RU2636454C2 - Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения - Google Patents
Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2636454C2 RU2636454C2 RU2015119344A RU2015119344A RU2636454C2 RU 2636454 C2 RU2636454 C2 RU 2636454C2 RU 2015119344 A RU2015119344 A RU 2015119344A RU 2015119344 A RU2015119344 A RU 2015119344A RU 2636454 C2 RU2636454 C2 RU 2636454C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- viev
- fusobacterium necrophorum
- vaccine
- exotoxin
- leukocidin
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и микробиологии. Предложены вакцина против некробактериоза и способ ее получения. Вакцина содержит инактивированный формалином лейкоцидин – экзотоксин, полученный из Fusobacterium necrophorum, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и дополнительно сапонин, глицерин при определенном соотношении компонентов. Лейкоцидин, входящий в состав предложенной вакцины, является экзотоксином, полученным из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, и представляет собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа с содержанием 1,5-2,0 млрд клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см. Предложенная вакцина может быть использована в ветеринарии для профилактики некробактериоза животных. 2 н.п. ф-лы, 5 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения вакцины для профилактики некробактериоза животных.
Известен способ изготовления вакцины против некробактериоза животных, включающий выращивание штамма возбудителя некробактериоза, инактивацию выросшей культуры, разделение ее на биомассу и культуральную жидкость, ресуспендирование отделенной биомассы, экстракцию антигена, содержащего эндотоксин, многократным замораживанием и оттаиванием полученной суспензии, центрифугированием и отделением антигена из супернатанта, параллельное извлечение экзотоксина из культуральной жидкости, инактивацию полученных экзотоксина и эндотоксина, их объединение с последующим добавлением адъюванта на основе минерального масла и ланолина и получением целевого продукта, причем из штаммов выращивают производственный штамм Bacteroides necrophorum (ВИЭВ), отделенную биомассу ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 100-120 млрд кл./мл, выделяют эндотоксин с концентрацией белка 2,5-3,0 мг/мл, а извлечение экзотоксина осуществляют ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 1,3-1,7 КДа до содержания белка в экзотоксине 5,5-6,0 мг/мл, смешивают экзотоксин и эндотоксин в равных объемных соотношениях (Патент RU 2109519, A61K 39/02, Опубликовано 27.04.1998, Бюл. №21).
Однако известная вакцина не достаточно иммуногенна, так как требует двукратного введения и обеспечивает иммунитет только против некробактериоза в течение 3,5-4 мес. Кроме того, при получении вакцины осуществляют предварительный подбор местных штаммов для каждого конкретного хозяйства, что невозможно при промышленном производстве.
Способ изготовления вакцины включает культивирование штамма B.necrophorum «0-1» ВИЭВ на питательной среде, инактивирование формалином, отделение биомассы от культуральной жидкости центрифугированием, отделение центрифугата и концентрирование экзотоксина ультрафильтрацией до содержания белка 5,5-6,0 мг/мл (по Лоури). Получают экзотоксин B.necrophorum с молекулярной массой 18000-20000 Д. Добавляют к нему раствор формалина до конечной концентрации 0,4%. Инактивируют в течение 15 суток и смешивают инактивированный формалином экзотоксин с масляным адъювантом при следующем содержании компонентов (в мас. %): инактивированный формалином экзотоксин B.necrophorum - 60,0-67,0, масляный адювант - 33,0-40,0. Затем гомогенизируют полученную суспензию и расфасовывают готовую вакцину. Вакцину животным вводят внутрикожно одно-, двукратно в дозе 0,2-0,4 мл. Изобретение позволяет упростить способ изготовления высокоэффективной вакцины, получить вакцину с низкой реактогенностью, а также снизить прививочную дозу вакцины и повысить удобство ее введения (Патент RU 2329828, A61K 39/02, опубл. 27.07.2008, бюл. №21).
Однако известная вакцина не обеспечивает создание достаточного иммунитета против некробактериоза.
Задачей изобретения является повышение качества целевого продукта за счет увеличения сроков иммунитета животных и снижения реактогенности вакцины против некробактериоза.
Технический результат изобретения достигается в вакцине против некробактериоза, содержащей инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ тем, что инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляет собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа с содержанием 1,5-2,0 млрд. клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см3, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и дополнительно содержит сапонин и глицерин при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Технический результат изобретения достигается также в способе получения вакцины против некробактериоза путем культивирования штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирования его формалином, отделения бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделением из культуральной жидкости экзотоксина - лейкоцидина, его очистки и концентрирования ультрафильтрацией на полых волокнах и адсорбцией на гидроокиси алюминия в гликолевом буфере, причем перед адсорбцией на гидроокиси алюминия к экзотоксину добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 1,5-2,0 млрд клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см3, после чего последовательно добавляют сапонин, а глицерин добавляют сразу после добавления сапонина.
В патентной и научно-технической литературе неизвестны технические решения, аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения «новизна».
Нами впервые показано, что сочетанное использование вышеуказанных компонентов позволяет изготовить новую вакцину против некробактериоза животных, следовательно, изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».
Предлагаемая вакцина против некробактериоза создает длительный иммунитет у привитых животных, при этом по иммуногенности она превосходит известную вакцину против некробактериоза. Вакцина безвредна и авирулентна для лабораторных и сельскохозяйственных животных, т.е. предложение «промышленно применимо».
Вакцину против некробактериоза готовят следующим образом.
Пример 1. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum 
ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5 мг % с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 1,5 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4, взятой в конечной концентрации 1,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина. К полученной реакционной среде последовательно добавляют сапонин и глицерин, взятые в конечной концентрации 0,25% и 20,0% соответственно, получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.
Пример 2. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 7,0 мг % с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 2,0 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,6, взятой в конечной концентрации 2,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина. К полученной реакционной среде последовательно добавляют сапонин и глицерин, взятые в конечной концентрации 0,75% и 30,0%, соответственно, получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 20 мин.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.
Полученные по примерам 1-2 составы 1-2 применяют для профилактических и вынужденных прививок клинически здоровых животных однократно. Молодняк, не достигший 3-месячного возраста, прививать ассоциированной вакциной не разрешается. Вакцину вводят внутрикожно с помощью безыгольного инъектора в бесшерстный участок тела свиньям по 0,4 см3 и северным оленям по 0,2 см3.
Кроме того, реактогенность в группе контрольных животных, получавших вакцину, полученную по прототипу, составила 6±1,8 см2, в то время как в опытных группах она была равна 0.
Кроме того, реактогенность в группе контрольных животных, получавших вакцину, полученную по прототипу, составила 4±1,2 см2, в то время как в опытных группах она была равна 0.
Таким образом, вакцина против некробактериоза является высокоэффективным препаратом, способным более длительно защитить животных от некробактериоза (более двух лет) и снизить реактогенность с 2,8-7,8 см до 0 см.
Claims (3)
1. Вакцина против некробактериоза, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, отличающаяся тем, что инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляет собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа с содержанием 1,5-2,0 млрд клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см3, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и дополнительно содержит сапонин и глицерин при следующем соотношении компонентов, мас. %:
2. Способ получения вакцины против некробактериоза путем культивирования штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирования его формалином, отделения бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделением из культуральной жидкости экзотоксина - лейкоцидина, его очистки и концентрирования ультрафильтрацией на полых волокнах и адсорбцией на гидроокиси алюминия в гликолевом буфере и добавления инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, отличающийся тем, что к экзотоксину-лейкоцидину добавляют инактивированную бактериальную массу штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 1,5-2,0 млрд клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см3, после чего последовательно добавляют сапонин, а глицерин добавляют сразу после добавления сапонина.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015119344A RU2636454C2 (ru) | 2015-05-22 | 2015-05-22 | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015119344A RU2636454C2 (ru) | 2015-05-22 | 2015-05-22 | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015119344A RU2015119344A (ru) | 2016-12-10 |
| RU2636454C2 true RU2636454C2 (ru) | 2017-11-23 |
Family
ID=57759680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015119344A RU2636454C2 (ru) | 2015-05-22 | 2015-05-22 | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2636454C2 (ru) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2109519C1 (ru) * | 1997-06-02 | 1998-04-27 | Николай Васильевич Мельник | Способ изготовления вакцины против некробактериоза животных |
| RU2195318C1 (ru) * | 2001-11-19 | 2002-12-27 | Караваев Юрий Дмитриевич | Гипериммунная сыворотка для лечения и профилактики некробактериоза животных |
| RU2329828C1 (ru) * | 2007-03-02 | 2008-07-27 | Николай Васильевич Мельник | Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных и способ профилактики и лечения некробактериоза животных |
| RU2480237C1 (ru) * | 2011-11-15 | 2013-04-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Ассоциированная вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных |
| RU2524430C1 (ru) * | 2013-05-07 | 2014-07-27 | Николай Васильевич Мельник | Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения ее |
-
2015
- 2015-05-22 RU RU2015119344A patent/RU2636454C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2109519C1 (ru) * | 1997-06-02 | 1998-04-27 | Николай Васильевич Мельник | Способ изготовления вакцины против некробактериоза животных |
| RU2195318C1 (ru) * | 2001-11-19 | 2002-12-27 | Караваев Юрий Дмитриевич | Гипериммунная сыворотка для лечения и профилактики некробактериоза животных |
| RU2329828C1 (ru) * | 2007-03-02 | 2008-07-27 | Николай Васильевич Мельник | Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных и способ профилактики и лечения некробактериоза животных |
| RU2480237C1 (ru) * | 2011-11-15 | 2013-04-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Ассоциированная вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных |
| RU2524430C1 (ru) * | 2013-05-07 | 2014-07-27 | Николай Васильевич Мельник | Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения ее |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2015119344A (ru) | 2016-12-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10772954B2 (en) | Dual adjuvant vaccine compositions, preparation and uses | |
| CN107537031B (zh) | 一种预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
| JP2021506782A (ja) | レンサ球菌感染防御のためのワクチン | |
| KR102447303B1 (ko) | 박테리아성 백신 및 그의 제조방법 | |
| RU2480237C1 (ru) | Ассоциированная вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных | |
| CA2931139C (en) | Swine vaccine against prrs and lawsonia intracellularis | |
| RU2524430C1 (ru) | Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения ее | |
| RU2636454C2 (ru) | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения | |
| RU2329828C1 (ru) | Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных и способ профилактики и лечения некробактериоза животных | |
| RU2590596C1 (ru) | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения | |
| RU2432174C1 (ru) | Способ получения эшерихиозного анатоксина | |
| CN102266551B (zh) | 可用于治疗人或动物免疫相关性疾病的白介素-4治疗性疫苗 | |
| JP6712760B2 (ja) | サルモネラワクチン | |
| RU2590598C1 (ru) | Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения её | |
| CN105497885B (zh) | 一种亚单位疫苗及其制备方法和应用 | |
| RU2191599C1 (ru) | Ассоциированная вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных | |
| KR102077701B1 (ko) | 살모넬라 갈리나룸 사균체를 포함하는 가금 티푸스의 예방 또는 치료용 백신 조성물 | |
| RU2109519C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против некробактериоза животных | |
| US20040170652A1 (en) | Saponin inactivated mycoplasma vaccine | |
| RU2396978C1 (ru) | Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота | |
| KR101640716B1 (ko) | 면역보조제를 첨가한 스쿠티카충 백신 조성물 | |
| RU2340357C2 (ru) | Вакцина против эшерихиоза животных | |
| RU2190424C1 (ru) | Антигенный состав чумной химической вакцины | |
| CN111467488B (zh) | 一种水溶性复合免疫佐剂及其应用 | |
| Savina et al. | The effect of synthetic adjuvant on the formation of the immune response |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190523 |