RU2659948C1 - Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits - Google Patents
Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits Download PDFInfo
- Publication number
- RU2659948C1 RU2659948C1 RU2017108572A RU2017108572A RU2659948C1 RU 2659948 C1 RU2659948 C1 RU 2659948C1 RU 2017108572 A RU2017108572 A RU 2017108572A RU 2017108572 A RU2017108572 A RU 2017108572A RU 2659948 C1 RU2659948 C1 RU 2659948C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- serum
- brucellosis
- blood
- days
- rabbits
- Prior art date
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 44
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 title claims abstract description 29
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 17
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000036512 infertility Effects 0.000 claims abstract description 6
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 claims description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 6
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 18
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 abstract description 12
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 3
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract description 2
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 abstract 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 abstract 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 abstract 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 16
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 10
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- SYTBZMRGLBWNTM-SNVBAGLBSA-N (R)-flurbiprofen Chemical compound FC1=CC([C@H](C(O)=O)C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 SYTBZMRGLBWNTM-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 2
- 230000003616 anti-epidemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000576973 Homo sapiens Mitochondrial-processing peptidase subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102100025298 Mitochondrial-processing peptidase subunit beta Human genes 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940059904 light mineral oil Drugs 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 sodium thiolate Chemical class 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к ветеринарии, к диагностике инфекционных болезней, а именно индикации и дифференциации возбудителей бруцеллеза.The invention relates to veterinary medicine, to the diagnosis of infectious diseases, namely the indication and differentiation of pathogens of brucellosis.
Бруцеллез - инфекционная болезнь животных, представляющая большую опасность и для людей.Brucellosis is an infectious disease of animals, which is also a great danger to humans.
Возбудители бруцеллеза обладают различной степенью диссоциации и агглютинабельностью, порой полной утратой S-агглютинабельности. Индикация таких культур бруцелл затруднена. В этой связи актуальным является получение эффективной R-бруцеллезной диагностической агглютинирующей сыворотки. Известно, что для индикации и дифференциации возбудителей бруцеллеза в бактериологической диагностике необходима R-бруцеллезная агглютинирующая сыворотка. От уровня ее чувствительности зависит надежность индикации и видовой дифференциации бруцелл. Причем для практики важны простота и безопасность ее получения.Pathogens of brucellosis have varying degrees of dissociation and agglutinability, sometimes a complete loss of S-agglutinability. Indication of such brucella cultures is difficult. In this regard, it is relevant to obtain an effective R-brucellosis diagnostic agglutinating serum. It is known that for the indication and differentiation of pathogens of brucellosis in bacteriological diagnosis, R-brucellosis agglutinating serum is necessary. The reliability of the indication and species differentiation of brucella depends on the level of its sensitivity. Moreover, the simplicity and safety of its preparation are important for practice.
Наиболее близким является способ получения R-бруцеллезной сыворотки на кроликах, включающий 4-кратную внутривенную иммунизацию кроликов живой культурой B.abortus16/4, обескровливание животных через 5-7 дней после последнего введения [1].The closest is a method for producing R-brucellosis serum in rabbits, including 4-fold intravenous immunization of rabbits with live culture of B. abortus16 / 4, bleeding animals 5-7 days after the last injection [1].
Недостатками этого способа являются: трудоемкость процесса (внутривенная иммунизация, кратность введения), эпидемическая опасность, связанная с использованием живой культуры бруцелл вида abortus, небольшой объем выхода конечного продукта за счет получения сыворотки от животного-продуцента только при однократном взятии крови.The disadvantages of this method are: the complexity of the process (intravenous immunization, the frequency of administration), the epidemic danger associated with the use of a live culture of brucella of the abortus species, the small yield of the final product due to obtaining serum from the producer animal only with a single blood sample.
Техническим результатом предлагаемого способа изготовления R-бруцеллезной сыворотки является снижение трудоемкости процесса ее изготовления и эпидемической опасности, увеличения выхода конечного продукта.The technical result of the proposed method for the manufacture of R-brucellosis serum is to reduce the complexity of the manufacturing process and the epidemic danger, increase the yield of the final product.
Техническое решение достигается тем, что способ получения R-бруцеллезной сыворотки на кроликах включает подкожно однократно иммунизацию кроликов суспензией в объеме 1 мл, представляющую собой смесь: антигена (100 млн КОЕ/мл инактивированной культуры штамма В. abortus 16/4) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, на 16-20 день проводят пробное крововзятие, а на 21-35 дни осуществляют трехкратное четырехкратное взятие крови и обескровливание, сыворотку отстаивают, проверяют на стерильность и активность, сыворотка должна иметь титр: в пробирочной РА - 1:640-1:1280, в пластинчатой РА - 1:30-1:60 соответственно, консервируют и фасуют.The technical solution is achieved by the fact that the method for producing R-brucellosis serum in rabbits includes subcutaneous immunization of rabbits once with a suspension in a volume of 1 ml, which is a mixture of antigen (100 million CFU / ml inactivated culture of strain B. abortus 16/4) with MONTANIDE ™ adjuvant ISA 61 VG, blood sampling is carried out on days 16–20, and blood sampling and bleeding are carried out three to four times on days 21–35, the serum is defended, checked for sterility and activity, serum should have a titer: in vitro RA - 1: 640-1 : 1280, in the reservoir nchatoy RA - 1: 30-1: 60, respectively, canned and packaged.
Предлагаемый способ получения R-бруцеллезной сыворотки позволяет снизить трудоемкость производственного процесса за счет однократного подкожного введения антигена кроликам, максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса за счет использования инактивированной культуры бруцелл штамма В.abortus 16/4. Использование адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG в смеси с инактивированной культурой бруцелл штамма В.abortus 16/4 позволит стимулировать получение высоких титров антител и повысить количество получаемой сыворотки, минимум в два раза за счет взятия крови от каждого животного-продуцента минимум трех-четырехкратно.The proposed method for producing R-brucellosis serum allows to reduce the complexity of the production process due to a single subcutaneous administration of antigen to rabbits, to maximize the anti-epidemic safety of this process through the use of an inactivated brucella strain of strain B. abortus 16/4. The use of the MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant in a mixture with an inactivated brucella culture of strain B. abortus 16/4 will stimulate the production of high antibody titers and increase the amount of serum obtained by at least two times by taking blood from each animal producer at least three to four times.
Для иммунизации кроликов использовали инактивированную культуру бруцелл штамма В.abortus 16/4 в дозе 100 млн КОЕ/мл в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG.For immunization of rabbits, an inactivated brucella culture of B. abortus 16/4 strain was used at a dose of 100 million CFU / ml in a mixture with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant.
В качестве адъюванта применяли французский препарат MONTANIDE™ ISA 61 VG, производитель - фирма «SEPPIC». Готовый к использованию масляный адъювант для ветеринарных вакцин для производства эмульсий «вода-в-масле» содержит особое обогащенное светлое минеральное масло и высокоочищенное ПАВ, полученное из маннитола и очищенной олеиновой кислоты растительного происхождения. Препарат MONTANIDE™ ISA 61 VG не содержит компонентов животного происхождения. Рецептуры вакцин с MONTANIDE™ ISA 61 VG вызывают сильный и продолжительный иммунный ответ. По сравнению с традиционными масляными эмульсиями суспензия с MONTANIDE™ ISA 61 VG является устойчивой, стабильной и легковводимой. Для приготовления 100,0 г вакцины обычно необходимо: MONTANIDE™ ISA 61 VG - 60,0 г и водной антигенной среды - 40,0 г, т.е. в соотношении 40 и 60% соответственно. Стабильные эмульсии получаются путем смешивания водной антигенной среды в MONTANIDE™ ISA 61 VG, при комнатной температуре или ниже, при интенсивном перемешивании [3].French adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG was used as an adjuvant, manufactured by SEPPIC. The ready-to-use oil adjuvant for veterinary vaccines for the production of water-in-oil emulsions contains a special enriched light mineral oil and highly purified surfactant obtained from mannitol and purified plant-derived oleic acid. MONTANIDE ™ ISA 61 VG does not contain animal components. MONTANIDE ™ ISA 61 VG vaccine formulations elicit a strong and sustained immune response. Compared to traditional oil emulsions, the suspension with MONTANIDE ™ ISA 61 VG is stable, stable and easy to administer. To prepare 100.0 g of vaccine, it is usually necessary: MONTANIDE ™ ISA 61 VG - 60.0 g and aqueous antigenic medium - 40.0 g, i.e. in the ratio of 40 and 60%, respectively. Stable emulsions are obtained by mixing an aqueous antigenic medium in MONTANIDE ™ ISA 61 VG, at room temperature or lower, with vigorous stirring [3].
В качестве антигена использовали штамм В.abortus 16/4. Используемый штамм В.abortus 16/4 должен отвечать паспортным данным. Его высевают на одну из питательных сред: эритрит агар, МППГГА. После 2-3-суточного роста бактериальную массу штамма В.abortus 16/4 смывают с поверхности питательной среды фенолизированным физиологическим раствором. Полученную взвесь бруцелл доводят до необходимой концентрации по оптическому стандарту мутности (производитель ФГБУ НЦЭСМП МЗ РФ), сливают через двойной стерильный марлевый фильтр в стерильные колбы и обезвреживают прогреванием на водяной бане при температуре 80°С в течение 60 минут, периодически помешивая. Проверяют на чистоту и стерильность бактериальной массы путем засева на питательные среды [2]. Взвесь штамма В.abortus 16/4, используемой в качестве антигена при гипериммунизации кроликов, должна быть стерильной.The strain B.abortus 16/4 was used as antigen. Used strain B. abortus 16/4 must meet the passport data. It is sown on one of the nutrient media: erythritol agar, MPPGA. After 2-3-day growth, the bacterial mass of strain B. abortus 16/4 is washed off the surface of the nutrient medium with a phenolized saline solution. The resulting suspension of brucella was adjusted to the required concentration according to the optical turbidity standard (manufacturer FSBI NTsESMP MZ RF), poured through a double sterile gauze filter into sterile flasks and neutralized by heating in a water bath at a temperature of 80 ° C for 60 minutes, stirring occasionally. Check for cleanliness and sterility of the bacterial mass by inoculation on nutrient media [2]. Suspension of strain B. abortus 16/4, used as an antigen for hyperimmunization of rabbits, must be sterile.
При комнатной температуре интенсивно перемешивают на магнитной мешалке 4 мл взвеси убитой культуры штамма В.abortus 16/4 с добавлением 6 мл адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG (для получения 10 мл суспензии).At room temperature, 4 ml of a suspension of killed culture of strain B. abortus 16/4 is mixed intensively on a magnetic stirrer with the addition of 6 ml of MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant (to obtain 10 ml of suspension).
В качестве животных-продуцентов использовали кроликов.As animal producers used rabbits.
Заявленный результат достигается следующим образом:The claimed result is achieved as follows:
Кроликам однократно подкожно вводят 1мл суспензии, представляющей собой смесь антигена (100 млн КОЕ/мл инактивированной культуры штамма В.abortus 16/4) с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG). На 16-20 день проводят пробное крововзятие. При условии положительной пластинчатой и пробирочной РА с R-антигеном и живыми культурами в R-форме с полученной R сывороткой в разведении не ниже 1:30 осуществляют взятие крови (из ушной вены) в сроки с 21 по 35 день после гипериммунизации, из расчета 16-20 мл крови на 1 кг живой массы. Проводят тотальное взятие крови (производственное кровопускание). Кровь отдельно от каждого кролика берут с соблюдением правил асептики и антисептики в отдельную стерильную емкость. После крововзятия емкость с кровью ставят в термостат при 37°С на 3-4 часа для отделения сыворотки, затем помещают в холодильник при 2-8°С на двое суток для отстаивания сыворотки. Сыворотку от каждого кролика сливают отдельно в стерильные сосуды, обезвреживают добавлением мертиолата натрия до конечной концентрации 1:10000 [5] и фасуют.Rabbits are injected subcutaneously once with 1 ml of a suspension, which is a mixture of antigen (100 million CFU / ml of inactivated culture of strain B. abortus 16/4) with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant). On day 16-20, test blood sampling is performed. Under the condition of positive plate and test RA with R-antigen and live cultures in R-form with R serum obtained in a dilution of at least 1:30, blood is taken (from the ear vein) from 21 to 35 days after hyperimmunization, at the rate of 16 -20 ml of blood per 1 kg of live weight. Total blood sampling is performed (production bloodletting). Blood is taken separately from each rabbit in compliance with the rules of asepsis and antiseptics in a separate sterile container. After blood collection, the blood vessel is placed in a thermostat at 37 ° C for 3-4 hours to separate the serum, then placed in the refrigerator at 2-8 ° C for two days to settle the serum. The serum from each rabbit is poured separately into sterile vessels, neutralized by the addition of sodium thiolate to a final concentration of 1: 10000 [5] and packaged.
Контроль активности и специфичности полученной сыворотки осуществляют в пластинчатой и пробирочной РА с R- и S-антигенами и живыми культурами бруцелл в S- и R-форме. Сыворотка считается качественной, если пластинчатая РА с антигенами и живыми культурами бруцелл в R-.форме будет положительной в разведениях не ниже 1:30 при отрицательном результате РБП и пластинчатой агглютинации с живыми культурами бруцелл в S-форме в разведении 1:10. В пробирочной РА с R-антигеном титр сыворотки должен быть не ниже 1:640, при отрицательном результате РА с единым бруцеллезным антигеном для РА, РСК и РДСК в разведении 1:10. Постановку и учет реакций проводят согласно Наставлению по диагностике бруцеллеза животных [4].The activity and specificity of the obtained serum is monitored in lamellar and test tubes with R- and S-antigens and live Brucella cultures in S- and R-form. Serum is considered to be of high quality if lamellar RA with antigens and live cultures of brucella in the R-form is positive in dilutions of at least 1:30 with a negative result of RBP and plate agglutination with live cultures of brucella in S-form at a dilution of 1:10. In test RA with a R-antigen, the serum titer should be not lower than 1: 640, with a negative result of RA with a single brucellosis antigen for RA, RSK and RDSK at a 1:10 dilution. The formulation and registration of reactions is carried out according to the Manual on the diagnosis of animal brucellosis [4].
Пробу сыворотки крови отдельно из каждой емкости подвергают проверке на стерильность путем высевов на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро.A blood serum sample is separately tested from each container for sterility by plating on MPA, MPB, MPPB under liquid paraffin and Saburo medium.
При условии стерильности и получении положительных результатов серологических реакций сыворотку смешивают в одну емкость для составления серии, консервируют (например, в качестве консерванта мертиолатом натрия в конечной концентрации 1:10000) и расфасовывают.Under the condition of sterility and obtaining positive results of serological reactions, the serum is mixed in one container for making a series, preserved (for example, as a preservative with sodium merthiolate at a final concentration of 1: 10000) and packaged.
Пример 1. Определение оптимальной дозы антигена при гипериммунизации кроликов для получения R-бруцеллезной сыворотки (таблица 1)Example 1. Determination of the optimal dose of antigen for hyperimmunization of rabbits to obtain R-brucellosis serum (table 1)
В целях определения оптимальной дозы антигена при гипериммунизации кроликов инактивированной культурой В.abortus 16/4 в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG для получения R-бруцеллезной сыворотки были использованы 3 схемы гипериммунизации кроликов (таблица 1). Для чего из здоровых кроликов, предварительно проверенных на бруцеллез серологическими методами, с отрицательными результатами, сформировали три группы (по 3 кролика в каждой) и гипериммунизировали:In order to determine the optimal dose of antigen for hyperimmunization of rabbits with an inactivated B. abortus 16/4 culture mixed with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant, 3 rabbit hyperimmunization schemes were used to obtain R-brucellosis serum (Table 1). For this, from healthy rabbits, previously tested for brucellosis by serological methods, with negative results, three groups were formed (3 rabbits in each) and hyperimmunized:
1-я группа - животным ввели однократно подкожно инактивированную культуру В.abortus 16/4 в дозе 50 млн КОЕ/мл в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG;Group 1 - animals were injected once subcutaneously with inactivated culture of B. abortus 16/4 at a dose of 50 million CFU / ml in a mixture with MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant;
2-я группа - животным ввели однократно подкожно инактивированную культуру В.abortus 16/4 в дозе 100 млн КОЕ/мл в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG;2nd group - animals were injected once subcutaneously with inactivated culture of B. abortus 16/4 at a dose of 100 million CFU / ml in a mixture with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG;
3-я группа - животным ввели однократно подкожно инактивированную культуру В.abortus 16/4 в дозе 200 млн КОЕ/мл в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG.3rd group - animals were injected once subcutaneously with inactivated culture of B. abortus 16/4 at a dose of 200 million CFU / ml in a mixture with adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG.
Результат РА с сыворотками крови, полученными от кроликов на 21 день после их сенсибилизации (таблица 1). В первой группе РА была положительной в разведении: пробирочной - 1:320, в пластинчатой - 1:20 соответственно; во второй группе была положительной в разведении: пробирочной РА - 1:1280, в пластинчатой -1:60 соответственно; в третьей группе была положительной в разведении: пробирочной РА - 1:1280, в пластинчатой РА - 1:60 соответственно, при отрицательном результате РБП, пластинчатой агглютинации с живыми культурами бруцелл в S-форме в разведении 1:10 и отрицательном результате РА с единым бруцеллезным антигеном для РА, РСК и РДСК в разведении 1:10 во всех группах. По результатам исследования оптимальной схемой гипериммунизации кроликов можно признать схему №2. При ее применении получены высокие титры антител на 21 день после сенсибилизации.The result of RA with blood serum obtained from rabbits on day 21 after their sensitization (table 1). In the first group, RA was positive in dilution: in vitro - 1: 320, in the plate - 1:20, respectively; in the second group it was positive in dilution: test tube RA - 1: 1280, in the plate -1: 60, respectively; in the third group, it was positive in dilution: in vitro RA - 1: 1280, in plate RA - 1:60, respectively, with a negative result of RBP, plate agglutination with live cultures of brucella in S-form in a dilution of 1:10 and a negative RA result with a single brucellosis antigen for RA, RSK and RDSK in 1:10 dilution in all groups. According to the results of the study, the optimal scheme for hyperimmunization of rabbits can be considered scheme No. 2. With its use, high antibody titers were obtained on day 21 after sensitization.
Пример 2. Определение оптимальной схемы гипериммунизации кроликов для получения R-бруцеллезной сыворотки (таблица 2)Example 2. Determination of the optimal scheme of hyperimmunization of rabbits to obtain R-brucellosis serum (table 2)
В опыте изучили сравнительную эффективность трех схем получения R-бруцеллезной диагностической сыворотки. Для чего из здоровых кроликов, предварительно проверенных на бруцеллез серологическими методами, сформировали три группы (по 3 кролика в каждой):In the experiment, we studied the comparative effectiveness of three schemes for obtaining R-brucellosis diagnostic serum. For this, from healthy rabbits, previously tested for brucellosis by serological methods, three groups were formed (3 rabbits in each):
1-я группа - животным ввели трехкратно с интервалом 7 дней подкожно (п/кожно) инактивированную культуру В.abortus 16/4 в общей дозе 46,5 млрд КОЕ/мл;Group 1 - animals were injected three times with an interval of 7 days subcutaneously (p / dermally) inactivated culture of B. abortus 16/4 in a total dose of 46.5 billion CFU / ml;
2-я группа - животным ввели четырехкратно с интервалом 7 дней внутривенно живую культуру В.abortus 16/4 в общей дозе 90,5 млрд КОЕ/мл.Group 2 — animals were injected four times with an interval of 7 days with an intravenous live culture of B. abortus 16/4 in a total dose of 90.5 billion CFU / ml.
3-я группа - животным ввели однократно подкожно инактивированную культуру В.abortus 16/4 в дозе 100 млн КОЕ/мл в смеси с адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG в объеме 1 мл.3rd group - the animals were injected once subcutaneously with inactivated culture of B. abortus 16/4 at a dose of 100 million CFU / ml in a mixture of adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG in a volume of 1 ml.
Кровь от животных в целях получения сыворотки брали на 14, 21, 28, 35 дни после введения антигенов.Blood from animals in order to obtain serum was taken on 14, 21, 28, 35 days after the introduction of antigens.
Таким образом, из приведенных в таблице данных очевидно, что оптимальной является схема получения R-бруцеллезной диагностической сыворотки, испытанная на животных третьей группы, в которой использовалась однократная подкожная гипериммунизация суспензией инактивированной культуры бруцелл В.abortus 16/4 в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, который позволяет стимулировать получение высоких титров антител. Кроме эпидемической безопасности ее преимущества заключаются в ее высоких титрах при получении в отдаленные сроки после гипериммунизации, а значит, в возможности получения значительного объема сыворотки с высокой активностью за счет многократного (не менее 3-4 раз) взятия крови.Thus, from the data given in the table, it is obvious that the optimal scheme is the preparation of R-brucellosis diagnostic serum tested on animals of the third group, in which a single subcutaneous hyperimmunization was used with a suspension of inactivated B. abortus 16/4 brucella culture mixed with MONTANIDE ™ oil adjuvant ISA 61 VG, which allows you to stimulate the receipt of high titers of antibodies. In addition to epidemic safety, its advantages lie in its high titers when receiving it in the long term after hyperimmunization, and therefore, in the possibility of obtaining a significant volume of serum with high activity due to repeated (at least 3-4 times) blood sampling.
Пример 3. Изучение диагностической активности R-бруцеллезной диагностической сыворотки, полученной от кроликов, гипериммунизированных по разным схемам, через 6 месяцев хранения (таблица 3)Example 3. The study of the diagnostic activity of R-brucellosis diagnostic serum obtained from rabbits hyperimmunized according to different schemes, after 6 months of storage (table 3)
Установлено, что сыворотка, полученная от кроликов по схеме, предусматривающей однократную подкожную гипериммунизацию инактивированной культурой бруцелл В.abortus 16/4 в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE™ ISA 61 VG, сохранила свою активность (РА в разведении не ниже 1:1280) в течение не менее 6 месяцев после ее получения из крови, взятой через 21, 28, 35 дней после гипериммунизации, в отличие от сыворотки, полученной при однократной внутривенной гипериммунизации живой культурой бруцелл В.abortus 16/4 без адъюванта, потерявшей активность в более ранние сроки - 28-35 дней.It was established that the serum obtained from rabbits according to the scheme providing a single subcutaneous hyperimmunization with an inactivated culture of B. abortus 16/4 brucella in a mixture with oil adjuvant MONTANIDE ™ ISA 61 VG, retained its activity (RA at a dilution of at least 1: 1280) for at least 6 months after receiving it from blood taken 21, 28, 35 days after hyperimmunization, in contrast to serum obtained with a single intravenous hyperimmunization with a live culture of B. abortus 16/4 brucella without an adjuvant that lost activity at an earlier date - 28 -35 days.
Предлагаемый способ получения R-бруцеллезной сыворотки на кроликах позволяет снизить трудоемкость производственного процесса за счет однократного подкожного введения антигена кроликам, максимально повысить противоэпидемическую безопасность этого процесса за счет использования инактивированной культуры бруцелл штамма В.abortus 16/4. Использование адъюванта MONTANIDE™ ISA 61 VG в смеси с инактивированной культурой бруцелл штамма В.abortus 16/4 позволит стимулировать получение высоких титров антител и повысить количество получаемой сыворотки минимум в два раза за счет взятия крови от каждого животного-продуцента минимум трех-четырехкратно.The proposed method for producing R-brucellosis serum in rabbits allows to reduce the complexity of the production process due to a single subcutaneous administration of antigen to rabbits, to maximize the anti-epidemic safety of this process by using an inactivated brucella culture of strain B. abortus 16/4. The use of the MONTANIDE ™ ISA 61 VG adjuvant in a mixture with an inactivated brucella culture of strain B. abortus 16/4 will stimulate the production of high antibody titers and increase the amount of serum obtained at least two times by taking blood from each animal producer at least three to four times.
ЛитератураLiterature
1. Дегтяренко Л.В., Косилов И.А., Ниязов У.Э., Шумилов К.В. Получение R-бруцеллезной сыворотки на кроликах / Профилактика и диагностика болезней животных. Сб.научных трудов. Новосибирск, 1983, с. 103-107.1. Degtyarenko L.V., Kosilov I.A., Niyazov U.E., Shumilov K.V. Obtaining R-brucellosis serum in rabbits / Prevention and diagnosis of animal diseases. Sat scientific works. Novosibirsk, 1983, p. 103-107.
2. Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним / Под ред. Т.С. Сайдулдина. - Алматы, 2007. - 433 с.2. Ivanov N.P. Brucellosis of animals and measures to combat it / Ed. T.S. Sayduldina. - Almaty, 2007 .-- 433 p.
3. Технический бюллетень MONTANIDE™ ISA 61 VG.3. MONTANIDE ™ ISA 61 VG Technical Bulletin.
4. Наставление по диагностике бруцеллеза животных. Утв. Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 29.09.2003 №13-5-02/0850.4. Manual on the diagnosis of animal brucellosis. Approved Veterinary Department of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation on September 29, 2003 No. 13-5-02 / 0850.
5. СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)» от 28 ноября 2013 г.5. SP 1.3.3118-13 “Safety of work with microorganisms of I-II pathogenicity (danger) groups” dated November 28, 2013
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017108572A RU2659948C1 (en) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017108572A RU2659948C1 (en) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2659948C1 true RU2659948C1 (en) | 2018-07-04 |
Family
ID=62816039
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017108572A RU2659948C1 (en) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2659948C1 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2012331C1 (en) * | 1991-06-27 | 1994-05-15 | Гематологический научный центр РАМН | Solution for preserving of enzyme treated erythrocyte used in isoserological reactions |
| RU2049153C1 (en) * | 1993-12-14 | 1995-11-27 | Институт порошковой металлургии | Apparatus for continuous cementation and cleaning of metal powders |
| US5747653A (en) * | 1987-07-30 | 1998-05-05 | Centro Nacional De Biopreparados | Method of producing of an antimeningococcic hyperimmune gamma globulin and gamma globulin produced by method |
| SU533102A1 (en) * | 1972-12-22 | 2000-03-20 | Всесоюзный научно-исследовательский ящурный институт | METHOD OF OBTAINING IMMUNE SERUM |
| RU2549434C2 (en) * | 2013-07-30 | 2015-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) | Method for making brucellosis diagnostic serum |
-
2017
- 2017-03-14 RU RU2017108572A patent/RU2659948C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU533102A1 (en) * | 1972-12-22 | 2000-03-20 | Всесоюзный научно-исследовательский ящурный институт | METHOD OF OBTAINING IMMUNE SERUM |
| US5747653A (en) * | 1987-07-30 | 1998-05-05 | Centro Nacional De Biopreparados | Method of producing of an antimeningococcic hyperimmune gamma globulin and gamma globulin produced by method |
| RU2012331C1 (en) * | 1991-06-27 | 1994-05-15 | Гематологический научный центр РАМН | Solution for preserving of enzyme treated erythrocyte used in isoserological reactions |
| RU2049153C1 (en) * | 1993-12-14 | 1995-11-27 | Институт порошковой металлургии | Apparatus for continuous cementation and cleaning of metal powders |
| RU2549434C2 (en) * | 2013-07-30 | 2015-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) | Method for making brucellosis diagnostic serum |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104829712B (en) | C, D types C.perfringens antitoxic serum and preparation method thereof | |
| CN104530232A (en) | Preparation method of refined egg yolk antibody for duck viral hepatitis | |
| RU2549434C2 (en) | Method for making brucellosis diagnostic serum | |
| US3354038A (en) | Serial passaging tissue cultured canine distemper virus to form attenuated vaccine short of virus-antigenicity decreasing passages | |
| RU2659948C1 (en) | Method for obtaining the r-brucellosis serum on rabbits | |
| US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
| RU2639127C2 (en) | Production method of brucellar monospecific serum anti-abortus | |
| RU2613901C1 (en) | Production method of brucellar monospecific serum anti-melitensis | |
| RU2538158C1 (en) | Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| US3470294A (en) | Vaccine for immunization of dogs and foxes against distemper,hepatitis contagiosa and leptospirosis and process for preparing it | |
| Senekjie | Immunologic Studies in Experimental Trypanosoma cruzi Infections: 2. Slide Agglutination and Intradermal Tests. | |
| IQBAL et al. | Immune response of rabbits to hemorrhagic septicemia vaccine formulations adjuvanted with montanide ISA-206, paraffin oil and alum | |
| Nakayama | On the toxin for leukocytes produced by streptococci (streptoleukocidin) | |
| RU2812350C1 (en) | Method of obtaining diagnostic serum against brucella in r-form | |
| RU2341288C1 (en) | MEDICINE FORMING CELLULAR IMMUNITY FOR MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS H37 Rv, METHOD OF PRODUCTION THEREOF (VERSIONS), RECOMBINANT STRAIN AND TUBERCULOSIS DIAGNOSTIC AGENT | |
| RU2802251C1 (en) | Vaccine composition for the prevention of enzootic abortion in sheep | |
| RU2772751C1 (en) | Method for producing a hyperimmune serum against bovine adenovirus-10 in cattle | |
| RU2288002C1 (en) | Method for preparing vaccine against enterococcus infection in nutrias | |
| RU2798283C1 (en) | Chlamydia vnitibp-21 chlamydia abortus strain for the production of immunobiological medicinal products | |
| RU2815538C1 (en) | Method of producing polyvalent vaccine against equine leptospirosis | |
| Rosenow | Studies in pneumonia and pneumococcus infections | |
| RU2707289C1 (en) | Method for producing vaccine associated with colibacillosis, streptococcus and pseudomonosis of bovine animals | |
| RU2416429C2 (en) | Method for producing antigen preparation of l-brucellas | |
| RU2147892C1 (en) | Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease | |
| RU2252031C1 (en) | Method for production of immune serum to virulent strain bacillus anthracis antigen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210315 |