RU2443776C1 - Микроорганизмы, микробные фосфатные удобрения и способы изготовления микробных фосфатных удобрений - Google Patents

Микроорганизмы, микробные фосфатные удобрения и способы изготовления микробных фосфатных удобрений Download PDF

Info

Publication number
RU2443776C1
RU2443776C1 RU2010126160/10A RU2010126160A RU2443776C1 RU 2443776 C1 RU2443776 C1 RU 2443776C1 RU 2010126160/10 A RU2010126160/10 A RU 2010126160/10A RU 2010126160 A RU2010126160 A RU 2010126160A RU 2443776 C1 RU2443776 C1 RU 2443776C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
microbial
cgmcc
strain
deposited
phosphate
Prior art date
Application number
RU2010126160/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2010126160A (ru
Inventor
Биу ХО (CN)
Биу ХО
Эн-хсиун ХУАН (CN)
Эн-хсиун ХУАН
Тин Квок ХО (CN)
Тин Квок ХО
Тин Вин ХО (CN)
Тин Вин ХО
Original Assignee
Фошан Дзинкуйзи Плант Ньютримент Ко., Лтд
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Фошан Дзинкуйзи Плант Ньютримент Ко., Лтд filed Critical Фошан Дзинкуйзи Плант Ньютримент Ко., Лтд
Publication of RU2010126160A publication Critical patent/RU2010126160A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2443776C1 publication Critical patent/RU2443776C1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05B—PHOSPHATIC FERTILISERS
    • C05B17/00—Other phosphatic fertilisers, e.g. soft rock phosphates, bone meal
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/10—Bacillus licheniformis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/66—Aspergillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Fertilizers (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Штамм Streptomyces cellulosae WH9 депонирован в CGMCC под номером NO.2167 и используют для получения микробного удобрения. Штамм Aspergillus versicolor WH13 депонирован в CGMCC под номером NO.2171 и используют для получения микробного удобрения. Микробное фосфатное удобрение содержит продукт ферментации микробной композиции, состоящей из следующих четырех микроорганизмов: штамма Bacillus subtilis WH2 (CGMCC NO.0395.2), штамма Bacillus licheniformis WH4 (CGMCC NO.0395.4), штамма Streptomyces cellulosae WH9 и штамма Aspergillus versicolor WH13. Также предоставлен способ изготовления указанного микробного фосфатного удобрения, где производство указанного микробного фосфатного удобрения может включать использование измельченной фосфатной породы, содержащей 8%-12% Р2О5. 4 н. и 4 з.п. ф-лы, 16 табл.

Description

Область техники
Настоящее изобретение относится к области микробных удобрений, в частности к новым микроорганизмам, микробным фосфатным удобрениям, полученным из продуктов ферментации микробной композиции, содержащей указанные микроорганизмы, и способу изготовления указанных микробных фосфатных удобрений.
Предпосылки изобретения
Традиционные фосфатные удобрения производят химическими способами, а именно путем разложения фосфатной породы с использованием концентрированной серной кислоты для изготовления фосфатных удобрений с высокой растворимостью. Сульфиды, такие как диоксид серы, образуемые в процессе изготовления фосфатных удобрений, выбрасываются в атмосферу и приводят к загрязнению воздуха, сульфаты, возникающие в результате применения фосфатных удобрений, вызывают закисление почвы, и 70% или более фосфат-ионов связывается в почве элементами наподобие алюминия, железа, кальция и магния, что приводит к засолонению почвы. Как правило, фактически менее чем 30% фосфора из почвы реально используется сельскохозяйственными культурами (растениями).
Категорию фосфатной породы классифицируют по содержанию в ней (по процентному содержанию) P2O5. Вообще говоря, фосфатную породу, содержащую более чем 28% P2O5, квалифицируют как породу от средней до высокой категории; фосфатную породу, содержащую от 8% до 28% P2O5, квалифицируют как породу от средней до низкой категории. В настоящее время фосфатную породу от средней до высокой категории используют в качестве исходного сырья для изготовления фосфатных удобрений химическим способом, несмотря на то, что затраты в процессе производства химических фосфатных удобрений с использованием фосфатной породы от средней до низкой категории являются слишком высокими и, таким образом, фосфатная порода от средней до низкой категории не подходит для такого производства. При использовании фосфатной породы, обладающей, например, 32% P2O5, содержание фосфора, заключающегося в химических фосфатных удобрениях, производимых путем разложения фосфатной породы с использованием концентрированной серной кислоты, составляет около 16%. При использовании фосфатной породы низкой категории стоимость сырьевых материалов, таких как фосфатная порода и концентрированная серная кислота, а также стоимость потребления электроэнергии при производстве фосфатных удобрений будет значительно возрастать.
Фосфатная порода от средней до низкой категории образует значительную долю ресурсов фосфатной породы. Для того, чтобы получить полную отдачу ресурсов фосфатной породы, снизить до минимума потери ресурсов и уменьшить несоответствие между запасом фосфатных удобрений и потребностью в них, важное значение имеет полная утилизация фосфатной породы от средней до низкой категории, которая не пригодна для изготовления фосфатных удобрений.
Существует много проблем с традиционным использованием фосфатной породы при производстве химических фосфатных удобрений, которые включают 1) жидкие отходы диоксида серы и сильных кислот, вызванные избыточным применением сильных кислот для разложения измельченной фосфатной породы при производстве фосфатных удобрений, приводят к загрязнению воздуха, почвы и водных ресурсов; 2) использование ресурсов фосфатной породы является относительно низким, и такая потеря ресурсов является особенно критической в условиях низкого в настоящее время выхода продукции фосфатной породы высокой категории; 3) применение традиционных фосфатных удобрений в значительной степени вызывает закисление почвы, что существенно сдерживает устойчивое развитие сельского хозяйства; 4) применение высококонцентрированных удобрений типа суперфосфата приводит к высокому содержанию нитратов в сельскохозяйственных культурах, из-за чего может страдать здоровье людей и их жизненная безопасность может оказаться ненадежной.
Вместе с развитием экономики и ростом уровня потребления требование к продуктам питания повсеместно перешло из количественной плоскости в плоскость безопасности и качества, и существует растущая потребность в качестве продуктов питания и вопросах их безопасности. Проблемы качества продуктов питания (особенно сельскохозяйственной продукции) вызывают широкое общественное беспокойство во всем мире. Для решения проблем качества продуктов питания необходимо рассмотреть основные причины. Поскольку большинство продуктов питания для потребления человеком происходит из сельскохозяйственной продукции, решение проблем загрязнения почвы, восстановление экологической среды почвы, исследование и разработка биологических фосфатных удобрений представляют собой важные меры с обещающей перспективой для обеспечения продовольственной безопасности.
Сущность изобретения
Задачей настоящего изобретения является предоставление микробного фосфатного удобрения и способа его изготовления, где группа WH-микроорганизмов, содержащихся в указанном микробном фосфатном удобрении, представляет собой группу преобразующих фосфор микроорганизмов, которые используют активный органический материал и измельченную фосфатную породу в качестве обеспечивающих жизнедеятельность. Указанное микробное фосфатное удобрение может препятствовать уплотнению почвы, облегчать образование кластерной структуры почвы, усиливать проницаемость почвы и ее способность накапливать влагу для обеспечения плодородия, способствовать самоподдержанию кислотно-щелочного баланса почвы, улучшать плодородие почвы самой по себе и эффективность ее подкормки, оказывать положительное воздействие при трансформации опустыненной земли и солонцевато-солончаковой почвы, предупреждать возникновение заболеваний, вызванных разнообразием почвенных грибков и бактерий, ослаблять длительный стресс сельскохозяйственных культур, улучшать устойчивость сельскохозяйственных культур к заболеваниям, облегчать деградацию остатков пестицидов в почве и улучшать качество сельскохозяйственных культур.
Другой задачей настоящего изобретения является превращение измельченной фосфатной породы от средней до низкой категории в активные высокоэффективные микробные фосфатные удобрения, по настоящему изобретению, при помощи микробной композиции по настоящему изобретению, полная утилизация минеральных ресурсов, облегчение несоответствия между потребностью в ресурсах фосфатной породы и их запасами, и в то же время в процессе производства активного микробного фосфатного удобрения по настоящему изобретению потребляется меньше электричества, что является энергосберегающим и безвредным для окружающей среды. Настоящее изобретение предоставляет два новых микроорганизма: Streptomyces cellulosae, названного WH9, и Aspergillus versicolor, названного WH13.
Микробное фосфатное удобрение по настоящему изобретению содержит продукт ферментации микробной композиции, состоящей из следующих четырех микроорганизмов: Bacillus subtilis, названного WH2; Bacillus licheniformis, названного WH4; Streptomyces cellulosae, названного WH9; Aspergillus versicolor, названного WH13. Депозитарная информация для WH2 и WH4 представляет собой следующее: Bacillus subtilis: депозитное учреждение: Китайский главный центр коллекций микробиологических культур Китайского административного комитета по коллекциям культур микроорганизмов (CGMCC), дата помещения в депозитарное хранилище: 23 апреля 1999 года, номер доступа: CGMCC NO.0395.2, назван как WH2; Bacillus licheniformis: депозитное учреждение: Китайский главный центр коллекций микробиологических культур Китайского административного комитета по коллекциям культур микроорганизмов (CGMCC), дата помещения в депозитарное хранилище: 23 апреля 1999 года, номер доступа: CGMCC NO.0395.4, назван как WH4; Streptomyces cellulosae: депозитное учреждение: Китайский главный центр коллекций микробиологических культур Китайского административного комитета по коллекциям культур микроорганизмов (CGMCC), дата помещения в депозитарное хранилище: 13 сентября 2007 года, номер доступа: CGMCC NO.2167, назван как WH9; Aspergillus versicolor: депозитное учреждение: Китайский главный центр коллекций микробиологических культур Китайского административного комитета по коллекциям культур микроорганизмов (CGMCC), дата помещения в депозитарное хранилище: 13 сентября 2007 года, номер доступа: CGMCC NO.2171, назван как WH13.
Микробное фосфатное удобрение по настоящему изобретению представляет собой продукт ферментации микроорганизмов (после 1-го культивирования вышеприведенной микробной композиции) с измельченной фосфатной породой и активного органического материала. Активный органический материал представляет собой одну или несколько разновидностей, выбранных из группы следующих: фильтрационная масса, получаемая в сахарной промышленности, куриный помет, свиной навоз, отруби земляного ореха, овсяная мука, остатки маниока и рапсовый жмых и т.д.
Количественное отношение отдельных микроорганизмов в микробной композиции, применяемой в микробных фосфатных удобрениях по настоящему изобретению, выражается в процентном содержании по массе (исходя из общей массы микробной композиции):
(1) WH2: 13-50%; (2) WH4: 10-45%;
(3) WH9: 8-40%; (4) WH13: 8-37%.
Настоящее изобретение также относится к способу изготовления вышеприведенных микробных фосфатных удобрений, включающему следующие стадии:
(1) смешивание WH2, WH4, WH9 и WH13 в соответствии с процентным содержанием по массе, как описано выше, для получения микробной композиции;
(2) изготовление микробной (после 1-го культивирования) культуральной среды указанной микробной композиции в соответствии с процентным содержанием по массе:
активный органический материал: 35-45%; рисовые отруби: 35-45%; порошок соевых бобов: 15-17%; молочный порошок: 1,5-2,5%; сахар: 0,5-1,5%; остальное вода;
(3) культивирование микробов (после 1-го культивирования) микроорганизмов: смешивание микробной (после 1-го культивирования) культуральной среды микробной композиции в соответствии с вышеприведенным составом с взбалтыванием, с последующим инокулированием микробной композицией при комнатной температуре, культивирование в микробной (после 1-го культивирования) культуральной среде при температуре в диапазоне от 30°C до 60°C, pH 6,5-7,5 в течение периода времени от 5 до 15 дней, затем получение микробов (после 1-го культивирования) микробной композиции;
(4) смешивание измельченной фосфатной породы, активного органического материала и микроорганизмов (после 1-го культивирования) микробной композиции в соответствии со следующим процентным содержанием по массе (исходя из суммарной массы трех компонентов, как описано выше), с последующей ферментацией при комнатной температуре в течение более чем 12 дней, которая в результате дает микробные фосфатные удобрения:
измельченная фосфатная порода 20-90%;
активный органический материал 5-40%;
микроорганизмы (после 1-го культивирования) микробной композиции 5-40%.
Как правило, число жизнеспособных микроорганизмов микробов (после 1-го культивирования) микробной композиции, культивированной в стадии (3), составляет от 500 млн/г до 3 млрд/г.
Измельченную фосфатную породу от средней до низкой категории, содержащую 8-28% P2O5, можно использовать в качестве вышеприведенной измельченной фосфатной породы, которую посредством биологической ферментация преобразуют в высокоэффективное активное микробное фосфатное удобрение, посредством чего можно полностью использовать минеральные ресурсы.
Настоящее изобретение отрабатывает получение биоактивного фосфатного удобрения при помощи биологической инженерии, при котором полностью используется высокая эффективность WH-микробной композиции поглощать фосфор. Микробные фосфатные удобрения по настоящему изобретению составляют и получают из чистого культивирования ряда полезных сельскохозяйственных микробов, подвергнутых процессу строгого отбора, так что преобразование фосфора можно достичь в результате применения в почве; почву можно предохранять от уплотнения; обеспечение почвенными питательными веществами можно значительно улучшить, растворение и высвобождение питательных веществ, которые с трудом растворяются в почве, можно, в первую очередь, стимулировать при помощи разнообразия микроорганизмов микробной композиции. Указанные WH-микроорганизмы высвобождают при метаболизме большое количество видов как неорганических, так и органических кислот, при помощи которых активируется высвобождение и хелатирование микроэлементов, таких как кремний, алюминий, железо, магний, молибден почвы, а также улучшается обеспечение почвы этими питательными веществами.
По сравнению с предшествующими технологиями настоящее изобретение обладает следующими существенными эффектами:
(1) активные микробные фосфатные удобрения по настоящему изобретению могут непосредственно поглощаться сельскохозяйственными культурами в почве под действием WH-микробной композиции, скорость использования фосфатных удобрений составляет вплоть до более чем 70%, однако количество их использования составляет менее чем половину от традиционных фосфатных удобрений, что необыкновенно увеличивает скорость утилизации ресурсов фосфатной породы и сберегает высокоценные, но невозобновляемые ресурсы;
(2) WH-микробная композиция может подвергать декомпозиции нерастворимые соли в почве, при помощи чего можно улучшить структуру почвы, решить проблему долговременной нехватки фосфора в почве и достичь значительного улучшения в предохранении почвы от уплотнения;
(3) в плане производства фосфатных удобрений значительно уменьшается стоимость производства, а эффективность производства необычайно возрастает за счет воздействия на измельченную фосфатную породу при помощи биологической ферментации. При производстве фосфатных удобрений традиционным химическим процессом с использованием концентрированной серной кислоты выделяется большое количество диоксида серы, приводящего к загрязнению воздуха, в то время как в процессе производства микробных фосфатных удобрений по настоящему изобретению диоксид серы не образуется, чем можно полностью решить проблему загрязнения воздуха при традиционном химическом процессе;
(4) применение микробных фосфатных удобрений по настоящему изобретению не приводит к закислению, засолонению почвы, а также можно значительно улучшить экологическую среду почвы и повысить содержание питательных веществ, содержащихся в почве, и можно значительно повысить качество и урожайность сельскохозяйственных культур, которые пригодны, в частности, для производства зеленых кормов, натуральных пищевых продуктов, с тем чтобы увеличить рыночную конкурентоспособность сельскохозяйственной продукции;
(5) применение активных микробных фосфатных удобрений по настоящему изобретению обнаруживает замечательный эффект уменьшения содержания нитритов в сельскохозяйственной продукции, даже ниже уровня, безопасного для здоровья человека, что является благоприятным для здоровья человека;
(6) активные микробные фосфатные удобрения по настоящему изобретению используют биологическую ферментацию при обработке измельченной фосфатной породы, за счет чего в процессе производства можно расходовать меньше электричества; потребляемая электроэнергия значительно уменьшается по сравнению с процессами с использованием традиционных химических фосфатных удобрений, за счет чего освобождаются источники энергии, что дает возможность достигать энергосбережения и обеспечивать защиту окружающей среды;
(7) под действием WH-микробной композиции производство биологических фосфатных удобрений, которые отличаются от традиционных химических фосфатных удобрений, в промышленности не ограничено производством с использованием фосфатной породы высокой категории (с более чем 28% P2O5). Возможно применение фосфатной породы от средней до низкой категории (с около 8%-28% P2O5), ресурсов фосфатной породы особо низкой категории, содержащей менее чем 26% P2O5 для производства настоящих биологических фосфатных удобрений, которые в существенной степени способствуют решению проблемы нехватки ресурсов фосфатной породы. Таким образом, массированное стимулирование применения активных микробных фосфатных удобрений по настоящему изобретению может значительно увеличить скорость использования ресурсов фосфатной породы, и эффект особенно заметен в случае, где уменьшаются возможности запасать фосфатную породу от средней до высокой категории;
(8) применение биологического способа по настоящему изобретению при производстве фосфатных удобрений делает возможным полное использование измельченной фосфатной породы от средней до низкой категории при ее преобразовании в высокоэффективные активные биологические фосфатные удобрения, при помощи чего можно обеспечить преобразование ресурсов и крупномасштабное автоматизированное производство, что может заметно снизить стоимость производства, повысить эффективность производства, способствовать эффективному циклу восполняемых ресурсов и промышленности и сельского хозяйства. После технической обработки биологического фосфора фосфор в фосфатной породе активируется, и применение удобрений по настоящему изобретению в почве может улучшить кислотность почвы, увеличить фосфор, улучшить эффективность удобрения, а также улучшить скорость использования ресурсов; активные фосфатные удобрения, полученные в соответствии с настоящим изобретением, могут необыкновенно повысить урожайность и качество сельскохозяйственных культур и вытеснить химический способ изготовления фосфатных удобрений;
(9) процесс получения активных микробных фосфатных удобрений по настоящему изобретению не требует сильных кислот, но предусматривает вместо этого биологическую ферментацию, при помощи которой можно предотвратить загрязнение; при изготовлении биологических фосфатных удобрений уменьшается использование и эксплуатация крупногабаритных механизмов и оборудования, что опосредованно уменьшает потребление энергии, обусловленное применением указанных механизмов и оборудования; производство биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению может решить проблему тепличного эффекта, вызванного выбросом большого количества вредных газов, что вызывает обеспокоенность международной общественности.
Депозитарное учреждение, адрес, дата поступления в депозитарное учреждение и номер доступа образца биологических материалов по настоящему изобретению, а также номенклатура по классификации указанных биологических материалов перечислены в следующей таблице.
Депозитное учреждение Адрес Дата поступления в депозитное учреждение Номер доступа Спецификация в соответствии с классификацией
Китайский главный центр коллекций микробиологических культур Китайского административного комитета по коллекциям культур микроорганизмов (CGMCC) Институт микробиологии, Китайская академия наук; шоссе Дайтун, район Чаоян, Пекин 23 апреля 1999 года CGMCC
№ 0395,2		 Bacillus subtilis
Китайский главный центр коллекций микробиологических культур Китайского административного комитета по коллекциям культур микроорганизмов (CGMCC) Институт микробиологии, Китайская академия наук; шоссе Дайтун, район Чаоян, Пекин 23 апреля 1999 года CGMCC
№ 0395,4		 Bacillus
licheniformis
Китайский главный центр коллекций микробиологических культур Китайского административного комитета по коллекциям культур микроорганизмов (CGMCC) Институт микробиологии, Китайская академия наук; шоссе Дайтун, район Чаоян, Пекин 13 сентября 2007 года CGMCC
№ 2167		 Streptomyces
cellulosae
Китайский главный центр коллекций микробиологических культур Китайского административного комитета по коллекциям культур микроорганизмов (CGMCC) Институт микробиологии, Китайская академия наук; шоссе Дайтун, район Чаоян, Пекин 13 сентября 2007 года CGMCC
№ 2171		 Aspergillus
versicolor
Предпочтительные варианты осуществления изобретения
Настоящее изобретение будет в дальнейшем описано со ссылкой на следующие примеры.
Пример 1
Количественное соотношение микробной композиции примера представляет собой следующее (процентное содержание по массе):
(1) Штамм WH2: 13%; (2) Штамм WH4: 10%;
(3) Штамм WH9: 40%; (4) Штамм WH13: 37%.
Микробные фосфатные удобрения по настоящему изобретению изготовляют в соответствии со следующими стадиями:
(1) смешивание до гомогенности штаммов WH2, WH4, WH9 и WH13 в соответствии с вышеприведенным соотношением (процентное содержание по массе) для получения WH-микробной композиции;
(2) изготовление культуральной среды для 1-го культивирования указанной микробной композиции в соответствии со следующим процентным содержанием по массе:
активный органический материал: 40% (отходы фильтрации: 20%, куриный помет: 20%), рисовые отруби: 40%, порошок соевых бобов: 16%, молочный порошок: 2%, сахар: 1%, остальное вода;
(3) культивирование микробов (после 1-го культивирования) микроорганизмов: смешивание культуральной среды (стадия 2) микробной композиции в соответствии с указанным составом с взбалтыванием с последующим инокулированием микробной композицией при комнатной температуре, культивирование в культуральной среде при температуре 60°C, pH 7,0 в течение 5 дней, затем получение микробов (после 1-го культивирования) микробной композиции (или названной как микробы в отрубях) после завершения культивирования; содержание активных микроорганизмов составляет до 3 млрд/г;
(4) смешивание измельченной фосфатной породы, активного органического материала и микроорганизмов (после 1-го культивирования) микробной композиции в соответствии со следующим составом, затем ферментация при комнатной температуре в течение 12 дней, дающая в результате микробные фосфатные удобрения, которые затем подвергали измельчению и расфасовыванию:
измельченная фосфатная порода 20%;
активный органический материал (отходы фильтрации: 20%, куриный помет: 20%) 40%;
микробы (после 1-го культивирования) 40%
Пример 2
Количественное соотношение и параметры различных компонентов в микробном фосфатном удобрении примера отличаются от таковых примера 1, как следует
1. Количественное соотношение (процентное содержание по массе) микроорганизмов, присутствующих в микробных фосфатных удобрениях по настоящему изобретению, составляет
(1) Штамм WH2: 50%; (2) Штамм WH4: 26%;
(3) Штамм WH9: 8%; (4) Штамм WH 13: 16%.
2. Количественное соотношение (процентное содержание по массе) культуральной среды для 1-го культивирования представляет собой следующее:
активный органический материал: 35% (отходы фильтрации: 20%, cassava residue: 15%), рисовые отруби: 45%, порошок соевых бобов: 15%, молочный порошок: 2,5%, сахар: 1,5%, остальное вода.
3. Температура культуральной среды: 45°C, pH: 6,5, время культивирования: 10 дней, содержание активных микроорганизмов: до 1,5 млрд/г.
4. Измельченная фосфатная порода от средней до низкой категории, активный органический материал и микробы (после 1-го культивирования) микроорганизмов смешивают в соответствии со следующим составом и подвергают ферментации при комнатной температуре в течение 13 дней, дающей в результате микробные фосфатные удобрения, которые затем подвергали измельчению и расфасовыванию:
измельченная фосфатная порода 55%;
активный органический материал (отруби земляного ореха: 10%, свиной навоз: 10%) 20%;
микробы (после 1-го культивирования) 25%.
Количественное соотношение и параметры других компонентов и стадия процесса являются теми же, что и в примере 1.
Пример 3
Количественное соотношение и параметры различных компонентов микробного фосфатного удобрения примера отличны от таковых в примере 1, как следует
1. Количественное соотношение (процентное содержание по массе) микроорганизмов, присутствующих в микробных фосфатных удобрениях по настоящему изобретению, составляет
(1) Штамм WH2: 30%; (2) Штамм WH4: 45%;
(3) Штамм WH9: 17% (4) Штамм WH13: 8%.
2. Количественное соотношение (процентное содержание по массе) культуральной среды для 1-го культивирования представляет собой следующее:
активный органический материал: 45% (отходы фильтрации: 30%, свиной навоз: 15%), рисовые отруби: 35%, порошок соевых бобов: 15%, молочный порошок: 1,5%, сахар: 1,5%, остальное вода.
3. Температура культуральной среды: 30°C, pH: 7,5, время культивирования: 15 дней, содержание активных микроорганизмов: до 500 млн/г.
4. Измельченная фосфатная порода от средней до низкой категории, активный органический материал и микробы (после 1-го культивирования) микроорганизмов смешивают в соответствии со следующим составом и подвергают ферментации при комнатной температуре в течение 14 дней, дающей в результате микробные фосфатные удобрения, которые затем подвергали измельчению и расфасовыванию
измельченная фосфатная порода 90%;
активный органический материал (рапсовый жмых: 5%) 5%;
микробы (после 1-го культивирования) 5%.
Количественное соотношение и параметры других компонентов и стадия процесса являются теми же, что и в примере 1.
Пример 4: Пример для сравнения 1
Расположение: Институт сельскохозяйственных наук, город Чиби, провинция Хубэй
Испытательный комплекс: Институт защиты растений и почвоведения, Академия сельского хозяйства и науки, провинция Хубэй
Сельскохозяйственная культура: рис-падди (среднесезонный рис)
Время проведения испытания: с 30 июня 2007 года по 27 октября 2007 года.
Таблица 1
Проверяемый способ обработки и подкормки биологическим фосфатным удобрением
Порядковый номер Обработка Азотное удобрение
(кг/му)		 Фосфатное удобрение
(кг/му)		 Калийное удобрение
(кг/му)		 Применяемый способ
1 СК: только азотное удобрение и калийное удобрение 15,3 0 11,6 Общее основное применение фосфатного удобрения и калийного удобрения, основное применение азотного удобрения: 60%, удобрение для посевного отделения: 20%, удобрение при колошении: 20%.
2 СК+ 40 кг/му биологического фосфатного удобрения 15,3 40 11,6
3 СК+ 20 кг/му биологического фосфатного удобрения 15,3 20 11,6
4 СК+ 40 кг/му суперфосфата кальция 15,3 40 11,6
5 СК+ 40 кг/му измельченной фосфатной породы 15,3 40 11,6
1 му = 0,0667 га
Таблица 2
Основная экономическая характеристика среднесезонного риса при использовании различных фосфатных удобрений
Обработка Высота растения (см) Число побегов (число/
растение)		 Длина метелки (см) Общее число зерен в метелке (метелок/
растение)		 Число выполненных зерен на метелку (зерна) Процент недоразвитых зерен (%) Масса 1000 зерен (г)
1 106,3 12,6 23,6 9,2 102,8 23,1 23,9
2 104,0 13,1 23,8 10,0 105,4 22,3 23,86
3 106,9 10,1 23,9 9,4 111,6 19,7 24,03
4 106,9 13,3 23,5 10,2 103,9 26,3 24,02
5 105,1 13,5 23,2 10,4 99,8 23,8 23,71
1 му = 0,0667 га
Таблица 3
Сравнение урожайности среднесезонного риса при применении различных фосфатных удобрений
Обработка Урожайность риса-падди (кг/100 м2) Увеличение продуктивности по сравнению с контролем (кг/100 м2) Увеличение производительности
(%)
1 7150,4 0  
2 7385,4 235,1 3,29
3 7675,4 525 7,34
4 7550,3 399,9 5,59
5 7145,3 -5,1 -0,07
Таблица 4
Эффект применения различных фосфатных удобрений на поглощение фосфора среднесезонным рисом
Обработка Содержание фосфора в стеблях (г/кг) Выход стеблей (кг/100 м2) Общее поглощение стеблями (кг) Содержание фосфора в зернах (г/кг) Выход семян (кг/100 м2) Общее поглощение зернами (кг) Общее поглощение фосфора (кг) Увеличение общего поглощения фосфора по сравнению с контролем (%)
1 0,649 15649,5 10,16 2 7150,4 14,30 24,46 -
2 0,823 15000,0 12,35 3,1 7385,4 22,89 35,24 44,09
3 0,736 14374,5 10,58 2,4 7675,4 18,42 29,00 18,58
4 0,813 17200,5 13,98 2,6 7550,3 19,63 33,61 37,44
5 0,751 18687,0 14,03 2,7 7145,3 19,29 33,33 36,26
Из результата анализа и изучения стеблей и зерен среднесезонного риса можно видеть, что применение биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению может улучшать общее поглощение фосфора стеблями и зернами риса-падди, и что увеличение общего поглощения фосфора стеблями и зернами риса-падди находится в диапазоне 18,58-44,09% по сравнению с контрольной группой обработки, где фосфатные удобрения не применяют, что свидетельствует о том, что биологические фосфатные удобрения по настоящему изобретению могут улучшать эффективность фосфора в почве и увеличивать поглощение фосфора сельскохозяйственными культурами. При этом применение 40 кг/му биологических фосфатных удобрений увеличивает общее поглощение фосфора на 4,85% по сравнению с группой с использованием суперфосфата кальция, показывая, что использование биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению в почве, в которой в течение длительного времени применяли химические фосфатные удобрения, может давать эффект увеличения урожайности. Применение биологических фосфатных удобрений обнаруживает значительный эффект на увеличение урожайности. В частности, применение 20 кг/му биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению увеличивает урожайность на 525 кг/гектар по сравнению с контрольной группой обработки без использования фосфатных удобрений, и увеличивает урожайность на 125,1 кг/100 м2 по сравнению с группой с использованием суперфосфата кальция. Независимо от того, рассматривается ли группа с 20 кг/му биологического фосфатного удобрения по настоящему изобретению или группа с 40 кг/му биологического фосфатного удобрения по настоящему изобретению, урожайность риса-падди в обеих группах является значительно более высокой, чем урожайность в группе с измельченной фосфатной породой, указывая, что применение биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению может высвобождать медленно высвобождаемый фосфор в почве и преобразовывать его в форму, легко усваиваемую сельскохозяйственными культурами, с тем, чтобы повысить урожайность сельскохозяйственной культуры.
Пример 5: Пример для сравнения 2
Расположение: Участок тестирования зерновых, Институт сельскохозяйственных культур Академии сельского хозяйства и науки, провинция Хубэй
Испытательный комплекс: Институт защиты растений и почвоведения, Академия сельского хозяйства и науки, провинция Хубэй
Сельскохозяйственная культура: кукуруза
Время проведения испытания: с 13 августа 2007 года по 5 ноября 2007 года
Таблица 1
Проверяемый способ обработки и подкормки биологическими фосфатными удобрениями
Порядковый номер Обработка Азотное удобрение
(кг/му)		 Фосфатное удобрение
(кг/му)		 Калийное удобрение
(кг/му)		 Применяемый способ
1 СК: только азотное удобрение и калийное удобрение 15 0 10 Общее основное применение фосфатно-калийных удобрений, основное применение
2 СК+ 40 кг/му биологического фосфатного удобрения 15 40 10
3 СК+ 20 кг/му биологического фосфатного удобрения 15 20 10 азотного удобрения: 60%, удобрение для семян
4 СК+ 40 кг/му суперфосфата кальция 15 40 10
5 СК+ 40 кг/му измельченной фосфатной породы 15 40 10
1 му = 0,0667 га
Таблица 2
Проверка урожайности сахарной кукурузы, подвергнутой обработке биологическим фосфатным удобрением
Обработка Свежий урожай кукурузы (кг/100 м2) Увеличение продукции по сравнению с контролем
(%)
1. СК: только азотное удобрение и калийное удобрение 6895,4  
2. СК+ 40 кг/му биологического фосфатного удобрения 7366,8 6,84
3. СК+ 20 кг/му биологического фосфатного удобрения 7378,8 7,01
4. СК+ 40 кг/му суперфосфата кальция 7169,4 3,98
5. СК+ 40 кг/му измельченной фосфатной породы 6808,9 -1,25
1 му = 0,0667 га
Таблица 3
Эффект применения различных фосфатных удобрений на поглощение фосфора кукурузой
Обработка Содержание фосфора в стеблях (%) Выход стеблей (кг/100 м2) Общее поглощение стеблями (кг) Содержание фосфора в зернах (%) Выход семян (кг/100 м2) Общее поглощение зернами (кг) Общее поглощение фосфора (кг) Увеличение общего поглощения фосфора по сравнению с контролем (%)
1 0,2 87984,2 149,57 0,12 6895,4 8,27 157,85 0
2 0,17 96339,4 192,68 0,13 7366,8 9,58 202,26 28,13
3 0,28 82240,4 230,27 0,10 7378,7 7,38 237,65 50,56
4 0,19 100091,4 190,17 0,12 7169,4 8,60 198,78 25,93
5 0,13 91299,7 118,69 0,11 6808,9 7,49 126,18 -20,06
Таблица 4
Сравнение урожайности кукурузы при использовании различных фосфатных удобрений
Обработка Содержание белка (%) Увеличение содержания белка по сравнению с контролем (%)
1. СК: только азотное удобрение и калийное удобрение 4,44 0
2. СК+ 40 кг/му биологического фосфатного удобрения; 4,75 6,98
3. СК+ 20 кг/му биологического фосфатного удобрения 4,56 2,70
4. СК+ 40 кг/му суперфосфата кальция 4,25 -4,28
5. СК+ 40 кг/му измельченной фосфатной породы 4,25 -4,28
1 му = 0,0667 га
Из вышеприведенной таблицы можно видеть, что применение биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению при выращивании сахарной кукурузы увеличивает урожайность на около 7% по сравнению с контрольным экспериментом, и показывает лучшие эффекты, чем при использовании суперфосфата кальция, и особенно в почве с постоянным применением химических фосфатных удобрений, применение биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению приводит к двойному полезному эффекту на сельскохозяйственные культуры и окружающую среду. Применение биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению увеличивает суммарное поглощение фосфора стеблями и зернами кукурузы на 28,13-50,56% по сравнению с контрольной обработкой, где фосфатные удобрения не используются, что показывает, что применение биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению может повышать эффективность фосфора в почве, увеличивать поглощение фосфора сельскохозяйственными культурами, и что применение биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению увеличивает суммарное поглощение фосфора на 2,2-24,63% по сравнению с группой с использованием суперфосфата кальция, что показывает, что применение биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению в почве, в которую в течение долгого времени вносили химические фосфатные удобрения, может приводить к эффекту увеличения урожайности. Применение биологических фосфатных удобрений по настоящему изобретению может приводить к увеличению общего содержания белка в сельскохозяйственных культурах на 2,70-6,98% по сравнению с контрольным экспериментом, что показывает, что биологические фосфатные удобрения могут не только улучшать снабжение почвы фосфором, но они также могут улучшать содержание питательных веществ в почве, а также качество сельскохозяйственных культур.
Пример 6: Пример для сравнения 3
Расположение: поселок Чонгбу, Сиан жен, район Жаоминг, город Фошан, провинция Гуандон
Хозяин: Чен Хаобин
Сельскохозяйственная культура: рис-падди
Figure 00000001
Таблица 2
Эксперимент для сравнения показателей
Тип удобрений Высота растения (см) Длина метелки (см) Эффективное число метелок (10 тысяч/му) Общее число зерен на метелку Число выполненных зерен на метелку Скорость образования семян (%) Масса 1000 зерен (г)
Микробные фосфатные удобрения по настоящему изобретению 91,5 22,8 22,6 150 124 82,7 16,0
Суперфосфат кальция 91,1 21,9 22,2 146 117 80,1 15,9
1 му = 0,0667 га
Применение микробных фосфатных удобрений по настоящему изобретению для риса-падди может значительно увеличивать число побегов, стимулировать рост корневой системы, улучшить различные экономические показатели, улучшить устойчивость к полеганию и уменьшить вред от заболевания ложных стеблей. Применение микробных фосфатных удобрений по настоящему изобретению для риса-падди в сравнении с группой с применением суперфосфата кальция приводит к увеличению среднего эффективного числа метелок на растение на 2%, увеличению длины метелки на 4%, увеличению скорости образования семян на 3,2%, увеличению урожайности на более чем 4% и уменьшению частоты возникновения заболевания ложных стеблей (уменьшению времен введения лекарственного препарата до по меньшей мере одного раза в квартал).
Пример 7: Для сравнения пример 4
Расположение: Дживей, селение Дайнан, район Жаоминг, город Фошан, провинция Гуандон
Хозяин: Жан лианхуа
Сельскохозяйственная культура: сладкая кукуруза AU.No.1
См. таблицу 1 для сравнения урожайности и см. таблицу 2 для основных экономических показателей, таких как диаметр стебля, высота растения
Figure 00000002
Таблица 2
Эксперимент для сравнения показателей (таких как диаметр стебля и высота растения)
Тип удобрений Диаметр стебля (см) Высота растения (см) Число листьев (число/
растение)		 Скорость образования полых стеблей (%) Скорость возникновения отсутствия семян (%) Оголенный початок (число/0,1 му)
Микробные фосфатные удобрения по настоящему изобретению 2,31 187 13 3,2 9,7 34,0
Суперфосфат кальция 2,10 185 12 3,8 11,64 38,5
1 му = 0,0667 га
Микробные фосфатные удобрения по настоящему изобретению могут эффективно стимулировать рост кукурузы, улучшать скорость прорастания семян и скорость подрастания проростков, предотвращать преждевременное старение, полые стебли, потерю зерен и полегание, увеличивать диаметр стеблей и число листьев, увеличивать массу одного початка и урожайность, уменьшать число оголенных початков и встречаемость заболевания растений и насекомых-паразитов, и придавать неволокнистый, свежий и сладкий вкус. Применение микробных фосфатных удобрений по настоящему изобретению для кукурузы, в сравнении с группой с применением суперфосфата кальция, приводит к увеличению диаметра стебля на 0,1-0,2 см, увеличению числа листьев на 1-1,5, увеличению массы одного початка на 3,6%, уменьшению скорости образования полых стеблей на 18%, уменьшению скорости появления отсутствия семян на 20%, уменьшению оголенных початков на 13%, уменьшению появления пятнистости листьев на 30% и увеличению урожайности на 3,7%.
Пример 8: Пример для сравнения 5
Расположение: Дживей, селение Дайнан, Янхежен, район Жаоминг, город Фошан, провинция Гуандон
Хозяин: Жан лианхуа
Сельскохозяйственная культура: момордика харантская
См. таблицу 1 для сравнения урожайности и см. таблицу 2 для показателей, таких как число завязавшихся плодов и масса одного плода.
Figure 00000003
Таблица 2
Эксперимент для сравнения показателей, таких как число завязавшихся плодов и масса одного плода
Тип удобрений Число завязавшихся плодов (число/0,1 му) Масса одного плода (г) Толщина побега (см) Деформированный плод (число/0,1 му) Толщина листа (мм) Период уборки урожая (дней)
Микробные фосфатные удобрения по настоящему изобретению 493 425 0,54 148 0,322 85
Суперфосфат кальция 483 417 0,49 169 0,294 77
1 му = 0,0667 га
Микробные фосфатные удобрения по настоящему изобретению могут эффективно улучшать рост момордики харантской, увеличивать диаметр стебля, способствовать хорошо развитой корневой системе, улучшать фотосинтез листвы и увеличивать скорость завязывания плодов, увеличивать толщину и массу побегов, уменьшать число деформированных плодов, увеличивать число кондиционных плодов, удлинять время уборки урожая и уменьшать встречаемость заболевания растений. Применение микробных фосфатных удобрений по настоящему изобретению для момордики харантской, по сравнению с группой с использованием с суперфосфата кальция, приводит к увеличению скорости завязывания плодов на 11%, увеличению толщины побега на 0,05 см, увеличению массы одного плода на 8 г, уменьшению числа деформированных плодов на 14%, увеличению толщины листьев на 0,03 мм, уменьшению случаев увядания на 20-30%, удлинению времени уборки урожая на 7-10 дней и увеличению урожайности на 4%.
Культурно-морфологические и физиологические характеристики Streptomyces cellulosae
1. Приборы и устройства: микроскоп для биологических исследований, термостатический инкубатор, автоклав-стерилизатор, сверхчистое место или чистая комната, электронные весы и инкубатор с шейкером, культуральная чашка, пробирка для анализа, пипетка и палочка с покрытием.
2. Реагенты и питательные среды: стерильная вода (или физиологический раствор), сахарозо-нитратный агар.
3. Ход эксперимента:
3.1. Серийные разведения:
К 100 мл стерильной воды (или физиологического раствора) со стеклянными бусами добавляли 10 г взвешенного образца (с точностью до 0,01 г), оставляли на 20 мин и полностью перемешивали при 200 об./мин на ротационном шейкере в течение 30 минут с получением основной суспензии (базовой суспензии).
С помощью стерильной пипетки отбирали 5,0 мл указанной основной суспензии и добавляли к 45 мл стерильной воды (или физиологическому раствору) и осуществляли серийные разведения до 10-кратного разведения, используя стерильную воду (или физиологический раствор), получая суспензию с различными разведениями (при проведении каждого следующего разведения стерильную пипетку меняли).
3.2. Образец и культура по изобретению
Для проведения эксперимента каждый образец 3 раза последовательно разводили. С помощью стерильной пипетки отбирали 0,1 мл суспензии с различными разведениями, наносили на подготовленные плашки с твердой средой (сахарозно-нитратный агар) и распределяли по поверхности среды с помощью стерильной полочки с покрытием. Затем плашки со средой инкубировали в перевернутом положении в термостатическом инкубаторе при 28°С в течение 5-7 дней до наблюдения.
На протяжении эксперимента каждое разведение суспензии брали в трехкратном повторе, а стерильную воду (или физиологический раствор) использовали как пустой контроль.
3.3. Определение колоний
На основании морфологии колоний Streptomyces cellulosae на сахарозо-нитратном агаре (мицелий, находящийся над поверхностью субстрата (воздушный мицелий), сначала имел светло-серый цвет, а затем приобретал цвет темно-серого сланца/ субстратный мицелий сначала был прозрачным, а затем становился лимонно-желтым; растворимый пигмент, по-видимому, был лимонно-желтым) отбирали характерные колонии для проведения процедуры идентификации, как указано в нижеприведенной таблице 1, для определения Streptomyces cellulosae.
Таблица 1
Морфологические, физиологические и биохимические идентификационные признаки Streptomyces cellulosae
показатели для идентификации наблюдения
морфология репродуктивного мицелия короткий, прямой и гибкий
морфология спор овальные или эллиптические, гладкая поверхность
глюкозо-аспарагиновый агар хороший рост воздушного мицелия, мицелий серого цвета; растворимый пигмент был желтым
кальций-малатный агар цвет воздушного мицелия от серого до совсем белого; субстратный мицелий был светло-желтый; растворимый пигмент был желтый
глицерин-аспарагиновый агар (ISP), агар на неорганическом крахмале (ISP), агар на солоде из дрожжевого экстракта (ISP) и агар на геркулесовой каше (ISP) воздушный мицелий были светло-желтым или бледно-желтым; субстратный мицелий был бесцветным, серовато-желтым, светло-желтым или серовато-оранжевым, не было растворимых пигментов или следовые количества желтого растворимого пигмента
питательный агар на глюкозе воздушный мицелий был сначала белым, затем стал серым; субстратный мицелий имел хороший рост, его цвет сначала был кремовый, а потом стал желтым
картофельный блок воздушный мицелий сначала был белым, а затем стал синевато-серым; субстратный мицелий сначала был кремовым, а затем стал желтым
разжижение желатина быстрое
коагуляции молока +
пептонизация молока +
гидролиз крахмала +
уменьшение нитратов слабо +
продукция меланоида -
продукция тирозиназы -
продукция H2S -
утилизация следующих питательных веществ:  
D-глюкоза +
L-арабиноза +
D-ксилоза +
D-фруктоза +
Сахароза +
Рамноза +
Инозит +
D-маннит +
Раффиноза -
"-": Отрицательная; "+": положительная; "слабо +": слабо положительная
3.4 Подсчет колоний
Используя в качестве стандарта для подсчета колоний плашку с 20-300 колониями, подсчитывали колонии, определенные как Streptomyces cellulosae, для каждого разведения суспензии, соответственно.
3.5. Патогенность
Streptomyces cellulosae не является патогенным для человека и животных.
Культурно-морфологические и физиологические характеристики Aspergillus versicolor
1. Приборы и устройства: микроскоп для биологических исследований, термостатический инкубатор, автоклав-стерилизатор, сверхчистое место или чистая комната, электронные весы и инкубатор с шейкером, культуральная чашка, пробирка для анализа, пипетка и палочка с покрытием.
2. Реагенты и среды: стерильная вода (или физиологический раствор), агар Czapke.
3. Ход эксперимента
3.1. Серийные разведения:
К 100 мл стерильной воды (или физиологического раствора) со стеклянными бусами добавляли 10 г взвешенного образца (с точностью до 0,01 г), оставляли на 20 мин и полностью перемешивали при 200 об/мин на ротационном шейкере в течение 30 минут с получением основной суспензии (базовой суспензии).
С помощью стерильной пипетки отбирали 5,0 мл указанной основной суспензии и добавляли к 45 мл стерильной воды (или физиологическому раствору) и осуществляли серийные разведения до 10-кратного разведения, используя стерильную воду (или физиологический. раствор), получая суспензию с различными разведениями (при проведении каждого следующего разведения стерильную пипетку меняли).
3.2. Образец и культура по изобретению
Для проведения эксперимента каждый образец 3 раза последовательно разводили. С помощью стерильной пипетки отбирали 0,1 мл суспензии с различными разведениями, наносили на подготовленные плашки с твердой средой (агар Чапека) и распределяли по поверхности среды с помощью стерильной полочки с покрытием. Затем плашки со средой инкубировали в перевернутом положении в термостатическом инкубаторе при 28°С в течение 5-7 дней до наблюдения.
На протяжении эксперимента каждое разведение суспензии брали в трехкратном повторе, а стерильную воду (или физиологический раствор) использовали как пустой контроль.
3.3. Определение колоний
На основании морфологии колоний Aspergilus versicolor на агаре Чапека отбирали характерные колонии для проведения процедуры идентификации Aspergilus versicolor с помощью микрографии.
Рост колоний был ограничен на агаре Чапека с диаметром 15-17 мм за 7 дней и 24-30 мм за 10-12 при 25°С. Колонии имели радиальные складки, были достаточно большими, выпуклыми, не плоскими, с центральным углублением или с небольшим искривлением в центре. Плотность колоний нитчатых или хлопьевидная или то и другое одновременно или мозаично. Цвет колоний был весьма различным - от белого, вначале, до различных оттенков зеленого, некоторые из них были зеленые почти как горох, асфодил, цвета темно-зеленого винограда, малахитово-зеленый, оливковый или темно-оливково-коричневый, но в некоторых случаях несколько колоний были и не зеленые, что зависело от числа конидиофоров. Мицелий был рыжий, розовый, светло-коричневый или бледно-розовый, коричнево-розовый. Конидиофоры иногда давали медленный рост. Экссудат (иногда отсутствовал) был почти бесцветный, светло-коричневый или сливовый, и образовывал капельки или стекался в большую каплю. Колонии давали слегка заплесневелый запах или не имели заметного запаха. Цвет обратной стороны колоний был весьма различны - от бесцветного до палевого, розового, розово-фиолетового или коричнево-фиолетового с пигментом, рассеянным в матрице. Некоторые штаммы образовывали склеротические клетки, а иногда и агрегированные до светло-желтой массы, которые можно были увидеть в старых культурах. Головка конидиофора была относительно небольшой, сначала круглой, а потом лучеобразной, с диаметром (25-) 75-125 мкм. Стебли конидиофоров были бесцветные или желтоватые с толстыми, гладкими стенками, причем те, которые росли непосредственно из матрицы, обычно имели размер (-45) 150-300 (-500) мкм × 4-8 мкм, а те, которые росли из воздушного мицелия, как правило, были короткими. Пузырьки имели вид полусферы, немного вытянутой или эллиптической формы с диаметром 9-20 мкм и приблизительно 3/4 от поверхности могли быть обработаны. Для небольших пузырьков верхушка ножки конидиофора была незначительно выпуклой. Конидии имели двойную структуру с размером 5-8 мкм × 2-3 мкм, и с фиалидами, размером 6-8 мкм × 1,5-2,5 мкм. Конидиофоры были зелеными и шаровидные или субсферическими и имели остистые и грубые стенки, диаметром (2-) 2,5 (-4) мкм. Склеротические клетки были шаровидные или субсферические с диаметром 11-20 мкм и были объединены в светло-желтые массы, при обильном формировании.
3.4. Подсчет колоний
Используя в качестве стандарта для подсчета колоний плашку с 10-150 колониями, подсчитывали колонии, определенные как Aspergilus versicolor, для каждого разведения суспензии, соответственно.
3.5. Патогенность
Aspergilus versicolor не является патогенным для человека и животных.

Claims (8)

1. Штамм Streptomyces cellulosae WH9, депонированный как CGMCC NO.2167 для получения микробного удобрения.
2. Штамм Aspergillus versicolor WH13, депонированный как CGMCC NO.2171 для получения микробного удобрения.
3. Микробное удобрение, содержащее микроорганизмы микробной композиции, состоящей из следующих четырех микроорганизмов: штамма Bacillus subtilis WH2, депонированного как CGMCC NO.0395.2; штамма Bacillus licheniformis WH4, депонированного как CGMCC NO.0395.4; штамма Streptomyces cellulosae WH9, депонированного как CGMCC NO.2167; и штамма Aspergillus versicolor WH13, депонированного как CGMCC NO.2171.
4. Микробное удобрение по п.3, где указанное удобрение представляет собой микроорганизмы микробной композиции с измельченной фосфатной породой и активным органическим материалом, где активный органический материал представляет собой одну или несколько разновидностей, выбранных из группы следующих: фильтрационная масса, получаемая в сахарной промышленности, куриный помет, свиной навоз, отруби земляного ореха, овсяная мука, остатки маниока и рапсовый жмых.
5. Микробное удобрение по п.3, где процентное содержание по массе индивидуальных микроорганизмов, исходя из общей массы микробной композиции, представляет собой:
(1) штамма Bacillus subtilis WH2, депонированного как CGMCC NO.0395.2: 13-50%;
(2) штамма Bacillus licheniformis WH4, депонированного как CGMCC NO.0395.4:10-45%;
(3) штамма Streptomyces cellulosae WH9, депонированного как CGMCC NO.2167:8-40%;
(4) штамма Aspergillus versicolor WH13, депонированного как CGMCC NO.2171:8-37%.
6. Микробное удобрение по п.4, где процентное содержание по массе компонентов представляет собой следующее:
микробы микробной композиции 5-40%;
измельченная фосфатная порода 20-90%;
активный органический материал 5-40%;
где активный органический материал представляет собой одну или несколько разновидностей, выбранных из группы следующих: фильтрационная масса, получаемая в сахарной промышленности, куриный помет, свиной навоз, отруби земляного ореха, овсяная мука, остатки маниока и рапсовый жмых.
7. Способ получения микробного удобрения, включающий следующие стадии:
(1) смешивание следующих четырех микроорганизмов в соответствии с процентным содержанием по массе для получения микробной композиции: штамма Bacillus subtilis WH2, депонированного как CGMCC NO.0395.2: 13-50%; штамма Bacillus licheniformis WH4, депонированного как CGMCC NO.0395.4: 10-45%; штамма Streptomyces cellulosae WH9, депонированного как CGMCC NO.2167: 8-40%; штамма Aspergillus versicolor WH13, депонированного как CGMCC NO.2171:8-37%;
(2) получение культуральной среды для указанной микробной композиции в соответствии со следующим процентным содержанием по массе:
активный органический материал: 35-45%, где активный органический материал представляет собой одну или несколько разновидностей, выбранных из группы следующих: фильтрационная масса, получаемая в сахарной промышленности, куриный помет, свиной навоз, отруби земляного ореха, овсяная мука, остатки маниока и рапсовый жмых; рисовые отруби: 35-45%; порошок соевых бобов: 15-17%; молочный порошок: 1,5-2,5%; сахар: 0,5-1,5%; и остальное вода;
(3) культивирование микробов: смешивание микробной культуральной среды микробной композиции в соответствии с вышеприведенным составом с помешиванием, с последующим инокулированием микробной композицией при комнатной температуре, культивирование микробной композиции в культуральной среде при температуре в диапазоне от 30°С до 60°С, рН 6,5-7,5 в течение периода времени 5-15 дней и получение микробов микробной композиции; и
(4) смешивание измельченной фосфатной породы, активного органического материала и микробов микробной композиции в соответствии со следующим процентным содержанием по массе, ферментирование полученной смеси при комнатной температуре в течение по меньшей мере 12 дней и получение микробного удобрения:
измельченная фосфатная порода 20-90%;
активный органический материал 5-40%,
где активный органический материал представляет собой одну или несколько разновидностей, выбранных из группы следующих:
фильтрационная масса, получаемая в сахарной промышленности, куриный помет, свиной навоз, отруби земляного ореха, овсяная мука, остатки маниока и рапсовый жмых;
микробы микробной композиции 5-40%.
8. Способ получения микробного удобрения по п.7, где указанная измельченная фосфатная порода содержит от 8% до 28% Р2О5.
RU2010126160/10A 2007-11-26 2008-11-06 Микроорганизмы, микробные фосфатные удобрения и способы изготовления микробных фосфатных удобрений RU2443776C1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200710093104.1 2007-11-26
CN200710093104A CN101225367B (zh) 2007-11-26 2007-11-26 一种微生物、用该微生物制造的微生物磷肥及其制造方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2010126160A RU2010126160A (ru) 2012-01-10
RU2443776C1 true RU2443776C1 (ru) 2012-02-27

Family

ID=39857574

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2010126160/10A RU2443776C1 (ru) 2007-11-26 2008-11-06 Микроорганизмы, микробные фосфатные удобрения и способы изготовления микробных фосфатных удобрений

Country Status (7)

Country Link
US (1) US8530220B2 (ru)
CN (1) CN101225367B (ru)
AU (1) AU2008331378B2 (ru)
MA (1) MA31928B1 (ru)
MX (1) MX2010005420A (ru)
RU (1) RU2443776C1 (ru)
WO (1) WO2009070966A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2802956C1 (ru) * 2023-03-30 2023-09-05 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет" Штамм актиномицета Streptomyces parvulus ВКПМ Ас-2177, обладающий способностью к солюбилизации фосфора

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101225367B (zh) * 2007-11-26 2010-05-26 佛山金葵子植物营养有限公司 一种微生物、用该微生物制造的微生物磷肥及其制造方法
ES2378040B1 (es) 2010-03-31 2013-02-18 Probelte, S.A Un preparado biológico bionematicida y estimulador del crecimiento vegetal y cultivos puros de las cepas denominadas n11, sr11 y alo1, contenidas en el mismo.
CN102090176B (zh) * 2011-01-25 2013-04-10 甘肃农业大学 田间秸秆留茬快速腐熟还田处理方法
WO2012107603A1 (es) 2011-02-07 2012-08-16 Fertinagro Nutrientes, S.L. Procedimiento de obtencion de un fertilizante biologico y fertilizante biologico asi obtenido
US8932382B2 (en) 2012-05-24 2015-01-13 Niha Corporation Process of producing bio-organo-phosphate (BOP) fertilizer through continuous solubilization of rock phosphate by a composting bioprocess and bioaugmentation with phosphorus solubilizing microorganisms
US9617190B2 (en) 2012-05-24 2017-04-11 Niha Corp. Bioactive nutrient fortified fertilizers and related methods
CN103255078B (zh) * 2013-02-04 2014-02-19 佛山金葵子植物营养有限公司 一种土壤重金属生物降解剂及其制造方法
MY177288A (en) * 2014-05-08 2020-09-10 Malaysian Palm Oil Board A composition to biologically control ganoderma disease and method of making thereof
CN104402650A (zh) * 2014-10-29 2015-03-11 黑龙江盛瑞康生物科技开发有限公司 一种用于种植水稻和玉米的微生物菌粉
CN106472274A (zh) * 2016-09-21 2017-03-08 广州稼源农业科技有限公司 一种白菜专用无土栽培营养液及其制备方法
CN106478226A (zh) * 2016-09-21 2017-03-08 深圳富农农业科技有限公司 纳米级微生物肥料及其制备方法
CN107188727A (zh) * 2017-07-21 2017-09-22 北京市农林科学院 一种设施番茄多效沼液肥的配方及施用方法
CN107382414A (zh) * 2017-07-28 2017-11-24 当涂县海纳农业科技有限公司 一种提高荞麦产量的专用肥料
CN107325988A (zh) * 2017-08-08 2017-11-07 宁夏天韵达科技有限公司 一种微生物菌群的配置方法
CN108865954B (zh) * 2018-07-30 2022-06-10 山东福田药业有限公司 一种海水芽孢杆菌及其在酵素肥中的应用和应用方法
CA3112312A1 (en) * 2018-10-05 2020-04-09 Fertinagro Biotech, S.L. Method for obtaining a granulated phosphate fertiliser and phosphate fertiliser obtained
CN110591982A (zh) * 2019-10-29 2019-12-20 广西金穗生态科技股份有限公司 液体微生物肥料及其制备方法
CN110791456B (zh) * 2019-11-26 2022-03-04 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一种耐盐促生芽孢杆菌及其应用
CN111302853A (zh) * 2020-02-16 2020-06-19 金葵子环保生物科技(国际)有限公司 一种微生物磷钾肥及其制造方法
CN111285731A (zh) * 2020-04-09 2020-06-16 山东恩宝生物科技有限公司 一种具有泡腾作用的增效海藻肥及其制备方法
CN111534465A (zh) * 2020-05-09 2020-08-14 山东植丰农化集团有限公司 一种经济作物专用负载型缓控释肥及其制法
WO2021229282A1 (en) * 2020-05-10 2021-11-18 Basavaraj Girennavar Bio-phosphate fertilizer formulation with full of life for crop nutrition, crop productivity and soil fertility
CN111837829A (zh) * 2020-08-21 2020-10-30 黑龙江省日捷东晟科技有限公司 一种菊苣的高产种植方法及利用菊苣根提取菊粉的方法
CN112280710A (zh) * 2020-10-27 2021-01-29 佛山金葵子植物营养有限公司 一种适于滨海盐碱地海水稻的微生物肥及其制备方法
CN112876323A (zh) * 2021-03-15 2021-06-01 冕宁县天云生物科技有限责任公司 一种复合微生物肥及其制备方法
CN114507659A (zh) * 2021-12-04 2022-05-17 广西壮族自治区农业科学院 一种微生物菌剂载体的制备方法
CN116410870B (zh) * 2023-02-14 2024-02-27 安徽农业大学 一株草酸青霉、复合菌剂、联合修复剂及其应用
CN116836814B (zh) * 2023-06-28 2024-01-30 贵州省草业研究所 一株内生真菌及其在提高紫花苜蓿铝耐受性中的应用
CN116875510B (zh) * 2023-07-31 2024-05-17 中国农业科学院特产研究所 链霉菌、微生物菌剂及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2009196C1 (ru) * 1990-04-12 1994-03-15 Министеро Делл' Юниверсита Е Делла Ричерка Шентифика Е Текнологика Способ стимуляции роста и продуктивности растений, биостимулирующая композиция для обработки сельскохозяйственных культур, штамм streptomyces sp. - стимулятор роста и продуктивности растений
CN1417167A (zh) * 2002-12-06 2003-05-14 北京六合新星生物技术有限公司 一种生物磷肥的制作方法
CN1955276A (zh) * 2006-09-04 2007-05-02 利耀铭 有机微生物组合物和用途

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1099394C (zh) * 1999-11-12 2003-01-22 高明金葵子植物营养有限公司 一种微生物磷钾肥及其制造方法
CN101225367B (zh) 2007-11-26 2010-05-26 佛山金葵子植物营养有限公司 一种微生物、用该微生物制造的微生物磷肥及其制造方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2009196C1 (ru) * 1990-04-12 1994-03-15 Министеро Делл' Юниверсита Е Делла Ричерка Шентифика Е Текнологика Способ стимуляции роста и продуктивности растений, биостимулирующая композиция для обработки сельскохозяйственных культур, штамм streptomyces sp. - стимулятор роста и продуктивности растений
CN1417167A (zh) * 2002-12-06 2003-05-14 北京六合新星生物技术有限公司 一种生物磷肥的制作方法
CN1955276A (zh) * 2006-09-04 2007-05-02 利耀铭 有机微生物组合物和用途

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2802956C1 (ru) * 2023-03-30 2023-09-05 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет" Штамм актиномицета Streptomyces parvulus ВКПМ Ас-2177, обладающий способностью к солюбилизации фосфора

Also Published As

Publication number Publication date
CN101225367A (zh) 2008-07-23
CN101225367B (zh) 2010-05-26
RU2010126160A (ru) 2012-01-10
AU2008331378A1 (en) 2009-06-11
AU2008331378B2 (en) 2012-02-09
MX2010005420A (es) 2010-09-28
MA31928B1 (fr) 2010-12-01
WO2009070966A1 (en) 2009-06-11
US8530220B2 (en) 2013-09-10
US20110100078A1 (en) 2011-05-05
WO2009070966A8 (zh) 2010-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2443776C1 (ru) Микроорганизмы, микробные фосфатные удобрения и способы изготовления микробных фосфатных удобрений
CN103232272B (zh) 一种复合有机微生物菌肥及其制造方法
CN102432399B (zh) 提高水稻抗逆性及产量的生物有机肥及其制备方法
CN112322501B (zh) 一株非洲哈茨木霉Ta97及其在秸秆还田方面的应用
CN102617208B (zh) 一种食用菌菌渣有机肥原料及其制备方法
CN102491802A (zh) 茶粕生物有机肥及其生产方法
CN107164272A (zh) 一种用于园林废弃物降解的复合微生物菌剂、制备方法和应用
CN107164261B (zh) 一株促进毛叶苕子增长的根瘤菌及其应用
CN1594232A (zh) 复合氨基酸生态营养剂
CN104130068B (zh) 一种复合型多功能生物叶面肥
CN110283751A (zh) 促进豆科植物生长的菌剂及其所用菌株与应用
CN106561269A (zh) 提高秀珍菇产量和氨基酸含量的栽培料及其栽培方法
CN106146194B (zh) 一种抗重茬菌剂
CN106045626A (zh) 利用氨基酸发酵废液和玉米秸秆生产生物菌肥的方法
CN104774045A (zh) 一种利用甜高粱酒醪加工微生物有机菌肥的方法
CN109511465A (zh) 一种基于玉米芯的平菇袋料栽培方法
CN101759501B (zh) 复合微生物菌群颗粒型硼镁肥料及其制备方法
CN101619006B (zh) 生物氮肥及其发酵工艺
CN105037045B (zh) 一种大豆营养液及其制备方法和使用方法
CN107857681A (zh) 一种油菜专用肥及其制备方法与应用
CN103555593B (zh) 黑曲霉菌株及其孢子粉的制备方法
CN104630103A (zh) 一种微生物菌剂及其制备方法和应用
US11293006B1 (en) Endophytes for organic nitrogen use for sustainable agriculture
CN110092698A (zh) 一种生物有机肥及其制备方法
CN104611263B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其培养方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20191018