RU2595038C1 - Лекарственное средство с противовирусной активностью (варианты) - Google Patents

Лекарственное средство с противовирусной активностью (варианты) Download PDF

Info

Publication number
RU2595038C1
RU2595038C1 RU2015113254/04A RU2015113254A RU2595038C1 RU 2595038 C1 RU2595038 C1 RU 2595038C1 RU 2015113254/04 A RU2015113254/04 A RU 2015113254/04A RU 2015113254 A RU2015113254 A RU 2015113254A RU 2595038 C1 RU2595038 C1 RU 2595038C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
drug
group
precipitate
mixture
antiviral activity
Prior art date
Application number
RU2015113254/04A
Other languages
English (en)
Inventor
Виктор Вениаминович Тец
Георгий Викторович ТЕЦ
Константин Андреевич Краснов
Original Assignee
Виктор Вениаминович Тец
Георгий Викторович ТЕЦ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Виктор Вениаминович Тец, Георгий Викторович ТЕЦ filed Critical Виктор Вениаминович Тец
Priority to RU2015113254/04A priority Critical patent/RU2595038C1/ru
Priority to PCT/RU2016/000197 priority patent/WO2016159836A1/ru
Priority to ES16773558T priority patent/ES2846928T3/es
Priority to US15/564,009 priority patent/US10253037B2/en
Priority to EP16773558.8A priority patent/EP3315501B1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2595038C1 publication Critical patent/RU2595038C1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/14—Ortho-condensed systems
    • C07D491/147—Ortho-condensed systems the condensed system containing one ring with oxygen as ring hetero atom and two rings with nitrogen as ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к лекарственному средству с противовирусной активностью в отношении ВИЧ инфекции и вируса гепатита В, представляющему собой производное 2-хлор-5-фенил-5Н-пиримидо[5′,4′:5,6]пирано[2,3-d]пиримидин-4-ола общей формулы (I)
Figure 00000002
где X выбран из группы Н, NO2, Hal, ОМе; R1 выбран из группы: Cl, ОН; R2 выбран из группы: Cl, SH, ОН. Лекарственное средство может содержать в эффективных количествах совместно с соединением формулы (I) ингибитор обратной транскриптазы, выбранный из Ретровира, или ингибитор протеазы, выбранный из Лопинавира. Лекарственное средство может быть приготовлено в форме таблеток или капсул для энтерального приема или в форме лиофильно высушенной субстанции; или в форме ректальных свечей. 2. н.п. ф-лы, 9 табл., 6 пр.

Description

Изобретение относится к области органической химии и медицины, конкретно - к синтетическим веществам пиримидинового ряда - производным 2-хлор-5-фенил-5H-пиримидо[5′,4′:5,6]пирано[2,3-d]пиримидин-4-ола, обладающим противовирусной активностью.
Изобретение может быть использовано для лечения заболеваний, вызванных вирусами иммунодефицита и другими ретровирусами, вирусами гепатита В, а также для аналогичных целей в ветеринарии. Заявленное средство может применяться как в индивидуальном виде, так и в комбинации с другими препаратами и фармацевтическими добавками.
Как известно, многие производные пиримидина обладают выраженной биологической активностью и участвуют в процессах жизнедеятельности организмов. Производные пиримидина являются нуклеиновыми основаниями (урацил, тимин, цитозин), витаминами (тиамин, фосфотиамин), коферментами (кокарбоксилаза), регуляторами роста (оротовая кислота) и т.д. [Data for Biochemical Research (3rd ed.), R.M.C. Dawson, D.C. Elliott, W.H. Elliott, K.М. Jones. (Clarendon Press, 1986].
Особый интерес представляют системы, в которых пиримидиновый цикл аннелирован другими гетероциклами. К ним относятся пурины, входящие в состав нуклеиновых кислот (аденин, гуанин), фолиевая кислота, АТФ, птерины, флавины, многие другие природные вещества и их синтетические аналоги.
Из синтетических производных пиримидина широкое использование в медицине приобрели замещенные барбитуровые и 2-тиобарбитуровые кислоты. Данные о биологической активности разнообразных производных 5-илиденбарбитуровых кислот суммированы в обзоре [2 - Sans R.G., Chosas M.G. // Pharmazie, 1988, Bd 43, N 12, S. 827-829], где отмечены антиконвульсантное, антимикробное, спазмолитическое, жаропонижающее, противоопухолевое действие этих веществ.
Высокая биологическая активность обнаружена также у аннелированных производных пиримидина, например у пиразоло[3,4-d]пиримидинов, полученных конденсацией 6-гидразиноурацилов с изо(тио)цианатами [3 - Naka Т., Nagaoka A., Furukawa Y., заявка ЕПВ No. 237289 (1987)], 5-деазафлавинов [4 - Yoneda F., Sasaki Т., Патент Японии, М кл. C07D 471/04, No 03 81276, заявлена 24.08.1989 (89/218146), опуб. 05.04.1991], производных пирроло[2,3-d]пиримидинов [5 - Quijano M.L., Nogueras М., Melguizo М., Alvarez de Cienfuegos G., Melgarejo М., Sanches A. // Nucleosides & Nucleotides, 1989, Vol. 8, N8, P. 1519-1528], пирано[2,3-d]пиримидинов [6 - Ahluwalia V.K., Batla R., Khurana A., Kumar R. // Indian J. Chem., 1990, Vol. 29B, N 12, P. 1141] и пиримидо[4,5-с]пиридазинов [7 - Billings B.K., Wagner J.A., Cook F.D., Castle R.N. // J. Heterocycl. Chem., 1975, Vol. 12, N 6, P. 1221-1224]. Перечисленные соединения обладают пестицидным, противоопухолевым, антимикробным, иммуносупрессивным, ноотропным, антигипертензионным и антиаллергическим действием.
Приведенные выше материалы свидетельствуют о перспективности поиска новых фармацевтических препаратов среди производных пиримидина.
В то же время известны лишь несколько примеров образования пирано[2,3-d:6,5-d′]дипиримидиновой системы, в частности, при взаимодействии барбитуровых кислот с 3-ацилхромонами [8 - Eiden F., Schikorr W. // Arch. Pharm., 1972, Bd 305, N 3, S. 187-193] [9 - Stone K.M., Wittington W.L., Treatment of genital gerpes. Rev. of Infect. Dis., 1990, 12, Supl. 6, P. 610-619]. Об их биологической активности сведений нет. Как было отмечено выше, соединения, содержащие фрагмент пиримидиндиона, обладают разнообразной биологической активностью. Однако эффективность многих из изученных веществ недостаточно высока, многие из них токсичны и обладают побочными эффектами. Кроме того, у бактерий, вирусов и опухолевых клеток очень быстро вырабатывается устойчивость к существующим препаратам [10 - Stone К.М., Wittington W.L., Treatment of genital gerpes, Rev. of Infect. Dis., 1990, 12, Supl. 6, P. 610-619].
Прототипом изобретения выбран препарат Ралтегравир (Raltegravir) ингибитор интегразы, N-(2-(4-(4-флюоробензилкарбамоил)-5-гидрокси-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)пропан-2-ил), общей формулы
Figure 00000001
(http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2011/022145s0181bl.pdf).
Препарат ингибирует каталитическую активность ВИЧ интегразы - фермента, участвующего в репликации вируса. Ингибирование интегразы предотвращает ковалентное введение генома ВИЧ в геном клетки хозяина на ранних стадиях развития инфекции. Недостатки прототипа связаны с быстро возникающей резистентностью вирусов к данному препарату, что обусловливает его невысокую эффективность.
Задачей изобретения является создание эффективного лекарственного средства с противовирусной активностью.
Согласно изобретению поставленная задача решается путем синтеза лекарственного средства 2-хлор-5-фенил-5Н-пиримидо[5',4':5,6]пирано[2,3-d]пиримидин-4-ола общей формулы
Figure 00000002
,
где Х выбран из группы: Н, NO2, Hal, OMe;
R1 выбран из группы: Cl, ОН;
R2 выбран из группы: Cl, SH, ОН;
лекарственное средство может быть приготовлено в форме таблеток или капсул для энтерального приема, или в форме лиофильно высушенной субстанции, или в форме ректальных свечей; лекарственное может быть выполнено совместно с ингибиторами обратной транскрипции, или совместно с ингибиторами интеграции, или совместно с ингибиторами протеаз.
Изобретение распространяется на все пространственные изомеры заявляемых веществ, все их таутомерные формы, а также соли.
Заявителю не известны какие-либо источники информации, в которых бы содержались сведения об идентичных технических решениях, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения условию патентоспособности «Новизна».
Заявителем не выявлены какие-либо источники информации, содержащие сведения о влиянии признаков изобретения на достигаемый вследствие их реализации технический результат. Это, по мнению заявителя, свидетельствует о соответствии данного технического решения условию патентоспособности «Изобретательский уровень».
Для решения поставленной задачи наиболее предпочтительны производные заявленного вещества, указанные в таблице 1.
Figure 00000003
Синтез заявленного лекарственного средства
Производные 1-7 заявленного вещества синтезируют в 2 этапа в соответствии со схемой 1.
Figure 00000004
Для получения заявляемых веществ вначале синтезируют промежуточные вещества - соли производных бис-[5-(2-сульфгидрил-4,6-дигидроксигексагидропиримидо)]фенилметана из соответствующих ароматических альдегидов и 2-тиобарбитуровой кислоты в присутствии основания (Base) - триэтиламина или пиридина. Затем обработкой промежуточных соединений хлорокисью фосфора синтезируют заявленные вещества.
Заявленное вещество получают следующим образом.
Для получения производного 1 в колбу вместимостью 500 мл помещают 14.4 г (0.1 моль) 2-тиобарбитуровой кислоты, приливают 150 мл воды и нагревают смесь до 90-95°С. Затем к горячему раствору при перемешивании приливают 5.01 (0.05 моль) триэтиламина в 7 мл спирта и нагревают еще 1 мин до полного растворения. Затем раствор снимают с нагрева и быстро при перемешивании приливают раствор 7.55 г (0.05 моль) 4-нитробензальдегида в 25-30 мл горячего спирта. Реакционную смесь перемешивают без нагревания 5 мин и оставляют при 15-20°С на 3-4 ч. Выпавший кристаллический осадок отфильтровывают, промывают небольшим количеством воды и сушат на воздухе до постоянного веса. Получают 24 г промежуточного вещества - триэтиламмониевой соли бис-[5-(2-сульфгидрил-4,6-дигидроксигексагидропиримидо)]4-нитрофенилметана в виде кристаллического порошка кремового цвета, Т разл. 240°С.
Затем в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора, нагревают до кипения и к кипящей жидкости при перемешивании добавляют 10 г полученного выше промежуточного вещества (триэтиламмониевой соли бис-[5-(2-сульфгидрил-4,6-дигидроксигексагидропиримидо)]-(4-нитрофенил)метана), и продолжают перемешивать при интенсивном кипячении с обратным холодильником 30-50 мин до полного растворения осадка, после чего кипятят еще 1 ч. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и при активном перемешивании порциями вливают в 350 г толченого льда. Скорость прибавления смеси регулируют так, чтобы температура массы была не выше 15°С. После прибавления всей смеси продолжают перемешивать массу, постепенно доводя ее до температуры 20°С, а при достижении заданной температуры добавляют к смеси еще 50 г льда, удерживая температуру в пределах 20-35°С. После завершения экзотермической реакции разбавляют смесь водой до конечного объема 1 л, выделившийся белый осадок фильтруют и промывают водой до слабокислой реакции смывов (рН 4-5). Далее сырой осадок переносят в колбу, добавляют 200 мл воды, 5 г трис-оксиметиламинометана (ТРИС) и перемешивают без нагревания до полного растворения осадка. Полученный раствор фильтруют от инородных частиц. К фильтрату добавляют 100 мл водного раствора уксусной кислоты 1% до рН 7 и выдерживают 30 мин, а выделившийся осадок отделяют и отбрасывают. К полученному фильтрату добавляют 100 мл раствора уксусной кислоты 1% до рН 5 и выдерживают 1 ч, сформировавшийся осадок фильтруют, промывают водным раствором уксусной кислоты 0.1%, затем чистой водой и сушат в вауум-эксикаторе над КОН при температуре до 30°С. Получают 3.5 г производного 1 заявляемого вещества в виде стеклообразного продукта коричневого цвета. Выход 40% от теории.
Примечание. По аналогичной методике при использовании соответствующих альдегидов (бензальдегида, 3-хлорбензальдегида и 4-метоксибензальдегида) получают производные 5, 6 и 7. Выход продуктов указан в таблице 2, характеристики и данные элементного анализа - в таблицах 3 и 4.
Для получения смеси производных 1, 2 и 3 в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора и нагревают до кипения. Затем в кипящую жидкость при перемешивании добавляют 10 г полученного выше промежуточного вещества (соли бис-[5-(2-сульфгидрил-4,6-дигидроксигексагидропиримидо)]-(4-нитрофенил)метана) и продолжают перемешивать при интенсивном кипячении с обратным холодильником 30-50 мин до полного растворения осадка, после чего кипятят еще 1 ч. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и при активном перемешивании порциями вливают в 350 г толченого льда. Скорость прибавления смеси регулируют так, чтобы температура массы была не выше 15°С. После прибавления всей смеси продолжают перемешивать массу, постепенно доводя ее до температуры 20°С, а при достижении заданной температуры добавляют к смеси еще 50 г льда, удерживая температуру в пределах 20-35°С. После завершения экзотермической реакции разбавляют смесь водой до конечного объема 1 л. Выделившийся белый осадок фильтруют через бумажный фильтр и тщательно промывают водой до слабокислой реакции смывов (рН 4-5). Далее сырой осадок переносят в колбу, добавляют 200 мл воды, 5 г трис-оксиметиламинометана (ТРИС) и перемешивают без нагревания до полного растворения осадка и получения раствора с рН 8-9. Полученный раствор разбавляют водой до конечного объема 400 мл и фильтруют от инородных частиц. Затем к полученному фильтрату медленно, при перемешивании, добавляют 50 мл водного раствора, содержащего 5 мл уксусной кислоты до рН 3. Выпавший густой осадок выдерживают 30 мин и фильтруют, тщательно промывают осадок на фильтре водным раствором уксусной кислоты 0.1%, затем чистой водой и сушат на воздухе при температуре не выше 40°С. После сушки получают 6 г стеклообразного продукта коричневого цвета, представляющего собой смесь производных 1, 2 и 3 заявляемого вещества в соотношении (%) 40:30:20 соответственно. Суммарный выход около 80% от теории.
Для получения целевого продукта, а именно 2-хлор-8-сульфгидрил-5-(4-нитрофенил)-5Н-пиримидо[5′,4′:5,6]пирано[2,3-d]пиримидин-4,6-диола (производное 2), в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора и нагревают до кипения. Затем в кипящую жидкость при перемешивании добавляют 10 г полученного выше промежуточного вещества (соли бис-[5-(2-сульфгидрил-4,6-дигидрокси-гексагидропиримидо)]-(4-нитрофенил)метана) и продолжают перемешивать при интенсивном кипении до полного растворения осадка (30-50 мин). После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и при активном перемешивании порциями вливают в 250 г толченого льда, регулируя скорость прибавления смеси так, чтобы конечная температура массы составляла 50-60°С. После завершения экзотермической реакции осадок фильтруют через бумажный фильтр и тщательно промывают водой. Далее сырой осадок переносят в колбу и растворяют в 200 мл воды с добавкой 5-6 мл аммиака 25%. Полученный раствор фильтруют от инородных частиц и фильтрат подкисляют водным раствором уксусной кислоты 5% до рН 5. Выпавший осадок отделяют и отбрасывают, а фильтрат подкисляют HCl до рН 1 и выдерживают 1 ч при 20°С. Выделившийся осадок фильтруют, промывают водой и сушат в вауум-эксикаторе над КОН при температуре до 30°С. После сушки получают 1.35 г производное 2 в виде светло-желтого кристаллического порошка. Выход 19% от теории.
Для получения заявляемого производного, а именно 2,6,8-трихлор-5-(4-нитрофенил)-5H-пиримидо[5′,4′:5,6]пирано[2,3-d]пиримидин-4-ола (производное 3), в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора и нагревают до кипения. Затем в кипящую жидкость при перемешивании добавляют 3 г полученного выше промежуточного вещества (соли бис-[5-(2-сульфгидрил-4,6-дигидрокси-гексагидропиримидо)]-(4-нитрофенил)метана) и продолжают перемешивать при интенсивном кипении 2 ч. После этого из смеси отгоняют в вакууме не менее 70 мл хлорокиси фосфора при температуре бани до 90°С и остаток охлаждают до комнатной температуры. Затем реакционную смесь при активном перемешивании порциями вливают в 150 г толченого льда, регулируя скорость прибавления смеси так, чтобы температура массы не превышала 15°С. После завершения экзотермической реакции осадок фильтруют через бумажный фильтр и тщательно промывают водой. Далее сырой осадок переносят в колбу, добавляют 100 мл воды, 2 г трис-оксиметиламинометана (ТРИС) и перемешивают без нагревания до полного растворения осадка и получения раствора с рН 8-9. Полученный раствор фильтруют от инородных частиц и фильтрат подкисляют водным раствором уксусной кислоты 1% до рН 7. Выпавший осадок фильтруют, тщательно промывают водой и сушат в вауум-эксикаторе над КОН при температуре до 30°С. После сушки получают 0.56 г производного 3 заявляемого вещества в виде стеклообразного продукта светло-коричневого цвета. Выход 27% от теории.
Для получения целевого продукта, а именно 2-хлор-5-(4-нитрофенил)-5H-пиримидо[5′,4′:5,6]пирано[2,3-d]пиримидин-4,6,8-триола (производное 4), в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора и нагревают до кипения. Затем в кипящую жидкость при перемешивании добавляют 10 г полученного выше промежуточного вещества (соли бис-[5-(2-сульфгидрил-4,6-дигидрокси-гексагидропиримидо)]-(4-нитрофенил)метана) и продолжают перемешивать при интенсивном кипении до полного растворения осадка (30-50 мин). После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и при активном перемешивании порциями вливают в 250 г толченого льда, регулируя скорость прибавления смеси так, чтобы конечная температура массы составляла 50-60°С. После завершения экзотермической реакции смесь перемешивают при 50°С в течение 8 ч. Затем охлаждают смесь до комнатной температуры, осадок фильтруют через бумажный фильтр и тщательно промывают водой. Далее сырой осадок переносят в колбу и растворяют в 200 мл воды с добавкой 5-6 мл аммиака 25%. Полученный раствор фильтруют от инородных частиц и фильтрат подкисляют водным раствором уксусной кислоты 5% до рН 5. Выпавший осадок отделяют и отбрасывают, а фильтрат подкисляют HCl до рН 1 и выдерживают 1 ч при 20°С. Выделившийся осадок фильтруют, промывают водой, затем спиртом, эфиром и сушат на воздухе при комнатной температуре. Получают 2.4 г производного 4 заявляемого вещества в виде бесцветного кристаллического порошка. Выход 34% от теории.
Figure 00000005
Figure 00000006
Figure 00000007
Исследование биологической активности заявленного лекарственного средства.
Пример 1. Определение анти-ВИЧ активности производных 1-7 заявленного лекарственного средства.
Материалы и методы:
Клетки. Использовали перевиваемые лимфобластоидные клетки человека МТ-4. Клетки культивировали в среде RPMI 1640 с 10% сыворотки эмбрионов коров, 100 мкг/мл гентамицина.
Вирусы. В качестве источника вируса использовали штамм ВИЧ-1899А.
Препарат. Исследовали образцы препаратов, растворенные в диметилсульфоксиде.
Структура исследования:
Исследование цитотоксического действия препарата.
К клеткам добавляли исследуемый препарат в различных концентрациях. Инкубировали клетки при 37С° в атмосфере с 5% CO2 и 98% влажности 5 дней. Учет результатов: определение жизнеспособности и количества клеток при помощи красителя.
Исследование противовирусного действия препарата.
К клеткам добавляли исследуемые препараты в различных дозах при одновременном инфицировании вирусом в дозе 0,01 ТЦИД50/клетка. Инкубировали культуры клеток при 37С° в атмосфере с 5% CO2 и 98% влажности 5 дней. Учет результатов проводили окрашиванием клеток с помощью тетразолиевого красителя (метод МТТ) со спектрофотометрией и световой микроскопией: исследование цитопатического эффекта вируса (ЦПД) и вирусиндуцируемого образования синцития (синцитий - конгломерат нескольких клеток с общей клеточной оболочкой, образовавшейся в результате слияния их мембран).
Степень защиты клеток от цитодеструктивного действия вируса определяли по формуле
Figure 00000008
А - число жизнеспособных клеток в опытной группе;
В - то же в инфицированной культуре (контроль вируса);
К - то же в неинфицированной культуре (контроль клеток).
Результаты исследования приведены в таблице 6.
Figure 00000009
Figure 00000010
Пример 2. Определение 50%-ной летальной дозы смеси производных 1+2+4 заявленного вещества (ЛД50) при парентеральном (инъекционном) способе введения.
Определение показателей острой токсичности при парентеральном способе введения включало эксперименты на мышах массой 18-20 г, возраст 8-9 недель.
В опытах на грызунах для исследования каждой дозы использовались группы по 5 животных одного пола. Препараты растворяли в стерильной Н2О и вводили в хвостовую вену (в/в).
Figure 00000011
Результаты: ЛД50 смеси производных 1+2+4 составило 2000-2500 мг/кг.
Пример 3. Определение ЛД50 смеси производных 1+2+5 при энтеральном способе введения.
Определение ЛД50 заявленного вещества при энтеральном способе введения.
Определение показателей острой токсичности при энтеральном способе введения включало эксперименты на мышах массой 18-20 г, возраст 8-9 недель.
В опытах на грызунах для исследования каждой дозы препаратов использовались группы по 5 животных одного пола. Препараты вводили внутрижелудочно (в/ж) в возрастающих дозах по Литчфилду-Уилкоксону.
Для этого их разводили в 1% крахмальной слизи и полученную взвесь вводили животным.
Figure 00000012
Результаты: ЛД50 смеси производных 1+2+5 составило 12000-16000 мг/кг.
Пример 4. Определение ЛД50 при внутривагинальном способе введения
Определение показателей острой токсичности при внутривагинальном способе введения включало эксперименты на крысах массой 150-170 г, возраст 3-3,5 месяца. Суппозитории, содержащие 1000 мкг/суппозиторий №14, нарезались бритвой на полоски меньшего размера, удобные для вагинального введения. Введения препарата осуществляли на протяжении 12 ч с интервалами в 2 ч. Общая дозировка, получаемая животным при введении, составила 2200 мкг/кг. Ни у одного из животных не отмечалось гибели и каких-либо признаков негативного воздействия препарата. Динамика массы тела во всех группах оставалась нормальной.
Пример 5. Совместное действие заявленного лекарственного средства и препаратов, используемых для лечения заболеваний, вызванных вирусами иммунодефицита человека.
Материалы и методы:
Использовали перевиваемые лимфобластоидные клетки человека МТ-4. Клетки культивировали в среде RPMI 1640 с 10% сыворотки эмбрионов коров, 100 мкг/мл гентамицина.
В качестве источника вируса использовали штамм ВИЧ-1899А.
Препарат. Исследовали образцы препаратов, растворенных в диметилсульфоксиде. В качестве антиретровирусного референс-препарата использовали препарат Ралтегравир (прототип).
Исследование противовирусного действия препарата (защита клеток).
К клеткам добавляли исследуемые препараты в различных дозах при одновременном инфицировании вирусом в дозе 0,01 ТЦИД50/клетка. Инкубировали культуры клеток при 37С° в атмосфере с 5% СО2 и 98% влажности 5 дней. Учет результатов проводили окрашиванием клеток с помощью тетразолиевого красителя (метод МТТ) со спектрофотометрией и световой микроскопией: исследование цитопатического эффекта вируса (ЦПД) и вирусиндуцируемого образования синцития (синцитий - конгломерат нескольких клеток с общей клеточной оболочкой, образовавшейся в результате слияния их мембран).
Результаты приведены в таблице 8.
Figure 00000013
Figure 00000014
Таким образом, можно сделать вывод о синергическом действии заявленного лекарственного средства при совместном использовании с препаратами, используемыми для лечения заболеваний, вызываемых вирусами иммунодефицита человека.
Пример 6. Влияние заявляемых соединений на репродукцию вируса гепатита В (HBV).
Материалы и методы.
Клетки линии HepG2.2.15, инфицированные вирусом гепатита В, выращивали на среде DMEM с добавлением 10% бычьей сыворотки при 5% CO2, 37°С.
Анализ количества внеклеточной HBV ДНК.
Через 5 дней инкубации HepG2.2.15 отбирали культуральную среду, центрифугированием отделяли клетки и выделяли ДНК по методу Klintschar и Neuhuber (Klintschar and Neuhuber, 2000). Количественное определение HBV проводили с использованием RT-PCR.
Результаты приведены в таблице 9.
Figure 00000015
Полученные данные указывают, что заявленное лекарственное средство активно против вируса гепатита В.

Claims (2)

1. Лекарственное средство с противовирусной активностью в отношении ВИЧ инфекции и вируса гепатита В, представляющее собой производные 2-хлор-5-фенил-5Н-пиримидо[5′,4′:5,6]пирано[2,3-d]пиримидин-4-ола общей формулы:
Figure 00000002

где: X выбран из группы: Н, NO2, Hal, ОМе;
R1 выбран из группы: Cl, ОН;
R2 выбран из группы: Cl, SH, ОН.
2. Лекарственное средство с противовирусной активностью в отношении ВИЧ инфекции, содержащее производное 2-хлор-5-фенил-5Н-пиримидо[5′,4′:5,6]пирано[2,3-d]пиримидин-4-ола общей формулы:
Figure 00000016

где: X выбран из группы: Н, NO2, Hal, ОМе;
R1 выбран из группы: Cl, ОН;
R2 выбран из группы: Cl, SH, ОН
совместно с ингибитором обратной транскриптазы, выбранным из Ретровира, или с ингибитором протеазы, выбранным из Лопинавира, взятых в эффективном количестве.
RU2015113254/04A 2015-04-03 2015-04-03 Лекарственное средство с противовирусной активностью (варианты) RU2595038C1 (ru)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015113254/04A RU2595038C1 (ru) 2015-04-03 2015-04-03 Лекарственное средство с противовирусной активностью (варианты)
PCT/RU2016/000197 WO2016159836A1 (ru) 2015-04-03 2016-04-06 Лекарственное средство с противовирусной активностью (варианты)
ES16773558T ES2846928T3 (es) 2015-04-03 2016-04-06 Fármaco con actividad antiviral (variantes)
US15/564,009 US10253037B2 (en) 2015-04-03 2016-04-06 Drug with antiviral activity (variants)
EP16773558.8A EP3315501B1 (en) 2015-04-03 2016-04-06 Drug with antiviral activity

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015113254/04A RU2595038C1 (ru) 2015-04-03 2015-04-03 Лекарственное средство с противовирусной активностью (варианты)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2595038C1 true RU2595038C1 (ru) 2016-08-20

Family

ID=56697553

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015113254/04A RU2595038C1 (ru) 2015-04-03 2015-04-03 Лекарственное средство с противовирусной активностью (варианты)

Country Status (5)

Country Link
US (1) US10253037B2 (ru)
EP (1) EP3315501B1 (ru)
ES (1) ES2846928T3 (ru)
RU (1) RU2595038C1 (ru)
WO (1) WO2016159836A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2666148C1 (ru) * 2017-10-05 2018-09-06 Общество с ограниченной ответственностью "Новые Антибиотики" Способ получения водорастворимой лиофилизированной формы соли бис(2-тио-4,6-диоксо-1,2,3,4,5,6-гексагидропиримидин-5-ил)-(4-нитрофенил)метана

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UY37861A (es) 2017-08-28 2019-03-29 Enanta Pharm Inc Agentes antivirales contra la hepatitis b
BR112021009854A2 (pt) 2018-11-21 2021-08-17 Enanta Pharmaceuticals, Inc. heterociclos funcionalizados como agentes antivirais
US11249987B2 (en) 2019-08-14 2022-02-15 Advanced New Technologies Co., Ltd. Data storage in blockchain-type ledger
WO2021188414A1 (en) 2020-03-16 2021-09-23 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocyclic compounds as antiviral agents

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4578380A (en) * 1983-09-30 1986-03-25 Warner-Lambert Company 5H-[1]benzopyrano[2,3-d]pyrimidine derivatives useful for controlling lesions of the gastric and duodenal mucous membranes
RU2188201C2 (ru) * 1997-11-19 2002-08-27 Ашкинази Римма Ильинична Производные 5h-пирано[2,3-d:6,5-d']дипиримидина, обладающие антимикробным, противовирусным и иммуномодулирующим действием
RU2246496C1 (ru) * 2003-09-12 2005-02-20 Тец Виктор Вениаминович Вещество с противовирусной и антибактериальной активностью на основе производных 2,8-дитиоксо-1h-пирано[2,3-d, 6,5-d`] дипиримидина и их 10-аза-аналогов

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0237289A3 (en) 1986-03-14 1988-07-27 Takeda Chemical Industries, Ltd. Pyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivatives, their production and use
JP2884170B2 (ja) 1989-08-24 1999-04-19 株式会社フジモト・ブラザーズ ５−デアザフラビン系化合物を有効成分とする制癌剤
IL136181A0 (en) * 1997-11-19 2001-05-20 Natural Drug Sciences Llc 5H-PYRANO[2,3-d:6,5-d'] DIPYRIMIDINE DERIVATIVES HAVING AN ANTIBACTERIAL, ANTIVIRAL, AND IMMUNO-MODULATING ACTIVITY
WO2002003971A2 (en) * 2000-07-07 2002-01-17 Stichting Rega Vzw Pharmaceutical composition and method for the treatment of retroviral infections

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4578380A (en) * 1983-09-30 1986-03-25 Warner-Lambert Company 5H-[1]benzopyrano[2,3-d]pyrimidine derivatives useful for controlling lesions of the gastric and duodenal mucous membranes
RU2188201C2 (ru) * 1997-11-19 2002-08-27 Ашкинази Римма Ильинична Производные 5h-пирано[2,3-d:6,5-d']дипиримидина, обладающие антимикробным, противовирусным и иммуномодулирующим действием
RU2246496C1 (ru) * 2003-09-12 2005-02-20 Тец Виктор Вениаминович Вещество с противовирусной и антибактериальной активностью на основе производных 2,8-дитиоксо-1h-пирано[2,3-d, 6,5-d`] дипиримидина и их 10-аза-аналогов

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2666148C1 (ru) * 2017-10-05 2018-09-06 Общество с ограниченной ответственностью "Новые Антибиотики" Способ получения водорастворимой лиофилизированной формы соли бис(2-тио-4,6-диоксо-1,2,3,4,5,6-гексагидропиримидин-5-ил)-(4-нитрофенил)метана
WO2019070169A1 (ru) * 2017-10-05 2019-04-11 Виктор Вениаминович ТЕЦ Способ получения лиофилизированной формы (бис(2-тио-4,6-диоксо-1,2,3,4,5,6-гексагидропиримидин-5-ил)-(4-нитрофенил)метана) и полученная лиофилизированная форма

Also Published As

Publication number Publication date
EP3315501A4 (en) 2019-04-24
US20180134723A1 (en) 2018-05-17
EP3315501B1 (en) 2020-09-23
WO2016159836A1 (ru) 2016-10-06
ES2846928T3 (es) 2021-07-30
EP3315501A1 (en) 2018-05-02
US10253037B2 (en) 2019-04-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2595038C1 (ru) Лекарственное средство с противовирусной активностью (варианты)
WO2014032481A1 (zh) 一种替诺福韦前药及其在医药上的应用
CN108218890B (zh) 一种五元非芳环并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法和应用
Nasr et al. 7-Aminoquinolines. A novel class of agents active against herpes viruses
Sekhar et al. Amino acid esters substituted phosphorylated emtricitabine and didanosine derivatives as antiviral and anticancer agents
NO180194B (no) 6-[X-(2-hydroksyetyl)aminoalkylÅ-5,11-diokso-5,6-dihydro-11-H-indeno[1,2-cÅisokinoliner og anvendelse derav til fremstilling av medikamenter, samt medikament inneholdende slike kinoliner
CN108218896B (zh) 一种噻唑并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法和应用
RU2376307C1 (ru) 4-((Z)-4'-ГИДРОКСИБУТЕН-2'-ИЛ)-2-R-6-ФЕНИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c][1,2,4]ТРИАЗИН-7-ОНЫ
RU2644351C1 (ru) (3S)-4-[6-(Пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2Н-[1,4]бензоксазин и (3R)-4-[6-(Пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2Н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
Selvakumar et al. Synthesis and antiviral study of 4-(7, 7-dimethyl-4-(piperazin-1-yl)-5, 6, 7, 8-tetrahydroquinazolin-2-yl) morpholine derivatives
CN101961331A (zh) 泛素e1抑制剂及其制备方法
US6071905A (en) Biologically active substance on the basis of tetracyclic nitrogen heterocycles of pyrimidine row
CN109096257B (zh) Meridianin类生物碱及其衍生物在防治植物病毒病菌病中的应用
US6340755B1 (en) 5H-Pyrano[2,3-d: 6,5-d']dipyrimidine derivatives having an antibacterial, antiviral and immuno-modulating activity
RU2246496C1 (ru) Вещество с противовирусной и антибактериальной активностью на основе производных 2,8-дитиоксо-1h-пирано[2,3-d, 6,5-d`] дипиримидина и их 10-аза-аналогов
Rostom et al. Synthesis and in vitro anti-HIV screening of certain 2-(benzoxazol-2-ylamino)-3H-4-oxopyrimidines
CN112375081B (zh) 具有抑制CDK4、6或9活性的吡咯[2,3-d]嘧啶衍生物及其制备方法和应用
RU2188201C2 (ru) Производные 5h-пирано[2,3-d:6,5-d']дипиримидина, обладающие антимикробным, противовирусным и иммуномодулирующим действием
RU2345080C2 (ru) 4-(4'-ГИДРОКСИБУТИЛ)-6-ФЕНИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c][1,2,4]ТРИАЗИН-7-ОН
DE4021006A1 (de) Pyrimidin-derivate, deren herstellung und verwendung sowie diese enthaltende arzneimittel
RU2746423C2 (ru) Ингибитор вируса гепатита В (ВГВ)
RU2188195C2 (ru) Соли 5,5'-арилиденбисбарбитуровых и 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот и 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровые) кислоты, обладающие противомикробным, противовирусным, иммуномодулирующим и противоопухолевым действием
RU2629670C2 (ru) 2-Амино-5,6-дифтор-1-(бета-D-рибофуранозил)-бензимидазол, способ получения и противовирусная активность его в отношении вируса герпеса простого 1-го типа
EP1043318A1 (en) Salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5,5'-arylidenebis(2-thiobarbituric) acids and 5,5'-arylidenebis(2-thiobarbituric) acids having an antibacterial, anti-chlamydial, antiviral and immuno-modulating activity
RU1389235C (ru) Производные тиено [2,3-D]пиримидина, обладающие противогерпетической и противотуберкулезной активностью

Legal Events

Date Code Title Description
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20200724