RU2650628C1 - Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят - Google Patents
Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят Download PDFInfo
- Publication number
- RU2650628C1 RU2650628C1 RU2017118742A RU2017118742A RU2650628C1 RU 2650628 C1 RU2650628 C1 RU 2650628C1 RU 2017118742 A RU2017118742 A RU 2017118742A RU 2017118742 A RU2017118742 A RU 2017118742A RU 2650628 C1 RU2650628 C1 RU 2650628C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- escherichia coli
- calves
- piglets
- culture medium
- medium containing
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 55
- 244000309466 calf Species 0.000 title claims abstract description 46
- 206010014889 Enterococcal infections Diseases 0.000 title claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 57
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 claims abstract description 36
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 36
- 241000194049 Streptococcus equinus Species 0.000 claims abstract description 34
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 claims abstract description 33
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 claims abstract description 32
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims abstract description 23
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims abstract description 22
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 claims abstract description 4
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 claims abstract 2
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 claims abstract 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 12
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 3
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000700115 Myocastoridae Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 208000029182 enterotoxemia Diseases 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 206010012742 Diarrhoea infectious Diseases 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 206010061259 Klebsiella infection Diseases 0.000 description 1
- 208000024233 Klebsiella infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000700110 Myocastor coypus Species 0.000 description 1
- 208000022274 Proteus Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000011501 Proteus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 1
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 241000392514 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Dublin Species 0.000 description 1
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 1
- 206010061372 Streptococcal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 244000309465 heifer Species 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 244000000074 intestinal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/116—Polyvalent bacterial antigens
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят, включающий получение антигенов путем выделения из пораженных органов телят и поросят эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих экзотоксины, гемолитических штаммов Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, выращивание которых проводят раздельно на питательном бульоне, при этом культуры Escherichia coli выращивают в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 ч до концентрации 5-6 млрд микробных клеток в 1 мл, после чего их инактивируют формалином до его конечной концентрации 0,3-0,4% в течение 14 суток, где после инактивации формалином антигенов осуществляют стерилизующую фильтрацию бульонной культуры Escherichia coli для получения бесклеточной культуральной среды, содержащей токсины Escherichia coli, которую смешивают с культуральными средами, содержащими клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, при следующем соотношении компонентов, мас. %: культуральная среда, содержащая клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis - 26,0-30,0; культуральная среда, содержащая клетки гемолитических штаммов Enterococcus faecalis - 26,0-30,0; бесклеточная культуральная среда, содержащая токсины Escherichia coli - остальное. Изобретение позволяет повысить эффективность специфической профилактики колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции у телят и поросят, повысить безопасность и безвредность вакцины. 2 табл., 7 пр.
Description
Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к способам получения вакцин, может быть использовано в учреждениях, занимающихся созданием вакцинных препаратов для профилактики смешанных кишечных инфекций у телят и поросят.
Установлено, что в последние годы в нозологическом профиле инфекционных заболеваний молодняка крупного рогатого скота и свиней превалируют колибактериоз, стрептококкоз и энтерококковая инфекция (Арбузова А.А. Этиологические аспекты возникновения желудочно-кишечных заболеваний телят раннего постнатального периода / Ученые записки Казанской ГАВМ. - 2010. Т. 200. С. 11-17; Спиридонов А.Г., Махмутов А.Ф. Этиология инфекционных диарей новорожденных поросят и телят / Ветеринарная медицина. 2011. В. 95. С. 264-265; Терехов В.И., Иванов А.В. Видовой состав бактерий, выделенных от поросят при острых кишечных заболеваниях / Ветеринария Кубани, 2011. №3. С. 23-25; Ефанова Л.И., Манжурина О.А., Степанов А.В. Этиологическая структура факторных инфекций свиней и крупного рогатого скота в хозяйствах ЦЧЗ России / Вестник Курской ГСХА, 2012. №12. С. 71-72; Терехов В.И. Этиология и эпизоотология желудочно-кишечных болезней новорожденных телят / Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2012. №1. С. 15). Данные заболевания протекают, как правило, в ассоциации, поэтому применение ассоциированных вакцин, включающих антигены разных возбудителей, является более предпочтительным, чем использование моновакцин, поскольку в этом случае одновременно создается напряженный иммунитет в отношении возбудителей сразу нескольких инфекционных болезней. Кроме того, в связи с вариабельностью и постоянным изменением антигенного состава возбудителей кишечных инфекций у молодняка крупного рогатого скота и свиней применяемые ассоциированные вакцины должны содержать антигены, соответствующие антигенам возбудителей, выделяемых из конкретного эпизоотического очага, либо содержать набор антигенов, общих для большинства основных возбудителей.
Известна вакцина, ассоциированная против диареи телят (патент РФ на изобретение №2035916 от 17.06.1993, МКИ A61K 39/116), которая содержит смесь микробных суспензий энтеробактерий Escherichia coli 09: K99, Е. coli 0138: K88, Е. coli 200, Salmonella typhimurium 195, S. dublin 196, S. enteritidis 197, Klebsiella pneumoniae 201, 202, Proteus vulgaris 198 и P. mirabilis 199, инактивированных этанолом и депонированных на гидроокиси алюминия. Данная вакцина предназначена для специфической профилактики колибактериоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза и протейной инфекции только у телят, однако она не защищает животных от стрептококковой и энтерококковой инфекций, кроме того, она не предназначена для защиты поросят.
Известна вакцина, ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиоза поросят (патент РФ на изобретение №2129441 от 10.12.97, МКИ А61К 39/116, К39/08, К39/108). Эта вакцина содержит клостридиозный компонент, представленный антигенами клостридий (суспензией клеток и В-токсином штамма Clostridium perfingens типа С N3), а также сложный эшерихиозный компонент, включающий набор соматических антигенов (078, 0141), белковых адгезивных антигенов (К88, К99, 987Р, F41), полисахаридных капсульных антигенов (К80, К87), термостабильные и термолабильные анатоксины в соотношении 1:1, инактивированные формалином, с добавлением адъюванта - геля гидроокиси алюминия. Данная вакцина обеспечивает широкий спектр иммуногенности против энтеротоксемии и эшерихиоза, но не создает иммунитета против стрептококкоза и энтерококковой инфекции. К тому же она предназначена только для защиты поросят, но не телят.
Известна вакцина, ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий (патент РФ на изобретение №2316344 от 19.07.2006, МПК А61К 39/112, 116, 108, 09, А61Р 31/04). Данная вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Streptococcus pneumoniae и Streptococcus faecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии с последующим посевом на дифференциально-диагностические среды. Выделенные чистые культуры раздельно выращивают в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см3 и смешивают в равных соотношениях. Инактивируют формалином до 0,4-0,6%-ной конечной концентрации. Выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 часов. Смешивают культуры в равных соотношениях. Вакцина также содержит формалин, глюкозу, гидроокись алюминия и обладает высокой специфичностью и иммуногенностью. Однако представленная вакцина против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции применима в качестве средства специфической профилактики только для нутрий и не предусматривает использование для профилактики обозначенных инфекций у телят и поросят.
Известен способ изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят (патент РФ на изобретение №2429012 от 20.09.2011, МПК А61К 39/116, 108, 09 - прототип), согласно которому вакцина, ассоциированная против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят, включает получение антигенов и инактивацию их формалином, при этом предварительно проводят выделение из пораженных органов телят и поросят эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, гемолитических штаммов Streptococcus bovis и Enterococcus fecalis, раздельно их выращивают на питательном бульоне при температуре 37°С, при этом культуры Escherichia coli в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus fecalis в течение 24 ч до концентрации 5-6 млрд микробных тел в 1 мл, раздельно инактивируют формалином до концентрации 0,3-0,4% в течение 14 суток, после чего смешивают культуры в равных объемах, фасуют и укупоривают.
Недостатком известного способа является то, что в полученной вакцине содержится большое количество балластных клеток Escherichia coli, несущих лишнюю антигенную нагрузку, что негативно сказывается на формировании у животных иммунной защиты против токсинов кишечной палочки, стрептококков и энтерококков, кроме того, данная вакцина может быть реактогенна.
Техническим результатом изобретения является повышение эффективности специфической профилактики колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции у телят и поросят, повышение безопасности и безвредности вакцины.
Технический результат достигается тем, что в способе получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят, включающем получение антигенов путем выделения из пораженных органов телят и поросят эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, гемолитических штаммов Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, выращивание которых проводят раздельно на питательном бульоне, при этом культуры Escherichia coli выращивают в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 ч до концентрации 5-6 млрд микробных клеток в 1 мл, затем их инактивируют формалином до его конечной концентрации 0,3-0,4% в течение 14 суток, согласно изобретению после инактивации формалином антигенов осуществляют стерилизующую фильтрацию бульонной культуры Escherichia coli для получения бесклеточной культуральной среды, содержащей токсины Escherichia coli, которую смешивают с культуральными средами, содержащими клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis | 26,0-30,0 |
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Enterococcus faecalis | 26,0-30,0 |
Бесклеточная культуральная среда, содержащая | |
токсины Escherichia coli | остальное |
Новизна технического решения заключается в том, что за счет использования бесклеточных культур эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, гемолитических штаммов Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, инактивированных формалином, обеспечивается повышение эффективности профилактики кишечных инфекций у телят и поросят, а также безвредность биопрепарата за счет отсутствия после применения поствакцинальных реакций.
В патентной и научно-технической литературе не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявляемого предложения.
Предложенный способ получения вакцины соответствует критерию «промышленная применимость», поскольку легко воспроизводим, не требует сложного технологического оборудования и условий.
Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции осуществляют следующим образом.
Первоначально среди эпизоотических штаммов Escherichia coli, изолированных от павших телят и поросят, проводят отбор тех из них, которые обладают генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов. Для этого можно использовать тест-системы «АмплиСенс E. coli-tox» (Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии МЗ РФ, г. Москва) либо определить наличие токсинообразования с помощью биотеста на инфузориях-стилонихиях (патент РФ на изобретение 2262529 от 20.10.2005, МПК C12N 1/10, C12Q 1/10). А среди эпизоотических штаммов стрептококков и энтерококков отбирают гемолитические варианты Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis. Отобранные штаммы по отдельности засевают в пробирки с 10 мл питательного бульона, в состав которого входят кислотный гидролизат крови (9-11%), аутолизат пекарских дрожжей (9-11%), пептон (0,9-1,1%), натрия хлорид (0,4-0,6%), двузамещенный фосфорнокислый натрий (0,05-0,15%) и калия хлорид (0,01-0,03%) (патент РФ на изобретение 2342425 от 27.12.2008, МПК C12N 1/20, C12Q 1/04), после чего их помещают в термостат и культивируют при 37°С в течение 6-8 ч до появления легкой мути, свидетельствующей о росте микроорганизмов. Затем полученные культуры переносят в колбы с 200-300 мл аналогичного питательного бульона и инкубируют при 37°С: штаммы Escherichia coli в течение 7 дней, а штаммы Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 ч до достижения концентрации 5-6 млрд микробных клеток в 1 мл. Ежедневно 2 раза в сутки колбы встряхивают. По окончании инкубации в культуры добавляют формалин до концентрации 0,3-0,4% и инактивируют в течение 14 суток при температуре 37°С с ежедневным двукратным перемешиванием. После завершения инактивации равные объемы культур Escherichia coli объединяют и с помощью стерилизующей фильтрации отделяют микробную массу от среды культивирования, получая, таким образом, бесклеточную культуральную среду Escherichia coli (колибактериозный антигенный компонент). Далее бесклеточную культуральную среду Escherichia coli и бульонные культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis соединяют при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis | 26,0-30,0 |
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Enterococcus faecalis | 26,0-30,0 |
Бесклеточная культуральная среда, содержащая | |
токсины Escherichia coli | остальное |
Полученную вакцину фасуют по 100 мл в стерильные флаконы, укупоривают и проверяют на стерильность и безвредность. По внешнему виду готовая вакцина представляет собой жидкость светло-коричневого цвета с рыхлым беловато-серым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом и темном помещении при температуре 4-10°С 1 год.
Полученная вакцина предназначена как для профилактики колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции у телят и поросят, протекающих как в виде мононоинфекций, так и в виде ассоциированных инфекций. Вакцина ареактогенна и безвредна. Вакцину применяют в неблагополучных по кишечным инфекциям телят и поросят хозяйствах.
Вакциной прививают стельных коров и нетелей дважды подкожно первый раз за 30, а второй раз за 15 дней до отела в дозе 5 и 10 мл соответственно; телят также прививают дважды, первый раз в возрасте 15-20 дней, а второй через 10-14 дней в дозе 1 и 2 мл соответственно.
Супоросным свиноматкам вакцину вводят внутримышечно дважды, первый раз за 30 дней, а второй раз за 20 дней до опороса в дозе 5 мл; поросят прививают первый раз в возрасте 15-17 дней, а второй в возрасте 28-30 дней в дозе 0,25 и 0,5 мл соответственно.
Использование вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции позволяет обеспечить защиту телят и поросят сразу от трех опасных инфекционных болезней: колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции, продолжительностью не менее 10 месяцев (срок наблюдения).
Эффективность вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции зависит от свойств подобранных эпизоотических штаммов Escherichia coli, Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, последовательности приготовления и процентного соотношения компонентов, входящих в ее состав.
Приведено пять примеров зависимости эффективности вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят от соотношения заявленных компонентов из расчета на 100 мл вакцины и два примера демонстрирующих сравнительную эффективность использования заявляемого изобретения.
Пример 1
Берут эпизоотические штаммы Escherichia coli, продуцирующие термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, гемолитические штаммы Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, выращивают раздельно на питательном бульоне, при этом культуры Escherichia coli выращивают в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 ч до концентрации 5-6 млрд микробных клеток в 1 мл, после чего их инактивируют формалином до конечной концентрации 0,3-0,4% в течение 14 суток, отделяют бактериальную массу Escherichia coli с помощью стерилизующей фильтрации, после чего полученные культуры смешивают при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis | 24,0 |
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Enterococcus faecalis | 24,0 |
Бесклеточная культуральная среда, содержащая | |
токсины Escherichia coli | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина обладает слабой протективной активностью и защищает от кишечной инфекции, обусловленной патогенными Escherichia coli, Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, телят в 77%, а поросят в 70% случаев.
Пример 2
Берут эпизоотические штаммы Escherichia coli, продуцирующие термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, гемолитические штаммы Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, выращивают раздельно на питательном бульоне, при этом культуры Escherichia coli выращивают в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 ч до концентрации 5-6 млрд микробных клеток в 1 мл, после чего их инактивируют формалином до конечной концентрации 0,3-0,4% в течение 14 суток, отделяют бактериальную массу Escherichia coli с помощью стерилизующей фильтрации, после чего полученные культуры смешивают при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis | 26,0 |
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Enterococcus faecalis | 26,0 |
Бесклеточная культуральная среда, содержащая | |
токсины Escherichia coli | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина защищает от кишечной инфекции, обусловленной патогенными Escherichia coli, Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, телят в 88%, а поросят в 84% случаев.
Пример 3
Берут эпизоотические штаммы Escherichia coli, продуцирующие термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, гемолитические штаммы Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, выращивают раздельно на питательном бульоне, при этом культуры Escherichia coli выращивают в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 ч до концентрации 5-6 млрд микробных клеток в 1 мл, после чего их инактивируют формалином до конечной концентрации 0,3-0,4% в течение 14 суток, отделяют бактериальную массу Escherichia coli с помощью стерилизующей фильтрации, после чего полученные культуры смешивают при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis | 28,0 |
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Enterococcus faecalis | 28,0 |
Бесклеточная культуральная среда, содержащая | |
токсины Escherichia coli | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина защищает от кишечной инфекции, обусловленной патогенными Escherichia coli, Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, телят в 93%, а поросят в 88% случаев.
Пример 4
Берут эпизоотические штаммы Escherichia coli, продуцирующие термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, гемолитические штаммы Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, выращивают раздельно на питательном бульоне, при этом культуры Escherichia coli выращивают в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 ч до концентрации 5-6 млрд микробных клеток в 1 мл, после чего их инактивируют формалином до конечной концентрации 0,3-0,4% в течение 14 суток, отделяют бактериальную массу Escherichia coli с помощью стерилизующей фильтрации, после чего полученные культуры смешивают при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis | 30,0 |
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Enterococcus faecalis | 30,0 |
Бесклеточная культуральная среда, содержащая | |
токсины Escherichia coli | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина защищает от кишечной инфекции, обусловленной патогенными Escherichia coli, Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, телят в 96%, а поросят в 92% случаев.
Пример 5
Берут эпизоотические штаммы Escherichia coli, продуцирующие термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, гемолитические штаммы Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, выращивают раздельно на питательном бульоне, при этом культуры Escherichia coli выращивают в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 ч до концентрации 5-6 млрд микробных клеток в 1 мл, после чего их инактивируют формалином до конечной концентрации 0,3-0,4% в течение 14 суток, отделяют бактериальную массу Escherichia coli с помощью стерилизующей фильтрации, после чего полученные культуры смешивают при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis | 32,0 |
Культуральная среда, содержащая | |
клетки гемолитических штаммов Enterococcus faecalis | 32,0 |
Бесклеточная культуральная среда, содержащая | |
токсины Escherichia coli | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина защищает от кишечной инфекции, обусловленной патогенными Escherichia coli, Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, телят в 89%, а поросят в 82% случаев. На месте введения у отдельных животных, особенно из числа поросят, развились плотные болезненные припухлости.
Пример 6
В хозяйстве Краснодарского края, неблагополучном по острым кишечным заболеваниям телят, провели производственное испытание заявляемой вакцины. По данным ветеринарной лаборатории диарею у молодняка крупного рогатого скота в данном хозяйстве вызывают патогенные штаммы кишечной палочки и стрепто- и энтерококки. Эффективность вакцины, изготовленной по заявляемому способу, сравнивали с эффективностью прототипа, для этого было сформировано 3 группы стельных коров по 25 голов в каждой.
Первую группу коров иммунизировали заявляемой вакциной первый раз за 30 дней до отела в дозе 5 мл, второй раз за 15 дней до отела в дозе 10 мл. Полученных от этих коров телят также иммунизировали заявляемой вакциной первый раз в возрасте 15-20 дней в дозе 1 мл, а второй через 10-15 дней в дозе 2 мл. Вакцину вводили подкожно в область верхней трети шеи.
Вторую группу коров и полученных от них телят иммунизировали прототипом по схеме и в дозах, аналогичных в первой группе.
Третья группа коров была контрольной, они и полученные от них телята не иммунизировались.
Эффективность вакцин оценивали по достижении телятами 3-месячного возраста и перевода их в другой корпус на групповое содержание. Критериями оценки служили показатели заболеваемости и летальности.
Результаты опыта отражены в таблице, из материалов которой видно, что в первой группе острая кишечная инфекция была зарегистрирована у 2 телят, при этом диарею у них удалось купировать в течение 3 дней, а на 5 день телята полностью выздоровели. Таким образом, профилактическая эффективность заявляемой вакцины составила 92%.
Во второй группе острая кишечная инфекция была зарегистрирована у 5 телят, причем у одного теленка она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животного. Профилактическая эффективность прототипа составила 80%.
В третьей группе из 25 телят заболело 18 животных, из которых 5 пали. Таким образом, в 3 группе заболеваемость составила 72%, а летальность - 27,8%, что свидетельствует о значительной тяжести болезни.
Следовательно, применение вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции, полученной по заявляемому способу, позволило более эффективно профилактировать заболевание телят острыми кишечными инфекциями. Заболеваемость телят, привитых заявляемой вакциной, составила 8%, а сохранность 100%, тогда как при использовании прототипа заболеваемость телят составила 20%, а сохранность 96%. В контрольной группе заболеваемость телят острой кишечной инфекцией составила 72%, а сохранность 80%.
Пример 7. Обоснование эффективности использования вакцины для профилактики острых кишечных заболеваний поросят
В хозяйстве длительно неблагополучном по острым кишечным заболеваниям поросят сформировали 3 группы супоросных свиноматок по 5 животных в каждой.
В первой группе (опытная) свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали предлагаемой вакциной. Свиноматок иммунизировали первый раз за 30 дней до опороса в дозе 5 мл, второй раз - за 20 дней в дозе 5 мл внутримышечно в область основания ушной раковины. Поросят иммунизировали дважды первый раз в возрасте 15-17 дней в дозе 0,25 мл, а второй в возрасте 28-30 дней в дозе 0,5 дней внутримышечно в области внутренней поверхности бедра.
Свиноматок второй группы (положительный контроль) вакцинировали вакциной ОКЗ производства ООО «АГРОВЕТ» (г. Москва) согласно инструкции, а именно двукратно за 30 и 40 дней до опороса в дозе 5 мл подкожно. Поросят, полученных от данных свиноматок, вакцинировали первый раз в возрасте 25-27 дней, второй раз в возрасте 35-37 дней подкожно в дозе 1,0 мл.
В третьей группе (отрицательный контроль) ни свиноматок, ни полученных от них поросят не вакцинировали.
За поросятами в течение 90 дней вели клиническое наблюдение, учитывали количество заболевших и павших животных. Результаты проведенного исследования представлены в таблице 2. Из материалов таблицы видно, что в 1-й группе от 5 свиноматок было получено 53 поросенка, из которых заболело 8 голов и пало 2. Заболеваемость по группе составила 15,1%, смертность 3,8%. Следовательно, профилактическая эффективность заявляемого способа составила 84,9% при сохранности поросят в группе 96,2%.
Во 2-й группе, где свиноматки иммунизировались вакциной ОКЗ, родилось 52 поросенка, из которых 17 заболело и 5 пало. Заболеваемость по этой группе составила 32,7%, смертность 9,6%, профилактическая эффективность вакцины ОКЗ 67,3% при сохранности 90,4%.
В 3-й группе было получено 53 поросенка, из них 28 заболело, 9 пало. Заболеваемость составила 52,8%, смертность 17%, а сохранность 83%.
Следовательно, заявляемый способ профилактики острых кишечных заболеваний позволил снизить заболеваемость по сравнению с прототипом на 17,6%, а в сравнении с группой отрицательного контроля на 37,7%, при этом падеж сократился в 2,5-4,5 раз, что свидетельствует о его высокой эффективности.
Claims (2)
- Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят, включающий получение антигенов путем выделения из пораженных органов телят и поросят эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих экзотоксины, гемолитических штаммов Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, выращивание которых проводят раздельно на питательном бульоне, при этом культуры Escherichia coli выращивают в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 ч до концентрации 5-6 млрд микробных клеток в 1 мл, после чего их инактивируют формалином до его конечной концентрации 0,3-0,4% в течение 14 суток, отличающийся тем, что после инактивации формалином антигенов осуществляют стерилизующую фильтрацию бульонной культуры Escherichia coli для получения бесклеточной культуральной среды, содержащей токсины Escherichia coli, которую смешивают с культуральными средами, содержащими клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
-
Культуральная среда, содержащая клетки гемолитических штаммов Streptococcus bovis 26,0-30,0 Культуральная среда, содержащая клетки гемолитических штаммов Enterococcus faecalis 26,0-30,0 Бесклеточная культуральная среда, содержащая токсины Escherichia coli остальное
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017118742A RU2650628C1 (ru) | 2017-05-29 | 2017-05-29 | Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017118742A RU2650628C1 (ru) | 2017-05-29 | 2017-05-29 | Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2650628C1 true RU2650628C1 (ru) | 2018-04-17 |
Family
ID=61976629
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017118742A RU2650628C1 (ru) | 2017-05-29 | 2017-05-29 | Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2650628C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2722668C1 (ru) * | 2019-06-20 | 2020-06-02 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" (ФГБНУ ВНИТИБП) | Способ получения инактивированной вакцины против легочных заболеваний молодняка продуктивных животных |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2035916C1 (ru) * | 1993-06-17 | 1995-05-27 | Акционерное общество "Агровет" | Вакцина, ассоциированная против диареи телят |
RU2316344C1 (ru) * | 2006-07-19 | 2008-02-10 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет | Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий |
RU2429012C1 (ru) * | 2010-07-27 | 2011-09-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Способ изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят |
-
2017
- 2017-05-29 RU RU2017118742A patent/RU2650628C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2035916C1 (ru) * | 1993-06-17 | 1995-05-27 | Акционерное общество "Агровет" | Вакцина, ассоциированная против диареи телят |
RU2316344C1 (ru) * | 2006-07-19 | 2008-02-10 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет | Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий |
RU2429012C1 (ru) * | 2010-07-27 | 2011-09-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Способ изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2722668C1 (ru) * | 2019-06-20 | 2020-06-02 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" (ФГБНУ ВНИТИБП) | Способ получения инактивированной вакцины против легочных заболеваний молодняка продуктивных животных |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2429012C1 (ru) | Способ изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят | |
RU2650628C1 (ru) | Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят | |
RU2428202C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят | |
RU2687488C1 (ru) | Формолвакцина полиштаммная против пневмоний телят стрептококковой этиологии | |
RU2553556C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
RU2649831C1 (ru) | Способ профилактики острых кишечных заболеваний у поросят | |
RU2432174C1 (ru) | Способ получения эшерихиозного анатоксина | |
RU2650604C1 (ru) | Способ профилактики острых кишечных заболеваний у телят | |
PILEHCHIAN et al. | Large scale production of Blackleg vaccine by fermenter and enriched culture medium in Iran | |
RU2538158C1 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
RU2263143C2 (ru) | Штамм бактерий streptococcus pyogenes №289, используемый для изготовления вакцин против стрептококкоза пушных зверей | |
RU2813771C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у телят | |
RU2813752C1 (ru) | Способ получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза телят и поросят | |
RU2764600C1 (ru) | Вакцина против эшерихиоза телят и поросят | |
RU2814593C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у поросят | |
RU2316344C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
RU2429879C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
RU2806810C1 (ru) | Вакцина гидроокись алюминиевая масляная против эшерихиоза телят и поросят | |
RU2406531C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий | |
RU2753410C2 (ru) | Способ получения анатоксин-вакцины против эшерихиоза животных | |
RU2766249C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у телят | |
RU2406532C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
RU2722668C1 (ru) | Способ получения инактивированной вакцины против легочных заболеваний молодняка продуктивных животных | |
RU2766549C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у поросят | |
RU2406533C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190530 |