RU2442130C2 - Способ изготовления модифицированных электродов, электроды, полученные указанным способом, и энзимные биосенсоры, включающие указанные электроды - Google Patents

Способ изготовления модифицированных электродов, электроды, полученные указанным способом, и энзимные биосенсоры, включающие указанные электроды Download PDF

Info

Publication number
RU2442130C2
RU2442130C2 RU2007146458/28A RU2007146458A RU2442130C2 RU 2442130 C2 RU2442130 C2 RU 2442130C2 RU 2007146458/28 A RU2007146458/28 A RU 2007146458/28A RU 2007146458 A RU2007146458 A RU 2007146458A RU 2442130 C2 RU2442130 C2 RU 2442130C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
electrode
iron
solution
iii
electrodes
Prior art date
Application number
RU2007146458/28A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2007146458A (ru
Inventor
Джузеппе ПАЛЛЕШИ (IT)
Джузеппе ПАЛЛЕШИ
Франческо РИЧЧИ (IT)
Франческо РИЧЧИ
Данила МОСКОНЕ (IT)
Данила МОСКОНЕ
Алессандро ПОША (IT)
Алессандро ПОША
Original Assignee
А. Менарини Индустрие Фармачеутике Рьюните С.Р.Л.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by А. Менарини Индустрие Фармачеутике Рьюните С.Р.Л. filed Critical А. Менарини Индустрие Фармачеутике Рьюните С.Р.Л.
Publication of RU2007146458A publication Critical patent/RU2007146458A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2442130C2 publication Critical patent/RU2442130C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/001—Enzyme electrodes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/001—Enzyme electrodes
    • C12Q1/002—Electrode membranes
    • C12Q1/003—Functionalisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C23—COATING METALLIC MATERIAL; COATING MATERIAL WITH METALLIC MATERIAL; CHEMICAL SURFACE TREATMENT; DIFFUSION TREATMENT OF METALLIC MATERIAL; COATING BY VACUUM EVAPORATION, BY SPUTTERING, BY ION IMPLANTATION OR BY CHEMICAL VAPOUR DEPOSITION, IN GENERAL; INHIBITING CORROSION OF METALLIC MATERIAL OR INCRUSTATION IN GENERAL
    • C23C—COATING METALLIC MATERIAL; COATING MATERIAL WITH METALLIC MATERIAL; SURFACE TREATMENT OF METALLIC MATERIAL BY DIFFUSION INTO THE SURFACE, BY CHEMICAL CONVERSION OR SUBSTITUTION; COATING BY VACUUM EVAPORATION, BY SPUTTERING, BY ION IMPLANTATION OR BY CHEMICAL VAPOUR DEPOSITION, IN GENERAL
    • C23C18/00—Chemical coating by decomposition of either liquid compounds or solutions of the coating forming compounds, without leaving reaction products of surface material in the coating; Contact plating
    • C23C18/02—Chemical coating by decomposition of either liquid compounds or solutions of the coating forming compounds, without leaving reaction products of surface material in the coating; Contact plating by thermal decomposition
    • C23C18/12—Chemical coating by decomposition of either liquid compounds or solutions of the coating forming compounds, without leaving reaction products of surface material in the coating; Contact plating by thermal decomposition characterised by the deposition of inorganic material other than metallic material
    • C23C18/1204—Chemical coating by decomposition of either liquid compounds or solutions of the coating forming compounds, without leaving reaction products of surface material in the coating; Contact plating by thermal decomposition characterised by the deposition of inorganic material other than metallic material inorganic material, e.g. non-oxide and non-metallic such as sulfides, nitrides based compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C23—COATING METALLIC MATERIAL; COATING MATERIAL WITH METALLIC MATERIAL; CHEMICAL SURFACE TREATMENT; DIFFUSION TREATMENT OF METALLIC MATERIAL; COATING BY VACUUM EVAPORATION, BY SPUTTERING, BY ION IMPLANTATION OR BY CHEMICAL VAPOUR DEPOSITION, IN GENERAL; INHIBITING CORROSION OF METALLIC MATERIAL OR INCRUSTATION IN GENERAL
    • C23C—COATING METALLIC MATERIAL; COATING MATERIAL WITH METALLIC MATERIAL; SURFACE TREATMENT OF METALLIC MATERIAL BY DIFFUSION INTO THE SURFACE, BY CHEMICAL CONVERSION OR SUBSTITUTION; COATING BY VACUUM EVAPORATION, BY SPUTTERING, BY ION IMPLANTATION OR BY CHEMICAL VAPOUR DEPOSITION, IN GENERAL
    • C23C18/00—Chemical coating by decomposition of either liquid compounds or solutions of the coating forming compounds, without leaving reaction products of surface material in the coating; Contact plating
    • C23C18/16—Chemical coating by decomposition of either liquid compounds or solutions of the coating forming compounds, without leaving reaction products of surface material in the coating; Contact plating by reduction or substitution, e.g. electroless plating
    • C23C18/1601—Process or apparatus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54373—Apparatus specially adapted for solid-phase testing involving physiochemical end-point determination, e.g. wave-guides, FETS, gratings
    • G01N33/5438—Electrodes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
    • Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
    • Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
    • Y10T436/144444—Glucose

Abstract

Изобретение относится к области модифицированных электродов для определения анализируемых веществ в биологических жидкостях. Способ изготовления электрода, полученного методом трафаретной печати, модифицированного берлинской лазурью, включает последовательное нанесение на поверхность указанного электрода раствора, содержащего ионы железа (III) или железа (II), одно поверхностно-активное вещество в подходящем растворителе, и раствора, содержащего ионы ферроцианида (II) или феррицианида (III), и одно поверхностно-активное вещество в подходящем растворителе, с такими концентрациями указанных растворов, которые обеспечивают образование берлинской лазури непосредственно на поверхности электрода. Причем указанный электрод, полученный методом трафаретной печати, не подвергается предварительной обработке перед указанным последовательным нанесением растворов. При этом указанный раствор, содержащий ионы железа (III) или железа (II), является кислым раствором с рН 0,5-6,0 соединения, выбранного из группы, состоящей из солей железа (III) или железа (II) неорганических кислот. Указанное поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из лаурилсульфата натрия и лаурилэтоксисульфата, хлорида бензалкония, полиоксиэтилена производных эфиров жирных кислот и сорбита и их смесей. Технический результат изобретения является высокий уровень воспроизводимости на стадии нанесения, стабильность, оперативность и возможность длительного хранения. 5 н. и 20 з.п. ф-лы, 6 ил.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области модифицированных электродов для определения анализируемых веществ в биологических жидкостях и, в частности, к новому способу изготовления электродов, модифицированных берлинской лазурью, вышеописанным модифицированным электродам, биосенсорам, включающим указанные электроды, и способу определения анализируемых веществ в биологических жидкостях с применением указанных электродов.
Уровень техники
Применение берлинской лазури для модификации энзимных электродов, применяемых в амперометрии, и является результатом открытия, произошедшего 80-е, которое сводится к тому, что берлинская лазурь может быть нанесена слоями на электроды из различных материалов, таких как платина, стеклоуглерод, SnO2 и TiO2 и обладает каталитическим действием при восстановлении пероксида водорода, продуцируемого при энзимном окислении анализируемого вещества.
Указанными электродами, модифицированными берлинской лазурью, может быть определена концентрация образующегося пероксида водорода, позволяя тем самым непрямое определение концентрации окисляемого анализируемого вещества, которая прямо пропорциональна количеству продуцированного пероксида водорода.
Эти электроды, модифицированные берлинской лазурью, применялись в аналитических целях, в частности амперометрических биосенсорах, для измерения содержания глюкозы в крови. В дополнение к действию в качестве электрохимического медиатора при восстановлении пероксида водорода слой берлинской лазури может быть применен в качестве подложки для иммобилизации энзима оксидазы.
Электроды, модифицированные берлинской лазурью, могут быть получены, например, посредством электрохимического осаждения растворов ферроцианида железа(III) на электроде из одного из вышеуказанных материалов. US 5876581, например, описывает способ электрохимического осаждения, в котором пара электродов погружена в раствор, содержащий ионы железа(III) и гексацианоферрата; проведение электролиза с одним или двумя электродами в качестве катода и другим в качестве анода, слой нерастворимого гексацианоферрата(III) железа, известного как берлинская лазурь, осаждается на поверхность катода.
Электроды, которые могут быть применены в способе в соответствии с US 5876581, требуют присутствие катодов, изготовленных или покрытых инертным металлом, таким как платина, родий, золото и т.д., или оксидом проводящего металла, или полупроводника. Ранее эти традиционные электроды были заменены на электроды, полученные методом трафаретной печати (SPEs), которые обладают многочисленными преимуществами: они дешевы, просты в изготовлении, универсальны и пригодны для крупномасштабного изготовления.
Как указано выше, электроды, модифицированные берлинской лазурью, применяли ранее и в настоящее время этот продукт наносят на поверхность электрода электрохимическим путем. Указанный путь, однако, непригоден для широкомасштабного изготовления модифицированных электродов исходя из электродов, полученных методом трафаретной печати по двум основным причинам:
1) электрохимические операции обычно длительные и должны выполняться электрод за электродом, с огромными затратами времени в случае изготовления большого количества электродов; и 2) плоская форма электродов, полученных методом трафаретной печати, делает применение электрохимических операций сложными и трудоемкими, поскольку последние требуют погружения электрода в раствор, содержащий ионные частицы, и это может приводить к образованию слоя берлинской лазури также на поверхности электрода сравнения, блокируя электрическую проводимость и препятствуя применению электродов, полученных методом трафаретной печати в аналитических целях.
По этим причинам, насколько известно заявителю, в настоящее время не существует электрохимических способов осаждения берлинской лазури на электроды, полученные методом трафаретной печати. Способ химического осаждения берлинской лазури на электроды, полученные методом трафаретной печати, описаны Риччи (Ricci) и др. в Biosensors and Bioelectronics 18 (2003) 165-174. Указанный способ включает предварительную электрохимическую обработку электродов в течение 3 минут при потенциале 1,7 В перед химическим осаждением берлинской лазури. В соответствии с этой статьей указанный способ достаточен для получения улучшенной воспроизводимости и отклика электрода, но с другой стороны делает изготовление модифицированных электродов очень трудоемким, требующим предварительной электрохимической обработки каждого из них и сводит к нулю преимущества химического осаждения.
Кроме того, в этом способе берлинская лазурь наносится на электрод вручную, посредством сложной операции, которая требует большой осторожности для предотвращения увеличения внутреннего сопротивления системы: смесь должна быть приготовлена на месте, добавлением раствора феррицианида калия в HCl к раствору хлорида железа(III) в HCl, после чего капля указанной смеси наносится исключительно на поверхность рабочего электрода, при этом необходимо избежать попадания смеси на электрод сравнения и вспомогательный электрод.
Таким образом даже с вышеуказанными предосторожностями модифицированные электроды ограничены в плане воспроизводимости осаждения и устойчивости слоя берлинской лазури; поэтому, даже несмотря на то, что электроды, полученные методом трафаретной печати, сами по себе характеризуются высоким уровнем воспроизводимости поверхности электрода, определяющим устойчивость и воспроизводимость электрического сигнала анализируемого вещества, низкая воспроизводимость и недостаток в единообразии приготовления слоя берлинской лазури создают серьезные проблемы при измерении количества анализируемого вещества в биологических жидкостях и, в общем, в применениях, для которых электрод предназначен.
Из сказанного выше должно быть понятно, что существует потребность в способе легко масштабируемом, посредством которого поверхность электродов, полученных методом трафаретной печати, берлинской лазурью может быть модифицирована в способе, в котором устранены недостатки известных способов, подчеркнутые выше.
Раскрытие изобретения
Заявитель разработал новый способ, в частности, дешевый и простой в осуществлении, который позволяет модифицировать электроды, полученные методом трафаретной печати, берлинской лазурью, получать электроды с высоким уровнем стабильности и воспроизводимости, применимые в изготовлении плоских биосенсеров для количественного определения анализируемых веществ в биологических жидкостях.
Целью настоящего изобретения является способ изготовления электрода, полученного методом трафаретной печати, модифицированного берлинской лазурью, характеризующийся тем, что он включает последовательное осаждение на поверхность указанного электрода, полученного методом трафаретной печати, раствора, содержащего ионы железа(III) или железа(II) и, по меньшей мере, одно поверхностно-активное вещество в подходящем растворителе и раствор, содержащий ферроцианид(II) или феррицианид(III) ионы и, по меньшей мере, одно поверхностно-активное вещество в подходящем растворителе. Указанные растворы имеют такую концентрацию, которая обеспечивает образование берлинской лазури непосредственно на поверхности электрода.
Другими объектами изобретения являются электрод, полученный методом трафаретной печати, модифицированный берлинской лазурью, полученный вышеуказанным способом, энзимный электрод и энзимный биосенсор, который включает указанный электрод, и способ определения количества анализируемого вещества в биологическом образце, включающий контакт между образцом и вышеуказанным энзиматическим биосенсором.
Характеристики и преимущества изобретения будут проиллюстрированы в деталях следующим описанием.
Краткое описание фигур
Фигура 1: Вид сбоку модифицированного электрода, полученного методом трафаретной печати, изготовленного, как описано в примере 1.
Фигура 2: Циклическая вольтамперограмма, записанная с применением модифицированного электрода, полученного методом трафаретной печати, как описано в примере 1 (кривая а), и циклическая вольтамперограмма, записанная на этом же электроде в присутствии H2O2 (кривая b), которая демонстрирует электрохимическую активность берлинской лазури.
Фигура 3: Циклическая вольтамперограмма, записанная с применением модифицированного электрода, полученного методом трафаретной печати, как описано в примере 3 (кривая а), и циклическая вольтамперограмма, записанная на этом же электроде в присутствии H2O2 (кривая b), которая демонстрирует электрохимическую активность берлинской лазури.
Фигура 4: Сравнение между циклической вольтамперограммой, записанной с применением модифицированного электрода, как описано в примере 1 (кривая а), и циклической вольтамперограммой, записанной с применением модифицированного электрода, как описано в примере 3 для сравнения (кривая b). Следует отметить большее осаждение берлинской лазури, полученной на электроде примера 1.
Фигура 5: Сравнение между рабочей стабильностью модифицированного электрода в соответствии с примером 1 (Фиг.5А) и модифицированным электродом в соответствии с примером 3 для сравнения (Фиг.5B), в которых может быть отмечена большая рабочая стабильность электрода, полученного в соответствии со способом, описанным в примере 1.
Осуществление изобретения
В способе изобретения применяют раствор, содержащий ионы железа(III) или железа(II), например, кислый раствор с рН между 0,5 и 6,0, предпочтительно кислый раствор, полученный добавлением HCl, соединения, выбранного из группы, состоящей из солей железа(III) или железа(II) неорганических кислот, например, хлорид, сульфат и нитрат железа(III); предпочтительно раствор представляет собой раствор хлорида железа(III) в водной HCl 0,01 М с рН 2,0.
Концентрация железа(III) или железа(II) в вышеуказанном растворе может быть, например, между 20 мМ и 2 М и предпочтительно 1 М. Раствор, содержащий ионы гексацианоферрата(III) в соответствии с изобретением, является, например, кислым раствором, с рН между 0,5 и 6,0, полученным предпочтительно добавлением HCl, соли, содержащей ионы ферроцианида Fe(CN)6 4- или феррицианида Fe(CN)6 3-, например, натрия, калия, аммония или гексацианоферрата кобальта; предпочтительно настоящий раствор является раствором феррицианида калия K3Fe(СН)6 в водной 0,01 М HCl с рН 2,0. Концентрация ферроцианид(II) или феррицианид(III) иона в вышеуказанном растворе может быть, например, между 20 мМ и 2 М и предпочтительно 1 М.
В соответствии с изобретением настоящий способ включает нанесение раствора, содержащего ион железа(II) или железа(III) на поверхность рабочего электрода, и сразу вслед за этим нанесение раствора, содержащего ион гексацианоферрат(III) в равном объеме и концентрации. Объем растворов с концентрацией между 20 мМ и 2 мМ составляет, например, 100 нл - 4 µл для поверхности электрода между 0,314 мм2 и 3,14 см2, предпочтительно 3,14 мм2.
Электроды отпечатываются трафаретным способом на инертном материале, например, поликарбонате, полиэфире, поливинилхлориде (PVC) или другом пластическом материале подходящей краской с проводящими материалами, например, графитом, серебром, золотом или платиной, которые являются подходящими для применения в настоящем способе изготовления модифицированных электродов изобретения: графитовая краска является предпочтительной для рабочего электрода. После смешивания двух растворов смесь оставляют на период, например, между 2 минутами и 2 часами и предпочтительно на 10 минут; поверхность рабочего электрода затем промывают промывочным раствором, состоящим, например, из водного кислого раствора с рН между 0,5 и 6,0 и предпочтительно водного раствора 0,01 М HCl с рН 2,0. Вслед за этим рабочий электрод может быть промыт дистиллированной водой. Модифицированные таким образом электроды оставляют для высушивания в печи при температуре 50°С-200°С на 10 минут - 3 часа. Предпочтительно электрод помещают в печь при 100°С на 1 час 30 минут. Два раствора, содержащих ион железа(III) или железа(II) и ион ферроцианида(II) или феррицианида(III) в соответствии с изобретением, кроме того, содержат, по меньшей мере, одно поверхностно-активное вещество, выбранное из катионного, анионного, амфотерного поверхностно-активного вещества, в количествах для каждого раствора, например, 0,001-10 мас.% по отношению к общему объему раствора. Предпочтительно поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из лаурил сульфата натрия и лаурилэтоксисульфата, хлорида бензалкония, соединений, принадлежащих к семейству продуктов, известных под торговой маркой Tween®, т.е. полиоксиэтиленовые производные эфиров жирных кислот с сорбитом и их смеси.
В соответствии с особо предпочтительным осуществлением изобретения поверхностно-активное вещество полиоксиэтилен (20) сорбит монолаурат, продаваемый под маркой Tween® 20, добавляют к каждому из двух растворов, содержащих соответственно ион железа(III) или железа(III) и ион ферроцианида(II) или феррицианида(III), в количестве 0,05 мас.% по отношению к общему объему раствора.
Настоящим способом нанесения может быть получен слой берлинской лазури на поверхности рабочего электрода, который является крайне воспроизводимым и активным с точки зрения электрохимии. Кроме того, циклической вольтамперометрией может быть определено количество берлинской лазури, находящейся на рабочем электроде после нанесения, включающее значения 10-200 нмоль/см2 и предпочтительно 100 нмоль/см2.
Настоящим способом может быть получен плотный слой берлинской лазури, никогда ранее не наблюдавшийся в химическом или электрохимическом способах; высокая поверхностная плотность берлинской лазури на поверхности электрода позволяет получить крайне высокую рабочую стабильность без влияния на каталитическую активность по отношению к восстановлению H2O2.
Электроды, модифицированные берлинской лазурью, изготовленные в соответствии со способом изобретения, могут быть применены в изготовлении энзимных биосенсоров с двумя или тремя электродами, которые также являются объектом настоящего изобретения. В указанных биосенсорах модифицированные электроды применяют в качестве подложки для иммобилизации подходящего энзима, выбранного на основе типа аналитического определения, для которого биосенсор предназначен, т.е. так что анализируемое вещество действует как субстрат для энзима, генерируя продукт, который может быть окислен или восстановлен электрохимически на модифицированном электроде, изменяя силу измеряемого тока пропорционально количеству анализируемого вещества, присутствующего в анализируемой жидкости.
Биосенсор по изобретению включает энзимный электрод, т.е. модифицированный электрод изобретения, описанный выше, на котором иммобилизован энзим обычно применяемыми способами, известными специалисту в данной области, и ячейку для биологической жидкости, так чтобы последняя находилась в контакте с энзимом.
В соответствии с предпочтительным осуществлением изобретения биосенсор по изобретению включает модифицированный электрод изобретения, на котором иммобилизован энзим глюкозооксидазы, применимый для определения глюкозы в биологических жидкостях, таких как кровь, сыворотка или плазма; в этом случае анализируемым веществом является глюкоза, которая окисляется энзимом, давая H2O2, который восстанавливается на модифицированном электроде за счет приложенного потенциала между этим электродом и электродом сравнения, генерируя ток, пропорциональный полученному H2O2 и следовательно количеству глюкозы, присутствующей в жидкости, содержащейся в ячейке.
Другим объектом изобретения является способ определения количества анализируемого вещества в биологической жидкости, включающий приложение подходящего потенциала на модифицированный электрод изобретения, описанного выше, и электрод сравнения, присутствующий в биосенсоре по изобретению, и регистрацию генерируемого тока. Предпочтительно способ по изобретению применяют для определения содержания глюкозы в биологических жидкостях при низком прилагаемом потенциале, например, между -250 мВ и +200 мВ, предпочтительно -50 мВ.
Способ изготовления электродов, модифицированных берлинской лазурью, как описано выше, обладает высоким уровнем воспроизводимости на стадии нанесения, что положительно влияет на воспроизводимость измерений, выполняемых с электродами, модифицированными способом по изобретению; кроме того, он обеспечивает модифицированный электрод с большей рабочей стабильностью, чем любой другой электрод, модифицированный берлинской лазурью, изготовленный известным до настоящего времени способом. Установлено, что слой берлинской лазури на электродах, модифицированных настоящим способом, остается активным и электрохимическая активность снижается только на около 35% после 150 часов непрерывной работы. В дополнение к большей рабочей стабильности электроды, модифицированные берлинской лазурью, изготовленные способом по изобретению, также обладают более высокой стабильностью при долговременном хранении.
Указанные величины стабильности, оперативность и возможность длительного хранения и воспроизводимость в случае биосенсоров с двумя и тремя электродами также достигаются способом, который не требует в отличие, например, от способа, описанного Риччи (Ricci) и др. в Biosensors and Bioelectronics 18 (2003) 165-174, предварительной электрохимической обработки электрода перед нанесением берлинской лазури, и поэтому является менее трудоемким и легче автоматизируемым и поэтому применимым в промышленном масштабе.
Другим преимуществом модифицированных электродов по изобретению в случае биосенсоров с двумя электродами, которые могут быть применены, например, при определении глюкозы является то, что они включают рабочий электрод и электрод сравнения, при этом не требуются противоэлектрода в отличие от, например, электродов, модифицированных берлинской лазурью, описанных в вышеуказанной статье Риччи (Ricci) и др.
Следующие примеры представляют не ограничивающую иллюстрацию изобретения.
Пример 1
Изготовление модифицированного электрода
Известным способом изготавливают электрод, полученный методом трафаретной печати, на полиэфирном листе, включающий круглый рабочий электрод с диаметром 2 мм, полученный с применением графитовой краски, и серебряный электрод сравнения; поверхность рабочего электрода отделяют краской из изолирующего материала. Фиг.1 представляет вид сбоку электрода, изготовленного таким образом. Готовят два следующих раствора: 1) 1 М раствор феррицианида калия K3Fe(CN)6 в 10 мM HCl и 2) 1 М раствор хлорида железа(III) в HCl 10 мМ. Tween® 20 добавляют к каждому из двух растворов в количестве 0,05 мас.% по отношению к общему объему раствора.
Распределительным автоматом 1 µл раствора 1) наносят на поверхность рабочего электрода и сразу за этим тем же распределительным автоматом 1 µл раствора 2) наносят на ту же поверхность рабочего электрода, получая таким образом 2 µл раствора хлорида железа(III) и гексацианоферрата калия на указанной поверхности. Через 10 минут модифицированные таким образом электроды промывают несколькими миллилитрами 10 мМ раствора HCl, затем помещают в печь при 100°С на 1 час.
Вышеописанная операция приводит к осаждению на электроде крайне компактного и стабильного слоя берлинской лазури с высокой поверхностной плотностью берлинской лазури на рабочем электроде. Последнее подтверждают результаты циклической вольтамперометрии, представленной на фиг.2, которая позволяет рассчитать количество берлинской лазури на поверхности рабочего электрода: измеренная поверхностная плотность составляет около 100 нмоль/см2, гораздо больше, чем приводится в литературе до настоящего времени с применением различных способов нанесения.
Пример 2
Определение каталитической активности берлинской лазури электрода, изготовленного в примере 1.
Свойства модифицированного электрода, изготовленного в описанным выше примере 1, определяют при помощи циклической вольтамперометрии в ряду потенциалов -0,4-0,4 В. Фиг.2 представляет вольтамперограмму, полученную на электроде, полученном методом трафаретной печати, еще не модифицированном, и на том же электроде, модифицированном берлинской лазурью, изготовленном как описано выше в примере 1. Для последнего электрода можно видеть увеличение катодной волны на вольтамперограмме при около 0,05 В в присутствии пероксида водорода, демонстрирующее каталитическую активность слоя берлинской лазури, нанесенной на электрод.
Пример 3 (сравнение)
Изготовление модифицированного электрода, как описано Риччи (Ricci) и др. в Biosensors and Bioelectronics 18 (2003) 165-174
В соответствии с методикой, описанной ранее в статье Риччи (Ricci) и др. в Biosensors and Bioelectronics 18 (2003) 165-174, модифицируют электрод, полученный методом трафаретной печати, на полиэфирном листе, включающий круглый рабочий электрод с диаметром 2 мм, полученный при помощи графитовой краски, и серебряный электрод сравнения; поверхность рабочего электрода отделяют краской из изолирующего материала. Готовят следующие растворы 1) 0,1 М раствор феррицианида калия K3Fe(CN)6 в 10 мМ HCl и 2) 0,1 М раствор хлорида железа(III) в 10 мМ HCl.
Перед нанесением двух растворов электрохимическим способом электрод предварительно обрабатывают наложением постоянного потенциала, равного 1,7 В по отношению к Ag/AgCl в течение 3 минут, операция, не подходящая для автоматизации и гораздо более трудоемкая и длительная, чем операция в примере 1.
Распределительным автоматом на поверхность рабочего электрода наносят 20 µл раствора 1) и сразу за этим тем же распределительным автоматом наносят на ту же поверхность рабочего электрода 20 µл раствора 2), получая таким образом 40 µл смеси хлорида железа(III) и гексацианоферрата калия. Через 10 минут модифицированные таким образом электроды промывают несколькими миллилитрами 10 мМ раствора HCl, затем помещают в печь при 100°С на 1 час. Каталитическую активность слоя берлинской лазури, нанесенной таким образом, оценивают тем же способом, как описано в примере 2. Фиг.3 представляет циклические вольтамперограммы, полученные с модифицированным электродом, как описано выше.
Пример 4
Определение аналитической эффективности модифицированных электродов изобретения и известного уровня техники
Аналитическую эффективность электродов, модифицированных берлинской лазурью, изготовленных как описано в примерах 1 и 3, проверяют, определяя отклик на H2O2, рабочую и нерабочую стабильность и воспроизводимость. Что касается воспроизводимости, значения воспроизводимости, рассчитанные как процент относительного стандартного отклонения (обозначаемый далее как RSD%), для электрода, модифицированного как описано в примере 3, составляет около 20%, несовместимое с любым типом промышленного применения, тогда как рассчитанный RSD% для электрода, модифицированного как описано в примере 1, составляет 5%. Что касается толщины нанесенной на электроды берлинской лазури способом известного уровня техники, описанным в примере 3, поверхностная плотность слоя полученной берлинской лазури составляет 1-10 нмоль/см2, что много меньше, чем эта же характеристика для электрода изобретения примера 1 (около 100 нмоль/см2), что демонстрирует сравнение циклических вольтамперограмм (фиг.4).
Это приводит к более высокой рабочей стабильности берлинской лазури, вплоть до максимума в 200 часов. Фиг.5, например, представляет непрерывный мониторинг с помощью проточного устройства, полученного с двумя электродами, изготовленными способами, описанными в примерах 1 и 3. Как явно видно при концентрации 5 мМ Н2О2 оба электрода обеспечивают прохождение тока восстановления благодаря каталитической активности берлинской лазури, но электрод примера 1 демонстрирует более долговременную рабочую стабильность с уменьшением начального сигнала только на 20% через 200 часов. В случае электрода известного уровня техники, изготовленного в примере 3, наблюдается более заметное уменьшение, равное около 70% после 200 часов.
Пример 5
Изготовление биосенсора
Модифицированный электрод, изготовленный как описано в примере 1, применяют в качестве носителя для иммобилизации энзима глюкозооксидазы с целью получения биосенсора, пригодного для непрерывного контроля содержания глюкозы в крови. С этой целью 200 нл раствора глутаральдегида (0,025% об./об. в H2O) наносят на поверхность рабочего электрода, предварительно модифицированного берлинской лазурью, как описано в примере 1. Приблизительно после 25 минут 200 нл смеси, полученной растворением 10 мг энзима глюкозооксидазы в 1 мл водного раствора Nation® (0,1%), наносят на ту же поверхность рабочего электрода. Вновь оставляют его приблизительно на 25 минут, чтобы достичь полного высыхания нанесенного раствора.

Claims (25)

1. Способ изготовления электрода, полученного методом трафаретной печати, модифицированного берлинской лазурью, характеризующийся тем, что он включает последовательное нанесение на поверхность указанного электрода раствора, содержащего ионы железа (III) или железа (II) и, по меньшей мере, одно поверхностно-активное вещество в подходящем растворителе, и раствора, содержащего ионы ферроцианида (II) или феррицианида (III) и, по меньшей мере, одно поверхностно-активное вещество в подходящем растворителе, с такими концентрациями указанных растворов, которые обеспечивают образование берлинской лазури непосредственно на поверхности электрода.
2. Способ по п.1, в котором указанный электрод, полученный методом трафаретной печати, не подвергается предварительной обработке перед указанным последовательным нанесением растворов.
3. Способ по п.1, в котором указанный раствор, содержащий ионы железа (III) или железа (II), является кислым раствором с рН 0,5-6,0 соединения, выбранного из группы, состоящей из солей железа (III) или железа (II) неорганических кислот.
4. Способ по п.3, в котором указанные соли железа (III) или железа (II) неорганических кислот выбраны из хлорида железа (III), сульфата железа (III) и нитрата железа (III).
5. Способ по п.3, в котором указанный раствор является раствором хлорида железа (III) в водной 0,01 М HCl с рН 2,0.
6. Способ по п.1, в котором указанный раствор, содержащий ионы гексацианоферрата (III), является кислым раствором с рН 0,5-6,0 соли, содержащим ионы ферроцианида (II) или феррицианида (III).
7. Способ по п.6, в котором указанная соль выбрана из гексацианоферрата натрия, калия, аммония и кобальта.
8. Способ по п.6, в котором указанный раствор является раствором феррицианида калия K3Fe(CN)6 в водной 0,01 М HCl с рН 2,0.
9. Способ по п.1, в котором указанные растворы имеют одинаковые концентрации 20-2 мМ и наносятся равными объемами 100 нл - 4 мкл на электрод с поверхностью 0,314 мм2 - 3,14 см2, предпочтительно 3,14 мм2.
10. Способ по п.1, в котором указанный электрод, полученный методом трафаретной печати, выполнен из инертного материала с трафаретной печатью графитовой краской.
11. Способ по п.1, дополнительно включающий стадии удаления растворов нанесенных на 10 мин, промывки поверхности рабочего электрода промывочным раствором, состоящим из водного раствора с рН 0,5-6,0, и при необходимости промывки дистиллированной водой и высушивания в печи с температурой 50-200°С в течение 10 мин - 3 ч.
12. Способ по п.11, в котором указный промывочный раствор является водным раствором 0,01 М HCl с рН 2,0.
13. Способ по п.12, в котором электрод высушивают в печи при температуре 100°С в течение 1 ч 30 мин.
14. Способ по п.1, в котором указанное поверхностно-активное вещество выбрано из катионных, анионных, амфотерных поверхностно-активных веществ и их смесей и добавлено в количествах для каждого раствора 0,001-10 мас.% по отношению к общему объему раствора.
15. Способ по п.12, в котором указанное поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из лаурилсульфата натрия и лаурилэтоксисульфата, хлорида бензалкония, полиоксиэтилен производных эфиров жирных кислот и сорбита и их смесей.
16. Способ по п.12, в котором указанное поверхностно-активное вещество является полиоксиэтилен (20) монолауратом сорбита в количестве 0,05 мас.% по отношению к общему объему раствора.
17. Электрод, полученный методом трафаретной печати, модифицированный берлинской лазурью, изготовленный способом по п.1, в котором количество нанесенной берлинской лазури составляет 10-200 нмоль/см2.
18. Электрод, полученный методом трафаретной печати, по п.17, в котором количество берлинской лазури составляет 100 нмоль/см2.
19. Энзимный электрод, содержащий электрод, полученный методом трафаретной печати, модифицированный, по п.17 и подходящий энзим, иммобилизованный на указанном электроде, выбранный таким образом, чтобы его продукт мог быть окислен или восстановлен электрохимически на указанном модифицированном электроде.
20. Энзимный электрод по п.19, в котором указанный энзим является энзимом глюкозооксидазы.
21. Энзимный биосенсор, содержащий энзимный электрод по п.19 в качестве рабочего электрода, при необходимости противо-электрод и ячейку для анализируемой биологической жидкости, такую, чтобы последняя контактировала с иммобилизованным энзимом указанного энзимного электрода.
22. Биосенсор по п.21, включающий электрод, полученный методом трафаретной печати, и указанный электрод сравнения в качестве отдельных электродов.
23. Способ определения количества анализируемого вещества в биологической жидкости, включающий приложение соответствующего потенциала на энзимный электрод по п.19 и электрод сравнения, включенный в энзимный биосенсор по п.21, и регистрацию генерированного тока.
24. Способ по п.23, в котором указанное анализируемое вещество является глюкозой и приложенный потенциал составляет (-250)-(+200) мВ.
25. Способ по п.24, в котором указанный прилагаемый потенциал равен -50 мВ.
RU2007146458/28A 2006-12-13 2007-12-12 Способ изготовления модифицированных электродов, электроды, полученные указанным способом, и энзимные биосенсоры, включающие указанные электроды RU2442130C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT000322A ITFI20060322A1 (it) 2006-12-13 2006-12-13 Processo per la preparazione di elettrodi modificati, elettrodi preparati con tale processo, e biosensori enzimatici che li comprendono.
ITFI2006A000322 2006-12-13

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2007146458A RU2007146458A (ru) 2009-06-20
RU2442130C2 true RU2442130C2 (ru) 2012-02-10

Family

ID=39272068

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007146458/28A RU2442130C2 (ru) 2006-12-13 2007-12-12 Способ изготовления модифицированных электродов, электроды, полученные указанным способом, и энзимные биосенсоры, включающие указанные электроды

Country Status (14)

Country Link
US (2) US8309362B2 (ru)
EP (1) EP1935331B1 (ru)
CY (1) CY1117023T1 (ru)
DK (1) DK1935331T3 (ru)
ES (1) ES2555313T3 (ru)
HR (1) HRP20151244T1 (ru)
HU (1) HUE026692T2 (ru)
IT (1) ITFI20060322A1 (ru)
ME (1) ME02268B (ru)
PL (1) PL1935331T3 (ru)
PT (1) PT1935331E (ru)
RS (1) RS54399B1 (ru)
RU (1) RU2442130C2 (ru)
SI (1) SI1935331T1 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2580288C2 (ru) * 2013-04-29 2016-04-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Русенс" Способ изготовления микробиосенсора для определения глюкозы или лактата
RU2696499C1 (ru) * 2018-02-08 2019-08-02 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) Биосенсор для одновременного определения глюкозы и лактата в крови
RU2703316C1 (ru) * 2018-11-29 2019-10-16 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) Способ изготовления высокостабильного покрытия сенсора на пероксид водорода

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7905134B2 (en) * 2002-08-06 2011-03-15 The Regents Of The University Of California Biomarker normalization
US7810380B2 (en) 2003-03-25 2010-10-12 Tearlab Research, Inc. Systems and methods for collecting tear film and measuring tear film osmolarity
GB0813200D0 (en) * 2008-07-18 2008-08-27 Univ Leeds Hexacyanoferrate modified electrode
CN101825603A (zh) * 2010-04-17 2010-09-08 上海交通大学 用于检测触酶阳性菌的电流型酶电极及其制备方法
US9097661B2 (en) * 2011-01-27 2015-08-04 Caterpillar, Inc. Electrochemical sulfur sensor and the method of making the same
CN104198554B (zh) * 2014-09-03 2016-06-15 海南大学 一种工作电极及其制备方法、生物传感器
US11536707B2 (en) 2014-09-23 2022-12-27 Tearlab Research, Inc. Systems and methods for integration of microfluidic tear collection and lateral flow analysis of analytes of interest
KR101633057B1 (ko) 2015-04-22 2016-06-23 재단법인 실감교류인체감응솔루션연구단 헤드 마운트 디스플레이 시스템을 위한 얼굴 모션 캡쳐 방법
WO2017210465A1 (en) * 2016-06-01 2017-12-07 Autotelic Llc Prussian blue screen-printed electrode for determining cation concentration in physiological samples
CN109312384B (zh) 2016-06-15 2022-12-30 伊士曼化工公司 物理气相沉积的生物传感器组件
CN109689880B (zh) 2016-09-16 2022-12-13 伊士曼化工公司 通过物理气相沉积制备的生物传感器电极
WO2018052711A1 (en) 2016-09-16 2018-03-22 Eastman Chemical Company Biosensor electrodes prepared by physical vapor deposition
WO2018236572A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Eastman Chemical Company PHYSICAL DEPOSITION ELECTRODE IN VAPOR PHASE FOR ELECTROCHEMICAL SENSORS
US11536685B2 (en) 2020-02-06 2022-12-27 Trustees Of Boston University High throughput assay for identifying microbial redox enzymes
US11331020B2 (en) 2020-02-06 2022-05-17 Trustees Of Boston University Enzyme-based electrochemical nicotine biosensor
CN111272843B (zh) * 2020-02-25 2023-01-06 衡阳师范学院 一种纳米线构建的FeCo网状结构纳米材料及其制备方法与应用
CN112964772B (zh) * 2021-03-30 2021-11-26 南京工业大学 一种基于丝网印刷芯片上酶的固定方法
WO2022232670A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 Trustees Of Boston University Hormone electrochemical biosensor
CN113945618B (zh) * 2021-09-24 2024-02-09 合肥天一生物技术研究所有限责任公司 一种用于血浆中维生素b2含量检测的丝网印刷电极
CN114062672B (zh) * 2021-11-12 2023-04-25 福州大学 一种检测covid-19抗体的血糖生物传感器
CN114965629B (zh) * 2022-05-31 2023-07-25 浙江大学 一种乳酸生物传感器及其制备方法、一种细胞活力电化学检测方法
CN115072740B (zh) * 2022-06-23 2023-10-10 齐齐哈尔大学 一种核壳结构普鲁士蓝纳米球的制备方法
CN115266865B (zh) * 2022-07-29 2024-04-16 北京大学 一种提高电化学传感器稳定性的方法
CN115494130A (zh) * 2022-09-19 2022-12-20 北京大学 一种牙刷电化学传感器构建方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5858288A (ja) 1981-10-02 1983-04-06 Seiko Instr & Electronics Ltd ヘキサシアノ鉄酸鉄の合成法
US4652530A (en) * 1985-07-15 1987-03-24 Rohm And Haas Company Monitoring method for isothiazolones in aqueous systems
EP0231476A1 (en) * 1985-12-23 1987-08-12 Siddiqi, Iqbal W., Dr. Selectively ion-permeable electrodes for analyzing selected ions in aqueous solution
EP1390733B1 (en) * 2001-05-30 2010-05-19 i-SENS, INC. Biosensor
KR100475634B1 (ko) * 2001-12-24 2005-03-15 주식회사 아이센스 일정 소량의 시료를 빠르게 도입할 수 있는 시료도입부를구비한 바이오 센서
US20060205090A1 (en) * 2005-03-14 2006-09-14 Newton Michael W Water-soluble conjugates for electrochemical detection
US20100000882A1 (en) * 2006-10-04 2010-01-07 Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Detection of Explosive Materials

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
F.Ricci et al. Prussia Blue based screen printed biosensors with improved characteristics of long-term lifetime and pH stability, Biosensors and bioelectronics, p.165-174, 18, 2003. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2580288C2 (ru) * 2013-04-29 2016-04-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Русенс" Способ изготовления микробиосенсора для определения глюкозы или лактата
RU2696499C1 (ru) * 2018-02-08 2019-08-02 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) Биосенсор для одновременного определения глюкозы и лактата в крови
RU2703316C1 (ru) * 2018-11-29 2019-10-16 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) Способ изготовления высокостабильного покрытия сенсора на пероксид водорода

Also Published As

Publication number Publication date
US20130001102A1 (en) 2013-01-03
HRP20151244T1 (hr) 2016-01-29
RS54399B1 (en) 2016-04-28
ME02268B (me) 2016-04-28
PT1935331E (pt) 2016-01-11
US8309362B2 (en) 2012-11-13
EP1935331B1 (en) 2015-09-09
SI1935331T1 (sl) 2016-04-29
EP1935331A3 (en) 2014-01-01
CY1117023T1 (el) 2017-04-05
ES2555313T3 (es) 2015-12-30
PL1935331T3 (pl) 2016-06-30
US20080160625A1 (en) 2008-07-03
RU2007146458A (ru) 2009-06-20
ITFI20060322A1 (it) 2008-06-14
EP1935331A2 (en) 2008-06-25
DK1935331T3 (en) 2015-12-14
HUE026692T2 (en) 2016-07-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2442130C2 (ru) Способ изготовления модифицированных электродов, электроды, полученные указанным способом, и энзимные биосенсоры, включающие указанные электроды
Ghica et al. A glucose biosensor using methyl viologen redox mediator on carbon film electrodes
Sun et al. Simultaneous determination of dopamine and ascorbic acid at poly (neutral red) modified electrodes
Somasundrum et al. Amperometric determination of hydrogen peroxide by direct and catalytic reduction at a copper electrode
CN100430721C (zh) 高敏感性电位传感器的制造方法
Haghighi et al. Direct electron transfer from glucose oxidase immobilized on an overoxidized polypyrrole film decorated with Au nanoparticles
CA2416207A1 (en) Electrochemical method for measuring chemical reaction rates
Wring et al. Voltammetric behaviour of screen-printed carbon electrodes, chemically modified with selected mediators, and their application as sensors for the determination of reduced glutathione
Brahman et al. Fullerene–C60–MWCNT composite film based ultrasensitive electrochemical sensing platform for the trace analysis of pyruvic acid in biological fluids
Roushani et al. Electrochemical detection of butylated hydroxyanisole based on glassy carbon electrode modified by iridium oxide nanoparticles
Nassef et al. Simultaneous detection of ascorbate and uric acid using a selectively catalytic surface
Hasebe et al. Electropolymerized poly (Toluidine Blue)-modified carbon felt for highly sensitive amperometric determination of NADH in flow injection analysis
US8968825B1 (en) Disposable palladium nanoparticle-modified graphite pencil electrode
Schick et al. Amperometric nonenzymatic determination of serum glucose by means of a nickel-catalyst electrode.
Salimi et al. Electrocatalytic reduction of H2O2 and oxygen on the surface of thionin incorporated onto MWCNTs modified glassy carbon electrode: application to glucose detection
Zen et al. Electrocatalytic Oxidation of Hypoxanthine on a Nafion/Lead‐Ruthenium Oxide Pyrochlore Modified Electrode
WO1995021934A1 (en) Hexacyanoferrate modified electrodes
JP3437016B2 (ja) バイオセンサおよびそれを用いた基質の定量方法
Elewi et al. Development of hydrogen peroxide biosensor based on immobilization of hemoglobin on screen-printed carbon electrode modified with silver nanoparticles
Saini et al. Preliminary investigation of a bioelectrochemical sensor for the detection of phenol vapours
Zhang et al. Disposable electrochemical capillary-fill device for glucose sensing incorporating a water-soluble enzyme/mediator layer
KR20110084035A (ko) 페놀계 이성질체의 동시 검출이 가능한 전도성 고분자 전극을 이용한 전기화학적 센서 및 그 제조방법
Thangamuthu et al. Silicomolybdate‐Incorporated‐Glutaraldehyde‐Cross‐Linked Poly‐l‐Lysine Film Modified Glassy Carbon Electrode as Amperometric Sensor for Bromate Determination
Li et al. Polyaniline/prussian blue composite film electrochemical biosensors for cholesterol detection
JP3207676B2 (ja) カーボン電極およびその製造方法