RU2571852C2 - ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИЙ РОДА Listeria И ВИДА Enterococcus faecalis - Google Patents
ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИЙ РОДА Listeria И ВИДА Enterococcus faecalis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2571852C2 RU2571852C2 RU2014145033/10A RU2014145033A RU2571852C2 RU 2571852 C2 RU2571852 C2 RU 2571852C2 RU 2014145033/10 A RU2014145033/10 A RU 2014145033/10A RU 2014145033 A RU2014145033 A RU 2014145033A RU 2571852 C2 RU2571852 C2 RU 2571852C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacteria
- enterococcus
- strain
- relation
- enterococcus faecium
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Enterococcus faecium Ef79OSAU, обладающий антагонистической активностью в отношении бактерий рода Listeria и вида Enterococcus faecalis, депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры человека (ГКНМ) ФБУН «МНИИЭМ им Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора» под регистрационным номером-1251 и может быть использован для приготовления пробиотических препаратов. Изобретение позволяет повысить антагонистическую активность в отношении бактерий рода Listeria и вида Enterococcus faecalis. 3 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве пробиотических препаратов, оказывающих антагонистическое влияние на бактерии рода Listeria и вида Enterococcus faecalis, вызывающих заболевания у сельскохозяйственных животных.
Аналогов изобретения в патентной и научно-технической литературе не обнаружено.
Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в получении бактериального штамма, обладающего антагонистической активностью в отношении бактерий рода Listeria и вида Enterococcus faecalis.
Указанный технический результат достигнут тем, что получен новый штамм Enterococcus faecium.
Новый штамм Enterococcus faecium выделен с использованием классических бактериологических методов из содержимого толстого отдела кишечника здоровой свиньи в 2013 году в лаборатории кафедры микробиологии и заразных болезней ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет».
Полученный штамм Enterococcus faecium депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры человека (ГКНМ) ФГУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора», под регистрационным номером - 1251.
Заявляемый штамм Enterococcus faecium 1251 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.
Культурально-морфологические признаки.
Овоидные (яйцевидные) неподвижные клетки несколько вытянутые в длину, расположены попарно. Размер клеток 1,25×1,59 мкм. Окраска по Граму - положительная. Спор не образуют.
На желчно-эскулиновом агаре с азидом натрия (37°C, 24 ч) образует мелкие (точечные), 0,5-1 мм в диаметре, сероватого цвета (полупрозрачные), окруженные черным ореолом, округлые, выпуклые колонии с гомогенной внутренней структурой, S-форма. Рост обильный.
На Schaedler-агаре (37°C, 24 ч) дает обильный рост с характерным молочно-кислым запахом, колонии мелкие (1-2 мм), округлые, выпуклые, блестящие, гладкие, край колонии ровный.
В Schaedler-бульоне (37°C, 24 ч) дает обильный рост, придонный осадок, который гомогенизируется при встряхивании.
На молочно-ингибиторной среде по Г.П. Калине (37°C, 24 ч) формирует мелкие (1-2 мм), серого цвета, с металлическим (стальным) блеском, округлые колонии. Края колонии ровные, поверхность выпуклая, влажная, блестящая. Рост обильный.
Физиолого-биохимические признаки.
Факультативный анаэроб, оптимальные условия для культивирования - атмосферные. Температура культивирования - 37°C. Способен к росту при 45°C. Может расти на средах с содержанием 6,5% NaCl. На средах вырастает в течение 18-24 часов.
Хемоорганотроф, метаболизм бродильного типа. Штамм осуществляет гомоферментативное молочно-кислое брожение. Каталазу не продуцирует, желатину не разжижает. Ферментирует D-рибозу, D-рафинозу, лактозу, салицин, N-ацетил-D-глюкозамин, D-маннозу, сахарозу, D-мальтозу, метил-В-D-глюкопиранозид, D-трегалозу, D-галактозу. Продуцирует ферменты: L-аспартат-ариламидазу, аргининдигидролазу 1, альфа-галактозидазу, бета-галактозидазу, L-пирролидонил-ариламидазу, аргининдигидролазу 2.
Штамм устойчив к новобицину, бацитрацину.
Условия и состав среды для размножения: на Schaedler-агаре при 37°C (pH 7,2-7,6), в Schaedler-бульоне при 37°C в течение 18-24 часов.
Диапазон значений pH среды, при котором растет штамм Enterococcus faecium 1251, составляет 4,5-10, pH-оптимум роста штамма-7,5.
Генетические особенности штамма: методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) установлено, что штамм имеет гены, кодирующие синтез энтероцинов Р, L50A и L50B. С помощью ПЦР установлено, что в геноме штамма отсутствуют генетические детерминанты, кодирующие синтез факторов вирулентности: цитолизинов (cylM, cylB, cylA, cylLs, cylL1)); гены, обуславливающие протеолитическую активность (GelE и sprE); ген, ответственный за продукцию гиалуронидазы (Hyl); ген, кодирующий белки клеточной стенки (ESP); ген, отвечающий за синтез поверхностного белка-адгезина (ASA). Штамм имеет гены устойчивости к аминогликозидам (кроме гентамицина) (ant(4′)-Ia) и к низким концентрациям ванкомицина (vanC-2/3).
Условия хранения: лиофильно высушенная культура при температуре 4±2°C в защищенном от прямых солнечных лучей месте при относительной влажности воздуха не более 60% в течение 2-х лет или культура, выращенная в течение суток при 37°C в полужидкой среде СТА, в условиях бытового холодильника при температуре 4±2°C в течение 6 месяцев.
Штамм Enterococcus faecium 1251 идентифицирован с использованием полимеразной цепной реакции по видоспецифическому гену, кодирующему синтез супероксиддисмутазы (Jackson C.R., Fedorka-Cray P.J., Barrett J.B. Use of a genus- and species-specific multiplex PCR for identification of enterococci. J. Clin. Microbiol. 2004. 42(8): 3558-3565), как штамм вида Enterococcus faecium.
Антагонистическая активность.
Исследование антагонистической активности штамма Enterococcus faecium 1251 проводили чашечным методом (принцип отсроченного антагонизма) на плотной среде - Schaedler агар (Кудлай М.Г., Лиходед В.Г. Бактериоциногения. Л.: «Медицина». 1966. С. 15-24) на тест-штаммах Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, K. oxytoca, Enterobacter cloacae, Moraxella morganii, Candida albicans, Enterococcus faecalis, Listeria monocytogenes.
Результаты исследований приведены в таблице 1.
Как видно из таблицы антагонистическая активность Enterococcus faecium 1251 установлена в отношении Enterococcus faecalis, Listeria monocytogenes и не выявлена в отношении Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, К. oxytoca, Enterobacter cloacae, Moraxella morganii, Candida albicans. Степень антагонизма выражается коэффициентом антагонистической активности и определяется по следующим критериям: 2 и менее - низкая, 2-5 - средняя, 5 и более - высокая.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Суточную культуру штамма Enterococcus faecium 1251 засевали уколом в питательный Schaedler-агар. После инкубации при температуре 37°C в течение 24 часов выросшую культуру инактивировали парами хлороформа в течение одного часа. Затем чашку просушивали 30 мин на воздухе и на поверхность агара наслаивали второй слой (4-5 мл) расплавленного и остуженного до 50°C 0,7% Schaedler-агара, смешанного с 0,1 мл тестируемых культур - Enterococcus faecalis, Listeria monocytogenes, L. seeligeri, L. ivanovii, L. innocua (их мутность составляет 2 по шкале МакФарланда).
Через 24 ч инкубации при температуре 37°C проводили учет результатов: для этого с помощью линейки и циркуля измеряли диаметр зон задержки роста тестируемой культуры (d1) и диаметр роста штамма-продуцента (d2). По отношению зоны задержки роста тестируемой культуры к зоне роста штамма-продуцента антагонистически активных субстанций вычисляли коэффициент его антагонистической активности (КА).
Результаты исследований приведены в таблице 2.
Коэффициент антагонистической активности в отношении Listeria monocytogenes составляет от 2,9 до 9,7; Enterococcus faecalis от 3,6 до 6,5; также штамм проявляет антагонистическую активность в отношении других видов рода Listeria: L. seeligeri, L. ivanovii, L. innocua.
Пример 2.
Аналогично примеру 1 проводили эксперименты по определению коэффициента антагонистической активности (КА) у Enterococcus faecium 1251 и диких штаммов Enterococcus faecium, выделенных из кишечного биотопа по отношению к тест-штаммам (таблица 3).
Авторами экспериментально установлено, что коэффициент антагонистической активности (КА) у Enterococcus faecium 1251 в отношении L. monocytogenes составил 7,0, Enterococcus faecalis 5,1; L. innocua 7,2; L. ivanovii 6,9; L. seeligeri 10,1.
Тогда как коэффициент антагонистической активности диких штаммов Enterococcus faecium составлял: в отношении L. monocytogenes от 1,4 до 3,7; Enterococcus faecalis от 1,4 до 2,2; L. innocua от 2,7 до 3,8; L. ivanovii от 2,1 до 3,2; L. seeligeri от 3,9 до 4,2, что свидетельствует о высокой антагонистической активности заявляемого штамма Enterococcus faecium 1251 в отношении бактерий рода Listeria и вида Enterococcus faecalis по сравнению с изученными дикими штаммами Enterococcus faecium.
Таким образом, заявляемый штамм Enterococcus faecium 1251 отличается высокой антагонистической активностью в отношении бактерий рода Listeria и вида Enterococcus faecalis и может быть использован в производстве пробиотических препаратов, оказывающих антагонистическое влияние на бактерии рода Listeria и вида Enterococcus faecalis, вызывающих заболевания у сельскохозяйственных животных.
Claims (1)
- Штамм бактерий Enterococcus faecium, обладающий антагонистической активностью в отношении бактерий рода Listeria и вида Enterococcus faecalis, депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры человека (ГКНМ) ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора» под регистрационным номером -1251.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014145033/10A RU2571852C2 (ru) | 2014-11-06 | 2014-11-06 | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИЙ РОДА Listeria И ВИДА Enterococcus faecalis |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014145033/10A RU2571852C2 (ru) | 2014-11-06 | 2014-11-06 | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИЙ РОДА Listeria И ВИДА Enterococcus faecalis |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014145033A RU2014145033A (ru) | 2015-02-10 |
RU2571852C2 true RU2571852C2 (ru) | 2015-12-20 |
Family
ID=53281797
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014145033/10A RU2571852C2 (ru) | 2014-11-06 | 2014-11-06 | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИЙ РОДА Listeria И ВИДА Enterococcus faecalis |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2571852C2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2739427C1 (ru) * | 2019-12-23 | 2020-12-24 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Оренбургский государственный аграрный университет" | Штамм бактерий Enterococcus faecium, обладающий антагонистической активностью в отношении бактерий вида E. coli, родов Enterococcus и Listeria |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2182172C1 (ru) * | 2001-04-05 | 2002-05-10 | Байгузина Фаниля Абузаровна | Штамм бактерий bacillus subtilis, обладающий широким спектром антагонистической активности |
RU2227039C2 (ru) * | 2002-07-03 | 2004-04-20 | Алехина Галина Геннадьевна | Пробиотическая композиция с высокой антагонистической активностью в отношении условно-патогенной и патогенной микрофлоры для лечебно-профилактических средств и способ ее получения |
RU2501851C1 (ru) * | 2012-08-31 | 2013-12-20 | Общество с ограниченной ответственностью "НОВА" | ШТАММ Bacillus licheniformis, ОБЛАДАЮЩИЙ ВЫРАЖЕННЫМ АНТАГОНИЗМОМ ПО ОТНОШЕНИЮ К Salmonella typhi, Staphyloccus aureus, Listeria monocytogenes И РЕЗИСТЕНТНОСТЬЮ К СТРЕПТОМИЦИНУ И НАЛИДИКСОВОЙ КИСЛОТЕ |
-
2014
- 2014-11-06 RU RU2014145033/10A patent/RU2571852C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2182172C1 (ru) * | 2001-04-05 | 2002-05-10 | Байгузина Фаниля Абузаровна | Штамм бактерий bacillus subtilis, обладающий широким спектром антагонистической активности |
RU2227039C2 (ru) * | 2002-07-03 | 2004-04-20 | Алехина Галина Геннадьевна | Пробиотическая композиция с высокой антагонистической активностью в отношении условно-патогенной и патогенной микрофлоры для лечебно-профилактических средств и способ ее получения |
RU2501851C1 (ru) * | 2012-08-31 | 2013-12-20 | Общество с ограниченной ответственностью "НОВА" | ШТАММ Bacillus licheniformis, ОБЛАДАЮЩИЙ ВЫРАЖЕННЫМ АНТАГОНИЗМОМ ПО ОТНОШЕНИЮ К Salmonella typhi, Staphyloccus aureus, Listeria monocytogenes И РЕЗИСТЕНТНОСТЬЮ К СТРЕПТОМИЦИНУ И НАЛИДИКСОВОЙ КИСЛОТЕ |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
БЕРЛОВ М.Н., и др. Антагонистическая активность энтерококков в отношении Streptomyces pyogenes, Вестник Санкт-Петербургского Университета, сер.11, 2008, вып.3, стр.137-143. * |
СЕМЕНОВ А.В. и др., Характеристика антагонистической активности пробиотических бактерий при их взаимодействии, Клиническая, микробиологическая, антимикробная химиотерапия, 2010, т. 12, N4, стр. 347-352. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2739427C1 (ru) * | 2019-12-23 | 2020-12-24 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Оренбургский государственный аграрный университет" | Штамм бактерий Enterococcus faecium, обладающий антагонистической активностью в отношении бактерий вида E. coli, родов Enterococcus и Listeria |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2014145033A (ru) | 2015-02-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111394361B (zh) | 一株侧孢短芽孢杆菌、其组合物及其用途 | |
CN109055268B (zh) | 一种复合微生态制剂及其在蜜蜂养殖过程中的应用 | |
CN110157645B (zh) | 一种唾液乳杆菌y4及其应用 | |
CN117551568A (zh) | 一株具有产苯乳酸能力的植物乳杆菌ts | |
CN117327626A (zh) | 一种植物乳杆菌ts1及其培养方法与应用 | |
RU2571852C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИЙ РОДА Listeria И ВИДА Enterococcus faecalis | |
CN105104712B (zh) | 一种微生物饲料添加剂及其制备方法 | |
CN114717150B (zh) | 一种植物乳杆菌crs33及其应用 | |
SETYATI et al. | Enzyme-producing symbiotic bacteria in gastropods and bivalves molluscs: Candidates for bioindustry materials | |
Manguntungi et al. | The profile analysis of lactic acid bacteria (LAB) from Sumbawa white honey and its potential producing antibacterial compounds | |
KR101201337B1 (ko) | 신규한 락토바실러스속 유산균 복합 균주를 포함하는 사료첨가제 | |
RU2739427C1 (ru) | Штамм бактерий Enterococcus faecium, обладающий антагонистической активностью в отношении бактерий вида E. coli, родов Enterococcus и Listeria | |
CN109628343B (zh) | 短双歧杆菌yh68及在降低鼠伤寒沙门氏菌感染风险产品中的应用 | |
Mokhtari et al. | Isolation and identification of lactic acid bacteria from Algerian durum wheat (Triticum Durum) natural fermented in underground silos Matmora “El-Hammoum” and their Antimicrobial Activity Again Pathogenic Germs | |
JP2017012163A (ja) | 耐酸性、耐胆汁性及び細胞付着能に優れたラクトバシラス・プランタラムllp5193、及びこれを有効成分として含む製品 | |
KR20210076221A (ko) | 페디오코커스 펜토사세우스 kcc-45 및 이를 포함하는 조성물 | |
RU2576008C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Enterococcus faecium, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ СНИЖАТЬ ОБРАЗОВАНИЕ БИОПЛЕНОК ГРИБАМИ РОДА Candida | |
RU2787384C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus subtilis subsp. inaquosorum, обладающий антагонистическим действием в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов | |
RU2677668C2 (ru) | ШТАММЫ Lactobacillus helveticus D75 и D76 И ПРЕПАРАТ, ИХ СОДЕРЖАЩИЙ | |
RU2733431C2 (ru) | Способ контроля ингибирующих свойств в отношении бактериальной флоры питательной среды для выделения бруцелл | |
RU2787241C2 (ru) | Способ повышения продуктивности цыплят-бройлеров | |
Lestari et al. | Isolation and identification of bacteria in gastrointestinal of eel (Anguilla bicolor) that has potential as probiotic | |
Le et al. | Chitinase-producing Salinivibrio bacteria isolated from salt-fermented shrimp with antimicrobial and safety assessments | |
Kamble et al. | Enhancement of DNase production from a moderate halophilic bacterium and studies on its phylogeny | |
Bazukyan et al. | SOME PROPERTIES OF ANTIBACTERIAL COMPONENT OF LACTIC ACID BACTERIA ISOLATED FROM ARMENIAN DAIRY PRODUCTS. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171107 |