RU2549434C2 - Method for making brucellosis diagnostic serum - Google Patents
Method for making brucellosis diagnostic serum Download PDFInfo
- Publication number
- RU2549434C2 RU2549434C2 RU2013135895/15A RU2013135895A RU2549434C2 RU 2549434 C2 RU2549434 C2 RU 2549434C2 RU 2013135895/15 A RU2013135895/15 A RU 2013135895/15A RU 2013135895 A RU2013135895 A RU 2013135895A RU 2549434 C2 RU2549434 C2 RU 2549434C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- serum
- brucellosis
- abortus
- blood
- antigen
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к ветеринарии, к диагностике инфекционных болезней, а именно бруцеллеза.The invention relates to veterinary medicine, to the diagnosis of infectious diseases, namely brucellosis.
Бруцеллез - инфекционная, хронически протекающая болезнь животных и человека.Brucellosis is an infectious, chronically occurring disease of animals and humans.
В массовой диагностике этой болезни у разных видов животных используют различные серологические реакции с антигенами, полученными из типичных бруцелл, находящихся в S-форме.In the mass diagnosis of this disease in different animal species, various serological reactions are used with antigens derived from typical S-form brucellas.
При этом в качестве контроля при исследовании сывороток крови, поступающих от животных в диагностические ветеринарные лаборатории, используют отрицательные и позитивные сыворотки крови.At the same time, negative and positive blood serums are used as a control in the study of blood sera from animals to diagnostic veterinary laboratories.
Позитивная бруцеллезная сыворотка, таким образом, необходима в массовой серологической диагностике бруцеллеза у разных видов животных в качестве контрольной при исследовании сывороток крови с целью выявления в РА, РСК и других реакциях антител к типичным бруцеллам, находящимся в S-форме.Thus, positive brucellosis serum is required in mass serological diagnosis of brucellosis in different animal species as a control in the study of blood serum in order to detect antibodies to typical brucella in S form in RA, CSC and other reactions.
Кроме того, S-бруцеллезную сыворотку применяют в бактериологической диагностике бруцеллеза при идентификации и дифференциации выделенных культур бруцелл в пластинчатой реакции агглютинации.In addition, S-brucellosis serum is used in the bacteriological diagnosis of brucellosis in the identification and differentiation of isolated brucella cultures in a plate agglutination reaction.
В качестве S-бруцеллезной сыворотки используют сыворотку крови, полученную от животного, сенсибилизированного типичными бруцеллами, с высоким уровнем содержания в ней антител к ним.As S-brucellosis serum, blood serum obtained from an animal sensitized with typical brucella with a high level of antibody thereto is used.
В литературе известен принцип получения S-бруцеллезной диагностической сыворотки, основанный на гипериммунизации животных-доноров (кролики, крупный рогатый скот и др.) по определенной схеме, преследующей достижение высокого уровня антител (Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним / под ред. Т.С. Сайдулдина. - Алматы, 2007. - 433 с.).In the literature, the principle of obtaining S-brucellosis diagnostic serum is known, based on hyperimmunization of animal donors (rabbits, cattle, etc.) according to a certain scheme that pursues the achievement of a high level of antibodies (Ivanov N.P. Brucellosis of animals and measures to combat it / under the editorship of T.S. Saiduldin. - Almaty, 2007 .-- 433 p.).
Максимально высокого уровня антител в сыворотке крови можно достичь за счет многократной гипериммунизации животных-продуцентов культурами вирулентных бруцелл. Так, известен способ получения диагностической бруцеллезной агглютинирующей сыворотки, заключающийся в гипериммунизации кроликов-продуцентов живыми вирулентными клетками В.abortus 146 и B.melitensis И-297. Животным вводят подкожно трехкратно в четыре точки спины вдоль позвоночника 0,5, 0,75 и 1,0 мл смеси в равных количествах культур с равным объемом полного адъюванта Фрейнда с недельным интервалом. Через две недели после завершающей инъекции антигена вводят подкожно в область внутренней верхней трети поверхности бедра 1,0 мл смеси культур в 0,85%-ном растворе натрия хлорида. Через 14 дней после окончания иммунизации кроликов тотально обескровливают. Сыворотку инактивируют нагреванием и консервируют [RU 2005781 C1, 15.01.1994].The maximum high level of antibodies in the blood serum can be achieved by repeated hyperimmunization of animal producers with virulent brucella cultures. Thus, there is a known method for producing diagnostic brucellosis agglutinating serum, which consists in hyperimmunization of producer rabbits with live virulent cells of B. abortus 146 and B. melitensis I-297. Animals are injected subcutaneously three times at four points of the back along the spine with 0.5, 0.75 and 1.0 ml of the mixture in equal amounts of cultures with an equal volume of Freund's complete adjuvant with a weekly interval. Two weeks after the final injection of antigen, subcutaneously injected into the region of the inner upper third of the thigh surface 1.0 ml of a mixture of cultures in a 0.85% solution of sodium chloride. 14 days after the end of immunization, rabbits are totally bled. Serum is inactivated by heating and canned [RU 2005781 C1, 01/15/1994].
Известен способ получения поливалентной диагностической бруцеллезной сыворотки, заключающийся в гипериммунизации быков-продуцентов взвесью культур бруцелл - В.abortus 544, B.melitensis 16-М и B.suis 1330, инактивированной нагреванием при температуре 60°C в течение 2 часов с последующим добавлением карболовой кислоты и выдерживанием при 37°C - 48 часов. Вначале проводят грунд-иммунизацию животных путем однократного введения 10 мл бруцеллезного антигена подкожно и через 1 месяц начинают реиммунизацию в 2-4 цикла с интервалами 20-30 суток. В течение одного цикла проводят 5 ежедневных инъекций антигена с объемами 10, 15, 20, 30, 40 мл. [Сыворотка диагностическая бруцеллезная агглютинирующая. ТУ-316-82 от 01.06.1982, утв. ГУ по производству бактерийных и вирусных препаратов МЗ СССР].A known method of obtaining a multivalent diagnostic brucellosis serum, which consists in hyperimmunization of bulls with a suspension of brucella cultures - B. abortus 544, B.melitensis 16-M and B.suis 1330, inactivated by heating at a temperature of 60 ° C for 2 hours, followed by the addition of carbolic acid and aging at 37 ° C for 48 hours. Initially, animal immunization is carried out by administration of a single dose of 10 ml of brucellosis antigen subcutaneously and after 1 month they begin immunization in 2-4 cycles at intervals of 20-30 days. During one cycle, 5 daily injections of antigen are carried out with volumes of 10, 15, 20, 30, 40 ml. [Serum diagnostic brucellosis agglutinating. TU-316-82 from 06/01/1982, approved. GU for the production of bacterial and viral preparations of the Ministry of Health of the USSR].
Недостатками обоих способов являются высокая себестоимость конечного продукта за счет длительности и трудоемкости процесса его получения, а также эпидемическая опасность, связанная с использованием в процессе производства живых вирулентных культур бруцелл. Даже использование во втором способе для гипериммунизации животных взвеси инактивированных вирулентных бруцелл не исключает эпидемическую опасность, так как предварительно осуществляется работа с живыми вирулентными бруцеллами.The disadvantages of both methods are the high cost of the final product due to the length and complexity of the process of obtaining it, as well as the epidemic danger associated with the use of live virulent cultures of brucella in the production process. Even the use in suspension of inactivated virulent brucella suspensions in the second method for animal hyperimmunization does not exclude an epidemic danger, since work with live virulent brucellas is carried out previously.
Одним из актуальных моментов является использование в процессе получения сывороток вакцинных штаммов бруцелл, причем не видов melitensis и suis, а только вида abortus, обладающего наименьшей остаточной вирулентностью.One of the important points is the use of vaccine strains of Brucella in the process of obtaining sera, not of melitensis and suis species, but only of the abortus species, which has the least residual virulence.
Такая принципиальная возможность для получения эффективной бруцеллезной сыворотки для использования в серологической диагностике болезни, вызываемой любыми видами бруцелл в S-форме, существует благодаря объективным доказательствам их антигенного родства.Such a fundamental possibility for obtaining effective brucellosis serum for use in the serological diagnosis of the disease caused by any type of brucella in the S-form exists due to objective evidence of their antigenic relationship.
Наиболее близким техническим результатом является способ изготовления диагностической бруцеллезной сыворотки (патент RU №2361610 C1 от 20.07.2009 «Способ получения бруцеллезного антигена из штамма Brucella abortus 19 изготовления единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК, бруцеллезного антигена для роз - бенгал пробы (РБП) и бруцеллезного антигена для кольцевой реакции (КР) с молоком, способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки и диагностические наборы»), заключающийся в гипериммунизации животных-продуцентов подкожно в области средней трети шеи антигеном из штамма В.abortus 19 по следующей схеме: 1-й день вводят 5 мм3 антигена (75 млрд м.к.), 10-й день вводят 8 мм3 (120 млрд м.к.), 20-21-й день вводят 10 мм3 (150 млрд м.к.), на 27-28-й день проводят пробное взятие крови, а на 30-31-й день осуществляют производственное кровопускание. Кровь выдерживают при температуре 37-38°C в течение 2-3 часов, а затем помещают в холодильник при 2-8°C на 3-5 суток, после чего отделяют сыворотку. Полученную сыворотку консервируют добавлением 4%-ной сухой борной кислоты, после чего прогревают в водяной бане при температуре 54-56°C в течение 40 минут при постоянном перемешивании, а затем помещают в холодильник при температуре 2-8°C на 10 суток. Сыворотка должна быть стерильной, иметь титр в РА не ниже 1000 ME, а в РСК - не ниже 1:20. Сыворотку расфасовывают и проверяют на активность и специфичность.The closest technical result is a method for the production of diagnostic brucellosis serum (patent RU No. 2361610 C1 dated 07/20/2009 “Method for producing brucellosis antigen from strain Brucella abortus 19 for the manufacture of a single brucellosis antigen for RA, RSK and RDSK, brucellosis antigen for roses - Bengal samples (RBP ) and brucellosis antigen for a ring reaction (CR) with milk, a method for the manufacture of brucellosis diagnostic serum and diagnostic kits "), which consists in hyperimmunization of animal producers subcutaneously in the area with edney third neck V.abortus antigen from strain 19 in the following way: Day 1 3 5 mm administered antigen (75 billion MK), the 10th day administered 8 mm 3 (120 billion MK), 20 On the 21st day, 10 mm 3 (150 billion m.k.) is administered, on the 27-28th day a test blood sample is taken, and on the 30-31st day, bloodletting is performed. Blood is kept at a temperature of 37-38 ° C for 2-3 hours, and then placed in a refrigerator at 2-8 ° C for 3-5 days, after which the serum is separated. The resulting serum is preserved by adding 4% dry boric acid, and then heated in a water bath at a temperature of 54-56 ° C for 40 minutes with constant stirring, and then placed in a refrigerator at a temperature of 2-8 ° C for 10 days. Serum must be sterile, have a titer in RA of not less than 1000 ME, and in CSC - not less than 1:20. Serum is packaged and checked for activity and specificity.
Недостатком этого способа является длительность, трудоемкость процесса, эпидемическая опасность, связанная с использованием живой культуры бруцелл.The disadvantage of this method is the duration, the complexity of the process, the epidemic danger associated with the use of a live culture of brucella.
Техническим результатом способа изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки является снижение трудоемкости процесса ее изготовления и эпидемической опасности.The technical result of the method of manufacturing brucellosis diagnostic serum is to reduce the complexity of the manufacturing process and the epidemic danger.
Техническое решение достигается тем, что способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки включает гипериммунизацию животным-продуцентам подкожно бруцеллезного антигена штамма В.abortus 19, сыворотку отделяют, консервируют и расфасовывают, проверяют на стерильность, активность и специфичность, сыворотка должна иметь титр в РА не ниже 1000 ME, а РСК не ниже 1:20, однократно вводят животным-продуцентам в область подгрудка суспензию в объеме 5 мл, представляющую смесь бруцеллезного антигена (100 млрд м.к. убитой культуры штамма В.abortus 19) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, на 18-20-й день проводят пробное крововзятие, а на 24-30-й день осуществляют двукратное взятие крови или осуществляют производственное кровопускание.The technical solution is achieved by the fact that the method of manufacturing brucellosis diagnostic serum involves hyperimmunization of animal producers of subcutaneous brucellosis antigen of strain B. abortus 19, the serum is separated, preserved and packaged, checked for sterility, activity and specificity, the serum must have a titer in RA of at least 1000 ME and the CSC is not lower than 1:20, a suspension in a volume of 5 ml, which is a mixture of brucellosis antigen (100 billion cubic meters of the killed culture of strain B. abortus 19) with hell, is injected once into the producer animals once with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant, on a day 18-20 they carry out test blood sampling, and on day 24-30 they carry out double blood sampling or perform bloodletting.
Предлагаемый способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки, позволяет снизить трудоемкость процесса изготовления сыворотки, а также максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса за счет гипериммунизации животных-продуцентов убитой культуры вакцинного штамма В.abortus 19 в сочетании с адъювантом, позволяющим стимулировать получение высоких титров антител даже при однократной гипериммунизации и брать кровь от животного-продуцента двукратно или осуществлять производственное кровопускание в течение с 24 по 30 день после гипериммунизации.The proposed method for the production of brucellosis diagnostic serum allows to reduce the complexity of the serum manufacturing process, as well as maximize the anti-epidemic safety of this process due to the hyperimmunization of animal producers of the killed culture of the vaccine strain B. abortus 19 in combination with adjuvant, which allows to stimulate the production of high titers of antibodies even with a single hyperimmunization and to take blood from an animal producer twice or to carry out industrial bloodletting during e from 24 to 30 days after hyperimmunization.
В качестве адъюванта применяли французский препарат MONTANIDE™ ISA 61 VG, производитель - фирма «SEPPIC». Готовый к использованию масляный адъювант для ветеринарных вакцин для производства эмульсий «вода в масле» содержит особое обогащенное светлое минеральное масло и высокоочищенное ПАВ, полученное из маннитола и очищенной олеиновой кислоты растительного происхождения. MONTANIDE™ ISA 61 VG не содержит компонентов животного происхождения. Рецептуры вакцин с MONTANIDE™ ISA 61 VG вызывают сильный и продолжительный иммунный ответ. По сравнению с традиционными масляными эмульсиями суспензия с MONTANIDE™ ISA 61 VG является устойчивой, стабильной и легко вводимой. Для приготовления 100 г вакцины обычно необходимо: MONTANIDE™ ISA 61 VG - 60 г и водной антигенной среды - 40 г. Стабильные эмульсии получаются путем смешивания водной среды в MONTANIDE™ ISA 61 VG, при комнатной температуре или ниже, при интенсивном перемешивании.French adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG was used as an adjuvant, manufactured by SEPPIC. The ready-to-use oil adjuvant for veterinary vaccines for the production of water-in-oil emulsions contains a special enriched light mineral oil and highly purified surfactant obtained from mannitol and purified plant-derived oleic acid. MONTANIDE ™ ISA 61 VG does not contain animal components. MONTANIDE ™ ISA 61 VG vaccine formulations elicit a strong and sustained immune response. Compared to traditional oil emulsions, the suspension with MONTANIDE ™ ISA 61 VG is stable, stable and easy to administer. To prepare 100 g of vaccine, it is usually necessary: MONTANIDE ™ ISA 61 VG - 60 g and aqueous antigenic medium - 40 g. Stable emulsions are obtained by mixing the aqueous medium in MONTANIDE ™ ISA 61 VG, at room temperature or lower, with vigorous stirring.
В качестве животных-продуцентов использовали, например, быков.As animal producers used, for example, bulls.
Заявленный результат достигается следующим путем: каждому здоровому быку-продуценту в возрасте 1,5-2 лет после предварительного исследования их на бруцеллез вводят однократно подкожно в области подгрудка суспензию в объеме 5 мл, представляющую собой смесь антигена (100 млрд м.к, убитой культуры штамма B.abortus 19) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG.The claimed result is achieved in the following way: after a preliminary study, they are injected into a healthy bovine bull 1.5–2 years old for brucellosis once subcutaneously in the chest area with a suspension of 5 ml, which is a mixture of antigen (100 billion cubic meters, killed culture B.abortus strain 19) with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant.
Сначала готовят антиген. Штамм В.abortus 19, используемый для приготовления антигена, по своим свойствам должен отвечать паспортным данным, описанным при изготовлении вакцины. Штамм В.abortus 19 высевают на одну из питательных сред эритритагар, среда Белобаба, МППГГА. После 3-4-суточного роста бактериальную массу шт. 19 смывают с ее поверхности фенолизированным физиологическим раствором. Полученную взвесь бруцелл доводят до концентрации 300-400 млрд микробных тел в 1,0 см3 по бруцеллезному стандарту мутности, сливают через двойной марлевый фильтр в колбы и прогревают на водяной бане при температуре 80°C в течение 60 минут, помешивая через каждые 5 минут. Затем ее проверяют на чистоту, стерильность путем засева на питательные среды (Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним / под ред. Т.С. Сайдулдина. - Алматы, 2007. - 433 с.).First prepare the antigen. The strain B. abortus 19 used to prepare the antigen, according to its properties, must meet the passport data described in the manufacture of the vaccine. The strain B. abortus 19 is sown on one of the nutrient media of erythritol, Belobab medium, MPPGA. After 3-4-day growth, the bacterial mass of pcs. 19 is washed off its surface with phenolized saline. The resulting suspension of brucella was adjusted to a concentration of 300-400 billion microbial bodies in 1.0 cm 3 according to the brucellosis standard of turbidity, poured through a double gauze filter into flasks and heated in a water bath at 80 ° C for 60 minutes, stirring every 5 minutes . Then it is checked for cleanliness, sterility by seeding on nutrient media (Ivanov N.P. Brucellosis of animals and measures to combat it / under the editorship of TS Sayduldin. - Almaty, 2007. - 433 p.).
Взвесь штамма В.abortus 19, используемая в качестве антигена, должна быть стерильной.Suspension of strain B. abortus 19, used as antigen, must be sterile.
При комнатной температуре интенсивно перемешивают на магнитной мешалке взвесь убитой культуры вакцинного штамма В.abortus 19 с добавлением адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG в соотношении 40 и 60% соответственно, т.е. для приготовления 100 мл суспензии необходимо 40 мл взвеси и 60 мл адъюванта. Быкам-продуцентам однократно вводят 5 мл суспензии, представляющей собой смесь антигена (100 млрд м.к. убитой культуры штамма В.abortus 19) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG. На 18-20-й день проводят пробное крововзятие, а с 24 по 30 день, если достаточен уровень антител титр в РА не ниже 1000 ME, в РСК не ниже 1:20, осуществляют двукратное взятие крови из расчета 16-20 мл крови на 1 кг живой массы или производственное кровопускание. Сыворотку получают следующим образом: кровь от каждого быка-продуцента берут из яремной вены с соблюдением правил асептики и антисептики в отдельную стерильную емкость. После крововзятия емкость с кровью ставят в термостат при 37°C на 3-4 часа для отделения сыворотки, затем помещают в холодильник при 2-8°C на 2-е суток. Сыворотку от каждого быка-продуцента сливают отдельно в стерильные сосуды и консервируют 4%-ной сухой борной кислотой, после чего прогревают в водяной бане при температуре 50°C в течение 40 минут при постоянном перемешивании, затем ставят на 10 дней в холодильник при температуре 2-8°C.At room temperature, a suspension of the killed culture of the vaccine strain B. abortus 19 with the addition of MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant in the ratio of 40 and 60%, respectively, is intensively stirred on a magnetic stirrer, i.e. for the preparation of 100 ml of suspension, 40 ml of suspension and 60 ml of adjuvant are necessary. Bulls-producers are once injected with 5 ml of a suspension, which is a mixture of antigen (100 billion mk of the killed culture of strain B. abortus 19) with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG. Blood sampling is carried out on day 18-20, and from day 24 to 30, if the antibody level is sufficient titer in RA of not less than 1000 ME, in CSC not less than 1:20, double blood sampling is performed at the rate of 16-20 ml of blood per 1 kg of live weight or industrial bloodletting. Serum is obtained as follows: blood from each producing bull is taken from the jugular vein in compliance with the rules of asepsis and antiseptics in a separate sterile container. After blood collection, the blood vessel is placed in a thermostat at 37 ° C for 3-4 hours to separate the serum, then placed in a refrigerator at 2-8 ° C for 2 days. The serum from each producer bull is poured separately into sterile vessels and preserved with 4% dry boric acid, and then heated in a water bath at a temperature of 50 ° C for 40 minutes with constant stirring, then put in a refrigerator for 10 days at a temperature of 2 -8 ° C.
Пробу сыворотки крови из каждой емкости подвергают проверке на стерильность путем высевов на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро и на активность в РА, РСК, РБП.A blood serum sample from each container is tested for sterility by plating on MPA, MPB, MPPB under paraffin oil and Saburo medium and on activity in RA, RSK, RBP.
При условии стерильности и получении положительных результатов серологических реакций сыворотку смешивают в одну емкость для составления серии и расфасовывают.Under the condition of sterility and obtaining positive results of serological reactions, the serum is mixed in one container to make a series and packaged.
Предлагаемый способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки позволяет снизить трудоемкость процесса изготовления сыворотки, а также максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса и брать кровь от каждого животного двукратно или осуществляют производственное кровопускание с 24-30 день после гипериммунизации.The proposed method for the production of brucellosis diagnostic serum can reduce the complexity of the serum manufacturing process, as well as maximize the anti-epidemic safety of this process and take blood from each animal twice or perform bloodletting from 24-30 days after hyperimmunization.
Пример 1. Определение оптимальной схемы гипериммунизации животных-продуцентов для получения руцеллезной диагностической сыворотки.Example 1. Determination of the optimal hyperimmunization regimen of animal producers for the production of diagnostic testosterone serum.
В целях определения птимальной схемы гипериммунизации животных для получения бруцеллезной диагностической сыворотки для изучения были использованы схемы гипериммунизации животных (табл.1). Для этого сформировали 4 группы по 3 головы здоровых животных, предварительно исследованных на бруцеллез с отрицательными результатами и гипериммунизировали подкожным введением (п/к):In order to determine the optimal scheme for hyperimmunization of animals to obtain brucellosis diagnostic serum for study, we used the schemes of hyperimmunization of animals (Table 1). For this, 4 groups of 3 heads of healthy animals were formed, previously tested for brucellosis with negative results and hyperimmunized by subcutaneous administration (s / c):
1-я группа - живой культурой В.abortus 19 в дозах 75, 120 и 150 млрд м.к. с интервалом 10 дней.Group 1 - a live culture of B. abortus 19 in doses of 75, 120 and 150 billion m.k. with an interval of 10 days.
2-я группа - живой культурой бруцелл В.abortus 19 в дозах 50, 100 и 100 млрд м.к. с интервалом 10 дней.Group 2 - a live culture of B. abortus 19 brucella in doses of 50, 100 and 100 billion m.k. with an interval of 10 days.
3-я группа - однократно 5 мл суспензии - смесь антигена (50 млрд м.к убитой культуры В.abortus 19) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG.3rd group - once 5 ml of suspension - a mixture of antigen (50 billion m.k. killed culture of B. abortus 19) with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG.
4-я группа - однократно 5 мл суспензии - смесь антигена (100 млрд м.к. убитой культуры В.abortus 19) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG.4th group - once 5 ml of suspension - a mixture of antigen (100 billion m.k. of killed culture of B. abortus 19) with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG.
По результатам изучения оптимальной схемой гипериммунизации признана схема №4. При ее применении высокие титры антител практически не уступали таковым при использовании схемы №1 как на 20-й, так и на 30-й день после первого введения антигена. Однако при схеме №1 предусмотрено трехкратное использование больших доз живой культуры бруцелл, а при схеме №4 - лишь однократное введение 5 мл суспензии, представляющей смесь антигена (100 млрд м.к. убитой вакцинной культуры В.abortus 19) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG.According to the results of the study, the optimal scheme for hyperimmunization was recognized as scheme No. 4. With its use, high antibody titers were practically not inferior to those when using scheme No. 1 on both the 20th and 30th days after the first administration of antigen. However, with Scheme No. 1, large doses of large doses of live brucella culture are used, and with Scheme No. 4, only a single injection of 5 ml of a suspension representing a mixture of antigen (100 billion m.c. of killed B. abortus 19 vaccine culture) with MONTANIDE ™ ISA adjuvant 61 VG.
ME1600
ME
Пример 2. Изучение диагностической активности сывороток, полученных от быков-продуцентов, гипериммунизированных по разным схемам, через 6 месяцев их храненияExample 2. The study of the diagnostic activity of sera obtained from bulls, hyperimmunized according to different schemes, after 6 months of storage
В сыворотках крови, полученных от быков-продуцентов, гипериммунизированных по разным схемам, определяли средние титры антител через 6 месяцев их хранения в сравнении со средними титрами антител через 30 дней после первого введения антигена (табл.2.).In the blood serum obtained from producer bulls hyperimmunized according to different schemes, the average titers of antibodies after 6 months of their storage were determined in comparison with the average titers of antibodies 30 days after the first injection of antigen (Table 2.).
Установлено, что средние титры антител у быков-продуцентов по схеме №4, предусматривающей лишь однократное введение 5 мл суспензии, представляющей смесь 100 млрд м.к. убитой вакцинной культуры В.abortus 19 с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, через 6 месяцев хранения сывороток не изменились и остались на высоком уровне (РА - 1166,7 ME и РСК 1:80). У животных, гипериммунизированных по трем остальным схемам (№№1-3), титры снизились.It was found that the average titers of antibodies in producing bulls according to scheme No. 4, which provides for only a single injection of 5 ml of a suspension, representing a mixture of 100 billion cubic meters killed vaccine culture of B. abortus 19 with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG, after 6 months of storage of sera did not change and remained at a high level (RA - 1166.7 ME and RSK 1:80). In animals hyperimmunized according to the other three schemes (Nos. 1-3), titers decreased.
Таким образом, самым эффективным оказался способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки по схеме №4. Предлагаемая схема предусматривает однократное введение 5 мл суспензии, представляющей смесь 100 млрд м.к. убитой культуры вакцинного штамма Brucella abortus 19 с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, позволяет решить задачу усовершенствования способа получения активной диагностической бруцеллезной сыворотки, по пути его упрощения и повышения гарантий противоэпидемической безопасности.Thus, the most effective was the method of manufacturing brucellosis diagnostic serum according to scheme No. 4. The proposed scheme provides for a single injection of 5 ml of a suspension representing a mixture of 100 billion mk killed culture of the vaccine strain Brucella abortus 19 with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG, allows you to solve the problem of improving the method of obtaining active diagnostic brucellosis serum, in the way of its simplification and increase guarantees of anti-epidemic safety.
ЛитератураLiterature
1. Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним. - Алматы, 2007. - 611 с.1. Ivanov N.P. Animal brucellosis and measures to combat it. - Almaty, 2007 .-- 611 p.
2. Сыворотка диагностическая бруцеллезная аггютинирующая. ТУ-316-82 от 01.06.1982, утв. ГУ по производству бактериальных и вирусных препаратов МЗ СССР.2. Serum diagnostic brucellosis agglutinating. TU-316-82 from 06/01/1982, approved. State institution for the production of bacterial and viral preparations of the Ministry of Health of the USSR.
3. RU 2005781 C1, 15.01.1994. Штамм бактерий Brucella melitensis биовара I, используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки к бруцеллам.3. RU 2005781 C1, 01/15/1994. The bacterial strain Brucella melitensis biovar I, used to obtain multivalent hyperimmune serum to brucella.
4. RU №2361610 C1, 20.07.2009 «Способ получения бруцеллезного антигена из штамма Brucella abortus 19 изготовления единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК, бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП) и бруцеллезного антигена для кольцевой реакции (КР) с молоком, способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки и диагностические наборы».4. RU No. 2361610 C1, July 20, 2009 “A method for producing a brucellosis antigen from Brucella abortus 19 strain for the manufacture of a single brucellosis antigen for RA, RSK and RDSK, brucellosis antigen for rose bengal test (RBP) and brucellosis antigen for the ring reaction (KR) with milk, a method of manufacturing brucellosis diagnostic serum and diagnostic kits. "
5. Технический бюллетень MONTANIDE™ ISA 61 VG.5. MONTANIDE ™ ISA 61 VG Technical Bulletin.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013135895/15A RU2549434C2 (en) | 2013-07-30 | 2013-07-30 | Method for making brucellosis diagnostic serum |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013135895/15A RU2549434C2 (en) | 2013-07-30 | 2013-07-30 | Method for making brucellosis diagnostic serum |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013135895A RU2013135895A (en) | 2015-02-10 |
| RU2549434C2 true RU2549434C2 (en) | 2015-04-27 |
Family
ID=53281600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013135895/15A RU2549434C2 (en) | 2013-07-30 | 2013-07-30 | Method for making brucellosis diagnostic serum |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2549434C2 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2613901C1 (en) * | 2016-01-18 | 2017-03-21 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных" (ФГБНУ ВНИИБТЖ) | Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis |
| RU2639127C2 (en) * | 2016-04-22 | 2017-12-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных" (ФГБНУ ВНИИБТЖ) | Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus |
| RU2659948C1 (en) * | 2017-03-14 | 2018-07-04 | Федеральное государственное бюджетное научноеучреждение "Омский аграрный научный центр" (ФГБНУ "Омский АНЦ") | Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2010577C1 (en) * | 1991-07-09 | 1994-04-15 | Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока | Method for preparation of diagnostic serum |
| RU2361610C1 (en) * | 2008-03-20 | 2009-07-20 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Way of reception of brucellous antigen from strain brucella abortus 19 for manufacturing of uniform brucellous antigen for aa (agglutination assay), cfr (complement fixation reaction) and lcfr (long-term complement fixation reaction), brucellous antigen for rose bengal assay (rba) and brucellous antigen for ring test (rt) with milk, way of manufacturing of brucellous diagnostic serum and diagnostic sets |
-
2013
- 2013-07-30 RU RU2013135895/15A patent/RU2549434C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2010577C1 (en) * | 1991-07-09 | 1994-04-15 | Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока | Method for preparation of diagnostic serum |
| RU2361610C1 (en) * | 2008-03-20 | 2009-07-20 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Way of reception of brucellous antigen from strain brucella abortus 19 for manufacturing of uniform brucellous antigen for aa (agglutination assay), cfr (complement fixation reaction) and lcfr (long-term complement fixation reaction), brucellous antigen for rose bengal assay (rba) and brucellous antigen for ring test (rt) with milk, way of manufacturing of brucellous diagnostic serum and diagnostic sets |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2613901C1 (en) * | 2016-01-18 | 2017-03-21 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных" (ФГБНУ ВНИИБТЖ) | Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis |
| RU2639127C2 (en) * | 2016-04-22 | 2017-12-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных" (ФГБНУ ВНИИБТЖ) | Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus |
| RU2659948C1 (en) * | 2017-03-14 | 2018-07-04 | Федеральное государственное бюджетное научноеучреждение "Омский аграрный научный центр" (ФГБНУ "Омский АНЦ") | Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013135895A (en) | 2015-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102908615B (en) | Novel haemophilus parasuis disease trivalent inactivated vaccine and preparation method thereof | |
| CN107177001B (en) | Egg yolk antibody for preventing and treating porcine epidemic diarrhea and preparation method thereof | |
| CN104530232A (en) | Preparation method of refined egg yolk antibody for duck viral hepatitis | |
| RU2549434C2 (en) | Method for making brucellosis diagnostic serum | |
| EP0100710B1 (en) | Vaccine for the immunization of animals and men against toxoplasma gondii | |
| RU2361610C1 (en) | Way of reception of brucellous antigen from strain brucella abortus 19 for manufacturing of uniform brucellous antigen for aa (agglutination assay), cfr (complement fixation reaction) and lcfr (long-term complement fixation reaction), brucellous antigen for rose bengal assay (rba) and brucellous antigen for ring test (rt) with milk, way of manufacturing of brucellous diagnostic serum and diagnostic sets | |
| RU2432174C1 (en) | Method for producing colibacillosis anatoxin | |
| RU2613901C1 (en) | Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis | |
| RU2538158C1 (en) | Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| RU2639127C2 (en) | Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus | |
| IQBAL et al. | Immune response of rabbits to hemorrhagic septicemia vaccine formulations adjuvanted with montanide ISA-206, paraffin oil and alum | |
| RU2659948C1 (en) | Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits | |
| RU2184567C1 (en) | Strain feline calicivirus used for control of immunogenic activity of vaccines, preparing specific curative-prophylaxis and diagnostic biopreparations | |
| RU2814593C1 (en) | Method of preventing escherichiosis in calves | |
| RU2772751C1 (en) | Method for producing a hyperimmune serum against bovine adenovirus-10 in cattle | |
| NZ199561A (en) | Vaccine against enzootic abortion in ewes | |
| RU2297452C2 (en) | Asia-1-type foot-and-mouth disease virus strain for producing of diagnostic and/or vaccine preparations | |
| CN109453371A (en) | A kind of sheep pox, goats contagious pleuropneumonia bivalent inactivated vaccine and its production method | |
| RU2812350C1 (en) | Method of obtaining diagnostic serum against brucella in r-form | |
| RU2813771C1 (en) | Method of preventing escherichiosis in calves | |
| CN117024577A (en) | A-type sai-kava virus positive serum and preparation method and application thereof | |
| RU2147892C1 (en) | Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease | |
| RU2813752C1 (en) | Method of producing aluminum hydroxide oil vaccine against escherichiosis in calves and piglets | |
| RU2802251C1 (en) | Vaccine composition for the prevention of enzootic abortion in sheep | |
| RU2708891C1 (en) | Vaccine for rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180731 |