RU2373580C1 - Способ моделирования острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте - Google Patents
Способ моделирования острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте Download PDFInfo
- Publication number
- RU2373580C1 RU2373580C1 RU2008127901/14A RU2008127901A RU2373580C1 RU 2373580 C1 RU2373580 C1 RU 2373580C1 RU 2008127901/14 A RU2008127901/14 A RU 2008127901/14A RU 2008127901 A RU2008127901 A RU 2008127901A RU 2373580 C1 RU2373580 C1 RU 2373580C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- experiment
- days
- animals
- immunization
- cycles
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной нефрологии, и может быть использовано для моделирования острого постстрептококкового гломерулонефрита. Для этого белой беспородной крысе вводят внутрибрюшинно 1 раз в день штамм Streptococcus pyogenes Dick-I с концентрацией 109 КОЕ/мл, в разведении 1:9, в дозе 0, 5 мл взвеси. Введение осуществляют по следующей схеме - 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами. Способ обеспечивает повышение воспроизводимости, сокращение времени эксперимента, удешевление методики, а также прост в исполнении.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии, патологической физиологии и экспериментальной медицине, и может быть использовано для изучения патогенеза, морфогенеза острого постстрептококкового гломерулонефрита и доклинического исследования эффективности новых лекарственных препаратов.
Пиогенные стрептококки относятся к наиболее распространенным возбудителям постинфекционных поражений сердца и почек. Поэтому воспроизведение в эксперименте адекватной модели постстрептококкового гломерулонефрита с целью доклинической апробации новых лекарственных средств является актуальной задачей практического здравоохранения. Наиболее близким аналогом является способ иммунизации кроликов весом 2,0-2,5 кг инактивированным штаммом Streptococcus pyogenes в течение 6-8 недель (Тотолян А.А., Бурова Л.А. Критический анализ предполагаемых механизмов патогенеза постстрептококкового гломерулонефрита // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия, 2001, Том 3, №4, стр.316-323; Бурова Л.А., Гаврилова Е.А., Пигаревский П.В., Селиверстова В.Г, Нагорнев В.А., Шален К., Тотолян А.А. Способность стрептококков группы А типа М 12 связывать иммунные комплексы и их роль в патогенезе постстрептококкового гломерулонефрита // Медицинская Иммунология, 2007, Том 8, №5-6, стр.623-630). Недостатками известного способа являются дороговизна исследования, длительность и сложность проводимого эксперимента.
Технический результат: упрощение способа моделирования острого постстрептококкового гломерулонефрита на животных, повышение воспроизводимости, сокращение времени эксперимента и удешевление методики.
Указанные задачи достигаются путем многократной иммунизации белых беспородных крыс нефритогенным штаммом пиогенного стрептококка - Dick-I Streptococcus pyogenes (ГНИИ стандартизации и контроля им. Л.А.Тарасевича) по новой схеме.
Способ осуществляют следующим образом. Белых беспородных крыс иммунизируют инактивированной бактериальной суспензией эталонного штамма Dick-I Streptococcus pyogenes (ГНИИ стандартизации и контроля им. Л.А.Тарасевича). Антигенную суспензию для иммунизации животных получают путем культивирования штамма на мясопептонном бульоне в аэробных условиях при температуре +37°С, центрифугирования суточной бульонной культуры Streptococcus pyogenes в течение 10-15 минут при скорости 3000 оборотов в минуту и последующего удаления супернатанта. Полученную взвесь концентрацией 109 КОЕ/мл, определяемой на КФК-3 (оптическая плотность 0,028, длина волны 540 нм, кювета - 1,060 мм), инактивируют при +56°С в течение 30 минут. Из расчета 50 мкл взвеси на 1 животное готовят разведение: 9 мл стерильного физиологического раствора и 1 мл взвеси (на 1 животное приходится 500 мкл (0,5 мл) полученной вновь взвеси антигенной суспензии). Иммунизацию животных проводят внутрибрюшинно 1 раз в день по схеме: 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами.
Эксперимент выполнен на 30 животных - самцах и самках беспородных белых крыс четырехмесячного возраста, содержащихся в стандартных условиях вивария. Все эксперименты проведены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N 755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.
Животные были разделены на 2 экспериментальные группы: I группа - контрольная (интактные животные); II группа - моделирование острого гломерулонефрита.
I группа - контрольная (интактные животные), n=10;
II группа - животные, иммунизированные бактериальной суспензией штамма Streptococcus pyogenes, n=20. II группа (опытная) была подразделена на 2 подгруппы, различающихся сроком забора органов (21 и 31 день).
Перед началом эксперимента у животных контрольной (интактной) и опытной группы проводили анализ разовой порции мочи на белок, используя качественную реакцию с 20% сульфосалициловой кислотой. В конце каждого цикла иммунизации у животных контрольной и опытной групп также исследовали разовую порцию мочи на белок. По окончании опыта животных выводили из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Внутренние органы забирали для проведения гистологического исследования.
Результаты экспериментов подвергнуты статистической обработке с применением компьютерных программ Microsoft Excel и Biostat.
У животных контрольной группы не было выявлено лабораторных и гистологических признаков развития гломерулонефрита. В течение всего эксперимента в моче животных этой группы белок не выявлялся.
При проведении гистологического исследования в почках четко выявлялась капсула почки, корковое вещество с почечными тельцами и извитыми канальцами, мозговое вещество почки. Хорошо визуализировались сосочек и почечная лоханка, выстланная переходным эпителием. Сосудистые клубочки не были изменены, капсула не утолщена. Между почечными тельцами находились проксимальные и дистальные почечные канальцы с типичной структурой. Прямые канальцы в мозговом веществе и собирательные трубочки - без особенностей.
При исследовании мочи на содержание белка у 90% иммунизированных животных к 21 дню иммунизации был положительный результат.
На секции отмечались макроскопические признаки застойной сердечной недостаточности: общее венозное полнокровие; увеличение печени (печень плотная, темная); инъецированность сосудов брыжейки, имелись небольшие кровоизлияния.
При проведении гистологического исследования аутопсийного материала, полученного от иммунизированных животных к 21 дню эксперимента, в ткани почек выявлялось полнокровие сосудов коркового и мозгового слоев, большое количество увеличенных гиперцеллюлярных клубочков с резко уменьшенным мочевым пространством, инфильтрированных нейтрофильными гранулоцитами и лимфоцитами, с мезангиальной пролиферацией. Отмечалось сужение просветов капилляров за счет пролиферации эндотелиальных и мезангиальных клеток, что обусловило лапчатость отдельных клубочков. Таким образом, в этом сроке отмечалась экссудативная фаза воспаления в клубочках. В проксимальных и дистальных канальцах нефронов имелись участки белковой дистрофии эпителия, воспалительная инфильтрация стромы преимущественно лимфоцитами с примесью небольшого количества нейтрофилов и гистиоцитов.
При проведении гистологического исследования аутопсийного материала, полученного от иммунизированных животных к 31 дню эксперимента, в клубочках начинали преобладать процессы пролиферации, что выражалось в появлении наряду с мезангиальной и эндотелиальной пролиферацией отложения нитей фибрина и белковых масс в капсуле Боумена, сращении капилляров клубочка с капсулой и образовании микрополулуний в отдельных клубочках. Имелся тромбоз капилляров клубочков. Их базальная мембрана была утолщена. В проксимальных и дистальных канальцах отмечалась белковая дистрофия эпителия, в строме - воспалительная инфильтрация нейтрофильными гранулоцитами и лимфоцитами.
Воспроизводимость способа составила 100%. У всех животных после иммунизации развивались гистологические признаки острого гломерулонефрита.
Примеры конкретного выполнения
Пример 1. Самке беспородной белой крысы (№3), массой 164,0 г, в течение 3 недель внутрибрюшинно 1 раз в день вводили микробную суспензию культуры Streptococcus pyogenes по следующей схеме: 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами. В конце каждого цикла иммунизации проводилась качественная реакция с 20% сульфосалициловой кислотой для определения белка в разовых порциях мочи. В конце 3-й недели иммунизации животное под эфирным наркозом было выведено из эксперимента, почки фиксировали в нейтральном формалине с целью последующего комплексного морфологического исследования.
К концу 2 недели иммунизации в моче животного отмечалась положительная реакция на белок.
При исследовании в проходящем свете образцов почечной ткани, окрашенных гематоксилином и эозином, выявлялось полнокровие сосудов коркового и мозгового слоев, большое количество увеличенных гиперцеллюлярных клубочков с резко уменьшенным мочевым пространством, инфильтрированных нейтрофильными гранулоцитами и лимфоцитами, с мезангиальной пролиферацией. Отмечалось сужение просветов капилляров за счет пролиферации эндотелиальных и мезангиальных клеток. В проксимальных и дистальных канальцах нефронов имелись участки белковой дистрофии эпителия, воспалительная инфильтрация стромы преимущественно лимфоцитами с примесью небольшого количества нейтрофилов и гистиоцитов.
Пример 2. Самцу белой беспородной крысы (№5), массой 155,0 г, в течение 3 недель внутрибрюшинно 1 раз в день вводили микробную суспензию культуры Streptococcus pyogenes по следующей схеме: 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами. На 31 день иммунизации животное под эфирным наркозом было выведено из эксперимента, почки фиксировали в нейтральном формалине с целью последующего комплексного морфологического исследования.
При исследовании разовой порции мочи на белок при помощи качественной реакции с 20% сульфосалициловой кислотой выявлена положительная реакция в конце 2 недели иммунизации.
При проведении гистологического исследования аутопсийного материала в клубочках наряду с мезангиальной и эндотелиальной пролиферацией наблюдались отложения нитей фибрина и белковых масс в капсуле Боумена, сращение капилляров клубочка с капсулой и образование микрополулуний в отдельных клубочках. В части клубочков имелся тромбоз капилляров. Базальная мембрана капилляров клубочка была утолщена. В проксимальных и дистальных канальцах отмечалась белковая дистрофия эпителия, в строме - воспалительная инфильтрация нейтрофильными гранулоцитами и лимфоцитами.
Предлагаемый способ позволяет изучить патогенез, морфогенез острого постстрептококкового гломерулонефрита и проводить доклинические исследования эффективности новых лекарственных препаратов для лечения острого постстрептококкового гломерулонефрита у людей.
Claims (1)
- Способ моделирования острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте путем многократного введения штамма Streptococcus pyogenes лабораторному животному, отличающийся тем, что в качестве лабораторного животного используют белую беспородную крысу, которой вводят внутрибрюшинно 1 раз в день штамм Streptococcus pyogenes Dick-I с концентрацией 109 КОЕ/мл, в разведении 1:9, в дозе 0,5 мл взвеси по следующей схеме - 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008127901/14A RU2373580C1 (ru) | 2008-07-08 | 2008-07-08 | Способ моделирования острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008127901/14A RU2373580C1 (ru) | 2008-07-08 | 2008-07-08 | Способ моделирования острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2373580C1 true RU2373580C1 (ru) | 2009-11-20 |
Family
ID=41477995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008127901/14A RU2373580C1 (ru) | 2008-07-08 | 2008-07-08 | Способ моделирования острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2373580C1 (ru) |
-
2008
- 2008-07-08 RU RU2008127901/14A patent/RU2373580C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| NORDSTRAND A. et al. Streptokinase as a mediator of acute post-streptococcal glomerulonephritis in an experimental mouse model. Infect Immun. 1998 Jan; 66(1):315-21. HOLM SE et al. A streptococcal plasminogen activator in the focus of infection and in the kidneys during the initial phase of experimental streptococcal glomerulonephritis. APMIS. 1988 Dec; 96(12):1097-108. * |
| БУРОВА Л.А. и др.Способность стрептококков группы А типа М 12 связывать иммунные комплексы и их роль в патогенезе пострептококкового гломерулонефрита. Медицинская иммунология. 2007. т.8, №5-6, с.623-630. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Montgomery et al. | Plasma-derived C1 esterase inhibitor for acute antibody-mediated rejection following kidney transplantation: results of a randomized double-blind placebo-controlled pilot study | |
| Kim et al. | Role of CD11b+ macrophages in intraperitoneal lipopolysaccharide-induced aberrant lymphangiogenesis and lymphatic function in the diaphragm | |
| Garg et al. | Glomerular proteinuria: a complex interplay between unique players | |
| US20170198027A1 (en) | Process of afod and afcc and manufacturing and purification processes of proteins | |
| Mellors et al. | Analytical pathology: II. Histopathologic demonstration of glomerular-localizing antibodies in experimental glomerulonephritis | |
| CN109674819A (zh) | 胎盘间充质干细胞制剂及其治疗硬化病的用途 | |
| CN109646458A (zh) | 使用胎盘间充质干细胞制剂治疗硬化病的方法 | |
| Okada et al. | Selective depletion of fibroblasts preserves morphology and the functional integrity of peritoneum in transgenic mice with peritoneal fibrosing syndrome | |
| Aamelfot et al. | Characterisation of a monoclonal antibody detecting A tlantic salmon endothelial and red blood cells, and its association with the infectious salmon anaemia virus cell receptor | |
| He et al. | Renal macrophages monitor and remove particles from urine to prevent tubule obstruction | |
| Herrera et al. | Animal models of light chain deposition disease provide a better understanding of nodular glomerulosclerosis | |
| Stenvinkel et al. | Implantation of autologous selected renal cells in diabetic chronic kidney disease stages 3 and 4—clinical experience of a “first in human” study | |
| FI115383B (fi) | Menetelmä Anti-inflammatorisen tekijän eristämiseksi | |
| RU2373580C1 (ru) | Способ моделирования острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте | |
| WO2020030091A1 (zh) | 用于治疗组织坏死或改善心脏功能的药物 | |
| FI120574B (fi) | Anti-inflammatorinen tekijä, menetelmä sen eristämiseksi ja sen käyttö | |
| Sutherland | THE SYDNEY FUNNEL–WEB SPIDER (ATRAX ROBUSTUS) 2. FRACTIONATION OF THE FEMALE VENOM INTO FIVE DISTINCT COMPONENTS | |
| CN102499177A (zh) | 一种IgAN肾小球硬化大鼠模型的用途 | |
| Ribatti et al. | Mast cell populations in the chick embryo lung and their response to compound 48/80 and dexamethasone | |
| CN105315364B (zh) | 胶原蛋白vi疫苗预防动脉粥样硬化 | |
| Herrera et al. | Phenotypic plasticity of mesenchymal stem cells is crucial for mesangial repair in a model of immunoglobulin light chain-associated mesangial damage | |
| Khalaniia et al. | Pathomorphology of peripheral organs of immunogenesis in cats with spontaneous feline infectious peritonitis | |
| CN102499179A (zh) | 一种IgAN肾小球硬化大鼠模型的建立方法 | |
| RU2384893C1 (ru) | Способ моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте | |
| CN104650221B (zh) | 大容量血清抗体的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100709 |