RU2639504C2 - Химерные антигены для вакцины против вируса гепатита с - Google Patents
Химерные антигены для вакцины против вируса гепатита с Download PDFInfo
- Publication number
- RU2639504C2 RU2639504C2 RU2015121429A RU2015121429A RU2639504C2 RU 2639504 C2 RU2639504 C2 RU 2639504C2 RU 2015121429 A RU2015121429 A RU 2015121429A RU 2015121429 A RU2015121429 A RU 2015121429A RU 2639504 C2 RU2639504 C2 RU 2639504C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hcv
- amino acids
- antigen
- vaccine
- antigens
- Prior art date
Links
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 title claims abstract description 214
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 68
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 236
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 236
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 234
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 160
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 54
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 49
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 claims description 66
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 55
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 55
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 39
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims description 26
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 19
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims description 19
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 14
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 12
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 153
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 59
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 46
- 230000004044 response Effects 0.000 description 42
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 38
- 101710144111 Non-structural protein 3 Proteins 0.000 description 37
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 37
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 29
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 26
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 23
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 21
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 20
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 17
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 17
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 16
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 16
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 14
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 13
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 12
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 11
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 10
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 10
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 9
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 8
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 8
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 6
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 6
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 6
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 6
- 230000008593 response to virus Effects 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 241000700646 Vaccinia virus WR Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 5
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 5
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 229940124954 vaccinia virus vaccine Drugs 0.000 description 4
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 3
- 101710125507 Integrase/recombinase Proteins 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 3
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 3
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000007822 cytometric assay Methods 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108700037339 HLA-DR13 antigen Proteins 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229940083538 smallpox vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 102000008482 12E7 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010020567 12E7 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 1
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 101710118188 DNA-binding protein HU-alpha Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 241000711557 Hepacivirus Species 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 108700039791 Hepatitis C virus nucleocapsid Proteins 0.000 description 1
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710144128 Non-structural protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101800001020 Non-structural protein 4A Proteins 0.000 description 1
- 101800001019 Non-structural protein 4B Proteins 0.000 description 1
- 101800001014 Non-structural protein 5A Proteins 0.000 description 1
- 101710199667 Nuclear export protein Proteins 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 101800001554 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 1
- 108700010756 Viral Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 201000003278 cryoglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 201000008230 cutaneous porphyria Diseases 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- SHFKGANKURXVMY-LCWPZEQJSA-N hcv e2 protein Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)CC1=CC=CC=C1 SHFKGANKURXVMY-LCWPZEQJSA-N 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000008935 histological improvement Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 201000008171 proliferative glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24271—Demonstrated in vivo effect
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Представленные изобретения касаются химерного антигена, вакцинной композиции, содержащей такой химерный антиген, и применения химерного антигена для получения вакцин против вируса гепатита C (HCV). Охарактеризованный химерный анетиген состоит из а) первого сегмента, состоящего из области Е2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV, b) второго сегмента, состоящего из области Е1 (аминокислоты 190-222) полибелка HCV, и с) третьего сегмента, состоящего из области Core (аминоксилоты 1-50) этого белка, в таком порядке. Изобретения обеспечивают сильный иммунный ответ широкого спектра против различных антигенов вируса и могут быть использованы в медицине и фармацевтической промышленности, а также для профилактического и/или терапевтического применения против HCV. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 25 ил., 7 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к области медицины и фармацевтической промышленности, в частности, к разработке химерных антигенов против вируса гепатита C (HCV) и вакцинных композиций, содержащих их. В этом изобретении используют минимальное количество компонентов, поскольку точный выбор конкретных областей антигенов HCV и включение искусственных эпитопов, специфичных для CD4+ T-лимфоцитов, позволяет химерным антигенам индуцировать сильный и широкий иммунный ответ против HCV.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Вирусом HCV инфицировано примерно 3% мирового населения (Williams R. Hepatology 2006; 44: 521-526). У большинства инфицированных людей инфекция переходит в хроническую форму (Amoroso P., et al., J Hepatol 1998; 28: 939-944). Инфекция гепатита C является одной из основных причин хронического повреждения печени, цирроза печени, печеночной недостаточности и рака печени (Hoofnagle J.H. Hepatology 2002; 36 (5 Suppl 1): S21-S29). В настоящее время HCV-инфекция является основной причиной трансплантации печени в странах первого мира. Кроме того, HCV-инфекция связана с внепеченочными проявлениями, такими как криоглобулинемия II типа, мембранопролиферативный гломерулонефрит, поздняя кожная порфирия, среди прочих. В настоящее время профилактическая вакцина против этого вируса отсутствует и используемые обычные методы противовирусного лечения, основанные на комбинации пегилированный интерферон (IFN)+рибавирин, эффективны менее чем в 50% случаев. Более того, вышеупомянутые методы лечения вызывают множество побочных эффектов (Ghany M.G. et al., Hepatology. 2009; 49 (4): 1335-74).
HCV принадлежит к роду Hepacivirus семейства Flaviviridae. Это оболочечный вирус, вирусные частицы которого имеют диаметр примерно 50-70 нм и связаны с липопротеинами очень низкой плотности (ЛПОНП) (VLDL) (Popescu C.I. and Dubuisson J. Biol Cell. 2009; 102 (1): 63-74). Вирусный геном представляет собой положительную цепь рибонуклеиновой кислоты (РНК) размером примерно 9,6 т.н. Геном кодирует вирусный полибелок, который процессируется ко- и посттрансляционно в по меньшей мере 10 вирусных белков: Core, E1, E2, p7 (структурные белки) и неструктурные белки: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5B (Bartenschlager R. and Lohmann V. 2000. J Gen Virol. 81: 1631-48).
Существует несколько серьезных препятствий для разработки эффективной вакцины против HCV. Этот патоген представляет собой РНК вирус, который может быстро мутировать, приспосабливаясь к среде хозяина. Это способствует широкому разнообразию многочисленных вирусных изолятов, идентифицированных по всему миру. Определено шесть основных генотипов HCV, различия нуклеотидных последовательностей которых могут составлять до 30% (Simmonds P. J Hepatol. 1999; 31 Suppl 1: 54-60). Наибольшая гетерогенность наблюдается в гипервариабельной области белка E2 HCV, где обнаружен эпитоп, потенциально являющийся мишенью для нейтрализующих антител. Фактически, HCV циркулирует в организме в виде гетерогенной популяции вирусных молекул, это явление известно как квазивиды (Simmonds P. J Gen Virol. 2004; 85 (Pt 11): 3173-88). Показано, что мутации являются способом, за счет которого вирусам удается избегать специфического гуморального и клеточного иммунного ответа, вырабатываемого хозяином.
Следует подчеркнуть, что HCV вызывает хроническую инфекцию у иммунокомпетентных индивидуумов, несмотря на наличие активного иммунного ответа (Lechmann et al., Semin Liver Dis 2000, 20, 211-226). В настоящее время выяснено несколько вирусных эффектов, которые способствуют сохранению инфекции за счет стимулирования нерелевантных иммунных ответов и предотвращения эффективного иммунного ответа. Эти эффекты обнаружены как в случае врожденного, так и приобретенного иммунитета (Grakoui A. et al. Science 2003, 302 (5645): 659-62). Существуют доказательства того, что неэффективный иммунный ответ против HCV не только не устраняет этот патоген, но также способствует повреждению печени.
На сегодняшний день иммунологические параметры, коррелирующие с защитой и избавлением от HCV, полностью не определены. Однако считается, что особенно большое значение имеет индукция мощного и устойчивого клеточного иммунного ответа против различных антигенов HCV (Lechmann et al., Semin Liver Dis 2000, 20, 211-226). У хронически инфицированных HCV пациентов нарушение специфического ответа T-лимфоцитов является особенно важным. Судя по всему, в данный эффект вносят вклад несколько механизмов; одним из них является действие регуляторных Т-клеток.
Почти все стратегии иммунизации были использованы в попытках разработать вакцину против HCV. Некоторые из этих стратегий включают: рекомбинантные белки, синтетические пептиды, вирусоподобные частицы, «голую» дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и рекомбинантные вирусы. Все вирусные антигены были оценены в качестве мишеней для потенциальных вакцин против HCV. Большинство вакцин-кандидатов находятся на стадии изучения иммуногенности в животных моделях. Тем не менее, в настоящее время некоторые кандидаты достигли стадии клинической оценки, показано, что они являются безопасными и иммуногенными, однако четкий клинический эффект пока не был продемонстрирован (Alvarez-Lajonchere L., Dueñas-Carrera S. Int Rev Immunol. 2012; 31(3): 223-42).
Разработка субъединичной белковой вакцины-кандидата была одной из первых стратегий, изученных с целью получения вакцины против HCV. Некоторые из этих кандидатов на основе структурных антигенов позволяют добиться ограниченной защиты против заражения вирусами в животных моделях. Это относится к ситуации с шимпанзе, иммунизированными олигомером E1 и E2. Были иммунизированы семь шимпанзе, у пятерых из них развилась защита и две стали инфицированы, но затем избавились от вируса без достижения хронической стадии (Choo et al., Proc Natl Acad Sci USA 1994, 91, 1294-1298). Эта защита коррелировала с присутствием антител, способных ингибировать взаимодействие между белком E2 и человеческими клетками (Rosa et al., Proc Natl Acad Sci USA 1996, 93, 1759-1763).
Рекомбинантный белок E1 из изолята генотипа 1b очищали в виде гомодимеров (Maertens et al., Acta Gastroenterol Belg 2000, 63, 203). Два шимпанзе, хронически инфицированных HCV, получали 9 доз по 50 мкг этого рекомбинантного белка E1. Вакцинация приводила к улучшению гистологии печени, клиренсу вирусных антигенов из печени и снижению уровней аланинаминотрансферазы. Однако сывороточные уровни РНК не менялись в процессе лечения, и воспаление печени и вирусные антигены вновь появлялись после завершения лечения. Наблюдали связь между высокими уровнями анти-E1 антител и уменьшением повреждения печени (Maertens et al., Acta Gastroenterol Belg 2000, 63, 203). Действие варианта белка E1, сформулированного в квасцах, изучали на людях. Этот кандидат был безопасным и иммуногенным, индуцировал продукцию специфических антител и лимфопролиферативные ответы (Nevens F., et al., Hepatology. 2003; 38 (5): 1289-96). Однако введение этого кандидата не влияло на клиническое течение HCV-инфекции, поскольку пациенты не избавлялись от вируса и не наблюдалось улучшения гистологии печени. Недостаток подхода с белковыми субъединицами заключается в том, что в некоторых случаях он не приводил к индукции сильного клеточного иммунного ответа. Этот подход может иметь еще один недостаток: введение областей, вовлеченных в различные механизмы нарушения HCV-специфического иммунного ответа, вызываемого патогеном на разных уровнях (Grakoui A et al., Science 2003, 302 (5645): 659-62).
Две вакцины-кандидата на основе смесей синтетических пептидов, включая эпитопы T-лимфоцитов, также достигли стадии клинических испытаний (Yutani et al., Cancer Sci 2009, 100(10): 1935-42, Klade et al., Gastroenterology 2008, 134(5): 1385-95). Оба кандидата индуцировали специфические иммунные ответы и имели низкую реактогенность у хронически инфицированных HCV пациентов во время фаз I и II клинических испытаний, проведенных до настоящего времени (Alvarez-Lajonchere L, Dueñas-Carrera S. Int Rev Immunol. 2012; 31 (3): 223-42). Однако эти вакцины-кандидаты не оказывали существенного влияния на вирусную нагрузку или оказывали временное влияние. Принимая во внимание, что эти кандидаты не вызывали никакого улучшения в гистологии печени, их клинический эффект еще предстоит продемонстрировать. Различные эпитопы для CD4+ и CD8+ T-клеток, которые могут быть важны для клиренса вируса, были идентифицированы на всем протяжении полибелка HCV. Эти данные свидетельствуют в пользу стратегии получения вакцин на основе синтетических пептидов. Различные пептиды, включая эпитопы Core, NS4 и NS5, самостоятельно или с липидными фрагментами, индуцировали сильные ответы цитотоксических T-лимфоцитов у мышей (Shirai et al., J Infect Dis 1996, 173, 24-31; Hiranuma et al., J Gen Virol 1999, 80, 187-193; Oseroff et al., Vaccine 1998, 16, 823-833). Основной недостаток этого подхода состоит в том, что эти пептиды в отсутствие функции T-хелперов могут быть плохими иммуногенами. Кроме того, эффективность вакцины часто зависит от индукции мультивалентного и с широким спектром иммунного ответа против нескольких антигенов. При увеличении количества пептидов, включенных в вакцину, сложность препарата возрастает со всех точек зрения. Эти ограничения являются недостатками данного подхода.
С другой стороны, различные рекомбинантные вирусные векторы прошли оценку в качестве вакцин-кандидатов против HCV. Дефектные рекомбинантные аденовирусы являются привлекательными кандидатами вследствие их высокого тропизма к печени, их способности индуцировать гуморальный и клеточный иммунные ответы, а также возможности их введения пероральным и парентеральным путями. Рекомбинантные аденовирусы, экспрессирующие структурные белки HCV, индуцируют продукцию антител против каждого из этих белков (Makimura et al., Vaccine 1996, 14, 28-36). Кроме того, после иммунизации мышей рекомбинантным аденовирусом с Core и E1, был обнаружен специфический иммунный ответ цитотоксических T-лимфоцитов против этих антигенов (Bruna-Romero et al., Hepatology 1997, 25, 470-477). Хотя эти результаты являются обнадеживающими, некоторые проблемы, связанные с использованием рекомбинантных аденовирусов в генной терапии, вызывают сомнения по поводу их безопасности для людей. В настоящее время вакцины-кандидаты против HCV на основе рекомбинантного аденовируса проходят оценку в клинических испытаниях с хорошими результатами по иммуногенности, но без признаков клинического эффекта (Barnes et al., Sci Transl Med. 2012; 4(115): 115). Использование других рекомбинантных вирусных векторов, таких как вирус осповакцины, вирус оспы кур и вирус канарипокс, содержащих различные гены HCV, приводило к индукции сильных ответов цитотоксических T-лимфоцитов и T-хелперов у мышей (Shirai et al., J Virol 1994, 68, 3334-3342; Large et al., J Immunol 1999, 162, 931-938). В частности, модифицированный вирус осповакцины Ankara, рекомбинантный для неструктурных антигенов NS3-NS5 HCV, прошел оценку в клинических испытаниях на людях (Fournillier et al., Vaccine, 2007; 25 (42): 7339-53). Этот кандидат был иммуногенным и отличался хорошей переносимостью в фазе I клинических испытаний с участием хронически инфицированных HCV пациентов. Аналогично подходу с использованием пептидов, эффект в отношении вирусной нагрузки был временным и наблюдался только у части вакцин; таким образом, клинический эффект по-прежнему не был продемонстрирован. Как правило, вакцины-кандидаты на основе рекомбинантных вирусов встречают препятствия с точки зрения безопасности и регулирующих положений для их применения.
В качестве стратегии для разработки вакцины против HCV была всесторонне изучена ДНК-иммунизация. Исследования на животных моделях показали способность этих кандидатов индуцировать клеточный и гуморальный иммунные ответы против почти всех антигенов HCV (Alvarez-Lajonchere L., Dueñas-Carrera S., Hum Vaccin. 2009; 5 (8): 568-71). Две вакцины-кандидата, включающие плазмиды для ДНК-иммунизации, которые содержат последовательности, кодирующие антигены HCV, находятся в стадии клинических испытаний на людях (Alvarez-Lajonchere L., Dueñas-Carrera S., Int Rev Immunol. 2012; 31 (3): 223-42). В одном случае это вакцина на основе ДНК, экспрессирующей белки NS3-NS5, которую вводят электропорацией (Sällberg M, et al., Expert Opin Biol Ther. 2009; 9 (7): 805-15). В другом случае это вакцинная композиция на основе смеси рекомбинантного белка core и ДНК плазмиды, которая экспрессирует структурные антигены HCV (Castellanos M, et al., J Gene Med. 2010; 12 (1): 107-16). Показано, что оба кандидата безопасны, хорошо переносимы и индуцируют специфические иммунные ответы у иммунизированных субъектов (Alvarez-Lajonchere L., Dueñas-Carrera S., Int Rev Immunol. 2012; 31 (3): 223-42). Ни в одном из этих двух случаев не было продемонстрировано влияние на течение инфекции HCV или устойчивое гистологическое улучшение. ДНК-вакцины, несмотря на их потенциальные преимущества, связанные с их простотой и стабильностью, встречают серьезные возражения со стороны регулирующих органов. Их принципиальное ограничение, судя по всему, связано с их недостаточной иммуногенностью у человека, явлением, до сих пор до конца не изученным, что в значительной степени отличается от результатов, полученных на животных моделях.
Учитывая вышесказанное, разработка профилактической или терапевтической вакцины против HCV является нерешенной проблемой. Настоящее изобретение направлено на достижение именно этой цели.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение решает вышеупомянутую проблему за счет получения химерного антигена для вакцины против вируса гепатита C (HCV), содержащего: a) первый сегмент, соответствующий области E2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV, b) второй сегмент, соответствующий области E1 (аминокислоты 190-222) полибелка HCV, и c) третий сегмент, соответствующий области Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV, в таком порядке.
Новизна изобретения заключается в выборе конкретных эпитопов и порядке, в котором они размещены на полученных вариантах белка. Такая конструкция вакцинного антигена позволяет уменьшить количество компонентов, необходимых для усиления и расширения спектра иммунного ответа против различных антигенов HCV. В настоящем изобретении впервые описан слитый белок, содержащий в одном химерном антигене области полибелка HCV, соответствующие E2 (аминокислоты 408-540), E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50), именно в таком порядке. Возникающий в результате иммунный ответ является релевантным и направлен, таким образом, против широкого спектра вирусных антигенов.
Выбор конкретных областей HCV позволяет избегать использования таких областей вирусных белков, которые могут проявлять подавляющие иммунитет эффекты. Точно так же это позволяет избегать использования других областей, которые могут быть иммунодоминантными в сравнении с теми, которые выбраны по настоящему изобретению, и которые при включении в сконструированный антиген ограничивали бы индукцию специфического иммунного ответа против областей, выбранных по настоящему изобретению. С другой стороны, изобретение включает порядок, в котором выбранные области размещены в искусственном белковом антигене, учитывая тот факт, что этот элемент существенно влияет на индукцию иммунного ответа против HCV, вследствие различий в экспозиции и процессинге/представлении эпитопов для иммунной системы. Действительно, в химерных антигенах по настоящему изобретению области из белков core, E1 и E2 размещены в обратном порядке по сравнению с порядком в природном вирусном полибелке.
В варианте осуществления изобретения последовательность химерного вакцинного антигена выбрана из группы, состоящей из SEQ ID No. 10 (антиген Eq1) и SEQ ID No. 16 (антиген Eq1b).
Кроме того, химерные антигены по изобретению могут содержать в своей последовательности по меньшей мере один специфичный для хелперных T-лимфоцитов эпитоп. В варианте осуществления изобретения специфичный для хелперных T-лимфоцитов эпитоп, включенный в химерные антигены, представляет собой один эпитоп из неструктурных белков HCV. В конкретном варианте осуществления неструктурный белок представляет собой NS3. Более конкретно, изобретение относится к химерному вакцинному антигену, характеризующемуся аминокислотной последовательностью, обозначенной SEQ ID No. 14 (антиген EqNS3).
В другом аспекте изобретения специфичный для хелперных T-лимфоцитов эпитоп, включенный в химерные антигены, представляет собой искусственный эпитоп для CD4+ T-лимфоцитов. В контексте изобретения термин «искусственный эпитоп» означает эпитоп, аминокислотная последовательность которого не существует в естественном виде; вместо этого он разработан при помощи биоинформатики. Выбор и включение искусственных эпитопов, которые узнаются хелперными T-лимфоцитами, способствует индукции специфического иммунного ответа против эпитопов HCV, включенных в химерные антигенные варианты. В данном изобретении впервые описаны в качестве искусственных эпитопов для хелперных T-лимфоцитов эпитопы P1M (SEQ ID No. 17) и P2B (SEQ ID No. 18). Эти эпитопы были разработаны для содержания мотива связывания HLA-DR13 и HLA-DR11. Таким образом, изобретение относится к специфичному для хелперных T-лимфоцитов эпитопу, аминокислотная последовательность которого соответствует последовательности SEQ ID No. 17 или SEQ ID No. 18.
В варианте осуществления изобретения химерные антигены содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID No. 12 (антиген NSEq2), SEQ ID No. 13 (антиген EqNSb) и SEQ ID No. 15 (антиген EqP1), и они содержат по меньшей мере один из этих специфичных для хелперных T-лимфоцитов эпитопов.
Следующие химерные антигены имеют характеристики, приведенные ниже: химерный антиген Eq1 (SEQ ID No. 10) содержит области E2 (аминокислоты 408-540), E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV в этом конкретном порядке. Химерный антиген NSEq2 (SEQ ID No. 12) содержит эпитопы P2B и P1M, в таком порядке, включенные в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). Химерный антиген EqNSb (SEQ ID No. 13) содержит эпитоп P2B, включенный в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). Химерный антиген EqNS3 (SEQ ID No. 14) содержит области аминокислот 1242-1415 полибелка HCV, включенные в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). Химерный антиген EqP1 (SEQ ID No. 15) содержит эпитоп P1M, включенный в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). Химерный антиген Eq1b (SEQ ID No. 16) содержит области E2 (аминокислоты 408-540), E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV, в этом конкретном порядке, но в этом случае аминокислотная последовательность соответствует варианту H77 HCV генотипа 1a (справочная последовательность NCBI: NC_004102.1).
В варианте осуществления изобретения химерные антигены получены с помощью технологии рекомбинантной ДНК из бактерий, трансформированных плазмидами, описанными в примере 1. Тем не менее, экспертам в данной технологии известно, что такие антигены могут быть получены из других хозяев и могут быть очищены широко известными методами для использования в иммунизации.
В другом аспекте изобретение относится к вакцинной композиции, содержащей химерный антиген для вакцины против HCV, который состоит из a) первого сегмента, состоящего из области E2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV, b) второго сегмента, состоящего из области E1 (аминокислоты 190-222) полибелка HCV, и c) третьего сегмента, состоящего из области Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV, в таком порядке; и фармацевтически приемлемые эксципиенты и/или адъюванты.
В варианте осуществления изобретения вакцинная композиция содержит антигены, обозначенные SEQ ID No. 10 (антиген Eq1), SEQ ID No. 16 (антиген Eq1b), SEQ ID No. 14 (антиген EqNS3), SEQ ID No. 12 (антиген NSEq2), SEQ ID No. 13 (антиген EqNSb) или SEQ ID No. 15 (антиген EqP1).
Для целей изобретения можно использовать широкий спектр фармацевтически приемлемых адъювантов, коммерчески доступных или тех, которые находятся на стадии разработки, для потенцирования иммунного ответа против химерных антигенов, содержащихся в вакцинных композициях, являющихся объектами изобретения.
Вакцинные композиции по изобретению могут также содержать рекомбинантный белковый вариант структурных или NS3 антигенов HCV. Кроме того, вакцинные композиции по изобретению могут содержать плазмиду для ДНК-иммунизации, которая экспрессирует структурные антигены HCV. В другом варианте осуществления изобретения химерные антигены можно формулировать с плазмидой для ДНК-иммунизации, которая одновременно экспрессирует структурные антигены HCV и рекомбинантный капсидный белок HCV.
В другом аспекте изобретение включает, что вакцинную композицию, содержащую химерный антиген для вакцины против HCV, который содержит: a) первый сегмент, состоящий из области E2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV, b) второй сегмент, состоящий из области E1 (аминокислоты 190-222) полибелка HCV, и c) третий сегмент, состоящий из области Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV, в таком порядке, можно вводить по схемам первичного/бустерного введения, наряду с препаратами на основе плазмид для ДНК-иммунизации, рекомбинантных вариантов структурных белков HCV или смеси обоих.
Вакцинные композиции, являющиеся объектами настоящего изобретения, имеют преимущества индукции как гуморального, так и клеточного иммунных ответов против нескольких антигенов HCV, таким образом, они активны против широкого спектра вирусных изолятов и способны создавать защиту в модели суррогатного вирусного заражения.
По изобретению, вакцинные композиции можно вводить внутримышечным, внутрикожным, внутрибрюшинным, подкожным, подслизистым, внутривенным или подъязычным путями введения, или любым другим путем введения, известным специалистам в данной области. С другой стороны, введение можно осуществлять с использованием шприцев, распылителей или любых других устройств для введения.
Объектом изобретения также является использование химерных вакцинных антигенов, которые состоят из первого сегмента, состоящего из области E2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV, второго сегмента, состоящего из области E1 (аминокислоты 190-222) полибелка HCV, и третьего сегмента, состоящего из области Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV, в таком порядке, для изготовления вакцины, предназначенной для индукции иммунного ответа против HCV. В варианте осуществления изобретения вышеуказанная вакцина способна создавать защиту в модели суррогатного вирусного заражения.
С другой стороны, вакцины по изобретению способны индуцировать ответы у здоровых индивидуумов или у инфицированных HCV пациентов. Таким образом, один из аспектов изобретения также относится к способу индукции иммунного ответа против HCV. Данный способ отличается введением химерного антигена, который состоит из первого сегмента, состоящего из области E2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV, второго сегмента, состоящего из области E1 (аминокислоты 190-222) полибелка HCV, и третьего сегмента, состоящего из области Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV, в таком порядке, или вакцинной композиции, содержащей вышеуказанный антиген, здоровому или инфицированному HCV индивидууму.
Изобретение также включает, что в вышеуказанном способе химерный вакцинный антиген или вакцинную композицию, содержащую его, вводят по схемам первичного/бустерного введения, наряду с препаратами на основе плазмид для ДНК-иммунизации, рекомбинантных вариантов структурных белков HCV или смеси обоих.
Для лечения инфицированных HCV пациентов антигены по изобретению или вакцинные композиции, содержащие их, можно вводить одновременно с лекарственными средствами, входящими в стандарт медицинской помощи для этого типа пациентов.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
Фигура 1. Карты плазмид, содержащих последовательности, кодирующие различные химерные антигены. A: pIMCo64K, плазмида для экспрессии антигена Coq1. B: pIME64K, плазмида для экспрессии антигена Eq1. C: pIME164K, плазмида для экспрессии антигена E1q1. D: pINSE64K, плазмида для экспрессии антигена NSEq2. E: pIENSb, плазмида для экспрессии антигена EqNSb. F: pIENS3, плазмида для экспрессии антигена EqNS3. G: pIMP1E64K, плазмида для экспрессии антигена EqP1. H: pIME64Kb, плазмида для экспрессии антигена Eq1b.
Фигура 2. Схематическое изображение различных химерных антигенов. A: антиген Coq1, содержит области Core (аминокислоты 1-50), E1 (аминокислоты 190-222) и E2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV. B: антиген Eq1, содержит области E2 (аминокислоты 408-540), E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV. C: антиген E1q1, содержит области E1 (аминокислоты 190-222), E2 (аминокислоты 408-540) и Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV. D: антиген NSEq2, содержит эпитопы P2B и P1M, включенные в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). E: антиген EqNSb, содержит эпитоп P2B, включенный в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). F: антиген EqNS3, содержит область аминокислот 1242-1415 полибелка HCV, включенную между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50) в Eq1. G: антиген EqP1, содержит эпитоп P1M, включенный в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). H: антиген Eq1b, содержит области E2 (аминокислоты 408-540), E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50) варианта полибелка H77 HCV генотипа 1a.
Фигура 3. Ответ в виде продукции антител против белков HCV в схемах иммунизации различными химерными антигенами. Результаты приведены по оси Y в виде величины, обратной титру антител, определяемому как максимальное разведение, при котором сыворотки демонстрируют оптическую плотность при 492 нм, по меньшей мере в два раза превышающую среднюю оптическую плотность сывороток группы отрицательного контроля, при определении методом ELISA. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве покрывающих антигенов в анализе ELISA.
Фигура 4. Пролиферативный ответ против белков HCV в схеме иммунизации различными химерными антигенами. Результаты приведены по оси Y в виде индекса стимуляции, определяемого как отношение количества клеток, пролиферирующих при стимуляции, к количеству клеток, пролиферирующих без стимуляции, при определении в цитометрическом анализе с окрашиванием CFSE. Индекс стимуляции, превышающий два, считается положительным. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 5. Ответ в виде секреции IFN-гамма против белков HCV в схеме иммунизации различными химерными антигенами. По оси Y приведено число истинных пятен на миллион клеток, определяемое как число обнаруженных пятен в условиях стимулирования минус число обнаруженных пятен в условиях без стимулирования, при определении секреции IFN-гамма в анализе ELISPOT. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 6. Ответ на заражение вирусом в схеме иммунизации различными химерными антигенами. Результаты приведены по оси Y в виде логарифма вирусного титра, определяемого как логарифм количества бляшкообразующих единиц на мл, обнаруживаемых в яичниках самок мышей после заражения вирусом. Вирусами осповакцины, используемыми для вирусного заражения, были вирус vvRE, вирус осповакцины, экспрессирующий антигены Core, E1 и E2 (область аминокислот 1-650 в полибелке HCV), и вирус осповакцины WR, не экспрессирующий антигены HCV. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы.
Фигура 7. Ответ в виде продукции антител против белков HCV в схеме иммунизации Eq1 в смеси с NS3. Результаты приведены по оси Y в виде величины, обратной титру антител, при определении методом ELISA. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV), E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) и NS3 (аминокислоты 1192-1457 полибелка HCV) в качестве покрывающих антигенов в анализе ELISA.
Фигура 8. Пролиферативный ответ против белков HCV в схеме иммунизации Eq1 в смеси с NS3. Результаты приведены по оси Y в виде индекса стимуляции при определении в цитометрическом анализе с окрашиванием CFSE. Индекс стимуляции, превышающий два, считается положительным. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и NS3 (аминокислоты 1192-1457 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 9. Ответ в виде секреции IFN-гамма против белков HCV в схеме иммунизации Eq1 в смеси с NS3. По оси Y приведено число истинных пятен на миллион клеток при определении секреции IFN-гамма в анализе ELISPOT. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) и NS3 (аминокислоты 1192-1457 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 10. Ответ на заражение вирусом в схеме иммунизации Eq1 в смеси с NS3. Результаты приведены по оси Y в виде логарифма вирусного титра. Вирусами осповакцины, используемыми для вирусного заражения, были vvRE и WR. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы.
Фигура 11. Ответ в виде продукции антител против белков HCV в схеме иммунизации Eq1 в сочетании с плазмидой для ДНК-иммунизации. Результаты приведены по оси Y в виде величины, обратной титру антител, при определении методом ELISA. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве покрывающих антигенов в анализе ELISA.
Фигура 12. Пролиферативный ответ против белков HCV в схеме иммунизации Eq1 в сочетании с плазмидой для ДНК-иммунизации. Результаты приведены по оси Y в виде индекса стимуляции при определении в цитометрическом анализе с окрашиванием CFSE. Индекс стимуляции, превышающий два, считается положительным. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 13. Ответ в виде секреции IFN-гамма против белков HCV в схеме иммунизации Eq1 в сочетании с плазмидой для ДНК-иммунизации. По оси Y приведено число истинных пятен на миллион клеток при определении секреции IFN-гамма в анализе ELISPOT. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 14. Ответ на заражение вирусом в схеме иммунизации Eq1 в сочетании с плазмидой для ДНК-иммунизации. Результаты приведены по оси Y в виде логарифма вирусного титра, определяемого в яичниках самок мышей после заражения вирусом. Для вирусного заражения использовали вирусы vvRE и WR. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы.
Фигура 15. Ответ в виде продукции антител против белков HCV в схеме иммунизации Eq1 в смеси с рекомбинантными вариантами структурных белков HCV. Результаты приведены по оси Y в виде величины, обратной титру антител, при определении методом ELISA. По оси X показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве покрывающих антигенов в анализе ELISA.
Фигура 16. Пролиферативный ответ против белков HCV в схеме иммунизации Eq1 в смеси с рекомбинантными вариантами структурных белков HCV. Результаты приведены в виде индекса стимуляции при определении в цитометрическом анализе с окрашиванием CFSE. Индекс стимуляции, превышающий два, считается положительным. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 17. Ответ в виде секреции IFN-гамма против белков HCV в схеме иммунизации Eq1 в смеси с рекомбинантными вариантами структурных белков HCV. Результаты приведены в виде числа истинных пятен на миллион клеток при определении в анализе ELISPOT на IFN-гамма. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 18. Ответ на заражение вирусом в схеме иммунизации Eq1 в смеси с рекомбинантными вариантами структурных белков HCV. Результаты приведены в виде логарифма вирусного титра, определяемого в яичниках самок мышей после заражения вирусом. Для вирусного заражения использовали вирусы осповакцины vvRE и WR. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы.
Фигура 19. Ответ в виде продукции антител против белков HCV в схеме иммунизации различными химерными антигенами, содержащими искусственные эпитопы и эпитопы белка NS3. Результаты приведены в виде величины, обратной среднему титру антител, при определении методом ELISA. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV), а также NS3 (аминокислоты 1192-1457 полибелка HCV) в качестве покрывающих антигенов в анализе ELISA.
Фигура 20. Пролиферативный ответ против белков HCV в схеме иммунизации различными химерными антигенами, содержащими искусственные эпитопы и эпитопы белка NS3. Результаты приведены в виде индекса стимуляции при определении в цитометрическом анализе с окрашиванием CFSE. Индекс стимуляции, превышающий два, считается положительным. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV), а также NS3 (аминокислоты 1192-1457 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 21. Ответ в виде секреции IFN-гамма против белков HCV в схеме иммунизации различными химерными антигенами, содержащими искусственные эпитопы и эпитопы белка NS3. Результаты приведены в виде числа истинных пятен на миллион клеток при определении в анализе ELISPOT на IFN-гамма. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV), а также NS3 (аминокислоты 1192-1457 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 22. Ответ на заражение вирусом в схеме иммунизации различными химерными антигенами, содержащими искусственные эпитопы и эпитопы белка NS3. Результаты приведены в виде логарифма вирусного титра, определяемого в яичниках самок мышей после заражения вирусом. Для вирусного заражения использовали вирусы осповакцины vvRE и WR. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы.
Фигура 23. Ответ в виде продукции антител против белков HCV в схеме иммунизации химерными антигенами Eq1 и Eq1b. Результаты приведены в виде величины, обратной среднему титру антител, при определении методом ELISA. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве покрывающих антигенов в анализе ELISA.
Фигура 24. Пролиферативный ответ против белков HCV в схеме иммунизации химерными антигенами Eq1 и Eq1b. Результаты приведены в виде индекса стимуляции при определении в цитометрическом анализе с окрашиванием CFSE. Индекс стимуляции, превышающий два, считается положительным. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы. Иммунный ответ оценивали с использованием рекомбинантных вариантов Core (аминокислоты 1-120 капсидного белка), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве стимулирующих клетки антигенов.
Фигура 25. Ответ на заражение вирусом в схеме иммунизации химерными антигенами Eq1 и Eq1b. Результаты приведены в виде логарифма вирусного титра, определяемого в яичниках самок мышей после заражения вирусом. Для вирусного заражения использовали вирусы осповакцины vvRE и WR. Показаны различные иммуногены, введенные мышам BALB/c. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение для средних значений каждой группы.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МЕТОДОВ/ПРИМЕРЫ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Пример 1. Получение различных химерных антигенов, содержащих эпитопы HCV
Как показано на фигуре 1, были получены плазмиды pIMCo64K (SEQ ID No. 1), pIME64K (SEQ ID No. 2), pIME164K (SEQ ID No. 3), pINSE64K (SEQ ID No. 4), pIENSb (SEQ ID No. 5), pIENS3 (SEQ ID No. 6), pIMP1E64K (SEQ ID No. 7), pIME64Kb (SEQ ID No. 8). Эти плазмиды позволяли экспрессировать в Escherichia coli химерные антигены Coq1 (SEQ ID No. 9), Eq1 (SEQ ID No. 10), E1q1 (SEQ ID No. 11), NSEq2 (SEQ ID No. 12), EqNSb (SEQ ID No. 13), EqNS3 (SEQ ID No. 14), EqP1 (SEQ ID No. 15) и Eq1b (SEQ ID No. 16), соответственно, приведенные на фигуре 2. Во всех случаях, за исключением антигена Eq1b (последовательность которого происходит из штамма H77 HCV генотипа 1a), аминокислотная последовательность происходит из изолята HCV генотипа 1b (González-Horta E.E., Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2011; 15 (11): 1320-7).
Как показано на фигуре 2, химерный антиген Coq1 (SEQ ID No. 9) содержит области Core (аминокислоты 1-50), E1 (аминокислоты 190-222) и E2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV, расположенные именно в таком порядке. Химерный антиген Eq1 (SEQ ID No. 10) содержит, точно так же, области E2 (аминокислоты 408-540, E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV, но именно в этом другом порядке. Химерный антиген E1q1 (SEQ ID No. 11) содержит те же области, но в следующем порядке: E1 (аминокислоты 190-222), E2 (аминокислоты 408-540) и Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV. Химерный антиген NSEq2 (SEQ ID No. 12) содержит эпитопы P2B и P1M, в таком порядке, включенные в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). С другой стороны, химерный антиген EqNSb (SEQ ID No. 13) содержит эпитоп P2B, включенный в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). Химерный антиген EqNS3 (SEQ ID No. 14) содержит область аминокислот 1242-1415 полибелка HCV, включенную между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50) химерного антигена Eq1. Химерный антиген EqP1 (SEQ ID No. 15) содержит эпитоп P1M, включенный в Eq1 между областями E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50). Химерный антиген Eq1b (SEQ ID No. 16) содержит области E2 (аминокислоты 408-540), E1 (аминокислоты 190-222) и Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV, именно в таком порядке, но в этом случае аминокислотная последовательность соответствует штамму H77 HCV генотипа 1a (справочная последовательность NCBI: NC_004102.1).
Искусственные эпитопы P1M и P2B, включенные в некоторые из химерных антигенов, были разработаны методами биоинформатики так, чтобы они узнавались хелперными T-лимфоцитами человека. Связывающиеся с HLA-DR13 и HLA-DR11 мотивы были изучены с использованием программ Rankpep, SYFPETHI и ProPred с целью предложения аминокислотных вариантов на каждое положение в искусственных эпитопах в соответствии с частотой появления. В качестве искусственных эпитопов, специфичных для хелперных T-лимфоцитов, описаны P1M, из 14 аминокислот с последовательностью LPEYVIMVKLPSRA (SEQ ID No. 17), и P2B, из 15 аминокислот с последовательностью GYKVIVLNPRVASTL (SEQ ID No. 18).
Для экспрессии рекомбинантных белковых антигенов компетентные клетки бактериального штамма E. coli GC-366 трансформировали соответствующими плазмидами. Экспрессия рекомбинантных белков происходила в течение 12 ч при 37 градусах Цельсия, с использованием минимальной среды для культивирования клеток. Все белковые антигены содержали для белковой экспрессии на N-конце фрагмент, происходящий из белка P64K из Neisseria meningitidis, ранее известный для этой функции (Yero D et al., Biotechnol Appl Biochem. 2006; 44 (Pt 1): 27-34). С другой стороны, белковые варианты содержали на C-конце метку из шести остатков гистидина для облегчения очистки белка. Фактически, белки очищали путем солюбилизации нерастворимой фракции, образующейся в результате разрушения клеток, с использованием карбонат-бикарбонатного буфера, pH 9,6, 8 M мочевины, с последующей металл-хелатной аффинной хроматографией.
Пример 2. Изучение на мышах иммуногенности различных химерных антигенов, содержащих эпитопы HCV
Иммунизировали 8-недельных самок мышей BALB/c массой 16-18 г, по 17 животных на группу. Группы иммунизации были следующими: группа 1, химерный антиген Coq1, сформулированный в квасцах; группа 2, антиген E1q1, сформулированный в квасцах; группа 3, антиген Eq1, сформулированный в квасцах; группа 4, квасцы (контрольная группа). Во всех случаях вводили 20 мкг рекомбинантных антигенов. Иммунизации проводили в недели 0, 2 и 4 путем внутримышечной инъекции.
Кровь собирали в недели 0 и 6 для изучения продукции антител против антигенов HCV. Кроме того, 5 мышей на группу умерщвляли в неделю 6 для изучения специфического клеточного ответа. Дополнительно, 5 животных на группу заражали рекомбинантным вирусом осповакцины vvRE (Alvarez-Lajonchere et al., Biotecnología Aplicada 2007; 24 (3-4): 246-253), экспрессирующим структурные белки HCV, и другие 5 животных заражали контрольным вирусом осповакцины WR в неделю 6. Через пять дней после заражения мышей умерщвляли и вирусный титр определяли в яичниках, как описано ранее (Alvarez-Lajonchere et al., Biotechnol Appl Biochem. 2008; 51 (Pt 2): 97-105).
Специфический иммунный ответ против антигенов HCV показан на фигурах 3-5. Оцениваемый ответ обнаруживали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120, Alvarez-Obregon J.C. et al. Vaccine 2001; 19: 3940-3946), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV, Lorenzo L.J. et al., Biotechnol Appl Biochem 2000; 32(2): 137-143) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV, Martinez-Donato et al., Mol Biotechnol. 2007; 35(3): 225-36) в качестве захватывающих антигенов в ELISA или в качестве антигенов для стимуляции в анализах для определения клеточного иммунного ответа. Как показано на фигуре 3, продукция антител против структурных белков HCV была выше в группе животных, иммунизированных Eq1 (p<0,0001; критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна), для всех оцениваемых антигенов. Аналогичную ситуацию наблюдали для пролиферативного ответа (фигура 4) и для секреции IFN-гамма (фигура 5), соответственно. Кроме того, как показано на фигуре 6, группа животных, иммунизированных белком Eq1, была единственной, где наблюдали способность в значительной степени контролировать специфическую вирусемию (после заражения vvRE) в модели суррогатного заражения (p=0,0069, критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна).
Эти результаты свидетельствуют о способности химерного антигена Eq1 индуцировать специфический иммунный ответ, как гуморальный, так и клеточный, против нескольких антигенов HCV, с функциональной активностью in vivo, поскольку он способен создавать защиту в модели суррогатного заражения. Кроме того, это свидетельствует, что порядок, в котором выбранные области структурных белков HCV расположены в химерных антигенах, является критическим для индукции специфического иммунного ответа и для развития функционального защитного иммунного ответа в модели заражения, поскольку варианты Coq1 и E1q1 не смогли индуцировать иммунный ответ такого типа. Таким образом, недостаточно просто иметь эпитопы в антигене, но нужно иметь их в правильном контексте.
Пример 3. Изучение на мышах иммуногенности антигена Eq1 в смеси с NS3
Иммунизировали 8-недельных самок мышей BALB/c массой 16-18 г, по 17 животных на группу. Группы иммунизации были следующими: группа 1, антиген Eq1, сформулированный в квасцах; группа 2, антиген Eq1 в смеси с рекомбинантным белком NS3 (Palenzuela D et al., Biotecnología Aplicada 2006; 23: 94-98), сформулированные в квасцах; группа 3, рекомбинантный белок NS3, сформулированный в квасцах; группа 4, квасцы (контрольная группа). Во всех случаях 20 мкг рекомбинантного антигена Eq1 и 10 мкг белка NS3 вводили в соответствующих группах. Иммунизации проводили в недели 0, 2 и 4 путем внутримышечной инъекции.
Кровь собирали в недели 0 и 6 для изучения продукции антител против антигенов HCV. Кроме того, 5 мышей на группу умерщвляли в неделю 6 для изучения специфического клеточного ответа. Дополнительно, 5 животных на группу заражали рекомбинантным вирусом осповакцины vvRE (Alvarez-Lajonchere et al., Biotecnología Aplicada 2007; 24 (3-4): 246-253), экспрессирующим структурные белки HCV, и другие 5 животных заражали контрольным вирусом осповакцины WR в неделю 6. Через пять дней после заражения мышей умерщвляли и вирусный титр определяли в яичниках, как описано ранее.
Специфический иммунный ответ против антигенов HCV показан на фигурах 7-9. Оцениваемый иммунный ответ обнаруживали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV), E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) и NS3 (аминокислоты 1192-1457 в полибелке HCV) в качестве захватывающих антигенов в ELISA или в качестве антигенов для стимуляции в анализах для определения клеточного иммунного ответа. Как показано на фигуре 7, продукция антител была индуцирована против структурных антигенов HCV в группах животных, иммунизированных Eq1 отдельно или в смеси с NS3, без статистически значимых различий между ними. Однако продукция антител против NS3 была значительно выше в группе смеси NS3 и Eq1 (p=0,0001, критерий Манна-Уитни).
С другой стороны, анализ пролиферативного ответа, представленный на фигуре 8, свидетельствовал о значительно более сильном ответе против антигенов Core, E2 и NS3 в группе животных, которым вводили смесь Eq1 с NS3, чем при введении отдельных антигенов (p<0,05, критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса). Статистически значимые различия между группами животных, иммунизированных Eq1 отдельно или в смеси с NS3, не наблюдали для ответа против E1.
Что касается специфического ответа в виде секреции IFN-гамма, который показан на фигуре 9, он был индуцирован со статистически значимыми различиями между вариантами, иммунизированными рекомбинантными белками, только в отношении антигена E2, в случае которого наблюдали значительно более сильный ответ в группе животных, иммунизированных смесью Eq1 и NS3 (p<0,05, критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса).
Кроме того, как показано на фигуре 10, в группах животных, иммунизированных как белком Eq1 отдельно, так и в смеси с NS3, наблюдали значительный контроль специфической вирусемии (заражение vvRE) в модели суррогатного заражения (p<0,05, критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна).
Эти результаты свидетельствовали о том, что препарат на основе смеси антигена Eq1 с NS3 способен индуцировать усиленный специфический иммунный ответ, как гуморальный, так и клеточный, против структурных антигенов HCV и NS3 с функциональной активностью in vivo, поскольку он способен создавать защиту в модели суррогатного заражения.
Пример 4. Изучение на мышах иммуногенности химерного антигена Eq1 в смеси с плазмидой для ДНК-иммунизации
Иммунизировали 8-недельных самок мышей BALB/c массой 16-18 г, по 17 животных на группу. Группы иммунизации были следующими: группа 1, антиген Eq1, сформулированный в квасцах; группа 2, антиген Eq1 в смеси с плазмидой для ДНК-иммунизации pIDKE2 (Dueñas-Carrera et al., Biotechnol Appl Biochem. 2004; 39: 249-55) в солевом растворе; группа 3, антиген Eq1 в смеси с плазмидой pIDKE2 и с белком Co.120 (Dueñas-Carrera et al., Biotecnología Aplicada 1999; 16(4), 226-231) в солевом растворе; группа 4, белок Co.120 в смеси с плазмидой pIDKE2 в солевом растворе в недели 0 и 3, с дозой антигена Eq1, сформулированного в квасцах, в неделю 6; группа 5, плазмида pIDKE2 в солевом растворе в недели 0, 3 и 6; группа 6, квасцы (контроль); группа 7, солевой раствор (контроль). Мыши в соответствующих группах получали 20 мкг химерного антигена Eq1 и 10 мкг рекомбинантного белка Co.120. В случае плазмиды pIDKE2 в каждой дозе вводили 100 мкг. Иммунизации проводили в недели 0, 3 и 6 путем внутримышечной инъекции.
Кровь собирали в недели 0 и 8 для изучения продукции антител против антигенов HCV. Кроме того, 5 мышей на группу умерщвляли в неделю 8 для изучения специфического клеточного ответа. Дополнительно, 5 животных на группу заражали рекомбинантным вирусом осповакцины vvRE, экспрессирующим структурные белки HCV, и другие 5 животных заражали контрольным вирусом осповакцины WR в неделю 8. Через пять дней после заражения мышей умерщвляли и вирусный титр определяли в яичниках, как описано ранее.
Специфический иммунный ответ против антигенов HCV показан на фигурах 11-13. Оцениваемый ответ обнаруживали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве захватывающих антигенов в ELISA или в качестве антигенов для стимуляции в анализах для определения клеточного иммунного ответа. Как показано на фигуре 11, продукция антител против структурных антигенов HCV была индуцирована во всех группах иммунизации, за исключением контроля. Значительно более высокая продукция антител против E1 и E2 была обнаружена в группе животных, иммунизированных смесью белка Eq1 и Co.120 с плазмидой pIDKE2, по сравнению с группой животных, иммунизированных только плазмидой pIDKE2 (p<0,05, критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна). Точно так же, статистически значимые различия между этими двумя группами наблюдали для пролиферативного ответа (фигура 12) против Core, E1 и E2 (p<0,05, критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна). Фактически, в группе животных, иммунизированных смесью белка Eq1 и Co.120 с плазмидой pIDKE2, был индуцирован пролиферативный ответ против антигенов E1 и E2, который значительно превосходил тот, который был индуцирован в остальных группах (p<0,05, критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса), за исключением группы животных, иммунизированных по схеме первичное/бустерное введение (группа 4).
Что касается специфического ответа в виде секреции IFN-гамма, у животных во всех группах был индуцирован поддающийся обнаружению ответ (фигура 13) против структурных белков HCV (за исключением контроля). Статистически значимые различия в ответах против E1 и E2 не наблюдали между группами животных, вакцинированных иммуногенными вариантами, за исключением наблюдаемого превосходящего ответа (p<0,05, критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса), индуцированного против E2, в группе животных, иммунизированных отдельно Eq1 (группа 1), в сравнении с группой животных, иммунизированных только плазмидой pIDKE2 (группа 5). Однако ответ в виде секреции IFN-гамма против антигена Core был значительно выше в группе животных, иммунизированных смесью белков Eq1 и Co.120 с плазмидой pIDKE2, по сравнению с остальными группами (p<0,05; критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса), за исключением группы животных, иммунизированных по схеме первичное/бустерное введение (группа 4).
Кроме того, все группы животных, которым вводили химерный антиген Eq1 (группы 1-4), отличались способностью в значительной степени контролировать специфическую вирусемию (заражение vvRE) в модели суррогатного заражения (фигура 14) (p<0,05, критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна), но не остальные группы.
Результаты свидетельствовали о том, что вакцинная композиция на основе Eq1 в смеси с плазмидой pIDKE2 и белком Co.120, или введенная по схеме первичное/бустерное введение, делает возможной индукцию усиленного специфического иммунного ответа, как гуморального, так и клеточного, против структурных антигенов HCV с функциональной активностью in vivo, поскольку она способна создавать защиту в модели суррогатного заражения.
Пример 5. Изучение на мышах иммуногенности химерного антигена Eq1 в смеси с рекомбинантными белковыми вариантами структурных белков HCV
Иммунизировали 8-недельных самок мышей BALB/c массой 16-18 г, по 17 животных на группу. Группы иммунизации были следующими: группа 1, антиген Eq1, сформулированный в квасцах; группа 2, смесь белков Co.120, E1.340 (Lorenzo L.J. et al., Biotechnol Appl Biochem 2000; 32(2): 137-143) и E2.680 (Martinez-Donato et al., Mol Biotechnol. 2007; 35(3): 225-36), сформулированная в квасцах, в недели 0 и 2 с дозами химерного антигена Eq1, сформулированного в квасцах, в неделю 4; группа 3, химерный антиген Eq1, сформулированный в квасцах, в неделю 0 и дозы смеси белков Co.120, E1.340 и E2.680, сформулированной в квасцах, в недели 2 и 4; группа 4, смесь белков Co.120, E1.340, E2.680 и Eq1, сформулированная в квасцах; группа 5, смесь белков Co.120, E1.340 и E2.680, сформулированная в квасцах; группа 6, квасцы (контроль). Мыши в соответствующих группах получали 20 мкг химерного антигена Eq1, 16,7 мкг белков E1 и E2, а также 0,1 мкг белка Co.120. Иммунизации проводили в недели 0, 2 и 4 путем внутримышечной инъекции.
Кровь собирали в недели 0 и 6 для изучения продукции антител против антигенов HCV. Кроме того, 5 мышей на группу умерщвляли в неделю 6 для изучения специфического клеточного ответа. Дополнительно, 5 животных на группу заражали рекомбинантным вирусом осповакцины vvRE, экспрессирующим структурные белки HCV, и другие 5 животных заражали контрольным вирусом осповакцины WR в неделю 8. Через пять дней после заражения мышей умерщвляли и вирусный титр определяли в яичниках, как описано ранее.
Специфический иммунный ответ против HCV показан на фигурах 15-17. Оцениваемый ответ обнаруживали с использованием рекомбинантных вариантов белка Core (аминокислоты 1-120), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве захватывающих антигенов в ELISA или в качестве антигенов для стимуляции в анализах для определения клеточного иммунного ответа. Как показано на фигуре 15, у иммунизированных животных во всех группах, за исключением контроля, была индуцирована продукция специфических антител против структурных антигенов HCV. Никаких статистически значимых различий не наблюдали для продукции антител против белка Core среди групп. Напротив, в группах животных, иммунизированных смесью структурных белков (группа 5), и в группе животных, иммунизированных смесью структурных белков плюс Eq1 (группа 4), наблюдали значительно более высокую продукцию антител против E1 и E2, чем в группах животных, иммунизированных отдельно Eq1 (p<0,05, критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна).
С другой стороны, пролиферативный ответ против антигенов HCV был индуцирован во всех группах, за исключением контроля, как показано на фигуре 16. Никаких статистически значимых различий между группами не наблюдали с точки зрения пролиферативного ответа против E1 и E2. Однако во всех группах животных, получавших химерный антиген Eq1 в любом из сочетаний (группы 1-4), был индуцирован пролиферативный ответ против Core, значительно превосходящий тот, который был индуцирован смесью структурных белков HCV (группа 5) (p<0,05, критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса).
Как показано на фигуре 17, ответ в виде секреции IFN-гамма имел такую же закономерность, которую наблюдали для пролиферативного ответа. В этом случае, в группе животных, иммунизированных смесью структурных белков HCV (группа 5), ответ в виде секреции IFN-гамма против Core был значительно ниже, чем ответ, индуцированный в группах животных, иммунизированных химерным антигеном Eq1 отдельно (группа 1) и смесью Eq1 со структурными белками HCV (группа 4) (p<0,05, критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса).
Кроме того, животные во всех группах, за исключением контроля, были способны в значительной степени контролировать специфическую вирусемию (заражение vvRE) в модели суррогатного заражения вирусом (фигура 18) (p<0,05, критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна).
Результаты свидетельствовали о том, что вакцинная композиция на основе химерного антигена Eq1 в смеси с препаратом, содержащим рекомбинантные белковые варианты структурных антигенов HCV Core, E1 и E2, делает возможной индукцию усиленного специфического иммунного ответа, как гуморального, так и клеточного, против структурных белков HCV с функциональной активностью in vivo, поскольку она способна создавать защиту в модели суррогатного заражения.
Пример 6. Изучение на мышах иммуногенности различных химерных антигенов, содержащих эпитопы HCV и искусственные эпитопы, специфичные для хелперных T-лимфоцитов
Иммунизировали 8-недельных самок мышей BALB/c массой 16-18 г, по 17 животных на группу. Группы иммунизации были следующими: группа 1, химерный антиген Eq1, сформулированный в квасцах; группа 2, химерный антиген NSEq2, сформулированный в квасцах; группа 3, химерный антиген EqNSb, сформулированный в квасцах; группа 4, химерный антиген EqNS3, сформулированный в квасцах; группа 5, химерный антиген EqP1, сформулированный в квасцах; группа 6, квасцы (контроль). Мыши в соответствующих группах получали 20 мкг рекомбинантных химерных антигенов. Иммунизации проводили в недели 0, 2 и 4 путем внутримышечной инъекции.
Кровь собирали в недели 0 и 6 для изучения продукции антител против антигенов HCV. Кроме того, 5 мышей на группу умерщвляли в неделю 6 для изучения специфического клеточного ответа. Дополнительно, 5 животных на группу заражали рекомбинантным вирусом осповакцины vvRE, экспрессирующим структурные белки HCV, и другие 5 животных заражали контрольным вирусом осповакцины WR в неделю 8. Через пять дней после заражения мышей умерщвляли и вирусный титр определяли в яичниках, как описано ранее.
Специфический иммунный ответ против антигенов HCV показан на фигурах 19-21. Оцениваемый ответ обнаруживали с использованием рекомбинантных вариантов белков Core (аминокислоты 1-120), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV), E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) и NS3 (аминокислоты 1192-1457 в полибелке HCV) в качестве захватывающих антигенов в ELISA или в качестве антигенов для стимуляции в анализах для определения клеточного иммунного ответа. Как показано на фигуре 19, во всех группах, за исключением контроля, у животных была индуцирована продукция специфических антител против структурных белков HCV без статистически значимых различий между группами животных, иммунизированных различными химерными антигенами. Только в группах 2, 3 и 4, для которых использовали области NS3 HCV, была индуцирована продукция антител против этого вирусного антигена, которая была значительно более сильной в группе 4 по сравнению с группами 2 и 3 (p<0,05, критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса).
Как показано на фигуре 20, во всех группах, за исключением контроля, у животных был индуцирован специфический пролиферативный ответ против структурных антигенов HCV. В этом случае пролиферативный ответ против антигенов Core и E1 был значительно выше в группах 2, 3 и 5 по сравнению с группой 1 (p<0,05, критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса). Никаких статистически значимых различий не было обнаружено среди групп, иммунизированных различными химерными антигенами, с точки зрения пролиферативного ответа против E2. Только в группах 2, 3 и 4, для которых использовали области NS3 HCV, был индуцирован пролиферативный ответ против этого вирусного антигена, который был значительно сильнее в группе Group 4 по сравнению с группами 2 и 3 (p<0,05, критерии множественного сравнения ANOVA и Ньюмена-Кейлса).
Анализ специфического ответа в виде секреции IFN-гамма (фигура 21) показал его индукцию против структурных антигенов HCV во всех группах, за исключением контроля, без статистически значимых различий между группами. Только в группах 2, 3 и 4, для которых использовали области NS3 HCV, был индуцирован ответ в виде секреции IFN-гамма против этого вирусного антигена без статистически значимых различий между группами.
Кроме того, животные во всех группах, за исключением контроля, были способны в значительной степени контролировать специфическую вирусемию (заражение vvRE) в модели суррогатного заражения вирусом (фигура 22) (p<0,05, критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна).
Результаты свидетельствуют, что включение эпитопов или областей NS3 HCV в последовательность Eq1 делает возможной индукцию специфического иммунного ответа против этого вирусного антигена без оказания влияния на иммунный ответ, индуцированный против структурных антигенов HCV. Более того, включение искусственных эпитопов P1M и P2B в последовательность белка Eq1 способствует значительному возрастанию пролиферативного ответа против антигенов Core и E1 без оказания влияния на способность индуцировать специфический гуморальный или клеточный иммунный ответ против этих антигенов или E2, и при этом также сохраняется функциональная активность in vivo, поскольку это может создавать защиту в модели суррогатного заражения вирусом.
Пример 7. Сравнительное изучение на мышах иммуногенности химерных антигенов Eq1 и Eq1b
Иммунизировали 8-недельных самок мышей BALB/c массой 16-18 г, по 17 животных на группу. Группы иммунизации были следующими: группа 1, химерный антиген Eq1b, сформулированный в квасцах; группа 2, химерный антиген Eq1, сформулированный в квасцах; группа 3, квасцы (контроль). Мыши в соответствующих группах получали 20 мкг химерных антигенов. Иммунизации проводили в недели 0, 2 и 4 путем внутримышечной инъекции.
Кровь собирали в недели 0 и 6 для изучения продукции антител против антигенов HCV. Кроме того, 5 мышей на группу умерщвляли в неделю 6 для изучения специфического клеточного ответа. Дополнительно, 5 животных на группу заражали рекомбинантным вирусом осповакцины vvRE, экспрессирующим структурные белки HCV, и другие 5 животных заражали контрольным вирусом осповакцины WR в неделю 8. Через пять дней после заражения мышей умерщвляли и вирусный титр определяли в яичниках, как описано ранее.
Специфический иммунный ответ против антигенов HCV показан на фигурах 23 и 24. Оцениваемый ответ обнаруживали с использованием рекомбинантных вариантов белков Core (аминокислоты 1-120), E1 (аминокислоты 192-340 полибелка HCV) и E2 (аминокислоты 384-680 полибелка HCV) в качестве захватывающих антигенов в ELISA или в качестве антигенов для стимуляции в анализах для определения клеточного иммунного ответа. Как показано на вышеупомянутых фигурах, в группах животных, иммунизированных белками, но не в контроле, были индуцированы специфические ответы в виде продукции антител и пролиферативного ответа против структурных антигенов HCV без статистически значимых различий между группами животных, иммунизированных рекомбинантными белками.
С другой стороны, группы животных, иммунизированных химерными антигенами, но не контроль, проявляли способность в значительной степени контролировать специфическую вирусемию (заражение vvRE) в модели суррогатного заражения вирусом (фигура 25) (p<0,05; критерии множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Данна) без различий между группами животных, иммунизированных рекомбинантными белками.
Claims (14)
1. Химерный антиген для вакцины против вируса гепатита С (HCV), состоящий из а) первого сегмента, состоящего из области Е2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV, b) второго сегмента, состоящего из области Е1 (аминокислоты 190-222) полибелка HCV, и с) третьего сегмента, состоящего из области Core (аминокислоты 1-50) этого белка, в таком порядке.
2. Химерный вакцинный антиген по п. 1, в котором его аминокислотная последовательность выбрана из группы, состоящей из SEQ ID No. 10 (антиген Eq1) и SEQ ID No. 16 (антиген Eq1b).
3. Вакцинный химерный антиген по п. 1, связанный с неструктурными белками HCV NS3 и состоящий из SEQ ID No. 14 (антиген EqNS3).
4. Химерный вакцинный антиген по п. 1, связанный с искусственным эпитопом SEQ ID No. 17 (Р1М) или SEQ ID No. 18 (P2B).
5. Химерный вакцинный антиген по п. 4, в котором его аминокислотная последовательность выбрана из группы, состоящей из SEQ ID No. 12 (антиген NSEq2), SEQ ID No. 13 (антиген EqNSb) и SEQ ID No. 15 (антиген EqP1).
6. Вакцинная композиция, содержащая 20 мкг химерного антигена для вакцины против HCV, который содержит: а) первый сегмент, состоящий из области Е2 (аминокислоты 408-540) полибелка HCV, b) второй сегмент, состоящий из области Е1 (аминокислоты 190-222) полибелка HCV, и с) третий сегмент, состоящий из области Core (аминокислоты 1-50) полибелка HCV, именно в таком порядке; и эксципиенты и/или фармацевтически приемлемые адъюванты, для индукции специфического иммунного ответа против HCV.
7. Вакцинная композиция по п. 6, содержащая химерный вакцинный антиген по любому из пп. 2-5.
8. Вакцинная композиция по п. 6 или 7, дополнительно содержащая плазмиду для ДНК-иммунизации, экспрессирующую структурные антигены HCV.
9. Вакцинная композиция по п. 6 или 7, дополнительно содержащая плазмиду для ДНК-иммунизации, экспрессирующую структурные антигены HCV и рекомбинантный капсидный белок HCV.
10. Вакцинная композиция по п. 6 или 7, которую можно вводить по схемам первичного/бустерного введения с препаратами на основе плазмид для ДНК-иммунизации, рекомбинантных белков структурных антигенов HCV или смеси обоих.
11. Применение химерных вакцинных антигенов по любому из пп. 1-5 для получения вакцины, предназначенной для индукции специфического иммунного ответа против HCV.
12. Применение по п. 11, в котором такая вакцина способна создавать защиту in vivo в модели суррогатного заражения вирусом.
13. Применение по п. 11, в котором такая вакцина способна индуцировать иммунный ответ у здоровых индивидуумов или у пациентов, инфицированных HCV.
14. Применение по п. 11, в котором такую вакцину вводят по схемам первичного/бустерного введения с препаратами на основе плазмид для ДНК-иммунизации, рекомбинантных белков структурных антигенов HCV или смеси обоих.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CU2012-0153 | 2012-11-05 | ||
CU20120153A CU24112B1 (es) | 2012-11-05 | 2012-11-05 | Antígenos vacunales quiméricos contra el virus de la hepatitis c |
PCT/CU2013/000006 WO2014067498A1 (es) | 2012-11-05 | 2013-10-28 | Antígenos vacunales quiméricos contra el virus de la hepatitis c |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015121429A RU2015121429A (ru) | 2016-12-27 |
RU2639504C2 true RU2639504C2 (ru) | 2017-12-21 |
Family
ID=49724426
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015121429A RU2639504C2 (ru) | 2012-11-05 | 2013-10-28 | Химерные антигены для вакцины против вируса гепатита с |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9676825B2 (ru) |
EP (1) | EP2915544B1 (ru) |
JP (1) | JP6259831B2 (ru) |
KR (1) | KR102093495B1 (ru) |
CN (1) | CN104837498B (ru) |
AR (1) | AR093341A1 (ru) |
AU (1) | AU2013339846B2 (ru) |
CA (1) | CA2901346C (ru) |
CU (1) | CU24112B1 (ru) |
ES (1) | ES2644801T3 (ru) |
IN (1) | IN2015DN03925A (ru) |
MX (1) | MX358507B (ru) |
RU (1) | RU2639504C2 (ru) |
WO (1) | WO2014067498A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201503036B (ru) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3319997A4 (en) | 2015-07-07 | 2019-01-23 | The Governors of the University of Alberta | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS BASED ON HEPATITIS C VIRUS AND METHODS OF USE |
CA3037813A1 (en) * | 2016-09-21 | 2018-03-29 | The Governors Of The University Of Alberta | Hepatitis c virus immunogenic compositions and methods of use thereof |
US11660332B2 (en) * | 2017-04-27 | 2023-05-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Nucleoside-modified mRNA-lipid nanoparticle lineage vaccine for hepatitis C virus |
EP3765075A4 (en) * | 2018-03-16 | 2021-12-08 | The Governors of the University of Alberta | PEPTIDIC COMPOSITIONS OF THE HEPATITIS C VIRUS AND THEIR USE PROCEDURES |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010047830A2 (en) * | 2008-10-24 | 2010-04-29 | The Scripps Research Institute | Agents for hcv treatment |
US20110256098A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-10-20 | David Apelian | Immunotherapy for chronic hepatitis c virus infection |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2391843C (en) * | 1999-11-19 | 2011-10-18 | Csl Limited | Hcv vaccine compositions |
US6544780B1 (en) * | 2000-06-02 | 2003-04-08 | Genphar, Inc. | Adenovirus vector with multiple expression cassettes |
CU23496A1 (es) * | 2004-09-03 | 2010-02-23 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Composición vacunal contra el virus de la hepatitis c |
JP5405832B2 (ja) * | 2006-01-04 | 2014-02-05 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス, インコーポレイテッド | Hcv特異的なt細胞の活性化 |
US7256008B2 (en) | 2006-01-06 | 2007-08-14 | Abbott Laboratories | Determination of concentration of FK778 by competitive immunoassay |
WO2009056535A2 (en) * | 2007-10-29 | 2009-05-07 | Genimmune N.V. | Methods and kits for inducing a ctl response using a prime boost regimen |
EP2281882A4 (en) * | 2008-04-25 | 2012-03-21 | Toray Industries | NUCLEIC ACID CONTAINING A CHIMERIC GENE FROM HEPATITIS TYPE C VIRUS |
-
2012
- 2012-11-05 CU CU20120153A patent/CU24112B1/es active IP Right Grant
-
2013
- 2013-10-28 JP JP2015540044A patent/JP6259831B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2013-10-28 AU AU2013339846A patent/AU2013339846B2/en not_active Ceased
- 2013-10-28 EP EP13801461.8A patent/EP2915544B1/en active Active
- 2013-10-28 US US14/440,443 patent/US9676825B2/en active Active
- 2013-10-28 CN CN201380064380.9A patent/CN104837498B/zh active Active
- 2013-10-28 ES ES13801461.8T patent/ES2644801T3/es active Active
- 2013-10-28 MX MX2015005651A patent/MX358507B/es active IP Right Grant
- 2013-10-28 CA CA2901346A patent/CA2901346C/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-10-28 KR KR1020157012656A patent/KR102093495B1/ko active IP Right Grant
- 2013-10-28 RU RU2015121429A patent/RU2639504C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-10-28 IN IN3925DEN2015 patent/IN2015DN03925A/en unknown
- 2013-10-28 WO PCT/CU2013/000006 patent/WO2014067498A1/es active Application Filing
- 2013-11-04 AR ARP130104019A patent/AR093341A1/es unknown
-
2015
- 2015-05-04 ZA ZA2015/03036A patent/ZA201503036B/en unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110256098A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-10-20 | David Apelian | Immunotherapy for chronic hepatitis c virus infection |
WO2010047830A2 (en) * | 2008-10-24 | 2010-04-29 | The Scripps Research Institute | Agents for hcv treatment |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
ARASH ARASHKIA et al. Construction of HCV-polytope vaccine candidates harbouring immune-enhancer sequences and primary evaluation of their immunogenicity in BALB/c mice, Virus Genes, 2010, No. 40, p. 44-52. * |
HUI LI et al. Genetic Diversity of Near Genome-Wide Hepatitis C Virus Sequences during Chronic Infection: Evidence for Protein Structural Conservation Over Time, PLoS ONE, 2011, Vol. 6, No. 5, p. 1-1. * |
HUI LI et al. Genetic Diversity of Near Genome-Wide Hepatitis C Virus Sequences during Chronic Infection: Evidence for Protein Structural Conservation Over Time, PLoS ONE, 2011, Vol. 6, No. 5, p. 1-1. А.В. ИВАНОВ и др. МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА С. Успехи биологической химии, 2005, т. 45, с. 37-86, стр. 42-49. * |
А.В. ИВАНОВ и др. МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА С. Успехи биологической химии, 2005, т. 45, с. 37-86, стр. 42-49. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20150079694A (ko) | 2015-07-08 |
JP2015536936A (ja) | 2015-12-24 |
AU2013339846B2 (en) | 2017-08-17 |
ZA201503036B (en) | 2016-01-27 |
RU2015121429A (ru) | 2016-12-27 |
JP6259831B2 (ja) | 2018-01-10 |
CN104837498B (zh) | 2018-05-18 |
US9676825B2 (en) | 2017-06-13 |
AU2013339846A1 (en) | 2015-05-14 |
US20150307558A1 (en) | 2015-10-29 |
EP2915544A1 (en) | 2015-09-09 |
IN2015DN03925A (ru) | 2015-10-02 |
AR093341A1 (es) | 2015-06-03 |
CA2901346A1 (en) | 2014-05-08 |
CU24112B1 (es) | 2015-08-27 |
MX358507B (es) | 2018-08-22 |
MX2015005651A (es) | 2015-08-20 |
ES2644801T3 (es) | 2017-11-30 |
EP2915544B1 (en) | 2017-08-09 |
CA2901346C (en) | 2019-04-23 |
KR102093495B1 (ko) | 2020-03-26 |
WO2014067498A1 (es) | 2014-05-08 |
CU20120153A7 (es) | 2014-06-27 |
CN104837498A (zh) | 2015-08-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2948791T3 (es) | Vacuna de ácido nucleico contra el virus de la hepatitis C | |
KR100875483B1 (ko) | 백신 조성물 | |
Zingaretti et al. | Why is it so difficult to develop a hepatitis C virus preventive vaccine? | |
EP3723861A1 (en) | Hepatitis b immunisation regimen and compositions | |
RU2639504C2 (ru) | Химерные антигены для вакцины против вируса гепатита с | |
Olivera et al. | Protective cellular immune response against hepatitis C virus elicited by chimeric protein formulations in BALB/c mice | |
US8691234B2 (en) | Vaccine formulation potentiated by the combination of DNA and an antigen | |
KR20200100686A (ko) | B형 간염 면역화 레지멘 및 조성물 | |
AU746258B2 (en) | Genetic immunization with nonstructural proteins of hepatitis C virus | |
US20070032444A1 (en) | Genetic immunization with nonstructural proteins of hepatitis C virus | |
CN115843270A (zh) | 包括缺失可变结构域的e2多肽的丙型肝炎核酸疫苗 | |
RU2353651C2 (ru) | Рекомбинантные векторы на основе "живого" вируса оспы домашней птицы и их применение в фармацевтических композициях против вируса гепатита с | |
JP2008508890A6 (ja) | 組換え生鶏痘ウィルスベクター及びc型肝炎ウィルスに対する薬剤組成物中でのそれらの使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201029 |