RU2455015C1 - Способ получения сыворотки крови плодов коров для культивирования клеток животных и человека - Google Patents
Способ получения сыворотки крови плодов коров для культивирования клеток животных и человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2455015C1 RU2455015C1 RU2011126222/15A RU2011126222A RU2455015C1 RU 2455015 C1 RU2455015 C1 RU 2455015C1 RU 2011126222/15 A RU2011126222/15 A RU 2011126222/15A RU 2011126222 A RU2011126222 A RU 2011126222A RU 2455015 C1 RU2455015 C1 RU 2455015C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- serum
- blood
- fruits
- animal
- cow
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, вирусологии и иммунологии и может быть использовано при культивировании линии клеток животных и человека. Способ включает взятие крови, отделение сыворотки, ее 2-кратную стерилизующую фильтрацию. Кровь у плодов берут унифицированной стерильной системой в стеклянные флаконы емкостью 250 мл с гипертоническим раствором NaCl. Флаконы заполняют на 80-100%. Взятие крови осуществляют через углубление у краниальной части грудной кости. Сыворотку отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 30-40 минут. После сбора сыворотку замораживают при -15…-20°С не менее 7 суток. После разморозки при +4…+20°С сыворотку собирают и удаляют сильно гемолизированные слои. После чего полученную сыворотку предварительно фильтруют через глубинные фильтры EKS, а затем через стерилизующие мембранные фильтры при +2…+6°С. Способ позволяет увеличить выход целевого продукта и улучшить его качество. 7 табл., 7 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии при культивировании клеток животных и человека. Фетальная сыворотка обеспечивает рост крайне прихотливых культур клеток, но она дефицитна и дорогостоящая по причине, прежде всего, ограниченного количества доноров, а также несовершенства существующих технологий ее получения.
Известен ряд способов получения сыворотки плодов коров, которые взяты нами в качестве аналогов предлагаемого изобретения (Романюк Е.Н. и др. Опыт получения препарата сыворотки крови эмбрионов коров // Цитология // 1983. - Т.25. - №9. - С.1093; Каулен Д.Р. и др. А.с. 1015894, МКИ3 А61К 31/00 (СССР), 1983. Способ получения эмбриональной сыворотки крови; Хазипов Н.З. и др. Методические рекомендации по ускоренному получению сыворотки крови животных для культивирования клеток и вирусологических исследований методом центрифугирования. М., 1985, с.2-5; Хаертынов К.С. и др. Фетальная сыворотка крови крупного рогатого скота // Ветеринария. - 1990. - №3. - С.62-63; Franz H. et al. Patent 223921, MKI3 А61К 35/16. (DDR), 1985. Verfahren zur Gewinung von fetalen Kälberserum und fetaler substanzen; W. Wittmann et al. Patent 223922, MKI3 А61К 35/16 (DDR), 1985. Verfahren zur Gewinung von fetalem und neonatalem Kälberserum). Близких аналогов данного способа за последние годы в доступной литературе и в интернете нами не обнаружено.
Общими для этих способов получения фетальной сыворотки плодов коров являются следующие недостатки:
1. Взятие крови проводится у 5-9-месячных плодов коров без учета эффективности их обескровливания. Поэтому при совершенствовании технологии получения данной сыворотки первостепенное внимание было уделено оптимизации взятия крови, что отражено в авторском свидетельстве СССР №1544965 «Способ взятия крови из сердца эмбрионов коров» от 3 января 1991 года (Гурьянов Н.И. и др.), которое взято нами в качестве близкого аналога по данному звену технологической цепи получения фетальной сыворотки.
2. Выход сыворотки к объему взятой крови мал и составляет 50%.
3. Данные технологии не имеет профилактических мер и методов удаления факторов, ингибирующих рост клеток (остаточный гемоглобин, общие липиды и др.). Для улучшения качественных параметров фетальной сыворотки в качестве аналога нами взят способ, описанный в патенте РФ №1813783 «Способ получения сыворотки крови животных для культивирования клеток животных тканей» от 5 марта 1994 года (Гурьянов Н.И. и др.)
Другим аналогом, но только по качественным характеристикам, является фетальная сыворотка крови плодов коров, которая до сих пор считается самой лучшей биологической добавкой в питательные среды при выращивании культур клеток животных и человека (ТУ ФС 42-7ВС-85), утвержденной Минздравом СССР 4 апреля 1985 года. В табл.1 приведены качественные показатели, которым должна соответствовать сыворотка крови плодов коров.
| Таблица 1 | |
| Показатели качества сыворотки крови плодов коров по ТУ ФС 42-7ВС-85 | |
| Показатели | Сыворотка крови плодов коров по ТУ ФС 42-7 ВС-85 |
| Прозрачность (535 нм) | Не более 0,300 ед. оптической плотности |
| рН | 7,6±0,2 |
| Свободный гемоглобин | Не более 50 мг/дл |
| Общие липиды | 30-50 мг/дл |
| Холестерин | 10-20 мг/дл |
| Общий белок, в том числе: | 4,5±2,5 г/дл |
| альбумины | 55±5% |
| α-глобулины | 35±5% |
| β-глобулины | 10±5% |
| γ-глобулины | Ниже 1% |
| Ростстимулирующая активность на перевиваемых линиях клеток по | |
| индексу их пролиферации | Не менее 6,0-7,0 |
Наиболее близким по техническому решению является способ получения сыворотки крови плодов коров, описанный Хазиповым Н.З. и др. в 1985 году, который взят нами в качестве прототипа предлагаемого изобретения, но при апробации получения сыворотки по данной технологии обнаружен ряд существенных недостатков, имеющих место при взятии крови, отделении из нее сыворотки и ее стерилизации.
Недостатки при взятии крови сводятся к следующему:
1. Экспериментально установлено, что объем взятой крови, выраженный в процентах от массы тела, мал и составляет: у плодов - 1-5 кг - 3,07±0,23; 5-10 кг - 2,87±0,16; свыше 10 кг - 2,33±0,26.
2. Место прокола иглой довольно неопределенно (между 3 и 4 ребрами с левой стороны плода), поэтому левосторонняя кардиопункция часто бывает неудачной.
3. Объем крови, извлекаемый ординарными системами у плодов массой 1-4 кг, незначителен. Их использование в данном случае практически невозможно. Это большой недостаток, если учесть, что плоды массой 1-4 кг составляют иногда 40-50% от общего их количества. Данный недостаток существует и в экономических патентах ГДР.
4. Иглы типа «Рекорд» имеют малый диаметр (1-1,5 мм), что не дает возможности для быстрого обескровливания, а иглы диаметром 5-7 мм сильно травмируют (особенно при повторном проколе) сердце плода и кровь в значительной степени изливается в грудную полость.
5. Система типа «елочка» неудобна в эксплуатации, так как громоздка и при неудачной кардиопункции в дальнейшем не может быть использована.
6. Флаконы заполняют кровью лишь на 50-60% их объема, что нерационально и требует большего их количества.
Недостатком отделения сыворотки плодов коров по прототипу является то, что полузаполненные кровью флаконы, выдержанные 4-5 часов при температур +6…+10°С, центрифугируют лишь при скорости 700-800 об/мин не менее 40-50 минут. Сбор сыворотки проводят под разрежением у пламени горелки из открытых флаконов, расположенных под углом 45°,с помощью толстой стеклянной трубки, что приводит к попаданию в собранную сыворотку большого количества форменных элементов крови и в каждом флаконе остается по 20-25 мл сыворотки.
Недостатком стерилизации ее является то, что фильтрацию проводят в день сбора сыворотки через набор миллипоровых фильтров при положительном давлении 0,5-0,7 атм, причем в подогретом виде до +30…+37°С. Каждодневная фильтрация сыворотки создает дополнительные трудности, большой расход фильтров и ведет к значительной ее потере. Профильтрованную сыворотку через 7-14 дней подвергают повторной стерилизации, так как на дно флаконов выпадает осадок.
Цель предлагаемого изобретения - повышение эффективности способа на всех этапах технологической цепи получения сыворотки крови плодов коров, включая улучшение ее биологических свойств.
Поставленная цель решается за счет существенных изменений в способах взятия крови, отделения и стерилизации сыворотки крови плодов коров.
Способ получения сыворотки крови плодов коров для культивирования клеток животных и человека, включающий взятие крови, отделение сыворотки, 2-кратную стерилизующую ее фильтрацию, отличающийся тем, что кровь у плодов берут унифицированной стерильной системой в стеклянные флаконы емкостью 250 мл с гипертоническим раствором NaCl, заполняя их на 80-100%, кардиопункцию проводят через углубление у краниальной части грудной кости, отделение сыворотки центрифугированием при 2000 об/мин в течение 30-40 минут, после сбора сыворотки ее замораживают при -15…-20°С не менее 7 дней, после разморозки при +4…+20°С сыворотку собирают, удаляя сильно гемолизированные слои, предварительно фильтруют через глубинные фильтры EKS, а затем через стерилизующие мембранные фильтры при +2…+6°С.
Отличительные признаки и полезная эффективность предлагаемого способа взятия крови из сердца плодов коров сводятся к следующему:
1. Кардиопункция через углубление у краниальной части грудной кости более проста, надежна в исполнении;
2. Взятие крови проводят асептически унифицированной системой, включающей в себя иглу с внутренним диаметром 3 мм и силиконовую трубку во флаконы емкостью 250 мл.
3. Для смачивания внутренних поверхностей флаконов и для лучшей ретракции сгустка крови во флаконы наливают 5% раствор натрия хлористого из расчета 2 мл на 100 мл крови.
4. Взятие крови проводят в 2 этапа: первый - кардиопункция и свободное стекание крови (до прекращения) из плодов, подвешенных за задние конечности в вертикальном положении, второй - принудительное удаление крови, заключающееся в массаже тела, поднятии головы и шеи выше уровня проекции сердца, с одновременным наружным его массажем.
5. Флаконы заполняют кровью до 80-100% их объема, помещают в вертикальном положении в холодную воду со льдом (температура +6…+8°С), где их выдерживают до центрифугирования 3-4 часа.
6. Преимущества предлагаемого способа взятия крови у плодов коров дают возможность для увеличения объема забираемой крови в сравнении с прототипом в 2-3 раза, что ведет к снижению себестоимости конечной продукции.
Отделение и сбор сыворотки также имеют отличительные признаки. По усовершенствованной нами методике флаконы, заполненные кровью, центрифугируют 30-40 минут при скорости 1800-2000 об/мин, а сбор отделившейся сыворотки проводят под разрежением специальной системой во флаконы емкостью 500 мл до отметки 400 мл и замораживают при температуре -15…-20°С не менее 7 суток. После первого осторожного сбора светлой сыворотки из флаконов проводят повторный сбор ее со взвесью форменных элементов во флаконы емкостью 250 мл, которые подвергают центрифугированию при 1000 об/мин в течение 10-15 минут, что позволяет дополнительно извлекать в расчете на каждый флакон с кровью плодов коров 10-15 мл светлой сыворотки. Выход сыворотки по сравнению с прототипом велик и варьирует от 60 до 75% от объема крови.
Отличительные признаки стерилизации сыворотки по предлагаемой технологии сводятся к следующему. После оттаивания при температуре +4…+20°С из сыворотки выпадают нестойкие белки в осадок, которые отфильтровывают через плотную ткань, после чего сыворотку крови предварительно фильтруют при +2…+6°С через глубинные фильтры EKS, а затем через стерилизующие мембранные фильтры любой надежной фирмы, например «Millipore Intertec» США, ее филиала в Ирландии, или «Владисарт» Россия.
Существенным отличием способа получения сыворотки крови плодов коров является то, что мы используем унифицированную нами технологию ее получения, что иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Взятие крови у плодов коров по предлагаемому способу в сравнительном аспекте с прототипом
Исследования по взятию крови проведены на достаточно большом количестве плодов коров и результаты отражены в табл.2.
| Таблица 2 | ||
| Результаты взятия крови у плодов коров по известному прототипу и предлагаемому способам | ||
| Группы плодов коров с массой тела, кг | Способ взятия крови | |
| известный М±m | предлагаемый М±m | |
| До 5 кг | ||
| Количество плодов | 12 | 10 |
| Взято крови к живой массе, % | 3,07±0,23 | 5,35±0,23 |
| 5-10 кг | ||
| Количество плодов | 10 | 9 |
| Взято крови к живой массе, % | 2,87±0,16 | 5,20±0,18 |
| Больше 10 кг | ||
| Количество плодов | 6 | 12 |
| Взято крови к живой массе, % | 2,33±0,26 | 5,00±0,13 |
Как следует из табл.2, преимущества предлагаемого способа взятия крови у плодов коров по сравнению с прототипом очевидны.
Пример 2. Влияние концентрации раствора натрия хлористого на выход сыворотки крови плодов коров и содержание в ней общего белка и остаточного гемоглобина
Для изучения влияния концентрации натрия хлористого на выход сыворотки и содержание в ней общего белка и остаточного гемоглобина кровь брали у 13 плодов коров массой тела 13,5-30,6 кг. С возрастанием концентрации раствора натрия хлористого достоверно увеличивался выход сыворотки крови и снижалось содержание в ней остаточного гемоглобина. Изменение уровня белка в сыворотке крови статистически недостоверно, но масса общего белка в объеме сыворотки, отделившейся из 1 л крови, увеличилась с повышением концентрации солевого раствора и составляла при 1%-ной его концентрации 19,1±0,4 г, 5%-ной - 20,7±0,4 г и 10%-ной - 22,5±0,4 г. Результаты проведенных исследований отражены в табл.3.
| Таблица 3 | ||||
| Влияние концентрации раствора натрия хлористого на выход сыворотки крови плодов коров и содержание в ней общего белка и остаточного гемоглобина | ||||
| Концентрация раствора NaCl, % | Выход сыворотки | Концентрация общего белка в сыворотке крови, г/л | Концентрация гемоглобина в сыворотке крови, мл/100 мл | |
| мл | % к объему крови | |||
| 1(контроль) | 130,0±2,4 | 52,0±1,0 | 36,8±0,7 | 28,2±1,3 |
| 5 | 144,8±1,8 | 57,8±0,7 | 35,8±0,7 | 23,7±1,1 |
| Р<0,001 | Р>0,05 | Р<0,01 | ||
| 10 | 160,4±1,7 | 64,2±0,7 | 35,1±0,7 | 23,1±1,0 |
| Р<0,001 | Р>0,05 | Р<0,01 | ||
Использование гипертонического раствора натрия хлористого не только способствует увеличению выхода сыворотки, но также улучшает ее ростстимулирующую активность на культурах клеток.
Пример 3. Влияние объема 10%-ного раствора натрия хлористого на выход сыворотки крови плодов коров и содержание в ней общего белка и остаточного гемоглобина. Результаты исследований приведены в табл.4.
| Таблица 4 | ||||
| Влияние объема 10%-ного раствора натрия хлористого на выход сыворотки крови плодов коров и содержание в ней общего белка и остаточного гемоглобина | ||||
| Объем раствора NaCl на100 мл крови, мл | Выход сыворотки | Концентрация общего белка в сыворотке крови, г/л | Концентрация гемоглобина в сыворотке крови, мл/100 мл | |
| мл | % к объему крови | |||
| 1 (контроль) | 137,1±2,0 | 54,9±0,8 | 39,8±1,6 | 23,5±2,1 |
| 2 | 154,3±1,8 | 61,7±0,7 | 38,3±1,7 | 22,3±1,3 |
| Р<0,001 | Р>0,05 | Р>0,05 | ||
| 3 | 154,3±1,8 | 61,7±0,7 | 36,8±1,6 | 22,7±1,6 |
| Р<0,001 | Р>0,05 | Р>0,05 | ||
| 4 | 154,3±1,8 | 61,7±0,7 | 35,6±1,7 | 23,3±1,7 |
| Р<0,001 | Р>0,05 | Р>0,05 | ||
Объем солевого раствора до определенного предела оказывал существенное влияние на выход сыворотки. Максимальный ее выход наблюдали при добавлении раствора натрия хлористого во флаконы из расчета 2 мл на 100 мл крови. Снижение концентрации общего белка и остаточного гемоглобина при увеличении объема солевого раствора статистически недостоверно.
Пример 4. Влияние очередности заполнения флаконов кровью плодов коров на выход сыворотки и содержание в ней общего белка и остаточного гемоглобина.
Опытным путем установлено достоверное снижение выхода сыворотки из крови плодов коров от первых флаконов к последним. Данный показатель от 1 до 6 флаконов уменьшался на 14,5%. Снижение концентрации общего белка в сыворотке крови недостоверно. Содержание остаточного гемоглобина в 6 флаконах по сравнению с 1 возрастал более чем в 2 раза. Кровь взята у 8 плодов, а результаты данного опыта приведены в табл.5.
| Таблица 5 | ||||
| Влияние очередности заполнения флаконов кровью плодов коров на выход сыворотки и содержание в ней общего белка и остаточного гемоглобина | ||||
| Номер флакона | Выход сыворотки крови | Концентрация общего белка в сыворотке крови, г/л | Концентрация остаточного гемоглобина в сыворотке крови, мг/100 мл | |
| мл | к объему крови, % | |||
| 1(контроль) | 160,0±2,5 | 64,0±1,0 | 38,3±0,7 | 21,5±1,1 |
| 2 | 158,3±1,8 | 63,3±0,7 | 37,6±0,8 | 24,7±0,9 |
| Р>0,05 | Р>0,05 | Р<0,01 | ||
| 3 | 148,9±1,9 | 59,6±0,8 | 37,1±0,9 | 29,0±1,1 |
| Р<0,01 | Р>0,05 | Р<0,001 | ||
| 4 | 148,3±1,8 | 59,3±0,7 | 36,4±0,9 | 33,5±1,4 |
| Р<0,01 | Р>0,05 | Р<0,001 | ||
| 5 | 141,1±1,9 | 56,4±0,8 | 35,8±1,0 | 40,1±1,7 |
| Р<0,001 | Р>0,05 | Р<0,001 | ||
| 6 | 135,0±2,5 | 54,0±1,0 | 35,5±1,7 | 44,9±3,2 |
| Р<0,001 | Р>0,05 | Р<0,001 | ||
Пример 5. Влияние времени взятия крови у плодов коров на содержание в сыворотке общего белка и остаточного гемоглобина.
При определении влияния сроков взятия крови у плодов коров на содержание в их сыворотке общего белка и остаточного гемоглобина учитывали то обстоятельство, что во время движения животных на конвейере от момента обескровливания до их нутровки проходит 30 минут. Поэтому отсчет времени начинали с момента обескровливания стельных коров. В зависимости от времени взятия крови достоверно увеличивалась концентрация остаточного гемоглобина, снижение же общего белка по мере обескровливания плодов коров не достоверно, что отражено в табл.6.
| Таблица 6 | ||
| Влияние времени взятия крови у плодов коров на содержание в сыворотке общего белка и остаточного гемоглобина | ||
| Время взятия крови у плодов от момента обескровливания коров, мин | Концентрация общего белка в сыворотке крови, г/л | Концентрация остаточного гемоглобина в сыворотке крови, мг/100 мл |
| 30 (контроль) | 34,9±1,5 | 20,3±1,5 |
| 40 | 34,2±1,4 | 27,2±1,5 |
| Р>0,05 | Р<0,01 | |
| 50 | 33,5±1,5 | 36,2±1,8 |
| Р>0,05 | Р<0,001 | |
| 60 | 32,9±1,5 | 49,6±2,6 |
| Р>0,05 | Р<0,001 | |
| 70 | 32,2±1,5 | 69,1±4,9 |
| Р>0,05 | Р<0,001 | |
Сыворотка, полученная из крови плодов через 1 час после обескровливания коров, сильно гемолизирована и часто бывает непригодна для дальнейшей переработки. Если до нутровки животных долго держали на конвейере, то в 2-3 раза снижался и объем взятой крови у плодов.
Пример 6. Зависимость выхода сыворотки крови плодов коров от объема флаконов.
Для изучения влияния объема флаконов, заполняемых кровью, у 6 плодов коров массой тела 13,2-28,2 кг во флаконы емкостью 250 и 450 мл, которые предварительно заполняли 10%-ным раствором натрия хлористого из расчета 2 мл на 100 мл крови. Флаконы разного объема объединяли в общие системы. Выход сыворотки в процентах к объему крови составил во флаконах на 250 мл 65,0±1,2%, а на 450 мл - 60,1±0,7%. Следует отметить, что сыворотку, собранную из флаконов емкостью 450 мл, всегда дополнительно центрифугировали, так как она сильно опалесцировала. Меньший выход сыворотки, ее опалесценция во флаконах емкостью 450 мл, по-видимому, обусловлены их большим диаметром.
Пример 7. Изучение физико-биохимических показателей и биологической активности сыворотки крови плодов коров, получаемой по предлагаемой технологии.
Многократными опытами по получению фетальной сыворотки установлены определенные параметры ее качества, которые отражены в табл.7.
| Таблица 7 | ||
| Рекомендуемые параметры контроля качества жидкой сыворотки крови плодов коров для культивирования клеток | ||
| № п/п | Показатели | Параметры |
| 1 | Внешний вид | Прозрачная жидкость соломенно-желтого или красновато-желтого цвета |
| 2 | Прозрачность, ед. опт. плотности | 0,114±0,019 |
| 3 | рН | 7,26±0,13 |
| 4 | Остаточный гемоглобин, мг/100 мл | 30,0±5,2 |
| 5 | Общие липиды, мг/100 мл | 70,0±4,6 |
| 6 | Холестерин, мг/100 мл | 38,2±3,8 |
| 7 | Общий белок, г/100 мл | 3,16±0,20 |
| в том числе: | ||
| альбумины | 1,32±0,12 | |
| α-глобулины | 1,26±0,10 | |
| β-глобулины | 0,42±0,08 | |
| γ-глобулины | 0,17±0,02 | |
| 8 | Ростстимулирующая активность по индексу пролиферации перевиваемых | |
| клеток РК-15, Vero, NGUC-1, Hela и др. | 6,16-7,48 | |
| 9 | Возможные контаминанты: бактерии, | |
| грибы, микоплазмы, вирусы | отсутствуют | |
Необходимо отметить, что по предлагаемой методике получения фетальной сыворотки удаление ингибиторов роста клеток (остаточный гемоглобин, общие липиды, холестерин и др.) проводят после размораживания сыворотки крови плодов коров только из флаконов, в которых у их дна содержатся сильногемолизированные слои сыворотки.
Преимущества предлагаемых методов взятия крови и отделения сыворотки у плодов коров дают в совокупности возможность для увеличения объема производства конечного продукта в сравнении с существующими технологиями более чем в 3 раза. Технологический цикл по получению фетальной сыворотки несколько удлиняется, но это приводит к позитивным изменениям как биохимического состава, так и биологических ее свойств. Улучшение качественных показателей фетальной сыворотки за счет снижения концентрации общего белка, в том числе γ-глобулинов, остаточного гемоглобина, общих липидов, в том числе общего холестерина, достигается методом замораживания - оттаивания ее и сбора лишь верхних светлых слоев сыворотки до границы с гемолизированными слоями в случае, если сыворотка сильно гемолизирована. Ни одна из серий сыворотки, получаемой предлагаемым методом, не оказывала токсического действия на разнообразные перевиваемые культуры клеток. Кроме того, мы культивировали на среде с этой сывороткой перевиваемую линию клеток Hela, Vero, а также данная сыворотка успешно прошла испытания в г. Казани в городском диагностическом центре и центре гигиены и эпидемиологии на перевиваемых линиях клеток человека.
Claims (1)
- Способ получения сыворотки крови плодов коров для культивирования клеток животных и человека, включающий взятие крови, отделение сыворотки, 2-кратную стерилизующую ее фильтрацию, отличающийся тем, что кровь у плодов берут унифицированной стерильной системой в стеклянные флаконы емкостью 250 мл с гипертоническим раствором NaCl, заполняя их на 80-100%, кардиопункцию проводят через углубление у краниальной части грудной кости, отделение сыворотки - центрифугированием при 2000 об/мин в течение 30-40 мин, после сбора сыворотки ее замораживают при (-15)-(-20)°С не менее 7 суток, после разморозки при 4-20°С сыворотку собирают, удаляя сильно гемолизированные слои, предварительно фильтруют через глубинные фильтры EKS, а затем - через стерилизующие мембранные фильтры при 2-6°С.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011126222/15A RU2455015C1 (ru) | 2011-06-24 | 2011-06-24 | Способ получения сыворотки крови плодов коров для культивирования клеток животных и человека |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011126222/15A RU2455015C1 (ru) | 2011-06-24 | 2011-06-24 | Способ получения сыворотки крови плодов коров для культивирования клеток животных и человека |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2455015C1 true RU2455015C1 (ru) | 2012-07-10 |
Family
ID=46848415
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011126222/15A RU2455015C1 (ru) | 2011-06-24 | 2011-06-24 | Способ получения сыворотки крови плодов коров для культивирования клеток животных и человека |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2455015C1 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1563651A1 (ru) * | 1988-03-25 | 1990-05-15 | Среднеазиатский Филиал Всесоюзного Научно-Исследовательского Института | Способ получени сыворотки из крови плодов овец |
-
2011
- 2011-06-24 RU RU2011126222/15A patent/RU2455015C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1563651A1 (ru) * | 1988-03-25 | 1990-05-15 | Среднеазиатский Филиал Всесоюзного Научно-Исследовательского Института | Способ получени сыворотки из крови плодов овец |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ХАЗИПОВ Н.З. и др. Методические рекомендации по ускоренному получению сыворотки крови животных для культивирования клеток и вирусологических исследований методом центрифугирования. - М.: Колос, 1985, с.2-5. КОСТИНА Г.А. Исследование свойств различных видов сывороток и разработка технологии их получения для использования в культивировании культур клеток, автореф. диссерт. на соиск. уч. степ. канд. биол. наук, Новосибирск, 1990, 24 с. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20180015128A1 (en) | Amniotic Fluid-Derived Preparation with a Standardized Biologic Activity | |
| CN105543168B (zh) | 免疫细胞的储存及运输方法 | |
| US20210023144A1 (en) | Liquid amnion transplant product | |
| US20220395623A1 (en) | Methods for isolating umbilical cord blood plasma products, tissue and cellular exosomes, and compositions and methods of use thereof | |
| BRPI0917993B1 (pt) | composições de célula-tronco mesenquimal purificada | |
| CN102732482B (zh) | 骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法 | |
| SE528214C2 (sv) | Förfarande för framställning av blodplättslysat | |
| CN110072992A (zh) | 哺乳动物细胞冷冻保存液 | |
| CN104271735B (zh) | 含有海藻糖的用于预防肺栓塞形成的哺乳动物细胞悬浮液 | |
| CN108142412A (zh) | 一种免疫细胞冻存液及冻存方法 | |
| CN109097340B (zh) | 一种禽腺病毒、一种四联疫苗及其制备方法 | |
| US20230148586A1 (en) | Low-temperature storage of biological samples | |
| CN102688485A (zh) | 一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法 | |
| CN102015108B (zh) | 用以收集血液以生产干细胞的试剂盒 | |
| RU2455015C1 (ru) | Способ получения сыворотки крови плодов коров для культивирования клеток животных и человека | |
| CN107058225B (zh) | 一种复合诱导培养基以及采用该培养基诱导脐带间充质干细胞成神经元样细胞的方法 | |
| CN109792972B (zh) | 一种囊尾蚴体外培养方法 | |
| RU2414227C1 (ru) | Иммуномодулятор для выращивания бройлеров и способ его применения | |
| RU2460786C1 (ru) | Способ получения сыворотки крови взрослого крупного рогатого скота для культивирования клеток животных и человека | |
| US20180000869A1 (en) | Amniotic fluid-derived preparations | |
| Sterling | Preliminary attempts in larch embryo culture | |
| CN107982532B (zh) | 一种鸭甲肝病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法 | |
| CN105543162B (zh) | 一种鲫鱼脑组织细胞系及其应用 | |
| CN105505867B (zh) | 用于分离淋巴细胞的组合物及其分离液 | |
| CN103611156A (zh) | 一种禽用五联疫苗及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130625 |