RU2104031C1

RU2104031C1 - Method of preparing monospecific sera for brucellosis pathogens differentiation

Info

Publication number: RU2104031C1
Application number: RU95100388A
Authority: RU
Inventors: В.Г. Дальвадянц; Г.И. Лямкин; Л.В. Ляпустина; И.Ф. Таран; Л.М. Луканина
Original assignee: Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Priority date: 1995-01-11
Filing date: 1995-01-11
Publication date: 1998-02-10
Also published as: RU95100388A

Abstract

FIELD: medicinal microbiology. SUBSTANCE: method involves intravenous immunization of rabbits with a single dose of strain Brucella abortus-544 (1.8-2.0 x $$$ CFU/1 ml physiological solution) or Brucella melintensis-28 (2.8-3.0 x $$$ CFU/1 ml) that provides increase of sensitivity of monospecific sera by 2-4-fold, respectively. Animals were bled in 5-7 days, sera were inactivated at 60-65 C for 1-1.5 h followed by cross-over absorption of serum with B. melitensis-28 and B. abortus-544 biomass, respectively. Biomass is cultured for 70-72 h, centrifuged, cooled for 24-26 h and diluted with physiological solution at concentration of absorbing bacterial mass in 3.5-3.7 x $$$ CFU/10 ml serum followed by addition of phenol to ready serum and package. EFFECT: improved method of serum preparing.

Description

Изобретение относится к микробиологии, в частности, к способу получения моноспецифических сывороток антимелитензис и антиабортус для дифференциации по антигенной структуре штаммов бруцелл. The invention relates to microbiology, in particular, to a method for producing monospecific antimelitensis and anti-abortus serums for differentiation by the antigenic structure of brucella strains.

Изобретением решается задача повышения чувствительности сывороток при проведении реакции агглютинации, что обеспечивает расширение возможностей эпизоотологоэпидемического надзора по бруцеллезу, диагностике и лечению данной инфекции. The invention solves the problem of increasing the sensitivity of sera during the agglutination reaction, which provides increased opportunities for epizootological and epidemiological surveillance for brucellosis, diagnosis and treatment of this infection.

Известна принципиальная схема получения моноспецифических сывороток (Методические указания по лабораторной диагностике бруцеллеза у людей и выделению возбудителя из пищевых продуктов и других материалов.- Ставрополь, 1962. - С. 21). Моноспецифические сыворотки получают путем иммунизации кроликов эталонными штаммами бруцелл с последующей абсорбцией сыворотки бактериальной массой (бакмассой) эталонного штамма гетерологичного вида бруцелл. Реакцию агглютинации ставят обычным объемным методом до титра сыворотки, начиная с разведения 1:10. В качестве антигена при постановке реакции агглютинации применяют 3-суточную агаровую культуру живых бруцелл изучаемого штамма, разведенную до 10⁹ колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл физиологического раствора. Для разведения сыворотки применяют физиологический раствор с 0,5% карболовой кислоты.The known scheme for producing monospecific sera (Methodological guidelines for the laboratory diagnosis of brucellosis in humans and the selection of the pathogen from food products and other materials. - Stavropol, 1962. - S. 21). Monospecific sera are obtained by immunization of rabbits with reference strains of brucella followed by absorption of the serum by the bacterial mass (back mass) of a reference strain of a heterologous type of brucella. The agglutination reaction is performed using the usual volumetric method to a serum titer starting from a 1:10 dilution. As an antigen in the formulation of the agglutination reaction, a 3-day agar culture of living brucellas of the studied strain is used, diluted to 10 ⁹ colony forming units (CFU) in 1 ml of physiological saline. For serum dilution, physiological saline with 0.5% carbolic acid is used.

Недостатком методики является низкая чувствительность сыворотки при разведении более чем 1:160, что препятствует получению результатов с достаточной степенью достоверности. The disadvantage of this technique is the low sensitivity of serum when diluted more than 1: 160, which prevents the obtaining of results with a sufficient degree of reliability.

Наиболее близким по существу к заявляемому изобретению является способ получения моноспецифических сывороток с использованием штаммов бруцелл видов метилензис и абортус 1-х биоваров (Corbel M.J., Yill K.P.W and Thomas E.L. Methods for the Identification of Brucella. Ministry of Agriculture, Flaheries and Food, Research Seetion. Central Veterinary Lab. New Haw, Weybrige, Sury KT153 N 13, 1978). The closest to the claimed invention is a method for producing monospecific sera using brucella strains of the species methylensis and abortus of 1 biovar (Corbel MJ, Yill KPW and Thomas EL Methods for the Identification of Brucella. Ministry of Agriculture, Flaheries and Food, Research Seetion Central Veterinary Lab. New Haw, Weybrige, Sury KT153 N 13, 1978).

Способ осуществляется следующим образом. Проводят иммунизацию кроликов внутривенно разовыми дозами по 0,5 мл суспензией штаммов или мелитензис 16 М или бруцелла абортус 544, в зависимости от того, какую из сывороток надо получить, в дозе, содержащей 10⁹ КОЕ в 1 мл. Через 5-7 дней животных обескровливают при титре сывороточной агглютинации не менее 1:1280 против гомологичного антигена. Затем путем смешивания проводят абсорбцию сыворотки бакмассой штамма гетерологичного вида бруцелл из расчета 1 мл культуры с концентрацией 10⁹ КОЕ на 10 мл сыворотки. Иными словами, если получаем сыворотку антимелитензис, то заражаем кроликов штаммом бруцелла мелитензис, а абсорбцию ведем штаммом бруцелла абортус. Если получаем сыворотку антиабортус, то заражаем животных штаммом бруцелла абортус, а абсорбцию ведем штаммом бруцелла мелитензис. Затем сыворотку инкубируют при 37^oC в течение 2 ч, восстанавливают центрифугированием, разводят в фенолсолевом растворе, фасуют и хранят при 4^oC.The method is as follows. Rabbits are immunized intravenously in single doses of 0.5 ml with a suspension of strains or melitensis 16 M or brucella abortus 544, depending on which of the sera should be obtained, in a dose containing 10 ⁹ CFU in 1 ml. After 5-7 days, animals are bled at a titer of serum agglutination of at least 1: 1280 against a homologous antigen. Then, by mixing, the whey is absorbed by the Bakassa strain of the heterologous type of brucella at the rate of 1 ml of culture with a concentration of 10 ⁹ CFU per 10 ml of serum. In other words, if we get anti-melitensis serum, then we infect rabbits with the brucella strain melitensis, and we absorb the brucella strain abortus. If we get anti-abortus serum, then we infect the animals with the brucella strain abortus, and we absorb the brucella strain melitensis. Then the serum is incubated at 37 ^o C for 2 hours, restored by centrifugation, diluted in phenolic salt solution, Packed and stored at 4 ^o C.

У прототипа и заявляемого изобретения имеются следующие сходные существенные признаки. The prototype and the claimed invention have the following similar essential features.

Иммунизация кроликов разовой дозой штаммами бруцелла мелитензис и абортус 1 биовара, обескровливание животных через 5-7 дней, абсорбция сыворотки бакмассой штамма гетерологичного вида (абортус или мелитензис) с последующей ее инкубацией при 37^oC в течение 2 ч, центрифугирование, разведение в растворе фенола и фасовкой, обеспечивающие получение моноспецифических сывороток для дифференцирования штаммов бруцелл.Immunization of rabbits with a single dose of strains of Brucella melitensis and abortus 1 biovar, bleeding animals after 5-7 days, absorption of serum by Bakassa strain of a heterologous species (abortus or melitensis), followed by incubation at 37 ^o C for 2 hours, centrifugation, dilution in phenol solution and packaging, providing monospecific sera for the differentiation of strains of brucella.

Недостатком прототипа является небольшая чувствительность получаемой сыворотки, так как максимальное разведение в реакции агглютинации достигает титра 1:160. Указанный недостаток обусловлен тем, что используемый в прототипе штамм бруцелла мелитензис 16М склонен к диссоциативным процессам, что в свою очередь приводит к снижению его антигенной активности и как следствие снижению титра получаемой сыворотки. The disadvantage of the prototype is the low sensitivity of the obtained serum, since the maximum dilution in the agglutination reaction reaches a titer of 1: 160. This disadvantage is due to the fact that the brucella strain melitensis 16M used in the prototype is prone to dissociative processes, which in turn leads to a decrease in its antigenic activity and, as a consequence, a decrease in the titer of the resulting serum.

Целью изобретения является повышение чувствительности моноспецифической сыворотки антиабортус и антимелитензис для дифференциации возбудителей бруцеллеза. The aim of the invention is to increase the sensitivity of monospecific serum antiabortus and antimelitensis to differentiate pathogens of brucellosis.

Для достижения поставленной цели предлагаемый способ получения моноспецифических сывороток антимелитензис и антиабортус включает иммунизацию кроликов разовой дозой гетерологичного штамма бруцелл в каждом отдельном случае, для штамма бруцелла мелитензис иммунизирующая доза 2,8-3,0•10⁸ КОЕ/мл, а для штамма бруцелла абортус 544 - 1,8-2,0•10⁸ КОЕ/мл, обескровливание животных через 5-7 дней, инактивацию сывороток при 60-65^oC в течение 1-1,5 ч, подготовку бакмассы гетерологичных видов бруцелл для абсорбции сывороток путем выращивания штаммов бруцелл в течение 70-72 ч, центрифугирование, охлаждение осадка в течение 24-26 ч и добавление к осадкам физиологического раствора, абсорбцию сывороток гетерологичным видом бруцелл (абортус или мелитензис) из расчета 3,5-3,7•10⁹ КОЕ на 10 мл сыворотки, с последующей инкубацией сывороток при 37^oC в течение 2 ч, восстановлением сывороток путем центрифугирования, разведением в растворе фенола и фасовкой.To achieve this goal, the proposed method for producing monospecific serum antimelitensis and antiabortus involves immunizing rabbits with a single dose of a heterologous strain of brucella in each individual case, for the brucella strain melitensis, the immunizing dose is 2.8-3.0 • 10 ⁸ CFU / ml, and for the brucella strain abortus 544 - 1.8-2.0 • 10 ⁸ CFU / ml, bleeding animals after 5-7 days, inactivation of sera at 60-65 ^o C for 1-1.5 hours, preparation of the Bakmassa heterologous species of brucella for absorption of serum by growing brucella strains in t chenie 70-72 hours, centrifugation, cooling the precipitate for 24-26 hours, and adding to saline precipitation, absorption heterologous sera view Brucella (abortions or melitenzis) based 3,5-3,7 • 10 ⁹ cfu in 10 ml serum , followed by incubation of the sera at 37 ^o C for 2 hours, the restoration of the serum by centrifugation, dilution in phenol solution and packaging.

По отношению к прототипу у заявляемого изобретения имеются следующие отличительные признаки. In relation to the prototype of the claimed invention has the following distinctive features.

Использование в качестве иммунизирующего агента в одном случае и как абсорбента в другом, штамма вида бруцелла мелитензис 28. Штамм бруцелла мелитензис 28 зарегистрирован в коллекционном центре Ставропольского научно-исследовательского противочумного института за N 28. По сравнению со штаммов бруцелла мелитензис 16М, при применении которого получаем титры моноспецифических сывороток 1:160, предлагаемый штамм при его использовании в производстве моноспецифических сывороток антиабортус и антимелитензис дает возможность получить титры не менее 1:320-1:640, так как он не склонен к диссоциативному процессу в отличие от штамма бруцелла мелитензис 16М и обеспечивает высокую концентрацию антител, достаточную для повышения чувствительности сывороток в реакции агглютинации. The use of a strain of the type of brucella melitensis 28 as an immunizing agent in another case. The strain of brucella melitensis 28 is registered in the collection center of the Stavropol Scientific Research Anti-Plague Institute for N 28. Compared to strains of brucella, melitensis 16M, when used, we obtain titers of monospecific serums 1: 160, the proposed strain, when used in the production of monospecific sera, antiabortus and antimelitensis makes it possible to obtain titers not m its 1: 320-1: 640, since it is not prone to dissociative process unlike melitenzis Brucella strain 16M and provides a high concentration of antibody sufficient to increase the sensitivity of sera agglutination reaction.

Уменьшение концентрации заражающей дозы при иммунизации кроликов для бруцелла мелитензис 28 и для бруцелла абортус 544 до 2,8-3,0•10⁸ КОЕ/мл и 1,8-2,0•10⁸ КОЕ/мл соответственно оказывает стимулирующее действие на синтез антител. Получение сывороток, отвечающих необходимым требованиям, во многом зависит от схемы иммунизации, кратности, последовательности, сроков и способов введения определенных доз антигена. Дозы антигена, оказывающие наиболее интенсивное стимулирующее влияние на синтез антител, как правило, небольшие. В экспериментах доказано, что предлагаемые дозы оптимальны, так как именно такие дозы индуцируют выработку высокоавидных антител, способных прочно связывать антиген. Способы введения антигена могут быть различными. Наиболее высокие титры антител удается получить при внутривенном способе введения антигена, так как в иммунный ответ включается селезенка, где находится большое количество антителобразующих клеток, поэтому мы пользуемся этим способом введения и используем предлагаемые дозы заражения при иммунизации.The decrease in the concentration of the infectious dose during immunization of rabbits for Brucella melitensis 28 and for Brucella abortus 544 to 2.8-3.0 • 10 ⁸ CFU / ml and 1.8-2.0 • 10 ⁸ CFU / ml, respectively, has a stimulating effect on the synthesis antibodies. Obtaining serums that meet the necessary requirements, largely depends on the immunization schedule, multiplicity, sequence, timing and methods of administration of certain doses of antigen. Doses of antigen, which have the most intense stimulating effect on antibody synthesis, are usually small. In experiments, it was proved that the proposed doses are optimal, since it is precisely such doses that induce the production of highly avid antibodies that can firmly bind the antigen. Methods of administration of antigen may be different. The highest antibody titers can be obtained with the intravenous method of antigen administration, since the spleen, where a large number of antibody-forming cells are located, is included in the immune response, so we use this method of administration and use the proposed doses of infection during immunization.

Инактивация сывороток при 60-65^oC в течение 1-1,5 ч с добавлением мертиолята натрия до концентрации 1:10000 обеспечивает большую степень обеззараживания. При проведении серологических исследований проводят предварительное обеззараживание материала - сыворотки крови обеззараживают добавлением мертиолята натрия до концентрации 1:10000 с последующим прогреванием их при 56^oC в течение 30 мин (Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности. Санитарные правила СП 1.2.011-94. Госкомсанэпиднадзор России.- М.- 1994. - C. 17). В эксперименте увеличение времени инактивации до 1,5 ч дает большую степень безопасности при работе персонала с бруцеллезной сывороткой. Подготовка бакмассы бруцелл для абсорбции с сывороткой путем выращивания культур в течение 70-72 ч, центрифугирования, охлаждения осадка в течение 24-26 ч и добавления к осадку физиологического раствора, обеспечивает более высокую по сравнению с прототипом степень абсорбции и чувствительность сывороток в реакции агглютинации, что характеризуется конечным титром сывороток не менее чем 1:320-1:640.Inactivation of sera at 60-65 ^o C for 1-1.5 hours with the addition of sodium thiolate to a concentration of 1: 10000 provides a large degree of disinfection. When conducting serological studies, preliminary disinfection of the material is carried out - blood serum is disinfected by adding sodium thiolate to a concentration of 1: 10000, followed by heating them at 56 ^o C for 30 minutes (Safety of work with microorganisms of I-II pathogenicity groups. Sanitary rules SP 1.2.011- 94. Goskomsanepidnadzor of Russia.- M.- 1994. - C. 17) In the experiment, increasing the inactivation time to 1.5 hours gives a greater degree of safety when working with brucellosis serum. The preparation of brucella bacmass for absorption with serum by growing cultures for 70-72 hours, centrifuging, cooling the precipitate for 24-26 hours and adding physiological saline to the precipitate provides a higher degree of absorption and sensitivity of serums in the agglutination reaction compared to the prototype, which is characterized by a final titer of serum of not less than 1: 320-1: 640.

Увеличение количества бакмассы для абсорбции сывороток до 3,5-3,7•10⁹ КОЕ на 10 мл сыворотки дает возможность повысить чувствительность сывороток за счет более интенсивного блокирования перекрестных антител.An increase in the amount of backbone for serum absorption up to 3.5-3.7 • 10 ⁹ CFU per 10 ml of serum makes it possible to increase the sensitivity of sera due to more intensive blocking of cross antibodies.

Таким образом, между отличительными признаками и целью изобретения существует причинно-следственная связь. Возможность практического осуществления заявляемого способа с использованием полной совокупности общих и отличительных признаков подтверждается примерами конкретного выполнения. Thus, between the distinguishing features and the purpose of the invention there is a causal relationship. The possibility of practical implementation of the proposed method using the full totality of common and distinctive features is confirmed by examples of specific performance.

Пример 1. Кроликам массой 2,5-3,0 кг вводят внутривенно 2-суточную культуру бруцелл в количестве 1 мл с концентрацией для штамма бруцелла мелитензис 28 3,0•10⁸ КОЕ/мл, а для штамма бруцелла абортус 2,0•10⁸ КОЕ/мл. Через 5-7 дней животных обескровливают, сыворотку отсасывают и инактивируют при 60^oC в течение 1 ч. Параллельно выращивают культуру гетерологичного вида бруцелл для проведения абсорбции в первом случае штаммом бруцелла абортус 544, во втором - штаммом бруцелла мелитензис 28 на матрацах в течение 72 ч. Затем бакмассу смывают, центрифугируют, осадок охлаждают в течение 24 ч и добавляют к нему физиологический раствор в таком количестве, чтобы конечная концентрация бакмассы составила 3,7 •10⁹ КОЕ/мл. Полученную бакмассу в количестве 3,7•10⁹ КОЕ/мл добавляют к 10 мл сыворотки, инкубируют при 37^oC в течение 2 ч и центрифугируют. В сыворотку добавляют 0,25-0,5% фенола и перемешивают. Сыворотки готовы. При титровании полученных сывороток с добавлением бруцеллезного диагностикума реакция прошла на (++++) при максимальном разведении 1:640.Example 1. Rabbits weighing 2.5-3.0 kg are injected intravenously with a 2-day-old culture of Brucella in an amount of 1 ml with a concentration for the Brucella strain melitensis 28 3.0 • 10 ⁸ CFU / ml, and for the Brucella strain abortus 2.0 • 10 ⁸ CFU / ml. After 5-7 days, the animals are bled, the serum is aspirated and inactivated at 60 ^° C for 1 h. In parallel, a culture of a heterologous species of brucella is grown for absorption in the first case with the brucella strain abortus 544, in the second case with the brucella strain melitensis 28 on mattresses for 72 h. Then the Bakmass is washed off, centrifuged, the precipitate is cooled for 24 hours and physiological saline is added to it in such an amount that the final concentration of Bakmass is 3.7 • 10 ⁹ CFU / ml. The resulting bakmass in the amount of 3.7 • 10 ⁹ CFU / ml is added to 10 ml of serum, incubated at 37 ^o C for 2 hours and centrifuged. 0.25-0.5% phenol is added to the serum and mixed. Serums are ready. When titrating the obtained sera with the addition of brucellosis diagnosticum, the reaction passed to (++++) with a maximum dilution of 1: 640.

Пример 2. Выполняют аналогично примеру 1, за исключением того, что при иммунизации кроликов используют концентрацию бруцелла мелитензис 28 в 2,8•10⁸ КОЕ/мл, а бруцелла абортус 544 в 1,8•10⁸ КОЕ/мл вводимой суспензии антигена. Инактивацию сыворотки проводят при 62^oC в течение 1,2 ч, бакмассу выращивают в течение 70 ч, охлаждение осадка бакмассы проводят 25 ч, при перекрестной абсорбции используют концентрацию клеток штаммов бруцелла мелитензис 28 и бруцелла абортус 544 в 3,5•10⁹ КОЕ на 10 мл сыворотки. Наибольшая степень разведения при положительной реакции сыворотки составляет 1: 320.Example 2. Perform analogously to example 1, except that when immunizing rabbits using a concentration of brucella melitenzis 28 in 2.8 • 10 ⁸ CFU / ml, and brucella abortus 544 in 1.8 • 10 ⁸ CFU / ml injected suspension of antigen. Serum inactivation is carried out at 62 ^o C for 1.2 hours, the backmass is grown for 70 hours, the backbone is cooled for 25 hours, and cross-absorption is carried out using the concentration of Brucella melitensis 28 and Brucella abortus 544 strains in 3.5 • 10 ⁹ CFU per 10 ml of serum. The highest degree of dilution with a positive serum reaction is 1: 320.

Пример 3. Выполняют аналогично примеру 1, за исключением того, что при иммунизации кроликов применяют концентрацию штаммов бруцелла мелитензис 28 в 2,9•10⁸ КОЕ/мл, а бруцелла абортус 544 в 1,9•10⁸ КОЕ/мл вводимой суспензии антигена. Инактивацию сывороток проводят при 65^oC в течение 1,5 ч, бакмассу выращивают в течение 71 ч, охлаждение осадка бакмассы проводят 26 ч, а при перекрестной абсорбции используют концентрацию клеток штаммов бруцелла мелитензис 28 и бруцелла абортус 544 в 3,6•10⁹ КОЕ на 10 мл сыворотки. При титровании полученных сывороток получаем их максимальное разведение, равное 1: 640.Example 3. Perform analogously to example 1, except that when immunizing rabbits, the concentration of strains of Brucella melitensis 28 in 2.9 • 10 ⁸ CFU / ml, and Brucella abortus 544 in 1.9 • 10 ⁸ CFU / ml of the introduced antigen suspension are used. . Serum inactivation is carried out at 65 ^o C for 1.5 hours, the backmass is grown for 71 hours, the backbone is cooled for 26 hours, and cross-absorption is carried out using the concentration of Brucella melitensis 28 and Brucella abortus 544 cell strains in 3.6 • 10 ⁹ CFU per 10 ml of serum. When titrating the obtained sera, we obtain their maximum dilution equal to 1: 640.

Выбор граничных значений заявляемых параметров предлагаемого способа обусловлен тем, что уменьшение концентраций иммунизирующего агента-штамма бруцелла мелитензис 28 ниже 2,8•10⁸ КОЕ/мл или штамма бруцелла абортус 544 ниже 1,8•10⁸ КОЕ/мл вводимой суспензии приводит к недостаточному образованию антител, что в конечном итоге снижает чувствительность получаемой сыворотки, а увеличение иммунизирующих доз выше 3,0•10⁸ КОЕ/мл для штамма бруцелла мелитензис 28 и для штамма бруцелла абортус 544 выше 2,0•10⁸ КОЕ/мл вводимой суспензии нецелесообразно, так как заявленные пределы концентраций используемых штаммов обеспечивают достаточную степень иммунизации животных, в противном случае дальнейшее повышение иммунизирующих доз приведет к недифференцированному иммунологическому ответу.The choice of the boundary values of the claimed parameters of the proposed method is due to the fact that a decrease in the concentration of the immunizing agent-strain of brucella melitensis 28 below 2.8 • 10 ⁸ CFU / ml or strain of brucella abortus 544 below 1.8 • 10 ⁸ CFU / ml of the introduced suspension leads to insufficient the formation of antibodies, which ultimately reduces the sensitivity of the obtained serum, and an increase in immunizing doses above 3.0 • 10 ⁸ CFU / ml for the brucella strain melitensis 28 and for the brucella strain abortus 544 above 2.0 • 10 ⁸ CFU / ml of the administered suspension is inappropriate , So as the claimed concentration limits of the strains used provide a sufficient degree of immunization of animals, otherwise a further increase in immunizing doses will lead to an undifferentiated immunological response.

Заявленные пределы по времени и температуре инактивации сыворотки, а также по времени выращивания и охлаждения бакмассы необходимы и достаточны для обеззараживания сыворотки и созревания бакмассы для перекрестной абсорбции. The stated limits on the time and temperature of inactivation of serum, as well as on the time of growing and cooling back mass are necessary and sufficient for disinfection of serum and maturation of back mass for cross absorption.

Уменьшение концентрации бакмассы для перекрестной абсорбции сывороток ниже 3,5•10⁹ КОЕ на 10 мл сыворотки приводит к снижению степени абсорбции и как следствие чувствительности ее. А при увеличении количества бакмассы при перекрестной абсорбции выше, чем 3,7•10⁹ КОЕ на 10 мл сыворотки, возникает опасность получения неспецифических реакций.A decrease in the concentration of bacmass for cross-absorption of serums below 3.5 • 10 ⁹ CFU per 10 ml of serum leads to a decrease in the degree of absorption and, as a consequence, its sensitivity. And with an increase in the amount of Bakmass during cross-absorption higher than 3.7 • 10 ⁹ CFU per 10 ml of serum, there is a risk of non-specific reactions.

Таким образом, изобретение реально осуществимо, его использование позволяет организовать получение моноспецифических сывороток, чувствительность которых в 2-4 раза выше, чем сывороток, получаемых по способу-прототипу. Thus, the invention is feasible, its use allows you to organize the production of monospecific sera, the sensitivity of which is 2-4 times higher than the serum obtained by the prototype method.

Claims

A method for producing monospecific sera for diffepentsiatsii causative agents of brucellosis, comprising immunizing rabbits strains of Brucella species melitenzis and abortions 544 single dose intravenously, bleeding the animals after 5 7 days, cross absorption serum bacterial mass heterologous species Brucella with subsequent incubation at 37 ^o C for 2 hours recovery of serum by centrifugation, dilution in phenol solution and packaging, characterized in that when immunizing rabbits as an immunizing a cient use a new strain of Brucella melitenzis 28, wherein it infecting dose is 2,8 3,0 • August ¹⁰ colony forming units (CFU) per 1 ml of physiological saline, and abortions during infection Brucella infection dose is 544 1,8 2,0 • 10 ⁸ CFU per 1 ml of suspension, after bleeding the animals, the serum is inactivated at 60 65 ^o C for 1 1.5 hours, the bacterial mass of brucella heterologous strain for absorption is prepared by growing cultures for 70 72 hours, centrifugation, cooling the sediment for 24 26 h and adding to the sediment physiologically one solution under absorption cross serum weight heterologous bacterial species Brucella it is used in an amount of 3,5 3,7 • 10 ⁹ cfu per 10 ml of serum.