RU2524133C2 - ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЛАГЕЛЛИНА - Google Patents
ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЛАГЕЛЛИНА Download PDFInfo
- Publication number
- RU2524133C2 RU2524133C2 RU2012148482/10A RU2012148482A RU2524133C2 RU 2524133 C2 RU2524133 C2 RU 2524133C2 RU 2012148482/10 A RU2012148482/10 A RU 2012148482/10A RU 2012148482 A RU2012148482 A RU 2012148482A RU 2524133 C2 RU2524133 C2 RU 2524133C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- flagellin
- recombinant
- strain
- pet151flic
- producer
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli - продуцента биологически активного флагеллина. Охарактеризованный штамм получен трансформацией культуры клеток E. coli BL21[DE3] рекомбинантной плазмидной ДНК рЕТ151FliC, полученной на основе вектора рЕТ151FliC, в который был встроен ген fliC, кодирующий биологически активный флагеллин, имеющий нуклеотидную последовательность, представленную в Seq ID No 3. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика под № В-11369. Представленное решение обладает более высокой продуцирующей способностью в отношении рекомбинантного флагеллина, являющегося эффективным адъювантом. 1 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии получения рекомбинантного флагеллина с помощью штамма бактерий Escherichia coli.
Бактериальный белок флагеллин является эффективным стимулятором иммунной системы. Взаимодействуя с клеточным рецептором TLR-5, который экспрессируется на поверхности клеток эпителия, эндотелия сосудов, нейтрофилов, моноцитов, дендритных клеток и Т-лимфоцитов, флагеллин вызывает быструю продукцию клетками противовоспалительных цитокинов и хемакинов, активирующих иммунные клетки и привлекающих их к месту внедрения патогена. Особую роль в развитии иммунного ответа играет взаимодействие флагеллина с TLR-5 дендритных клеток, стимулирующее созревание дендритных клеток, выражающееся, в частности, в экспрессии на их поверхности CD80, CD86, MHCII. Стимулированные флагеллином дендритные клетки усиленно продуцируют TNF-α, IL-8, IL-1β, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, RANTES. Показано, что дендритные клетки, стимулированные флагеллингом, в свою очередь, стимулируют пролиферацию Т-клеток и продукцию ими интерферона-γ. Активация флагеллином моноцитов и макрофагов также усиливает иммунный ответ посредством стимулирования фагоцитоза.
Иммуностимулирующее действие флагеллина проявляется как при его системном введении, так и при воздействии на слизистые оболочки. Взаимодействие с рецептором TLR-5 высокоспецифично и происходит при низких концентрациях флагеллина - до 8,5×10-10 М. Кроме того, поскольку TLR-5 расположен на поверхности клеток, взаимодействие с ним флагеллина не требует предварительного фагоцитоза, чем объясняется быстрота реакции клеток на флагеллин.
Известен ряд патентов, где флагеллин используется в качестве адъюванта при иммунизации против ряда патогенов, в том числе белка, слитого с целевым антигеном в единую полипептидную цепь [WO 2006078657, WO 2011028875], в виде смеси с целевым иммуногеном [EA 201001820] или в виде вирусоподобных частиц, содержащих флагеллин и целевой антиген [US 201205082, WO 2009128949].
Известен патент, где флагеллин может использоваться в качестве иммуностимулятора и иммуномодулятора для лечения заболеваний, связанным с хронической бактериальной инфекцией [WO 2007098371].
Известно также антиапоптотическое действие флагеллина, которое позволило использовать его в качестве радиопротектора и хемопротектора [EA 010291, WO 2009102818].
Недостатком данной технологии является недостаточная эффективность рекомбинантного флагеллина, а также высокая себестоимость флагеллина, связанная с его низким выходом.
Известна технология получения рекомбинантного флагеллина, где предложено его получение из Flic Salmonella entericf Serovar Typhimurium ATCC 14028 [заявка EA 201001820, 2010]. Недостаток данного метода получения флагеллина заключается в необходимости работы с культурой Salmonella, что требует повышенных мер безопасности, увеличивает объем финансовых затрат и времени на получение флагеллина.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является разработка авторов [Матюнина Е.А. и др. «Получение рекомбинантного белка FliC в клетках Е. coli»<URL: http://shmain.ru/nauchnye-stati/matyunina-e-a-al-shexadat-r-i-duxovlinov-i-v-poluchenie-rekombinantnogo-belka-flic-v-kletkax-e-coli.html>, где показана возможность получения флагеллина из Е. coli, однако дальнейшие проведенные авторами испытания показали, что он является денатурированным и поэтому неактивным, что вызвало необходимость проведения дополнительных работ, приведших к созданию настоящего изобретения.
Для устранения всех этих недостатков существует необходимость в бактериальных продуцентах, обеспечивающих высокий уровень продукции высокоактивного флагеллина.
Задачей, решаемой авторами, являлось создание технологии, позволяющей получать активный рекомбинантный флагеллин (с удельной активностью не менее 106 Единиц активности/мг), и повышение выхода продукции.
Технический результат был достигнут созданием штамма Escherichia coli BL21[DE3]pET151FliC - продуцента высокоактивного рекомбинантного флагеллина, полученного трансформацией культуры клеток E. coli BL21[DE3] (Invitrogen, США, генотип F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm rne131 (DE3) рекомбинантной плазмидной ДНК pET151FliC, созданной in vitro и содержащей ген рекомбинантного флагеллина fliC, вектор pET151FliC, кодирующий биологически активный флагеллин Salmonella typhymurium Т10 по Seq ID No 3.
Полученный штамм E.coli BL21[DE3]pET151FliC депонирован во Всероссийскую коллекцию промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика под № В-11369 от 30.10.2012.
Штамм E. coli ВКПМ № В-11369 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физико-биохимическими свойствами:
Культурально-морфологические особенности штамма: грамотрицательные прямые палочки, размером 1,1-1,5×2,0-3,0 мкм, одиночные, спор и капсул не образуют. Каталазоположительные. Оксидазоотрицательные. Факультативные анаэробы. Клетки хорошо растут на простых питательных средах, содержащих и не содержащих ампициллин, например, на среде LB. На агаризованной среде - колонии гладкие, круглые, слабо выпуклые, с ровным краем. В жидких средах образуют равномерную светорассеивающую суспензию, при хранении без перемешивания оседают на дно. Клетки растут в интервале температур от 8°C до 43°C, интервал для культивирования - 28-38°C, оптимум роста при 37°C. Интервал pH 5-7. Катализируют D-глюкозу и некоторые другие углеводы с образованием кислоты и газа, не сбраживают галактозу. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная, не образуют H2S, гидролизуют мочевину.
Характеристики полезного вещества, синтезируемого штаммом: Рекомбинантный белок - флагеллин, длиной 528 аминокислотных остатков, состоящий из флагеллина FliC Salmonella typhimurium T10 (495 амк) и служебной последовательности длиной 33 аминокислоты
Активность штамма
Продуктивность штамма - рекомбинантный флагеллин составляет не менее 37% белка клеточного лизата при культивировании в условиях индукции.
Криоконсервация. В запаянных ампулах, штамм, лиофильно-высушенный в среде, содержащей на 30 мл воды - 5 г сахарозы, 1,5 г желатина, хранится при комнатной температуре в течении 20 лет.
Культивирование штамма: культивирование при температуре 28-38°С в термостате или качалке, в агаризованной (2% агара) или жидкой LB-среде соответственно. Селективные условия - добавление 100 мкг/мл ампициллина.
Ферментация: ферментацию ведут в жидкой среде PYP-5052, содержащей 0,2% лактозы, с добавлением 100 мкг/мл ампициллина, при перемешивании и аэрировании, при температуре 28-38°С в течение 18 часов.
На фиг.1 приведены электрофореграммы лизатов клеток Escherichia coli ВКПМ № В-11369 при культивировании в условиях индукции синтеза белка лактозой и без индукции, где 1-белковый маркер молекулярного веса, кДа; 2-лизат клеток штамма Е.coli ВКПМ № В-11369 индукции экспрессии 0,2% лактозой; 3-лизат клеток штамма Е.coli ВКПМ № В-11369 без индукции экспрессии 0,2% лактозой.
Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами использования штамма Е.coli ВКПМ № В-11369.
Пример 1. Создание генетической конструкции, обеспечивающей синтез рекомбинантного флагеллина в клетках Е.coli.
Методом полимеразной цепной реакции с использованием специфических праймеров FliC-For (SEQ ID NO 1) и FliC-Rev (SEQ ID NO 2) на матрице геномной ДНК вакцинного штамма Salmonella typhimurium T10 (RU2192886) был амплифицирован ген fliC, кодирующий флагеллин, который далее был сшит с вектором рЕТ151. Последовательность нуклеотидов полученного гена совпадает с последовательностью флагеллина FliC (флагеллина фазы 1) Salmonella enterica serovar Typhimurium, имеющейся в GeneBank (BAA02846.1) Полученный ген был вставлен в экспрессионный вектор рЕТ151 с получением экспрессионной плазмиды pET151FliC.
Плазмида рЕТ151 FliC обеспечивает синтез в клетках Escherichia coli полноразмерного бактериального флагеллина, дополнительно содержащего с N-конца служебную последовательность длиной 33 аминокислоты, которая обеспечивает высокоэффективную инициацию синтеза белка рибосомами Е.coli, содержит участок, состоящий из 6-ти остатков гистидина (гистидиновый таг), предназначенную для последующей очистки рекомбинантного флагеллина с помощью металлохелатной хроматографии, сайт узнавания антителом V5, а также сайт гидролиза протеиназой TEV, позволяющий при необходимости удалить большую часть служебной последовательности обработкой очищенного рекомбинантного флагеллина вышеназванной протеиназой с последующим повторным циклом металлохелатной хроматографии. Последовательность нуклеотидов искусственного гена, кодирующего рекомбинантный флагеллин, представлена в SEQ ID No 3.
Пример 2. Получение штамма-продуцента рекомбинантного флагеллина и исследование его продуктивности.
Полученной плазмидой pET151FliC были трансформированы клетки Escherichia coli штамма BL21[DE3]Star, содержащие в своем геноме ген, кодирующий полимеразу фага Т7 под контролем бактериального промотора, индуцируемого лактозой. Кроме того, они не содержат протеазу Ion и несут мутацию в гене, кодирующем протеазу OmpT. Отсутствие этих двух протеаз уменьшает деградацию гетерологичных белков. Данный штамм содержит также мутацию в гене rne, кодирующий рибонуклеазу Е, что приводит к увеличению стабильности мРНК в клетке и, как следствие, к повышению продукции клетками данного штамма рекомбинантного белка.
В результате был получен штамм E.coli ВКПМ № В-11369 - продуцент бактериального белка FliC.
Для поддержания полученного штамма-продуцента белка FliC использовали плотную агаризованную LB-среду, содержащую 100 мкг/мл ампициллина и 1% глюкозы.
Продуктивность полученного штамма-продуцента изучали путем культивирования клеток в среде PYP-5052 с 0,2% лактозой, в термостатированной качалке роторного типа при температуре 37°С, скорости вращения платформы 250 об/мин в течение 18 часов. Оптическая плотность (ОП600) культуры после окончания культивирования составила 7 О.Е. В качестве контроля использовали неиндуцированную культуру (без добавления лактозы). Образцы биомассы клеток лизировали и анализировали методом диск-электрофореза в ПААГе в денатурирующих условиях с последующей денситометрией.
Результат представлен на фиг.1.
Как видно из фиг.1, индукция лактозой культуры клеток E.coli ВКПМ № В-11369 приводит к синтезу белка с молекулярным весом примерно 57 килодальтон, что соответствует ожидаемому молекулярному весу для рекомбинантного флагеллина. Анализ денситограммы полиакриламидного геля, представленного на фиг.1, выполненный с помощью программы TotalLab, показал, что рекомбинантный флагеллин составляет 37% общего белка клеточного лизата.
Пример 3. Очистка рекомбинантного флагеллина и изучение его биологической активности.
Рекомбинантный флагеллин очищали из клеточных лизатов методом металлохелатной хроматографии с последующим диализом. Чистота выделенного флагеллина составила не менее 97% по результатам электрофореза в полиакриламидном геле с последующей денситометрией.
Биологическая активность рекомбинантного флагеллина оценивалась в тесте, основанном на способности клеток линии А-549 секретировать интерлейкин-8 при добавлении в культуральную среду флагеллина. Для постановки теста клетки линии А-549 вносили в количестве 5×104 на лунку в 96-луночную плоскодонную культуральную плату («Costar») в 100 мкл среды DMEM/F12 с 10% фетальной сыворотки. Плату инкубировали 24 часа в инкубаторе при 37°С в атмосфере 5% CO2 в условиях абсолютной влажности. За время инкубации клетки в плате образовывали плотный монослой. Далее к клеткам добавляли исследуемые препараты флагеллина в различных концентрациях в объеме 100 мкл в культуральной среде (не менее 3 параллельных лунок для каждой концентрации). Затем плату инкубировали еще 24 часа в СО2-инкубаторе и собирали супернатанты, в которых определяли концентрацию ИЛ-8 с помощью коммерческого набора на основе твердофазного иммуноферментного анализа (ООО «Цитокин»).
Результаты двух экспериментов по определению биологической активности рекомбинантного флагеллина представлены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1 | |
Определение активности рекомбинантного флагеллина в эксперименте 1 | |
Концентрация рекомбинантного флагеллина, нг/мл | Концентрация ИЛ-8 в супернатантах, пг/мл (среднее ± станд. отклонение) |
100 | 3799±590 |
20 | 5368±715 |
4 | 5119±370 |
0,8 | 1567±266 |
0,16 | 442±115 |
0,032 | 161±69 |
0,0064 | 77±2 |
Контроль | 98±31 |
Таблица 2 | |
Определение активности рекомбинантного флагеллина в эксперименте 2 | |
Концентрация рекомбинантного флагеллина, нг/мл | Концентрация ИЛ-8 в супернатантах, пг/мл (среднее ± станд. отклонение) |
10 | 5658±957 |
2 | 4470±950 |
0,4 | 795±34 |
0,08 | 202±30 |
0,016 | 114±19 |
0,0032 | 74±38 |
0,00064 | 94±7 |
Контроль | 104±13 |
Из таблиц 1 и 2 следует, что рекомбинантный флагеллин, продуцируемый клетками штамма E.coli ВКПМ № В-11369, обладает биологической активностью и дозозависимо усиливает продукцию ИЛ-8 клетками А549, 50% эффективная доза для рекомбинантного флагеллина составляет примерно 10 нг/мл.
Преимуществом штамма E.coli ВКПМ № В-11369 является высокая биологическая активность в качестве адъюванта.
Claims (1)
- Штамм бактерий Escherichia coli BL21[DE3]pET151FliC - продуцент биологически активного рекомбинантного флагеллина, полученный трансформацией культуры клеток E. coli BL21[DE3] рекомбинантной плазмидной ДНК рЕТ151FliC, полученной на основе вектора рЕТ151FliC, в который был встроен ген fliC, кодирующий биологически активный флагеллин, имеющий нуклеотидную последовательность, представленную в Seq ID No 3, депонированный во Всероссийскую коллекцию промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика под № В-11369.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012148482/10A RU2524133C2 (ru) | 2012-11-15 | 2012-11-15 | ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЛАГЕЛЛИНА |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012148482/10A RU2524133C2 (ru) | 2012-11-15 | 2012-11-15 | ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЛАГЕЛЛИНА |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2012148482A RU2012148482A (ru) | 2014-05-27 |
RU2524133C2 true RU2524133C2 (ru) | 2014-07-27 |
Family
ID=50774934
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012148482/10A RU2524133C2 (ru) | 2012-11-15 | 2012-11-15 | ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЛАГЕЛЛИНА |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2524133C2 (ru) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2615440C2 (ru) * | 2015-05-25 | 2017-04-04 | Илья Владимирович Духовлинов | Гибридный белок, ДНК, генетическая конструкция, рекомбинантная клетка, вакцина на основе гибридного белка для профилактики и лечения туберкулеза (варианты) |
RU2647831C1 (ru) * | 2017-03-15 | 2018-03-19 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства | Вакцина против туберкулеза |
EA031495B1 (ru) * | 2015-03-19 | 2019-01-31 | Общество с ограниченной ответственностью "Эксифарм" (ООО "Эксифарм") | ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНАЯ ВАКЦИНА НА ОСНОВЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ Ag85B, TB10.4, FliC |
EA035920B1 (ru) * | 2017-10-30 | 2020-08-31 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Активные Биосистемы" (Ооо "Абс") | Технология выделения и очистки рекомбинантного флагеллина |
RU2793753C1 (ru) * | 2022-09-07 | 2023-04-05 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" (ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова) | Рекомбинантная плазмидная ДНК pPA-FlicC, кодирующая синтез рекомбинантного флагеллина-С Pseudomonas aeruginosa, штамм Escherichia coli PA-FlicC - продуцент гибридного рекомбинантного белка и способ получения указанного белка |
-
2012
- 2012-11-15 RU RU2012148482/10A patent/RU2524133C2/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
МАТЮНИНА Е.А., АЛЬ-ШЕХАДАТ Р.И., ДУХОВЛИНОВ И.В., Получение рекомбинантного белка FliC в клетках E. сoli, 04.02.10, найдена в Internet 16.10.13, . SMITH N.H., SELANDER R.K., Sequence invariance of the antigen-coding central region of the phase 1 flagellar filament gene (fliC) among strains of Salmonella typhimurium, J. Bacteriol., Feb 1990, Vol. 2, No. 172, p. 603-609 (abstract) * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA031495B1 (ru) * | 2015-03-19 | 2019-01-31 | Общество с ограниченной ответственностью "Эксифарм" (ООО "Эксифарм") | ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНАЯ ВАКЦИНА НА ОСНОВЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ Ag85B, TB10.4, FliC |
RU2615440C2 (ru) * | 2015-05-25 | 2017-04-04 | Илья Владимирович Духовлинов | Гибридный белок, ДНК, генетическая конструкция, рекомбинантная клетка, вакцина на основе гибридного белка для профилактики и лечения туберкулеза (варианты) |
EA037849B1 (ru) * | 2015-05-25 | 2021-05-27 | Илья Владимирович ДУХОВЛИНОВ | Гибридный белок, днк, генетическая конструкция, продуцент, вакцина на основе гибридного белка для профилактики и лечения туберкулеза (варианты) |
RU2647831C1 (ru) * | 2017-03-15 | 2018-03-19 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства | Вакцина против туберкулеза |
EA035920B1 (ru) * | 2017-10-30 | 2020-08-31 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Активные Биосистемы" (Ооо "Абс") | Технология выделения и очистки рекомбинантного флагеллина |
RU2793753C1 (ru) * | 2022-09-07 | 2023-04-05 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" (ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова) | Рекомбинантная плазмидная ДНК pPA-FlicC, кодирующая синтез рекомбинантного флагеллина-С Pseudomonas aeruginosa, штамм Escherichia coli PA-FlicC - продуцент гибридного рекомбинантного белка и способ получения указанного белка |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2012148482A (ru) | 2014-05-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7329513B2 (en) | High level constitutive production of anthrax protective antigen | |
RU2524133C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЛАГЕЛЛИНА | |
CN102276730B (zh) | 金黄色葡萄球菌IsdBid-TRAP融合蛋白制备方法及其应用 | |
CN111925452B (zh) | 猪肺炎支原体基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用 | |
KR101650869B1 (ko) | 엔지니어링 박테리아 재조합 단백질의 고효율 발현방법 및 응용 | |
US20220267716A1 (en) | Methods and compositions for culturing hemoglobin-dependent bacteria | |
CN107828714A (zh) | 一株异源表达L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶的大肠杆菌重组菌 | |
CN103193887B (zh) | 一种重组猪白细胞介素2-Fc融合蛋白及其编码基因和表达方法 | |
CN108948163B (zh) | 澳洲坚果植物防御素及其应用 | |
CN103012578B (zh) | 一种重组猪白细胞介素2及其编码基因和表达方法 | |
Hasan et al. | Production of antibacterial compounds by free and immobilized Bacillus pumilus SAF1 | |
CN104418945A (zh) | 一种肽的制备方法及其在制备药物和饲料添加剂中的应用 | |
CN100453637C (zh) | 盘基网柄菌的半合成培养基及其制备方法 | |
CN1100881C (zh) | 人、猪共患囊虫病核酸疫苗 | |
TWI541350B (zh) | A Method for Highly Efficient Expression of Recombinant Protein from Engineering Bacteria and Its Application | |
RU2564120C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ БЕЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКА 70 И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА БЕЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКА ЧЕЛОВЕКА | |
CN106244611B (zh) | 一种细胞免疫佐剂tsa-41的制备方法及应用 | |
RU2582569C2 (ru) | Днк, кодирующая полноразмерный антагонист рецептора интерлейкина-36 человека, днк, кодирующая полноразмерный антагонист рецептора интерлейкина-36 человека с с-концевым полигистидиновым тагом, плазмидный экспрессионный вектор (варианты), штамм бактерий escherichia coli bl21 star[de3] (рет-il36raf), - продуцент полноразмерного рецепторного антагониста интерлейкина-36 и штамм бактерий escherichia coli bl21 star[de3] (pet-il36raf-his), - продуцент полноразмерного рецепторного антагониста интерлейкина-36 с с-концевым полигистидиновым тагом | |
CN110331121B (zh) | 一种高产脂肽的重组菌及其应用 | |
CN111944838B (zh) | 革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用、腐败梭菌α毒素的制备方法和疫苗 | |
CN110787291A (zh) | 一种加强型佐剂 | |
CN116640743B (zh) | 一种核酸内切酶及其应用 | |
CN111607548B (zh) | 一种产甘露聚糖的重组大肠杆菌及其应用 | |
RU2689903C1 (ru) | Свежевыделенный штамм бактерий Bordetella pertussis - продуцент комплекса протективных антигенов для производства бесклеточной коклюшной вакцины | |
KR101677947B1 (ko) | 스쿠티카충 예방용 어류 백신 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE Effective date: 20161103 |
|
QC41 | Official registration of the termination of the licence agreement or other agreements on the disposal of an exclusive right |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20161103 Effective date: 20190819 |