RU2590596C1 - Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения - Google Patents
Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2590596C1 RU2590596C1 RU2015119345/10A RU2015119345A RU2590596C1 RU 2590596 C1 RU2590596 C1 RU 2590596C1 RU 2015119345/10 A RU2015119345/10 A RU 2015119345/10A RU 2015119345 A RU2015119345 A RU 2015119345A RU 2590596 C1 RU2590596 C1 RU 2590596C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- viev
- fusobacterium necrophorum
- exotoxin
- leukocidin
- vaccine
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и микробиологии. Описана вакцина против некробактериоза, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и дополнительно сапонин, глицерин и натриевую соль сукцината хитозана при определенном соотношении компонентов. Также описан способ получения такой вакцины. Изобретение может быть использовано в ветеринарии для профилактики некробактериоза животных. 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения вакцины для профилактики некробактериоза животных.
Известен способ изготовления вакцины против некробактериоза животных, включающий выращивание штамма возбудителя некробактериоза, инактивацию выросшей культуры, разделение ее на биомассу и культуральную жидкость, ресуспендирование отделенной биомассы, экстракцию антигена, содержащего эндотоксин, многократным замораживанием и оттаиванием полученной суспензии, центрифугированием и отделением антигена из супернатанта, параллельное извлечение экзотоксина из культуральной жидкости, инактивацию полученных экзотоксина и эндотоксина, их объединение с последующим добавлением адъюванта на основе минерального масла и ланолина и получением целевого продукта, причем из штаммов выращивают производственный штамм Bacteroides necrophorum (ВИЭВ), отделенную биомассу ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 100-120 млрд кл. /мл, выделяют эндотоксин с концентрацией белка 2,5-3,0 мг/мл, а извлечение экзотоксина осуществляют ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 1,3-1,7 КДа до содержания белка в экзотоксине 5,5-6,0 мг/мл, смешивают экзотоксин и эндотоксин в равных объемных соотношениях (Патент RU 2109519, А61К 39/02, Опубликовано 27.04.1998, Бюл. №21).
Однако известная вакцина недостаточно иммуногенна, так как требует двукратного введения и обеспечивает иммунитет только против некробактериоза в течение 3,5-4 мес. Кроме того, при получении вакцины осуществляют предварительный подбор местных штаммов для каждого конкретного хозяйства, что невозможно при промышленном производстве.
Известен также способ изготовления вакцины, который включает культивирование штамма B.necrophorum «0-1» ВИЭВ на питательной среде, инактивирование формалином, отделение биомассы от культуральной жидкости центрифугированием, отделение центрифугата и концентрирование экзотоксина ультрафильтрацией до содержания белка 5,5-6,0 мг/мл (по Лоури). Получают экзотоксин B.necrophorum с молекулярной массой 18000-20000 Д. Добавляют к нему раствор формалина до конечной концентрации 0,4%. Инактивируют в течение 15 суток и смешивают инактивированный формалином экзотоксин с масляным адъювантом при следующем содержании компонентов (в мас. %): инактивированный формалином экзотоксин B.necrophorum - 60,0-67,0, масляный адювант - 33,0-40,0. Затем гомогенизируют полученную суспензию и расфасовывают готовую вакцину. Вакцину животным вводят внутрикожно одно-, двукратно в дозе 0,2-0,4 мл. Изобретение позволяет упростить способ изготовления высокоэффективной вакцины, получить вакцину с низкой реактогенностью, а также снизить прививочную дозу вакцины и повысить удобство ее введения (Патент RU 2329828, А61К 39/02, опубл. 27.07. 2008, бюл. №21).
Однако известная вакцина не обеспечивает создание достаточного иммунитета против некробактериоза.
Задачей изобретения является повышение качества целевого продукта за счет увеличения сроков иммунитета животных и снижения реактогенности вакцины против некробактериоза.
Технический результат изобретения достигается в вакцине против некробактериоза, содержащей инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, тем, что инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляет собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа с содержанием 1,5-2,0 млрд клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см3, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и дополнительно содержит сапонин, глицерин и натриевую соль сукцината хитозана при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Известен способ получения натриевой соли сукцината хитозана (Патент RU 2144040, МПК С08В 37/08, А61К 31/722, Опубликовано 10.01.2000), который может быть использован в ветеринарии, медицине и косметике в качестве пленкообразователя, гидранта или эмульгатора.
Технический результат изобретения достигается также в способе получения вакцины против некробактериоза путем культивирования штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирования его формалином, отделения бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделения из культуральной жидкости экзотоксина-лейкоцидина, его очистки и концентрирование ультрафильтрацией на полых волокнах и адсорбцией на гидроокиси алюминия в гликолевом буфере, причем перед адсорбцией на гидроокиси алюминия к экзотоксину добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 1,5-2,0 млрд клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см3, после чего последовательно добавляют сапонин, а глицерин добавляют сразу после добавления сапонина.
В патентной и научно-технической литературе неизвестны технические решения, аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения «новизна».
Нами впервые показано, что сочетанное использование вышеуказанных компонентов позволяет изготовить новую вакцину против некробактериоза животных, следовательно, изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».
Предлагаемая вакцина против некробактериоза создает длительный иммунитет у привитых животных, при этом по иммуногенности она превосходит известную вакцину против некробактериоза. Вакцина безвредна и авирулентна для лабораторных и сельскохозяйственных животных, т.е. предложение «промышленно применимо».
Вакцину против некробактериоза готовят следующим образом.
Пример 1. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидина-экзотоксина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0¬1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 к Да и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин-эндотоксин добавляют 1% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 1,5 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4, взятой в конечной концентрации 1,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина. К полученной реакционной среде последовательно добавляют натриевую соль сукцината хитозана, сапонин и глицерин, взятых в конечной концентрации 1,0%, 0,25% и 20,0% соответственно, получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.
Пример 2. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидина-экзотоксина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0¬1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 к Да и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин-эндотоксин добавляют 10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 2,0 млрд клеток в 1 см, затем сорбируют на 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,6, взятой в конечной концентрации 2,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина. К полученной реакционной среде последовательно добавляют натриевую соль сукцината хитозана, сапонин и глицерин, взятых в конечной концентрации 5,0%, 0,75% и 30,0% соответственно, получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 20 мин.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.
Полученные по примерам 1-2 составы 1-2 применяют для профилактических и вынужденных прививок клинически здоровых животных однократно. Молодняк, не достигший 3-месячного возраста, прививать ассоциированной вакциной не разрешается. Вакцину вводят внутрикожно с помощью безыгольного инъектора в бесшерстный участок тела свиньям по 0,4 см3 и северным оленям по 0,2 см3.
Таблица 1
Сравнительная характеристика показателей иммуногенности известной и предлагаемой вакцин против некробактериоза через 2 года после вакцинации оленей в республике Саха (Якутия)
Кроме того, реактогенность в группе контрольных животных, получавших вакцину, полученную по прототипу, составила 6,5±2,1 см2, в то время как в опытных группах она была равна 0.
Кроме того, реактогенность в группе контрольных животных, получавших вакцину, полученную по прототипу, составила 5,2±1,3 см2, в то время как в опытных группах она была равна 0.
Таким образом, вакцина против некробактериоза является высокоэффективным препаратом, способным более длительно защитить животных от некробактериоза (более двух лет) и снизить реактогенность с 3,9-8,6 см до 0 см.
Claims (2)
1. Вакцина против некробактериоза, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, отличается тем, что инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляет собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа с содержанием 1,5-2,0 млрд клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см3, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и дополнительно содержит сапонин, глицерин и натриевую соль сукцината хитозана при следующем соотношении компонентов, мас.%:
2. Способ получения вакцины против некробактериоза путем культивирования штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирования его формалином, отделения бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделением из культуральной жидкости экзотоксина - лейкоцидина, его очистки и концентрирование ультрафильтрацией на полых волокнах и адсорбцией на гидроокиси алюминия в гликолевом буфере и добавления инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, отличающийся тем, что к экзотоксину-лейкоцидину добавляют инактивированную бактериальную массу штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 1,5-2,0 млрд. клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см3, после чего последовательно добавляют натриевую соль сукцината хитозана и сапонин, а глицерин добавляют сразу после добавления сапонина.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015119345/10A RU2590596C1 (ru) | 2015-05-22 | 2015-05-22 | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015119345/10A RU2590596C1 (ru) | 2015-05-22 | 2015-05-22 | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2590596C1 true RU2590596C1 (ru) | 2016-07-10 |
Family
ID=56371981
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015119345/10A RU2590596C1 (ru) | 2015-05-22 | 2015-05-22 | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2590596C1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2109519C1 (ru) * | 1997-06-02 | 1998-04-27 | Николай Васильевич Мельник | Способ изготовления вакцины против некробактериоза животных |
| RU2329828C1 (ru) * | 2007-03-02 | 2008-07-27 | Николай Васильевич Мельник | Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных и способ профилактики и лечения некробактериоза животных |
| RU2480237C1 (ru) * | 2011-11-15 | 2013-04-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Ассоциированная вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных |
| RU2524430C1 (ru) * | 2013-05-07 | 2014-07-27 | Николай Васильевич Мельник | Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения ее |
-
2015
- 2015-05-22 RU RU2015119345/10A patent/RU2590596C1/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2109519C1 (ru) * | 1997-06-02 | 1998-04-27 | Николай Васильевич Мельник | Способ изготовления вакцины против некробактериоза животных |
| RU2329828C1 (ru) * | 2007-03-02 | 2008-07-27 | Николай Васильевич Мельник | Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных и способ профилактики и лечения некробактериоза животных |
| RU2480237C1 (ru) * | 2011-11-15 | 2013-04-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Ассоциированная вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных |
| RU2524430C1 (ru) * | 2013-05-07 | 2014-07-27 | Николай Васильевич Мельник | Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения ее |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bonanni et al. | Vaccine evolution | |
| JPH05507484A (ja) | ブタ肺炎ワクチンおよびその製造方法 | |
| US10772954B2 (en) | Dual adjuvant vaccine compositions, preparation and uses | |
| WO2018000722A1 (zh) | 一种预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
| EP3471706B1 (en) | Oral pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically active agent, at least one cationic bioadhesive polymer and at least two anionic polymers | |
| RU2480237C1 (ru) | Ассоциированная вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных | |
| RU2524430C1 (ru) | Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения ее | |
| CN1909925B (zh) | 一种免疫佐剂 | |
| RU2590596C1 (ru) | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения | |
| EP3076997A1 (en) | Swine vaccine against prrs and lawsonia intracellularis | |
| RU2636454C2 (ru) | Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения | |
| RU2590598C1 (ru) | Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения её | |
| RU2329828C1 (ru) | Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных и способ профилактики и лечения некробактериоза животных | |
| TWI257867B (en) | Vaccine preparations containing attenuated toxin | |
| CN105497885B (zh) | 一种亚单位疫苗及其制备方法和应用 | |
| KR102077701B1 (ko) | 살모넬라 갈리나룸 사균체를 포함하는 가금 티푸스의 예방 또는 치료용 백신 조성물 | |
| RU2191599C1 (ru) | Ассоциированная вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных | |
| JP6712760B2 (ja) | サルモネラワクチン | |
| ES2301230T3 (es) | Antigenos de erysipelothrix rhusiopathiae y composiciones de vacuna. | |
| US20040170652A1 (en) | Saponin inactivated mycoplasma vaccine | |
| RU2396978C1 (ru) | Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота | |
| CN107496914B (zh) | 一种佐剂组合物及其制备方法和应用 | |
| RU2109519C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против некробактериоза животных | |
| CN105031645B (zh) | 一种人用狂犬病疫苗及其制备方法 | |
| Savina et al. | The effect of synthetic adjuvant on the formation of the immune response |