ES2846928T3 - Fármaco con actividad antiviral (variantes) - Google Patents

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Abstract

Derivados de 2-cloro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol de la siguiente fórmula general: **(Ver fórmula)** donde: X se selecciona del grupo: H, NO2, Hal, OMe; R1 se selecciona del grupo: Cl, OH; R2 se selecciona del grupo: Cl, SH, OH para su uso en el tratamiento de la hepatitis B.

Description

DESCRIPCIÓN
Fármaco con actividad antiviral (variantes)
Resumen
La invención se refiere al campo de la química orgánica y la medicina, y más particularmente a sustancias sintéticas de la serie pirimidina, concretamente, derivados de 2-cloro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol, que tienen actividad antiviral. Se reivindica un fármaco con actividad antiviral contra la infección por VIH y el virus de la hepatitis B, que contiene derivados de 2-cloro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol de la fórmula general mostrada, donde: X se selecciona del grupo: H, NO2 , Hal, OMe; R1 se selecciona del grupo: Cl, OH; y R2 se selecciona del grupo: Cl, SH, OH; y un fármaco con actividad antiviral contra la infección por VIH, que contiene un derivado de 2-cloro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol de la fórmula general mostrada, donde: X se selecciona del grupo: H, NO2 , Hal, OMe; R1 se selecciona del grupo: Cl, OH; y R2 se selecciona del grupo: Cl, SH, OH en combinación con el inhibidor de proteasa Lopinavir, en una cantidad eficaz. El resultado es un fármaco eficaz con actividad antiviral.
Campo técnico
La invención se refiere al campo de la química orgánica y la medicina, y más particularmente a sustancias sintéticas de la serie pirimidina, concretamente, derivados de 2-cloro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol, que tienen actividad antiviral.
La invención puede usarse para tratar enfermedades causadas por virus de inmunodeficiencia, virus de hepatitis B, y también para fines similares en medicina veterinaria. El agente en cuestión se puede utilizar tanto de forma individual como en combinación con otros fármacos y aditivos farmacéuticos.
Antecedentes de la técnica
Es conocido comúnmente que los derivados de pirimidina tienen una actividad biológica pronunciada y participan en los procesos vitales de los organismos. Los derivados de pirimidina son bases nucleicas (uracilo, timina, citosina), vitaminas (tiamina, fosfotiamina), coenzimas (cocarboxilasa), reguladores del crecimiento (ácido orótico), etc. [Data for Biochemical Research (3a ed.), R. M. C. Dawson, D. C. Elliott, W. H. Elliott, K. M. Jones (Clarendon Press, 1986].
Son de particular interés los sistemas en los que el anillo de pirimidina se hibrida con otros heterociclos. Estos incluyen purinas que forman parte de ácidos nucleicos (adenina, guanina), ácido fólico, ATF, pterinas, flavinas, muchas otras sustancias naturales y sus análogos sintéticos.
A partir de derivados sintéticos de pirimidina, los ácidos barbitúrico y 2-tiobarbitúrico sustituidos se encuentran entre los más utilizados en medicina. Los datos sobre la actividad biológica de diversos derivados de los ácidos 5-ilidenbarbitúricos se resumen en la revisión [2- Sans RG, Chosas MG // Pharmazie, 1988,Bd 43, N 12, S. 827-829], donde se aprecia el efecto anticonvulsivo, antimicrobiano, antiespasmódico, antipirético y anticanceroso de estas sustancias.
También se encontró una alta actividad biológica en derivados de pirimidina hibridados, por ejemplo, en pirazolo[3,4-d]pirimidinas obtenidas por condensación de 6-hidrazinouracilos con iso(tio)cianatos [3- Naka T., Nagaoka A., Furukawa Y., Solicitud EpO N.° 237289 (1987)], 5-desazaflavinas [4- Yoneda F., Sasaki T., Patente Japonesa, M cl.C 07D 471/04, N.° 0381276, presentada el 24 de agosto de 1989 (89/218146), publicada el 05.04.1991], derivados de pirrolo[2,3-d]pirimidinas [5- Quijano ML, Nogueras M., Melguizo M., Alvarez de Cienfuegos G., Melgarejo M., Sanches A. // Nucleosides & Nucleotides, 1989, Vol. 8, N 8, pág. 1519-1528], pirano[2,3-d]pirimidinas [6- Ahluwalia V.K., Batla R., Khurana A., Kumar R. // Indian J. Chem. , 1990, Vol. 29B, N.° 12, pág. 1141] y pirimido[4,5-c]piridazinas [7- Billings B. K., Wagner J.A., Cook F.D., Castle R.N. // J.Heterocycl. Chem., 1975, Vol. 12, N 6, pág. 1221-1224]. Los compuestos enumerados poseen acción pesticida, antitumoral, antimicrobiana, inmunosupresora, nootrópica, antihipertensiva y antialérgica.
Los materiales anteriores indican la perspectiva de encontrar nuevos fármacos entre los derivados de pirimidina.
Al mismo tiempo, solo se conocen algunos ejemplos de la formación de un sistema de pirano[2,3-d:6,5-d']dipirimidina, en particular, cuando los ácidos barbitúricos reaccionan con 3-acilcromonas [8 - Eiden F., Schikorr W. // Arch. Pharm., 1972, Bd 305, N 3, S. 187-193] [9- Stone K.M., Wittington W.L., Treatment of genital gerpes, Rev. of Infect. Dis., 1990, 12, Supl. 6, pág. 610-619].
No hay información sobre su actividad biológica. Como se ha señalado anteriormente, los compuestos que contienen un fragmento de pirimidinadiona tienen una diversidad de actividades biológicas. Sin embargo, la eficacia de muchas de las sustancias estudiadas no es lo suficientemente alta, muchas de ellas son tóxicas y tienen efectos secundarios. Además, las bacterias, los virus y las células tumorales se vuelven resistentes muy rápidamente a los fármacos existentes [10-Stone KM, Wittington WL, Treatment of genital gerpes, Rev. Of Infect. Dis., 1990, 12, Supl. 6, pág. 610­ 619].
El documento WO 02/03971 divulga derivados de 5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol, para su uso en el tratamiento de la infección por VIH.
Se ha seleccionado una preparación conocida como Raltegravir como prototipo de la invención; es un inhibidor de la integrasa, N-(2-(4-(4-fluorobencilcarbamoil)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropirimidin-2-il)propan-2-ilo) de la siguiente fórmula general:
Figure imgf000003_0001
(http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2011/022145s018 lbl.pdf).
El fármaco inhibe la actividad catalítica de la integrasa del VIH, una enzima implicada en la replicación viral. La inhibición de la integrasa evita la introducción covalente del genoma del VIH en el genoma de la célula huésped en las primeras fases de la infección. Las desventajas del prototipo están asociadas con la rápida aparición de resistencia de los virus a este fármaco, lo que causa su baja eficacia.
Sumario de la invención
El objeto de la presente invención es proporcionar un medicamento eficaz con actividad antiviral.
De acuerdo con la invención en la variante 1, la tarea se consigue mediante la síntesis de un medicamento con actividad antiviral frente al virus de la hepatitis B, que está compuesto por derivados de 2-cloro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol de la siguiente fórmula general:
Figure imgf000003_0002
donde: X se selecciona del grupo: H, NO2 , Hal, OMe;
R1 se selecciona del grupo: Cl, OH;
R2 se selecciona del grupo: Cl, SH, OH;
De acuerdo con la invención en la variante 2, la tarea se logra mediante la síntesis de un medicamento con actividad antiviral frente a la infección por VIH, que contiene un derivado de 2-cloro-5-fenil-5H-pirimido[5', 4':5,6]pirano[2,3-d] pirimidin-4-ol de la siguiente fórmula general:
Figure imgf000004_0001
donde: X se selecciona del grupo: H, NO2 , Hal, OMe;
R1 se selecciona del grupo: Cl, OH;
R2 se selecciona del grupo: Cl, SH, OH en combinación con el inhibidor de proteasa Lopinavir, en una cantidad eficaz.
En una realización adicional, la invención se refiere a los derivados (1) a (7) y su uso en el tratamiento de infecciones por hepatitis B o VIH.
La invención se aplica a todos los isómeros espaciales de los compuestos en cuestión y todas sus formas tautoméricas, y también a las sales.
Breve descripción de los dibujos
En lo sucesivo, la invención se explica con una descripción detallada de ejemplos de su implementación sin referencia a los dibujos.
Realización preferida
Para resolver el problema, los derivados de la sustancia en cuestión enumerados en la Tabla 1 son los más preferidos. Síntesis del producto médico en cuestión
Los derivados 1-7 de la sustancia en cuestión se sintetizan en 2 fases de acuerdo con el Diagrama 1.
Diagrama 1
Figure imgf000004_0002
Para obtener las sustancias en cuestión, primero se sintetizan intermedios, que son las sales de los derivados de bis-[5-(2-sulfhidril-4,6-dihidroxihexahidropirimido)]fenilmetano a partir de los correspondientes aldehídos aromáticos y ácido 2-tiobarbitúrico en presencia de la base (trietilamina o piridina). A continuación, los compuestos intermedios se tratan con oxicloruro de fósforo para sintetizar las sustancias en cuestión.
La sustancia en cuestión se prepara de la siguiente manera.
Para obtener el derivado, se ponen 14,4 g (0,1 mol) de ácido 2-tiobarbitúrico en un matraz de 500 ml, se añaden 150 ml de agua y la mezcla se calienta a 90-95 °C. A continuación, se añaden 5,01 (0,05 mol) de trietilamina en 7 ml de alcohol a la solución calienta mientras se agita, y la mezcla se calienta durante 1 minuto más hasta su completa disolución. Después de eso, la solución se retira del calentador y se añade por vertido una solución de 7,55 g (0,05 mol) de 4-nitrobenzaldehído en 25-30 ml de alcohol caliente. La mezcla de reacción se agita sin calentar durante 5 minutos y se deja a 15-20 °C durante 3-4 horas. El depósito cristalino precipitado se elimina por filtración, se lava con una pequeña cantidad de agua y se seca al aire hasta un peso constante. Se obtienen 24 g de un intermedio, que es la sal trietilamonio de bis-[5-(2-sulfhidril-4,6-dihidroxihexahidropirimido)]4-nitrofenilmetano en forma de un polvo cristalino de color crema, T de dec. 240 °C.
A continuación se ponen 100 ml de oxicloruro de fósforo en un matraz de 200 ml, se calienta hasta ebullición, y se añaden 10 g del intermedio anterior (bis[5-(2-sulfhidril-4,6-dihidroxihexahidropirimido)]-(4-nitrofenil)metano de trietilamonio) mientras se agita, y se continúa la agitación a reflujo vigoroso durante 30-50 minutos hasta que el precipitado se disuelve completamente, después de lo cual se hierve durante 1 hora más. Después de eso, la mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y con agitación vigorosa, y a continuación se vierte en 350 g de hielo triturado. La velocidad de adición de la mezcla se ajusta de modo que la temperatura de la masa no supere los 15 °C. Después de la adición de toda la mezcla, se continúa la agitación de la masa, llevándola gradualmente a la temperatura de 20 °C, y cuando se alcanza la temperatura especificada, se añaden 50 g más de hielo a la mezcla, manteniendo la temperatura dentro de 20-35 °C. Una vez completada la reacción exotérmica, la mezcla se diluye con agua hasta el volumen final de 1 l, el depósito de color blanco precipitado se filtra y se lava con agua hasta una reacción de lavado ligeramente ácida (pH 4-5). A continuación, el depósito en bruto se transfiere a un matraz, se añaden 200 ml de agua y 5 g de tris-hidroximetilaminometano (TRIS) y se mezclan sin calentamiento hasta que el depósito se disuelve por completo. La solución resultante se filtra para eliminar cualquier partícula extraña. Se añaden 100 ml de una solución acuosa de ácido acético al 1 % al filtrado a pH 7 y se mantiene durante 30 minutos, y el depósito precipitado se separa y se desecha. Se añaden 100 ml de una solución de ácido acético al 1 % al filtrado resultante a pH 5 y la mezcla se mantiene durante 1 hora, el depósito formado se filtra, se lava con una solución acuosa de ácido acético al 0,1 %, y a continuación se lava con agua pura y se seca en un desecador de vacío sobre KOH a una temperatura de hasta 30 °C. Se obtienen 3,5 g del derivado 1 de la sustancia en cuestión en forma de un producto vítreo de color pardo. El rendimiento es del 40 % del valor teórico.
Nota. Por el mismo procedimiento se obtienen los derivados 5, 6 y 7 utilizando los correspondientes aldehídos (benzaldehído, 3-clorobenzaldehído y 4-metoxibenzaldehído). El rendimiento de los productos se indica en la Tabla 2, las características y los datos del análisis elemental se pueden encontrar en las Tablas 3 y 4.
Para preparar una mezcla de los derivados 1, 2 y 3, se ponen 100 ml de oxicloruro de fósforo en un matraz de 200 ml y se calienta hasta ebullición. A continuación, se añaden 10 g del intermedio obtenido anteriormente (sales de bis [5-(2-sulfhidril-4,6-dihidroxihexahidropirimido)]-(4-nitrofenil)metano) al líquido en ebullición mientras se agita y se continúa agitando con ebullición vigorosa durante 30-50 minutos hasta que el depósito se disuelva por completo, después de lo cual se hierve durante 1 hora más. Después de eso, la mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y con agitación vigorosa, y a continuación se vierte en 350 g de hielo triturado. La velocidad de adición de la mezcla se ajusta de modo que la temperatura de la masa no supere los 15 °C. Después de la adición de toda la mezcla, se continúa la agitación de la masa, llevándola gradualmente a la temperatura de 20 °C, y cuando se alcanza la temperatura especificada, se añaden 50 g más de hielo a la mezcla, manteniendo la temperatura dentro de 20­ 35 °C. Una vez completada la reacción exotérmica, la mezcla se diluye con agua hasta el volumen final de 1 litro. El depósito de color blanco precipitado se filtra y se lava con agua hasta una reacción de lavado ligeramente ácida (pH 4-5). A continuación, el depósito en bruto se transfiere a un matraz, se añaden 200 ml de agua y 5 g de trishidroximetilaminometano (TRIS) y se mezclan sin calentamiento hasta que el depósito se disuelve por completo y se obtiene una solución con un pH de 8-9. La solución resultante se diluye con agua hasta el volumen final de 400 ml y se filtra para eliminar cualquier partícula extraña. A continuación, se añaden lentamente 50 ml de una solución acuosa que contiene 5 ml de ácido acético al filtrado resultante mientras se agita para alcanzar un pH 3. El residuo sólido precipitado se mantiene durante 30 minutos y se filtra, la torta de filtro se lava a fondo con una solución acuosa. de ácido acético al 0,1 %, a continuación se lava con agua pura y se seca al aire a una temperatura no superior a 40 °C. Después del secado, se obtienen 6 g de un producto de color pardo vítreo, que es una mezcla de los derivados 1, 2 y 3 de la sustancia en cuestión en una relación (%) de 40:30:20, respectivamente. El rendimiento total es de aproximadamente el 80 % del valor teórico.
Para obtener el producto deseado, concretamente 2-cloro-8-sulfhidril-5-(4-nitrofenil)-5H-pirimido [5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4.6-diol (derivado 2), se ponen 100 ml de oxicloruro de fósforo en un matraz de 200 ml y se calienta hasta ebullición. A continuación, se añaden 10 g del intermedio obtenido anteriormente (sales de bis [5-(2-sulfhidril-4,6-dihidroxihexahidropirimido)]-(4-nitrofenil)metano) al líquido en ebullición mientras se agita y se continúa agitando con ebullición vigorosa durante 30-50 minutos hasta que el depósito se disuelva por completo. Después de eso, la mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se vierte en porciones en 250 g de hielo triturado con agitación vigorosa, ajustando la velocidad de adición de la mezcla para que la temperatura final del material sea 50-60 °C. Una vez completada la reacción exotérmica, el residuo se filtra a través de un filtro de papel y se lava a fondo con agua. A continuación, el residuo en bruto se transfiere a un matraz y se disuelve en 200 ml de agua con la adición de 5-6 ml de amoniaco al 25 %. La solución resultante se filtra para eliminar las partículas extrañas y el filtrado se acidifica con una solución acuosa de ácido acético al 5 % a pH 5. El residuo precipitado se separa y se desecha, y el filtrado se acidifica con HCl a pH 1 y se mantiene durante 1 hora a 20 °C. El residuo precipitado se filtra, se lava con agua y se seca en un desecador de vacío sobre KOH a una temperatura de hasta 30 °C. Después del secado, se obtienen 1,35 g del derivado 2 en forma de un polvo cristalino de color amarillo claro. El rendimiento es del 19 % del valor teórico.
Para obtener el producto deseado, concretamente, 2,6,8-tricloro-5-(4-nitrofenil)-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol (derivado 3), se ponen 100 ml de oxicloruro de fósforo en un matraz de 200 ml y se calienta hasta ebullición. A continuación, se añaden 3 g del intermedio obtenido anteriormente (sales de bis [5-(2-sulfhidril-4,6-dihidroxihexahidropirimido)]-(4-nitrofenil)metano) al líquido en ebullición mientras se agita y se continúa agitando con ebullición vigorosa durante 2 horas. Después de esto, se destilan al menos 70 ml de oxicloruro de fósforo de la mezcla en vacío a una temperatura del baño de hasta 90 °C y el residuo se enfría a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla de reacción se vierte en porciones en 150 g de hielo triturado con agitación vigorosa, ajustando la velocidad de adición de la mezcla para que la temperatura de la masa no supere los 15 °C. Una vez completada la reacción exotérmica, el residuo se filtra a través de un filtro de papel y se lava a fondo con agua. A continuación, el residuo en bruto se transfiere a un matraz, se añaden 100 ml de agua y 2 g de tris-hidroximetilaminometano (TRIS) y se agitan sin calentamiento hasta que el residuo se disuelve por completo y se obtiene una solución con un pH de 8-9. La solución resultante se filtra para eliminar las partículas extrañas y el filtrado se acidifica con una solución acuosa de ácido acético al 1 % a pH 7. El residuo formado se filtra, se lava a fondo con agua y se seca en un desecador de vacío sobre KOH a una temperatura de hasta 30 °C. Se obtienen 0,56 g del derivado 3 de la sustancia en cuestión en forma de un producto vítreo de color pardo claro. El rendimiento es del 27 % del valor teórico.
Para obtener el producto deseado, concretamente, 2-cloro-8-sulfhidril-5-(4-nitrofenil)-5H-pirimido [5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4,6,8-triol (derivado 4), se ponen 100 ml de oxicloruro de fósforo en un matraz de 200 ml y se calienta hasta ebullición. A continuación, se añaden 10 g del intermedio obtenido anteriormente (sales de bis [5-(2-sulfhidril-4,6-dihidroxihexahidropirimido)]-(4-nitrofenil)metano) al líquido en ebullición mientras se agita y se continúa agitando con ebullición vigorosa durante 30-50 minutos hasta que el depósito se disuelva por completo. Después de eso, la mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se vierte en porciones en 250 g de hielo triturado con agitación vigorosa, ajustando la velocidad de adición de la mezcla para que la temperatura final del material sea 50-60 °C. Una vez completada la reacción exotérmica, la mezcla se agita a 50 °C durante 8 horas. A continuación, la mezcla se enfría a temperatura ambiente, el precipitado se filtra a través de un filtro de papel y se lava a fondo con agua. A continuación, el residuo en bruto se transfiere a un matraz y se disuelve en 200 ml de agua con la adición de 5-6 ml de amoniaco al 25 %. La solución resultante se filtra para eliminar las partículas extrañas y el filtrado se acidifica con una solución acuosa de ácido acético al 5 % a pH 5. El residuo precipitado se separa y se desecha, y el filtrado se acidifica con HCl a pH 1 y se mantiene durante 1 hora a 20 °C. El residuo precipitado se filtra, se lava con agua, a continuación con un alcohol y éter y se seca al aire a temperatura ambiente. Se obtienen 2,4 g del derivado 4 de la sustancia en cuestión en forma de un polvo cristalino incoloro. El rendimiento es del 34 % del valor teórico.
Estudio de la actividad biológica del producto médico en cuestión.
Ejemplo 1. Determinación de la actividad anti-VIH de los derivados 1-7 del producto médico en cuestión.
Materiales y métodos:
Células. Se utilizaron células linfoblastoides humanas MT-4. Las células se incubaron en medio RPMI 1640 con suero de embriones de vaca al 10 %, 100 pg/ml de gentamicina.
Virus. Se usó la cepa VIH-1899A se utilizó como fuente del virus.
El fármaco. Se estudiaron muestras de fármacos disueltos en dimetilsulfóxido.
Estructura del estudio:
Estudio del efecto citotóxico del fármaco.
El producto médico investigado se añadió a las células en diversas concentraciones. Las células se incubaron a 37 °C en la atmósfera con el 5 % de CO2 y al 98 % de humedad durante 5 días. Registro de los resultados: Determinación de la viabilidad y el número de células mediante un colorante.
Estudio del efecto antiviral del fármaco.
Los productos médicos investigados se añadieron a las células a diversas dosis con infección simultánea con el virus a una dosis de 0,01 TCD50/célula. Los cultivos celulares se incubaron a 37 °C en la atmósfera con el 5 % de CO2 y al 98 % de humedad durante 5 días. Los resultados se registraron mediante la tinción de las células con colorante de tetrazolio (método MTT) con espectrofotometría y microscopía óptica: investigación del efecto citopático del virus (CPD) y formación inducida por virus de sincitio (el sincitio es un conglomerado de varias células con una membrana celular común formada como resultado de la fusión de sus membranas).
El grado de protección de las células del efecto citodestructivo del virus se determinó mediante la siguiente fórmula:
A-B
% de protección = -----x 100,
K-B
donde
A es el número de células viables en el grupo experimental;
B es el mismo en el cultivo infectado (control de virus);
K es el mismo en el cultivo no infectado (control celular).
Los resultados del estudio se presentan en la Tabla 6.
Ejemplo 2. Determinación de una dosis letal al 50 % de una mezcla de los derivados 1 2 4 de la sustancia en cuestión (DL50) con un modo de administración parenteral (inyectable).
La determinación de los indicadores de toxicidad aguda en el modo de administración parenteral incluyó experimentos en ratones que pesaban 18-20 g, de 8-9 semanas de edad.
En los experimentos con roedores, se utilizaron grupos de 5 animales del mismo sexo para estudiar cada dosis. Las preparaciones se disolvieron en H2O estéril y se inyectaron en la vena de la cola (IV).
Resultados: La DL50 de una mezcla de los derivados 1 2 4 fue de 2000 a 2500 mg/kg.
Ejemplo 3. Determinación de la DL50 de una mezcla de los derivados 1 2 5 en modo de administración enteral. Determinación de la DL50 de la sustancia en cuestión en el modo de administración enteral.
La determinación de los indicadores de toxicidad aguda en el modo de administración enteral incluyó experimentos en ratones que pesaban 18-20 g, de 8-9 semanas de edad.
En los experimentos con roedores, se utilizaron grupos de 5 animales del mismo sexo para estudiar cada dosis. Los fármacos se administraron por vía intragástrica (IG) en dosis crecientes según el método de Litchfield-Wilcoxon. Para ello, se diluyeron en moco de almidón al 1 % y se administró a los animales la suspensión resultante.
Resultados: La DL50 de una mezcla de los derivados 1 2 5 fue de 12000 - 16000 mg/kg.
Ejemplo 4. Determinación de la DL50 en modo de administración intravaginal
La determinación de los indicadores de toxicidad aguda en el modo de administración intravaginal incluyó experimentos en ratas que pesaban 150-170 g, de 3-3,5 meses de edad. Los supositorios que contenían 1000 pg/supositorio N.° 14 se cortaron con una cuchilla en tiras de un tamaño más pequeño, conveniente para la administración vaginal. El fármaco se administró durante 12 horas a intervalos de 2 horas. La dosis total recibida por el animal tras la administración fue de 2200 pg/kg. Ninguno de los animales murió ni mostró signos de efectos adversos del fármaco. La dinámica del peso corporal en todos los grupos se mantuvo normal.
Ejemplo 5. Acción conjunta del medicamento en cuestión y las preparaciones utilizadas para tratar enfermedades causadas por virus de inmunodeficiencia humana.
Materiales y métodos:
Se utilizaron células linfoblastoides humanas MT-4. Las células se cultivaron en medio RPMI 1640 con suero de embriones de vaca al 10 %, 100 pg/ml de gentamicina.
Se usó la cepa de VIH-1899A como fuente del virus.
El fármaco. Se estudiaron muestras de fármacos disueltos en dimetilsulfóxido. Como fármaco antirretroviral de referencia, se utilizó Raltegravir (prototipo).
Estudio de la acción antiviral del fármaco (protección celular).
Los fármacos investigados se añadieron a las células a diversas dosis con infección simultánea con el virus a una dosis de 0,01 TCD50/célula. Los cultivos celulares se incubaron a 37 °C en la atmósfera con el 5 % de CO2 y al 98 % de humedad durante 5 días. Los resultados se registraron mediante la tinción de las células con colorante de tetrazolio (método MTT) con espectrofotometría y microscopía óptica: investigación del efecto citopático del virus (CPD) y formación inducida por virus de sincitio (el sincitio es un conglomerado de varias células con una membrana celular común formada como resultado de la fusión de sus membranas).
Los resultados se dan en la Tabla 8.
Por lo tanto, se puede concluir que el fármaco en cuestión tiene un efecto sinérgico cuando se usa en combinación con fármacos usados para tratar enfermedades causadas por el virus de la inmunodeficiencia humana.
Ejemplo 6. Efecto de los compuestos en cuestión sobre la reproducción del virus de la hepatitis B (VHB).
Materiales y métodos.
Se cultivaron células de la línea HepG2.2.15 infectadas con el virus de la hepatitis B en medio DMEM complementado con suero bovino al 10 % con CO2 al 5 %, a 37 °C.
Análisis de la cantidad de VHB extracelular del ADN.
Después de 5 días de incubación con HepG2.2.15, se seleccionó el medio de cultivo, las células se separaron por centrifugación, y el ADN se aisló por el método de Klintschar y Neuhuber (Klintschar y Neuhuber, 2000). La cuantificación del VHB se realizó mediante RT-PCR.
Los resultados se dan en la Tabla 9.
Los datos obtenidos indican que el fármaco en cuestión es activo contra el virus de la hepatitis B.
Aplicabilidad industrial
La invención se implementa utilizando materiales y equipos comunes, lo que da como resultado, según la opinión del Solicitante, la conformidad de la invención con el criterio de patentabilidad de "Aplicabilidad Industrial" ("IA").
Tabla 1.
Figure imgf000008_0001
Tabla 2
Figure imgf000008_0002
Tabla 3
Figure imgf000009_0002
Tabla 4
Figure imgf000009_0003
Tabla 5
Figure imgf000009_0001
continuación
Figure imgf000010_0001
Tabla 6
Figure imgf000010_0002
Tabla 7
Figure imgf000011_0001
Tabla 8
Figure imgf000011_0002
Tabla 9
Figure imgf000011_0003

Claims (4)

REIVINDICACIONES
1. Derivados de 2-doro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol de la siguiente fórmula general:
Figure imgf000012_0001
donde: X se selecciona del grupo: H, NO2 , Hal, OMe;
R1 se selecciona del grupo: Cl, OH;
R2 se selecciona del grupo: Cl, SH, OH
para su uso en el tratamiento de la hepatitis B.
2. Un fármaco combinado para su uso en el tratamiento de infecciones por VIH, que contiene un derivado de 2-cloro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano[2,3-d]pirimidin-4-ol de la siguiente fórmula general:
Figure imgf000012_0002
donde: X se selecciona del grupo: H, NO2 , Hal, OMe;
R1 se selecciona del grupo: Cl, OH;
R2 se selecciona del grupo: Cl, SH, OH
junto con el inhibidor de proteasa Lopinavir, en una cantidad eficaz.
3. Derivados de 2-cloro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano [2,3-d]pirimidin-4-ol de las fórmulas (1) a (7):
Figure imgf000013_0001
4. Derivados de 2-doro-5-fenil-5H-pirimido[5',4':5,6]pirano [2,3-d]pirimidin-4-ol de las fórmulas (1) a (7) para su uso en el tratamiento de infecciones por hepatitis B o VIH:
Figure imgf000014_0001
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