RU2708891C1 - Vaccine for rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis - Google Patents
Vaccine for rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2708891C1 RU2708891C1 RU2018122231A RU2018122231A RU2708891C1 RU 2708891 C1 RU2708891 C1 RU 2708891C1 RU 2018122231 A RU2018122231 A RU 2018122231A RU 2018122231 A RU2018122231 A RU 2018122231A RU 2708891 C1 RU2708891 C1 RU 2708891C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- coronavirus
- adhesive
- att25
- antigens
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/15—Reoviridae, e.g. calf diarrhea virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к ветеринарной микробиологии и вирусологии.The present invention relates to veterinary microbiology and virology.
Вакцина содержит активное вещество и целевые добавки.The vaccine contains the active substance and targeted additives.
В качестве активного вещества вакцина содержит смесь инактивированной суспензии штамма ротавируса РМ, семейства Reoviridae, рода Rotavirus (справка о депонировании №193/19 от 04.02.2004 г), инактивированной суспензии штамма коронавируса КЛ-2 семейства Coronaviridae, рода Coronavirus (справка о депонировании №3064/37 от 02.06.1989 г), с активностью каждого из вирусных штаммов 105,5 - 106,5 ТЦД50 в см3 вакцины и адгезивных антигенов бактерий Escherichia coli, взятых в равном соотношении с концентрацией 50-100 млдр. микробных клеток в 1 см3 вакцины.As an active substance, the vaccine contains a mixture of an inactivated suspension of a strain of rotavirus PM, family Reoviridae, genus Rotavirus (certificate of deposit No. 193/19 of 02/04/2004), an inactivated suspension of a strain of coronavirus KL-2 of the family Coronaviridae, genus Coronavirus (certificate of deposit No. 3064/37 dated 06/02/1989 g), with the activity of each of the viral strains 10 5.5 - 10 6.5 TCD 50 in cm 3 of vaccine and adhesive antigens of Escherichia coli bacteria taken in equal proportion with a concentration of 50-100 mld. microbial cells in 1 cm 3 vaccine.
Вакцину рекомендуется применять в хозяйствах, неблагополучных по таким кишечным заболеваниям вирусно-бактериальной этиологии, как рота-, коронавирусная и колибактериозная инфекция телят.The vaccine is recommended for use in farms that are unsuccessful for intestinal diseases of viral and bacterial etiology, such as rota-, coronavirus and colibacteriosis of calves.
Колибактериоз (эшерихиоз) - широко распространенное во всем мире инфекционное заболевание новорожденных сельскохозяйственных животных, проявляющееся в виде диареи, сепсиса и сопровождающееся высокой заболеваемостью, смертностью и снижением привесов у переболевших животных.Colibacteriosis (Escherichiosis) is a worldwide widespread infectious disease of newborn farm animals, manifested in the form of diarrhea, sepsis and accompanied by high morbidity, mortality and a decrease in weight gain in sick animals.
С другой стороны, массовые энтериты и энтероколиты новорожденных телят, обусловленные рота-, коронавирусами имеют высокую инцидентность с E.coli. В этой связи, важное значение придается активной иммунизации коров-матерей с целью получения от них молозива и молока с высоким уровнем антител против рота-, коронавируса и колибактериоза дляOn the other hand, mass enteritis and enterocolitis of newborn calves caused by rota-, coronaviruses have a high incidence with E. coli. In this regard, great importance is attached to the active immunization of mother cows with the aim of obtaining from them colostrum and milk with a high level of antibodies against rota-, coronavirus and colibacteriosis for
выпаивания новорожденным телятам и создания у них пассивного иммунитета к данным инфекциям.feeding newborn calves and creating passive immunity to these infections.
Адгезивность микроорганизмов один из основных факторов патогенности. 60% циркулирующих в хозяйствах штаммов E.coli - возбудителей колибактериоза обладают различными адгезивными антигенами и их сочетаниями. Наиболее часто у телят обнаруживают адгезины К99, F41, Att25. Активная защита от факторов адгезии микроорганизмов с помощью специфических препаратов может быть особенно эффективна при кишечных инфекциях животных, особенно вызываемых E.coli.Microbial adhesion is one of the main pathogenicity factors. 60% of E. coli strains circulating on farms, the causative agents of colibacteriosis, have various adhesive antigens and their combinations. Adhesins K99, F41, Att25 are most often found in calves. Active protection against adhesion factors of microorganisms with the help of specific drugs can be especially effective for intestinal infections of animals, especially those caused by E. coli.
В нашей стране были предложены серии коммерческих сорбированных инактивированных противовирусных вакцин - против ротавирусного энтерита телят «РОТА-ВАК ВИЭВ», вакцина инактивированная гидроокисьалюминиевая против коронавирусного энтерита крупного рогатого скота «КОР-ВАК ВИЭВ», вакцина ассоциированная инактивированная против ротавирусного, коронавирусного энтеритов телят и вирусной диареи крупного рогатого скота, «РОДИКОР-ВАК ВИЭВ» (Гулюкин М.И., Мникова Л.А., Ишкова Т.А., Соколова Н.Л., Жидков С.А. Разработка и внедрение в практику эффективной системы диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. 2015. Т. 78. С. 179-186).In our country, a series of commercial adsorbed inactivated antiviral vaccines were proposed - against rotavirus enteritis of calves "ROTA-WAC VIEV", vaccine inactivated aluminum hydroxide against coronavirus enteritis in cattle "KOR-WAK VIEV", vaccine associated inactivated against rotavirus and coronavirus diarrhea of cattle, “RODICOR-VAK VIEV” (Gulukin MI, Mnikova LA, Ishkova TA, Sokolova NL, Zhidkov SA Development and implementation in practice of effective su- diagnostics and prophylaxis of viral gastro-intestinal diseases in cattle // Proceedings of the All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine. YR Kovalenko. 2015. T. 78. S. 179-186).
Разработан ряд вакцин на основе адгезивных антигенов. В частности, в ВИЭВ предложена вакцина против колибактериоза молодняка сельскохозяйственных животных на основе адгезивных антигенов К99, К88ав, К88ас, К88ад, F41, Атт25, 987Р, а также конъюгата термостабильного (ST) и термолабильного (LT) энтеротоксинов эшерихий (Соколова Н.А., Головко А.Н., Курашвили Т.К. и др. Способ получения вакцины против колибактериоза сельскохозяйственных животных, патент RU 2053792, С1, 10.02.1996).A number of vaccines based on adhesive antigens have been developed. In particular, the VIEV proposed a vaccine against colibacteriosis of young farm animals based on adhesive antigens K99, K88av, K88as, K88ad, F41, Att25, 987P, as well as thermostable (ST) and thermolabile (LT) enterotoxin esherichia conjugate (Sokolova N.A. , Golovko A.N., Kurashvili T.K. et al. A method for producing a vaccine against colibacteriosis of farm animals, patent RU 2053792, C1, 02/10/1996).
Вакцины обладали высокими иммуногенными свойствами и широкимVaccines had high immunogenic properties and wide
спектром действия на отдельных возбудителей колибактериоза молодняка сельскохозяйственных животных - телят, поросят и ягнят.spectrum of action on individual pathogens of colibacillosis of young farm animals - calves, piglets and lambs.
Известна поливалентная вакцина с адгезивными антигенами против колибактериоза (эшерихиоза) телят, которая включает 50% антигенной части E.coli А20 (Атт25), E.coli F41, E.coli К88 (F4) E.coli К99 (F5) и 50% адъюванта Montanide ISA-206 (Амосова Л.А., Ломако Ю.В., Новикова О.Н., Зубовская И.В., Карпович В.К., Пукшлис А.И. Экспериментальные исследования по разработке технологии изготовления и применения вакцины поливалентной с адгезивными антигенами против колибактериоза (эшерихиоза) телят / Эпизоотология, иммунобиология, фармакология, санитария. - 2015. - №1. - С. 3-7.).A multivalent vaccine with adhesive antigens against colibacteriosis (Escherichiosis) of calves is known, which includes 50% of the antigenic part of E.coli A20 (Att25), E.coli F41, E.coli K88 (F4) E.coli K99 (F5) and 50% adjuvant Montanide ISA-206 (Amosova L.A., Lomako Yu.V., Novikova O.N., Zubovskaya I.V., Karpovich V.K., Pukslis A.I. Experimental studies on the development of technology for the manufacture and use of the multivalent vaccine with adhesive antigens against colibacteriosis (Escherichiosis) of calves / Epizootology, immunobiology, pharmacology, sanitation. - 2015. - No. 1. - S. 3-7.).
Была сконструированна ассоциированная вакцина против коронавирусной и ротавирусной инфекции, колибактериоза и клостридиоза телят - которая содержит инактивированные рота и коронавирусы крупного рогатого скота, инактивированные адгезинпродуцирующие штаммы E.coli с антигенами К99 и F41, бета-токсоид Clostridium perfringens тип С (штамм ВТ).An associated vaccine was developed against coronavirus and rotavirus infection, colibacteriosis and calostridiosis of calves - which contains inactivated bovine rotaviruses and coronaviruses, inactivated adhesion-producing E. coli strains with K99 and F41 antigens, Clostridium perfringens type C beta beta toxoid (C).
Все имеющиеся коммерческие вакцины включают в свой состав неполный спектр возбудителей диареи новорожденных телят, либо не все специфические адгезивные антигены, характерные для возбудителей эшерихиозов. В указанных вакцинах в качестве бактериального компонента использована инактивированная клеточная суспензия, представляющая смесь антигенов клеточной стенки, не отвечающих за колонизирующую способность бактерий.All available commercial vaccines include an incomplete spectrum of causative agents of diarrhea of newborn calves, or not all specific adhesive antigens characteristic of causative agents of Escherichiosis. In these vaccines, an inactivated cell suspension is used as a bacterial component, which is a mixture of cell wall antigens that are not responsible for the colonizing ability of bacteria.
Известна также ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая вакцина против рота-, -корона, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят (Гаффаров Х.З., Спиридонов Ч.Н., Иванов А.В. и др. патент RU 2137499, С1, 10.02.2000)The associated inactivated aluminum hydroxide vaccine against rota-, corona, herpesvirus and Escherichia diarrhea of newborn calves is also known (Gaffarov Kh.Z., Spiridonov Ch.N., Ivanov A.V. et al. Patent RU 2137499, C1, 10.02.2000)
Ассоциированная вакцина имеет низкую антигенную и иммуногенную активность вакцинных штаммов, и как следствие отсутствие иммунитета уThe associated vaccine has low antigenic and immunogenic activity of vaccine strains, and as a result, the lack of immunity in
животных к эшерихиозу, протекающему в форме колидиареи и колиэнтеротоксемии.animals to Escherichiosis, proceeding in the form of colidia and colienterotoxemia.
Наиболее близкой по технической сущности, выбранной в качестве прототипа, является вакцина инактивированная против вирусной диареи, рота-, короновирусной болезни и эшерихиоза крупного рогатого скота (Патент RU №2403063 C1; А61К 39/295, А61Р 31/00; 28.08.2009) (прототип).The closest in technical essence, selected as a prototype, is a vaccine inactivated against viral diarrhea, rota-, coronovirus disease, and bovine Escherichiosis (Patent RU No. 2403063 C1; A61K 39/295, A61P 31/00; 08/28/2009) ( prototype).
Комбинированная вакцина имеет относительно невысокий титр иммуногенной активности входящих в ее состав вирусных суспензий, наличие клеток эшерихий и перегруженности антигенами ее состава.The combined vaccine has a relatively low titer of immunogenic activity of the viral suspensions included in its composition, the presence of Escherichia cells and congestion with antigens of its composition.
Задачей исследований являлось - получение вакцины с высокими иммуногенными свойствами, расширенным профилактическим спектром действия на кишечные инфекции телят вирусно-бактериальной этиологии.The objective of the research was to obtain a vaccine with high immunogenic properties, an expanded prophylactic spectrum of action on intestinal infections of calves of viral and bacterial etiology.
Нами предложена вакцина, ассоциированная инактивированная против ротавирусного, коронавирусного энтерита и эшерихиоза крупного рогатого скота.We have proposed a vaccine associated inactivated against rotavirus, coronavirus enteritis and bovine Escherichiosis.
Сравнительный анализ заявляемого способа получения вакцины и прототипа показывает, что предлагаемая вакцина отличается тем, что в ее составе объединены очищенные адгезивные антигены К99, F41, Атт25 с вирусным материалом, а сами адгезины получены при помощи, увеличенной до 1,5-3,0 М концентрации раствора фосфатно-мочевинного буфера.A comparative analysis of the proposed method for producing the vaccine and the prototype shows that the proposed vaccine is characterized in that it combines the purified adhesive antigens K99, F41, Att25 with viral material, and the adhesins themselves are obtained using increased to 1.5-3.0 M concentration of a solution of phosphate-urea buffer.
Сущность изобретения заключается в следующем.The invention consists in the following.
В состав вакцины входят ротавирус крупного рогатого скота штамм РМ, выращенный в перевиваемой культуре клеток МДВК или ЛЭК; коронавирус крупного рогатого скота, штамм КЛ-2, выращенный в тех же культурах и очищенные адгезины штаммов E.coli - К99, F41, Att25. Вакцина инактивирована формалином и сорбирована на гидроокиси алюминия.The composition of the vaccine includes cattle rotavirus strain PM, grown in a transplanted cell culture of MDVC or LEK; cattle coronavirus, strain KL-2 grown in the same cultures and purified adhesins of E. coli strains - K99, F41, Att25. The vaccine is inactivated by formalin and adsorbed onto aluminum hydroxide.
Вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота представляет собой жидкость светло-желтого цвета, при хранении образуется рыхлый белый осадок, легко разбивающийся в гомогенную взвесь при встряхивании.The vaccine against rota-, coronavirus infection, and bovine Escherichiosis is a light yellow liquid; during storage, a loose white precipitate forms, which easily breaks up into a homogeneous suspension with shaking.
Вакцина стабильна и сохраняет активность при температуре 2-8°C не менее 12 мес.The vaccine is stable and remains active at a temperature of 2-8 ° C for at least 12 months.
Вакцину вводят стельным животным двукратно за 40 и 20 дней до отела в объеме 5 мл подкожно в область средней трети шеи или в паховую складку.The vaccine is administered to pregnant animals twice for 40 and 20 days before calving in a volume of 5 ml subcutaneously in the middle third of the neck or in the inguinal fold.
Пример 1.Example 1
Технологический процесс состоит из нескольких стадий: стадии получения вирусного и эшерихиозного компонентов, добавление адъюванта, смешивание всех компонентов вакцины с последующей расфасовкой готовой продукции.The technological process consists of several stages: the stage of obtaining the viral and Escherichia components, the addition of an adjuvant, the mixing of all components of the vaccine with the subsequent packaging of the finished product.
А. Стадия получения вирусного компонента вакцины.A. Stage of obtaining the viral component of the vaccine.
Культивирование рота и коронавирусов проводят в культурах клеток ЛЭК или МДВК одномоментно или в несколько циклов с постепенным накоплением вирусного материала, хранят до изготовления вакцины при -10-20°C. Каждую партию рота-, коронавирусов проверяют на стерильность путем высева на питательные среды, и исследуют активность в ИФА (не ниже 1:16) для рота-, и в РГА (не ниже 1:512) для коронавируса. Суспензии, содержащие отдельно рота и коронавирус инактивируют формалином в конечной концентрации 0,05%.The cultivation of the company and coronaviruses is carried out in LEK or MDVK cell cultures simultaneously or in several cycles with the gradual accumulation of viral material, stored until the vaccine is manufactured at -10-20 ° C. Each batch of rota-, coronaviruses is checked for sterility by plating on nutrient media, and activity is studied in ELISA (not less than 1:16) for rota- and in RGA (not less than 1: 512) for coronavirus. Suspensions containing a separate company and coronavirus inactivate formalin at a final concentration of 0.05%.
После инактивации антигенная активность суспензии штамма ротавируса РМ должна составлять 105,5 - 106,5 ТЦД50 в см3 вакцины, суспензии штамма коронавируса КЛ-2 105,5 - 106,5 ТЦД50 в см3 вакцины.After inactivation, the antigenic activity of a suspension of a strain of rotavirus PM should be 10 5.5 - 6.5 6.5 TCD 50 in cm 3 vaccines, suspensions of a strain of coronavirus KL-2 10 5.5 - 10 6.5 TCD 50 in cm 3 of vaccine.
Б. Стадия получения бактериального компонента вакцины.B. The stage of obtaining the bacterial component of the vaccine.
Отбирают штаммы-продуценты адгезивных антигенов К99, F41, Att25 (референтные или полевые культуры E.coli), реагирующие в реакции агглютинации со стандартными моноспецифическими антиадгезивными сыворотками в титрах 1:320 - 1:1280 и выше, обладающие иммуногенными свойствами. Засевают в бульон Хоттингера или любую другую среду, способствующую экспрессии адгезивных антигенов. Культивирование проводят при 37-38°C в течение 6-8 ч при шюттулировании. ПолученнуюSelecting strains producing adhesive antigens K99, F41, Att25 (reference or field cultures of E. coli) that react in the agglutination reaction with standard monospecific anti-adhesive serums in titers of 1: 320 - 1: 1280 and higher, possessing immunogenic properties. Inoculated into Hottinger broth or any other medium that promotes the expression of adhesive antigens. Cultivation is carried out at 37-38 ° C for 6-8 hours when shuttling. Received
бульонную культуру центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 30-40 мин при 4-10°C. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок ресуспендируют в 1,5-3,0 М растворе фосфатно-мочевинного буфера до концентрации 50×109-100×109 микр. кл./мл. Полученную суспензию прогревают в водяной бане при 60-64°C в течение 20-25 мин при периодическом встряхивании (60 U/мин), после чего охлаждают и центрифугируют при 10000-15000 об/мин в течение 10-20 мин.the broth culture is centrifuged at 3000-5000 rpm for 30-40 minutes at 4-10 ° C. The supernatant is removed and the precipitate resuspended in a 1.5-3.0 M solution of phosphate-urea buffer to a concentration of 50 × 10 9 -100 × 10 9 mic. cells / ml The resulting suspension is heated in a water bath at 60-64 ° C for 20-25 minutes with periodic shaking (60 U / min), after which it is cooled and centrifuged at 10,000-15,000 rpm for 10-20 minutes.
Супернатант сливают в стерильную посуду, инактивируют путем добавления 0,3-0,4% формалина и выдерживают при 37-38°C в течение суток, после чего проверяют на стерильность. Добавляют гидроокись алюминия до конечной концентрации 25%.The supernatant is poured into a sterile dish, inactivated by adding 0.3-0.4% formalin and kept at 37-38 ° C for 24 hours, after which it is checked for sterility. Aluminum hydroxide is added to a final concentration of 25%.
В. Стадия объединения вирусного и бактериального компонентов вакцины.B. Stage of combining the viral and bacterial components of the vaccine.
Для получения комплексного препарата, приготовленные указанным способом компоненты адгезинов и вирусов берут в равных соотношениях (1:1:1) и смешивают в стерильной посуде, т.е. в 1 см3 вакцины содержится 1 часть суспензии штамма ротавируса РМ, 1 часть штамма коронавируса КЛ-2 и 1 часть адгезивных антигенов бактерий Escherichia coli. В свою очередь адгезивные антигены бактерий Escherichia coli К99, F41, Атт25 тоже берутся в равном соотношении.To obtain a complex preparation, the adhesin and virus components prepared in this way are taken in equal proportions (1: 1: 1) and mixed in a sterile container, i.e. 1 cm 3 of the vaccine contains 1 part of a suspension of a strain of rotavirus PM, 1 part of a strain of coronavirus KL-2 and 1 part of adhesive bacteria antigens of Escherichia coli. In turn, the adhesive antigens of bacteria Escherichia coli K99, F41, Att25 are also taken in equal proportions.
Приготовленную вакцину расфасовывают в стерильные стеклянные флаконы и герметично закрывают. Хранят 12 мес. при температуре +2-8°C.The prepared vaccine is packaged in sterile glass bottles and sealed. Store 12 months. at a temperature of + 2-8 ° C.
Способы получения адгезивных антигенов для вакцины с апробацией на лабораторных мышах.Methods for producing adhesive antigens for a vaccine tested in laboratory mice.
Вариант 1. Способ получения вакцины осуществляется, как описано выше, но для отделения от бактерий адгезивных антигенов используют 1,5 М концентрацию раствора фосфатно-мочевинного буфера.Option 1. The method of obtaining the vaccine is carried out as described above, but to separate the adhesive antigens from bacteria, use a 1.5 M concentration of a solution of phosphate-urea buffer.
Полученный препарат при однократном введении белым мышам стимулирует выработку антител к адгезинам в титрах 1:160-1:640 (в реакции агглютинации).The resulting preparation, when administered once to white mice, stimulates the production of antibodies to adhesins in titers of 1: 160-1: 640 (in the agglutination reaction).
Вариант 2. Способ получения вакцины осуществляется, как описано выше, но для получения отдельных адгезивных антигенов используют 2,0 М концентрацию раствора фосфатно-мочевинного буфера.Option 2. The method of obtaining the vaccine is carried out as described above, but to obtain individual adhesive antigens using a 2.0 M concentration of a solution of phosphate-urea buffer.
Такой препарат при однократном введении белым мышам стимулирует выработку антител к адгезинам в титрах 1:640-1:1280 (в РА).Such a preparation, when administered once to white mice, stimulates the production of antibodies to adhesins in titers of 1: 640-1: 1280 (in RA).
Вариант 3. Способ получения вакцины осуществляется, как описано выше, но для получения очищенных адгезивных антигенов используют 3,0 М концентрацию раствора фосфатно-мочевинного буфера.Option 3. The method of obtaining the vaccine is carried out as described above, but to obtain a purified adhesive antigens using a 3.0 M concentration of a solution of phosphate-urea buffer.
Пример 2. Оценка антигенной активности вакцины на лабораторных животных.Example 2. Evaluation of the antigenic activity of the vaccine in laboratory animals.
Полученный препарат при однократной иммунизации белых мышей стимулирует выработку антител к адгезинам в титрах 1:320-1:1280 (в РА).The resulting preparation during a single immunization of white mice stimulates the production of antibodies to adhesins in titers of 1: 320-1: 1280 (in RA).
В опыте на крысах (Таб. 1) антигены входящие в вакцину вводили без адъювантов в трех вариантах ротавирус (РВ) и адгезивные антигены E.coli, коронавирус (KB) и адгезивные антигены E.coli, а также все антигены вместе подкожно в область спины по 3 мл дважды с интервалом 20 дней.In the rat experiment (Table 1), the antigens included in the vaccine were administered without adjuvants in three variants of rotavirus (PB) and adhesive antigens of E. coli, coronavirus (KB) and adhesive antigens of E. coli, as well as all antigens subcutaneously together in the back 3 ml twice with an interval of 20 days.
Кровь брали через 14, 21 и 28 дней после второй иммунизации и исследовали на наличие специфических антител методом ИФА для вирусов и РА для адгезивных антигенов. На всех сроках исследования отмечается повышение титров антител к антигенным компонентам вакцины. К вируснымBlood was taken 14, 21 and 28 days after the second immunization and examined for the presence of specific antibodies by ELISA for viruses and RA for adhesive antigens. At all stages of the study, an increase in titers of antibodies to antigenic components of the vaccine was noted. To viral
компонентам вакцины совместно с адгезивными антигенами E.coli, титры достигали величины 1:6400 к РВ и 1:400 к КР со снижением к 28-м суткам. Титры к адгезивным антигенам при совместном применении с вирусами были к К99 1:320, к F41 1:80 и Att25 1:1280, с постепенным снижением к 28-м суткам.components of the vaccine together with adhesive antigens of E. coli, titers reached a value of 1: 6400 to RV and 1: 400 to KR with a decrease by the 28th day. Titles to adhesive antigens when used together with viruses were to K99 1: 320, to F41 1:80 and Att25 1: 1280, with a gradual decrease by the 28th day.
Морским свинкам и кроликам трехвалентную вакцину с адъювантом вводили внутримышечно двукратно с интервалом 7 дней. Через 14 дней после первой и второй иммунизации брали кровь для определения антител к компонентам вакцины.Guinea pigs and rabbits were given the trivalent vaccine with adjuvant intramuscularly twice with an interval of 7 days. 14 days after the first and second immunization, blood was taken to determine antibodies to the components of the vaccine.
Результаты по изучению антигенных свойств трехвалентной вакцины на морских свинках и кроликах показали, что введение вакцины животным стимулирует образование специфических антител против всех компонентов вакцины (Таб. 2). Установлено, что гидроокись алюминия является эффективным адъювантом при иммунизации лабораторных животных.The results of a study of the antigenic properties of the trivalent vaccine in guinea pigs and rabbits showed that administration of the vaccine to animals stimulates the formation of specific antibodies against all components of the vaccine (Table 2). It has been established that aluminum hydroxide is an effective adjuvant in the immunization of laboratory animals.
Так, при исследовании сыворотки крови морских свинок и кроликов, иммунизированных вакциной, методом иммуноферментного анализа установлено следующее: титры антител к рота,- и коронавирусам после двух вакцинаций выросли до значения 1:1600 - 1:3200 при начальных показаниях в среднем 1:200. Титры антител к адгезивным антигенам E.coli в РА на 14 день после второй иммунизации у морских свинок и кроликов достигали для К99 1:80 и 1:960, для F41 1:448 и 1:960, Att25 1:1296 и 1:800 соответственно. Полученные результаты свидетельствовали о том, что изготовленнаяSo, when examining the blood serum of guinea pigs and rabbits immunized with the vaccine by enzyme-linked immunosorbent assay, the following was established: titers of antibodies to the company, and to the coronaviruses after two vaccinations increased to a value of 1: 1600 - 1: 3200 with an initial reading of an average of 1: 200. Antibody titers to E. coli adhesive antigens in RA on day 14 after the second immunization in guinea pigs and rabbits reached for K99 1:80 and 1: 960, for F41 1: 448 and 1: 960, Att25 1: 1296 and 1: 800 respectively. The results obtained indicated that the fabricated
лабораторная серия вакцины характеризовалась выраженными антигенными свойствами.the laboratory vaccine series was characterized by pronounced antigenic properties.
Пример 3. Производственное испытание экспериментальных серий вакцины в опытах на коровах.Example 3. Production test of experimental series of vaccines in experiments on cows.
Иммуногенные свойства ассоциированной вакцины изучались на стельных коровах и телятах в хозяйствах Вологодской области в 2015-2017 гг. В период испытания ассоциированной вакциной было иммунизировано 76 стельных коров, контрольная группа состояла из 23 голов.The immunogenic properties of the associated vaccine were studied on pregnant cows and calves in the farms of the Vologda Oblast in 2015-2017. During the trial, 76 pregnant cows were immunized with the associated vaccine; the control group consisted of 23 animals.
Вакцину вводили животным за 40 и 20 дней до отела в объеме 5 - 6 мл в область шеи. У животных до введения вакцины, за 40 и 20 дней до предполагаемого отела отбирали пробы сывороток крови, а после отела на 1, 2 и 3 день отбирали пробы молозива. Сыворотки крови и фекалии телят отбирали на 3 и 7 день для исследования на наличие антител к рота-, и коронавирусам КРС и бактериальным компонентам вакцины. Результаты приведены в (Таб. 3).The vaccine was administered to animals 40 and 20 days before calving in a volume of 5-6 ml in the neck. In animals before vaccine administration, 40 and 20 days before the expected calving, blood serum samples were taken, and after calving, colostrum samples were taken on days 1, 2, and 3. Blood serum and feces of calves were selected on days 3 and 7 for testing for the presence of antibodies to rotavirus, and cattle coronaviruses and bacterial components of the vaccine. The results are shown in (Table 3).
Установлено, что иммунизация стельных коров существенно влияет на накопление специфических антител в крови и молозиве животных и не оказывает отрицательного воздействия на физиологические показатели организма. Так, перед вакцинацией титр антител в пробах сыворотки кровиIt was established that immunization of pregnant cows significantly affects the accumulation of specific antibodies in the blood and colostrum of animals and does not adversely affect the physiological parameters of the body. So, before vaccination, the titer of antibodies in serum samples
коров равнялся 1:400-1:800 для вирусов и 1:10-1:80 для адгезинов, за 20 дней перед отелом значение титров возросло до 1:1600-1:3200 для вирусов и до 1:278-1:1105 для адгезинов.cows was 1: 400-1: 800 for viruses and 1: 10-1: 80 for adhesins, 20 days before calving, the titer increased to 1: 1600-1: 3200 for viruses and up to 1: 278-1: 1105 for adhesins.
В молозиве первого дня отмечали наивысший титр специфических антител. Так, к рота- и коронавирусам титры антител достигали величины - 1:25600, к адгезивному антигену К99-1:3595, к F41-1:2324, к Att25-1:7498.In colostrum of the first day, the highest titer of specific antibodies was noted. So, to the rota and coronaviruses, antibody titers reached a value of 1: 25600, to the adhesive antigen K99-1: 3595, to F41-1: 2324, to Att25-1: 7498.
По сравнению с молозивом от контрольных животных титры антител к адгезинам выросли в 17-268 раз.Compared to colostrum from control animals, the titers of antibodies to adhesins increased by 17-268 times.
В молозиве 2 и 3-го дня антител содержалось значительно меньше, но их титры все равно превышали контрольные значения в 8-100 раз.Colostrum on the 2nd and 3rd day of antibodies contained significantly less antibodies, but their titers still exceeded the control values by 8-100 times.
Пример 4. Производственное испытание экспериментальных серий вакцины в опытах на телятах.Example 4. Production test of experimental series of vaccines in experiments on calves.
Иммуногенные свойства вакцины определяли также по степени заболеваемости новорожденных телят, полученных от вакцинированных и контрольных коров. Молозиво выпаивали телятам через 2-4 часа после рождения. За телятами вели наблюдение и ежедневно клинически обследовали. При этом учитывали количество специфических антител, получаемых животным с молозивом матери, частоту, продолжительность, тяжесть болезни телят. В результате проведенных исследований, установлена прямая коррелятивная связь между количеством антител в молозиве коров и наличием их в сыворотке крови и фекалиях телят, которым выпаивали иммунное молозиво. Так, в сыворотке крови 3 дневных телят от иммунизированных коров титры антител против адгезинов К99, F41, Att25 были соответственно в 13, 10 и 32 раза выше, чем у контрольных животных (Таб. 4). Фекалии телят, которым выпаивали молозиво от вакцинированных коров, содержали антитела в 65% случаев, а в фекалиях телят контрольной группы антитела выявляли лишь у одного теленка. Титры копроантител к адгезивным антигенам у телят от иммунизированных коров в 6-28 раз превышали титры у контрольных животных.The immunogenic properties of the vaccine were also determined by the degree of incidence of newborn calves obtained from vaccinated and control cows. Colostrum was fed to calves 2-4 hours after birth. The calves were monitored and clinically examined daily. In this case, the number of specific antibodies obtained by the animal with colostrum of the mother, the frequency, duration, severity of calf disease, was taken into account. As a result of the studies, a direct correlative relationship was established between the number of antibodies in the colostrum of cows and their presence in the blood serum and feces of calves fed with immune colostrum. So, in the serum of 3 day old calves from immunized cows, antibody titers against adhesins K99, F41, Att25 were 13, 10, and 32 times higher than in control animals, respectively (Table 4). The feces of calves fed colostrum from vaccinated cows contained antibodies in 65% of cases, and only one calf showed antibodies in the feces of calves in the control group. The titers of coproantibodies to adhesive antigens in calves from immunized cows were 6-28 times higher than the titers in control animals.
Около 20% телят от вакцинированных коров в течение первой неделиAbout 20% of calves from vaccinated cows during the first week
заболели с клиническим проявлением диареи, однако заболевание протекало в легкой форме, длилось не более 3-4 суток и заканчивалось выздоровлением.fell ill with the clinical manifestation of diarrhea, however, the disease proceeded in a mild form, lasted no more than 3-4 days and ended in recovery.
У контрольных телят, полученных от неиммунизированных коров, заболевание протекало длительно, в острой форме, сопровождалось тяжелой диареей с большим количеством слизи, обезвоживанием, повышением температуры тела, истощением. Из всех заболевших пало 4 теленка (17,3%).In control calves obtained from non-immunized cows, the disease proceeded for a long time, in acute form, accompanied by severe diarrhea with a lot of mucus, dehydration, fever, and exhaustion. Of all the cases, 4 calves fell (17.3%).
В результате проведенных исследований были изучены иммуногенные свойства трехвалентной вакцины против рота-коронавирусной инфекций и колиэнтеритов телят и даны характеристики защитных свойств молозива от коров вакцинированных трехвалентной вакциной и их влияние на резистентность телят.As a result of the studies, the immunogenic properties of the trivalent vaccine against rotavirus-coronavirus infections and calf colitis were studied and the protective properties of colostrum from cows vaccinated with the trivalent vaccine and their effect on calf resistance were given.
На основании полученных результатов разработана и утверждена нормативно-техническая документация на трехвалентную ассоциированную вакцину против рота-, коронавирусной инфекций и колиэнтеритов телят, включающая инструкцию по изготовлению вакцины, инструкцию по ее применению, СТО (стандарт организации ФГБНУ ВИЭВ).Based on the results, normative and technical documentation was developed and approved for the trivalent associated vaccine against rotavirus, coronavirus infections, and calf colienteritis, including instructions for the manufacture of the vaccine, instructions for its use, and STO (standard organization of the Federal State Budgetary Institution of Higher VET).
Таким образом, разработанная вакцина позволит правильно организовать мероприятия по профилактике и борьбе с желудочно-кишечными болезнями телят. Применение вакцины позволит значительно снизить заболеваемость и отход телят, облегчит течение болезни, уменьшит возможность инфицирования здоровых телят. Разработанная вакцина соответствует уровню, предъявляемого к препаратам данногоThus, the developed vaccine will make it possible to properly organize measures for the prevention and control of gastrointestinal diseases of calves. The use of the vaccine will significantly reduce the incidence and departure of calves, facilitate the course of the disease, and reduce the possibility of infection in healthy calves. The developed vaccine corresponds to the level presented to the drugs of this
предназначения, поскольку в ее состав входят рота-, коронавирусные компоненты вирусов, проявляющих высокую инцидентность в ассоциации с адгезивными штаммами E.coli, а очищенные адгезины, обеспечивают значительно более высокий уровень антител по сравнению с использованием цельной бактериальной клетки или ее других компонентов.destinations, since it contains the rota-, coronavirus components of viruses that exhibit high incidence in association with adhesive strains of E. coli, and purified adhesins provide a significantly higher level of antibodies compared to using a whole bacterial cell or its other components.
Вакцина апробирована с положительным результатом на крупном рогатом скоте в неблагополучных хозяйствах. Это подтверждает безвредность препарата, повышенную иммуногенную активность компонентов вакцины в сравнении с другими препаратами, выраженную в индукции иммунного ответа у коров-матерей к разным вариантам антигенов возбудителей, циркулирующих в хозяйстве.The vaccine was tested with a positive result on cattle in dysfunctional farms. This confirms the harmlessness of the drug, the increased immunogenic activity of the components of the vaccine in comparison with other drugs, expressed in the induction of the immune response in mother cows to different variants of the antigens of pathogens circulating on the farm.
Результаты апробации свидетельствуют о том, что вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота обладает высокими иммуногенными свойствами, обеспечивает создание напряженного колострального иммунитета и обладает протективными свойствами.Testing results indicate that the vaccine against rota-, coronavirus infection, and Escherichiosis in cattle has high immunogenic properties, provides the creation of intense colostral immunity, and has protective properties.
Учитывая широкое распространение желудочно-кишечных заболеваний в хозяйствах РФ и необходимость вакцинации большого количества животных, экономический эффект от применения разрабатываемой вакцины может быть существенным.Given the widespread spread of gastrointestinal diseases in Russian farms and the need to vaccinate a large number of animals, the economic effect of using the vaccine being developed can be significant.
Список литературыList of references
1. Гулюкин М.И., Мникова Л.А., Ишкова Т.А., Соколова Н.Л., Жидков С.А. Разработка и внедрение в практику эффективной системы диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. 2015. Т. 78. С. 179-186.1. Gulyukin M.I., Mnikova L.A., Ishkova T.A., Sokolova N.L., Zhidkov S.A. Development and implementation of an effective system for the diagnosis and prevention of viral gastrointestinal diseases in cattle // Proceedings of the All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after Ya.R. Kovalenko. 2015.V. 78.P. 179-186.
2. Сергеев В.А., Непоклонов Е.А., Алипер Т.И. и др. Вакцина инактивированная против вирусной диареи, рота-, короновирусной болезни и эшерихиоза крупного рогатого скота / патент RU №2403063 C1; А61К 39/295, А61Р 31/00, 28.08.2009. Прототип.2. Sergeev V.A., Nepoklonov E.A., Alipper T.I. et al. Inactivated vaccine against viral diarrhea, rota-, coronovirus disease, and bovine Escherichiosis / RU patent No. 2403063 C1; A61K 39/295, A61P 31/00, 08/28/2009. Prototype.
3. Соколова Н.А., Головко А.Н., Курашвили Т.К. и др. Способ получения вакцины против колибактериоза сельскохозяйственных животных / патент RU 2053792, С1, 10.02.1996.3. Sokolova N.A., Golovko A.N., Kurashvili T.K. and others. A method of obtaining a vaccine against colibacteriosis of farm animals / patent RU 2053792, C1, 02/10/1996.
4. Амосова Л.А., Ломако Ю.В., Новикова О.Н., Зубовская И.В., Карпович B.К., Пукшлис А.И. Экспериментальные исследования по разработке технологии изготовления и применения вакцины поливалентной с адгезивными антигенами против колибактериоза (эшерихиоза) телят / Эпизоотология, иммунобиология, фармакология, санитария. - 2015. - №1. - C. 3-7.4. Amosova L.A., Lomako Yu.V., Novikova O.N., Zubovskaya I.V., Karpovich V.K., Pukslis A.I. Experimental studies on the development of technology for the manufacture and use of a multivalent vaccine with adhesive antigens against colibacteriosis (Escherichiosis) of calves / Epizootology, immunobiology, pharmacology, sanitation. - 2015. - No. 1. - C. 3-7.
5. Гаффаров Х.З., Спиридонов Ч.Н., Иванов А.В. и др. Ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят / патент RU 2137499, С1, 10.02.2000.5. Gaffarov Kh.Z., Spiridonov Ch.N., Ivanov A.V. and other Associated vaccine against rota-, corona-, herpes virus and Escherichia diarrhea of newborn calves / patent RU 2137499, C1, 02/10/2000.
Claims (2)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018122231A RU2708891C1 (en) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | Vaccine for rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018122231A RU2708891C1 (en) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | Vaccine for rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2708891C1 true RU2708891C1 (en) | 2019-12-12 |
Family
ID=69006471
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018122231A RU2708891C1 (en) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | Vaccine for rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2708891C1 (en) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2145236C1 (en) * | 1999-04-30 | 2000-02-10 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт | Mixed vaccine against rota-, corona-, herpesviral and escherichia diarrhea in newborn calves |
UA45698A (en) * | 2001-06-07 | 2002-04-15 | Інститут Експериментальної І Клінічної Ветеринарної Медицини | ROCOCOL VACCINE INACTIVATED AGAINST ESHERICHIOSIS AND ORAL AND CORONAVIRUS INFECTIONS OF CALVES |
RU2325183C1 (en) * | 2006-12-08 | 2008-05-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Production method of animal colibacillosis vaccine |
RU2403063C1 (en) * | 2009-08-28 | 2010-11-10 | Автономная некоммерческая организация "Научно-исследовательский институт диагностики и профилактики болезней человека и животных" (АНО "НИИ ДПБ") | Inactivated combined vaccine against viral diarrhea, rota-, corona-virus diseases and escherichiosis of cattle |
RU2517733C1 (en) * | 2012-12-26 | 2014-05-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный Центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Inactivated emulsion vaccine associated against adenoviral, herpes virus infection, parainfluenza-3 and viral diarrhea - mucosal disease of cattle |
-
2018
- 2018-06-19 RU RU2018122231A patent/RU2708891C1/en active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2145236C1 (en) * | 1999-04-30 | 2000-02-10 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт | Mixed vaccine against rota-, corona-, herpesviral and escherichia diarrhea in newborn calves |
UA45698A (en) * | 2001-06-07 | 2002-04-15 | Інститут Експериментальної І Клінічної Ветеринарної Медицини | ROCOCOL VACCINE INACTIVATED AGAINST ESHERICHIOSIS AND ORAL AND CORONAVIRUS INFECTIONS OF CALVES |
RU2325183C1 (en) * | 2006-12-08 | 2008-05-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Production method of animal colibacillosis vaccine |
RU2403063C1 (en) * | 2009-08-28 | 2010-11-10 | Автономная некоммерческая организация "Научно-исследовательский институт диагностики и профилактики болезней человека и животных" (АНО "НИИ ДПБ") | Inactivated combined vaccine against viral diarrhea, rota-, corona-virus diseases and escherichiosis of cattle |
RU2517733C1 (en) * | 2012-12-26 | 2014-05-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный Центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Inactivated emulsion vaccine associated against adenoviral, herpes virus infection, parainfluenza-3 and viral diarrhea - mucosal disease of cattle |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2403063C1 (en) | Inactivated combined vaccine against viral diarrhea, rota-, corona-virus diseases and escherichiosis of cattle | |
RU2723709C1 (en) | Method for prevention of rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis | |
RU2708891C1 (en) | Vaccine for rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis | |
RU2549434C2 (en) | Method for making brucellosis diagnostic serum | |
RU2649831C1 (en) | Method of prevention of acute intestinal diseases of piglets | |
CN101914144A (en) | Staphylococcus aureus capsular polysaccharide and protein conjugate and preparation method and application thereof | |
Sudjarwo et al. | Purification and characterization protein of anti-dengue specific immunoglobulin Y for diagnostic kit of dengue | |
RU2650628C1 (en) | Method of obtaining vaccine associated with colibacillosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets | |
Sudjarwo et al. | Production and characterization protein of anti HIV specific immunoglobulin Y for Immunotherapy | |
RU2813771C1 (en) | Method of preventing escherichiosis in calves | |
RU2813752C1 (en) | Method of producing aluminum hydroxide oil vaccine against escherichiosis in calves and piglets | |
RU2764600C1 (en) | Vaccine against escherichiosis of calves and piglets | |
RU2297452C2 (en) | Asia-1-type foot-and-mouth disease virus strain for producing of diagnostic and/or vaccine preparations | |
RU2814593C1 (en) | Method of preventing escherichiosis in calves | |
RU2766249C1 (en) | Method for preventing escherichiosis in calves | |
RU2806810C1 (en) | Hydroxide aluminum oil vaccine against escherichiosis in calves and piglets | |
RU2753410C2 (en) | Method for obtaining toxoid vaccine against escherichiosis of animals | |
RU2766549C1 (en) | Method for preventing escherichiosis in piglets | |
RU2145236C1 (en) | Mixed vaccine against rota-, corona-, herpesviral and escherichia diarrhea in newborn calves | |
RU2457859C1 (en) | Cattle viral diarrhoeia vaccine | |
RU2316344C1 (en) | Associated vaccine against colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal infection in nutrias | |
RU2777479C1 (en) | Method for specific prevention of rhinopneumonia and strangles in horses using an associated vaccine in herding conditions | |
RU2699035C2 (en) | Polyvalent cattle vaccine against anaerobic enterotoxemia and method of using it | |
RU2406531C1 (en) | Associated vaccine against streptoccocosis, pseudomonosis and enterococcus infection in nutria | |
RU2147892C1 (en) | Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease |