RU2613901C1 - Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis - Google Patents
Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2613901C1 RU2613901C1 RU2016101290A RU2016101290A RU2613901C1 RU 2613901 C1 RU2613901 C1 RU 2613901C1 RU 2016101290 A RU2016101290 A RU 2016101290A RU 2016101290 A RU2016101290 A RU 2016101290A RU 2613901 C1 RU2613901 C1 RU 2613901C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- serum
- melitensis
- hours
- rabbits
- inactivated
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к ветеринарии, к диагностике инфекционных болезней, а именно к дифференциации возбудителей бруцеллеза.The invention relates to veterinary medicine, to the diagnosis of infectious diseases, namely to the differentiation of pathogens of brucellosis.
Бруцеллез - инфекционная болезнь животных, представляющая большую опасность и для людей.Brucellosis is an infectious disease of animals, which is also a great danger to humans.
Существуют различные возбудители бруцеллеза. Среди сельскохозяйственных животных наиболее распространены бруцеллы видов abortus и melitensis. Но наиболее опасным как для животных, так и людей является возбудитель бруцелл вида melitensis (В.melitensis).There are various causative agents of brucellosis. Among farm animals, the most common brucella species are abortus and melitensis. But the most dangerous for both animals and humans is the causative agent of brucella species melitensis (B. melitensis).
В этой связи принципиально важно в случае возникновения вспышки бруцеллеза объективно установить вид возбудителя, так как от этого существенно зависит выбор оптимальной схемы противобруцеллезных мероприятий.In this regard, it is fundamentally important in the event of an outbreak of brucellosis to objectively establish the type of pathogen, since the choice of the optimal scheme of anti-brucellosis measures depends on it.
В этой связи наиболее актуальным является получение эффективной бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-melitensis.In this regard, the most relevant is to obtain effective brucellosis monospecific serum anti-melitensis.
Известно, что для дифференциации возбудителей бруцеллеза в бактериологической диагностике в качестве одного из основных методов используют антивидовые моноспецифические бруцеллезные сыворотки. От уровня их чувствительности зависит надежность видовой дифференциации бруцелл. Кроме того, практически важны простота и безопасность их получения.It is known that for the differentiation of pathogens of brucellosis in bacteriological diagnostics, as one of the main methods, antispecific monospecific brucellosis serums are used. The reliability of the species differentiation of brucella depends on the level of their sensitivity. In addition, the simplicity and safety of their preparation are practically important.
В литературе давно известен принцип получения бруцеллезных моноспецифических (монорецепторных) антивидовых диагностических сывороток по определенной схеме, преследующей достижение высокого уровня антител за счет многократной гипериммунизации животных-продуцентов (кроликов) культурами вирулентных штаммов бруцелл, с последующей адсорбцией полученных сывороток взвесью бруцелл гетерологичного вида, с целью удаления общих для них антител (Вершилова П.А. Биохимическая и серологическая дифференциация группы Brucella и ее значение в эпидемиологии / Архив биологических наук, 35, сер. Б, 2 М., 1934; Кириллов Л.В. Получение монорецепторных сывороток // В кн. Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты / М., 1963. С. 366-371.; Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним/ под ред. Т.С. Сайдулдина - Алматы, 2007. - 433 с).The principle of obtaining brucellosis monospecific (monoreceptor) antispecies diagnostic sera according to a certain scheme that pursues the achievement of a high level of antibodies due to multiple hyperimmunization of animal producers (rabbits) with cultures of virulent strains of brucella, followed by adsorption of the obtained sera by a suspension of brucella with a heterologous species, has long been known in the literature removal of antibodies common to them (P. Vershilova, Biochemical and serological differentiation of the Brucella group and its significance in the epidemic Logic / Archive of Biological Sciences, 35, ser. B, 2 M., 1934; Kirillov L.V. Production of monoreceptor sera // In the book Biological and Chemotherapeutic Veterinary Medicines / M., 1963. P. 366-371 .; Ivanov N.P. Brucellosis of animals and measures to combat it / under the editorship of T.S. Saiduldin - Almaty, 2007 .-- 433 s)
Недостатками этого принципа получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки являются трудоемкость внутривенного метода, высокая себестоимость конечного продукта за счет получения сыворотки только при однократном взятии крови, а также эпидемическая опасность, связанная с использованием в процессе производства живых вирулентных штаммов бруцелл.The disadvantages of this principle of obtaining brucellosis monospecific serum are the complexity of the intravenous method, the high cost of the final product due to the production of serum only with a single blood draw, as well as the epidemic risk associated with the use of live virulent brucella strains in the production process.
Наиболее близким техническим результатом является способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-melitensis (патент RU №2104031 C1 от 10.02.1998 г. A61K 39/10). Способ получения моноспецифических сывороток для дифференциации возбудителей бруцеллеза, включающий внутривенную иммунизацию кроликов разовой дозой штамма B.melitensis 28 в дозе 2,8-3,0×108 КОЕ в 1 мл физиологического раствора, обескровливание животных через 5-7 дней, инактивацию сыворотки при 60-65°C в течение 1-1,5 часов и перекрестную абсорбцию сыворотки бактериальной массой штамма В.abortus 544, выращенной в течение 70-72 ч., центрифугированной, охлажденной в течение 24-26 ч. и разбавленной физиологическим раствором, при концентрации абсорбирующей бактериальной массы в 3,5-3,7×109 КОЕ на 10 мл сыворотки) с последующим добавлением к готовой сыворотке раствора фенола и фасовку.The closest technical result is a method for producing brucellosis monospecific serum anti-melitensis (patent RU No. 2104031 C1 of 02/10/1998, A61K 39/10). A method for producing monospecific sera for differentiation of brucellosis pathogens, including intravenous immunization of rabbits with a single dose of B. melitensis 28 strain at a dose of 2.8-3.0 × 10 8 CFU in 1 ml of saline, bleeding animals after 5-7 days, serum inactivation at 60-65 ° C for 1-1.5 hours and cross-absorption of serum by the bacterial mass of strain B. abortus 544, grown for 70-72 hours, centrifuged, cooled for 24-26 hours and diluted with saline, at bacterial absorbent concentrations weight in 3.5-3.7 × 10 9 CFU per 10 ml of serum), followed by the addition of phenol solution to the finished serum and packaging.
Недостатками этого способа являются трудоемкость процесса, эпидемическая опасность, связанная с использованием живой культуры бруцелл вида melitensis, небольшой объем выхода конечного продукта за счет получения сыворотки от животного-продуцента только при однократном взятии крови.The disadvantages of this method are the complexity of the process, the epidemic danger associated with the use of a live culture of brucella species melitensis, a small amount of output of the final product due to obtaining serum from the animal producer only with a single blood sample.
Техническим результатом предлагаемого способа изготовления бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-melitensis является снижение трудоемкости процесса ее изготовления и эпидемической опасности, увеличения выхода конечного продукта.The technical result of the proposed method for the manufacture of brucellosis monospecific anti-melitensis serum is to reduce the complexity of the manufacturing process and the epidemic danger, increase the yield of the final product.
Техническое решение достигается тем, что способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-melitensis, включает иммунизацию кроликов разовой дозой штамма В.melitensis, получение сыворотки, ее инактивация при 60-65°С течение 1-1,5 ч, перекрестную адсорбцию бактериологической массой штамма В.abortus 544, полученной путем выращивания культуры в течение 70-72 ч. центрифугирования, охлаждения осадка в течение 24-26 часов и добавления к осадку физиологического раствора для получения бактериальной массы в количестве 3,5-3,7×109 КОЕ на 10 мл сыворотки, с последующей ее инкубацией при 37°С в течение 2 часов, восстановление сыворотки путем центрифугирования, консервирование и фасовка, иммунизацию кроликов проводят подкожно в область подгрудка суспензией в объеме 1 мл, представляющую собой смесь: 200 млн. м.к. инактивированной культуры штамма В.melitensis 16М с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, для перекрестной адсорбции используют инактивированный штамм В.abortus 544, на 14-16 день проводят пробное крововзятие, а на 21-45 дни осуществляют трехкратное взятие крови и на 60 день обескровливают.The technical solution is achieved by the fact that the method for producing brucellosis monospecific anti-melitensis serum involves immunization of rabbits with a single dose of B. melitensis strain, obtaining serum, its inactivation at 60-65 ° C for 1-1.5 hours, cross-adsorption by the bacteriological mass of strain B .abortus 544 obtained by growing the culture for 70-72 hours by centrifugation, cooling the precipitate for 24-26 hours and adding physiological saline to the sediment to obtain a bacterial mass in the amount of 3.5-3.7 × 10 9 CFU per 10 ml of serum, with subsequent guide its incubation at 37 ° C for 2 hours whey recovery by centrifugation, canning and packaging, immunization of rabbits is carried out subcutaneously in dewlap suspension in a volume of 1 ml, which is a mixture:. 200 million MK of inactivated culture of B. melitensis 16M strain with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant; for inverse adsorption, the inactivated B. abortus 544 strain is used, blood sampling is carried out on days 14-16, and three-time blood sampling is carried out on days 21-45 and blood is bled on day 60 .
Предлагаемый способ получения бруцеллезной моноспецифической бруцеллезной диагностической сыворотки anti-melitensis позволяет снизить трудоемкость производственного процесса за счет подкожного введения антигена кроликам, максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса за счет использования инактивированных культур бруцелл, и взятие крови от каждого кролика минимум четырехкратно, а, значит, минимум в два раза повысить количество получаемой сыворотки.The proposed method for producing brucellosis monospecific brucellosis diagnostic serum anti-melitensis can reduce the complexity of the production process by subcutaneous administration of antigen to rabbits, maximize the anti-epidemic safety of this process by using inactivated cultures of brucella, and taking blood from each rabbit is at least four times, and, therefore, at least double the amount of serum obtained.
В качестве антигенов использовали инактивированные культуры бруцелл:Inactivated brucella cultures were used as antigens:
- для гипериммунизации кроликов - взвесь инактивированной культуры штамма B.melitensis 16М - 200 млн.м.к. с добавлением адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG;- for hyperimmunization of rabbits - a suspension of inactivated culture of B. melitensis 16M strain - 200 mln.m. with the addition of MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant;
- для адсорбции полученной сыворотки - штамм В.abortus 544.- for adsorption of the obtained serum - strain B. abortus 544.
Используемые штаммы должны отвечать паспортным данным. Их высевают на одну из питательных сред: эритрит агар, МППГГА. После 2-3-суточного роста бактериальную массу смывают с поверхности питательной среды физиологическим раствором с добавлением 0,5% фенола. Полученную взвесь бруцелл доводят до необходимой концентрации по оптическому стандарту мутности, сливают через двойной марлевый фильтр в колбы и обезвреживают прогреванием на водяной бане при температуре 80°С в течение 60 минут, периодически помешивая. Проверяют на чистоту и стерильность путем засева на питательные среды (Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним/ под ред. Т.С. Сайдулдина - Алматы, 2007. - 433 с).The strains used must meet the passport data. They are sown on one of the nutrient media: erythritol agar, MPPGA. After 2-3-day growth, the bacterial mass is washed off the surface of the nutrient medium with physiological saline with the addition of 0.5% phenol. The resulting suspension of brucella was adjusted to the required concentration according to the optical turbidity standard, poured through a double gauze filter into flasks and neutralized by heating in a water bath at a temperature of 80 ° C for 60 minutes, stirring occasionally. Check for cleanliness and sterility by seeding on nutrient media (Ivanov N.P. Brucellosis of animals and measures to combat it / under the editorship of T.S. Saiduldin - Almaty, 2007. - 433 s).
Взвеси культур, используемые в качестве антигенов, как при гипериммунизации кроликов, так и для адсорбции полученных сывороток должны быть стерильными.Suspensions of cultures used as antigens, both during hyperimmunization of rabbits and for the adsorption of the obtained sera, must be sterile.
В качестве адъюванта применяли французский препарат MONTANIDE™ ISA 61 VG, производитель - фирма «SEPPIC». Готовый к использованию масляный адъювант для ветеринарных вакцин для производства эмульсий «вода в масле» содержит особое обогащенное светлое минеральное масло и высокоочищенное ПАВ, полученное из маннитола и очищенной олеиновой кислоты растительного происхождения. Препарат MONTANIDE™ ISA 61 VG не содержит компонентов животного происхождения. Рецептуры вакцин с MONTANIDE™ ISA 61 VG вызывают сильный и продолжительный иммунный ответ. По сравнению с традиционными масляными эмульсиями суспензия с MONTANIDE ISA 61 VG является устойчивой, стабильной и легко вводимой. Для приготовления 100 г вакцины обычно необходимо: MONTANIDE™ ISA 61 VG - 60 г и водной антигенной среды - 40 г. Стабильные эмульсии получаются путем смешивания водной среды в MONTANIDE™ ISA 61 VG, при комнатной температуре или ниже, при интенсивном перемешивании.French adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG was used as an adjuvant, manufactured by SEPPIC. The ready-to-use oil adjuvant for veterinary vaccines for the production of water-in-oil emulsions contains a special enriched light mineral oil and highly purified surfactant obtained from mannitol and purified plant-derived oleic acid. MONTANIDE ™ ISA 61 VG does not contain animal components. MONTANIDE ™ ISA 61 VG vaccine formulations elicit a strong and sustained immune response. Compared to traditional oil emulsions, the suspension with MONTANIDE ISA 61 VG is stable, stable and easy to administer. To prepare 100 g of vaccine, it is usually necessary: MONTANIDE ™ ISA 61 VG - 60 g and aqueous antigenic medium - 40 g. Stable emulsions are obtained by mixing the aqueous medium in MONTANIDE ™ ISA 61 VG, at room temperature or lower, with vigorous stirring.
При комнатной температуре интенсивно перемешивают на магнитной мешалке взвесь убитой культуры штамма B.melitensis 16М с добавлением адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG, в соотношении 40 и 60%, соответственно, т.е. для приготовления 10 мл суспензии необходимо 4 мл взвеси и 6 мл адъюванта.At room temperature, a suspension of the killed culture of B. melitensis 16M strain with the addition of MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant in a ratio of 40 and 60%, respectively, is intensively stirred on a magnetic stirrer, respectively, i.e. for the preparation of 10 ml of suspension, 4 ml of suspension and 6 ml of adjuvant are necessary.
В качестве животных-продуцентов использовали кроликов.As animal producers used rabbits.
Заявленный результат достигается следующим образом:The claimed result is achieved as follows:
Кроликам однократно подкожно в область подгрудка вводят 1 мл суспензии, представляющей собой смесь антигена (200 млн. м.к. инактивированной культуры штамма В.melitensis 16М с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG). На 14 день проводят пробное крововзятие, а далее при условии положительной РА с полученной сывороткой и испытуемой живой культурой В.melitensis в разведении не ниже 1:160, осуществляют четырехкратное взятие крови (из ушной вены) в сроки с 21 по 45 день после гипериммунизации, из расчета 16-20 мл крови на 1 кг живой массы. Через 60 дней тотальное взятие крови (производственное кровопускание). Кровь от каждого кролика берут с соблюдением правил асептики и антисептики в отдельную стерильную емкость. После крововзятия емкость с кровью ставят в термостат при 37°С на 3-4 часа для отделения сыворотки, затем помещают в холодильник при 2-8°С на 2-е суток. Сыворотку от каждого кролика сливают отдельно в стерильные сосуды, после чего прогревают в водяной бане при температуре 60-65°С в течение 1-1,5 часов при постоянном перемешивании и обезвреживают добавлением мертиолата натрия до конечной концентрации 1:10000.Rabbits were injected subcutaneously into the breast area 1 ml of the suspension, which was a mixture of antigen (200 mln.m.K. of inactivated culture of B. melitensis 16M strain with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant). On day 14, a test blood sampling is carried out, and then subject to positive RA with the obtained serum and the tested live culture of B. melitensis in a dilution of at least 1: 160, blood is taken four times (from the ear vein) from 21 to 45 days after hyperimmunization, at the rate of 16-20 ml of blood per 1 kg of live weight. After 60 days, total blood sampling (production bloodletting). Blood from each rabbit is taken in compliance with the rules of asepsis and antiseptics in a separate sterile container. After blood collection, the blood vessel is placed in a thermostat at 37 ° C for 3-4 hours to separate the serum, then placed in a refrigerator at 2-8 ° C for 2 days. The serum from each rabbit is poured separately into sterile vessels, after which it is heated in a water bath at a temperature of 60-65 ° C for 1-1.5 hours with constant stirring and neutralized by adding sodium merthiolate to a final concentration of 1: 10000.
Затем осуществляют процесс перекрестной адсорбции полученной anti-melitensis сыворотки, используя бактериальную массу инактивированного штамма В.abortus 544, полученную путем выращивания в течение 70-72 ч, центрифугирования, охлаждения осадка в течение 24-26 часов и добавления к осадку физиологического раствора для получения бактериальной массы в количестве 3,5-3,7×109 КОЕ на 10 мл сыворотки, с последующим инкубированием смеси при 37°С в течение 2 часов и ее восстановление центрифугированием 30 мин при 3000-5000 об/мин и добавлением в качестве консерванта, например, мертиолата натрия в конечной концентрации 1:10000 и фасовка.Then, the process of cross-adsorption of the obtained anti-melitensis serum is carried out using the bacterial mass of the inactivated B. abortus 544 strain obtained by culturing for 70-72 hours, centrifuging, cooling the precipitate for 24-26 hours and adding physiological saline to the precipitate to obtain bacterial weight in the amount of 3.5-3.7 × 10 9 CFU per 10 ml of serum, followed by incubation of the mixture at 37 ° C for 2 hours and its restoration by centrifugation for 30 minutes at 3000-5000 rpm and adding as a preservative, for example p, sodium merthiolate at a final concentration of 1: 10000 and packing.
Контроль активности полученной сыворотки осуществляют в РА до адсорбции и после нее, используя в качестве антигенов живые культуры бруцелл видов abortus и melitensis. Сыворотка считается качественной, если РА с ней и антигенами живых культур бруцелл видов melitensis будет положительной в разведениях не ниже 1:160 и отрицательном результате агглютинации живых культур бруцелл видов abortus в разведениях 1/10, соответственно.The activity of the obtained serum is monitored in RA before and after adsorption using live brucella cultures of the abortus and melitensis species as antigens. Serum is considered to be of high quality if RA with it and antigens of live cultures of brucella melitensis species is positive in dilutions of at least 1: 160 and a negative result of agglutination of live cultures of brucella species abortus in 1/10 dilutions, respectively.
Пробу сыворотки крови из каждой емкости подвергают проверке на стерильность путем высевов на ΜΠΑ, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро и на активность в РА, РСК, РБП.A blood serum sample from each container is tested for sterility by plating on ΜΠΑ, MPB, MPPB under paraffin oil and Saburo medium and for activity in RA, RSK, RBP.
При условии стерильности и получении положительных результатов серологических реакций сыворотку смешивают в одну емкость для составления серии, консервируют мертиолатом натрия в качестве консерванта в конечной концентрации 1:10000 и расфасовывают.Under the condition of sterility and obtaining positive results of serological reactions, the serum is mixed in one container to make a series, canned with sodium thiolate as a preservative in a final concentration of 1: 10000 and packaged.
Пример 1. Определение оптимальной схемы гипериммунизации кроликов для получения сыворотки бруцеллезной моноспецифической anti-melitensisExample 1. Determination of the optimal scheme for hyperimmunization of rabbits to obtain serum of brucellosis monospecific anti-melitensis
В опыте изучили сравнительную эффективность двух схем получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-melitensis, для чего из здоровых кроликов, предварительно проверенных на бруцеллез серологическими методами, сформировали две группы (по 3 кролика в каждой):In the experiment, we studied the comparative effectiveness of two schemes for producing brucellosis monospecific anti-melitensis serum, for which, from healthy rabbits, previously tested for brucellosis by serological methods, two groups were formed (3 rabbits each):
1-я группа - животным ввели однократно внутривенно живую культуру В.melitensis 16М в дозе 200 млн. м.к. в объеме 1 мл.;Group 1 - animals were injected once with an intravenous live culture of B. melitensis 16M at a dose of 200 million m. in a volume of 1 ml .;
2-я группа - животным ввели однократно подкожно инактивированную культуру В.melitensis 16М в дозе 200 млн.м.к. в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG в общем объеме 1 мл.2nd group - animals were injected once subcutaneously inactivated culture of B. melitensis 16M at a dose of 200 million m in a mixture with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG in a total volume of 1 ml.
Кровь от животных обеих групп в целях получения сывороток брали на 7, 14, 21, 28, 45, 60 и 90 дни после введения антигенов.Blood from animals of both groups in order to obtain sera was taken on 7, 14, 21, 28, 45, 60 and 90 days after the introduction of antigens.
Исследование полученных сывороток проводили в РА с антигенами, приготовленными из В.abortus 544 и В.melitensis 565, согласно общепринятой методике до и после адсорбции.The study of the obtained sera was carried out in RA with antigens prepared from B. abortus 544 and B. melitensis 565, according to the standard procedure before and after adsorption.
Перед адсорбцией сыворотки инактивировали при 60-65°C в течение 1-1,5 ч и обезвреживали мертиолатом натрия до конечной концентрации 1:10000.Before adsorption, serum was inactivated at 60-65 ° C for 1-1.5 h and neutralized with sodium thiolate to a final concentration of 1: 10000.
В дальнейшем проводили адбсорбцию полученных сывороток anti-melitensis бактериологической массой штамма В.abortus 544, полученной путем выращивания культуры в течение 70-72 ч, центрифугирования, охлаждения осадка в течение 24-26 часов и добавления к осадку физиологического раствора для получения бактериальной массы в количестве 3,5-3,7×109 КОЕ на 10 мл сыворотки, с последующей инкубацией смеси при 37°С в течение 2 ч и ее восстановление путем центрифугированием 30 минут при 5000 об /мин и добавлением в качестве консерванта мертиолата натрия до конечной концентрации 1:10000 и расфасовкуSubsequently, the obtained anti-melitensis sera were adsorbed with the bacteriological mass of strain B. abortus 544 obtained by growing the culture for 70-72 hours, centrifuging, cooling the precipitate for 24-26 hours and adding physiological saline to the sediment to obtain the bacterial mass in the amount 3.5-3.7 × 10 9 CFU per 10 ml of serum, followed by incubation of the mixture at 37 ° C for 2 hours and its recovery by centrifugation for 30 minutes at 5000 rpm and adding sodium merthiolate as a preservative to the final concentration AI 1: 10000 and packaging
Результаты опыта приведены в таблицах 1-7.The results of the experiment are shown in tables 1-7.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 7 день после их сенсибилизации (таблица 1) в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами инактивированных культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:40-1:80 и 1:80-1:160, а после адсорбции - 1:20 и 1:160-320 соответственно; во второй группе до адсорбции 1:80 и 1:40, а после адсорбции - 0- 1:10 и 1:40-1:80, соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on the 7th day after their sensitization (table 1) in the first group was positive before adsorption of inactivated brucella cultures of abortus and melitensis species with antigens at a dilution of 1: 40-1: 80 and 1: 80-1: 160, and after adsorption - 1:20 and 1: 160-320, respectively; in the second group, before adsorption, 1:80 and 1:40, and after adsorption, 0-1: 10 and 1: 40-1: 80, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 14 день после их сенсибилизации (таблица 2), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами инактивированных культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160-1:2560 и 1:80-1:1280, а после адсорбции - 1:10 -1:20 и 1:160-320, соответственно; во второй группе до адсорбции 1:160-1:1280 и 1:160-1:1280, а после адсорбции - 0-1:20 и 1:80-1:160, соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on the 14th day after their sensitization (Table 2) in the first group was positive before adsorption of inactivated brucella cultures of the abortus and melitensis species in antigens at a dilution of 1: 160-1: 2560 and 1: 80-1 : 1280, and after adsorption - 1:10 -1: 20 and 1: 160-320, respectively; in the second group, before adsorption, 1: 160-1: 1280 and 1: 160-1: 1280, and after adsorption, 0-1: 20 and 1: 80-1: 160, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 21 день после их сенсибилизации (таблица 3) в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами инактивированных культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160-1:320 и 1:80-1:640, а после адсорбции - 1:10 и 1:320 соответственно; во второй группе до адсорбции 1:40-1:160 и 1:80-1:640, а после адсорбции - 1:10 и 1:320-1:640, соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on the 21st day after their sensitization (Table 3) in the first group was positive before adsorption of inactivated brucella cultures of abortus and melitensis species with antigens at a dilution of 1: 160-1: 320 and 1: 80-1: 640, and after adsorption - 1:10 and 1: 320, respectively; in the second group, before adsorption, 1: 40-1: 160 and 1: 80-1: 640, and after adsorption, 1:10 and 1: 320-1: 640, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 28 день после их сенсибилизации (таблица 4) в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами инактивированных культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 и 1:1280-1:2560, а после адсорбции - 1:10 и 1:160-1:320 соответственно; во второй группе до адсорбции 1:640-1:1280 и 1:640-1:2560, а после адсорбции - 1:10-1:20 и 1:320, соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on day 28 after their sensitization (table 4) in the first group was positive before adsorption of inactivated brucella cultures of the abortus and melitensis species in antigens at a dilution of 1: 160 and 1: 1280-1: 2560, and after adsorption - 1:10 and 1: 160-1: 320, respectively; in the second group, before adsorption, 1: 640-1: 1280 and 1: 640-1: 2560, and after adsorption, 1: 10-1: 20 and 1: 320, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 35 день после их сенсибилизации (таблица 5) в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами инактивированных культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160-1:320 и 1:1280-1:2560, а после адсорбции - 1:40-1:160 и 1:80-1:320 соответственно; во второй группе до адсорбции 1:640-1:1280 и 1:640-1:2560, а после абсорбции - 1:10 и 1:320,соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on the 35th day after their sensitization (table 5) in the first group was positive before adsorption of inactivated brucella cultures of the abortus and melitensis species in antigens at a dilution of 1: 160-1: 320 and 1: 1280-1: 2560, and after adsorption - 1: 40-1: 160 and 1: 80-1: 320, respectively; in the second group, before adsorption, 1: 640-1: 1280 and 1: 640-1: 2560, and after absorption, 1:10 and 1: 320, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 60 день после их сенсибилизации (таблица 6) в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами инактивированных культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160-1:320 и 1:1280-1:2560, а после адсорбции - 1:40-1:160 и 1:80-1:320, соответственно; во второй группе до адсорбции 1:640-1:1280 и 1:640-1:2560, а после адсорбции - 1:10 и 1:320 соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on the 60th day after their sensitization (table 6) in the first group was positive before adsorption of inactivated brucella cultures of the abortus and melitensis species in antigens at a dilution of 1: 160-1: 320 and 1: 1280-1: 2560, and after adsorption - 1: 40-1: 160 and 1: 80-1: 320, respectively; in the second group, before adsorption, 1: 640-1: 1280 and 1: 640-1: 2560, and after adsorption, 1:10 and 1: 320, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 90 день после их сенсибилизации (таблица 7) в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами инактивированных культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160-1:320 и 1:160-1:640, а после адсорбции - 1:40 и 1:80-1:160 соответственно; во второй группе до адсорбции 1:320 и 1:640, а после адсорбции - 1:20 и 1:80-1:160 соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits 90 days after their sensitization (table 7) in the first group was positive before adsorption of inactivated brucella cultures of abortus and melitensis species with antigens at a dilution of 1: 160-1: 320 and 1: 160-1: 640, and after adsorption - 1:40 and 1: 80-1: 160, respectively; in the second group, before adsorption, 1: 320 and 1: 640, and after adsorption, 1:20 and 1: 80-1: 160, respectively.
Таким образом, из приведенных данных, очевидно, что оптимальной является схема получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-melitensis, испытанная на животных второй группы, в которой использовалась однократная подкожная гипериммунизация в область подгрудка суспензией инактивированной культуры бруцелл вида melitensis в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG. Кроме эпидемической безопасности, ее преимущества заключаются в более высоких ее титрах при получении в отдаленные сроки после гипериммунизации, а значит в возможности получения значительного объема сыворотки с более высокой активностью за счет многократного (не менее 4-х раз) взятия крови.Thus, from the data presented, it is obvious that the optimal scheme is for the preparation of brucellosis monospecific anti-melitensis serum tested on animals of the second group, in which single subcutaneous hyperimmunization was applied to the breast area with a suspension of inactivated brucella melitensis culture mixed with MONTANIDE ™ ISA oil adjuvant 61 VG. In addition to epidemic safety, its advantages lie in its higher titers when received in the long term after hyperimmunization, which means that it is possible to obtain a significant volume of serum with higher activity due to repeated (at least 4 times) blood sampling.
Пример 2. Изучение диагностической активности бруцеллезных моноспецифических сывороток anti-melitensis, полученных от кроликов, гипериммунизированных по разным схемам, через 6 месяцев их хранения (таблица 8).Example 2. The study of the diagnostic activity of brucellosis monospecific anti-melitensis sera obtained from rabbits hyperimmunized according to different schemes after 6 months of storage (table 8).
Установлено, что сыворотка, полученная от кроликов по схеме, предусматривающей однократную подкожную гипериммунизацию инактивированной культурой бруцелл вида melitensis в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, сохранила свою активность (РА в разведении не ниже 1:160) в течение не менее 6 месяцев после ее получения из крови, взятой через 21, 28, 35 и 60 дней после гипериммунизации, в отличие от сыворотки, полученной при однократной внутривенной гипериммунизации живой культурой бруцелл вида melitensis без адъюванта, потерявшей активность в более ранние сроки - 28-35 дней.It was established that the serum obtained from rabbits according to the scheme providing a single subcutaneous hyperimmunization with an inactivated culture of melitensis brucella in a mixture with oil adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG, retained its activity (RA at a dilution of at least 1: 160) for at least 6 months after it was obtained from blood taken 21, 28, 35, and 60 days after hyperimmunization, in contrast to serum obtained by a single intravenous hyperimmunization with a live culture of melitensis brucella without adjuvant, which lost activity in earlier rock - 28-35 days.
Предлагаемый способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-melitensis позволяет снизить трудоемкость производственного процесса за счет подкожного введения в область подгрудка кроликам антигена, максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса за счет использования инактивированных культур бруцелл, а также брать кровь от каждого животного минимум четырехкратно, а, значит, минимум в два раза повысить количество получаемой сыворотки.The proposed method for producing brucellosis monospecific serum anti-melitensis allows to reduce the complexity of the production process due to subcutaneous administration of antigen to rabbits in the breast area, maximizes the antiepidemic safety of this process through the use of inactivated brucella cultures, and also takes blood from each animal at least fourfold, which means , at least double the amount of serum obtained.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016101290A RU2613901C1 (en) | 2016-01-18 | 2016-01-18 | Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016101290A RU2613901C1 (en) | 2016-01-18 | 2016-01-18 | Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2613901C1 true RU2613901C1 (en) | 2017-03-21 |
Family
ID=58452959
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016101290A RU2613901C1 (en) | 2016-01-18 | 2016-01-18 | Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2613901C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2104031C1 (en) * | 1995-01-11 | 1998-02-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Method of preparing monospecific sera for brucellosis pathogens differentiation |
| UA22013U (en) * | 2006-11-10 | 2007-04-10 | Nat Scient Ct Is I Of Ex And C | Method for production of positive brucellosis serum |
| CN101592661A (en) * | 2009-03-26 | 2009-12-02 | 张晓艳 | The brucellosis antibody competition enzyme-linked immunosorbent adsorption test detection kit |
| RU2549434C2 (en) * | 2013-07-30 | 2015-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) | Method for making brucellosis diagnostic serum |
-
2016
- 2016-01-18 RU RU2016101290A patent/RU2613901C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2104031C1 (en) * | 1995-01-11 | 1998-02-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Method of preparing monospecific sera for brucellosis pathogens differentiation |
| UA22013U (en) * | 2006-11-10 | 2007-04-10 | Nat Scient Ct Is I Of Ex And C | Method for production of positive brucellosis serum |
| CN101592661A (en) * | 2009-03-26 | 2009-12-02 | 张晓艳 | The brucellosis antibody competition enzyme-linked immunosorbent adsorption test detection kit |
| RU2549434C2 (en) * | 2013-07-30 | 2015-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) | Method for making brucellosis diagnostic serum |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Alton et al. | Laboratory techniques in brucellosis | |
| CN104530232A (en) | Preparation method of refined egg yolk antibody for duck viral hepatitis | |
| RU2549434C2 (en) | Method for making brucellosis diagnostic serum | |
| CN110227151A (en) | Immunogenic composition comprising mycoplasma antigen | |
| RU2613901C1 (en) | Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis | |
| RU2639127C2 (en) | Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus | |
| RU2438709C1 (en) | Serum against cattle diseases caused by viruses of infectious rhinotracheatis, paraflu, rota, corona and mucosa diarrhea-disease, polyspecific, hyperimmune, method of prevention and treatment of cattle diseases caused by viruses of infectious rhinotracheitis, parainfluenza, rota, corona and mucosa diarrhea-disease | |
| RU2659948C1 (en) | Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits | |
| Trussell | Microagglutination tests with Trichomonas vaginalis | |
| RU2361610C1 (en) | Way of reception of brucellous antigen from strain brucella abortus 19 for manufacturing of uniform brucellous antigen for aa (agglutination assay), cfr (complement fixation reaction) and lcfr (long-term complement fixation reaction), brucellous antigen for rose bengal assay (rba) and brucellous antigen for ring test (rt) with milk, way of manufacturing of brucellous diagnostic serum and diagnostic sets | |
| RU2538158C1 (en) | Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| CN107982532B (en) | Duck hepatitis A virus antigen-antibody complex vaccine and preparation method thereof | |
| IQBAL et al. | Immune response of rabbits to hemorrhagic septicemia vaccine formulations adjuvanted with montanide ISA-206, paraffin oil and alum | |
| RU2812350C1 (en) | Method of obtaining diagnostic serum against brucella in r-form | |
| RU2425148C2 (en) | Brucella abortus uf-1 strain for preparing biological preparations for diagnostics and specific prevention of brucellosis in farm animals | |
| RU2802251C1 (en) | Vaccine composition for the prevention of enzootic abortion in sheep | |
| RU2798283C1 (en) | Chlamydia vnitibp-21 chlamydia abortus strain for the production of immunobiological medicinal products | |
| RU2714305C1 (en) | Method of producing a brucellous erythrocyte antigen for the indirect hemagglutination reaction (ihar) | |
| RU2247577C2 (en) | Vaccine for specific prophylaxis of porcine chlamydiosis | |
| RU2416429C2 (en) | Method for producing antigen preparation of l-brucellas | |
| RU2457859C1 (en) | Cattle viral diarrhoeia vaccine | |
| RU2184567C1 (en) | Strain feline calicivirus used for control of immunogenic activity of vaccines, preparing specific curative-prophylaxis and diagnostic biopreparations | |
| RU2772751C1 (en) | Method for producing a hyperimmune serum against bovine adenovirus-10 in cattle | |
| RU2301682C1 (en) | Vaccine for specific prophylaxis of chlamydiosis in cattle and sheep and goats | |
| RU2708891C1 (en) | Vaccine for rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200119 |