RU2576008C2 - ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ СНИЖАТЬ ОБРАЗОВАНИЕ БИОПЛЕНОК ГРИБАМИ РОДА Candida - Google Patents
ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ СНИЖАТЬ ОБРАЗОВАНИЕ БИОПЛЕНОК ГРИБАМИ РОДА Candida Download PDFInfo
- Publication number
- RU2576008C2 RU2576008C2 RU2015103576/10A RU2015103576A RU2576008C2 RU 2576008 C2 RU2576008 C2 RU 2576008C2 RU 2015103576/10 A RU2015103576/10 A RU 2015103576/10A RU 2015103576 A RU2015103576 A RU 2015103576A RU 2576008 C2 RU2576008 C2 RU 2576008C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- enterococcus faecium
- ability
- biofilms
- candida
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Enterococcus faecium 18 депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора под коллекционным номером 1252. Штамм обладает способностью снижать образование биопленок грибами рода Candida и может быть использован для приготовления пробиотического препарата. 2 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической промышленности для получения пробиотического препарата, обладающего способностью снижать образование биопленок грибами рода Candida.
Аналогов изобретения в патентной и научно-технической литературе не обнаружено.
Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в получении нового бактериального штамма, обеспечивающего эффективное снижение способности образовывать биопленки грибами рода Candida.
Указанный технический результат достигнут получением нового штамма бактерий Enterococcus faecium 18.
Штамм Enterococcus faecium 18 выделен с использованием классических бактериологических методов из содержимого толстого кишечника здорового человека в 2014 году в лаборатории кафедры микробиологии и заразных болезней ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет».
Полученный штамм Enterococcus faecium 18 депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора». Коллекционный номер - №1252.
Штамм Enterococcus faecium 18 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.
Культурально-морфологические признаки
Овоидные (яйцевидные) неподвижные клетки, несколько вытянутые в длину, расположены попарно. Размер клеток 1,25×1,59 мкм. Окраска по Граму - положительная. Спор не образуют.
На желчно-эскулиновом агаре с азидом натрия (37°С, 24 ч) образует мелкие (точечные), 0,5-1 мм в диаметре, сероватого цвета (полупрозрачные), окруженные черным ореолом, округлые, выпуклые колонии с гомогенной внутренней структурой, S-форма. Рост обильный.
В Schaedler-бульоне (37°С, 24 ч) дает обильный рост, придонный осадок, который гомогенизируется при встряхивании.
На Schaedler-агаре (37°С, 24 ч) дает обильный рост с характерным молочнокислым запахом, колонии мелкие (1-2 мм), округлые, выпуклые, блестящие, гладкие, край колонии ровный.
На молочно-ингибиторной среде по Г.П. Калине (37°С, 24 ч) формирует мелкие (1-2 мм), серого цвета, с металлическим (стальным) блеском, округлые колонии. Края колонии ровные, поверхность выпуклая, влажная, блестящая. Рост обильный.
Физиолого-биохимические признаки
Факультативный анаэроб, оптимальные условия для культивирования - атмосферные. Температура культивирования - 37°С. На питательных средах вырастает в течение 18-24 часов.
Хемоорганотроф, метаболизм бродильного типа. Штамм осуществляет гомоферментативное молочнокислое брожение. Каталазу не продуцирует, желатину не разжижает. Ферментирует D-рибозу, D-рафинозу, лактозу, салицин, N-ацетил-D-глюкозамин, D-маннозу, сахарозу, D-мальтозу, метил-В-D-глюкопиранозид, D-трегалозу, D-галактозу. Продуцирует ферменты: L-аспартат-ариламидазу, аргининдигидролазу 1, альфа-галактозидазу, бета-галактозидазу, L-пирролидонил-ариламидазу, аргининдигидролазу 2.
Штамм желатиназу не продуцирует, продуцирует аминокислоту аргинин, ферментирует сорбозу, арабинозу, маннитол, мелибиозу.
Штамм Enterococcus faecium 18 идентифицирован с использованием полимеразной цепной реакции по видоспецифическому гену, кодирующему синтез супероксиддисмутазы (Jackson C.R., Fedorka-Cray P.J., Barrett J.B. Use of a genus- and species-specific multiplex PCR for identification of enterococci. J. Clin. Microbiol. 2004. 42(8): 3558-3565), как штамм вида Enterococcus faecium.
Генетические особенности штамма: методом ПЦР установлено, что в геноме штамма отсутствуют генетические детерминанты, кодирующие синтез факторов вирулентности: цитолизинов (cylM, cylB, cylA, cylLs); ген, обуславливающий протеолитическую активность (GelE); ген, ответственный за продукцию гиалуронидазы (Hyl); ген, кодирующий белки клеточной стенки (ESP); ген, отвечающий за синтез поверхностного белка-адгезина (ASA).
Штамм устойчив к ванкомицину, тейкопланину, гентамицину и имеет гены устойчивости к ванкомицину и тейкопланину (Van A, Van C1, Van С2-3).
Условия и состав среды для размножения: на Schaedler-агаре при 37°С (рН 7,2-7,6), в Schaedler-бульоне при 37°С в течение 18-24 часов.
Условия хранения: лиофильно высушенная культура при температуре 4±2°С в защищенном от прямых солнечных лучей месте при относительной влажности воздуха не более 60% в течение 2-х лет или культура, выращенная в течение суток при 37°С в полужидкой среде СТА, в условиях бытового холодильника при температуре 4±2°С в течение 6 месяцев.
Способность штамма Enterococcus faecium 18 снижать образование биопленок грибами рода Candida определяется по степени связывания грибами рода Candida красителя «кристаллический фиолетовый» в стерильных 96-луночных полистироловых планшетах (O′Toole G., Kaplan Н.В., Kolter R. Biofilm formation as microbial development. Annu. Rev. Microbiol. 2000, 54: 49-79) с помощью фотометра Stat Fax 2100 («Awareness Technology», США) после их совместного культивирования (Ермоленко Е.И., Ждан-Пушкина С.Х., Суворов А.Н. Взаимодействие Candida albicans и Lactobacillus plantarum in vitro. Проблемы медицинской микологии. 2004, т. 6, №2: 49-54). Уровень способности к образованию биопленок грибами рода Candida рассчитывается как отношение опыт/контроль и выражается в условных единицах (Валышев А.В., Валышева И.В., Гейде И.В. Образование биопленок фекальными штаммами энтеробактерий и дрожжевых грибов рода Candida. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2009, №4: С.44-46).
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Изучали влияние штамма Enterococcus faecium 18, выделенного из кишечника здорового человека, на способность грибов рода Candida образовывать биопленки при совместном культивировании в жидкой питательной среде (Schaedler-бульон «Hi Media», Индия).
Готовили взвеси суточных агаровых культур 5 видов грибов: С. albicans (n=6), С. glabrata (n=6), С. tropicalis (n=6), С. kefyr (n=6), С. krusei (n=6) и штамма Enterococcus faecium 18 (мутность 2 по шкале Мак Фарланда).
Затем готовили 30 пробирок (5 видов грибов по 6 штаммов), в каждую вносили 5 мл Schaedler-бульона, 0,05 мл взвеси штамма Enterococcus faecium 18 и добавляли 0,05 мл взвеси исследуемого штамма гриба рода Candida (опытные пробы).
В 30 контрольных пробирок вносили только по 5 мл Schaedler-бульона и по 0,05 мл взвеси исследуемого штамма гриба рода Candida.
Опытные и контрольные пробы инкубировали при 37°С в микроаэрофильных условиях в течение 24 часов.
После инкубирования культуры грибов рода Candida из опытных и контрольных пробирок в объеме 0,01 мл высевали на среду Сабуро, посевы инкубировали при 37°С 24 часа, затем из выросших колоний грибов рода Candida готовили взвесь и определяли их способность образовывать биопленки по степени связывания ими красителя «кристаллический фиолетовый» в стерильных 96-луночных полистироловых планшетах с помощью фотометра Stat Fax 2100 («Awareness Technology», США).
Уровень признака выражали в условных единицах.
Результаты исследований приведены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, средний уровень признака в контроле составляет у С. albicans 3,5±0,01, у non-albicans видов (С. glabrata, С. tropicalis, С. kefyr, С. krusei) 3,7±0,02, 2,9±0,02, 2,9±0,02, 2,8±0,02, соответственно.
В опытных пробах, после совместного культивирования грибов с Enterococcus faecium 18 уровень способности к образованию биопленок у всех исследуемых видов грибов рода Candida существенно снижался (в 2,1-3,7 раза).
Пример 2.
Аналогично примеру 1 проводили эксперименты по определению у разных видов грибов рода Candida уровня способности образовывать биопленки при культивировании с заявляемым штаммом Enterococcus faecium 18 и дикими штаммами Enterococcus faecium, выделенными из кишечного биотопа.
Результаты исследований приведены в таблице 2.
Как видно из таблицы 2, после совместного культивирования грибов рода Candida с Enterococcus faecium 18 уровень способности образовывать биопленки составил - у С. albicans 1,7±0,01; С. glabrata 1,0±0,01; С. tropicalis 0,95±0,01; С. kefyr 1,2±0,01; С. krusei 1,05±0,01, а после сокультивирования с дикими штаммами Enterococcus faecium уровень признака составил - у С. albicans от 1,9±0,01 до 3,5±0,01; С. glabrata от 1,2±0,01 до 2,0±0,01 С. tropicalis от 1,1±0,01 до 2,4±0,01 С. kefyr от 1,4±0,01 до 2,2±0,01 С. krusei от 1,1±0,01 до 2,1±0,01, что свидетельствует о высокой способности заявляемого штамма Enterococcus faecium 18 снижать образование биопленок у грибов рода Candida по сравнению с изученными дикими штаммами Enterococcus faecium.
Таким образом, заявляемый штамм Enterococcus faecium 18 отличается высокой способностью снижать образование биопленок грибами рода Candida и может быть использован в производстве пробиотических препаратов, оказывающих профилактическое и лечебное действие при дисбиозах кишечника.
Claims (1)
- Штамм бактерий Enterococcus faecium, обладающий способностью снижать образование биопленок грибами рода Candida, депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора», под коллекционным номером 1252.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015103576/10A RU2576008C2 (ru) | 2015-02-03 | 2015-02-03 | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ СНИЖАТЬ ОБРАЗОВАНИЕ БИОПЛЕНОК ГРИБАМИ РОДА Candida |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015103576/10A RU2576008C2 (ru) | 2015-02-03 | 2015-02-03 | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ СНИЖАТЬ ОБРАЗОВАНИЕ БИОПЛЕНОК ГРИБАМИ РОДА Candida |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015103576A RU2015103576A (ru) | 2015-06-27 |
RU2576008C2 true RU2576008C2 (ru) | 2016-02-27 |
Family
ID=53497339
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015103576/10A RU2576008C2 (ru) | 2015-02-03 | 2015-02-03 | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ СНИЖАТЬ ОБРАЗОВАНИЕ БИОПЛЕНОК ГРИБАМИ РОДА Candida |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2576008C2 (ru) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2413761C1 (ru) * | 2006-11-17 | 2011-03-10 | Ска Хайджин Продактс Аб | Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И/ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ КАНДИДОЗА И ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВЫХ ПУТЕЙ |
-
2015
- 2015-02-03 RU RU2015103576/10A patent/RU2576008C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2413761C1 (ru) * | 2006-11-17 | 2011-03-10 | Ска Хайджин Продактс Аб | Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И/ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ КАНДИДОЗА И ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВЫХ ПУТЕЙ |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
РК 37179, 15.08.2003. ЕРМОЛЕНКО Е.И., ЖДАН- ПУШКИНА С.Х., и др., Чувсвительность грибов рода Candida к дейсвию лактобацилл, Успехи медицинской микологии, 2003, т.1, с. 13-14. РЫБАЛЬЧЕНКО О.В. и др. Структура и функции бактериальных биопленок симбиотических и условно- патогенных бактерий, Верхневолжский медицинский журнал, 2013, т.11, вып. 4, с.37-42. ЕРМОЛЕНКО Е.И., ЖДАН- ПУШКИНА С.Х. идр., Взаимодействие Candida albicans и Lactobacillus plantarum in vitro. Проблемы медицинской микологии, 2004, 6,2, с. 49-54.. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2015103576A (ru) | 2015-06-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105132322B (zh) | 一株植物乳杆菌及其应用 | |
CN110577919B (zh) | 一种分离自婴儿粪便的耐热型动物双歧杆菌乳亚种 | |
Lacerda et al. | Lactic acid bacteria and yeasts associated with spontaneous fermentations during the production of sour cassava starch in Brazil | |
CN110157645B (zh) | 一种唾液乳杆菌y4及其应用 | |
CN110607251B (zh) | 一种降解呕吐毒素的海洋杆菌及其应用 | |
CN109022313B (zh) | 一株植物乳杆菌 | |
CN105132321B (zh) | 一种屎肠球菌及其高密度固态发酵的培养基及方法 | |
Rapsang et al. | Identification of Lactobacillus pobuzihii from tungtap: a traditionally fermented fish food, and analysis of its bacteriocinogenic potential | |
CN114574393B (zh) | 一种德氏乳杆菌seuneu-110及其在皮肤方面的应用 | |
CN109182218A (zh) | 一株唾液乳杆菌及在下调变形链球菌生物膜形成的基因表达中的应用 | |
CN111040959B (zh) | 具有特定病原微生物拮抗能力的草鱼源乳酸菌及其应用 | |
CN110452849B (zh) | 一种益生植物乳杆菌 | |
TWI701331B (zh) | 具腸道保健功效與耐酒精之益生菌株及在保健產品與啤酒製造之應用 | |
Kim et al. | Characterization of Bacillus polyfermenticus KJS-2 as a probiotic | |
CN115786190B (zh) | 一株可产尿石素a抗衰老的植物乳杆菌及其应用 | |
Englerová et al. | The study of the probiotic potential of the beneficial bacteria isolated from kefir grains | |
KR20150101789A (ko) | 복합 효소 생산능 및 항균 활성을 갖는 바실러스 서브틸리스 bk418 균주 및 이의 용도 | |
RU2576008C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ СНИЖАТЬ ОБРАЗОВАНИЕ БИОПЛЕНОК ГРИБАМИ РОДА Candida | |
CN110982736A (zh) | 一种食品来源产胞外多糖的棒状乳杆菌及其应用 | |
CN110106113A (zh) | 一株高加索酸奶乳杆菌msr101及其应用 | |
CN113061550B (zh) | 一株乳杆菌新菌株z6及其在食品中的应用 | |
RU2571852C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИЙ РОДА Listeria И ВИДА Enterococcus faecalis | |
Nurcahyo et al. | Isolation and characterization of lactic acid bacteria (LAB) from small intestine content of duck (Anas Sp.) as a probiotic candidate | |
CN112063566B (zh) | 一株屎肠球菌及其应用 | |
CN109628343B (zh) | 短双歧杆菌yh68及在降低鼠伤寒沙门氏菌感染风险产品中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HC9A | Changing information about author(s) | ||
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170204 |