RU2540144C1 - СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНА Bordetella pertussis - Google Patents
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНА Bordetella pertussis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2540144C1 RU2540144C1 RU2013154746/10A RU2013154746A RU2540144C1 RU 2540144 C1 RU2540144 C1 RU 2540144C1 RU 2013154746/10 A RU2013154746/10 A RU 2013154746/10A RU 2013154746 A RU2013154746 A RU 2013154746A RU 2540144 C1 RU2540144 C1 RU 2540144C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pertussis
- mixture
- toxin
- vaccine
- bordetella pertussis
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения бесклеточной коклюшной вакцины. Способ включает культивирование коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделение супернатанта от микробной массы центрифугированием, выделения из него коклюшного токсина, детоксикацию его формалином в присутствии сахарозы в термостате, сорбцию анатоксина на геле гидроокиси алюминия. В качестве продуцента коклюшного токсина используют штамм Bordetella pertussis №287. Детоксикацию указанного токсина Bordetella pertussis проводят в течение 19-20 суток. Полученный анатоксин соединяют с анатоксинами вакцинных штаммов №203 и №305, берут их в соотношении соответственно 1:0,5:0,5, добавляют в смесь физиологический раствор с фосфатным буфером и сорбируют смесь анатоксинов на геле гидроокиси алюминия. Изобретение позволяет повысить активность и снизить токсичность полученной бесклеточной коклюшной вакцины. 3 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для получения бесклеточной коклюшной вакцины.
Широкая иммунизация населения противококлюшными вакцинами привела к адаптации коклюшного микроба к сложившимся условиям, что послужило изменениям в его геноме, вследствие чего ген субъединицы А коклюшного токсина циркулирующих штаммов стал нести аллельный вариант ptx A1 (AJ245366), вместо ptx A2 (AJ245267) и ptx A4 (AJ245368), присущих вакцинным штаммам, что привело к возможности появления штаммов Bordetella pertussis с повышенной токсигенной активностью. Выделение этих штаммов и адаптация их для получения анатоксина B. pertussis может служить одним из способов повышения активности вакцинных препаратов.
Вследствие этого эффективность вакцинации населения коклюшными вакцинами, в том числе бесклеточными коклюшными вакцинами, снизилась, что привело к периодическим вспышкам заболевания. Поэтому повышение специфической активности бесклеточной коклюшной вакцины является актуальным и важным для ее совершенствования.
Известен способ получения анатоксина Bordetella pertussis путем культивирования коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделения супернатанта, выделение из него токсина осаждением 3-7%-ным раствором гексаметафосфата натрия в присутствии 0,002-0,006М растворов соляной, серной и трихлоруксусной кислот при pH=3,4-3,6; детоксикацию токсина проводят в 8-12%-ном растворе сахарозы.
(RU 1369042, A61К 39/10, 1995 г.)
Известен свежевыделенный штамм бактерий Bordetella pertussis - продуцент коклюшного токсина.
(RU 2407788 С1, 2010 г.)
Задачей изобретения является разработка способа получения бесклеточной коклюшной вакцины.
Техническим результатом заявленного способа является повышение активности и снижение токсичности полученной бесклеточной коклюшной вакцины.
Для достижения указанного технического результата в способе получения бесклеточной коклюшной вакцины путем культивирования коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделения супернатанта от микробной массы центрифугированием, выделения из него коклюшного токсина, детоксикации его формалином в присутствии сахарозы в термостате, сорбции анатоксина на геле гидроокиси алюминия, согласно изобретению в качестве продуцента коклюшного токсина используют свежевыделенный штамм Bordetella pertussis №287, при этом детоксикацию указанного токсина Bordetella pertussis проводят в течение 19-20 суток, полученный анатоксин соединяют с анатоксинами вакцинных штаммов №203 и №305, берут их в соотношении соответственно 1:0,5:0,5, добавляют в смесь физиологический раствор с фосфатным буфером и сорбируют смесь анатоксинов на геле гидроокиси алюминия.
Сущность изобретения поясняется на следующем примере.
Пример. Лиофилизированный свежевыделенный штамм Bordetella pertussis №287, культивируют на чашках Петри со средой Борде-Жангу в течение 2-3 суток, затем пересевают 10-15 типичных колоний на пробирки со средой Борде-Жангу. Смыв с пробирок 2-3 пассажа переносят в колбы Эрленмейера с полусинтетической жидкой питательной средой (100 мл) и анионообменной смолой, колбы помещают в шуттель аппарат и выращивают при r=36±1°C до конца экспоненциальной фазы. После морфологического контроля полученную маточную культуру пересевают в матрацы с синтетической жидкой питательной средой, добавляют анионообменную смолу и культивирование проводят в течение 120 часов в статических условиях при t=36±1°C.
После окончания культивирования надосадочную жидкость отделяют от микробных клеток центрифугированием при 12500 об/мин в течение 60 минут. Токсин из центрифугата отделяют осаждением с помощью 3-7% раствора гексаметафосфата натрия, 2н. серной, 2н. соляной, 2н. трихлоруксусной кислотами в изоэлектрической зоне pH=3,4-3,6, осадок отделяют центрифугированием при 12500 об/мин в течение одного часа, осторожно промывают дистиллированной водой, растворяют в 1/15М фосфатном буфере, гомогенизируют на электрическом гомогенизаторе в течение 12 секунд, затем добавляют сахарозу до концентрации 10% и выдерживают в холодильнике в течение одного часа при периодическом осторожном перемешивании. К смеси добавляют формалин до концентрации 0,4% и смесь помещают в термостат при 36,5°C. Обезвреживание проводят 19-20 суток, периодически осторожно перемешивая смесь. По окончании смесь помещают в холодильник. Полученный анатоксин соединяют с анатоксинами вакцинных штаммов №203 и №305, берут их в соотношении соответственно 1:0,5:0,5. Добавляют в смесь физиологический раствор с фосфатным буфером и сорбируют смесь анатоксинов на геле гидроокиси алюминия (добавляют 1 мг геля гидроксида алюминия в 1 мл смеси (2 дозы для человека). Смесь шуттелируют на холоду в течение одного часа и переносят в холодильник.
Протективные свойства коклюшных вакцин исследовали на модели интрацеребрального заражения мышей, иммунизированных коклюшной вакциной, полученной заявленным способом, в сравнении с таковой, полученной известным способом. Результаты исследований приведены в таблице 1.
Как следует из данных таблицы 1, несмотря на очень высокую заражающую дозу - 3846 LD50 (по требованию ВОЗ не менее 100 LD50), все препараты бесклеточной коклюшной вакцины обладали выраженной протективной активностью (по требованию ВОЗ не менее 8 МЗЕ/мл), при этом активность препаратов, полученных заявленным способом (20,8 МЗЕ/мл), в 2 раза превосходила таковую, полученную известным способом (9,0 МЗЕ/мл).
Результаты изучения безопасности бесклеточных коклюшных вакцин, полученных известным и заявленным способом, представлены в таблице 2.
Как следует из данных таблицы 2, все исследуемые препараты бесклеточных коклюшных вакцин были безопасны, поскольку по требованиям ВОЗ безопасными считаются препараты, после введения которых прирост массы тела мышей через 7 дней составляет не менее 60% по отношению к контролю.
Исследование сенсибилизирующих свойств препаратов проводили в опытах изучения их сенсибилизирующего действия к гистамину в опытах на мышах (таблица 3).
Как следует из данных таблицы 3, все препараты бесклеточных коклюшных вакцин не сенсибилизировали мышей к гистамину ни в одной, ни в двух иммунизирующих дозах для человека, что также свидетельствует о низких сенсибилизирующих свойствах этих препаратов.
Полученные данные свидетельствуют о высокой протективной активности препарата, полученного заявляемым способом, превышающей в 2 раза таковую препаратов, полученных известным способом. Данные препараты были нетоксичны в иммунизирующей дозе для человека и не сенсибилизировали мышей к гистамину в дозах, более 2 доз для человека.
Преимущество изобретения в том, что разработан способ получения высокоактивной и малотоксичной бесклеточной коклюшной вакцины, превышающей в 2 раза по протективной активности препараты, полученные известным способом. Способ может быть использован в практике здравоохранения для получения бесклеточной коклюшной вакцины для профилактики коклюшной инфекции.
Claims (1)
- Способ получения бесклеточной коклюшной вакцины путем культивирования коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделения супернатанта от микробной массы центрифугированием, выделения из него коклюшного токсина, детоксикации его формалином в присутствии сахарозы в термостате, сорбции анатоксина на геле гидроокиси алюминия, отличающийся тем, что в качестве продуцента коклюшного токсина используют штамм Bordetella pertussis № 287, при этом детоксикацию указанного токсина Bordetella pertussis проводят в течение 19-20 суток, полученный анатоксин соединяют с анатоксинами вакцинных штаммов Bordetella pertussis № 203 и № 305, берут их в соотношении соответственно 1:0,5:0,5, добавляют в смесь физиологический раствор с фосфатным буфером и сорбируют смесь анатоксинов на геле гидроокиси алюминия.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013154746/10A RU2540144C1 (ru) | 2013-12-11 | 2013-12-11 | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНА Bordetella pertussis |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013154746/10A RU2540144C1 (ru) | 2013-12-11 | 2013-12-11 | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНА Bordetella pertussis |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2540144C1 true RU2540144C1 (ru) | 2015-02-10 |
Family
ID=53286776
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013154746/10A RU2540144C1 (ru) | 2013-12-11 | 2013-12-11 | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНА Bordetella pertussis |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2540144C1 (ru) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1761795A1 (ru) * | 1990-07-12 | 1992-09-15 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова | Штамм бактерий ВоRDетеLLа реRтUSSIS - продуцент коклюшного токсина |
SU1369042A1 (ru) * | 1986-02-26 | 1995-08-09 | Центральный научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова | Способ получения анатоксина bordetella pertussis |
US20030215461A1 (en) * | 1994-12-15 | 2003-11-20 | Institut Pasteur | Acellular antibordetella vaccine |
RU2227746C1 (ru) * | 2003-02-13 | 2004-04-27 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН | Способ получения анатоксина bordetella pertussis |
RU2407788C1 (ru) * | 2009-07-23 | 2010-12-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН (НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН) | Свежевыделенный штамм бактерий bordetella pertussis - продуцент коклюшного токсина |
-
2013
- 2013-12-11 RU RU2013154746/10A patent/RU2540144C1/ru active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1369042A1 (ru) * | 1986-02-26 | 1995-08-09 | Центральный научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова | Способ получения анатоксина bordetella pertussis |
SU1761795A1 (ru) * | 1990-07-12 | 1992-09-15 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова | Штамм бактерий ВоRDетеLLа реRтUSSIS - продуцент коклюшного токсина |
US20030215461A1 (en) * | 1994-12-15 | 2003-11-20 | Institut Pasteur | Acellular antibordetella vaccine |
RU2227746C1 (ru) * | 2003-02-13 | 2004-04-27 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН | Способ получения анатоксина bordetella pertussis |
RU2407788C1 (ru) * | 2009-07-23 | 2010-12-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН (НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН) | Свежевыделенный штамм бактерий bordetella pertussis - продуцент коклюшного токсина |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JONES D.H. et al., Protection of mice from Bordetella pertussis respiratory infection using microencapsulated pertussis fimbriae, Vaccine, 1995, Vol.13, no. 7, pp.675-681. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101716341B (zh) | 一种人用二倍体细胞狂犬灭活疫苗及其制备方法 | |
AU2017203173B2 (en) | Method For The Production Of Protein Complexes And Vaccine Compositions Comprising The Same | |
CN106267176B (zh) | 鸡传染性鼻炎疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
RU2540144C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНА Bordetella pertussis | |
RU2432174C1 (ru) | Способ получения эшерихиозного анатоксина | |
RU2396978C1 (ru) | Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота | |
RU2650628C1 (ru) | Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят | |
CN110974952A (zh) | 一种新型佐剂CpG-ODN猪链球菌2+9型二价灭活疫苗及其制备方法 | |
RU2531054C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
RU2263143C2 (ru) | Штамм бактерий streptococcus pyogenes №289, используемый для изготовления вакцин против стрептококкоза пушных зверей | |
CN114805554B (zh) | 抗猪链球菌和副猪嗜血杆菌的精制卵黄抗体注射剂及其制备方法 | |
RU2388488C1 (ru) | Вакцина против псевдомоноза нутрий | |
RU2377016C1 (ru) | Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины | |
RU2340357C2 (ru) | Вакцина против эшерихиоза животных | |
RU2404802C1 (ru) | Вакцина против колибактериоза кроликов | |
RU2406533C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
RU2689903C1 (ru) | Свежевыделенный штамм бактерий Bordetella pertussis - продуцент комплекса протективных антигенов для производства бесклеточной коклюшной вакцины | |
RU2723711C1 (ru) | Способ получения вакцины гидроокисьалюминиевой против мастита коров стрептококковой этиологии | |
Springer et al. | Protection of mice against lethal Staphylococcus infection by Escherichia coli O86 fractions | |
RU2406531C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий | |
EA029938B1 (ru) | Вакцина против мыта лошадей | |
RU2288004C1 (ru) | Вакцина против колибактериоза нутрий | |
RU2597837C1 (ru) | Иммуностимулирующий препарат, обладающий противоопухолевой активностью | |
RU2636454C2 (ru) | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения | |
RU2553557C2 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов |