CN115414330A - 华佗再造丸在制备治疗脑小血管病的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药技术领域，特别是涉及华佗再造丸的新应用，尤其涉及华佗再造丸在制备治疗脑小血管病的药物中的应用。相对于传统技术，本发明的有益效果包括：本发明将华佗再造丸用作脑小血管病的治疗药物，发现华佗再造丸能够促进胼胝体髓鞘修复再生和脑血流量的恢复，增加胼胝体区髓鞘蛋白表达和减少轴突完整性的破坏，促进脑血流量的恢复、改善脑灌注不足，显著减轻脑白质损伤。本发明为脑小血管病的治疗提供新手段。

Description

华佗再造丸在制备治疗脑小血管病的药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及华佗再造丸的新应用，尤其涉及华佗再造丸在制备治疗脑小血管病的药物中的应用。
背景技术
脑小血管病(cerebral small vessel disease，CSVD)是临床上常见的一类与年龄相关的脑血管疾病，指由各种病因影响脑小血管，特别是小静脉、静脉、毛细血管、动脉血管和小动脉的病理变化导致的各种临床和神经影像学结果。脑白质高信号(white matterhypertensities，WMH)是CSVD的影像标志物之一。WMH患病率极高，与认知障碍的发生发展密切相关，但其影像表现及临床症状的异质性为早期发现、早期诊断带来了困难。目前，关于WMH发生发展的病理生理学机制研究至今尚未完全阐明，同时也没有针对早期干预、药物开发的潜在靶点的研究等。因此，临床上针对脑小血管病还缺乏有效治疗手段。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明实施例的主要目的包括提供华佗再造丸的新应用，主要是将涉及华佗再造丸用于制备治疗脑小血管病的药物，为脑小血管病的治疗提供有效手段。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
本发明提供华佗再造丸在制备治疗脑小血管病的药物中的应用。
在本发明的一些实施方式中，治疗是指给予受试者有效治疗剂量的所述药物的条件下，所述受试者的认知损伤得到显著恢复。
在本发明的一些实施方式中，治疗是指给予受试者有效治疗剂量的所述药物的条件下，所述受试者的脑白质损伤显著减轻。
在本发明的一些实施方式中，所述受试者的脑血流量显著增加。
在本发明的一些实施方式中，所述受试者的髓鞘厚度显著增加。
在本发明的一些实施方式中，所述受试者的髓鞘蛋白表达量显著增加。
在本发明的一些实施方式中，所述髓鞘蛋白为MBP(髓鞘碱性蛋白)和MAG(髓鞘相关醣蛋白)中的一种或者多种。
在本发明的一些实施方式中，所述受试者为哺乳动物。
在本发明的一些实施方式中，所述哺乳动物为人或者鼠。
在本发明的一些实施方式中，所述药物的剂型为口服液。
相对于传统技术，本发明的有益效果包括：
本发明将华佗再造丸用作脑小血管病的治疗药物，发现华佗再造丸能够促进胼胝体髓鞘修复再生和脑血流量的恢复，增加胼胝体区髓鞘蛋白表达和减少轴突完整性的破坏，促进脑血流量的恢复、改善脑灌注不足，显著减轻脑白质损伤。本发明为脑小血管病的治疗提供新新手段，也符合当今研发治疗脑小血管疾病药物的决策。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为矿场实验结果统计图；图中：A为各组小鼠在角落的时间统计图，B为各组小鼠在中心的时间统计图，C为各组小鼠移动速度统计图，D各组小鼠移动总距离统计图；
图2为水迷宫实验结果统计图；图中：A各组小鼠在逃避潜伏期的时间统计图，B为各组小鼠在跨越平台的次数统计图，C为各组小鼠在目标象限停留时间统计图，D为各组小鼠游泳速度统计图；
图3为各组小鼠y型迷宫实验结果统计图；
图4为各组小鼠新物体识别实验结果统计图；
图5为各组小鼠不同组间脑灌注血流量代表图；
图6为不同组间胼胝体区髓鞘变化图；图中：A为各组小鼠胼胝体区电子显微镜代表图，B为各组小鼠轴突的直径统计图，C为各组小鼠整个有髓鞘纤维的直径统计图，D为各组小鼠G-ratio(轴突的直径/整个有髓鞘纤维的直径)统计图；
图7为不同组间黑金染色代表图；
图8为不同组间免疫荧光染色代表图；图中：A为各组MAG免疫荧光代表图，B为MBP免疫荧光代表图，C为各组MAG WB蛋白代表图，D为MBP WB蛋白代表图。
具体实施方式
下面结合附图、实施方式和实施例，对本发明作进一步详细的说明。应理解，这些实施方式和实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，提供这些实施方式和实施例的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。还应理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式和实施例，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。此外，在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为充分地理解，应理解，本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述实施方式和实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
本发明中涉及“多个”、“多种”、“多次”、“多元”等，如无特别限定，指在数量上大于2或等于2。例如，“一种或多种”表示一种或大于等于两种。
本文中所使用的“其组合”、“其任意组合”、“其任意组合方式”等中包括所列项目中任两个或任两个以上项目的所有合适的组合方式。
本文中，“合适的组合方式”、“合适的方式”、“任意合适的方式”等中所述“合适”，以能够实施本发明的技术方案、解决本发明的技术问题、实现本发明预期的技术效果为准。
本文中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本发明保护范围的限制。
本发明中，“进一步”、“更进一步”、“特别”等用于描述目的，表示内容上的差异，但并不应理解为对本发明保护范围的限制。
本发明中，“可选地”、“可选的”、“可选”，指可有可无，也即指选自“有”或“无”两种并列方案中的任一种。如果一个技术方案中出现多处“可选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“可选”各自独立。
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
华佗再造丸，为治风剂，具有活血化瘀，化痰通络，行气止痛之功效，临床用于痰瘀阻络之中风恢复期和后遗症，症见半身不遂、拘挛麻木、口眼歪斜、言语不清。关于华佗再造丸药理作用的报道有：增加脑部血流量；抗凝血，抗血栓，改善血液流变性，抑制家兔血小板聚集；选择性增加颈总动脉、颈内动脉血流量；增加主动脉血流量，心脏指数，每搏博输出量和每搏博指数，提高心脏做功效率；促进脑出血后血肿病灶的清除与修复，有利于改善临床偏瘫症状；改善心功能；增加离体心脏冠状动脉的血流量；提高机体免疫功能；降低整体动物的耗氧量；改善脑梗塞动物的神经行为障碍；缩小脑梗塞动物的脑梗塞范围；降低脑梗塞动物的血浆内皮素含量，提高血清SOD含量。华佗再造丸是一种成品复合药物，且具有多靶点作用。目前，华佗再造丸已被报道用于脑卒中、阿尔茨海默病、高血脂症、动脉粥样硬化、稳定性劳累型心绞痛等，尚未报道华佗再造丸在脑小血管病的研究。
相对于华佗再造丸已经报道的适用病症，临床上的脑小血管病具有一定的特殊性，包括脑白质高信号(white matter hypertensities，WMH)是CSVD的影像标志物之一。脑白质病变是由正常白质逐渐发生病理变化的一个动态进展的过程，导致WMH的病因有很多。脑白质病变的控制对脑小血管病的治疗至关重要。
发明人在对脑小血管病进行大量研究的基础上，尝试将华佗再造丸用作治疗药物，结果发现其能够显著减轻脑白质损伤，并且恢复认知损伤。本发明的技术方案包括：
本发明提供华佗再造丸在制备治疗脑小血管病的药物中的应用。
在本发明中，“治疗”与“预防和/或治疗”“改善”具有相同含义，可以互换使用。在本发明中，“治疗”包括预防、治疗、辅助治疗等方面。如本文所用，“治疗”是指减轻、延缓进展、衰减、预防，或维持现有疾病或病症。“治疗”还包括将疾病或病症的一个或多个症状治愈、预防其发展或减轻到某种程度。其中，如本文所用，“治疗”是指减轻、延缓进展、衰减，或维持现有疾病或病症，治疗还包括将疾病或病症的一个或多个症状治愈、预防其发展或减轻到某种程度。
在本发明中，“药物”包括在体内或体外提供药理作用的任何药剂、化合物、组合物或混合物，且往往提供的是有益效果。“药物”在体内产生药理作用的范围没有特别限制，可以为全身效果，也可以只在局部产生效果。所述“药物”的活性没有特别限制，可以为能与其它物质发生相互作用的活性物质，也可以为不发生相互作用的惰性物质。
在本发明的一些实施方式中，治疗是指给予受试者有效治疗剂量的所述药物的条件下，所述受试者的认知损伤得到显著恢复。
在本发明的一些实施方式中，治疗是指给予受试者有效治疗剂量的所述药物的条件下，所述受试者的脑白质损伤显著减轻。
在本发明中，“效治疗剂量”是指针对疾病、病症和/或症状，将引起个体的生物学或医学响应的药物活性成分的量，例如为个体带来药理上积极效果的本发明嗜粘蛋白阿克曼菌的量，所述药理上积极效果包括但不限于降低或抑制酶或蛋白质活性或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病进程或预防疾病等。在本发明的一些实施方式中，所述受试者的脑血流量显著增加。
在本发明的一些实施方式中，所述受试者的髓鞘厚度显著增加。
在本发明的一些实施方式中，所述受试者的髓鞘蛋白表达量显著增加。
在本发明的一些实施方式中，所述髓鞘蛋白为MBP(髓鞘碱性蛋白)和MAG(髓鞘相关醣蛋白)中的一种或者多种。
本发明中，“受试者”指服用药物的患者。
本发明中，“受试者”是动物，优选为哺乳动物，更优选地为人，受试者包括但不限于具有疾病、病症和/或症状的患者。本发明中的受试者优选为哺乳动物。术语“哺乳动物”主要是指温血脊椎类哺乳动物，包括但不限于：如猫、狗、兔、熊、狐狸、狼、猴子、鹿、鼠(如大鼠、小鼠)、猪、牛、羊、马、人等，优选灵长类动物，更优选为人。
本发明对药物的剂型不做特别限定，可以根据临床需求制备成任意剂型，包括但不限于：口服液，例如口服悬浊液。
具体实施例
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，优先参考本发明中给出的指引，还可以按照本领域的实验手册或常规条件，还可以按照制造厂商所建议的条件，或者参考本领域已知的实验方法。
下述的具体实施例中，涉及原料组分的量度参数，如无特别说明，可能存在称量精度范围内的细微偏差。涉及温度和时间参数，允许仪器测试精度或操作精度导致的可接受的偏差。
本发明的技术思路包括：
从整体到分子水平，系统探讨华佗再造丸对BCAS小鼠认知功能的改善作用及其可能的机制。本发明首先从整体角度，采用了BCAS小鼠模型，通过行为学检测方法证明华佗再造丸减轻BCAS小鼠的认知功能障碍；再从整体到离体水平，用分子生物学技术研究，结果发现：华佗再造丸可促进胼胝体髓鞘修复再生和轴突完整性，以及可以促进脑血流量的恢复改善脑灌注不足，以证明华佗再造丸可作为治疗脑小血管病脑白质损伤的潜在靶点药物。
下面是本发明的具体实施例说明：
一、BCAS小鼠模型的制备
雄性C57BL/6J小鼠(8-10周，体重22-25g)购自南京大学动物模型中心提供。它们被安置在一个特定的无病原体(SPF)环境中，12小时光照/12小时黑暗周期，允许自由获得水和标准食物。术前，小鼠生长情况良好：①食欲旺盛；②眼睛有神，反应敏捷；③体毛光滑，肌肉丰满，活动有力；④身无伤痕，尾不弯曲，天然孔腔无分泌物，无畸形；粪便黑色呈麦粒状。术后，不同组的小鼠，在同样的条件下饲养，并进行各项测试。
用阿弗汀腹腔注射麻醉小鼠。通过颈部中线切口暴露两个共同颈动脉。右侧颈动脉分叉处的微线圈(内径0.18mm，节距0.50mm，总长2.5mm，购自萨瓦尼弹簧有限公司)环间轻轻抬起CCA。微线圈是绕着CCA旋转缠绕的。对左侧共同颈动脉采取了同样的程序。假手术组小鼠在不植入微弹簧圈的情况下接受同样的手术操作。死亡率约为10％。所有实验操作和动物护理均按照《医学实验动物护理和使用规程》和南京大学实验动物管理委员会的规定进行。
二、行为学
为了确定华佗再造丸治疗是否促进了BCAS后小鼠的认知障碍，我们进行行为测试。
1、分组：将华佗再造丸混悬于无菌蒸馏水中制备成口服悬浊液，不同组的口服剂量为：低剂量组灌胃给药2g/kg，中剂量组灌胃给药4g/kg，高剂量组灌胃给药8g/kg。
其中，“剂量”是指华佗再造丸的剂量，与一般成年人口服剂量一致，通常，成年人的口服剂量一般是一次口服4g-8g，一日2次-3次，重症一次8g-16g。
2、矿场实验及结果
矿场实验主要用于观察小鼠放入开放环境后的各种行为，反映实验动物的神经精神活动，排除了运动活动和焦虑样行为对认知功能的影响。
实验前清洗方箱内壁及底面，以免上次动物余留的信息(如动物的大、小便、气味)影响下一次测试结果。应在隔音，光强度和温、湿度适宜且保持一致的行为实验室内进行。每次实验应选择在同一时间段内完成。在箱底内面标记上4×4的16个格子，将动物放入箱内底面中心，同时进行摄像和计时，观察5min。计数老鼠在此段时间内能通过的格子数，格子的数目以前腿垮过格子线为准。
结果显示：根据不同指标(角落停留时间、中心停留时间、运动速度和运动距离)的观察发现，各组小鼠精神活动并无显著差异(图1)。
3、水迷宫实验及结果
用于检测动物空间位置学习记忆能力的行为学实验方法。
水迷宫由黑色圆形水池和可移动的有机玻璃平台组成，水池直径122cm，高75cm，平台高度50c直径10cm，平台低于水面1cm，水温控制范围为23士2℃。
实验分为训练期及测试期，实验前1天让每只小鼠熟悉水迷宫的环境1min；训练期持续4d，每天将每只小鼠分别从水池的东、西、南、北四个象限面向池壁放入水中，记录小鼠找到平台的逃避潜伏时间，若小鼠超过1min仍未找到平台，则将其引导至平台上停留15s。第5d为测试期，将水池中的平台撤去，将小鼠分别放入各个象限，利用Aymaze软件监测小鼠运动轨迹，记录1min内，小鼠穿越平台位置的次数及逃避潜伏期，计算小鼠平均游泳速度及探索路程。
结果见图2，图2所示结果说明：在BCAS后的第30天，与假手术组相比，BCAS小鼠在获取阶段花费了更多的时间搜索平台，而华佗再造丸治疗组减少了逃避潜伏期(图2中A图)。在探索测试中，BCAS小鼠跨越平台的次数减少(图2中B图)，在目标象限的时间明显减少(图2中C图)，三组游泳速度无显著性差异(图2中D图)。相比之下，华佗再造丸治疗组的小鼠比BCAS组有更好的记忆力，这表现在与BCAS组相比，穿越平台的频率明显增加，在目标标象限的时间变长。
4、y型迷宫实验及结果
采用y型迷宫实验评价小鼠的辨别性学习和工作记忆能力。
Y迷宫的3个臂被随机设为：新异臂(novel arm)、起始臂(start arm)和其他臂(other arm)。新异臂：在实验的第1个阶段即训练期时用隔板挡住，在第2个阶段即测试期时打开；起始臂：小鼠进入迷宫时所在的臂。实验分两个阶段，间隔1h。第一个阶段为训练期，新异臂被隔板挡住，小鼠由起始臂放入，在起始臂和其他臂中自由活动10min，训练结束后，小鼠被放回饲养笼。1h后进行。第二个阶段实验。抽开新异臂隔板，小鼠由起始臂放入，在3个臂中自由活动5min。录像记录5min内每只小鼠在各个臂停留的时间和穿梭次数。整个实验过程中起始臂和其他臂都是一直打开，动物可以自由出入。迷宫内铺垫木屑，每次训练或测试结束后，混匀各个臂里的锯末，以防动物残留气味干扰。迷宫上方1.5m处安置摄像镜头，全过程录像。
结果显示：BCAS后第30天，BCAS小鼠的自发性改变百分率明显低于假手术组。与BCAS组相比，华佗再造丸治疗组自发改变的百分比明显增加(图3)。
5、新物体识别实验及结果
在适应过程中，实验小鼠自由探索实验箱15分钟。在实验中，老鼠被允许用两个相同的红色长方体探索盒子10分钟。一个小时后，其中一个物体被一个绿色的立方体物体所替代。小鼠再次放入盒子中探索5分钟。探索被定义为用鼻子或前爪嗅或触摸刺激物体。探索每个对象所花费的总时间由一名对分组任务不知情的操作员测量。探索性偏好的百分比被定义为用于新对象的探索时间/用于两个对象的探索总时间。
结果显示：结果表明，假模型组更倾向于被一个新的目标所吸引，这是啮齿类动物的一个特征性的探索特征。与假模型组相比，BCAS组对探索新物体的好奇心较低，这可以从显著降低的探索偏好中看出。与BCAS组相比，华佗再造丸治疗组显著恢复了探索性偏好(图4)。
综上所述，通过几种不同的方法，我们发现华佗再造丸治疗可以减轻BCAS后的认知损伤。
三、脑血流量测量
1、分组：制备BCAS小鼠模型，将华佗再造丸混悬于无菌蒸馏水中制备成口服悬浊液，术后一天采用中剂量组灌胃给药。实验过程中，小鼠被随机分为三组：假手术组(Sham)；BCAS组(BCAS)；4g/kg华佗再造丸处理组的BCAS组(HT+BCAS)。
2、检测：使用激光多普勒血流仪(LDF)测量小鼠脑血流量。LDF探头垂直于颅骨，在前囟门后1毫米和外侧2.5毫米处，用牙科树脂固定塑料导引管(外径3毫米，内径2毫米，长度4毫米)。在BCAS之前、BCAS之后、BCAS之后的第30天，无论有无华佗再造丸治疗，都记录了脑血流。灌注图像是用PSI系统获得的，该系统有一个70兆瓦的内置激光二极管进行照明，一个1388×1038像素的CCD相机安装在颅骨上方10厘米处(速度19赫兹，曝光时间6毫秒)。
3、结果：结果显示与假手术小鼠相比，BCAS组脑血流灌注显著降低，提示BCAS小鼠成功诱导了整体低灌注。随着时间的推移，BCAS组的脑血流量有轻微的自发改善。在BCAS治疗后第30天，经华佗再造丸治疗的小鼠与未经治疗组相比，脑血流量明显改善(图5)。
四、分子生物学
1、分组：制备BCAS小鼠模型，将华佗再造丸混悬于无菌蒸馏水中制备成口服悬浊液，术后一天采用中剂量组灌胃给药。实验过程中，小鼠被随机分为四组：假手术组(Sham)；BCAS组(BCAS)；4g/kg华佗再造丸处理组的BCAS组(HT+BCAS)。
2、电镜检查及结果
小鼠安乐死后，从胼胝体中取1mm×1mm×1mm组织，用2.5％(v/v)戊二醛溶液固定。组织块在2wt％多聚甲醛PBS中孵育过夜，然后用2wt％四氧化锇在PBS中固定。经酒精梯度脱水后，将样品包埋入环氧树脂中。随后，用超微切片机切割成半薄切片，用1wt％甲苯胺蓝、醋酸铀酰和柠檬酸铅染色。然后，用透射电子显微镜筛选图像。G-ratio，是指轴突的直径/整个有髓鞘纤维的直径，被用来作为指标。
结果说明：华佗再造丸治疗组与对照组小鼠相比，胼胝体区髓鞘厚度增加(图6)。
3、黑金染色实验及结果
将0.3％的黑金和1％的硫代硫酸钠溶液预热至60℃后，将脑切片在黑金染料中孵育约12分钟，直到最细的髓鞘纤维被染成暗红色。然后将切片在60℃的硫代硫酸钠溶液中孵育3分钟。在室温下将切片在甲酚紫溶液中孵育3分钟。最后，经过酒精梯度脱水，二甲苯浸泡2分钟，树脂封片，用BX系列筛选图像。
结果说明：华佗再造丸治疗组减轻了BCAS小鼠胼胝体区脑白质损伤(图7)。
4、免疫荧光染色及结果
20μm厚的冠状切片用0.25％TritonX-100破膜，2％BSA封闭。随后，脑切片与一抗在4℃下孵育过夜。一抗为：MBP(Abcam，ab7349，1：500)，第二天用适当的二抗(Invitrogen)在室温孵育2小时后，切片用荧光显微镜(奥林巴斯IX73)观察。结果显示：华佗再造丸治疗组髓鞘蛋白MBP、MAG表达增加(图8中A图、B图)。
5、Western blot(WB技术)及结果
将组织样本称重后，按1mg组织加入10μLRIPA及PMSF(v/v，100:1)混合液，冰上裂解30min。利用超生匀浆仪将组织均浆后以13000rpm转速，4℃，离心30min。取上清，利用BCA试剂盒进行蛋白定量。将各组蛋白样品浓度调整一致后，加入loading buffer，金属浴100℃蛋白5min，蛋白样品保存于-80℃冰箱备用。将样品加入分离胶中，恒压60V电泳，当蛋白maker出现明显的分离条带后将电压改为130V。电泳结束后，以250V电流，4℃，转膜120min，将蛋白从胶上转移到PVDF膜上。转膜结束后，取出PVDF膜，将其浸泡在5％的脱脂牛奶(TBST配置)中进行抗原封闭，置于摇床上，室温封闭1小时。用一抗稀释液配置一抗，稀释比例参考抗体说明书推荐浓度，4℃孵育一抗过夜。第二天洗一抗，将PVDF膜浸泡于TBST中漂洗3次，每次10min。室温孵育二抗2h。洗二抗，TBST中漂洗3次，每次10min。利用Bioworld公司ECL化学发光试剂盒，将发光剂均匀浸透PVDF膜，利用Tanon5200全自动化学发光仪进行条带曝光。利用Image J3软件对蛋白条带进行灰度值测定。
结果显示：华佗再造丸治疗组髓鞘蛋白MBP、MAG表达增加(图8中C图、D图)。
以上所述实施方式和实施例的各技术特征可以进行任意合适方式的组合，为使描述简洁，未对上述实施方式和实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为在本说明书记载的范围中。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。还应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.华佗再造丸在制备治疗脑小血管病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，治疗是指给予受试者有效治疗剂量的所述药物的条件下，所述受试者的认知损伤得到显著恢复。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，治疗是指给予受试者有效治疗剂量的所述药物的条件下，所述受试者的脑白质损伤显著减轻。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述受试者的脑血流量显著增加。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述受试者的髓鞘厚度显著增加。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述受试者的髓鞘蛋白表达量显著增加。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述髓鞘蛋白包括MBP和MAG中的一种或者多种。
8.根据权利要求2至7中任一项所述的应用，其特征在于，所述受试者为哺乳动物。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述哺乳动物为人或者鼠。
10.根据权利要求2至7和9中任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括口服液。
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