RU2377016C1 - Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины - Google Patents
Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины Download PDFInfo
- Publication number
- RU2377016C1 RU2377016C1 RU2008115049/13A RU2008115049A RU2377016C1 RU 2377016 C1 RU2377016 C1 RU 2377016C1 RU 2008115049/13 A RU2008115049/13 A RU 2008115049/13A RU 2008115049 A RU2008115049 A RU 2008115049A RU 2377016 C1 RU2377016 C1 RU 2377016C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- days
- streptococcal
- staphylococcal
- detoxification
- toxins
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии. Способ включает выращивание микроорганизмов на жидкой синтетической среде до 10±2,0 млрд/см3 микробных тел, стерилизацию при 1,0 атм в течение 30-40 минут, детоксикацию экзо-, эндо- и суперэнтеротоксинов в суспензии микроорганизмов раствором формалина и стерилизацию. При этом раздельно выращивают стафилококки и стрептококки. Детоксикацию токсинов проводят двумя детоксикаторами - вначале 0,2% раствором формалина в течение 7-9 суток при 42-45°С, а затем 0,6±0,1% раствором этония при 42-45°С в течение 7-9 суток. Смешивают равные объемы стафилококковой и стрептококковой анатоксин-вакцин с сорбцией смеси на 1-3 мг/мл гидроксида алюминия и увеличивают вдвое концентрацию инактивированных токсинов с микроорганизмами декантацией 50±5% надосадочной жидкости. Полученная анатоксин-вакцина обладает высокой эффективностью, безвредна и используется для профилактики и лечения дерматитов, маститов, пневмоний, стафило-стрептококкозов птиц и плотоядных.
Description
Изобретение относится к микробиологии, в частности к технологии изготовления биопрепаратов для специфической профилактики и лечения болезней животных стафилококковой этиологии.
Известные способы получения инактивированных анатоксинов, анатоксин-вакцин вирусных и бактерийных вакцин, анатоксинов основаны на использовании 0,8±0,2% раствора формалина, УФ-лучей, ионизирующих излучений и пр. (Шапиро Я.С. «Микроорганизмы - вирусы, бактерии, грибы». Издательство «ЭЛБИ» - СПб, 2003 г., с.156-160).
Существующие способы получения стафилококковых и стрептококковых анатоксинов или анатоксин-вакцин предусматривают выращивание микроорганизмов на гидролизате Хоттингера, сахарном бульоне или на синтетических питательных средах, автоклавирование биомассы микроорганизмов и детоксикацию экзо- и эндотоксинов 0,8±0,2% раствором формалина.
Постинфекционный иммунитет при стафилококкозе и стрептококкозе обусловлен как гуморальными, так и клеточными факторами - антитоксинами, антимикробными антителами, против ферментов, а также Т-лимфоцитами и фагоцитами.
При этом следует учитывать, что их энтеротоксины являются суперантигенами, сильнейшими пищевыми ядами, термостабильными и обладают устойчивостью к действию формалина, т.е. не способны превращаться в анатоксины.
Термин суперантигены (САГ) используется для определения молекул, продуцируемых патогенными микроорганизмами и обладающих высоким митогенным действием на Т-клетки. Стрептококки и стафилококки синтезируют широкий спектр САГ - пирогенные (эритрогенные), экзотоксины, митогенные факторы.
Суперантигены стафилококков по структуре и биологическим свойствам близки к стрептококковым САГ- и представляют собой глобулярные белки с молекулярной массой 24-28 кД и состоят из центральной α-спирали, N-терминального и С-терминальных доменов. Установлено, что энтеротоксины стрептококков Spe A, Spe С, SSA обладают большим сходством со стафилококковым энтеротоксином SEB, образуя гомологичную белковую группу с идентичностью от 20 до 90%, а стрептококковые митогены типа Z-2 (SMEZ), Spe Y и Spe I, Spe H-N более сходны со стафилококковыми САГ.
Из 18 видов бактерий, причисленных к важнейшим патогенам человека и животных по медицинской значимости, стрептококки занимают второе место после стафилококков. Поэтому была предпринята попытка получить эффективный комплексный биопрепарат.
За прототип взят «Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины», Евглевский А.А., патент РФ №2229893 от 10 июня 2004 г., включающий выращивание стафилококков на синтетической среде, стерилизацию и детоксикацию токсинов 0,8%±0,2% раствором формалина.
Недостатком способа является проведение детоксикации стафилококковых экзо- и эндотоксинов с помощью 0,8±0,2% раствора формалина, который не обеспечивает детоксикацию стафилококковых суперэнтеротоксинов и, соответственно, не превращает их в анатоксины (Коротяев А.И., Бабичев С.А. «Медицинская микробиология, иммунология и вирусология». Санкт-Петербург, издательство «Специальная литература», 1998 г., с.338). Кроме того, представленный способ не обеспечивает детоксикацию стрептококковых токсинов.
Для детоксикации бактерийных токсинов и раскрытия механизма этого явления продолжается поиск новых средств и методов, обеспечивающих изготовление высокоактивных и безвредных биопрепаратов, свободных от ряда отрицательных моментов, присущих формольному анатаксинообразованию.
Новый детоксикатор должен обладать безвредностью и эффективной способностью инактивировать стафилококковые и стрептококковые суперэнтеротоксины, превращая их в активные анатоксины.
Испытание известных и новых средств для детоксикации стафило-стрептококковых суперэнтеротоксинов выявило эффективность ряда бисчетвертичных аммониевых соединений в частности этония, который был взят в качестве детоксикатора для получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины.
Целью предлагаемого изобретения является повышение эффективности и безопасности анатоксин-вакцины путем снижения концентрации формалина с 0,8±0,2% до 0,2% для детоксикации стафилококковых и стрептококковых экзо- и эндотоксинов, а через 7-9 суток последующей детоксикации суперэнтеротоксинов 0,6±0,1% раствором этония в течение 7-9 суток.
Поставленная цель достигается путем отдельной детоксикации стафилококковых и стрептококковых экзо- и эндотоксинов со взвесью автоклавированных микроорганизмов с концентрацией 10±2 млрд/мл при 42-45°С в течение 7-9 суток с помощью 0,2% раствора формалина, и детоксикации суперэнтеротоксинов 0,6±0,1% раствором этония при 42-45°С в течение 7-9 суток с последующим смешиванием равных объемов стафилококковой и стрептококковой анатоксин-вакцин, сорбцией на гидроксиде алюминия и декантацией 50±5% надосадочной жидкости для профилактики и лечения дерматитов, ускоренного заживления ран, маститов, пневмонии, стафило-стрептококкозов птиц и плотоядных.
В патентной и научно-технической литературе не обнаружены технические решения, аналогичные заявляемому с этонием.
Применение 0,6±0,1% раствора этония (1,2-Этилен-бис-(N-диметилкарбдецилоксиметил) аммония дихлорид - бисчетвертичное аммониевое соединение) в сочетании с предварительной детоксикацией 0,2% раствором формалина в предложенном режиме позволяет достичь эффекта указанного в цели изобретения, т.е. детоксикации стафило-стрептококковых суперэнтеротоксинов и повышения вдвое концентрации полученного препарата.
Установлена возможность полной и необратимой детоксикации стафилококковых и стрептококковых экзо-, эндо- и суперэнтеротоксинов с помощью двух детоксикаторов - 0,2% раствора формалина и через 7-9 суток 0,6±0,1% раствора этония и отработана технологическая схема изготовления биопрепарата и лечебно-профилактическая эффективность конечного продукта.
Результаты детоксицирующего действия этония на весь комплекс стафилококковых и стрептококковых токсинов и лечебно-протективные свойства стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины (ССтрАВ) представлены в следующих примерах.
Пример 1. Получение анатоксин-вакцины и определение концентрации стафилококков и стрептококков после их раздельного 12-15-суточного выращивания на жидкой синтетической среде в 2-литровых биобутылях с объемом среды, равным 1 литру, с последующим автоклавированием при 1,0 атм в течение 30 минут проводили по оптическому стандарту мутности ГНИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича.
Концентрация составляла 10,0±2,0 млрд/см3 микробных тел.
Детоксикацию экзо-, эндо- и суперэнтеротоксинов в суспензии микроорганизмов проводили последовательно двумя детоксикаторами - 0,2% раствором формалина в течение 7-9 суток при 42-45°С, а затем 0,6±0,1% раствором этония при 42-45°С в течение 7-9 суток. После детоксикации смешивали равные объемы стафилококковой и стрептококковой анатоксин-вакцин с сорбцией на 1-3 мг/мл гидроксида алюминия и увеличением концентрации инактивированных токсинов с микроорганизмами декантацией 50±5% надосадочной жидкости. Полученный препарат расфасовывали по флаконам и стерилизовали при 1,0 атм в течение 30-40 минут.
Пример 2. Стерильность препарата определяли согласно ГОСТ 28085.
В препаратах не отмечалось роста микрофлоры в течение 10-12 суток наблюдения при высеве в пробирке с МПА, МПБ и МПГБ.
Пример 3. Определение безвредности стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины проводили с использованием белых мышей, морских свинок, бройлеров, телят и поросят путем подкожного введения препарата в дозе 0,5; 1,0; 5,0 и 10,0 см3 соответственно этим видам животных. В испытании использовано по пять животных каждого вида. Все животные оставались живыми и клинически здоровыми при наблюдении в течение 9 суток.
Пример 4. 0пределение специфической активности проводили с использованием 6 беспородных щенков 2-3-месячного возраста, 8 телят, 10 поросят и 10 бройлеров после двукратной вакцинации в дозе 5,0 см3 с интервалом 10-12 суток. Через 7-9 суток животным ввели подкожно суспензию вирулентных стафилококков и стрептококков в дозе 10 млрд/см3 микроорганизмов в объеме 0,3 см3.
В качестве контроля использовали по две головы указанных видов животных, не подвергавшиеся вакцинации.
Наблюдение проводили в течение 12-15 суток. При этом установлено, что все опытные животные оставались клинически здоровыми, а в контроле отмечена гибель 2-х бройлеров и гнойничковые поражения у остальных животных на месте заражения.
Пример 5. Испытание на заживление ожоговых ран.
В исследованиях использовано 8 голов поросят (3-4-месячного возраста). Ожог кожи в размере 5-7 см2 проводили путем приложения 3-х слоев марли, смоченной 5% раствором фенола, в области средней трети шеи и бедра.
Лечение проводили путем 2-3-кратного ежедневного опрыскивания ожоговой поверхности кожи стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины и марли, смоченной биопрепаратом.
В качестве контроля использовали медвежий жир с антибиотиками.
При этом отмечено, что начало грануляции пораженной поверхности кожи происходило на 2-3 дня раньше, чем в контроле, а полное заживление завершалось через 20-25 суток, у контрольных животных - к 25-27 дню.
Пример 6. Лечение коров, больных катаральным и гнойно-катаральным маститами.
В исследовании использовано 26 коров больных катаральным и 18 коров с гнойно-катаральным маститами. При бактериологическом исследовании выделены золотистый стафилококк, стрептококки, протей и кишечная палочка.
Лечение проводили путем интрацистернального введения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины два раза в сутки (утром и вечером) в дозе 4-5 мл в каждый сосок вымени.
Полное выздоровление коров, больных катаральным маститом, отмечено через 4-5 суток, а при лечении мастисаном-А через 7-8 суток, коров, больных гнойно-катаральным маститом, - через 7-8 суток, а при лечении мастисаном-А через 9-10 суток. Лечение проводили в осенне-зимний период.
Пример 7. Изучение лечебной эффективности при лечении телят, больных пневмонией.
Получение стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины проводили путем отдельного выращивания в течение 12 суток стафилококков и стрептококков в 2-литровых биобутылях с объемом среды, равным 1 литру, до 12,0 млрд/см3 микробной концентрации и автоклавированию при 1,0 атм в течение 30 минут.
Детоксикацию экзо- и эндотоксинов вместе с микробной массой сначала проводили 0,2% раствором формалина при 42-45°С в течение 7-9 суток, а затем 0,6±0,1% раствором этония при 42-45°С в течение 7-9 суток. Завершение детоксикации всех видов токсинов, в т.ч. и суперэнтеротоксинов, которые формалин не инактивирует и, следовательно, не может перевести их в анатоксины. После завершения детоксикации проводили смешивание в равных объемах стафилококковой и стрептококковой анатоксин-вакцин, сорбцию на гидроксиде алюминия (1-3 мг/см3) и декантацию 50±5% надосадочной жидкости.
Приготовленная анатоксин-вакцина использована при лечении 18 телят, больных бронхопневмонией (учащенное дыхание до 60+5 дыхательных движений в минуту, повышение температуры до 41,5°С, кашель).
Из слизисто-гнойных истечений выделены стрептококки, золотистый стафилококк, протей. Лечение проводили путем ежедневного подкожного введения по 5-6 см3 анатоксин-вакцины с ингаляцией биопрепарата. В качестве контроля использовали амоксициллин для лечения 6 телят, больных бронхопневмонией.
Все телята, подвергнутые лечению стафило-стрептококковой анатоксин-вакциной выздоровели через 7-11 суток, а при лечении амоксициллином из 6 телят выздоровели 4 и двум телятам потребовалось еще введение линко-спектина.
Claims (1)
- Способ получения стафило- стрептококковой анатоксин-вакцины, включающий выращивание микроорганизмов на жидкой синтетической среде до 10±2,0 млрд/см3 микробных тел, стерилизацию при 1,0 атм. в течение 30-40 мин, детоксикацию экзо-, эндо и суперэнтеротоксинов в суспензии микроорганизмов раствором формалина, стерилизацию, отличающийся тем, что раздельно выращивают стафилококки и стрептококки, детоксикацию токсинов проводят двумя детоксикаторами - вначале 0,2%-ным раствором формалина в течение 7-9 суток при 42-45°С, а затем 0,6±0,1%-ным раствором этония при 42-45°С в течение 7-9 суток, смешивают равные объемы стафилококковой и стрептококковой анатоксин-вакцин, с сорбцией смеси на 1-3 мг/мл гидроксида алюминия, и увеличивают вдвое концентрацию инактивированных токсинов с микроорганизмами декантацией 50±5% надосадочной жидкости.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008115049/13A RU2377016C1 (ru) | 2008-04-16 | 2008-04-16 | Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008115049/13A RU2377016C1 (ru) | 2008-04-16 | 2008-04-16 | Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2008115049A RU2008115049A (ru) | 2009-10-27 |
RU2377016C1 true RU2377016C1 (ru) | 2009-12-27 |
Family
ID=41352490
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008115049/13A RU2377016C1 (ru) | 2008-04-16 | 2008-04-16 | Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2377016C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2468078C1 (ru) * | 2011-06-23 | 2012-11-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова Министерства сельского хозяйства Российской Федерации | Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины |
-
2008
- 2008-04-16 RU RU2008115049/13A patent/RU2377016C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2468078C1 (ru) * | 2011-06-23 | 2012-11-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова Министерства сельского хозяйства Российской Федерации | Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2008115049A (ru) | 2009-10-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2495565C1 (ru) | Способ стимуляции роста и повышения резистентности сельскохозяйственных животных | |
CN104189898A (zh) | 铜绿假单胞菌疫苗及其制备方法 | |
RU2429012C1 (ru) | Способ изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят | |
RU2377014C1 (ru) | Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины | |
RU2377016C1 (ru) | Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины | |
RU2428202C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят | |
RU2687488C1 (ru) | Формолвакцина полиштаммная против пневмоний телят стрептококковой этиологии | |
RU2553556C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
PILEHCHIAN et al. | Large scale production of Blackleg vaccine by fermenter and enriched culture medium in Iran | |
RU2432174C1 (ru) | Способ получения эшерихиозного анатоксина | |
RU2386448C2 (ru) | Способ получения ассоциированной анатоксин-вакцины для профилактики и лечения гнойно-септических болезней | |
RU2429879C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
RU2406533C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
RU2650628C1 (ru) | Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят | |
RU2316344C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
RU2406531C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий | |
UA121358C2 (uk) | Інактивована стафілококова рідка вакцина, спосіб її виготовлення і спосіб лікування та профілактики нею | |
Shibl | Role of Staphylococcus aureus exfoliatin toxin in staphylococcal infections in mice | |
RU2761379C1 (ru) | Поливалентная инактивированная вакцина против стрептококкозов свиней, способ ее получения и применения | |
RU2377013C1 (ru) | Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины | |
RU2531054C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
RU2562585C1 (ru) | Способ повышения биоцидной и лечебной эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины | |
RU2372937C1 (ru) | Способ получения колибактериозной анатоксин-вакцины | |
RU2421240C1 (ru) | Способ получения стафилококковой вакцины | |
RU2722668C1 (ru) | Способ получения инактивированной вакцины против легочных заболеваний молодняка продуктивных животных |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110417 |