[C@]1([H])O[H] 0.000 description 1
- 230000008836 DNA modification Effects 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 101100136092 Drosophila melanogaster peng gene Proteins 0.000 description 1
- 206010013801 Duchenne Muscular Dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 208000024720 Fabry Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000001914 Fragile X syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000025499 G6PD deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000027472 Galactosemias Diseases 0.000 description 1
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010018444 Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032007 Glycogen storage disease due to acid maltase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010053185 Glycogen storage disease type II Diseases 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical class OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000018565 Hemochromatosis Diseases 0.000 description 1
- 208000008051 Hereditary Nonpolyposis Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010051922 Hereditary non-polyposis colorectal cancer syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 201000005027 Lynch syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100033448 Lysosomal alpha-glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000001826 Marfan syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000002678 Mucopolysaccharidoses Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010068871 Myotonic dystrophy Diseases 0.000 description 1
- PKUWKAXTAVNIJR-UHFFFAOYSA-N O,O-diethyl hydrogen thiophosphate Chemical compound CCOP(O)(=S)OCC PKUWKAXTAVNIJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 201000011252 Phenylketonuria Diseases 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010357 RNA editing Methods 0.000 description 1
- 230000026279 RNA modification Effects 0.000 description 1
- 208000021811 Sandhoff disease Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021607 Silver chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010052164 Sodium Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000018674 Sodium Channels Human genes 0.000 description 1
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027073 Stargardt disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022292 Tay-Sachs disease Diseases 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108091046915 Threose nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000219977 Vigna Species 0.000 description 1
- UYWNJNXEHSUWLE-HFWGUVFESA-N [(2R)-3-hexadecanoyloxy-2-[(Z)-octadec-9-enoxy]propyl] 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC UYWNJNXEHSUWLE-HFWGUVFESA-N 0.000 description 1
- NYDLOCKCVISJKK-WRBBJXAJSA-N [3-(dimethylamino)-2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(CN(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC NYDLOCKCVISJKK-WRBBJXAJSA-N 0.000 description 1
- RVBUSVJSKGVQQS-UHFFFAOYSA-N [3-(dimethylamino)-2-octadecanoyloxypropyl] octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(CN(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC RVBUSVJSKGVQQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDTRCZFSIBOLMV-ODZMYOIVSA-N [Na].CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC ZDTRCZFSIBOLMV-ODZMYOIVSA-N 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- NHQSDCRALZPVAJ-HJQYOEGKSA-N agmatidine Chemical compound NC(=N)NCCCCNC1=NC(=N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NHQSDCRALZPVAJ-HJQYOEGKSA-N 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical class OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 208000006682 alpha 1-Antitrypsin Deficiency Diseases 0.000 description 1
- XSDQTOBWRPYKKA-UHFFFAOYSA-N amiloride Chemical compound NC(=N)NC(=O)C1=NC(Cl)=C(N)N=C1N XSDQTOBWRPYKKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002576 amiloride Drugs 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- HSWPZIDYAHLZDD-UHFFFAOYSA-N atipamezole Chemical compound C1C2=CC=CC=C2CC1(CC)C1=CN=CN1 HSWPZIDYAHLZDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003002 atipamezole Drugs 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 208000011142 cerebral arteriopathy, autosomal dominant, with subcortical infarcts and leukoencephalopathy, type 1 Diseases 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000007451 chronic bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- JADWVLYMWVNVAN-UHFFFAOYSA-N ctk0h5271 Chemical compound NP(N)(O)=S JADWVLYMWVNVAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- SDIXRDNYIMOKSG-UHFFFAOYSA-L disodium methyl arsenate Chemical compound [Na+].[Na+].C[As]([O-])([O-])=O SDIXRDNYIMOKSG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000014720 distal hereditary motor neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 239000002003 electrode paste Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001667 episodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002713 epithelial sodium channel blocking agent Substances 0.000 description 1
- ZJXZSIYSNXKHEA-UHFFFAOYSA-N ethyl dihydrogen phosphate Chemical compound CCOP(O)(O)=O ZJXZSIYSNXKHEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 208000008605 glucosephosphate dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N glycerol 1-phosphate Chemical class OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004502 glycogen storage disease II Diseases 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 235000009424 haa Nutrition 0.000 description 1
- 125000004438 haloalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000013403 hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 229940005405 kalydeco Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N methanesulfonic acid Substances CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 206010028093 mucopolysaccharidosis Diseases 0.000 description 1
- 201000002273 mucopolysaccharidosis II Diseases 0.000 description 1
- 208000022018 mucopolysaccharidosis type 2 Diseases 0.000 description 1
- NFQBIAXADRDUGK-KWXKLSQISA-N n,n-dimethyl-2,3-bis[(9z,12z)-octadeca-9,12-dienoxy]propan-1-amine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCCOCC(CN(C)C)OCCCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC NFQBIAXADRDUGK-KWXKLSQISA-N 0.000 description 1
- GLGLUQVVDHRLQK-WRBBJXAJSA-N n,n-dimethyl-2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propan-1-amine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(CN(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC GLGLUQVVDHRLQK-WRBBJXAJSA-N 0.000 description 1
- ZUHZZVMEUAUWHY-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpropan-1-amine Chemical class CCCN(C)C ZUHZZVMEUAUWHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004127 naloxone Drugs 0.000 description 1
- UZHSEJADLWPNLE-GRGSLBFTSA-N naloxone Chemical compound O=C([C@@H]1O2)CC[C@@]3(O)[C@H]4CC5=CC=C(O)C2=C5[C@@]13CCN4CC=C UZHSEJADLWPNLE-GRGSLBFTSA-N 0.000 description 1
- 239000002071 nanotube Substances 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 235000015816 nutrient absorption Nutrition 0.000 description 1
- 229940113162 oleylamide Drugs 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 229940124636 opioid drug Drugs 0.000 description 1
- 229960005010 orotic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003431 oxalo group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000008103 phosphatidic acids Chemical class 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000008106 phosphatidylserines Chemical class 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000001907 polarising light microscopy Methods 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000575 polymersome Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920006324 polyoxymethylene Polymers 0.000 description 1
- 208000015768 polyposis Diseases 0.000 description 1
- 229920001289 polyvinyl ether Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 201000009266 primary ciliary dyskinesia Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006308 propyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical group CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 208000002815 pulmonary hypertension Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000003132 pyranosyl group Chemical group 0.000 description 1
- HBCQSNAFLVXVAY-UHFFFAOYSA-N pyrimidine-2-thiol Chemical compound SC1=NC=CC=N1 HBCQSNAFLVXVAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003235 pyrrolidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 230000008263 repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000790 retinal pigment Substances 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 102200128591 rs78655421 Human genes 0.000 description 1
- 102200132108 rs80034486 Human genes 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M silver monochloride Chemical compound [Cl-].[Ag+] HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940124547 specific antidotes Drugs 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M sulfamate Chemical compound NS([O-])(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- PCYCVCFVEKMHGA-UHFFFAOYSA-N thiirane 1-oxide Chemical compound O=S1CC1 PCYCVCFVEKMHGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEMGGZBWXRYJHK-UHFFFAOYSA-N thiouracil Chemical compound O=C1C=CNC(=S)N1 ZEMGGZBWXRYJHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/31—Combination therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/34—Allele or polymorphism specific uses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии, в частности к одноцепочечному олигонуклеотиду, где все нуклеозиды олигонуклеотида представляют собой 2'-O-алкилрибонуклеозиды, а также к применению вышеуказанного олигонуклеотида в лечении муковисцидоза человеческого организма или организма животного. Также раскрыт комплекс для лечения муковисцидоза человеческого организма или организма животного, содержащий вышеуказанный олигонуклеотид. Изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения муковисцидоза, содержащей вышеуказанный олигонуклеотид. Изобретение позволяет эффективно осуществлять лечение муковисцидоза. 4 н. и 15 з.п. ф-лы, 9 ил., 2 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к генной терапии, более конкретно, к олигонуклеотидам для введения изменений в последовательность молекулы целевой РНК, присутствующей в живой клетке.
Уровень техники
Причиной многих генетических заболеваний являются мутации в геноме. Было обнаружено, что за счет мутаций осуществляются модификации генома различного типа: делеции одной или нескольких пар оснований, одно или более ошибочных спариваний оснований в последовательности гена, вставка (инсерция) одного или нескольких нуклеотидов или реитерация триплетных повторов и отсутствие или дупликация целого гена или его части.
Генетические заболевания, вызываемые ошибочными спариваниями, делецией или инсерцией одной или более пар оснований, включают муковисцидоз (кистозный фиброз), мышечную дистрофию, серповидноклеточную анемию, гемофилию, β-талассемию, синдром ломкой Х-хромосомы (синдром Мартина-Белл).
Репарацию РНК можно применять для исправления генетических дефектов на уровне РНК.
Олигонуклеотиды и их комплексы применялись в качестве терапевтических молекул для восстановления ДНК-модификаций (ДНК-репарации) (I Papaioannou, JP Simons, JS Owen Oligonucleotide-directed gene-editing technology: mechanisms and future prospects Expert Opin. Biol. Ther. (2012) 12(3): 329-342). Эти олигомеры могут содержать РНК- и/или ДНК-нуклеотиды. Они применяются для осуществления сайт-специфической репарации дефектной ДНК. Предполагалось, что репарация осуществляется путем активации механизмов репарации эндогенной ДНК после узнавания введенного ошибочного спаривания оснований.
Триплекс-формирующие олигонуклеотиды также применялись для таргетирования генов (направленного воздействия на гены) в качестве специфических в отношении последовательностей инструментов. Триплекс-формирующие олигонуклеотиды с высокой аффинностью связываются с большой бороздкой двухцепочечной (двойной) спирали ДНК. Благодаря этому свойству триплекс-формирующие олигонуклеотиды были предложены в качестве средства для сайт-специфической коррекции генов-мишеней (Knauert et al., Hum Mol Genet. (2001) 10, 2243-2251; Richardson et al, Drug Target (2002) 10, 133-134; Thoung et al., (1993) Angewandte Chemie. Intl. Ed. Eng., 32, 666-690.). Современные методы репарации генов-мишеней не очень эффективны, и/или не доказано, что они работают в живых клетках in situ, что оставляет возможность существования другого механизма репарации дефектов генов.
Сообщалось о репарации дефектных генов на уровне РНК. Специфичную репарацию мРНК с помощью комплекса дуплексных олигонуклеотидов применяли, например, для вставки нуклеотидов в AF508 CFTR мРНК in vitro. Предполагаемый механизм этого процесса включает расщепление, опосредуемое РНКазой Н, с последующей репарацией РНК. (PC Zamecnik, МК Raychowdhury, DR Tabatadze, HF Cantiello Reversal of cystic fibrosis phenotype in a cultured AF508 cystic fibrosis transmembrane conductance 10 regulator cell line by oligonucleotide insertion Proc Natl Acad Sci 2004 101(21) 8150- 8155; Международная заявка WO 2005094370, Oligonucleotide complex compositions and methods of use as gene alteration tools).
Описание изобретения
Настоящее изобретение относится к способу репарации гена-мишени в живых (живых) клетках, более предпочтительно, в живых клетках многоклеточного организма (in vivo). Более конкретно, в настоящем изобретении рассматривается введение изменений целевой РНК in vivo в живых клетках многоклеточного организма, более конкретно, в живых клетках животного, более конкретно, млекопитающего, в особенности человека. Несмотря на то, что имеются более ранние сообщения о репарации генов в живых клетках, заявители полагают, что в настоящем изобретении впервые раскрывается возможность введения изменений в молекуле целевой РНК в живой клетке in vivo, изменяя тем самым фенотип этого организма, с применением олигонуклеотидов, предпочтительно, одноцепочечных олигонуклеотидов, более предпочтительно, одноцепочечных олигорибонуклеотидов, еще более предпочтительно, химически модифицированных одноцепочечных олигорибонуклеотидов. Неожиданно оказалось, что олигонуклеотиды по настоящему изобретению можно вводить in vivo без утраты активности и в таких количествах, которые позволяют практически исправить болезненный фенотип организма субъекта. Данное изобретение иллюстрируется на примере введения в легкое особи (организма), страдающей муковисцидозом, химически модифицированного олигорибонуклеотида, который способен восстанавливать последовательность РНК, кодирующую CFTR, тем самым исправляя функцию белка CFTR и восстанавливая CF фенотип, или по меньшей мере улучшая состояние организма. Следовательно, настоящее изобретение относится к олигонуклеотиду, предпочтительно, одноцепочечному антисмысловому олигонуклеотиду; к композиции, содержащей такой олигонуклеотид; к фармацевтической композиции, содержащей такой олигонуклеотид и фармацевтически приемлемый носитель; к применению и к способам применения такого олигонуклеотида или композиции для in vivo или in vitro репарации РНК и/или введения изменений (модификации) в последовательность молекулы целевой РНК; такой олигонуклеотид или такую композицию для применения с целью лечения или предупреждения заболевания, связанного с (генетическим) нарушением или с генетической мутацией, включающего введение такого олигонуклеотида или композиции субъекту, предпочтительно, человеку; и к способу лечения или предупреждения заболевания, связанного с (генетическим) нарушением или с генетической мутацией, включающему введение такого олигонуклеотида или композиции субъекту, предпочтительно, человеку. При введении такого, предпочтительно, одноцепочечного антисмыслового, олигонуклеотида в клетку, предпочтительно, клетку млекопитающего, более предпочтительно, в клетку человека, этот олигонуклеотид направляется в то место РНК или ее предшественника или матрицы, где требуется репарация РНК, и, вероятно, служит в качестве лидирующей (ведущей) цепи для репарации РНК. Конкретный механизм репарации неизвестен, но олигонуклеотид по настоящему изобретению, предпочтительно, одноцепочечная молекула для репарации, предпочтительно, не допускает участия РНКазы Н в процессе репарации. Изменение, опосредуемое в целевой РНК, может происходить непосредственно на уровне РНК или опосредованно с использованием ДНК, которая затем транскрибируется в РНК, или ее предшественник. Олигонуклеотиды по настоящему описанию, как правило, называются олигонуклеотидами по изобретению и могут применяться во всех вариантах настоящего изобретения.
Все варианты настоящего изобретения могут осуществляться (в случае способа или применения) или могут применяться (в случае соединения или композиции) in vitro, in vivo или ex vivo.
Предмет и способы по настоящему изобретению удобно применять для лечения муковисцидоза, предпочтительно, с использованием репарации мутации дельтаР508 в экзоне 10 белка CFTR (трансмембранного регулятора муковисцидоза). Механизм действия типичного олигонуклеотида по изобретению, молекулы, показанной SEQ ID NO: 1, представлен на фигурах 1-3 и 7А. Активность типичного олигонуклеотида по изобретению, молекулы, представленной SEQ ID NO: 1, по сравнению с ранее описанной двухцепочечной (двунитевой) молекулой (Zamecnik et al, см. выше), иллюстрируется на фигуре 4. На фигуре показано, что представленный в настоящем описании одноцепочечный антисмысловой олигонуклеотид (AON) по меньше мере проявляет такую же активность, и по-видимому, является более активным, в процессе репарации CFTR по сравнению с ранее описанной двухцепочечной молекулой (PC Zamecnik, МК Raychowdhury, DR Tabatadze, HF Cantiello Reversal of cystic fibrosis phenotype in a cultured ΔF508 cystic fibrosis transmembrane conductance regulator cell line by oligonucleotide insertion Proc Natl Acad Sci 2004 101(21) 8150-8155; W 02005094370, Oligonucleotide complex compositions and methods of use as gene alteration tools). Активность олигонуклеотида SEQ ID NO: 1 определяли, применяя сравнительный анализ, описанный в статье Zamecnik et al, см. выше, в частности, см. Фиг. 4 на стр. 8153.
Предмет и способы по настоящему изобретению удобно применять для введения изменения в другую молекулу целевой РНК и/или для лечения других заболеваний, связанных с (генетическими) нарушениями, такими, но без ограничения, как альбинизм, дефицит альфа-1-антитрипсина, болезнь Альцгеймера, боковой (латеральный) амиотрофический склероз, астма, β-талассемия, ЦАДАСИЛ (Cadasil)-синдром, болезнь Шарко-Мари-Тута (Charcot-Marie-Tooth), хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ, COPD), дистальная спинальная мышечная атрофия (DSMA), мышечная дистрофия Дюшенна/Беккера, дистрофический буллезный эпидермолиз, буллезный эпидермолиз, болезнь Фабри, семейный аденоматоз, полипоз, галактоземия, болезнь Гоше, дефицит глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, гемофилия, врожденный гемохроматоз, синдром Хантера, болезнь Хантингтона, синдром (Гертруды) Гурлер (болезнь Шейе), воспалительные заболевания кишечника (ВБК, IBD), врожденный синдром массивной агглютинации (полиагглютинации), синдром Леша-Нихена, синдром Линча, синдром Марфана, мукополисахаридоз, мышечная дистрофия, миотоническая дистрофия типа I и II, болезнь Ниманна-Пика типа А, В и С, NY-ESO-1 опосредованный рак, болезнь Паркинсона, синдром Пейтца-Егерса, фенилкетонурия, болезнь Помпе, первичная цилиарная дискинезия, легочная гипертензия, пигментная дистрофия сетчатки, болезнь Сандхоффа, синдром тяжелого комбинированного иммунодефицита (ТКИД, SCID), серповидноклеточная анемия, спинальная мышечная атрофия, болезнь Штаргардта, болезнь Тея-Сакса, Х-сцепленный иммунодефицит (синдром ломкой Х-хромосомы), различные формы рака (например, рак молочной железы или рак яичника, связанный с мутацией в генах BRCA1 и 2) и т.п.
Согласно одному предпочтительному варианту изобретения изменение в целевой последовательности РНК включает инсерцию одного или более нуклеотидов в целевую РНК. Согласно более предпочтительному варианту инсерция одного или более нуклеотидов приводит к инсерции по меньшей мере одной аминокислотной последовательности в полипептидной последовательности, кодируемой целевой РНК-последовательностью. Согласно наиболее предпочтительному варианту инсерция аминокислотной последовательности приводит к восстановлению кодируемого полипептида до полипептида с нормальной функцией в многоклеточном организме. Соответственно, наиболее предпочтительными вариантами изобретения являются такие варианты, в которых целевая РНК-последовательность в многоклеточном организме связана с нарушением, вызванным нарушением функции целевой РНК-последовательности, а генетическое нарушение выбрано из группы нарушений, вызванных отсутствием одного или более нуклеотидов в целевой РНК-последовательности по сравнению с целевыми РНК-последовательностями с нормальной функцией. Предпочтительными последовательностями по изобретению являются такие целевые РНК-последовательности, в которых отсутствует по меньшей мере часть кодона, которая восстанавливается посредством (введения изменения в РНК-последовательности с помощью олигонуклеотида по изобретению.
В настоящем изобретении показано, что репарацию РНК можно проводить in vivo посредством системного введения олигонуклеотида по изобретению. В зависимости от ткани или органа, связанных с нарушением, или, в более общем смысле, в которых нужно выполнить изменения в целевой РНК, для того, чтобы оптимизировать доставку олигонуклеотида по изобретению, следует специально подобрать способ введения. При нарушениях работы легких и других заболеваниях дыхательных путей олигонуклеотиды по изобретению можно удобно вводить непосредственно в легкие, например, с помощью ингаляции. Или же, в зависимости от нарушения и/или ткани-мишени олигонуклеотид по изобретению удобно вводить местно (например, на кожу) или системно, например, интрадермально, подкожно, внутримышечно, внутривенно, перорально, ректально, интракраниально и т.п..
Олигонуклеотиды по изобретению могут содержать ДНК- или РНК-нуклеотиды; для более высокой стабильности эти нуклеотиды могут представлять собой модифицированные ДНК- или РНК-нуклеотиды, по описанию в другом месте настоящей заявки. Олигонуклеотид по изобретению может содержать, например, инозин и/или может содержать модифицированные нуклеотиды, включающие фрагменты, выбранные из группы, состоящей из 2'-О-алкилрибозы, 2'-O-метилрибозы, 2'-фторрибозы, фосфоротиоата, метилфосфоната, РМО (ФМО), 5-метил-dC, 2-амино-dA, С5-пиримидина. Примером такого предпочтительного стабилизированного нуклеотида является нуклеотид, стабилизированный 2'-O-метильной группой, другим примером является замкнутая (закрытая, "запертая") нуклеиновая кислота (LNA, ЗНК) и/или пептид(о)-нуклеиновая кислота (PNA, ПНК). Другие способы повышения стабильности могут включать, например, фосфоротиоатные связи между нуклеотидами. Олигонуклеотиды по изобретению можно получать любым методом, известным из уровня техники. Специалист в данной области техники знает, как синтезировать олигонуклеотиды по изобретению.
Исходя из этого олигонуклеотид по изобретению, предпочтительно, модифицируют химическими методами с тем, чтобы он был устойчив к действию эндонуклеаз и РНКазы Н, и с тем, чтобы инициировать (РНК) связывание и устойчивость дуплекса. Конкретные свойства выбранной химической группы, по меньшей мере частично, влияют на доставку олигонуклеотида по настоящему изобретению к мишени: способ введения, биологическую стабильность, биораспределение, внутритканевое распределение и клеточное поглощение и миграцию. Кроме того, можно осуществить дальнейшую оптимизацию химической структуры олигонуклеотида с целью повысить аффинность и устойчивость (стабильность) связывания, повысить активность, безопасность и/или снизить стоимость изделий, уменьшая время или совершенствуя методику синтеза или процессов очистки. Многие химические модификации обычно доступны и/или коммерчески доступны для специалиста в данной области техники (такие как 2-О-метил РНК и 5-замещенные пиримидины и 2,6-диаминопурины).
Олигонуклеотид по изобретению может иметь по меньшей мере один скелет и/или модификацию сахара и/или одну модификацию основания.
Модификация основания включает модифицированный вариант натуральных пуриновых и пиримидиновых оснований (в частности, аденина, урацила, гуанина, цитозина и тимина), такой как гипоксантин, оротовая кислота, агматидин, лизидин, 2-тиопиримидин (например, 2-тиоурацил, 2-тиотимин), G-clamp нуклеотид и его производные, 5-замещенный пиримидин (например, 5-галогенурацил, 5-пропинилурацил, 5-пропинилцитозин, 5-аминометилурацил, 5-гидроксиметилурацил, 5-аминометилцитозин, 5-гидроксиметилцитозин, Super Т), 7-дезазагуанин, 7-дезазааденин, 7-аза-2,6-диаминопурин, 8-аза-7-дезазагуанин, 8-аза-7-дезазааденин, 8-аза-7-дезаза-2,6-диаминопурин, Super G, Super А и N4-этилцитозин или их производные; N2-циклопентилгуанин (cPent-G), N2-циклопентил-2-аминопурин (cPent-AP) и N2-пропил-2-аминопурин (Pr-АР) или их производные; и вырожденные или стандартные основания, такие как 2,6-дифтортолуол, или отсутствующие основания, такие как АР-сайты (например, 1-дезоксирибоза, 1,2-дидезоксирибоза, 1-дезокси-2-O-метилрибоза; или производные пирролидина, в которых атом кислорода в цикле замещен на азот (азарибоза)). Примеры производных Super A, Super G и Super Т можно найти в патенте США №6,683,173 (Epoch Biosciences), который включен в настоящее изобретение посредством отсылки. Было показано, что cPent-G, cPent-AP и Pr-АР ослабляют иммуностимулирующие эффекты при включении в киРНК (Peacock Н. et al. J. Am. Chem. Soc. 2011, 133, 9200).
Модификация сахаров включает модифицированный вариант рибозильного фрагмента, в частности 2'-O-модифицированную РНК, например, 2'-O-алкил или 2'-O-(замещенный)алкил, например, 2'-O-метил, 2'-O-(2-цианоэтил), 2'-O-(2-метокси)этил (2'-МОЕ), 2'-O-(2-тиометил)этил, 2'-О-бутирил, 2'-О-пропаргил, 2'-O-аллил, 2'-O-(2-амино)пропил, 2'-O-(2-(диметиламино)пропил), 2'-O-(2-амино)этил, 2'-O-(2-(диметиламино)этил); 2'-дезокси (ДНК); 2'-O-(галогеналкокси)метил (Arai K. et al. Bioorg. Med. Chem. 2011, 27, 6285), например, 2'-O-(2-хлорэтокси)метил (MCEM), 2'-O-(2,2-дихлорэтокси)метил (DCEM); 2'-O-алкоксикарбонил, например, 2'-O-[2-(метоксикарбонил)этил] (МОСЕ), 2-O-[2-(N,N-метилкарбамоил)этил] (MCE), 2'-О-[2-(N,N-диметилкарбамоил)этил] (DCME); 2'-галоид, например, 2'-F, FANA (2'-F арабинозил нуклеиновая кислота); модификации сахаров по атомам углерода и азота; 3'-О-алкил, например, 3'-О-метил, 3'-О-бутирил, 3'-О-пропаргил; и их производные. Другие модификации включают "мостиковую" или "бициклическую" нуклеиновую кислоту (BNA), например, замкнутую (закрытую) нуклеиновую кислоту (LNA, ЗНК), ксило-LNA, α-L-LNA, β-D-LNA, cEt (2'-O4'-С пространственно затрудненный этил) LNA, cMOEt (2'-O,4'-С пространственно затрудненный метоксиэтил) LNA, нуклеиновую кислоту с этиленовым мостиком (ENA), трицикло ДНК; незапертую (разомкнутую) нуклеиновую кислоту (UNA); циклогексенил-нуклеиновую кислоту (CeNA), альтрит-нуклеиновую кислоту (ANA), гексит-нуклеиновую кислоту (HNA), фторированную HNA (F-HNA), пиранозил-РНК (p-RNA, п-РНК), 3'-дезоксипиранозил-ДНК (p-DNA); морфолино (РМО), катионную морфолино (PMOPlus), РМО-Х; и их производные. Настоящее изобретение охватывает также введение нескольких (более одной) разных модификаций сахаров в олигонуклеотид по настоящему изобретению. BNA производные описаны, например в Международной заявке WO 2011/097641, которая во всей полноте включена в настоящее изобретение посредством отсылки. Примеры РМО-Х описаны в Международной заявке WO 2011150408, которая во всей полноте включена в настоящее изобретение посредством отсылки.
Модификация скелета включает модифицированный вариант фосфодиэфира, такой как фосфоротиоат (PS), хирально чистый фосфоротиоат, фосфородитиоат (PS2), фосфоноацетат (РАСЕ), фосфоноацетамид (РАСА), тиофосфоноацетат, тиофосфоноацетамид, пролекарство фосфоротиоата, Н-фосфонат, метилфосфонат, метилфосфонотиоат, метилфосфат, метилфосфоротиоат, этилфосфат, этилфаосфоротиоат, боранофосфат, боранофосфоротиоат, метил боранофосфат, метил боранофосфонат, метил боранофосфоротиоат и их производные. Другие модификации включают фосфорамидит, фосфорамидат, N3'→Р5' фосфорамидат, фосфор диамидат, фосфоротиодиамидат, сульфамат, диметиленсульфоксид, сульфонат, триазол, оксалил, карбамат, метиленимино (MMI) и тиоацетамидо-нуклеиновую кислоту (TANA); и их производные. Настоящее изобретение охватывает также введение нескольких (более одной) разных модификаций скелета в олигонуклеотид по настоящему изобретению.
Другие химические модификации олигонуклеотида по настоящему изобретению включают пептидо-нуклеиновые кислоты (PNA, ПНК), PNA (ПНК), модифицированные борным кластером, пирролидин оксипептидо-нуклеиновую кислоту (POPNA), гликоль- или глицерин-нуклеиновую кислоту (GNA), треозо-нуклеиновую кислоту (TNA), ациклический треонин-нуклеиновую кислоту (aTNA), морфолино-олигонуклеотид (РМО, РМО-Х), катионные морфолино-олигомеры (PMOPlus), олигонуклеотиды с интегрированными (объединенными) основаниями и скелетами (ONIBs), пирролидин-амид олигонуклеотиды (POMs) и их производные.
Олигонуклеотид по изобретению содержит последовательность, комплементарную целевой РНК, которая подлежит репарации (восстановлению, исправлению) и, предпочтительно, кодирует последовательность полипептида дикого типа. Соответственно, вследствие вырождения кодонов, олигонуклеотид может содержать один или более вырожденных комплементарных кодонов. Комплементарные нуклеотиды могут находиться по обеим сторонам сайта, которые подлежит репарации, т.е. последовательность, фланкирующая последовательность, подлежащую изменению, предпочтительно находится на 3', 5' или как на 3', так и на 5'стороне от последовательности, подлежащей изменению. В результате спаривания оснований этих комплементарных последовательностей репарация РНК активируется.
Последовательность целевой РНК, предпочтительно, отличается от восстановленной (исправленной) последовательности или последовательности дикого типа. Неисправленная целевая РНК, предпочтительно, представляет собой мутированную последовательность. Предпочтительно, мутация представляет собой замену, делецию или инсерцию (вставку) нормальной последовательности дикого типа. Исправленная нацеленная РНК, предпочтительно, представляет собой последовательность гена дикого типа или другую заданную эталонную последовательность.
Протяженность олигонуклеотида по изобретению, предпочтительно, составляет от 15 до 100 нуклеотидов и, предпочтительно, по меньшей мере 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или по меньшей мере 40 нуклеотидов, из которых по меньшей мере 10 нуклеотидов комплементарны целевой последовательности РНК. В качестве матрицы (или индуктора, индуцирующего фактора) репарации можно применять другие нуклеотиды. Спаривание оснований с целевой мРНК-последовательностью преимущественно осуществляется в клетке. Клетка может являться клеткой млекопитающего и может находиться в клеточной культуре (in vitro) или в организме (внутри тела) (in vivo).
Настоящее изобретение, предпочтительно, относится к способу лечения муковисцидоза, при этом генетическое нарушение, предпочтительно, представляет собой мутацию дельтаF508, а последовательность, подлежащая изменению, предпочтительно, представляет собой (пре)мРНК белка CFTR, содержащая (укрывающая) мутацию дельтаF508. Предмет и способы по настоящему изобретению, предпочтительно, применяются для репарации РНК пациентов с мутацией ΔF508 в белке трансмембранном регуляторе муковисцидоза (CFTR). Введение 5'-UUU-3' или 5'-CUU-3' вместо трех удаленных (делетированных) нуклеотидов дает исправленную РНК, которая восстанавливает отсутствующую аминокислоту фенилаланин (F или Phe) в белковой последовательности и, следовательно, приводит к образованию белка дикого типа.
РНК CFTR AF508 может быть восстановлена, например, посредством контактирования с и/или трансфекции клеток, предпочтительно, клеток млекопитающих, более предпочтительно, человеческих клеток, in vitro или in vivo, олигонуклеотидом по изобретению.
Предпочтительный олигонуклеотид по изобретению является комплементарным последовательности, имеющей идентичность по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% нуклеотидам 16-30 и 34-48 последовательности SEQ ID NO: 6, а изменение в последовательности, предпочтительно, выбрано из 5'-UUU-3' и 5'-CUU-3', предпочтительно, 5'-CUU-3'. Более предпочтительный олигонуклеотид по изобретению представляет собой олигонуклеотид, содержащий или состоящий из SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3, предпочтительно, SEQ ID NO: 1; или олигонуклеотид, содержащий или состоящий из укороченного варианта SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3, предпочтительно, SEQ ID NO: 1. В таком укороченном варианте отсутствует (удалено) несколько нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 нуклеотидов на 3' и/или 5' конце SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. Предпочтительный вариант олигонуклеотида по изобретению содержит нуклеотиды с 7 до 29 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3, предпочтительно, SEQ 15 ID NO: 1.
SEQ ID NO: 1; 5'-AUCAUAGGAAACACCAAAGAUGAUAUUUUCUUU-3' (CAPS нуклеотиды, предпочтительно, означают РНК, модифицированную группой 2'-O-Ме).
SEQ ID NO: 3; 5'-AUCAUAGGAAACACCAAAAAUGAUAUUUUCUUU-3' (CAPS нуклеотиды, предпочтительно, означают РНК, модифицированную группой 2'-O-Ме).
Другой предпочтительный олигонуклеотид по изобретению включает олигонуклеотид, содержащий олигонуклеотид или состоящий из олигонуклеотида с последовательностью, выбранной из группы от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24, или олигонуклеотид, содержащий укороченный вариант или состоящий из укороченного варианта олигонуклеотида с последовательностью, выбранной из группы от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24. В таком укороченном варианте отсутствует (удалено) несколько нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 нуклеотидов на 3' и/или 5' конце последовательностей от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24. Такие олигонуклеотиды удобно применять для осуществления изменений в последовательности молекулы целевой РНК, например, посредством мутации сдвига рамки-инсерции 1 или 2 пар оснований в удаляемый кодон для фенилаланина (для иллюстрации), инсерции в рамке считывания нуклеозидного триплета, образующего кодон для фенилаланина в аминокислотном положении 508 белка CFTR, инсерции в рамке считывания нуклеозидного триплета, образующего кодон для лейцина в аминокислотном положении 508 или другом аминокислотном положении белка CFTR, или для вставки стоп-кодона в последовательность, кодирующую CFTR. Способ действия этих приведенных в качестве примера олигонуклеотидов с последовательностями SEQ ID NO: 16-24 показан на Фиг. 7b-8f.
Предпочтительно, в олигонуклеотиде по изобретению несколько, а именно, 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40 нуклеотидов содержат модификацию, описанную выше, или комбинации модификаций, причем предпочтительными являются 2'-O-Ме-модифицированные нуклеотиды. Можно также добавлять к последовательностям другие описанные ранее признаки, повышающие устойчивость, такие как LNA (ЗНК)- или PNA (ПНК)-нуклеотиды или фосфоротиоатные связи между некоторыми или всеми нуклеотидами. Или же вместо РНК-нуклеотидов можно использовать ДНК-нуклеотиды. В одной антисмысловой молекуле могут комбинироваться все или некоторые описанные модификации.
Вышеописанные модификации могли бы усилить всасывание в эпителиальных клетках. Или же молекулу можно сделать короче посредством удаления нескольких, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 12 нуклеотидов на 3' и/или 5' конце для усиления всасывания в клетки.
Для применения in vivo олигонуклеотид по изобретению может быть заключен для доставки (введения) в липосому, полисому (полирибосому) или наночастицу или другую подходящую частицу, такую как вирусная частица. Или же в комбинации с носителями молекулы для репарации могут находится в комплексе с полиэтиленимином (ПЭИ, PEI) и/или полиэтиленгликолем (ПЭГ, PEG). Олигонуклеотиды по изобретению можно синтезировать внутри клетки, даже in vivo, например, заражая клетки вирусом или вирусоподобной частицей, кодирующей олигонуклеотид. Или же живые клетки можно трансфецировать - in vitro или in vivo - с помощью (вирусной) ДНК или плазмиды и т.п. После заражения (инфицирования) или трансфекции живой клетки олигонуклеотид по изобретению синтезируется внутри живой клетки посредством обычной транскрипции и/или репликации.
Таким образом, олигонуклеотид по изобретению можно доставлять, как таковой, непосредственно в клетку, ткань или орган многоклеточного организма. Олигонуклеотид по изобретению можно также вводить опосредованно любым подходящим способом, известным из уровня техники. Олигонуклеотид по изобретению можно доставлять, например, в клетку, ткань или орган многоклеточного организма в виде вектора или экспрессионного вектора, при этом вектор или экспрессионный вектор содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую олигонуклеотид. Предпочтительно, экспрессионный вектор вводится в клетку, ткань или орган многоклеточного организма с применением носителя для доставки генов. Согласно одному варианту в изобретении предусматривается вирусный вектор, содержащий экспрессионную кассету (кассету экспрессии) или транскрипционную кассету, которая управляет экспрессией или транскрипцией олигонуклеотида по изобретению. Предпочтительным носителем для доставки является вирусный вектор, такой как аденоассоциированный вирусный вектор (AAV), или ретровирусный вектор, такой как лентивирусный вектор и т.п.
Один вариант изобретения относится к применению вектора, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты по определению выше, причем этот вектор применим для генной терапии. Векторы, которые применимы для генной терапии, описаны в статьях Anderson 1998, Nature 392: 25-30; Walther and Stein, 2000, Drugs 60: 249-71; Kay et al, 2001, Nat. Med. 7: 33-40; Russell, 2000, J. Gen. Virol. 81: 2573-604; Amado and Chen, 1999, Science 285: 674-6; Federico, 1999, Curr. Opin. Biotechnol.10: 448-53; Vigna and Naldini, 2000, J. Gene Med. 2: 308-16; Marin et al, 1997, Mol. Med. Today 3: 396 - 15 403; Peng and Russell, 1999, Curr. Opin. Biotechnol. 10: 454-7; Sommerfelt, 1999, J. Gen. Virol. 80: 3049-64; Reiser, 2000, Gene Ther. 7: 910-3; и цитируемых в них ссылочных материалах.
Вектор, особенно подходящий для генной терапии, включает аденовирусный и аденоассоциированный вирусный (AAV) вектор. Эти векторы заражают большое число типов пролиферирующих и не пролиферирующих клеток. Помимо этого, аденовирусные векторы обладают способностью к высокоуровневой экспрессии трансгенов. Однако, ввиду эписом(аль)ного характера аденовирусных и AAV векторов после входа в клетку эти вирусные векторы лучше всего подходят для терапевтического применения, требующего только транзиторной экспрессии трансгена (Russell, 2000, J. Gen. Virol. 81: 2573-2604; Goncalves, 2005, Virol J. 2(1):43), указанной выше. Предпочтительные аденовирусные векторы модифицируют с целью уменьшить реакцию организма, обсуждаемую в обзоре Russell (2000, см. выше).
Предпочтительным ретровирусным вектором для применения по настоящему изобретению является экспрессионная конструкция на основе лентивируса. Лентивирусные векторы обладают уникальной способностью заражать не пролиферирующие клетки (Amado and Chen, 1999 Science 285: 674-6). Способы создания и применения экспрессионных конструкций на основе лентивируса описаны в патентах США №№6,165,782, 6,207,455, 6,218,181, 6,277,633 и 6,323,031 и в статьях Federico (1999, Curr Opin Biotechnol 10: 448-53) и Vigna et al. (2000, J Gene Med 2000; 2: 308-16).
Обычно векторы для генной терапии рассматриваются как экспрессионные векторы, описанные выше, в том смысле, что они содержат молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессирующийся олигонуклеотид по изобретению, при этом указанная молекула нуклеиновой кислоты функционально связана с соответствующими регуляторными последовательностями. Такая регуляторная последовательность содержит по меньшей мере промоторную последовательность. Подходящие промоторы для экспрессии нуклеотидной последовательности, кодирующие полипептид из векторов для генной терапии, включают, например, промежуточный промотор ранних генов цитомегаловируса (CMV), промоторы длинных концевых повторов (LTRs) вируса, например, такие как ранний промотор длинных концевых повторов вируса мышиного лейкоза Молони (MMLV), вируса саркомы Рауса или HTLV-1, вируса зеленой мартышки 40 (SV 40) и тимидинкиназный промотор вируса простого герпеса.
Многие лекарственные средства для введения в легкие можно вводить через дыхательные пути. Одно такое лекарственное средство могло бы содержать молекулу для РНК-репарации, например, олигонуклеотид по изобретению. Для доставки олигонуклеотида по изобретению в аэрозоле в эпителиальные клетки дыхательных путей, предпочтительно, применяют ингалятор. Или же можно применять композицию для ингаляции в сухом порошке. Применение одноцепочечных (однонитевых) олигонуклеотидов по изобретению в системе доставки в дыхательные пути уменьшает вероятность разрыва молекулы за счет усилия сдвига при введении.
При многих заболеваниях повышается вязкость слизистого слоя, что приводит к уменьшению всасывания лекарственных средств через легкие. Одним таким заболеванием является хронический бронхит, другим примером такого заболевания является муковисцидоз. Имеются различные формы нормализаторов слизи, такие как ДНКазы, гипертонический солевой раствор или маннит, который продается под названием Бронхитол/Bronchitol. Когда нормализаторы слизи применяются в комбинации с соединениями для репарации РНК, такими как олигонуклеотиды по изобретению, они могут повышать эффективность таких лекарственных средств. Следовательно, введение олигонуклеотида по изобретению субъекту, предпочтительно человеку, предпочтительно объединяется с нормализаторами слизи, предпочтительно с нормализаторами слизи, описанными в настоящей заявке. Помимо этого, введение олигонуклеотидов по изобретению можно комбинировать с введением малой молекулы для лечения CF, такого как усилители (действия), например Калидеко/Kalydeco (ивакафтор/ivacaftor; VX-770), корректирующие соединения, например VX-809 (лумакафтор/Lumacaftor) и/или VX-661.
С целью эффективной доставки молекул для РНК репарации в эпителиальные клетки, например, легкого или кишечника, в качестве альтернативы или в комбинации с нормализаторами слизи можно осуществлять доставку в слизь проникающих частиц или наночастиц. Соответственно, при введении олигонуклеотида по настоящему изобретению субъекту, предпочтительно, человеку, применяют, предпочтительно, доставку в слизь проникающих частиц или наночастиц.
Хронические и острые легочные инфекции часто обнаруживаются у пациентов с такими заболеваниями, как муковисцидоз. Лечение антибиотиками уменьшает бактериальные инфекции и ослабляет их симптомы, такие как повышение вязкости слизи и/или образование биопленки. Применение антибиотиков в комплексе с молекулами РНК-репарации могло бы повысить эффективность репарации РНК благодаря более легкому доступу молекул для репарации к клеткам-мишеням. Поэтому введение олигонуклеотида по изобретению субъекту, предпочтительно, человеку, предпочтительно, комбинируют с лечением антибиотиками для уменьшения бактериальных инфекций и ослабления их симптомов, таких как повышение вязкости слизи и/или образование биопленки. Антибиотики можно применять системно или локально, или и тем и другим способом.
Например, для применения у больных муковисцидозом олигонуклеотиды по изобретению, или упакованные олигонуклеотиды или находящиеся в комплексе олигонуклеотиды по изобретению можно комбинировать с нормализаторами слизи, такими как ДНКаза, маннит или гипертонический солевой раствор, и/или антибиотиками и/или малой молекулой для лечения CF, таким как усилители (действия), например, Калидеко (ивакафтор; VX-770), или корректирующими соединениями, например VX-809 (лумакафтор) и/или VX-661.
С целью облегчения доступа к клеткам-мишеням для промывания легких перед введением олигонуклеотидов по изобретению можно применять бронхоальвеолярный лаваж (BAL).
Для доставки олигонуклеотидов по изобретению к эпителиальным клеткам кишечника можно применять капсулу с замедленным высвобождением (англ. термин «time-release capcule»). Репарация CFTR в этих клетках могла бы повысить всасывание питательных веществ. Это лечение можно комбинировать с применением препаратов панкреатических ферментов биологического или синтетического происхождения, таких как Панкрелипаза или Креон/Creon, которые имеются в продаже и обычно применяются для того, чтобы способствовать пищеварению у CF пациентов.
Согласно всем вариантам настоящего изобретения олигонуклеотиды по изобретению могут находиться в композиции с гипертоническим солевым раствором, т.е. в композиции, содержащей олигонуклеотид по изобретению, а также содержащей 2%-9% солевого раствора, предпочтительно, 3%-8% солевого раствора, более предпочтительно, 4%-8% солевого раствора, более предпочтительно, 5%-8% солевого раствора, более предпочтительно, 6%-8% солевого раствора (например, 6.1%, 6.2%, 6.3%, 6.4%, 6.5%, 6.6%, 6.7%, 6.8%, 6.9%, 7.0%, 7.1%, 7.2%, 7.3%, 7.4%, 7.5%, 7.6%, 7.7%, 7.8%, 7.9% или 8.0%)), более предпочтительно, 6%-7% солевого раствора, еще более предпочтительно, около 7% солевого раствора, наиболее предпочтительно, 7% солевого раствора. Процентное содержание солевого раствора в данном контексте определяется как вес солевого раствора/общий объем композиции, т.е. 7% солевого раствора соответствует 70 граммам солевого раствора/литр композиции. Предпочтительно, гипертонической солевой раствор по существу представляет собой раствор NaCl.
Согласно некоторым вариантам настоящего изобретения олигонуклеотид и/или композицию по изобретению можно вводить любым способом, известным специалисту в данной области техники, включая, но без ограничения, введение в легкие, предпочтительно, через (верхние) дыхательные пути, и системное введение, предпочтительно, внутривенное, внутримышечное, интрадермальное или подкожное введение.
Специалист в данной области техники поймет, что описанные выше в данной заявке способы доставки, носители и комбинации для введения можно также комбинировать в способах и при применении согласно настоящему изобретению, например, олигонуклеотид по настоящему изобретению и/или композиция, содержащая такой олигонуклеотид, может находится в комплексе с соединением для доставки по настоящей заявке, может быть упакован(а) (заключена) в носитель для доставки по настоящей заявке и/или может быть упакован(а) в капсулу с замедленным высвобождением.
Предпочтительным способом доставки является доставка в форме вирусной частицы или последовательности вирусной нуклеиновой кислоты, кодирующей олигонуклеотид по изобретению, причем этот олигонуклеотид экспрессируется в результате инфицирования живой клетки вирусной частицей или трансфекции живой клетки при использовании вирусной нуклеиновой кислоты; предпочтительно, как описано ранее в настоящей заявке.
Доставку олигонуклеотида по настоящему изобретению можно осуществлять в легкое, предпочтительно, через (верхние) дыхательные пути, и/или в кишечник. Введение можно сочетать с введением нормализаторов слизи, предпочтительно описанных в настоящей заявке, и/или с лечением антибиотиками, предпочтительно, как описано в настоящей заявке, и/или можно комбинировать с введением препаратов панкреатических ферментов, предпочтительно, описанных в настоящей заявке, и/или можно сочетать с бронхоальвеолярным лаважем для облегчения доступа к клеткам-мишеням.
Специалист в данной области техники понимает, что можно объединять два или более олигонуклеотидов по изобретению. Специалист в данной области техники понимает, что когда в данном контексте говорится об олигонуклеотиде по настоящему изобретению, то в способах и применении по изобретению можно, предпочтительно, взаимозаменяемо, использовать композицию или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению.
В одном аспекте настоящего изобретения предусматривается применение олигонуклеотида для введения изменений в последовательность молекулы целевой РНК, находящейся в живой клетке, включающее стадию предоставления олигонуклеотида в живую клетку в условиях, способствующих всасыванию живой клеткой указанного олигонуклеотида, причем указанный олигонуклеотид содержит последовательность, которая по меньшей мере частично комплементарна молекуле целевой РНК, так что в указанной живой клетке происходит гибридизация олигонуклеотида с целевой РНК, или ее предшественником, или ее матрицей, в результате этого в указанной живой клетке происходят биохимические процессы, вследствие которых различие между последовательностью олигонуклеотида и последовательностью целевой РНК копируется в молекуле РНК, либо непосредственно, либо с использованием ее предшественника или ее матрицы, что приводит к изменению последовательности указанной целевой РНК.
Согласно вариантам этого аспекта, олигонуклеотид, предпочтительно, представляет собой олигонуклеотид, описанный выше в настоящей заявке.
Согласно вариантам этого аспекта, олигонуклеотид, предпочтительно, представляет собой олигорибонуклеотид.
Согласно вариантам этого аспекта, олигонуклеотид, предпочтительно, предоставляется в живую клетку в виде одноцепочечного олигонуклеотида.
Согласно вариантам этого аспекта, живая клетка, предпочтительно, представляет собой часть многоклеточного организма.
Согласно вариантам этого аспекта, живая клетка, предпочтительно, представляет собой животную клетку, более предпочтительно, человеческую клетку.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение в последовательности указанной целевой РНК вызывает изменение фенотипа клетки.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение в указанной целевой РНК подтверждено посредством определения последовательности указанной целевой РНК, или ее предшественника или ее матрицы.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение в указанной целевой РНК подтверждено посредством определения последовательности полипептидного продукта или нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный полипептид, кодируемый указанной целевой РНК.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение в указанной целевой РНК подтверждено посредством определения фенотипического изменения в указанной живой клетке или в указанном организме, содержащем указанную клетку.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение представляет собой уменьшение интенсивности нарушения, причинно связанного с последовательностью целевой РНК до введения изменения.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, нарушение представляет собой генетическое нарушение.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, протяженность олигонуклеотида по данному аспекту составляет 15-100 нуклеотидов. Более предпочтительно, протяженность олигонуклеотида составляет от 20 до 50, более предпочтительно, от 25 до 45 нуклеотидов, более предпочтительно, от 27 до 35 нуклеотидов.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид содержит инозин и/или содержит модифицированные нуклеотиды, включающие фрагменты, выбранные из группы, состоящей из 2'-O-алкилрибозы, 2'-фторрибозы, РМО (ФМО), 5-метил-dC, 2-амино-dA, С5-пиримидина, и/или содержит модифицированные межнуклеозидные связи, выбранные из группы, состоящей из фосфоротиоатных связей, метилфосфонатных связей.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид содержит РНК, ДНК, ПНК (PNA) и/или ЗНК (LNA).
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, все нуклеозиды в олигонуклеотиде представляют собой 2'-O алкилрибонуклеозиды, более предпочтительно, 2'-O метилрибонуклеозиды.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, все нуклеозиды представляют собой рибонуклеозиды.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение последовательности целевой РНК включает инсерцию или замену одного или более нуклеозидов.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, целевая РНК кодирует человеческий CFTR, и изменение приводит в результате к созданию или восстановлению нуклеозидного триплета, кодирующего фенилаланин в аминокислотном положении 508 белка CFTR.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение включает инсерцию нуклеозидного триплета, выбранного из группы, состоящей из 5'-UUU-3' и 5'-CUU-3'.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, последовательность олигонуклеотида комплементарна последовательности, имеющей идентичность по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% нуклеотидам 16-30 и 34-48 последовательности SEQ ID NO: 6, а изменение представляет собой инсерцию нуклеозидного триплета, выбранного из группы, состоящей из 5'-UUU-3' и 5'-CUU-3'.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид содержит нуклеотиды или состоит из нуклеотидов 7-29, предпочтительно, содержит нуклеотиды или состоит из нуклеотидов 1-33, последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3, предпочтительно, SEQ ID NO: 1. Другие предпочтительные олигонуклеотиды включают олигонуклеотид, содержащий олигонуклеотид или состоящий из олигонуклеотида с последовательностью, выбранной из группы от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24, или олигонуклеотид, содержащий укороченный вариант олигонуклеотида или состоящий из укороченного варианта олигонуклеотида с последовательностью, выбранной из группы от SEQ ID NO: 16 to SEQ ID NO: 24. В таком укороченном варианте удалено несколько, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 нуклеотидов на 3' и/или 5' конце последовательностей от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид предоставляется в виде олигонуклеотида, заключенного в носитель, предпочтительно, в липосому, полисому или наночастицу, и/или олигонуклеотид находится в комплексе с соединением для доставки, предпочтительно полиэтиленимином (PEI, ПЭИ), полиэтиленгликолем (PEG, ПЭГ), и/или он связан со стерином (стеролом), предпочтительно, с холестерином (холестеролом).
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид предоставляется в респираторный тракт или легкие, предпочтительно через дыхательные пути, в сухом составе или в аэрозоле, предпочтительно с помощью ингалятора, и предпочтительно олигонуклеотид предоставляется вместе с медиатором трансфекции и/или лекарственным средством для лечения муковисцидоза, известным специалисту в данной области техники, предпочтительно, ДНКазой, маннитом (предпочтительно, бронхитолом) и/или малой молекулой для лечения CF, предпочтительно, Калидеко (ивакафтором; VX-770), VX-809 (лумакафтором) и/или VX-661.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид предусматривается в гипертоническом солевом растворе, предпочтительно с концентрацией солевого раствора между 2%-9%, предпочтительно 3%-8%, более предпочтительно, 4%-8%, более предпочтительно, 5%-8%, более предпочтительно, 6%-8%, более предпочтительно, 6%-7%, еще более предпочтительно, с концентрацией солевого раствора 7%, причем гипертонический солевой раствор, предпочтительно, представляет собой физиологически и фармацевтически приемлемый раствор.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, гипертонический солевой раствор представляет собой по существу раствор NaCl.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид вводят в частице, проникающей в слизь, предпочтительно в наночастице, проникающей в слизь.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, введение олигонуклеотида комбинируют с лечением антибиотиками для уменьшения бактериальных инфекций и ослабления их симптомов, таких как увеличение вязкости слизи и/или образование биопленки.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, перед введением олигонуклеотида по изобретению проводят бронхоальвеолярный лаваж (BAL).
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид вводят в капсуле с замедленным высвобождением с целью содействовать доставке в клетки кишечника.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, введение олигонуклеотида комбинируют с введением композиции биологического или синтетического панкреатического фермента, такой как панкрелипаза или Креон.
В другом аспекте настоящего изобретения предусматривается олигонуклеотид для применения при лечении человеческого организма или организма животного, при этом указанный олигонуклеотид способен вводить изменение в последовательность молекулы целевой РНК в живой клетке указанного человеческого организма или организма животного, предоставляя олигонуклеотид в живую клетку в условиях, способствующих всасыванию живой клеткой указанного олигонуклеотида, причем указанный олигонуклеотид содержит последовательность, которая по меньшей мере частично комплементарна молекуле целевой РНК, так что в указанной живой клетке происходит гибридизация олигонуклеотида с целевой РНК, или ее предшественником, или ее матрицей, в результате этого в указанной живой клетке происходят биохимические процессы, вследствие которых различие между последовательностью олигонуклеотида и последовательностью целевой РНК копируется в молекуле РНК, либо непосредственно, либо с использованием ее предшественника или ее матрицы, что приводит к изменению последовательности указанной целевой РНК.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид представляет собой олигонуклеотид, описанный ранее в настоящей заявке.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид представляет собой олигорибонуклеотид.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение в последовательности целевой РНК вызывает изменение фенотипа клетки.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение в указанной целевой РНК подтверждено посредством определения последовательности указанной целевой РНК, или ее предшественника или ее матрицы.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение в указанной целевой РНК подтверждено посредством определения последовательности полипептидного продукта, кодируемого указанной целевой РНК.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение в указанной целевой РНК подтверждено посредством определения фенотипического изменения в указанной живой клетке или в указанном организме, содержащем указанную клетку.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, фенотипическое изменение представляет собой уменьшение интенсивности нарушения, обусловленного последовательностью целевой РНК до введения изменения.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, нарушение представляет собой генетическое нарушение.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, протяженность олигонуклеотида по данному аспекту составляет 15-100 нуклеотидов.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, протяженность олигонуклеотида составляет от 20 до 50, более предпочтительно, от 25 до 45 нуклеотидов, более предпочтительно, от 27 до 35 нуклеотидов.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигорибонуклеотид содержит инозин и/или содержит модифицированные нуклеотиды, включающие фрагменты, выбранные из группы, состоящей из 2'-О-алкилрибозы, 2'-фторрибозы, РМО (ФМО), 5-метил-dC, 2-амино-dA, С5-пиримидина, и/или содержит модифицированные межнуклеозидные связи, выбранные из группы, состоящей из фосфоротиоатных связей, метилфосфонатных связей.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, все нуклеозиды в олигонуклеотиде представляют собой 2'-O-алкилрибонуклеозиды, более предпочтительно, 2'-O-метилрибонуклеозиды.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, все нуклеозиды представляют собой рибонуклеозиды.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид содержит РНК, ДНК, ПНК (PNA) и/или ЗНК (LNA).
Согласно всем вариантам изобретения олигонуклеотиды по изобретению, как правило, вводятся в дозах в интервале от 1 мкг до 1000 мг, более предпочтительно, от 10 мкг до 100 мг, еще более предпочтительно, от 100 мкг до 10 мг и, наиболее предпочтительно, от 500 мкг до 5 мг, в зависимости от клетки (ткани), подлежащей обработке (лечению), массы (веса) тела, способа и/или области введения (местное vs. системного), области введения (интраперитонеальное (внутрибрюшинное), внутримышечное, легочное и т.д.), нарушения, подлежащего лечению, применяемой схемы приема лекарств (разовое или повторное, болюсное или постоянное введение дозы) и т.п. Специалист в данной области техники может установить оптимальную дозу методом проб и ошибок.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение в последовательности молекулы целевой РНК включает инсерцию или замену одного или более нуклеозидов.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, целевая РНК кодирует человеческий белок CFTR, а изменение приводит к образованию или восстановлению нуклеозидного триплета, кодирующего фенилаланин в аминокислотном положении 508 белка CFTR.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, изменение включает инсерцию нуклеозидного триплета, выбранного из группы, состоящей из 5'-UUU-3' и 5'-CUU-3'.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, последовательность олигонуклеотида комплементарна последовательности, имеющей идентичность по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% нуклеотидам 16-30 и 34-48 последовательности SEQ ID NO: 6, а изменение представляет собой инсерцию нуклеозидного триплета, выбранного из группы, состоящей из 5'-UUU-3' и 5'-CUU-3'.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид содержит нуклеотиды или состоит из нуклеотидов 7-29, предпочтительно, содержит нуклеотиды или состоит из нуклеотидов 1-33, последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3, предпочтительно, SEQ ID NO: 1. Другой предпочтительный олигонуклеотид включает олигонуклеотид, содержащий олигонуклеотид или состоящий из олигонуклеотида с последовательностью, выбранной из группы от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24, или олигонуклеотид, содержащий укороченный вариант олигонуклеотида или состоящий из укороченного варианта олигонуклеотида с последовательностью, выбранной из группы от SEQ ID NO: 16 to SEQ ID NO: 24. В таком укороченном варианте удалено несколько, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 нуклеотидов на 3' и/или 5' конце последовательностей от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид предоставляется в носителе, предпочтительно в липосоме, полисоме или наночастице, и/или олигонуклеотид находится в комплексе с соединением для доставки, предпочтительно, полиэтиленимином (PEI, ПЭИ), полиэтиленгликолем (PEG, ПЭГ), и/или он связан со стеролом, предпочтительно с холестеролом.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид предоставляется в нижние дыхательные пути или легкие, предпочтительно, через верхние дыхательные пути, в сухом составе или в аэрозоле, предпочтительно с помощью ингалятора, и, предпочтительно, олигонуклеотид предоставляется вместе с медиатором трансфекции и/или лекарственным средством для лечения муковисцидоза, известным специалисту в данной области техники, предпочтительно, ДНКазой, маннитом (предпочтительно, бронхитолом) и/или малой молекулой для лечения CF, предпочтительно, Калидеко (ивакафтором; VX-770), VX-809 (лумакафтором) и/или VX-661.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид предоставляется в гипертоническом солевом растворе, предпочтительно с концентрацией солевого раствора между 2%-9%, предпочтительно 3%-8%, более предпочтительно, 4%-8%, более предпочтительно, 5%-8%, более предпочтительно, 6%-8%, более предпочтительно, 6%-7%, еще более предпочтительно, с концентрацией солевого раствора 7%, причем гипертонический солевой раствор, предпочтительно, представляет собой физиологически и фармацевтически приемлемый раствор.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, гипертонический солевой раствор представляет собой по существу раствор NaCl.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид вводят в частице, проникающей в слизь, предпочтительно в наночастице, проникающей в слизь.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, введение олигонуклеотида комбинируют с лечением антибиотиками для уменьшения бактериальных инфекций и ослабления их симптомов, таких как увеличение вязкости слизи и/или образование биопленки.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, перед введением олигонуклеотида по изобретению проводят бронхоальвеолярный лаваж (BAL).
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, олигонуклеотид вводят в капсуле с замедленным высвобождением с целью содействовать доставке в клетки кишечника.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, введение олигонуклеотида комбинируют с введением композиции биологического или синтетического панкреатического фермента, такой как Панкрелипаза или Креон.
В другом аспекте настоящего изобретения предусматривается фармацевтическая композиция, содержащая олигонуклеотид по определению в предыдущем аспекте настоящего изобретения, фармацевтически приемлемый носитель и/или гипертонический физиологически и фармацевтически приемлемый солевой раствор, предпочтительно, с концентрацией солевого раствора между 2%-9%, предпочтительно 3%-8%, более предпочтительно, 4%-8%, более предпочтительно, 5%-8%, более предпочтительно, 6%-8%, более предпочтительно, 6%-7%, еще более предпочтительно, с концентрацией солевого раствора 7%.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, гипертонический солевой раствор представляет собой по существу раствор NaCl.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, фармацевтическая композиция содержит также медиатор трансфекции.
Согласно вариантам этого аспекта, предпочтительно, фармацевтическая композиция содержит лекарственное средство против муковисцидоза, известное специалистам в данной области техники, предпочтительно, ДНКазу, маннит и/или малую молекулу для лечения CF, предпочтительно, Калидеко (ивакафтор; VX-770), VX-809 (лумакафтор) и/или VX-661.
В другом аспекте настоящего изобретения предусматривается олигонуклеотид по изобретению по определению в различных аспектах и вариантах данной заявки и/или фармацевтическая композиция, содержащая такой олигонуклеотид. Предпочтительно, такой олигонуклеотид или такая композиция по изобретению представляет собой одноцепочечный олигорибонуклеотид или фармацевтическую композицию, содержащую одноцепочечный олигорибонуклеотид, комплементарный последовательности, имеющей идентичность по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% нуклеотидам 16-30 и 34-48 последовательности SEQ ID NO: 6. Более предпочтительно, такой олигонуклеотид или такая композиция по изобретению представляет собой одноцепочечный олигорибонуклеотид, или фармацевтическую композицию, содержащую одноцепочечный олигорибонуклеотид, который содержит нуклеотиды 7-29, предпочтительно, содержит нуклеотиды или состоит из нуклеотидов 1-33, последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3, предпочтительно, SEQ ID NO: 1. Другой предпочтительный олигонуклеотид включает олигонуклеотид, содержащий олигонуклеотид или состоящий из олигонуклеотида с последовательностью, выбранной из группы от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24, или олигонуклеотид, содержащий укороченный вариант олигонуклеотида или состоящий из укороченного варианта олигонуклеотида с последовательностью, выбранной из группы от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24. В таком укороченном варианте удалено несколько, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 нуклеотидов на 3' и/или 5' конце последовательностей от SEQ ID NO: 16 до SEQ ID NO: 24.
Согласно всем вариантам настоящего изобретения можно применять эксципиент, который (также) содействует повышению стабильности, растворимости, всасывания (поглощения), активности, улучшению фармакокинетических и фармакодинамических свойств и доставке олигонуклеотида по изобретению в клетку, в частности, эксципиенты, способные образовывать комплексы, везикулы, наночастицы, микрочастицы, нанотрубки, наногели, гидрогели, полоксамеры или плюроники, полимерсомы, коллоидные частицы, микропузырьки, мицеллы, липоплексы и/или липосомы, которые доставляют соединение, вещества и/или олигонуклеотид(ы), образующие комплексы с везикулами или липосомами или заключенные в везикулы или липосомы, через клеточную мембрану. Примеры наночастиц включают наночастицы золота, магнитные наночастицы, наночастицы оксида кремния, липидные наночастицы, углеводные частицы (частицы сахаров), белковые наночастицы и пептидные наночастицы. Другую группу наночастиц составляют полимерные наночастицы. Многие из этих полимерных веществ известны из уровня техники. Соответствующие вещества включают, например, полиэтиленимин (PEI, ПЭИ), ExGen 500, полипропиленимин (PPI), поли(2-гидроксипропиленимин) (рНР), производные декстрана (например, поликатионы, такие как диэтиламиноэтил-(DEAE)-декстран, который также известен как трансфекционный реагент для трансфекции ДНК, который может объединяться с бутилцианоакрилатом (РВСА) и гексилцианоакрилатом (РНСА) для приготовления карионных наночастиц, которые могут доставлять указанное соединение через клеточные мембраны в клетки), бутилцианоакрилат (РВСА), гексилцианоакрилат (РНСА), сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA), полиамины (например, спермин, спермидин, путресцин, кадаверин), хитозан, полиамидоамины (РАМАМ), полиэфирамин, поливиниловый эфир, поливинилпирролидон (PVP), полиэтиленгликоль (PEG, ПЭГ), циклодекстрины, гиалуроновую кислоту, коломиновую кислоту и их производные, дендримеры (например, полиамидоамин), липиды {например, 1,2-диолеил-3-диметиламмонийпропан (DODAP), диолеилдиметиламмония хлорид (DODAC), производные фосфатидилхолина [например, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DSPC)], производные лизофосфатидилхолдина [например, 1-стеароил-2-лизо-sn-глицеро-3-фосфохолин (S-LysoPC)], сфингомиелин, 2-{3-[бис-(3-аминопропил)-амино]-пропиламино}-N-дитетрадецил-карбамоил метилацетамид (RPR209120), производные фосфоглицерина [например, 1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерина натриевую соль (DPPG-Na), производные фосфатидной кислоты [1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфатидной кислоты натриевую соль (DSPA), производные фосфатидилэтаноламина [например, диолеил-J-R-фосфатидилэтаноламин (DOPE), 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE), 2-дифитаноил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DPhyPE)], N-[1-(2,3-диолеилокси)пропил]-N,N,N-триметиламмоний (DOTAP), 1,3-диолеилокси-2-(6-карбоксиспермил)-пропиламид (DOSPER), (1,2-димиристилоксипропил-3-диметилгидроксиэтиламмоний (DMRIE), (N1-холестерилоксикарбонил)-3,7-диазанонан-1,9-диамин (CD AN), диметилдиоктадециламмония бромид (DDAB), 1-пальмитоил-2-олеил-sn-глицеро-3-фосфохолин (РОРС), (b-L-Аргинил-2,3-L-диаминопропионовой кислоты-N-пальмитил-N-олеиламида тригидрохлорид (AtuFECTOl), производные N,N-диметил-3-аминопропана [например, 1,2-дистеароилокси-N,N-диметил-3-аминопропан (DSDMA), 1,2-диолеилокси-N,N-диметил-3-аминопропан (DoDMA), 2,2-дилинолеил-N,N-диметил-3-аминопропан (DLinDMA), 2,2-дилинолеил-4-диметиламинометил [1,3]-диоксолан (DLin-K-DMA), производные фосфатидилсерина [1,2-диолеил-sn-глицеро-3-фосфо-L-серина натриевую соль (DOPS)], холестерин, синтетические амфифильные вещества (SAINT-18), липофектин, белки (например, альбумин, желатины, ателоколаген) пептиды (например, PepFects, NickFects, полиаргинин, полилизин, CADY, MPG), их комбинации и/или вирусные капсидные белки, обладающие способностью к самосборке в частицы, которые могут доставлять указанное соединение или олигонуклеотид в клетку. Липофектин является примером липосомного трансфекционного агента. Он состоит по меньшей мере из двух липидных компонентов, катионного липида N-[1-(2,3-диолеилокси)пропил]-N,N,N-триэтиламмония хлорида (DOTMA) (ср. с DOTAP, который является солью метансульфокислоты) и нейтрального липида диолеилфосфатидилэтаноламина (DOPE). Нейтральный компонент опосредует внутриклеточное высвобождение. В дополнение к этим материалам наночастиц, в качестве альтернативы, катионный пептид протамин дает возможность готовить препараты олигонуклеотидов в виде коллоидных систем. Эта коллоидная система из наночастиц может образовывать так называемые "proticles", которые можно получать простым методом самосборки для того, чтобы упаковать и опосредовать высвобождение соединения по настоящему изобретению внутри клетки. Специалист в данной области техники может выбрать и адаптировать любые из вышеприведенных или других имеющихся или не имеющихся в продаже альтернативных эксципиентов и систем доставки.
В настоящем изобретении предусматривается также способ предупреждения или лечения заболевания, связанного с (генетическим) нарушением или связанного с (генетической) мутацией у субъекта, включающий введение олигонуклеотида по изобретению или композиции по изобретению субъекту, предпочтительно, человеку.
(Генетическое) нарушение, (генетическая) мутация, олигонуклеотид, композиция и введение, предпочтительно, представляют собой такие нарушения, мутацию, олигонуклеотид, композицию и введение, которые описаны ранее в данной заявке.
В описании изобретения слово "генетическое(ая)" написано в скобках, чтобы показать, что мутации в молекуле целевой РНК не обязательно являются результатом генетического кодирования. Они могут появляться в результате (некорректного) "кодирования" РНК, аберрантного пред-РНК сплайсинга или процессинга, или действия любого другого (неизвестного) механизма.
В данном документе и в Формуле изобретения глагол "содержать", и его формы, образованные при спряжении, применяется как открытый, не ограничительный глагол и означает, что объекты, указанные после этого слова, включены, но объекты, конкретно не указанные, не исключены. Кроме того, ссылка на элемент в единственном числе не исключает возможности того, что имеется более одного элемента, если из контекста точно не следует, что имеется один и только один элемент. Таким образом, элемент в единственном числе (при отсутствии четкого утверждения, что имеется один и только один элемент) означает "по меньшей мере один". Слова "около" или "примерно", применяемые вместе с численной величиной (например, около 10), предпочтительно, означают, что эта величина может представлять собой данную величину (например, 10) плюс или минус 0.1% от этой величины.
Сведения о последовательности, предусматриваемые в данной заявке, не должны быть настолько узкоспецифическими, чтобы потребовалось включение ошибочно определенных нуклеотидов. Специалист в данной области способен идентифицировать такие ошибочно определенные нуклеотиды и знает, как исправить такие ошибки. В случае ошибок предпочтение должно отдаваться последовательностям геномной ДНК, мРНК и полинуклеотида белка трансмембранного регулятора муковисцидоза (CFTR).
Все цитируемые в настоящем изобретении патенты и ссылочные материалы тем самым вводятся в данное изобретение в качестве отсылки во всей полноте.
Настоящее изобретение далее описывается с помощью приведенных ниже примеров, которые не следует рассматривать как ограничивающие объем изобретения.
Если не указано иначе, в случае применения данного изобретения на практике применяются обычные методы молекулярной биологии, микробиологии и/или биохимии. Такие методы описаны в книгах: Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2nd edition), Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press; в Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; в Volumes 1 and 2 Ausubel et al. (1994) Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols, USA; и в Volumes I и II Brown (1998) Molecular Biology LabFax, Second Edition, Academic Press (UK); Oligonucleotide Synthesis (N. Gait editor); Nucleic Acid 30 Hybridization (Hames and Higgins, eds.).
Пример 1
In vivo оценка QR-010
Фенотип при муковисцидозе (CF, кистозном фиброзе) обусловлен отсутствием функционального CFTR белка, приводящим к снижению оттока ионов хлорида. CFTR также является негативным регулятором натриевого канала ENaC. Отсутствие CFTR стимулирует ENaC, что приводит к повышенному всасыванию (гиперабсорбции) ионов натрия, дополнительно нарушая осмотический баланс и ухудшая CF фенотип. Репарация CFTR повышает транспорт ионов хлорида и дополнительно приводит к снижению повышенного всасывания ионов натрия.
Эффективность агента в отношении CFTR можно количественно определять, определяя разности назальных потенциалов (NPD) на мышиной модели муковисцидоза (Leal et al, 2006, Lab animals 40: 43-52). Измерение значений NPD является способом измерения тока для стимуляции назального эпителия животных и человека. В данном контексте по кривой (следам, отпечаткам), образованной в процессе измерения, определяли транспорт (ионов) натрия, рассчитывая разность между начальным током и током после добавления блокатора ENaC. Для определения активности CFTR определяли разность показаний до и после нанесения буфера с отрицательным ионом (анионом) хлора (хлоридом-минус) и/или форсколина.
Снижение потенциала указывает на эффективность лечения вследствие снижения ENaC гиперактивности, наблюдаемой при CF. Натрий переносится с помощью ENaC, который регулируется посредством CFTR. Вследствие отсутствия функционального CFTR при CF не происходит понижающей регуляции ENaC, что приводит к повышенному всасыванию (гиперабсорбции) ионов натрия, а это, в свою очередь, ухудшает CF фенотип.
Повышение потенциала в результате стимулирования форсколином также указывает на эффективность лечения. Как правило, у CF мышей не наблюдался ни CFTR отклик на хлорид-минус ион, ни CFTR отклик, стимулированный форсколином; если после лечения можно было наблюдать статистически значимое изменение (поправку) стимулируемого форсколином CFTR отклика, этот результат являлся показателем эффективного лечения.
Коротко говоря, восемь мышей CF-dF508 лечили с помощью QR-010 от компании ProQR Therapeutics (олигонуклеотида с последовательностью, показанной в SEQ ID NO: 1). Мышам многократно вводили интраназально 40 мкг QR-010, растворенного в 2 мкл воды. Перед лечением в день 0 у мышей проводили измерение NPD, олигонуклеотид вводили на 2, 4 и 7 день и после лечения измеряли NPD на 9 день. Затем трем мышам вводили дозы лекарства на 10, 13 и 15 день и проводили измерение на 17 день.
Измерения NPD проводили по методике, описанной в статье Leal et al, 2006, Lab animals 40: 43-52, с некоторыми модификациями и используя высокоимпендансный (>1.0 Е+12 Q) вольтметр (Knick Portamesss 913, Elektronische Mebgerate, Berlin, Germany) с памятью данных. Коротко говоря, мышей клали на спину на нагревательный столик (грелку), а лапы и хвост освобождали. Внутривенный катетер с крыльями (0.719 мм, Insyte-Wt, Becton Dickinson, UT, USA) заполняли разбавленной электродной пастой (Signa [Parker Labs, Fairfield, NJ, USA] паста/KCl 1 моль/л 1:1 об/об) и вводили подкожно в заднюю лапу, служащую в качестве моста для соединения с эталонным Ag/AgCl электродом (SLE Instruments, South Croydon, UK). Двухпросветный катетер (внешний диаметр [OD] 0.3 мм) помещали в носовой проход, причем один просвет применяли для перфузии изотонических буферных солевых растворов, а другой служил в качестве измерительного электрода. Его сопротивление было <1.0 Е+6 Q. Язык животного отводили в сторону, а заостренный кончик фильтровальной бумаги помещали в рот примерно на 1 см ближе к горлу, чтобы впитывать избыток жидкости из ротовой полости. Избыточную жидкость, вытекающую из перфузированной ноздри, промокали фильтровальной бумагой, помещенной на кончик носа, таким образом в другую ноздрю раствор не попадал. Обычно в течение 5 минут после введения лекарств нагревательный столик осторожно наклоняли под углом примерно 30 градусов, при этом голова животного была направлена вниз, и с помощью перистальтического насоса (PI, Amersham Biosciences, Roosendaal, The Netherlands) начинали назальную перфузию со скоростью 15 мл/мин. Перед началом перфузии измеряли базовое значение назальной PD до момента получения устойчивого значения. Растворы меняли только после стабилизации напряжения. Базовый изотонический солевой раствор состоял из (ммоли/л): Na+ 140, Cl- 120, К+ 5.2, НСО3 - 25, HPO4 2- 2.4, H2PO4 - 0.4, Са2+ 1.2 и Mg2+ 1.2. Не содержащий хлорид-иона раствор для определения оттока (иона) хлорида из назального эпителия готовили, заменяя NaCl и CaCl2 на эквимолярное количество глюконата, a MgCl2 на MgSO4. Осмолярность составляла was 275 мОсм/л и рН 7.4. Начальное значение NPD определяется главным образом током (ионов) натрия, генерируемым с помощью ENaC. Этот канал блокировали амилоридом, чтобы снизить потенциал до нуля. Добавляли буфер, не содержащий хлорид-иона, для измерения хлорид-иона, транспортируемого CFTR, а для активации CFTR применяли форсколин. В конце эксперимента вводили фиксированную дозу налоксона (4 мг), конкурентного антагониста морфина (опиоидных препаратов), и атипамезол, медетомидин-специфический антидот (5-кратная доза медетомидина), и животное оставляли в темной комнате на нагревательном столике до полного восстановления нормального состояния, которое обычно наступало через 3-4 часа.
Результаты измерений NPD показаны на фиг. 5 и 6.
На Фиг. 5 четко показано, что перенос (транспорт) иона натрия у CF мышей меняется в результате лечения олигонуклеотидом QR-010 (р=0.0002; n=8), сдвигаясь к уровням дикого типа. Эти результаты являются конкретным свидетельством того, что активность CFTR восстанавливается после лечения с помощью QR-010.
На Фиг. 6 четко показано, что стимулируемый форсколином CFTR отклик повышается после 3 доз QR-010 (р=0.019; n=8), с дальнейшим повышением после 6 доз QR-010 (р=0.11, n=3). Как правило, у CF мышей отсутствует стимулируемый форсколином CFTR отклик; однако, после лечения наблюдалась коррекция стимулируемого форсколином CFTR отклика. Этот результат является конкретным свидетельством того, что активность CFTR восстанавливается после лечения с помощью QR-010.
В целом данный эксперимент четко демонстрирует, что олигонуклеотид по настоящему изобретению, такой как QR-010, позволяет эффективно исправлять генные дефекты.
Пример 2
Активность олигонуклеотидов, показанных в SEQ ID NO: 51. 56. 61 и 66, при восстановлении последовательности РНК, кодирующей CFTR дикого типа.
Олигонуклеотиды, показанные в SEQ ID NO: 51, 56, 61 и 66, проверяли на их активность при восстановлении последовательности РНК, кодирующей CFTR дикого типа в первичных клетках легочного эпителия, полученных от пациентов, несущих целевую мутацию по меньшей мере в одном аллеле. Клетки культивировали методами, известными специалисту в данной области техники, в подходящей среде. Олигонуклеотиды по изобретению вводили в клетки с помощью трансфекции. Трансфекцию осуществляли методами, известными специалисту в данной области техники, при использовании трансфекционного реагента липофектамина, с концентрациями в интервале от 1 до 500 нМ. К клеткам в соответствующей среде добавляли комплекс олигонуклеотид-трансфекционный реагент и после инкубации в течение 24 часов отмывали от клеток.
Активность олигонуклеотидов при восстановлении (исправлении) последовательности РНК, кодирующей CFTR дикого типа, определяли после 1-4 дней культивирования клеток после трансфекции. Клетки собирали и активность олигонуклеотидов оценивали на молекулярном уровне, применяя РНК репарацию в качестве первичного (исходного) показания. Репарацию РНК определяли методами секвенирования и/или количественной ПЦР (Q-PCR). РНК очищали от клеток методом, известным специалисту в данной области техники. Затем часть CFTR РНК, в которой находится мутация, амплифицировали методом ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR). Продукты RT-PCR секвенировали с целью определить, что мутация исправлена, как показано на Фиг. 9a-d.
Описание чертежей
Фиг. 1 - частичные последовательности дикого типа (WT) и AF508 (Mut) CFTR РНК, прилегающие к сайту делеции. Три нуклеотида, удаленные в мутантной последовательности, показаны жирным шрифтом в последовательности WT.
Фиг. 2 - схематическое изображение РНК-редактирования мутантной AF508 CFTR РНК с использованием олигонуклеотида с SEQ ID NO: 1. Молекула восстановленной (в результате репарации) РНК (RS) содержит инсерцию 3 нуклеотидов, делающую последовательность РНК идентичной дикого типа CFTR РНК.
Фиг. 3 - частичные последовательности РНК и белка дикого типа, мутантные и исправленные (восстановленные) молекулы. В мутантной последовательности белка отсутствует фенилаланин в положении 508. Результатом репарации РНК является инсерция фенилаланина, образуется последовательность белка дикого типа.
Фиг. 4 - активность одноцепочечного олигонуклеотида в клеточных культурах, экспрессирующих эндогенный AF508 мутантный CFTR. Сравниваются одноцепочечный олигонуклеотид и описанный ранее дуплексный олигонуклеотид. Активность измеряют, определяя активность CFTR в регуляции транспорта хлорид-ионов.
Фиг. 5 - активность ENaC, показанная как потенциал (мВ) для мыши дикого типа (WT), CF мыши (CF) и CF мыши, пролеченной олигонуклеотидом QR-010 (CF-пролеченная). ** Р<0.01; ns = незначимое. Столбцы показаны со стандартной ошибкой среднего (SEM); значения р получали с помощью двухвыборочного критерия для независимых выборок.
Фиг. 6 - стимулируемый форсколином CFTR отклик, показанный как относительное содержание в процентах для мыши дикого типа (Wild type), непролеченной CF мыши (CF), CF мыши, пролеченной 3 дозами QR-010 (CF 3D), и CF мыши, пролеченной 6 дозами QR-010 (CF 6D). Результаты для мыши дикого типа взяты за 100%.
Фиг. 7a - изображена репарация CFTR дельта F508 мутации в целевой РНК с помощью олигонуклеотида 010g (SEQ ID NO: 1); показана часть РНК, прилегающая к сайту делеции. Инсерция тринуклеозида CUU, приводящая в результате к появлению фенилаланина (F) в положении 508 (UUU), показана жирным шрифтом.
Фиг. 7b - показана инсерция двух нуклеозидов в положение 508 целевой РНК дельта F508 CFTR с помощью олигонуклеотида с последовательностью SEQ ID NO: 16; показана часть РНК, прилегающая к сайту делеции. Показана инсерция двух нуклеозидов CU в положение 508, вызывающая сдвиг рамки в кодирующей последовательности.
Фиг. 7c - показана инсерция одного нуклеозида в положение 508 целевой РНК дельта F508 CFTR с помощью олигонуклеотида с последовательностью SEQ ID NO: 17; показана часть РНК, прилегающая к сайту делеции. Показана инсерция нуклеозида С в положение 508, вызывающая сдвиг рамки в кодирующей последовательности, в конечном счете образуя стоп-кодон в положении 512.
Фиг. 7d - показана инсерция одного нуклеозида в положение 508 целевой РНК дельта F508 CFTR с помощью олигонуклеотида с последовательностью SEQ ID NO: 18; показана часть РНК, прилегающая к сайту делеции. Показана инсерция нуклеозида С в положение 508, вызывающая сдвиг рамки в кодирующей последовательности, в конечном счете образуя стоп-кодон в положении 512.
Фиг. 8 - показаны различные инсерции в положение 508 в целевой WT CFTR РНК.
Фиг. 8a - показана инсерция стоп-кодона в положение 508 (ATCATCTGATTTGGTGTT; SEQ ID NO: 33) целевой WT CFTR РНК с помощью олигонуклеотида с последовательностью SEQ ID NO: 19; показана часть РНК, прилегающая к положению 508. Инсерция стоп-кодона вызывает прекращение трансляции после I 507.
Фиг. 8b - показана инсерция двух нуклеозидов в положение 508 целевой РНК дельта F508 CFTR с помощью олигонуклеотида с последовательностью SEQ ID NO: 20; показана часть РНК, прилегающая к положению 508. Показана инсерция двух нуклеозидов GA в положение 508, вызывающая сдвиг рамки в кодирующей последовательности.
Фиг. 8c - показана инсерция одного нуклеозида в положение 508 целевой РНК дельта F508 CFTR с помощью олигонуклеотида с последовательностью SEQ ID NO: 21; показана часть РНК, прилегающая к положению 508. Показана инсерция нуклеозида А в положение 508, вызывающая сдвиг рамки в кодирующей последовательности, в конечном счете создавая стоп-кодон в положении 513.
Фиг. 8d - показана инсерция ко дона лейцина (ATCATCCTCTTTGGTGTT; SEQ ID NO: 40) в положение 508 целевой РНК дельта F508 CFTR с помощью олигонуклеотида с последовательностью SEQ ID NO: 22; показана часть РНК, прилегающая к положению 508. Показана инсерция кодона лейцина и полученный в результате полипептид.
Фиг. 8e - показана инсерция стоп-кодона посередине в экзоне 10 целевой РНК дельта F508 CFTR с помощью олигонуклеотида с последовательностью SEQ ID NO: 23; показана часть РНК, прилегающая к положению 508. Инсерция стоп-кодона вызывает прекращение трансляции после аминокислоты в положении F 494.
Фиг. 8f - показано введение кодона лейцина (CUU) в экзон 10 целевой РНК дельта F508 CFTR с помощью олигонуклеотида с последовательностью SEQ ID NO: 24. Показано введение кодона лейцина и полученный в результате полипептид.
Фиг. 9a - показано исправление CFTR R117H мутации в целевой РНК с помощью CFTR-R117 олигонуклеотида (SEQ ID NO: 51); показана часть РНК, прилегающая к сайту мутации. Замена "А" на "G" трансформирует САС кодон (His) в CGC кодон (Arg) и показана жирным шрифтом.
Фиг. 9b - показано исправление мутации CFTR G542X в целевой РНК с помощью CFTR-G542 олигонуклеотида (SEQ ID NO: 56); показана часть РНК, прилегающая к сайту мутации. Замена "U" на "G" трансформирует кодон UGA (Стоп-кодон) в кодон GGA (Gly) и показана жирным шрифтом.
Фиг. 9c - показано исправление мутации CFTR W1282X в целевой РНК с помощью CFTR-W1282 олигонуклеотида (SEQ ID NO: 61); показана часть РНК, прилегающая к сайту мутации. Замена "А" на "G" трансформирует кодон UGA (Стоп-кодон) в кодон UGG (Тгур) и показана жирным шрифтом.
Фиг. 9d - показано исправление мутации CFTR N1303K в целевой РНК с помощью CFTR-N1303 олигонуклеотида (SEQ ID NO: 66); показана часть РНК, прилегающая к сайту мутации. Замена "G" на "С" трансформирует кодон AAG (Lys) в кодон AAC (Asn) и показана жирным шрифтом.
Claims (19)
1. Применение одноцепочечного олигонуклеотида, где все нуклеозиды олигонуклеотида представляют собой 2'-O-алкилрибонуклеозиды, для лечения муковисцидоза у человека, нуждающегося в этом, путем нацеливания молекулы целевой РНК, находящейся в живой клетке указанного человека, включающее стадию предоставления олигонуклеотида в живую клетку в одноцепочечной форме в условиях, способствующих всасыванию живой клеткой указанного олигонуклеотида, причем указанный олигонуклеотид содержит последовательность, которая по меньшей мере частично комплементарна последовательности, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90% или 99% идентична нуклеотидам 16-30 и 34-48 последовательности SEQ ID NO: 5, причем олигонуклеотид содержит нуклеотиды или состоит из нуклеотидов 7-29 или нуклеотидов 1-33 последовательности SEQ ID NO: 1.
2. Применение по п. 1, где протяженность олигонуклеотида составляет 15-100 нуклеотидов.
3. Применение по п. 2, где протяженность олигонуклеотида составляет от 20 до 50 нуклеотидов, более предпочтительно от 25 до 45 нуклеотидов, более предпочтительно от 27 до 35 нуклеотидов.
4. Применение по любому из пп. 1-3, где олигонуклеотид содержит инозин и/или содержит модифицированные нуклеотиды, предпочтительно выбранные из группы, состоящей из РМО (ФМО), 5-метил-dC, 2-амино-dA, С5-пиримидина, и/или модифицированные межнуклеозидные связи, выбранные из группы, состоящей из фосфоротиоатных связей и метилфосфонатных связей.
5. Применение по любому из пп. 1-4, где все нуклеозиды олигонуклеотида представляют собой 2'-O-метилрибонуклеозиды.
6. Применение по п. 1, где олигонуклеотид предоставляется в носителе, предпочтительно в липосоме, полисоме или наночастице, и/или где олигонуклеотид находится в комплексе с соединением для доставки, предпочтительно с полиэтиленимином, полиэтиленгликолем, и/или связан со стеролом, предпочтительно с холестеролом.
7. Применение по п. 1, где олигонуклеотид предоставляется в легкие, предпочтительно через дыхательные пути, в сухом составе или в аэрозоле, предпочтительно с помощью ингалятора, и предпочтительно олигонуклеотид предоставляется вместе с медиатором трансфекции и/или лекарственным средством для лечения муковисцидоза, известным специалисту в данной области техники, предпочтительно ДНКазой, маннитом и/или малой молекулой для лечения муковисцидоза, предпочтительно Калидеко (ивакафтор; VX-770), VX-809 (лумакафтор) и/или VX-661.
8. Применение по п. 1, где олигонуклеотид предоставляется в гипертоническом солевом растворе, предпочтительно с концентрацией солевого раствора между 2-9%, предпочтительно 3-8%, более предпочтительно 4-8%, более предпочтительно 5-8%, более предпочтительно 6-8%, более предпочтительно 6-7%, еще более предпочтительно с концентрацией солевого раствора около 7%, причем гипертонический солевой раствор, предпочтительно, представляет собой физиологически и фармацевтически приемлемый раствор.
9. Одноцепочечный олигонуклеотид, где все нуклеозиды олигонуклеотида представляют собой 2'-O-алкилрибонуклеозиды, для применения в лечении муковисцидоза человеческого организма или организма животного, причем указанный олигонуклеотид комплементарен последовательности, которая по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90% или 99% идентична нуклеотидам 16-30 и 34-48 последовательности SEQ ID NO: 5, причем олигонуклеотид содержит нуклеотиды или состоит из нуклеотидов 7-29 или нуклеотидов 1-33 последовательности SEQ ID NO: 1.
10. Олигонуклеотид по п. 9, протяженность которого составляет 15-100 нуклеотидов.
11. Олигонуклеотид по п. 10, протяженность которого составляет от 20 до 50, более предпочтительно от 25 до 45 нуклеотидов, более предпочтительно от 27 до 35 нуклеотидов.
12. Олигонуклеотид по любому из пп. 9-11, где олигонуклеотид содержит инозин и/или содержит модифицированные нуклеотиды, предпочтительно выбранные из группы, состоящей из РМО (ФМО), 5-метил-dC, 2-амино-dA, С5-пиримидина, и/или модифицированные межнуклеозидные связи, выбранные из группы, состоящей из фосфоротиоатных связей и метилфосфонатных связей.
13. Олигонуклеотид по любому из пп. 9-11, в котором все нуклеозиды олигонуклеотида представляют собой 2'-O метилрибонуклеозиды.
14. Олигонуклеотид по п. 9, где олигонуклеотид предоставляется в носителе, предпочтительно в липосоме, полисоме или наночастице, и/или олигонуклеотид связан со стеролом, предпочтительно с холестеролом.
15. Олигонуклеотид по п. 9, где олигонуклеотид предоставляется в респираторный тракт или легкое, предпочтительно через дыхательные пути, в сухом составе или в аэрозоле, предпочтительно с помощью ингалятора, и предпочтительно олигонуклеотид предоставляется вместе с медиатором трансфекции и/или лекарственным средством для лечения муковисцидоза, известным специалисту в данной области техники, предпочтительно, ДНКазой, маннитом и/или малой молекулой для лечения муковисцидоза, предпочтительно, Калидеко (ивакафтор; VX-770), VX-809 (лумакафтор) и/или VX-661.
16. Олигонуклеотид по п. 15, где олигонуклеотид предоставляется в гипертоническом солевом растворе, предпочтительно с концентрацией соли между 2-9%, предпочтительно 3-8%, более предпочтительно 4-8%, более предпочтительно 5-8%, более предпочтительно 6-8%, более предпочтительно 6-7%, еще более предпочтительно с концентрацией солевого раствора около 7%, причем гипертонический солевой раствор, предпочтительно, представляет собой физиологически и фармацевтически приемлемый раствор.
17. Комплекс для лечения муковисцидоза человеческого организма или организма животного, содержащий олигонуклеотид по п. 9, который находится в комплексе с соединением для доставки.
18. Комплекс по п. 17, в котором соединение для доставки представляет собой полиэтиленимин или полиэтиленгликоль.
19. Фармацевтическая композиция для лечения муковисцидоза, содержащая олигонуклеотид по любому из пп. 9-13, фармацевтически приемлемый носитель и/или гипертонический физиологически и фармацевтически приемлемый солевой раствор, предпочтительно с концентрацией солевого раствора между 2-9%, предпочтительно 3-8%, более предпочтительно 4-8%, более предпочтительно 5-8%, более предпочтительно 6-8%, более предпочтительно 6-7%, еще более предпочтительно с концентрацией солевого раствора около 7%.
Applications Claiming Priority (11)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201261670681P | 2012-07-12 | 2012-07-12 | |
US61/670,681 | 2012-07-12 | ||
US201261718801P | 2012-10-26 | 2012-10-26 | |
US61/718,801 | 2012-10-26 | ||
EP13166465 | 2013-05-03 | ||
EP13166465.8 | 2013-05-03 | ||
EP13172515 | 2013-06-18 | ||
EP13172515.2 | 2013-06-18 | ||
EP13173818.9 | 2013-06-26 | ||
EP13173818 | 2013-06-26 | ||
PCT/NL2013/050534 WO2014011053A1 (en) | 2012-07-12 | 2013-07-12 | Oligonucleotides for making a change in the sequence of a target rna molecule present in a living cell |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015104763A RU2015104763A (ru) | 2016-08-27 |
RU2663110C2 true RU2663110C2 (ru) | 2018-08-01 |
Family
ID=49916369
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015104763A RU2663110C2 (ru) | 2012-07-12 | 2013-07-12 | Олигонуклеотиды для введения изменения в последовательность молекулы целевой рнк в живой клетке |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9605255B2 (ru) |
EP (2) | EP3103872B1 (ru) |
JP (1) | JP6373833B2 (ru) |
KR (1) | KR20150037968A (ru) |
CN (1) | CN104640986B (ru) |
AU (1) | AU2013287353B2 (ru) |
BR (1) | BR112015000710A8 (ru) |
CA (1) | CA2878934A1 (ru) |
CY (1) | CY1117858T1 (ru) |
DK (2) | DK2852668T3 (ru) |
ES (2) | ES2698522T3 (ru) |
HK (1) | HK1208491A1 (ru) |
HR (1) | HRP20160854T1 (ru) |
HU (1) | HUE029977T2 (ru) |
IL (1) | IL236654B (ru) |
MX (1) | MX356625B (ru) |
NZ (1) | NZ703824A (ru) |
PL (1) | PL2852668T3 (ru) |
PT (1) | PT2852668T (ru) |
RS (1) | RS54944B1 (ru) |
RU (1) | RU2663110C2 (ru) |
SI (1) | SI2852668T1 (ru) |
SM (1) | SMT201600234B (ru) |
WO (1) | WO2014011053A1 (ru) |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5409010B2 (ja) | 2005-12-28 | 2014-02-05 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | N−[2,4−ビス(1,1−ジメチルエチル)−5−ヒドロキシフェニル]−1,4−ジヒドロ−4−オキソキノリン−3−カルボキサミドの固体形態 |
US8563573B2 (en) | 2007-11-02 | 2013-10-22 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Azaindole derivatives as CFTR modulators |
US8802868B2 (en) | 2010-03-25 | 2014-08-12 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Solid forms of (R)-1(2,2-difluorobenzo[D][1,3]dioxo1-5-yl)-N-(1-(2,3-dihydroxypropyl-6-fluoro-2-(1-hydroxy-2-methylpropan2-yl)-1H-Indol-5-yl)-Cyclopropanecarboxamide |
EP3381899B1 (en) | 2010-04-22 | 2021-01-06 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Intermediate compound for process of producing cycloalkylcarboxamido-indole compounds |
SI2852668T1 (sl) | 2012-07-12 | 2016-09-30 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Oligonukleotidi za izvedbo spremembe v sekvenci tarčne molekule rna, prisotne v živeči celici |
RS57476B9 (sr) | 2014-04-15 | 2021-10-29 | Vertex Pharma | Farmaceutske kompozicije za lečenje bolesti posredovanih transmembranskim regulatorom provodljivosti cistične fibroze |
KR102472590B1 (ko) | 2014-05-14 | 2022-11-30 | 타르그이뮨 테라퓨틱스 아게 | 개선된 폴리에틸렌이민 폴리에틸렌글리콜 벡터 |
CA2963945C (en) | 2014-10-07 | 2023-01-10 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Co-crystals of modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator |
GB201418892D0 (en) * | 2014-10-23 | 2014-12-10 | Proqr Therapeutics B V | DNA editing |
US20210395729A1 (en) * | 2014-12-12 | 2021-12-23 | Tod M. Woolf | Compositions and methods for Editing Nucleic Acids in Cells Utilizing Oligonucleotides |
PL3234134T3 (pl) | 2014-12-17 | 2020-12-28 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Ukierunkowana edycja rna |
GB201507926D0 (en) * | 2015-05-08 | 2015-06-24 | Proqr Therapeutics N V | Improved treatments using oligonucleotides |
WO2017060317A1 (en) | 2015-10-05 | 2017-04-13 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Use of single-stranded antisense oligonucleotide in prevention or treatment of genetic diseases involving a trinucleotide repeat expansion |
US10801026B2 (en) | 2015-10-15 | 2020-10-13 | City Of Hope | Compounds and compositions including phosphorothioated oligodeoxynucleotide, and methods of use thereof |
AU2017281497B2 (en) * | 2016-06-22 | 2023-04-06 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Single-stranded RNA-editing oligonucleotides |
NZ751483A (en) | 2016-09-01 | 2022-07-01 | Proqr Therapeutics Ii Bv | Chemically modified single-stranded rna-editing oligonucleotides |
US11274300B2 (en) | 2017-01-19 | 2022-03-15 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Oligonucleotide complexes for use in RNA editing |
GB2574769A (en) | 2017-03-03 | 2019-12-18 | Univ California | RNA Targeting of mutations via suppressor tRNAs and deaminases |
CN107267516B (zh) * | 2017-07-28 | 2020-09-29 | 佛山科学技术学院 | 双sgRNA介导的基因精确修饰方法及应用 |
WO2019076919A1 (en) * | 2017-10-17 | 2019-04-25 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | COMBINED TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS |
US11866702B2 (en) | 2018-03-27 | 2024-01-09 | University Of Rochester | Nucleic acid molecules for pseudouridylation |
JP2023504314A (ja) | 2019-12-02 | 2023-02-02 | シェイプ セラピューティクス インコーポレイテッド | 治療的編集 |
CN113397996A (zh) * | 2021-07-23 | 2021-09-17 | 河南省人民医院 | 一种抗菌漱口水及其制备方法 |
CN114917227B (zh) * | 2022-05-19 | 2023-10-31 | 中国人民解放军海军军医大学 | 依伐卡托在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药中的应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU94046360A (ru) * | 1992-06-11 | 1997-06-10 | Астра Актиеболаг (SE) | Днк, вектор, клетка, способ получения ссжл/ксл человека, экспрессирующая система, гибридный ген, клетка млекопитающего, способ создания трансгенного млекопитающего, трансгенное млекопитающее, потомство трансгенного млекопитающего, молоко, детское питание, способ получения детского питания, применение днк |
US20080287379A1 (en) * | 2004-03-29 | 2008-11-20 | Tabatadze David R | Oligonucleotide Complex Compositions and Methods of Use as Gene Alteration Tools |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ266386A (en) | 1993-05-11 | 1997-11-24 | Univ North Carolina | Use of antisense rna oligonucleotides in regulating gene expression |
US6207455B1 (en) | 1997-05-01 | 2001-03-27 | Lung-Ji Chang | Lentiviral vectors |
JP4390860B2 (ja) | 1997-05-13 | 2009-12-24 | ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル | レンチウイルスをベースにした遺伝子転移ベクター |
US5994136A (en) | 1997-12-12 | 1999-11-30 | Cell Genesys, Inc. | Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors |
US6218181B1 (en) | 1998-03-18 | 2001-04-17 | The Salk Institute For Biological Studies | Retroviral packaging cell line |
US6683173B2 (en) | 1998-04-03 | 2004-01-27 | Epoch Biosciences, Inc. | Tm leveling methods |
DE19909769A1 (de) | 1999-03-05 | 2000-09-07 | Bundesrepublik Deutschland Let | Von SIVagm abgeleitete lentivirale Vektoren, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung zur Genübertragung in Säugerzellen |
EP2151248A1 (en) | 2008-07-30 | 2010-02-10 | Johann Bauer | Improved pre-mRNA trans-splicing molecule (RTM) molecules and their uses |
US20130059902A1 (en) | 2010-02-08 | 2013-03-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions useful in treatment of diseases or conditions related to repeat expansion |
EP3431604A1 (en) * | 2010-04-23 | 2019-01-23 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Organic compositions to treat beta-enac-related diseases |
US8779128B2 (en) | 2010-05-28 | 2014-07-15 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups |
SI2852668T1 (sl) * | 2012-07-12 | 2016-09-30 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Oligonukleotidi za izvedbo spremembe v sekvenci tarčne molekule rna, prisotne v živeči celici |
US20150209448A1 (en) | 2012-07-12 | 2015-07-30 | Proqr Therapeutics N.V. | Exon replacement with stabilized artificial rnas |
-
2013
- 2013-07-12 SI SI201330214A patent/SI2852668T1/sl unknown
- 2013-07-12 WO PCT/NL2013/050534 patent/WO2014011053A1/en active Application Filing
- 2013-07-12 HU HUE13760133A patent/HUE029977T2/en unknown
- 2013-07-12 ES ES16166821T patent/ES2698522T3/es active Active
- 2013-07-12 EP EP16166821.5A patent/EP3103872B1/en not_active Not-in-force
- 2013-07-12 RS RS20160489A patent/RS54944B1/sr unknown
- 2013-07-12 CN CN201380047636.5A patent/CN104640986B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2013-07-12 NZ NZ703824A patent/NZ703824A/en not_active IP Right Cessation
- 2013-07-12 DK DK13760133.2T patent/DK2852668T3/en active
- 2013-07-12 PT PT137601332T patent/PT2852668T/pt unknown
- 2013-07-12 JP JP2015521573A patent/JP6373833B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2013-07-12 CA CA2878934A patent/CA2878934A1/en not_active Abandoned
- 2013-07-12 MX MX2015000506A patent/MX356625B/es active IP Right Grant
- 2013-07-12 RU RU2015104763A patent/RU2663110C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-07-12 US US14/414,303 patent/US9605255B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-07-12 DK DK16166821.5T patent/DK3103872T3/en active
- 2013-07-12 KR KR1020157002757A patent/KR20150037968A/ko not_active Application Discontinuation
- 2013-07-12 BR BR112015000710A patent/BR112015000710A8/pt active Search and Examination
- 2013-07-12 AU AU2013287353A patent/AU2013287353B2/en not_active Ceased
- 2013-07-12 PL PL13760133.2T patent/PL2852668T3/pl unknown
- 2013-07-12 EP EP13760133.2A patent/EP2852668B1/en active Active
- 2013-07-12 ES ES13760133.2T patent/ES2584856T3/es active Active
-
2015
- 2015-01-11 IL IL236654A patent/IL236654B/en not_active IP Right Cessation
- 2015-09-14 HK HK15108980.8A patent/HK1208491A1/zh not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-07-12 HR HRP20160854TT patent/HRP20160854T1/hr unknown
- 2016-07-15 SM SM201600234T patent/SMT201600234B/it unknown
- 2016-07-22 CY CY20161100722T patent/CY1117858T1/el unknown
-
2017
- 2017-02-10 US US15/430,069 patent/US9994856B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU94046360A (ru) * | 1992-06-11 | 1997-06-10 | Астра Актиеболаг (SE) | Днк, вектор, клетка, способ получения ссжл/ксл человека, экспрессирующая система, гибридный ген, клетка млекопитающего, способ создания трансгенного млекопитающего, трансгенное млекопитающее, потомство трансгенного млекопитающего, молоко, детское питание, способ получения детского питания, применение днк |
US20080287379A1 (en) * | 2004-03-29 | 2008-11-20 | Tabatadze David R | Oligonucleotide Complex Compositions and Methods of Use as Gene Alteration Tools |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
FRIEDMAN K.J. et al., Correction of Aberrant Splicing of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) Gene by Antisense Oligonucleotides, THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, 1999, Vol. 274, No. 51, Issue of December 17, pp. 36193-36199. * |
FRIEDMAN K.J. et al., Correction of Aberrant Splicing of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) Gene by Antisense Oligonucleotides, THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, 1999, Vol. 274, No. 51, Issue of December 17, pp. 36193-36199. SHEN Y. et al., RNA-driven genetic changes in bacteria and in human cells, Mutation Research, 2011, Vol.717, pp. 91-98. GONCZ K.K. et al., Expression of DeltaF508 CFTR in normal mouse lung after site-specific modification of CFTR sequences by SFHR, Gene Ther., 2001, Vol.8, N.12, pp.961-965. * |
GONCZ K.K. et al., Expression of DeltaF508 CFTR in normal mouse lung after site-specific modification of CFTR sequences by SFHR, Gene Ther., 2001, Vol.8, N.12, pp.961-965. * |
SHEN Y. et al., RNA-driven genetic changes in bacteria and in human cells, Mutation Research, 2011, Vol.717, pp. 91-98. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2663110C2 (ru) | Олигонуклеотиды для введения изменения в последовательность молекулы целевой рнк в живой клетке | |
US20230287400A1 (en) | Modified Guide RNAs | |
AU2017320901B2 (en) | Chemically modified single-stranded RNA-editing oligonucleotides | |
JP6872560B2 (ja) | プログラム可能ヌクレアーゼのあるゲノム編集及びプログラム可能ヌクレアーゼのないゲノム編集のための改善された方法 | |
EP3308788B1 (en) | Compositions and methods for modulation of smn2 splicing | |
IL263332B2 (en) | RNA-editing single-stranded oligonucleotides | |
US9593335B2 (en) | Small interference RNAs, uses thereof and method for inhibiting the expression of PLK1 gene | |
US11911403B2 (en) | Antisense-induced exon exclusion in type VII collagen | |
US20150209448A1 (en) | Exon replacement with stabilized artificial rnas | |
EP4240338A1 (en) | <smallcaps/>? ? ?in vivo? ? ? ? ?programmable rna editingvia recruitment of endogenous adars | |
US20200109375A1 (en) | Therapeutics for phenylketonuria | |
EA045815B1 (ru) | Одноцепочечные редактирующие рнк олигонуклеотиды | |
WO2017027814A1 (en) | Una oligomeric agents for stimulating cystic fibrosis transmembrane conductance regulator and uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190713 |