RU2384893C1 - Способ моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте - Google Patents
Способ моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте Download PDFInfo
- Publication number
- RU2384893C1 RU2384893C1 RU2008142323/14A RU2008142323A RU2384893C1 RU 2384893 C1 RU2384893 C1 RU 2384893C1 RU 2008142323/14 A RU2008142323/14 A RU 2008142323/14A RU 2008142323 A RU2008142323 A RU 2008142323A RU 2384893 C1 RU2384893 C1 RU 2384893C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nephrotoxic
- experiment
- chronic
- suspension
- modelling
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте. Для этого от беспородной белой крысы получают суспензию почечного антигена. Затем проводят иммунизацию морской свинки полученной суспензией почечного антигена с полным адъювантом Фрейнда. Получают нефротоксическую сыворотку. После чего нефротоксическую сыворотку внутрибрюшинно вводят беспородной белой крысе. При этом введение осуществляют по схеме: двухкратно внутрибрюшинно 1 раз в сутки с интервалом между иммунизацией в 24 часа из расчета 100 мкл нефротоксической сыворотки на 100 г массы животного. Заявленный способ позволяет упростить моделирование хронического нефротоксического нефрита, удешевить методику, создать воспроизводимую модель хронического нефротоксического нефрита.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии, патологической физиологии и экспериментальной медицине. Может быть использовано для изучения патогенеза хронического гломерулонефрита и доклинического исследования эффективности новых лекарственных препаратов при данной патологии.
На сегодняшний день известно несколько моделей хронического нефротоксического гломерулонефрита у экспериментальных животных, воспроизводимого путем введения экспериментальному животному нефротоксической сыворотки.
Наиболее близким аналогом является способ воспроизведения модели нефротоксического нефрита у белых беспородных крыс путем введения экспериментальному животному нефротоксической сыворотки, полученной от иммунизированных суспензией почечного антигена беспородной белой крысы кроликов (М.В.Дикал, Ю.Е.Роговый. Роль препарата GA-40 в коррекции тубулоинтерстициального синдрома при хроническом нефрите Масуги // Научно-практический медицинский журнал «Клиническая анатомия и оперативная хирургия», 2006, Т 5, №3, с 10-14).
Недостатками известного способа являются сложность проводимого эксперимента и дороговизна исследования. Для приготовления нефротоксической сыворотки используются кролики, работа с которыми является трудоемкой и дорогостоящей. Кроме того, в воспроизведенной модели отсутствует описание морфологических изменений, характерных для хронического нефротоксического нефрита. Авторы описывают изменения лишь в канальцах и интерстициальной ткани почек, не описывают патологические изменения в клубочках. Не отмечена М.В.Дикалом и Ю.Е.Роговым процентная воспроизводимость эксперимента.
Технический результат: упрощение способа моделирования хронического нефротоксического нефрита, удешевление методики, создание воспроизводимой модели.
Указанные задачи достигаются путем иммунизации белых беспородных крыс нефротоксической сывороткой, получаемой в результате предшествующей иммунизации морской свинки суспензией почечного антигена беспородной белой крысы, по схеме: двухкратно внутрибрюшинно 1 раз в сутки с интервалом между иммунизацией в 24 часа, из расчета 100 мкл нефротоксической сыворотки на 100 г массы животного.
Способ осуществляют следующим образом.
Эксперимент выполнен на (14) животных - самцах и самках беспородных белых крыс четырехмесячного возраста, содержащихся в стандартных условиях вивария. Все эксперименты проведены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N 755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.
Животные были разделены на экспериментальные группы:
I группа - контрольная (интактные животные), n=7;
II группа - моделирование хронического нефротоксического нефрита, n=7.
Для получения нефротоксической сыворотки берут самку белой беспородной крысы, массой 230 г. Животное содержат в стандартных условиях вивария: стандартное содержание в пластиковых клетках с мелкой древесной стружкой, стандартный рацион вивария. Сразу после декапитации животного, проведенной под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии, почки перфузируют in situ стерильной охлажденной средой 199 до получения равномерного серо-коричневого цвета. После этого их отсекают от почечной ножки и переносят на стерильный лоток. Все последующие манипуляции выполняются при температуре +4°С. Отделив от капсулы, почку разрезают сагиттально, выделяют корковый слой (масса коркового слоя - 369 мг). Корковый слой суспендируют в стерильной ступке, дополнительно измельчают в ультразвуковом дезинтеграторе УЗДН - 2Т, в режиме 44 мГц, в течение 10 минут, затем переносят суспензию в центрифужный стаканчик, добавляя охлажденный физиологический раствор до 10 мл и мертиолят 1 мг в качестве антисептика. Полученную суспензию центрифугируют на холоде трехкратно по 3 минуты 2000 оборотов в минуту, каждый раз удаляя супернатант и доводя суспензию до 10 мл охлажденным физиологическим раствором. После этого суспензию центрифугируют при 5000 оборотов в минуту в течение 10 минут. Осадок переносят на стерильную фольгу и взвешивают на торсионных весах. Масса суспензионного осадка составила 370 мг.
Для приготовления антигена берут 200 мг осадка из расчета 1,0 мл полного адъюванта Фрейнда на 20 мг осадка. Полученную взвешенную антигенную суспензию коркового слоя почки крысы хранят при температуре 0°С+4°С.
Проводят иммунизацию морских свинок (n=3), из расчета 100 мкл полученной антигенной суспензии на 100 г массы тела животного, по следующей схеме: трехкратно внутрибрюшинно 1 раз в сутки с интервалом между иммунизацией 24 часа.
Спустя 30 дней от начала иммунизации морских свинок выводят из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Сыворотку забирают из полостей сердца сразу после биологической смерти животного, центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 10 минут до получения прозрачной жидкости. Полученную нефротоксическую сыворотку хранят в течение последующих 2-х дней при температуре +4°С.
Иммунизацию белых беспородных крыс проводят по следующей схеме: двухкратно внутрибрюшинно с интервалом в 24 часа, из расчета 100 мкл нефротоксической сыворотки на 100 г массы тела животного.
Перед началом эксперимента у животных контрольной (интактной) и опытной группы проводят анализ разовой порции мочи на белок, используя качественную реакцию с 20% сульфосалициловой кислотой. Через 1 час после иммунизации и затем последующего эксперимента в динамике проводят контрольное исследование мочи на белок.
Через 14 дней от начала иммунизации животных выводят из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Внутренние органы забирают для проведения гистологического исследования. Препараты приготовлены по общепринятым методикам, окрашивают гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону, нитратом серебра по Футу.
Результаты экспериментов подвергнуты статистической обработке с применением компьютерных программ Microsoft Excel и Biostat.
У животных контрольной группы не было выявлено лабораторных и гистологических признаков развития нефрита. В течение всего эксперимента в моче животных этой группы белок не выявлялся.
При проведении гистологического исследования в почках четко выявлялась капсула почки, корковое вещество с почечными тельцами и извитыми канальцами, мозговое вещество почки. Прямые канальцы в мозговом веществе и собирательные трубочки были без особенностей. Визуализировались сосочки и почечная лоханка, выстланная переходным эпителием. Капсула Боумена не утолщена, сосудистые клубочки нефрона не были изменены. Проксимальные и дистальные почечные канальцы находились между почечными тельцами, их структура была типичной.
При проведении иммунизации нефротоксической сывороткой у животных наблюдали выраженную протеинурию в первые сутки после иммунизации.
При проведении гистологического исследования аутопсийного материала, полученного от иммунизированных животных (крыса, иммунизированная нефротоксической сывороткой, полученной от морской свинки), в ткани почек выявлялось выраженное полнокровие сосудов коркового и мозгового слоев. В клубочках отмечалась пролиферация мезангиальных клеток. Клубочки увеличены в размерах, в ряде случаев имелись спайки капиллярных петель с капсулой Боумена, что значительно ограничивало объем мочевого пространства. У части клубочков отмечалось утолщение капсулы клубочка и стенок отдельных капилляров, выявляемое при окрашивании препаратов нитратом серебра по Футу. Капиллярные петли полнокровны, отдельные капилляры содержали тромбы.
В проксимальных и дистальных канальцах резко выражена гидропическая дистрофия, а также атрофия эпителия.
Таким образом, в гистологических препаратах почек иммунизированных животных наблюдалась морфологическая картина, соответствующая патоморфологическим изменениям, характерным для мезангиально-капиллярного гломерулонефрита человека.
Воспроизводимость эксперимента составила 100%, у всех иммунизированных животных отмечалась гистологическая картина хронического нефротоксического гломерулонефрита.
Примеры конкретного выполнения.
Пример 1. Самке беспородной белой крысы (№4), массой 205,0 г внутрибрюшинно вводили нефротоксическую сыворотку, полученную от морской свинки, иммунизированной суспензией почечного антигена беспородной белой крысы, по схеме: двухкратно 1 раз в сутки с интервалом между иммунизацией в 24 часа, из расчета 100 мкл нефротоксической сыворотки на 100 г массы животного.
Перед началом эксперимента у экспериментального животного проводили анализ разовой порции мочи на белок, используя качественную реакцию с 20% сульфосалициловой кислотой. Через 1 час после иммунизации и затем последующего эксперимента в динамике проводили контрольное исследование мочи на белок.
По окончании опыта животное вывели из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Внутренние органы забрали для проведения гистологического исследования.
При исследовании в проходящем свете образцов почечной ткани выявлено выраженное полнокровие сосудов коркового и мозгового слоев. Практически все клубочки увеличены в размерах, во всех отмечалась мезангиальная пролиферация. Объем мочевого пространства был значительно уменьшен. В нескольких клубочках имелись спайки капиллярных петель с капсулой Боумена. Во всех клубочках отмечалось утолщение капсулы и стенок отдельных капилляров, выявляемое при окрашивании препаратов нитратом серебра по Футу, полнокровие капиллярных петель.
В проксимальных и дистальных канальцах отмечалась резко выраженная гидропическая дистрофия и атрофия эпителия.
Пример 2. Самцу беспородной белой крысы (№2), массой 220,0 г внутрибрюшинно вводили нефротоксическую сыворотку, полученную путем иммунизации морской свинки суспензией почечного антигена беспородной белой крысы, по схеме: двухкратно 1 раз в сутки с интервалом между иммунизацией 24 часа, из расчета 100 мкл нефротоксической сыворотки на 100 г массы животного.
Перед началом эксперимента у экспериментального животного проводили анализ разовой порции мочи на белок, используя качественную реакцию с 20% сульфосалициловой кислотой. Через 1 час после иммунизации и затем через 1 день проводили контрольное исследование мочи на белок.
По окончании опыта животное вывели из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Внутренние органы забрали для проведения гистологического исследования.
При исследовании в проходящем свете образцов почечной ткани выявлялось ярко выраженное полнокровие сосудов коркового и мозгового слоев. Большинство клубочков увеличены в размерах с выраженной мезангиальной пролиферацией. Объем мочевого пространства в клубочках значительно уменьшен в результате пролиферативных изменений и спаек капиллярных петель с капсулой Боумена. Стенки капилляров были утолщены, что выявлялось при окрашивании препаратов нитратом серебра по Футу. Сами капиллярные петли полнокровны. Отмечались выраженные дистрофические и атрофические изменения эпителия в канальцах.
Пример 3. Самцу беспородной белой крысы (№7), массой 230,0 г внутрибрюшинно вводили нефротоксическую сыворотку, полученную путем иммунизации морской свинки суспензией почечного антигена беспородной белой крысы, по схеме: двухкратно 1 раз в сутки с интервалом между иммунизацией 24 часа, из расчета 100 мкл нефротоксической сыворотки на 100 г массы животного.
Перед началом эксперимента у экспериментального животного проводили анализ разовой порции мочи на белок, используя качественную реакцию с 20% сульфосалициловой кислотой. Анализ разовой порции мочи на белок, используя качественную реакцию с 20% сульфосалициловой кислотой, проводили перед началом эксперимента последующего эксперимента в динамике.
По окончании опыта животное вывели из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Внутренние органы забрали для проведения гистологического исследования.
При исследовании в проходящем свете образцов почечной ткани клубочки увеличены в размерах, вследствие выраженной пролиферация мезангиальных клеток. Объем мочевого пространства был значительно уменьшен. В нескольких клубочках имелись спайки капиллярных петель с капсулой Боумена. Во всех клубочках отмечалось утолщение капсулы и стенок отдельных капилляров, выявляемое при окрашивании препаратов нитратом серебра по Футу, полнокровие и тромбоз капиллярных петель.
В проксимальных и дистальных канальцах отмечалась резко выраженная гидропическая дистрофия и атрофия эпителия.
Claims (1)
- Способ моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте путем внутрибрюшинного введения нефротоксической сыворотки лабораторному животному, отличающийся тем, что нефротоксическую сыворотку получают путем иммунизации морской свинки суспензией почечного антигена, полученного от беспородной белой крысы, с полным адъювантом Фрейнда, и вводят беспородной белой крысе по схеме: 2-кратно внутрибрюшинно 1 раз в сутки с интервалом между иммунизацией в 24 ч, из расчета 100 мкл нефротоксической сыворотки на 100 г массы животного.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008142323/14A RU2384893C1 (ru) | 2008-10-24 | 2008-10-24 | Способ моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008142323/14A RU2384893C1 (ru) | 2008-10-24 | 2008-10-24 | Способ моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2384893C1 true RU2384893C1 (ru) | 2010-03-20 |
Family
ID=42137508
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008142323/14A RU2384893C1 (ru) | 2008-10-24 | 2008-10-24 | Способ моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2384893C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102750863A (zh) * | 2012-06-25 | 2012-10-24 | 关真民 | 球—管平衡失调演示模型 |
RU2616213C2 (ru) * | 2015-07-10 | 2017-04-13 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ коррекции дисфункции факторов врожденного и адаптивного иммунитета при хронической почечной недостаточности в эксперименте |
RU2793548C1 (ru) * | 2022-07-11 | 2023-04-04 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ профилактики нефротоксического действия хрома у крыс в эксперименте |
-
2008
- 2008-10-24 RU RU2008142323/14A patent/RU2384893C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ДИКАЛ М.В. и др. Роль препарата GA-40 в коррекции тубулоинтерстициального синдрома при хроническом нефрите Масуги. - Клиническая анатомия и оперативная хирургия, 2006, т.5, №3, с.10-14. CHEN A. et al. Glomerular immune deposits in experimental IgA nephropathy. A continuum of circulating and in situ formed immune complexes. // Am J Pathol. - 1988. - Jan; 130 (1). - p.216-222. DIXON F.J. et al. Experimental glomerulonephritis // The J. of Exp. Med. - 1961.- vol.113. - p.899-907. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102750863A (zh) * | 2012-06-25 | 2012-10-24 | 关真民 | 球—管平衡失调演示模型 |
RU2616213C2 (ru) * | 2015-07-10 | 2017-04-13 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ коррекции дисфункции факторов врожденного и адаптивного иммунитета при хронической почечной недостаточности в эксперименте |
RU2793548C1 (ru) * | 2022-07-11 | 2023-04-04 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ профилактики нефротоксического действия хрома у крыс в эксперименте |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Swamydas et al. | Isolation of mouse neutrophils | |
Iyengar | Elemental analysis of biological systems: biological, medical, environmental, compositional, and methodological aspects | |
US20210205372A1 (en) | Method and Composition for Promoting Cell Growth and Tissue Repair | |
Coombs et al. | Haemolytic disease of newborn foals due to iso-immunization of pregnancy | |
Xu et al. | Anti-rheumatoid arthritic effects of Saussurea involucrata on type II collagen-induced arthritis in rats | |
RU2384893C1 (ru) | Способ моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте | |
Tausk | The emergence of endocrinology | |
Chan et al. | Assessment of ex vivo transport function in isolated rodent brain capillaries | |
Spangberg | The study of biological properties of endodontic biomaterials | |
US20210308191A1 (en) | Drug Used for Treating Tissue Necrosis or for Improving Cardiac Function | |
CN115414330A (zh) | 华佗再造丸在制备治疗脑小血管病的药物中的应用 | |
Laflamme et al. | Bone marrow chimeras to study neuroinflammation | |
RU2410761C1 (ru) | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у крыс | |
RU2383063C1 (ru) | Способ моделирования хронического гломерулонефрита в эксперименте | |
RU2373583C1 (ru) | Способ моделирования хронического мембранозного гломерулонефрита в эксперименте | |
Kulikov et al. | Cardioprotective Effect of Soy Protein on a High-Salt Diet in Cynomolgus Monkeys | |
Nokhbatolfoghahai et al. | Teratogenic effect of lithium carbonate in early development of BALB/c mouse | |
King et al. | Assessing islet transplantation outcome in mice | |
Nagi et al. | Gold nephropathy in rabbits using an indigenous preparation: A morphological study | |
Zhang et al. | Testing of Schistosoma mansoni vaccine targets | |
Bobyk et al. | Experimental model of autoimmune myosin-induced myocardium injury | |
Ganieva et al. | EXPERIMENTAL STUDY OF THE CHRONIC TOXICITY OF THE TRIBULEPIL COLLECTION | |
CN117243932A (zh) | 东北贯众素在制备治疗骨关节炎药物中的应用 | |
CN116785413A (zh) | Trpm7的激酶结构域m7ck在制备ad治疗药物中的应用 | |
Kolomeets et al. | Complex phytochemical preparation (Herba centaurii, Radix levistici and Folia rosmarini) Protects Kidney during Glomerulonephritis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20101025 |