RU2639127C2 - Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus - Google Patents
Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus Download PDFInfo
- Publication number
- RU2639127C2 RU2639127C2 RU2016115897A RU2016115897A RU2639127C2 RU 2639127 C2 RU2639127 C2 RU 2639127C2 RU 2016115897 A RU2016115897 A RU 2016115897A RU 2016115897 A RU2016115897 A RU 2016115897A RU 2639127 C2 RU2639127 C2 RU 2639127C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- abortus
- serum
- adsorption
- strain
- rabbits
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к ветеринарии, к диагностике инфекционных болезней, а именно к дифференциации возбудителей бруцеллеза.The invention relates to veterinary medicine, to the diagnosis of infectious diseases, namely to the differentiation of pathogens of brucellosis.
Бруцеллез - инфекционная болезнь животных, представляющая большую опасность как для животных, так и для людей.Brucellosis is an infectious animal disease that poses a great danger to both animals and humans.
Существуют различные виды возбудители бруцеллеза. Среди сельскохозяйственных животных наиболее распространены бруцеллы видов abortus и melitensis, опасные как для животных, так и людей.There are various types of pathogens of brucellosis. Among farm animals, the most common brucella species are abortus and melitensis, which are dangerous for both animals and humans.
Принципиально важно, в случае возникновения вспышки бруцеллеза, объективно установить вид возбудителя, так как от этого существенно зависит выбор оптимальной схемы противобруцеллезных мероприятий.It is fundamentally important, in the event of an outbreak of brucellosis, to objectively establish the type of pathogen, since the choice of the optimal scheme of anti-brucellosis measures depends on it.
Известно, что для дифференциации возбудителей бруцеллеза в бактериологической диагностике в качестве одного из основных методов используют антивидовые моноспецифические бруцеллезные сыворотки. От уровня их чувствительности зависит надежность видовой дифференциации бруцелл. Кроме того, практически важны простота и безопасность их получения.It is known that for the differentiation of pathogens of brucellosis in bacteriological diagnostics, as one of the main methods, antispecific monospecific brucellosis serums are used. The reliability of the species differentiation of brucella depends on the level of their sensitivity. In addition, the simplicity and safety of their preparation are practically important.
Известен принцип получения бруцеллезных моноспецифических (монорецепторных) антивидовых диагностических сывороток по определенной схеме, целью которого является достижение высокого уровня антител за счет многократной гипериммунизации животных-продуцентов (кроликов) культурами вирулентных штаммов бруцелл, с последующей адсорбцией полученных сывороток взвесью бруцелл гетерологичного вида для удаления общих для них антител (Вершилова П.А. Биохимическая и серологическая дифференциация группы Brucella и ее значение в эпидемиологии // Архив биологических наук, 35, сер. Б, 2. М., 1934; Кириллов Л.В. Получение монорецепторных сывороток // Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты. М., 1963. С. 366-371; Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним. / Под ред. Т.С. Сайдулдина. - Алматы, 2007. - 433 с.).There is a known principle for producing brucellosis monospecific (monoreceptor) antiviral diagnostic sera according to a certain scheme, the purpose of which is to achieve a high level of antibodies due to repeated hyperimmunization of animal producers (rabbits) with cultures of virulent brucella strains, followed by adsorption of the obtained sera by a suspension of brucella of a heterologous species for removal antibodies (Vershilova P.A. Biochemical and serological differentiation of the Brucella group and its significance in epidemiology // Archi in biological sciences, 35, ser. B, 2. M., 1934; Kirillov L.V. Production of monoreceptor sera // Biological and chemotherapeutic veterinary preparations. M., 1963. S. 366-371; Ivanov NP Brucellosis animals and measures to combat it./Under the editorship of TS Sayduldin. - Almaty, 2007. - 433 p.).
Недостатками этого принципа получения бруцеллезных моноспецифических как М-, так и А-сывороток являются высокая себестоимость конечного продукта за счет получения сыворотки только при однократном взятии крови, а также эпидемическая опасность, связанная с использованием в процессе производства живых штаммов бруцелл.The disadvantages of this principle of obtaining brucellosis monospecific both M- and A-serums are the high cost of the final product due to the production of serum only with a single blood draw, as well as the epidemic danger associated with the use of live brucella strains in the production process.
Наиболее близким техническим результатом является способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus (Патент RU №2375074 (13) С1 от 30.06.2008, А61К 39/00). Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus включает внутривенную иммунизацию кроликов разовой дозой в объеме 1 мл смесью (1:1) из взвеси вакцинного штамма В. abortus 19 ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к. (микробных клеток)/мл, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к./мл, обескровливание животных, инактивацию сыворотки при 60-65°С в течение 1-1,5 ч, для перекрестной абсорбции используют бакмассу штамма В. melitensis 548, с последующей инкубацией сыворотки при 37°С в течение 2 ч, ее концентрированием путем центрифугирования и добавлением фенола в качестве консерванта.The closest technical result is a method for producing brucellosis monospecific anti-abortus serum (Patent RU No. 2375074 (13) C1 of 30.06.2008, A61K 39/00). The method of obtaining brucellosis monospecific anti-abortus serum involves intravenous immunization of rabbits with a single dose in a volume of 1 ml with a mixture (1: 1) from a suspension of vaccine strain B. abortus 19 VA at a concentration of 3.0-5.0 × 10 9 m.k. (microbial cells) / ml, disinfected by boiling for 60 minutes, and a suspension of live culture of the same strain of B. abortus 19BA with a concentration of 3.0-5.0 × 10 9 m.k. / ml, bleeding animals, inactivation of serum at 60 -65 ° C for 1-1.5 hours, for the cross-absorption, the Bakmass strain B. melitensis 548 is used, followed by incubation of the serum at 37 ° C for 2 hours, its concentration by centrifugation and phenol is added as a preservative.
Недостатками этого способа являются трудоемкость процесса, эпидемическая опасность, связанная с использованием живой культуры бруцелл вида abortus, небольшой объем выхода конечного продукта за счет получения сыворотки от животного-продуцента только при обескровливании.The disadvantages of this method are the complexity of the process, the epidemic risk associated with the use of a live culture of brucella species abortus, a small yield of the final product due to the production of serum from an animal producer only during bleeding.
Техническим результатом предлагаемого способа изготовления бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus является снижение трудоемкости процесса ее изготовления, эпидемической опасности и увеличения выхода конечного продукта.The technical result of the proposed method for the manufacture of brucellosis monospecific anti-abortus serum is to reduce the complexity of the manufacturing process, the epidemic danger and increase the yield of the final product.
Техническое решение достигается тем, что способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus включает иммунизацию кроликов разовой дозой штамма В. abortus 19, получение сыворотки, перекрестную абсорбцию сыворотки бактериальной массой гетерологического вида melitensis с последующей ее инкубацией при 37°С в течение 2 часов, концентрирование сыворотки путем центрифугирования, консервирование и фасовку, иммунизацию кроликов проводят подкожно в область подгрудка суспензией в объеме 1 мл, представляющей собой смесь 200 млн м.к. культуры штамма В. abortus 19, обеззараженной кипячением в течение 60 минут, с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, на 14-16 день проводят пробное крововзятие, а на 21-45 дни осуществляют трехкратное взятие крови и на 60 день обескровливают, для перекрестной адсорбции используют штамм В. melitensis 565, обеззараженный кипячением в течение 60 минут.The technical solution is achieved by the fact that the method for producing brucellosis monospecific anti-abortus serum involves immunizing rabbits with a single dose of strain B. abortus 19, obtaining serum, cross-absorbing the serum with the bacterial mass of the heterologous melitensis species, followed by its incubation at 37 ° C for 2 hours, concentration serum by centrifugation, preservation and packaging, immunization of rabbits is carried out subcutaneously in the area of the breast under the suspension in a volume of 1 ml, which is a mixture of 200 million MK cultures of strain B. abortus 19, disinfected by boiling for 60 minutes, with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant, test blood collection is carried out on days 14-16, and blood is taken three times for 21-45 days and bled for 60 days for cross-adsorption use the strain B. melitensis 565, disinfected by boiling for 60 minutes.
Предлагаемый способ изготовления бруцеллезной моноспецифической бруцеллезной диагностической сыворотки anti-abortus позволяет снизить трудоемкость за счет подкожного введения, максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса за счет использования обеззараженных культур бруцелл, а минимум четырехкратное взятие крови от каждого кролика позволит в два раза увеличить количество получаемой сыворотки.The proposed method for the manufacture of brucellosis monospecific brucellosis diagnostic anti-abortus serum can reduce the complexity due to subcutaneous administration, maximize the anti-epidemic safety of this process through the use of disinfected brucella cultures, and a minimum of four blood samples from each rabbit will double the amount of serum obtained.
В качестве антигенов использовали обеззараженные (инактивированные) кипячением 30 минут культуры бруцелл:As antigens used disinfected (inactivated) by boiling 30 minutes of Brucella culture:
- для гипериммунизации кроликов - взвесь обеззараженной культуры штамма B. abortus 19-200 млн м.к. с добавлением адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG;- for hyperimmunization of rabbits - a suspension of a disinfected culture of B. abortus strain 19-200 mln.m. with the addition of MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant;
- для адсорбции полученной сыворотки - обеззараженный штамм B. melitensis 565.- for adsorption of the obtained serum is a disinfected strain of B. melitensis 565.
Используемые штаммы должны отвечать паспортным данным. Культуру В. abortus 19 высевают на одну из питательных сред: эритрит агар, МППГГА. После 2-3-суточного роста при температуре 37°С бактериальную массу смывают с поверхности питательной среды физиологическим раствором с добавлением 0,5% фенола. Полученную взвесь бруцелл доводят до необходимой концентрации по оптическому стандарту мутности, сливают через двойной марлевый фильтр в колбы и обезвреживают кипячением в течение 60 минут, периодически помешивая. Проверяют на чистоту и стерильность путем засева на питательные среды.The strains used must meet the passport data. The culture of B. abortus 19 is sown on one of the nutrient media: erythritol agar, MPPGA. After 2-3-day growth at a temperature of 37 ° C, the bacterial mass is washed off the surface of the nutrient medium with physiological saline with the addition of 0.5% phenol. The resulting suspension of brucella was adjusted to the required concentration according to the optical turbidity standard, poured through a double gauze filter into flasks and neutralized by boiling for 60 minutes, stirring occasionally. Check for cleanliness and sterility by seeding on nutrient media.
Взвеси культур, используемые в качестве антигенов как при гипериммунизации кроликов, так и для адсорбции полученных сывороток, должны быть стерильными.Suspensions of cultures used as antigens both for hyperimmunization of rabbits and for the adsorption of the obtained sera should be sterile.
В качестве адъюванта применяли французский препарат MONTANIDE™ ISA 61 VG, производитель - фирма «SEPPIC». Готовый к использованию масляный адъювант для ветеринарных вакцин для производства эмульсий «вода в масле» содержит особое обогащенное светлое минеральное масло и высокоочищенное ПАВ, полученное из маннитола и очищенной олеиновой кислоты растительного происхождения. Препарат MONTANID™ISA 61 VG не содержит компонентов животного происхождения. Рецептуры вакцин с MONTANIDE™ ISA 61 VG вызывают сильный и продолжительный иммунный ответ. По сравнению с традиционными масляными эмульсиями суспензия с MONTANIDE™ ISA 61 VG является устойчивой, стабильной и легко вводимой. Для приготовления 100 г вакцины обычно необходимо: MONTANIDE™ ISA 61 VG - 60 г и водной антигенной среды - 40 г. Стабильные эмульсии получаются путем смешивания водной среды в MONTANIDE™ ISA 61 VG, при комнатной температуре или ниже, при интенсивном перемешивании.French adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG was used as an adjuvant, manufactured by SEPPIC. The ready-to-use oil adjuvant for veterinary vaccines for the production of water-in-oil emulsions contains a special enriched light mineral oil and highly purified surfactant obtained from mannitol and purified plant-derived oleic acid. MONTANID ™ ISA 61 VG does not contain animal components. MONTANIDE ™ ISA 61 VG vaccine formulations elicit a strong and sustained immune response. Compared to traditional oil emulsions, the suspension with MONTANIDE ™ ISA 61 VG is stable, stable and easy to administer. To prepare 100 g of vaccine, it is usually necessary: MONTANIDE ™ ISA 61 VG - 60 g and aqueous antigenic medium - 40 g. Stable emulsions are obtained by mixing the aqueous medium in MONTANIDE ™ ISA 61 VG, at room temperature or lower, with vigorous stirring.
При комнатной температуре интенсивно перемешивают на магнитной мешалке взвесь культуры штамма В. abortus 19, обеззараженной (кипячением в течение 60 минут), с добавлением адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG, в соотношении 40 и 60% соответственно, т.е. для приготовления 10 мл суспензии необходимо 4 мл взвеси - 500 млн м.к./мл и 6 мл адъюванта.At room temperature, a suspension of the culture of strain B. abortus 19, disinfected (by boiling for 60 minutes), with the addition of MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant, in a ratio of 40 and 60%, respectively, is intensively stirred on a magnetic stirrer, i.e. for the preparation of 10 ml of suspension, 4 ml of suspension is necessary - 500 mln MK / ml and 6 ml of adjuvant.
В качестве животных-продуцентов использовали кроликов.As animal producers used rabbits.
Заявленный результат достигается следующим образом.The claimed result is achieved as follows.
Кроликам однократно подкожно в область подгрудка вводят 1 мл суспензии, представляющей собой смесь антигена (200 млн м.к. обеззараженной культуры штамма В. abortus 19) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG. На 14 день проводят пробное крововзятие, а далее, при условии положительной РА с полученной сывороткой и испытуемой живой культурой В. melitensis в разведении не ниже 1:160, осуществляют четырехкратное взятие крови (из ушной вены) в сроки с 21 по 45 день после гипериммунизации, из расчета 16-20 мл крови на 1 кг живой массы. Через 60 дней тотальное взятие крови (производственное кровопускание). Кровь от каждого кролика берут с соблюдением правил асептики и антисептики в отдельную стерильную емкость. После крововзятия емкость с кровью ставят в термостат при 37°С на 3-4 часа для отделения сыворотки, затем помещают в холодильник при 2-8°С на 2-е суток. Сыворотку от каждого кролика сливают отдельно в стерильные сосуды, после чего прогревают в водяной бане при температуре 60-65°С в течение 1-1,5 часов при постоянном перемешивании и добавлением мертиолата натрия до конечной концентрации 1:10000.Rabbits are injected subcutaneously into the breast area 1 ml of the suspension, which is a mixture of antigen (200 mln.m.K. of disinfected culture of strain B. abortus 19) with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant. On day 14, a test blood sampling is carried out, and then, subject to positive RA with the obtained serum and the tested living culture of B. melitensis, at a dilution of not less than 1: 160, blood is taken four times (from the ear vein) from 21 to 45 days after hyperimmunization , at the rate of 16-20 ml of blood per 1 kg of live weight. After 60 days, total blood sampling (production bloodletting). Blood from each rabbit is taken in compliance with the rules of asepsis and antiseptics in a separate sterile container. After blood collection, the blood vessel is placed in a thermostat at 37 ° C for 3-4 hours to separate the serum, then placed in a refrigerator at 2-8 ° C for 2 days. The serum from each rabbit is poured separately into sterile vessels, and then heated in a water bath at a temperature of 60-65 ° C for 1-1.5 hours with constant stirring and the addition of sodium merthiolate to a final concentration of 1: 10000.
Процесс адсорбции полученной штамма anti-abortus сыворотки проводят, используя бактериальную массу обеззараженного кипячением в течение 30 минут штамма В. melitensis 565, полученную путем выращивания на матрицах в течение 72 часов. Бакмассу смывают 0,9% раствором натрия хлорида, центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин, осадок собирают и добавляют 0,9% раствор натрия хлорида. Полученную бакмассу, из расчета 3,5-3,7×109 КОЕ на 10 мл сыворотки, добавляют к сыворотке, с последующей инкубацией смеси при 37°С в течение 2 часов, концентрируют сыворотку путем центрифугирования 30 мин при 5000 об/мин и консервируют, например, добавлением мертиолата натрия в конечной концентрации 1:10000, фасуют.The adsorption process of the obtained anti-abortus serum strain is carried out using the bacterial mass of strain B. melitensis 565 disinfected by boiling for 30 minutes, obtained by growing on matrices for 72 hours. The bacmass is washed off with a 0.9% sodium chloride solution, centrifuged for 30 minutes at a rotation speed of 5000 rpm, the precipitate is collected and a 0.9% sodium chloride solution is added. The resulting Bakmass, at the rate of 3.5-3.7 × 10 9 CFU per 10 ml of serum, is added to the serum, followed by incubation of the mixture at 37 ° C for 2 hours, the serum is concentrated by centrifugation for 30 min at 5000 rpm and canned, for example, by adding sodium merthiolate at a final concentration of 1: 10000, packaged.
Контроль активности полученной сыворотки осуществляют в РА до адсорбции и после нее, используя в качестве антигенов живые культуры бруцелл видов abortus и melitensis. Сыворотка считается качественной, если РА с ней и антигенами живых культур бруцелл видов melitensis будет положительной в разведениях не ниже 1:160 и отрицательном результате агглютинации живых культур бруцелл видов melitensis в разведениях 1/10 соответственно.The activity of the obtained serum is monitored in RA before and after adsorption using live brucella cultures of the abortus and melitensis species as antigens. Serum is considered to be of high quality if RA with it and antigens of live cultures of brucella melitensis species is positive in dilutions of at least 1: 160 and a negative result of agglutination of live cultures of brucella melitensis species in 1/10 dilutions, respectively.
Пробу сыворотки крови из каждой емкости подвергают проверке на стерильность путем высевов на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро и на активность в РА, РСК, РБП.A blood serum sample from each container is tested for sterility by plating on MPA, MPB, MPPB under paraffin oil and Saburo medium and on activity in RA, RSK, RBP.
При условии стерильности и получении положительных результатов серологических реакций сыворотку смешивают в одну емкость для составления серии, консервируют, например, мертиолатом натрия качестве консерванта в конечной концентрации 1:10000 и расфасовывают.Under the condition of sterility and obtaining positive results of serological reactions, the serum is mixed in one container for making a series, canned, for example, with sodium merthiolate as a preservative in a final concentration of 1: 10000 and packaged.
Пример 1. Определение оптимальной схемы гипериммунизации кроликов для получения сыворотки бруцеллезной моноспецифической anti-abortus.Example 1. Determination of the optimal scheme for hyperimmunization of rabbits to obtain serum of brucellosis monospecific anti-abortus.
В опыте изучена сравнительная эффективность четырех схем получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, для чего из здоровых кроликов, предварительно проверенных на бруцеллез серологическими методами, сформировали 4 группы (по 3 кролика в каждой):In the experiment, the comparative efficacy of four schemes for producing brucellosis monospecific anti-abortus serum was studied, for which 4 healthy groups were formed from healthy rabbits previously tested for brucellosis by serological methods (3 rabbits each):
1-я группа - животным вводят однократно внутривенно в объеме 1 мл смесь (1:1) из взвеси вакцинного штамма В. abortus 19 концентрацией 3,0-5,0×109 м.к. (микробных клеток)/мл, обеззараженного кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19 концентрацией 3,0-5,0×109 м.к./мл.Group 1 - animals are injected once intravenously in a volume of 1 ml a mixture (1: 1) from a suspension of the vaccine strain B. abortus 19 with a concentration of 3.0-5.0 × 10 9 m.k. (microbial cells) / ml, disinfected by boiling for 60 min, and a suspension of live culture of the same strain of B. abortus 19 with a concentration of 3.0-5.0 × 10 9 m.k. / ml.
2-я группа - животным вводят однократно подкожно в область подгрудка обеззараженную кипячением в течение 60 минут культуру В. abortus 19 в дозе 200 млн м.к. в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG в общем объеме 1 мл.2nd group - animals are injected once subcutaneously into the area of the breast in a culture of B. abortus 19 disinfected by boiling for 60 minutes at a dose of 200 mln.m. in a mixture with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG in a total volume of 1 ml.
3-я группа - животным вводят однократно подкожно в область подгрудка обеззараженную кипячением в течение 60 минут культуру В. abortus 19 в дозе 100 млн м.к. в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG в общем объеме 1 мл.3rd group - the animals are injected once subcutaneously into the area of the breast in a culture of B. abortus 19 disinfected by boiling for 60 minutes at a dose of 100 mln.m. in a mixture with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG in a total volume of 1 ml.
4-я группа - животным вводят однократно подкожно в область подгрудка обеззараженную кипячением в течение 60 минут культуру В. abortus 19 в дозе 300 млн м.к. в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG в общем объеме 1 мл.4th group - the animals are injected once subcutaneously into the area of the breast in a culture of B. abortus 19 disinfected by boiling for 60 minutes at a dose of 300 million m. in a mixture with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG in a total volume of 1 ml.
Кровь от животных в целях получения сывороток брали на 7, 14, 21, 28, 45, 60 и 90 дни после введения антигенов.Blood from animals in order to obtain sera was taken on 7, 14, 21, 28, 45, 60 and 90 days after administration of antigens.
Исследование полученных сывороток проводили в РА с антигенами, приготовленными из В. abortus 544 и B. melitensis 565, согласно общепринятой методике до и после адсорбции.The study of the obtained sera was carried out in RA with antigens prepared from B. abortus 544 and B. melitensis 565, according to the standard procedure before and after adsorption.
Перед адсорбцией сыворотки инактивировали при 60-65°С в течение 1-1,5 ч и обезвреживали мертиолатом натрия до конечной концентрации 1:10000.Before adsorption, serum was inactivated at 60-65 ° C for 1-1.5 h and neutralized with sodium thiolate to a final concentration of 1: 10000.
В дальнейшем проводили адсорбцию полученных сывороток anti-abortus бактериологической массой штамма B. melitensis 565, обеззараженной кипячением в течение 60 минут и добавленной к сыворотке из расчета 3,5-3,7×109 м.к. на 10 мл сыворотки, с последующей инкубацией смеси при 37°С в течение 2 часов, концентрирование путем центрифугирования 30 минут при 5000 об/мин, добавление в качестве консерванта мертиолата натрия до конечной концентрации 1:10000 и фасовку.Subsequently, the obtained anti-abortus sera were adsorbed with the bacteriological mass of B. melitensis 565 strain, disinfected by boiling for 60 minutes and added to the serum at a rate of 3.5-3.7 × 10 9 m.k. per 10 ml of serum, followed by incubation of the mixture at 37 ° C for 2 hours, concentration by centrifugation for 30 minutes at 5000 rpm, adding sodium merthiolate as a preservative to a final concentration of 1: 10000 and packing.
Результаты опыта приведены в таблицах 1-7.The results of the experiment are shown in tables 1-7.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 7 день после их сенсибилизации (таблица 1), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:80 - 1:160 и 1:80, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:40 - 1:80 и 0-1:80, а после адсорбции - 1:20 - 1:40 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе - до адсорбции 1:40 - 1:80 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции 1:20 - 1:40 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:40 - 1:80 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции 1:20 - 1:40 и 0-1:10 соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on the 7th day after their sensitization (table 1) in the first group was positive before adsorption with the antigens of killed brucella cultures of the abortus and melitensis species at a dilution of 1:80 - 1: 160 and 1:80, and after adsorption - 1: 320 and 0-1: 10, respectively; in the second group - before adsorption 1:40 - 1:80 and 0-1: 80, and after adsorption - 1:20 - 1:40 and 0-1: 10, respectively; in the third group, before adsorption 1:40 - 1:80 and 0-1: 80, respectively, and after adsorption 1:20 - 1:40 and 0-1: 10, respectively; in the fourth group, before adsorption 1:40 - 1:80 and 0-1: 80, respectively, and after adsorption 1:20 - 1:40 and 0-1: 10, respectively.
РА сыворотками крови, полученными от кроликов на 14 день после их сенсибилизации (таблица 2), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:640 - 1:2560 и 1:1280 - 1:2560, а после адсорбции - 1:160 и 1:10-20 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:320 - 1:1280 и 1:80 - 1:1280, а после адсорбции - 1:160 - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе - до адсорбции 1:80 - 1:320 и 1:80 - 1:320 соответственно, а после адсорбции - 1:20 - 1:160 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:320 - 1:1280 и 1:160 - 1:1280 соответственно, а после адсорбции 1:160 - 1:320 и 0-1:10 соответственно.RA serum obtained from rabbits on the 14th day after their sensitization (table 2) in the first group was positive before adsorption with the antigens of killed brucella cultures of species abortus and melitensis at a dilution of 1: 640 - 1: 2560 and 1: 1280 - 1: 2560, and after adsorption - 1: 160 and 1: 10-20, respectively; in the second group, before adsorption 1: 320 - 1: 1280 and 1:80 - 1: 1280, and after adsorption - 1: 160 - 1: 320 and 0-1: 10, respectively; in the third group, before adsorption 1:80 - 1: 320 and 1:80 - 1: 320, respectively, and after adsorption - 1:20 - 1: 160 and 0-1: 10, respectively; in the fourth group, before adsorption 1: 320 - 1: 1280 and 1: 160 - 1: 1280, respectively, and after adsorption 1: 160 - 1: 320 and 0-1: 10, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 21 день после их сенсибилизации (таблица 3), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 - 1:320 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:160 - 1:1280 и 1:20 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:160 - 1:1280 и 1:80 - 1:1280, а после адсорбции - 1:160 и 0-1:20 соответственно; в третьей группе до адсорбции - 1:80 - 1:160 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции - 1:80 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:320 - 1:1280 и 1:160 - 1:1280 соответственно, а после адсорбции 1:160 - 1:320 и 0-1:20 соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on the 21st day after their sensitization (table 3) in the first group was positive before adsorption with the antigens of killed brucella cultures of the abortus and melitensis species at a dilution of 1: 160 - 1: 320 and 1: 640 - 1 : 1280, and after adsorption - 1: 160 - 1: 1280 and 1:20, respectively; in the second group - before adsorption 1: 160 - 1: 1280 and 1:80 - 1: 1280, and after adsorption - 1: 160 and 0-1: 20, respectively; in the third group, before adsorption — 1:80 - 1: 160 and 0-1: 80, respectively, and after adsorption — 1:80 and 0-1: 10, respectively; in the fourth group, before adsorption 1: 320 - 1: 1280 and 1: 160 - 1: 1280, respectively, and after adsorption 1: 160 - 1: 320 and 0-1: 20, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 28 день после их сенсибилизации (таблица 4), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:160 - 1:320 и 1:20 - 1:40 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:320 - 1:640 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе - до адсорбции 1:80 - 1:320 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции - 1:20 - 1:160 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:640 и 1:640 - 1:1280 соответственно, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on day 28 after their sensitization (table 4) in the first group was positive before adsorption with the antigens of killed brucella cultures of the abortus and melitensis species at a dilution of 1: 160 and 1: 640 - 1: 1280, and after adsorption - 1: 160 - 1: 320 and 1:20 - 1:40, respectively; in the second group - before adsorption 1: 320 - 1: 640 and 1: 640 - 1: 1280, and after adsorption - 1: 320 and 0-1: 10, respectively; in the third group - before adsorption 1:80 - 1: 320 and 0-1: 80, respectively, and after adsorption - 1:20 - 1: 160 and 0-1: 10, respectively; in the fourth group, before adsorption 1: 640 and 1: 640 - 1: 1280, respectively, and after adsorption - 1: 320 and 0-1: 10, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 35 день после их сенсибилизации (таблица 5), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:80 - 1:160 и 1:10 соответственно; во второй группе - до адсорбции 1:320 - 1:640 и 1:320 - 1:1280, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе - до адсорбции 1:160 и 1:80 - 1:320 соответственно, а после адсорбции - 1:80 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе - до адсорбции 1:640 и 1:320 - 1:1280 соответственно, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on the 35th day after their sensitization (table 5) in the first group was positive before adsorption with the antigens of killed brucella cultures of species abortus and melitensis at a dilution of 1: 160 and 1: 640 - 1: 1280, and after adsorption - 1:80 - 1: 160 and 1:10, respectively; in the second group - before adsorption 1: 320 - 1: 640 and 1: 320 - 1: 1280, and after adsorption - 1: 320 and 0-1: 10, respectively; in the third group - before adsorption 1: 160 and 1:80 - 1: 320, respectively, and after adsorption - 1:80 and 0-1: 10, respectively; in the fourth group, before adsorption 1: 640 and 1: 320 - 1: 1280, respectively, and after adsorption - 1: 320 and 0-1: 10, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 60 день после их сенсибилизации (таблица 6), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 и 1:640 - 1:1280, а после адсорбции - 1:80 - 1:160 и 1:10 соответственно; во второй группе до адсорбции - 1:320 - 1:640 и 1:320 - 1:1280, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в третьей группе до адсорбции - 1:80 - 1:160 и 0-1:160 соответственно, а после адсорбции 1:80 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе до адсорбции - 1:640 и 1:160-1:1280 соответственно, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits on the 60th day after their sensitization (table 6) in the first group was positive before adsorption with the antigens of killed brucella cultures of the abortus and melitensis species at a dilution of 1: 160 and 1: 640 - 1: 1280, and after adsorption - 1:80 - 1: 160 and 1:10, respectively; in the second group, before adsorption - 1: 320 - 1: 640 and 1: 320 - 1: 1280, and after adsorption - 1: 320 and 0-1: 10, respectively; in the third group, before adsorption, 1:80 - 1: 160 and 0-1: 160, respectively, and after adsorption, 1:80 and 0-1: 10, respectively; in the fourth group, before adsorption, 1: 640 and 1: 160-1: 1280, respectively, and after adsorption, 1: 320 and 0-1: 10, respectively.
РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 90 день после их сенсибилизации (таблица 7), в первой группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур бруцелл видов abortus и melitensis в разведении 1:160 - 1:320 и 1:80, а после адсорбции - 1:80 и 1:40 соответственно; во второй группе до адсорбции - 1:160 и 1:320, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно, в третьей группе до адсорбции -1:80 и 0-1:80 соответственно, а после адсорбции - 1:-20-40 и 0-1:10 соответственно; в четвертой группе до адсорбции - 1:160 1:320 и 1:320 - 1:640 соответственно, а после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно.RA with blood serum obtained from rabbits 90 days after their sensitization (table 7) in the first group was positive before adsorption with the antigens of killed brucella cultures of the abortus and melitensis species at a dilution of 1: 160 - 1: 320 and 1:80, and after adsorption, 1:80 and 1:40, respectively; in the second group, before adsorption, 1: 160 and 1: 320, and after adsorption, 1: 320 and 0-1: 10, respectively; in the third group, before adsorption, -1: 80 and 0-1: 80, respectively, and after adsorption, 1: -20-40 and 0-1: 10, respectively; in the fourth group, before adsorption - 1: 160 1: 320 and 1: 320 - 1: 640, respectively, and after adsorption - 1: 320 and 0-1: 10, respectively.
Таким образом, из приведенных данных очевидно, что оптимальной является схема получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, испытанная на животных второй группы, в которой использовалась однократная подкожная гипериммунизация в область подгрудка суспензия инактивированной культуры бруцелл вида anti-abortus в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG. Кроме эпидемической безопасности, ее преимущества заключаются в более высоких ее титрах при получении в отдаленные сроки после гипериммунизации, а значит, в возможности получения значительного объема сыворотки с более высокой активностью за счет многократного (не менее 4-х раз) взятия крови.Thus, from the data presented, it is obvious that the optimal scheme is for the preparation of brucellosis monospecific anti-abortus serum, tested on animals of the second group, in which a single subcutaneous hyperimmunization was used in the breast area of an inactivated brucella suspension of the anti-abortus species mixed with MONTANIDE ™ oil adjuvant ISA 61 VG. In addition to epidemic safety, its advantages lie in its higher titers when received in the long term after hyperimmunization, and therefore, in the possibility of obtaining a significant volume of serum with higher activity due to repeated (at least 4 times) blood sampling.
Пример 2. Изучение диагностической активности бруцеллезных моноспецифических сывороток anti-abortus, полученных от кроликов, гипериммунизированных по разным схемам, через 6 месяцев их хранения (таблица 8).Example 2. The study of the diagnostic activity of brucellosis monospecific anti-abortus sera obtained from rabbits hyperimmunized according to different schemes after 6 months of storage (table 8).
Установлено, что сыворотка, полученная от кроликов по схеме, предусматривающей однократную подкожную, в область подгрудка, гипериммунизацию обеззараженной культурой бруцелл вида anti-abortus в смеси с масляным адъювантом MONTANIDEТМ ISA 61 VG, сохранила свою активность (РА в разведении не ниже 1:160) в течение не менее 6 месяцев после ее получения. Из крови, взятой через 21, 28, 35 и 60 дней после гипериммунизации, в отличие от сыворотки, полученной при однократной внутривенной гипериммунизации смеси 1:1 обеззараженной и живой культурой бруцелл вида abortus без адъюванта, потерявшей активность в более ранние сроки - 28-35 дней.It was established that the serum obtained from rabbits according to the scheme providing a single subcutaneous injection to the undercartum region, hyperimmunization with a disinfected culture of anti-abortus brucella in a mixture with oil adjuvant MONTANIDE TM ISA 61 VG, retained its activity (RA at a dilution of at least 1: 160 ) for at least 6 months after receiving it. From blood taken 21, 28, 35, and 60 days after hyperimmunization, in contrast to serum obtained with a single intravenous hyperimmunization of a 1: 1 mixture of disinfected and live culture of abortus brucella without adjuvant, which lost activity at an earlier date - 28-35 days.
Предлагаемый способ получения бруцеллезной моноспецифической бруцеллезной диагностической сыворотки anti-abortus позволяет снизить трудоемкость за счет подкожного иммунизации, максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса за счет использования обеззараженных культур бруцелл, а также брать кровь от каждого животного минимум четырехкратно, а значит, в два раза повысить количество получаемой сыворотки.The proposed method for producing brucellosis monospecific brucellosis diagnostic anti-abortus serum can reduce the complexity due to subcutaneous immunization, maximize the anti-epidemic safety of this process through the use of disinfected brucella cultures, and also take blood from each animal at least fourfold, and therefore double the amount the resulting serum.
ЛитератураLiterature
1. Вершилова П.А. Биохимическая и серологическая дифференциация группы Brucella и ее значение в эпидемиологии // Архив биологических наук, 35, сер. Б, 2. М., 1934.1. Vershilova P.A. Biochemical and serological differentiation of the Brucella group and its importance in epidemiology // Archive of Biological Sciences, 35, ser. B, 2.M., 1934.
2. Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним. / Под ред. Т.С. Сайдулдина. - Алматы, 2007. - 433 с.2. Ivanov N.P. Animal brucellosis and measures to combat it. / Ed. T.S. Sayduldina. - Almaty, 2007 .-- 433 p.
3. Кириллов Л.В. Получение монорецепторных сывороток // Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты. М., 1963. С. 366-371.3. Kirillov L.V. Obtaining monoreceptor sera // Biological and chemotherapeutic veterinary drugs. M., 1963.S. 366-371.
4. Патент RU №2375074 (13) от 30.06.2008, А61K 39/00. «Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus».4. Patent RU No. 2375074 (13) dated 06/30/2008, A61K 39/00. "A method for producing brucellosis monospecific anti-abortus serum."
5. Технический бюллетень MONTANIDE™ ISA 61 VG.5. MONTANIDE ™ ISA 61 VG Technical Bulletin.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016115897A RU2639127C2 (en) | 2016-04-22 | 2016-04-22 | Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016115897A RU2639127C2 (en) | 2016-04-22 | 2016-04-22 | Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016115897A RU2016115897A (en) | 2017-10-26 |
| RU2639127C2 true RU2639127C2 (en) | 2017-12-19 |
Family
ID=60153594
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016115897A RU2639127C2 (en) | 2016-04-22 | 2016-04-22 | Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2639127C2 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2375074C1 (en) * | 2008-06-30 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method for production of brucellar monospecific serum anti-abortus |
| RU2549434C2 (en) * | 2013-07-30 | 2015-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) | Method for making brucellosis diagnostic serum |
-
2016
- 2016-04-22 RU RU2016115897A patent/RU2639127C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2375074C1 (en) * | 2008-06-30 | 2009-12-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method for production of brucellar monospecific serum anti-abortus |
| RU2549434C2 (en) * | 2013-07-30 | 2015-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) | Method for making brucellosis diagnostic serum |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| KULAKOV Lu. K., et al., Increased production of the protein antigen of Brucella melitensis in Escherichia coli K-12 cells [Article in Russian]. Mol Gen Mikrobiol Virusol. 1999; (4): 15-9. * |
| KULAKOV Lu. K., et al., Increased production of the protein antigen of Brucella melitensis in Escherichia coli K-12 cells [Article in Russian]. Mol Gen Mikrobiol Virusol. 1999; (4): 15-9. TABYNOV K., et al., An influenza viral vector Brucella abortus vaccine induces good cross-protection against Brucella melitensis infection in pregnant heifers. Vaccine. 2015 Jul 17; 33(31): 3619-23. doi: 10.1016/j.vaccine.2015.06.045. Epub 2015 Jun 17. * |
| TABYNOV K., et al., An influenza viral vector Brucella abortus vaccine induces good cross-protection against Brucella melitensis infection in pregnant heifers. Vaccine. 2015 Jul 17; 33(31): 3619-23. doi: 10.1016/j.vaccine.2015.06.045. Epub 2015 Jun 17. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2016115897A (en) | 2017-10-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104530232A (en) | Preparation method of refined egg yolk antibody for duck viral hepatitis | |
| CN101475639A (en) | Mixed yolk antibody for preventing and treating duck infectious serositis and preparation thereof | |
| CN113957007B (en) | Inactivated vaccine for mycoplasma synoviae | |
| RU2549434C2 (en) | Method for making brucellosis diagnostic serum | |
| US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
| RU2639127C2 (en) | Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus | |
| RU2428202C1 (en) | Associated vaccine against anaerobic enterotoxemia and colibacillosis diarrhea in calves | |
| RU2613901C1 (en) | Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis | |
| RU2438709C1 (en) | Serum against cattle diseases caused by viruses of infectious rhinotracheatis, paraflu, rota, corona and mucosa diarrhea-disease, polyspecific, hyperimmune, method of prevention and treatment of cattle diseases caused by viruses of infectious rhinotracheitis, parainfluenza, rota, corona and mucosa diarrhea-disease | |
| RU2659948C1 (en) | Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits | |
| US3470294A (en) | Vaccine for immunization of dogs and foxes against distemper,hepatitis contagiosa and leptospirosis and process for preparing it | |
| RU2538158C1 (en) | Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| Trussell | Microagglutination tests with Trichomonas vaginalis | |
| Senekjie | Immunologic Studies in Experimental Trypanosoma cruzi Infections: 2. Slide Agglutination and Intradermal Tests. | |
| CN107982532B (en) | Duck hepatitis A virus antigen-antibody complex vaccine and preparation method thereof | |
| IQBAL et al. | Immune response of rabbits to hemorrhagic septicemia vaccine formulations adjuvanted with montanide ISA-206, paraffin oil and alum | |
| RU2650628C1 (en) | Method of obtaining vaccine associated with colibacillosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets | |
| RU2425148C2 (en) | Brucella abortus uf-1 strain for preparing biological preparations for diagnostics and specific prevention of brucellosis in farm animals | |
| RU2772751C1 (en) | Method for producing a hyperimmune serum against bovine adenovirus-10 in cattle | |
| RU2813771C1 (en) | Method of preventing escherichiosis in calves | |
| RU2416429C2 (en) | Method for producing antigen preparation of l-brucellas | |
| RU2814593C1 (en) | Method of preventing escherichiosis in calves | |
| RU2813752C1 (en) | Method of producing aluminum hydroxide oil vaccine against escherichiosis in calves and piglets | |
| RU2714305C1 (en) | Method of producing a brucellous erythrocyte antigen for the indirect hemagglutination reaction (ihar) | |
| RU2741643C1 (en) | Associated vaccine against myxomatosis, pasteurellosis and viral haemorrhagic disease 1 and type 2 of rabbits |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200423 |