EA029938B1

EA029938B1 - Вакцина против мыта лошадей

Info

Publication number: EA029938B1
Application number: EA201600290A
Authority: EA
Inventors: Алим Байжанович Бижанов; Айдар Мырзахметулы Намет; Болат Шайзадаевич Каратаев
Original assignee: Тоо "Акынтай"
Priority date: 2015-04-09
Filing date: 2016-03-18
Publication date: 2018-05-31
Also published as: EA201600290A1

Abstract

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к профилактике и терапии мыта лошадей. Предложена стабильная, безвредная и высокоэффективная вакцина против мыта лошадей, включающая инактивированный штамм Streptococcus equi BNK; антибиотики широкого спектра действия бициллин-5, сульфадимезин и триметоприм; полиоксидоний в качестве адъюванта и иммуномодулирующего средства.

Description

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к профилактике и терапии мыта лошадей. Предложена стабильная, безвредная и высокоэффективная вакцина против мыта лошадей, включающая инактивированный штамм §1гер1ососси8 едш ΒΝΚ; антибиотики широкого спектра действия бициллин-5, сульфадимезин и триметоприм; полиоксидоний в качестве адъюванта и иммуномодулирующего средства.

029938 Β1

029938

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к профилактике и терапии мыта лошадей.

Известна вакцина против мыта лошадей, включающая мытный антиген, Т-активин и бициллин [патент РК № 3681, кл. А61К 39/00, 1996].

Недостатком известной вакцины является то, что в связи со снятием с производства отдельных компонентов препарата дальнейшее ее изготовление не представляется возможным.

Задачей изобретения является получение вакцины против мыта лошадей с использованием новых современных компонентов, позволяющих повысить иммуногенность, ускорить сроки выздоровления и исключить поствакцинальные осложнения.

Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной, безвредной и высокоэффективной вакцины против указанной инфекции.

Предложена вакцина против мыта лошадей, включающая инактивированный штамм 31гер1ососси8 есцп ΒΝΚ, содержащая антибиотики широкого спектра действия бициллин-5, сульфадимезин и триметоприм, а также полиоксидоний в качестве адъюванта и иммуномодулирующего средства, при следующем соотношении компонентов, в 1 л:

штамм 81гер1ососси§ βςιιΐ ΒΝΚ 1,8-2,0 χΐ 0¹⁰ КОЕ

бициллин-5 30-40 млн ЕД

сульфадимезин 1800-2000 мг

триметоприм 300-400 мг

полиоксидоний 80-120 мг

дистиллированная вода до 1 литра.

Штамм бактерий, используемый для изготовления инактивированной вакцины против мыта лошадей, депонирован в лаборатории ТОО "Акынтай" и обладает следующими свойствами.

Штамм бактерий 81гер1ососси§ есцп ΒΝΚ.

Культуральные свойства.

На МПА с добавлением 10%-ной сыворотки крови и 1%-ной глюкозы образуют мелкие округлой формы росинчатые прозрачные гладкие вязкой консистенции сливающиеся колонии, трудно снимаемые петлей. При просмотре на свет прозрачные с голубоватым оттенком при хранении в течение 2-4 сут колонии становятся серовато-белыми, прозрачными, но сохраняют гладкие очертания.

На МПБ с добавлением 10%-ной сыворотки крови и 1%-ной глюкозы при рН среды 7,4 дает рост в виде помутнения среды с образованием небольшого осадка на дне пробирки, при хранении в течение 3-5 сут бульон просветляется с образованием обильного сероватого осадка.

Биохимические свойства.

Обладает слабовыраженными биохимическими свойствами, не растет в МПБ с 40% желчи, не изменяет молоко с метиленовой синью, не свертывает молоко, не редуцирует лакмус, не ферментирует сорбит, маннит, глицерин, арабинозу, рафинозу, лактозу, не разжижает желатину, а разлагает глюкозу, сахарозу и мальтозу с образованием кислоты без газа.

Маркерные признаки. Лизирует эритроциты лошади, белых мышей, слабо лизирует эритроциты кроликов, не лизирует эритроциты золотистых хомячков, не ферментирует лактозу и манит, не продуцирует стрептолизин О, продуцирует гемолизин, лейкоцидин, токсин общего действия и агрессин.

Антигенные свойства.

Штамм преципитируется специфической стрептококковой сывороткой серологической группы С.

Антигенная активность.

При парентеральном введении в организм лошади вызывает выработку антител, выявляемых в РНГА, титр 1:2800.

Принадлежность к трофической группе. Прототроф.

Генетические особенности штамма.

Лизирует эритроциты лошади, белых мышей, слабо лизирует эритроциты кроликов, не лизирует эритроциты золотистых хомячков, не ферментирует лактозу и манит, не продуцирует стрептолизин-О, продуцирует гемолизин, лейкоцидин, токсин общего действия и агрессин. Продукт, синтезируемый штаммом - гемолитический токсин.

Активность (продуктивность).

Лизис эритроцитов лошади и белой мыши.

Реактогенность.

Обладает умеренно-средней реактогенностью для лошадей.

Иммуногенность.

При внутримышечном введении в дозе 2х10⁶ КОЕ продолжительность напряжения иммунитета у белых мышей составляет 12 мес.

Стабильность при пассировании.

Основные биологические свойства штамма стабильно сохраняются в течение 2 лет (срок наблюдения).

- 1 029938

Штамм хранится в темном месте, в лиофильно высушенном состоянии и в стеклянных ампулах под вакуумом при температуре от 4 до 10°С в течение 12 мес или в криозамороженном состоянии в стерильном растворе глицерола при температуре -75-80°С в течение 7 лет.

Пример 1.

Инактивированную вакцину против мыта лошадей готовят на основе штамма 31гер1ососси§ ецш

ΒΝΚ.

Для приготовления вакцины против мыта лошадей культуру мытного стрептококка, полученную путем пассажей в МПБ, МПА, агар и бульон Хоттингера с соблюдением условий стерильности смывают в сборник емкостью 10000 см³ (10 л), затем 0,85%-ным раствором хлорида натрия концентрацию микробных клеток доводят до содержания 1 млрд КОЕ для мытных стрептококков в 1 см³ и сливают в стерильных условиях в 5-10-литровые бутыли.

Инактивацию бактерийных суспензий мытного стрептококка в бутылях с концентрацией 1 млрд КОЕ в 1 см³ проводят путем автоклавирования при 120°С в течение 30 мин при 1,2 атм. Полученную инактивированную бактериальную массу, признанную стерильной и безвредной, в стерильных условиях разливают в 10 см³ пенициллиновые флаконы в объеме 1 см³ (для 10 доз вакцины) и в 20 см³ пенициллиновые флаконы в объеме 2 см³ (для 20 доз вакцины).

К 10-20 см³ пенициллиновым флаконам с инактивированной бактериальной массой добавляют соответственно 1-2 см³ сахарозо-желатиновой среды (10% сахарозы и 0,5% желатины), и производят лиофильное высушивание. День окончания лиофилизации считают датой изготовления вакцины.

Для приготовления 10 доз вакцины к антигену (1 млрд КОЕ во флаконе) в виде комплекта добавляют в стерильных условиях 1,5 млн ЕД бициллина-5, 100 мг сульфадимезина, 20 мг триметоприма, 6 мг полиоксидония, плотно закрывают резиновой пробкой и обкатывают алюминиевым колпачком.

Пример 2.

Инактивированную вакцину против мыта лошадей используют внутримышечно однократно при следующем соотношении компонентов:

штамм ЗЕерЮсоссиз ецш ΒΝΚ бициллин-5 сульфадимезин триметоприм

полиоксидонии

1,8χ10^1θΚΟΕ 20-25 млн ЕД 1800 мг 300 мг

80 мг

до 1 литра.

дистиллированная вода

Пример 3.

штамм 31гер1ососси8 βςιιϊ ΒΝΚ 1,9 х 10¹⁰ КОЕ

бициллин-5 25-30 млн ЕД

сульфадимезин 1900 мг

триметоприм 350 мг

полиоксидоний 100 мг

дистиллированная вода до 1 литра.

Пример 4.

штамм 31гер1ососси5 ецш ΒΝΚ 2x10¹⁰ КОЕ

бициллин-5 30-40 млн ЕД

сульфадимезин 2000 мг

триметоприм 400 мг

полиоксидоний 120 мг

дистиллированная вода до 1 литра.

Пример 5.

Иммуногенную активность вакцины определяют на 1000 белых мышах, подобранных по принципу аналогов, со средним весом 18-20 г, разделенных на 10 групп по 100 голов в каждой: 9 опытных, а 10-я контрольная.

Препараты вводят внутримышечно однократно в дозе 0,1 см³ на голову. На 21, 30 и 60 сутки иммунизированным и контрольным не иммунизированным белым мышам вводят вирулентную культуру 31гер1ососси§ едш в дозе 3 ΕΌ₅₀. Результаты испытания представлены в табл. 1.

- 2 029938

Таблица 1

Результаты определения иммуногенной активности вакцины против мыта лошадей на белых мышах

I ’руппа живот ных	Препараты: соотношение компонентов в 1 л вакцины, кратность и доза на 1 голову	Количес тво белых мышей, гол.	Срок проверки иммуните та, дни	Результат заражения	Процент иммунных животных
Выжило, гол.	Пало, гол
1	штамм 81гер1ососсиз ецш ΒΝΚ 1,8x10¹⁰ КОЕ, бициллин-5 - 20-25	100	21	98	2	98
2	млн ЕД, сульфадимезин - 1800 мг, триметоприм - 300 мг,	100	30	98	2	98
3	полиоксидоний - 80 мг, дистиллированная вода - до 1 литра, однократно, 0,1 см³	100	60	97	3	97
4	штамм ЗйерЮсоссиз ецш ΒΝΚ 1,9x10¹⁰ КОЕ, бициллин-5 - 25-30	100	21	98	2	98
5	млн ЕД, сульфадимезин - 1900 мг, триметоприм - 350 мг,	100	30	98	2	98
6	полиоксидоний - 100 мг, дистиллированная вода - до 1 литра, однократно, 0,1 см³	100	60	97	3	97
7	штамм 81гер1ососсиз εςιιϊ ΒΝΚ 2x10*° КОЕ, бициллин-5 - 30-40	100	21	98	2	98
8	млн ЕД, сульфадимезин - 2000 мг, триметоприм - 400 мг,	100	30	98	2	98
9	полиоксидоний - 120 мг, дистиллированная вода - до 1 литра, однократно, 0,1 см³	100	60	97	3	97
10	Контрольная группа, вакцина не вводилась	100	21	0	100	0

Из табл. 1 видно, что на 60-е сутки после введения вакцины в 3-й группе остались в живых 97 белых мышей - 97%, в 6 и 9-й группах получены аналогичные результаты при 100% гибели мышей в контрольной группе.

Пример 6.

Для определения терапевтической эффективности вакцины проводят эксперименты на 4 группах белых мышей, предварительно зараженных вирулентной культурой мытного стрептококка. Животных разделяют на четыре группы: три опытных и четвертая контрольная по 100 голов в каждой.

На 2-е сутки после заражения животным 1 группы вводят препарат по прописи, описанной в примере 2, животным 2 группы вводят препарат по прописи, описанной в примере 3, а животным 3 группы вводят препарат по прописи, описанной в примере 4.

Мышам препарат вводят внутримышечно однократно в дозе 0,1 см³. На 2-е и 3-е сутки после введения препарата у мышей восстановливается аппетит, животные выздоровливают при гибели всех животных в контрольной группе.

Пример 7.

Терапевтическую эффективность препарата проверяют в неблагополучном по мыту лошадей хозяйстве. Для этого отбирают 40 голов жеребят, больных мытом, первой группе животных - 20 голов - вводят препарат в терапевтической дозе 10 см³, а второй контрольной группе - 20 голов - препарат не вводят. На 4-5-е сутки после введения препарата у жеребят снижается температура тела до нормы, восстановливается аппетит, полностью рассасываются отечность подчелюстных лимфатических узлов, и животные выздоровливают, тогда как жеребята второй контрольной группы продолжают болеть клинической формой мыта.

Пример 8.

Напряженность иммунитета после введения вакцины определяют на заведомо здоровых 90 жеребятах. В эксперименте используют 6 групп лошадей по 15 голов в каждой, три опытных и три контрольных. Вакцину вводят внутримышечно в область крупа однократно в дозе 5,0 см³. Через 2, 6 и 12 месяцев иммунизированных и контрольных жеребят заражают вирулентной культурой мытного стрептококка в дозе 31 Т)₅₀ и учитывают результаты. Результаты испытаний представлены в табл. 2.

- 3 029938

Таблица 2

Результаты испытания напряженности иммунитета у жеребят, иммунизированных вакциной против мыта лошадей

Группа животных, п/п	Вакцина против мыта лошадей	Срок проверки иммунитета, мес	Результаты заражения	Процент иммунных жеребят
заболело, гол	не заболело, гол
1	Вакцинирована, опытная группа	2	0	15	100
2	Не вакцинирована, контрольная группа	2	15	0	0
3	Вакцинирована, опытная группа	6	0	15	100
4	Не вакцинирована, контрольная группа	6	15	0	0
5	Вакцинирована, опытная группа	12	1	14	93,33
6 ... .	Не вакцинирована, контрольная группа	12	15	0	0

При контрольном заражении в 1-й и 3-й группах заболевших животных не регистрируют (100% иммунных животных), а в 5-й опытной группе заболевает мытом в легкой форме 1 животное (93,33% иммунных животных). Тогда как все животные контрольных групп заболевают клинической формой мыта. Всех заболевших животных лечат этой же вакциной в терапевтической однократной дозе 10 см³.

Использование вакцины против мыта лошадей внутримышечно однократно в дозе 10 см³ приводит к полному клиническому выздоровлению жеребят от мыта в течение 4-5 суток, а в дозе 5 см³ предохраняет от заражения 93,3% привитых животных в течение 12 месяцев, а заболевшие животные переболевают мытом в легкой форме.

Предлагаемая вакцина безвредна, не вызывает осложнений у вакцинированных животных, обладает высокой активностью.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Вакцина против мыта лошадей, включающая инактивированный штамм мытного стрептококка 81гер1ососсиз ецщ ΒΝΚ, антибиотики широкого спектра действия бициллин-5, сульфадимезин и триметоприм; полиоксидоний в качестве адъюванта и иммуномодулирующего средства и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов (в 1 л):

штамм 31гер1ососси5 ецщ ΒΝΚ - 1,8-2,0х10¹⁰ КОЕ,

бициллин-5 - 30-40 млн ЕД,

сульфадимезин - 1800-2000 мг,

триметоприм - 300-400 мг,

полиоксидоний - 80-120 мг,

дистиллированная вода - до 1 л.