RU2358728C2 - Способ лечения и предупреждения потери костной ткани - Google Patents
Способ лечения и предупреждения потери костной ткани Download PDFInfo
- Publication number
- RU2358728C2 RU2358728C2 RU2007132977/15A RU2007132977A RU2358728C2 RU 2358728 C2 RU2358728 C2 RU 2358728C2 RU 2007132977/15 A RU2007132977/15 A RU 2007132977/15A RU 2007132977 A RU2007132977 A RU 2007132977A RU 2358728 C2 RU2358728 C2 RU 2358728C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bone
- lipoxygenase
- mice
- compound
- cells
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 113
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 title abstract description 40
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title abstract description 16
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title description 4
- 108010048907 Arachidonate 15-lipoxygenase Proteins 0.000 claims abstract description 105
- 102000009515 Arachidonate 15-Lipoxygenase Human genes 0.000 claims abstract description 88
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 57
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 46
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 26
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 12
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 88
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 43
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 38
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 38
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 36
- 230000011164 ossification Effects 0.000 claims description 32
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 23
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 18
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 16
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 16
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 16
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 13
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 claims description 7
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 claims description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 9
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 76
- 239000000867 Lipoxygenase Inhibitor Substances 0.000 description 40
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 37
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 35
- 229940123153 15 Lipoxygenase inhibitor Drugs 0.000 description 34
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 30
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 28
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 28
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 21
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 20
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 20
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 19
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 19
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 17
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 17
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 16
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 15
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 15
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 15
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- -1 superoxide ion Chemical class 0.000 description 14
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 12
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 12
- 101150054329 ALOX15 gene Proteins 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 102100022364 Polyunsaturated fatty acid 5-lipoxygenase Human genes 0.000 description 9
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 9
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 8
- 102000003820 Lipoxygenases Human genes 0.000 description 8
- 108090000128 Lipoxygenases Proteins 0.000 description 8
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 8
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 8
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 8
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 8
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 8
- ZGOOPZVQMLHPFM-UHFFFAOYSA-N PD-146176 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C1=CC=CC=C1SC2 ZGOOPZVQMLHPFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 7
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 7
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 7
- 210000005009 osteogenic cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 7
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012369 In process control Methods 0.000 description 6
- 101710156627 Polyunsaturated fatty acid 5-lipoxygenase Proteins 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 6
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 6
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 230000010256 bone deposition Effects 0.000 description 6
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 6
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 description 6
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 6
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 6
- 238000004190 ion pair chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 5
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 5
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 5
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 5
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 5
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 5
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 4
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 4
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 4
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 4
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 4
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- JRLOEMCOOZSCQP-UHFFFAOYSA-N 1-[3-(2-quinolinylmethoxy)phenyl]-1-hexanol Chemical compound CCCCCC(O)C1=CC=CC(OCC=2N=C3C=CC=CC3=CC=2)=C1 JRLOEMCOOZSCQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZKXFJDCWWSKUHN-UHFFFAOYSA-N 3-amino-n-(3,4-dichlorophenyl)-4-methoxybenzamide Chemical compound C1=C(N)C(OC)=CC=C1C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 ZKXFJDCWWSKUHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010093579 Arachidonate 5-lipoxygenase Proteins 0.000 description 3
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 102000043299 Parathyroid hormone-related Human genes 0.000 description 3
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 229940124325 anabolic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000037118 bone strength Effects 0.000 description 3
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000003021 clonogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 238000003935 denaturing gradient gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- WDEABJKSGGRCQA-UHFFFAOYSA-N docebenone Chemical compound CC1=C(C)C(=O)C(CCCCC#CCCCC#CCO)=C(C)C1=O WDEABJKSGGRCQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- SZNYYWIUQFZLLT-UHFFFAOYSA-N isopropylmethyl ether Natural products CC(C)COCC(C)C SZNYYWIUQFZLLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 3
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 3
- MWLSOWXNZPKENC-SSDOTTSWSA-N zileuton Chemical compound C1=CC=C2SC([C@H](N(O)C(N)=O)C)=CC2=C1 MWLSOWXNZPKENC-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 3
- 229960005332 zileuton Drugs 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- KRDSGPLHVQJFLM-BUHFOSPRSA-N (2e)-3-(2-oct-1-yn-1-ylphenyl)acrylic acid Chemical compound CCCCCCC#CC1=CC=CC=C1\C=C\C(O)=O KRDSGPLHVQJFLM-BUHFOSPRSA-N 0.000 description 2
- GMRQFYUYWCNGIN-ZVUFCXRFSA-N 1,25-dihydroxy vitamin D3 Chemical compound C1([C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=CC=C1C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-ZVUFCXRFSA-N 0.000 description 2
- ZNHVWPKMFKADKW-UHFFFAOYSA-N 12-HETE Chemical compound CCCCCC=CCC(O)C=CC=CCC=CCCCC(O)=O ZNHVWPKMFKADKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZNHVWPKMFKADKW-ZYBDYUKJSA-N 12-HETE Natural products CCCCC\C=C/C[C@@H](O)\C=C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O ZNHVWPKMFKADKW-ZYBDYUKJSA-N 0.000 description 2
- LNXMHXYXZGNPFI-UHFFFAOYSA-N 3-(2-non-1-ynylphenyl)propanoic acid Chemical compound CCCCCCCC#CC1=CC=CC=C1CCC(O)=O LNXMHXYXZGNPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150037123 APOE gene Proteins 0.000 description 2
- OGSPWJRAVKPPFI-UHFFFAOYSA-N Alendronic Acid Chemical compound NCCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O OGSPWJRAVKPPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000011730 Arachidonate 12-Lipoxygenase Human genes 0.000 description 2
- 108010076676 Arachidonate 12-lipoxygenase Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 239000004821 Contact adhesive Substances 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 101100216294 Danio rerio apoeb gene Proteins 0.000 description 2
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 2
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 2
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- MPBVHIBUJCELCL-UHFFFAOYSA-N Ibandronate Chemical compound CCCCCN(C)CCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O MPBVHIBUJCELCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 2
- 229930184725 Lipoxin Natural products 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108700020797 Parathyroid Hormone-Related Proteins 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710164073 Polyunsaturated fatty acid lipoxygenase ALOX15 Proteins 0.000 description 2
- 102100031950 Polyunsaturated fatty acid lipoxygenase ALOX15 Human genes 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 229940062527 alendronate Drugs 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000000879 anti-atherosclerotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 2
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 description 2
- 230000010072 bone remodeling Effects 0.000 description 2
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N carbonic acid monoamide Natural products NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 210000004394 hip joint Anatomy 0.000 description 2
- 229940015872 ibandronate Drugs 0.000 description 2
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 150000002639 lipoxins Chemical class 0.000 description 2
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000000329 molecular dynamics simulation Methods 0.000 description 2
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KJAMZCVTJDTESW-UHFFFAOYSA-N tiracizine Chemical compound C1CC2=CC=CC=C2N(C(=O)CN(C)C)C2=CC(NC(=O)OCC)=CC=C21 KJAMZCVTJDTESW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- ICLYJLBTOGPLMC-KVVVOXFISA-N (z)-octadec-9-enoate;tris(2-hydroxyethyl)azanium Chemical compound OCCN(CCO)CCO.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ICLYJLBTOGPLMC-KVVVOXFISA-N 0.000 description 1
- 150000005206 1,2-dihydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 1
- HNICUWMFWZBIFP-IRQZEAMPSA-N 13(S)-HODE Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\C=C/CCCCCCCC(O)=O HNICUWMFWZBIFP-IRQZEAMPSA-N 0.000 description 1
- JDSRHVWSAMTSSN-BSZOFBHHSA-N 13-HPODE Chemical compound CCCCCC(OO)\C=C\C=C/CCCCCCCC(O)=O JDSRHVWSAMTSSN-BSZOFBHHSA-N 0.000 description 1
- JSFATNQSLKRBCI-VAEKSGALSA-N 15-HETE Natural products CCCCC[C@H](O)\C=C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JSFATNQSLKRBCI-VAEKSGALSA-N 0.000 description 1
- JSFATNQSLKRBCI-UHFFFAOYSA-N 15-Hydroxyeicosatetraenoic acid Chemical compound CCCCCC(O)C=CC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JSFATNQSLKRBCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MDCMWBQAFWQOTN-UHFFFAOYSA-N 2-(phenylhydrazinylidene)acetamide Chemical class NC(=O)C=NNC1=CC=CC=C1 MDCMWBQAFWQOTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NEAQRZUHTPSBBM-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,3-dimethyl-7-nitro-4h-isoquinolin-1-one Chemical class C1=C([N+]([O-])=O)C=C2C(=O)N(O)C(C)(C)CC2=C1 NEAQRZUHTPSBBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRDSGPLHVQJFLM-UHFFFAOYSA-N 3-(2-oct-1-ynylphenyl)prop-2-enoic acid Chemical compound CCCCCCC#CC1=CC=CC=C1C=CC(O)=O KRDSGPLHVQJFLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRDCVMSNCBAMAM-UHFFFAOYSA-N 3-prop-2-ynoxyprop-1-yne Chemical class C#CCOCC#C HRDCVMSNCBAMAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RDEYORKJEDLLDB-DQVHGTJVSA-N 5-Hydroperoxyeicosatetraenoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC\C=C\C=C\C(\OO)=C\C=C\C(O)=O RDEYORKJEDLLDB-DQVHGTJVSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000000103 Anorexia Nervosa Diseases 0.000 description 1
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-M Arachidonate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC([O-])=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-M 0.000 description 1
- HKMTVMBEALTRRR-UHFFFAOYSA-N Benzo[a]fluorene Chemical compound C1=CC=CC2=C3CC4=CC=CC=C4C3=CC=C21 HKMTVMBEALTRRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- TZVQBYGXSQTCLW-UHFFFAOYSA-N CC(C)COC(NS(Nc(cc(cc1)-c([nH]c2c3)cc2cc(F)c3F)c1OC)(=O)=O)=O Chemical compound CC(C)COC(NS(Nc(cc(cc1)-c([nH]c2c3)cc2cc(F)c3F)c1OC)(=O)=O)=O TZVQBYGXSQTCLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DYEFUKCXAQOFHX-UHFFFAOYSA-N Ebselen Chemical compound [se]1C2=CC=CC=C2C(=O)N1C1=CC=CC=C1 DYEFUKCXAQOFHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241001125671 Eretmochelys imbricata Species 0.000 description 1
- UEXCJVNBTNXOEH-UHFFFAOYSA-N Ethynylbenzene Chemical group C#CC1=CC=CC=C1 UEXCJVNBTNXOEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBVJJBKOTRCVKF-UHFFFAOYSA-N Etidronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(O)(C)P(O)(O)=O DBVJJBKOTRCVKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- 206010020100 Hip fracture Diseases 0.000 description 1
- 101000741445 Homo sapiens Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- MIJPAVRNWPDMOR-ZAFYKAAXSA-N L-ascorbic acid 2-phosphate Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(OP(O)(O)=O)=C1O MIJPAVRNWPDMOR-ZAFYKAAXSA-N 0.000 description 1
- 101150028321 Lck gene Proteins 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010030247 Oestrogen deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 241000906034 Orthops Species 0.000 description 1
- 244000089040 Orthosiphon spicatus Species 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 1
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 1
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 1
- 208000001164 Osteoporotic Fractures Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 101710123753 Parathyroid hormone-related protein Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920002367 Polyisobutene Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical class CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004617 QSAR study Methods 0.000 description 1
- 230000007022 RNA scission Effects 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N Risedronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CC1=CC=CN=C1 IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- ZUBJEHHGZYTRPH-KTKRTIGZSA-N [(z)-octadec-9-enyl] hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOS(O)(=O)=O ZUBJEHHGZYTRPH-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 229940124532 absorption promoter Drugs 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 238000007844 allele-specific PCR Methods 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000008850 allosteric inhibition Effects 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000123 anti-resoprtive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 229940114078 arachidonate Drugs 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 150000003936 benzamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N beta-glycerol phosphate Natural products OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L beta-glycerolphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CC(CO)OOP([O-])([O-])=O GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006177 biological buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229960003773 calcitonin (salmon synthetic) Drugs 0.000 description 1
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 1
- 230000004094 calcium homeostasis Effects 0.000 description 1
- 238000007707 calorimetry Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000005482 chemotactic factor Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009643 clonogenic assay Methods 0.000 description 1
- 231100000096 clonogenic assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000004581 coalescence Methods 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000001246 colloidal dispersion Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 238000002477 conductometry Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 210000003275 diaphysis Anatomy 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 229960004585 etidronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 210000002436 femur neck Anatomy 0.000 description 1
- 210000003811 finger Anatomy 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 150000004673 fluoride salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical class F* 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 210000000245 forearm Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 201000003617 glucocorticoid-induced osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 231100000451 gonadotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003605 gonadotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 1
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000001624 hip Anatomy 0.000 description 1
- 150000002423 hopanoids Chemical class 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000002657 hormone replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 229940045644 human calcitonin Drugs 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000002758 humerus Anatomy 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 125000001867 hydroperoxy group Chemical group [*]OO[H] 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000031424 hyperprolactinemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000642 iatrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 108010040890 lipoxygenase L-1 Proteins 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000001699 lower leg Anatomy 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004705 lumbosacral region Anatomy 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002690 malonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000000324 molecular mechanic Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCO GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N n-hexadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 238000001683 neutron diffraction Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Chemical class 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 239000007935 oral tablet Substances 0.000 description 1
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N pamidronate Chemical compound NCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940046231 pamidronate Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 210000004417 patella Anatomy 0.000 description 1
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003209 petroleum derivative Substances 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 238000000711 polarimetry Methods 0.000 description 1
- 238000003969 polarography Methods 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000003793 prenatal diagnosis Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 238000003906 pulsed field gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- GZUITABIAKMVPG-UHFFFAOYSA-N raloxifene Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(C(=O)C=2C=CC(OCCN3CCCCC3)=CC=2)C2=CC=C(O)C=C2S1 GZUITABIAKMVPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004622 raloxifene Drugs 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000037425 regulation of transcription Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000000614 rib Anatomy 0.000 description 1
- 229940089617 risedronate Drugs 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068072 salmon calcitonin Proteins 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- DCQXTYAFFMSNNH-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]ethanol;acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O.OCCN(CCO)CCO DCQXTYAFFMSNNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 206010041569 spinal fracture Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 210000001562 sternum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 230000003868 tissue accumulation Effects 0.000 description 1
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical class OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 229940117013 triethanolamine oleate Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 210000000623 ulna Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 239000011647 vitamin D3 Substances 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 1
- 229940021056 vitamin d3 Drugs 0.000 description 1
- 238000011816 wild-type C57Bl6 mouse Methods 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
- A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
- A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
- A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/407—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. ketorolac, physostigmine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/66—Phosphorus compounds
- A61K31/662—Phosphorus acids or esters thereof having P—C bonds, e.g. foscarnet, trichlorfon
- A61K31/663—Compounds having two or more phosphorus acid groups or esters thereof, e.g. clodronic acid, pamidronic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/23—Calcitonins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/30—Insulin-like growth factors, i.e. somatomedins, e.g. IGF-1, IGF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
- G01N2333/90241—Oxidoreductases (1.) acting on single donors with incorporation of molecular oxygen, i.e. oxygenases (1.13)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/04—Screening involving studying the effect of compounds C directly on molecule A (e.g. C are potential ligands for a receptor A, or potential substrates for an enzyme A)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
- G01N2800/108—Osteoporosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для идентификации соединений, которые обладают способностью увеличивать минеральную плотность костной ткани. Способ заключается в том, что соединение приводят в контакт с 15-липоксигеназой и определяют, обладает ли соединение активностью в отношении ингибирования 15-липоксигеназы. Изобретение позволяет расширить ассортимент лекарственных средств для лечения заболеваний, связанных с потерей костной ткани, таких как остеопороз, остеоартрит, болезнь Пэджета, и заболеваний периодонта, а так же переломов. 6 з.п. ф-лы, 4 табл., 9 ил.
Description
Изобретение относится в целом к ингибиторам 15-липоксигеназы и их применению для лечения и предупреждения потери костной ткани. Конкретно изобретение относится к применению ингибиторов 15-липоксигеназы для уменьшения потери костной ткани и/или усиления образования сетчатой структуры костной ткани.
Липоксигеназы представляют собой ферменты, содержащие железо, не входящее в состав гема, которые присутствуют в растениях и животных и катализируют окисление определенных полиненасыщенных жирных кислот, например, входящих в состав липидов и липопротеинов. Известно несколько различных липоксигеназ, каждая из которых отличается по окислительной активности. Липоксигеназы млекопитающих обозначают по положению в молекуле арахидоновой кислоты, в котором происходит окисление. 5-липоксигеназа превращает арахидоновую кислоту в 5-гидропероксиэйкозатетраеновую кислоту (5-ГПЭТЕ). Это представляет собой первую стадию метаболизма, приводящего к образованию 5-гидроксиэйкозатетраеновой кислоты (5-ГЭТЕ) и лейкотриенов (ЛТ). Аналогично этому 12- и 15-липоксигеназы превращают арахидоновую кислоту в 12- и 15-ГПЭТЕ соответственно. Восстановление биохимическим путем 12-ГПЭТЕ приводит к образованию 12-ГЭТЕ, в то время как 15-ГЭТЕ является предшественником класса соединений, известных как липоксины.
Другой ряд биологических воздействий связан с продуктами, обладающими липоксигеназной активностью, многие из которых являются медиаторами различных болезненных состояний. ЛТ С4 и D4 являются сильными констрикторами человеческой бронхиальной гладкой мышцы; ЛТ В4 и 5-ГЭТЕ, обнаруженные в синовиальной жидкости пациентов, страдающих ревматоидным артритом, являются сильными хемотаксическими факторами воспалительных клеток, таких как полиморфонуклеарные лейкоциты (Green и Lambeth, Tetrahedron, 39, с.1687, 1983); были выявлены высокие уровни 12-ГЭТЕ в эпидермальной ткани пациентов, страдающих псориазом; было установлено, что липоксины стимулируют высвобождение присутствующего в лизосоме фермента и иона супероксида из нейтрофилов. Так, липоксигеназы играют важную роль в биосинтезе медиаторов астмы, аллергии, артрита, псориаза и воспаления, и ингибиторы этих ферментов прерывают путь биосинтеза, участвующий в развитии этих болезненных состояний.
Человеческая 15-липоксигеназа (15-ЛО) катализирует образование 15-S-гидроксиэйкозатетраеновой кислоты (15-S-ГЭТЕ) из арахидоновой кислоты (Kuhn и Borngraber, Lipoxygenases and Their Metabolites, изд-во Plenum Press, Нью-Йорк, 1999). У мышей синтез 15-8-ГЭТЕ осуществляется под воздействием 12/15-липоксигеназы (Alox15), которая представляет собой мышиный гомолог человеческой 15-ЛО. Мышиная 12/15-ЛО превращает арахидоновую кислоту в 12-(S)-гидроксиэйкозатетраеновую и 15-S-ГЭТЕ в соотношении 3:1 и, кроме того, она может превращать линолевую кислоту в 13-гидроксиоктадекадиеновую кислоту (13-ГОДЭ).
Ранее было установлено, что 15-липоксигеназа участвует в патогенезе некоторых заболеваний, включая атеросклероз (Harats и др., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., cc. 2100-2105, 2000), астму (Shannon и др., Am.Rev.Respir. Dis., 147, cc.1024-1028, 1993), рак (Shureiqi и др., JNCI, 92, cc.1136-1142, 2000) и гломерулонефрит (Montero и Badr, Exp. Neph., 8, cc.14-19, 2000). Были выявлены многочисленные классы соединений, которые обладают способностью ингибировать 15-липоксигеназу, в частности фенолы, гидроксамовые кислоты и ацетиленовые жирные кислоты (см. обзор Kuhn и Borngraber, Lipoxygenases and Their Metabolites, изд-во Plenum Press, Нью-Йорк, 1999). Эти агенты обладают различным спектром ингибирующей активности. Например, установлено, что нордигидрогвайаретовая кислота является ингибитором 5-и 15-липоксигеназы, установлено, что нафтилгидроксамовые кислоты ингибируют 5-, 12-и 15-липоксигеназу (US 4605669), и опубликованы данные о том, что бензофлуореновый ингибитор 15-липоксигеназы, PD 146176, обладает относительно специфичным действием в отношении 15-липоксигеназы (Sendobry и др., Br. J. Pharm., 120, cc.1199-1206, 1997). В опытах на мышах со специально созданной делецией гена Alox15 (Alox15 -/-) было установлено, что 15-липоксигеназа участвует в развитии атеросклероза. Первоначально было установлено, что такие мыши с дефицитом Alox15 обладают небольшим фенотипическими отличиями, включая повышенную активность присутствующей в них 5-ЛО (Sun и Funk, J. Biol. Chem., 271, cc.24055-24062, 1996). Однако нарушение Alox15 приводит к существенному уменьшению атеросклеротических повреждений у имеющих тенденцию к атеросклерозу мышей с дефицитом ароЕ (ароЕ -/-) (Cyrus и др., J. Clin Invest., 103, cc.1597-1604, 1999).
Хотя имеются данные о том, что 5-ЛО участвует в патогенезе некоторых заболеваний, биологическая функция мышиной или человеческой 15-липоксигеназы полностью не выявлена и не описано, что в клинических опытах установлена возможность применения ингибиторов 15-липоксигеназы для человека. В частности, до настоящего времени не описана возможность применения ингибиторов 15-липоксигеназы для лечения остеопороза и/или остеоартрита у человека.
Остеопороз обусловлен уменьшением плотности минерального компонента костной ткани (минеральной плотности костной ткани (МПК)) в зрелой кости и приводит к переломам после незначительной травмы. Заболевание является широко распространенным и наносит чрезвычайно большой экономический ущерб. Наиболее часто переломы происходят в позвоночнике, дистальном отделе лучевой кости и тазобедренном суставе. Оценки свидетельствуют о том, что одна треть женщин в возрасте свыше 65 лет может иметь переломы позвоночника, обусловленные, в частности, остеопорозом. Кроме того, в преклонном возрасте существует вероятность переломов тазобедренного сустава у приблизительно одной из трех женщин и у одного из шести мужчин.
Установлено, что имеются две различные фазы потери костной ткани. Одна представляет собой медленный связанный с возрастом процесс, который происходит у людей обоего пола и начинается в возрасте приблизительно 35 лет. Эта фаза протекает с приблизительно одинаковой скоростью у людей обоего пола и приводит к потере приблизительно одинаковых количеств кортикального слоя кости и губчатого вещества (спонгиозного или похожего на решетку слоя) кости. Кортикальный слой кости преобладает в добавочном скелете, в то время как губчатое вещество сконцентрировано в осевом скелете, прежде всего в позвоночнике, а также на концах длинных костей. Остеопороз, вызываемый связанной с возрастом потерей костной ткани, называют остеопорозом типа II.
Другой тип потери костной ткани происходит ускоренно, он проявляется у женщин в постменопаузальном периоде и обусловлен дефицитом эстрогена. На этой фазе происходит непропорциональная потеря губчатого вещества кости. Остеопороз, обусловленный истощением эстрогена, называют остеопорозом типа I. Основными клиническими последствиями остеопороза типа I являются переломы позвоночника, тазобедренного сустава и предплечья. Области скелета, для которых характерны такие повреждения, содержат большие количества трабекулярной костной ткани. Для остеопороза типа I, как правило, характерен высокий уровень обмена костной ткани. Резорбция костной ткани повышается, но компенсирующее образование костной ткани является неадекватным. Было установлено, что остеопороз связан с применением кортикостероидов, иммобилизацией или продолжительным нахождением в постельном режиме, алкоголизмом, диабетом, гонадотоксической химиотерапией, гиперпролактинемией, нервно-психической анорексией, первичной и вторичной аменореей, иммунодепрессией, связанной с введением трансплантата, и овариэктомией.
Предполагается, что механизм потери костной ткани при остеопорозе связан с дисбалансом процесса обновления скелета. Этот процесс называется ремоделированием костной ткани. Он происходит в ряде дискретных «карманах» активности. Эти карманы образуются спонтанно внутри костного матрикса на определенной поверхности костной ткани и представляют собой область резорбции костной ткани. Остеокласты (клетки, растворяющие костную ткань или ответственные за резорбцию костной ткани) осуществляют резорбцию части костной ткани, как правило, определенного постоянного размера. Затем после завершения этого процесса резорбции появляются остеобласты (костеобразующие клетки), которые заполняют полость, оставшуюся после остеокластов, новой костной тканью.
В организме здорового взрослого индивидуума остеокласты и остеобласты функционируют таким образом, что образование костной ткани и резорбция костной ткани сбалансированы. Однако при остеопорозе развивается дисбаланс в процессе ремоделирования костной ткани, в результате чего замена костной ткани происходит с меньшей скоростью, чем ее потеря. Хотя этот дисбаланс в определенной степени возникает у большинства индивидуумов в пожилом возрасте, он проявляется намного более серьезным образом и встречается в молодом возрасте при постменопаузальном остеопорозе, после овариэктомии или при ятрогенных (обусловленных применением лекарственных средств) состояниях, таких как состояния, вызванные применением кортикостероидов или иммунодепрессантов.
Для увеличения массы костной ткани у людей, страдающих остеопорозом, были предложены различные подходы, включая введение андрогенов, солей фтора и паратиреоидного гормона и модифицированных версий паратиреоидного гормона. Было предложено также применять для сохранения существующей массы костной ткани индивидуально или в сочетании друг с другом бисфосфонаты, кальцитонин, кальций, 1,25-дигидроксивитамин D3 и/или эстрогены.
Настоящее изобретение основано на открытии того, что ингибиторы 15-липоксигеназы обладают способностью увеличивать образование сетчатой структуры костной ткани и/или усиливать отложение костной ткани и ускорять заживление переломов. Такие молекулы можно вводить индивидуально или в сочетании с дополнительными агентами, которые обладают способностью ингибировать резорбцию костной ткани и/или усиливать образование костной ткани, в частности, с анаболиками.
Таким образом, одним из объектов изобретения является способ уменьшения потери костной ткани у индивидуума. Способ заключается в том, что индивидууму вводят фармацевтически эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы.
Другим объектом изобретения является способ повышения минеральной плотности костной ткани, заключающийся в том, что индивидууму вводят фармацевтически эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы.
Еще одним объектом изобретения является способ диагностики предрасположенности индивидуума к потере костной ткани, заключающийся в том, что осуществляют обнаружение полиморфизма человеческой хромосомы 17, прежде всего обнаружение полиморфизма гена 15-липоксигеназы.
Следующим объектом изобретения является способ отбора соединений, обладающих способностью уменьшать потерю костной ткани или увеличивать плотность минерального компонента костной ткани, заключающийся в том, что ингибиторы 15-липоксигеназы приводят в контакт с человеческими мезенхимальными стволовыми клетками и определяют клеточную дифференцировку клеток, участвующих в образовании костной ткани.
Эти и другие объекты настоящего изобретения более детально поясняются с помощью приведенного ниже подробного описания изобретения и прилагаемых чертежей. Кроме того, в настоящее описание полностью включены в качестве ссылки различные ссылки, в которых более подробно изложены определенные процедуры или композиции.
При осуществлении на практике настоящего изобретения можно применять, если не указано иное, стандартные методы химии протеинов, биохимии, методы рекомбинантной ДНК и фармакологии, известные специалистам в данной области. Такие методы подробно описаны в литературе (см., например, Т.Е. Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (изд-во W.H. Freeman and Company, 1993); A.L. Lehninger, Biochemistry (изд-во Worth Publishers, Inc., последнее издание); Sambrook и др., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2-е изд., 1989); Methods In Enzymology (под ред. S. Colowick и N. Kaplan, изд-во Academic Press, Inc.); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-е изд. (Истон, шт.Пенсильвания: изд-во Mack Publishing Company, 1990); Carey и Sundberg Advanced Organic Chemistry, 3-е изд.. (изд-во Plenum Press), тома А и В (1992).
Все публикации, патенты и заявки на патент, процитированные выше или ниже в настоящем описании, полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки.
При описании настоящего изобретения используются перечисленные ниже понятия, значения которых указаны ниже.
Понятие "потеря костной ткани" означает дисбаланс соотношения образования костной ткани и резорбции костной ткани, приводящий к меньшему, чем это необходимо, количеству костной ткани у пациента. Потеря костной ткани может происходить в результате остеопороза, остеотомии, периодонтита или обусловливаться неплотно прилегающим протезом. Потеря костной ткани может быть обусловлена также вторичным остеопорозом, который включает индуцированный глюкокортикоидами остеопороз, индуцированный гипертиреозом остеопороз, индуцированный иммобилизацией остеопороз, индуцированный гепарином остеопороз или индуцированный иммунодепрессантами остеопороз. Можно осуществлять мониторинг потери костной ткани, например, путем описанных ниже измерений плотности минерального компонента костной ткани.
Понятия "эффективное количество" или "фармацевтически эффективное количество" обозначает количество агента, которое не вызывает токсического действия, но является достаточным для обеспечения требуемого биологического результата. Таким результатом может являться уменьшение и/или облегчение признаков, симптомов или причин заболевания или любое другое требуемое изменение биологической системы. Например, "эффективное количество" с точки зрения терапевтического применения обозначает количество композиции, содержащей действующее вещество, необходимое для обеспечения клинически значимого повышения скорости заживления при лечении перелома; реверсии потери костной ткани при остеопорозе; реверсии повреждений или нарушений хрящевой ткани; предупреждения или замедления начала остеопороза; стимуляции и/или усиления образования костной ткани при несращиваемых переломах и остеогенеза при растяжении; увеличения и/или ускорения роста костной ткани в применяемых в качестве протеза устройствах; и восстановления дефектов зубов. Специалист в данной области может определить соответствующее "эффективное" количество в каждом отдельном случае с помощью стандартных экспериментов.
Понятие "увеличение отложения костной ткани" означает, что накопление костной ткани у индивидуума, которому вводят ингибиторы 15-липоксигеназы, предлагаемые в изобретении, увеличивается по сравнению с накоплением костной ткани у индивидуума, с которым производится сравнение и которому не вводят ингибитор 15-липоксигеназы. Такое увеличенное отложение костной ткани, как правило, определяют согласно настоящему изобретению путем измерения минеральной плотности костной ткани (МПК). Например, увеличение отложения костной ткани можно определять на модели с использованием животных, таких как подвергнутые овариэктомии мыши, собаки и т.п. Животному вводят тестируемое соединение и измеряют минеральную плотность костной ткани (МПК) в костях, которые, как правило, истощаются при остеопорозе типа I или типа II, таких как кости добавочного и/или осевого скелета, прежде всего позвоночного столба, включая позвонки, а также концевые части длинных костей, таких как бедренная кость, средний отдел и дистальный отдел лучевой кости. В данной области техники известны несколько методов определения МПК. Например, можно осуществлять измерения МПК с помощью двойной абсорбциометрии энергии рентгеновских лучей или количественной компьютерной томографии и т.п. (см. примеры). Аналогично этому с помощью методов, хорошо известных в данной области, можно определять увеличение образования костной ткани. Например, можно проводить динамические измерения скорости костеобразования (КОС) на меченных с помощью тетрациклина образцах губчатой кости из поясничного отдела позвоночного столба и дистального метафиза бедренной кости с помощью количественной компьютерной морфометрии (см., например. Ling и др., Endocrinology 140: cc.5780-5788, 1999. В альтернативном варианте можно оценивать маркеры образования костной ткани, такие как активность щелочной фосфатазы и уровни остеокальцина в сыворотке, для определения косвенным путем того, происходит ли образование костной ткани (см. Looker и др., Osteoporosis International 11(6): cc.467-480, 2000).
Понятие "увеличенное образование костной ткани" означает, что количество образующейся костной ткани у индивидуума, которому вводят ингибиторы 15-липоксигеназы, предлагаемые в изобретении, увеличивается по сравнению со скоростью образования костной ткани у индивидуума, которому не вводят ингибитор 15-липоксигеназы. Такое увеличенное образование костной ткани определяют согласно настоящему изобретению с помощью, например, количественной компьютерной морфометрии, а также с помощью описанных выше других маркеров образования костной ткани.
Понятие "ингибитор 15-липоксигеназы" обозначает соединение, которое ингибирует 15-липоксигеназу и характеризуется значением IC50 менее чем 1 мкМ, предпочтительно менее чем 100 нМ. Значения IC50 можно определять стандартными методами. Одним из конкретных методов является колориметрический анализ, согласно которому предполагаемый ингибитор предварительно инкубируют в течение примерно 10 мин с 15-липоксигеназой, после чего добавляют субстрат, представляющий собой линолевую кислоту, и выдерживают еще в течение 10 мин. Продукт, т.е. 13-HPODE, оценивают количественно методом, основанным на сочетании восстановления гидроксипероксилированного липида и окисления N-бензоиллейкометиленового синего в присутствии гемина при рН 5. Поглощение окисленного метиленового синего прямо пропорционально количеству 13-HPODE, образованного с помощью 15-липоксигеназы, и его можно измерять в присутствии ингибитора и без него. Этот конечный анализ описан более подробно у Bruce J. Auerbach, John S. Kiely и Joseph A. Cornicelli, A Spectrophotometric Microtiter-Based Assay for the Detection of Hydroperoxy Derivatives of Linoleic Acid, Analytical Biochemistry, 201, cc.375-380, 1992. Другие методы анализа включают методы, в которых начальную скорость ферментативной реакции измеряют спектрофотометрически путем измерения при 234 нм количества образовавшегося конъюгированного диена.
В контексте настоящего описания понятия "лечить" или "лечение" используются взаимозаменяемо и применяются для обозначения замедления развития симптомов потери костной ткани и/или уменьшения серьезности таких симптомов, которые развиваются или развитие которых предполагается. Кроме того, понятия включают предупреждение дополнительных симптомов, облегчение или предупреждение обусловливающих симптомы метаболических факторов и/или стимулирование роста костной ткани.
"Фармацевтически приемлемый" или "фармакологически приемлемый" обозначает продукт, который не является нежелательным ни с биологической, ни с иной точки зрения, т.е. продукт, который можно вводить индивидууму, не вызывая никаких нежелательных биологических действий или вредных взаимодействий с любыми компонентами композиции, в которую он входит.
"Физиологическое значение рН" или "значение рН, находящееся в диапазоне физиологических значений", означает значение рН в диапазоне примерно от 7,2 до 8,0 включительно, более предпочтительно в диапазоне примерно от 7,2 до 7,6 включительно.
В контексте настоящего описания понятие "пациент" обозначает млекопитающих и животных, не относящихся к млекопитающим. Примеры млекопитающих включают (но, не ограничиваясь ими) любого представителя класса млекопитающих: человека, приматов кроме человека, таких как шимпанзе и других видов человекообразных обезьян и обезьян; сельскохозяйственных животных, таких как крупный рогатый скот, лошади, овцы, козы, свиньи; домашних животных, таких как кролики, собаки и кошки; лабораторных животных, в том числе грызунов, таких как крысы, мыши и морские свинки, и т.п. Примеры животных, не относящихся к млекопитающим, включают (но, не ограничиваясь ими) птиц, рыб и т.п. Понятие не обозначает конкретный возраст или пол.
В контексте настоящего описания "полиморфизм" обозначает наличие в популяции двух или большего количества генетически детерминированных альтернативных последовательностей или аллелей. Полиморфный маркер или сайт представляет собой локус, в котором происходит дивергенция. Предпочтительные маркеры представляют собой по меньшей мере два аллеля, каждый из которых встречается в рассматриваемой популяции с частотой более чем 1%, более предпочтительно более чем 10 или 20%. Полиморфизм может представлять собой замены, инсерцию, повтор или делецию одного или нескольких оснований. Полиморфный локус может представлять собой всего лишь одну пару оснований. Полиморфные маркеры включают полиморфизмы длин рестрикционных фрагментов, варьиабельное количество тандемных повторов (ВКТП), гипервариабельные участки, минисателлиты, динуклеотидные повторы, тринуклеотидные повторы, тетрануклеотидные повторы, простые повторы последовательности и инсерционные элементы.
Однонуклеотидный полиморфизм (SNP) возникает в полиморфном сайте, занятом одним нуклеотидом, который представляет собой сайт вариации аллельных последовательностей. Как правило, перед сайтом и после него расположены высококонсервативные последовательности аллеля (например, последовательности, которые варьируются менее чем у 1/100 или 1/1000 представителей популяций). Однонуклеотидный полиморфизм, как правило, возникает в результате замены одного нуклеотида другим в полиморфном сайте. Транзиция представляет собой замену одного пуринового основания на другое пуриновое основание или одного пиримидинового основания на другое пиримидиновое основание. Трансверсия представляет собой замену пуринового основания на пиримидиновое основание, или наоборот. Однонуклеотидный полиморфизм может возникать также в результате делеции нуклеотида или инсерции нуклеотида в аллель, которые отсутствуют в аллеле, с которым производится сравнение.
В контексте настоящего описания понятие "клетка-предшественник" обозначает клетку, которая еще не полностью дифференцировалась или перешла на стадию (путь) дифференцировки и которая, как правило, не экспрессирует маркеры или не обладает функциями, присущими зрелой полностью дифференцированной клетке.
В контексте настоящего описания понятие "мезенхимальные клетки" или "мезенхимальные стволовые клетки" обозначает мультипатентные клетки-предшественники, которые обладают способностью к многократному делению и потомство которых образует скелетные ткани, включая хрящевую ткань, костную ткань, сухожилия, связки, строму костного мозга и соединительную ткань (см. A. Caplan, J. Orthop.Res. 9: cc.641-650, 1991).
В контексте настоящего описания понятие "остеогенные клетки" обозначает остеобласты и клетки-предшественники остеобластов.
В контексте настоящего описания понятие "локус количественного признака" (КПЛ) обозначает меру фенотипического признака, такую как минеральная плотность костной ткани, который является непрерывно распределенным и может определяться несколькими генами. КПЛ представляет собой сайт на хромосоме, аллели которой влияют на количественный признак.
Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, представляют собой соединения, которые обладают способностью ингибировать или уменьшать активность 15-липоксигеназы. В этом контексте ингибирование и уменьшение активности фермента означает уменьшение уровня измеренной активности по сравнению с контрольным экспериментом, в котором фермент, клетку или индивидуум не подвергают обработке тестируемым соединением. В конкретных вариантах осуществления изобретения ингибирование или уменьшение измеренной активности составляет по меньшей мере 10%. Специалисту в данной области должно быть очевидно, что для конкретных случаев применения может быть предпочтительным уменьшение или ингибирование измеренной активности по меньшей мере на 20, 50, 75, 90 или 100% или на любое целое число процентов от 10 до 100%. Как правило, ингибиторы 15-липоксигеназы, предлагаемые в настоящем изобретении, характеризуются значением IC50 менее чем 1 мкМ, предпочтительно менее чем 100 нМ.
Настоящее изобретение основано, в частности, на открытии того факта, что 15-липоксигеназа представляет собой важный модулятор массы костной ткани. В частности, геномное сканирование 100 микросателлитных маркеров у мышей позволило выявить локусы чувствительности к нарушению, связанному с потерей костной ткани, которые расположены на хромосомах 1, 2, 4 и 11. Различия в экспрессии генов, прежде всего генов, кодируемых на хромосоме 11, обусловливают существенные различия в экспрессии гена, кодирующего 15-липоксигеназу, что свидетельствует о наличии связи между экспрессией 15-липоксигеназы и уменьшением минеральной плотности костной ткани.
Полная масса костной ткани является основным критерием риска, обусловленного остеопорозом перелома. На основе семейных исследований и исследований, проведенных на близнецах, было установлено, что минеральную плотность костной ткани (МПК) регулируют генетические факторы (см. обзор Stewart и Ralston, J. Endocr., 166: cc.235-245, 2000). При создании изобретения применяли модель с использованием генов мыши для идентификации локусов, контролирующих МПК. Для идентификации областей генома, которые регулируют минеральную плотность костной ткани, применяли метод, включающий две стадии. Сначала применяли компьютерный метод и микросателлитные маркеры для сканирования базы данных однонуклеотидного полиморфизма (SNP) животного, в результате чего были предсказаны области хромосом, которые участвуют в накоплении и поддержании скелетной массы (пример 1). Затем применяли модели с использованием животных для идентификации и оценки мутаций в генах, участвующих в накоплении и поддержании скелетной массы (пример 2), и для установления того факта, что нарушение гена 15-липоксигеназы приводит к увеличению МПК (пример 4), что свидетельствует о том, что ген 15-липоксигеназы участвует в регуляции массы костной ткани.
Соединения, которые ингибируют активность 15-липоксигеназы и предупреждают резорбцию костной ткани или стимулируют образование костной ткани, являются наиболее предпочтительными для лечения остеопороза. Соединения, которые ингибируют активность 15-липоксигеназы, можно применять в способе лечения остеопороза или остеоартрита, основанном на ингибировании резорбции костной ткани остеокластами или стимуляции дифференцировки, приводящей к образованию остеобластов, и формирования новой костной ткани. В примере 3 продемонстрирована способность ингибиторов 15-липоксигеназы стимулировать дифференцировку человеческих мезенхимальных стволовых клеток в остеобласты in vitro. В примере 4 продемонстрировано, что полное нарушение гена 15-липоксигеназы in vivo приводит к увеличению МПК. В примере 5 на модели in vivo продемонстрирована способность ингибиторов 15-липоксигеназы стимулировать образование костной ткани.
Согласно настоящему изобретению ингибитор 15-липоксигеназы можно применять для приготовления лекарственного средства, которое содержит эффективное количество указанного ингибитора 15-липоксигеназы, предназначенного для уменьшения потери костной ткани у млекопитающего. Так, в настоящем изобретении предложен способ уменьшения потери костной ткани у млекопитающего, который заключается в том, что индивидууму вводят эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы. Предпочтительно потеря костной ткани связана с остеопорозом, остеоартритом, болезнью Пэджета или заболеваниями периодонта. Более предпочтительно потеря костной ткани связана с остеопорозом.
Кроме того, согласно настоящему изобретению ингибитор 15-липоксигеназы можно применять для приготовления лекарственного средства, предназначенного для увеличения минеральной плотности костной ткани у млекопитающего, которое содержит эффективное количество указанного ингибитора 15-липоксигеназы. Таким образом, в настоящем изобретении предложен также способ увеличения минеральной плотности костной ткани у млекопитающего, заключающийся в том, что млекопитающему вводят эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы.
Согласно настоящему изобретению ингибитор 15-липоксигеназы можно применять для приготовления лекарственного средства, содержащего эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы, которое предназначено для лечения остеопороза у млекопитающего. Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ лечения остеопороза у млекопитающего, заключающийся в том, что млекопитающему вводят эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы.
Кроме того, ингибитор 15-липоксигеназы можно применять для приготовления лекарственного средства, предназначенного для стимуляции дифференцировки линии мезенхимальных стволовых клеток у человека в остеобласты, которое содержит количество указанного ингибитора 15-липоксигеназы, эффективное для увеличения количества остеобластов в организме человека. Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ стимуляции дифференцировки линии мезенхимальных стволовых клеток у человека в остеобласты, заключающийся в том, что человеку вводят количество ингибитора 15-липоксигеназы, эффективное для увеличения количества остеобластов в организме человека. Предпочтительно ингибитор 15-липоксигеназы характеризуется значением IC50 менее 1 мкМ.
Лечение с помощью ингибитора 15-липоксигеназы можно применять для заживления переломов кости и остеоэктомий, включая как сращиваемые, так и не сращиваемые переломы. Типы переломов, которые можно лечить с помощью способов, предлагаемых в изобретении, включают переломы, вызываемые как травмой, так и остеопорозом, например переломы тазобедренного сустава, шейки бедра, запястья, позвонков, позвоночного столба, ребер, грудины, гортани и трахей, лучевой/локтевой кости, большеберцовой кости, коленной чашечки, ключицы, таза, плечевой кости, нижней части голени, пальцев руки и пальцев стопы, лица и лодыжки. С помощью способов, предлагаемых в настоящем изобретении, можно увеличивать скорость заживления, а также стимулировать сращивание в случае переломов, которые в противном случае остаются несращиваемыми. Профилактическое лечение пациента, для которого установлено, что он имеет риск возникновения переломов, может также снижать риск возникновения переломов у этого пациента.
Следовательно, ингибитор 15-липоксигеназы можно применять для приготовления лекарственного средства, которое содержит эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы, предназначенного для уменьшения количества случаев переломов у млекопитающего. Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ уменьшения количества случаев переломов у млекопитающего, заключающийся в том, что млекопитающему вводят эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы.
Кроме того, ингибитор 15-липоксигеназы можно применять для приготовления лекарственного средства, которое содержит эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы, предназначенного для заживления переломов у млекопитающего. Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ заживления переломов у млекопитающего, заключающийся в том, что млекопитающему вводят эффективное количество ингибитора 15-липоксигеназы.
Предпочтительно млекопитающее в указанных в описании способах и применениях представляет собой человека. Более предпочтительно описанный выше ингибитор 15-липоксигеназы характеризуется значением IC50 менее чем 1 мкМ.
Известны несколько ингибиторов 15-липоксигеназы, которые можно применять согласно способам, предлагаемым в настоящем изобретении. К таким ингибиторам относятся синтетические органические молекулы, растительные экстракты и другие природные продукты, а также антитела к 15-липоксигеназе. Репрезентативные примеры (не ограничивающие объем изобретения) описаны у Cornicelli JA, Trivedi BK., 15-lipoxygenase and its inhibition: a novel therapeutic target for vascular disease, [обзор] [113 ссылок]. Current Pharmaceutical Design; 5(1): cc.11-20, 1999 (описаны различные производные кофеиновой кислоты, простые пропаргиловые эфиры, катехолы и бензотиопираноиндолы); Cornicelli JA. 15-lipoxygenase inhibitors as antiatherosclerotic agents. Idrugs, 1(2): cc.206-213, 1998; Fleischer R., Frohberg P., Buge A., Nuhn P., Wiese M. QSAR analysis of substituted 2-phenylhydrazonoacetamides acting as inhibitors of 15-lipoxygenase. Quant Struct - Act Relat; 19(2): cc.162-172, 2000; Kuhn H. Inhibitors of 12/15-lipoxygenase are potential anti-atherosclerotic drugs. Curr Opin Anti-Inflammatory Immunomodulatory Invest Drugs; 1(3): cc.227-237, 1999; Mogul R., Johansen E., Holman T.R. Oleyl sulfate reveals allosteric inhibition of soybean lipoxygenase-1 and human 15-lipoxygenase. Biochemistry; 39(16): cc.4801-4807, 2000; Sexton К., Roark W.H., Sorenson R., Cornicelli J., Sekerke C., Welch K., Thiourea inhibitors of 15- lipoxygenase. Abstracts of Papers American Chemical Society; 218(1-2), 1999: MEDIO; Tait B.D., Dyer R.D., Auerbach B.J., Bornemeier D., Guilds-Zamarka L., Oxender M. и др. Catechol based inhibitors of 15-lipoxygenase. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, том 6(1): cc.93-96, 1996; Moreau R.A., Agnew J., Hicks K.B., Powell M.J., Modulation of lipoxygenase activity by bacterial hopanoids. JouPHKl of Natural Products, том; 60(4): cc.397-398, 1997; 219th National Meeting of the American Chemical Society (2000), Poster BIOL-15. авторы: E-N-Jonsson и T-R-Holman. University of California, Santa Cruz, CA (описаны ингибиторы 15-липоксигеназы, выделенные из морских губок; и Lyckander I.M., Malterud K.E. Lipophilic flavonoids from Orthosiphon spicatus as inhibitors of 15-lipoxygenase. Acta Pharm Nord; 4(3): cc.159-166, 1992. Кроме того, согласно способам, предлагаемым в настоящем изобретении, можно применять производные тиомочевины и бензамида, описанные в U.S. No. 6268387 на имя Conner и др. (представителем которых является 3-амино-N-(3,4-дихлорфенил)-4-метоксибензамид, т.е. соединение 3), которые являются ингибиторами 15-липоксигеназы, а также 2-фенилбензо[d]изоселеназол-3-он (эбселен), 6,11-дигидро-5-тиа-11-азабензо[а]флуорин (обозначенный в настоящем описании как соединение 2), и фенилацетиленовые производные, представителем которых является 3-(2-окт-1-инилфенил)акриловая кислота, т.е. соединение 4. Можно применять также соединения, описанные в WO 01/96298 (включенный в настоящее описание в качестве ссылки), включая соединение 6, т.е. изобутиловый эфир [[[5-(5,6-дифтор-1Н-индол-2-ил)-2-метоксифенил]амино]сульфонил]карбаминовой кислоты.
К другим ингибиторам 15-липоксигеназы относятся перечисленные ниже соединения:
1)
описанное в материалах 222-го National Meeting of the American Chemical Society, Чикаго, шт.Иллинойс, США, 26-30 августа 2001 г. постер, MEDI 270.
2)PD 148104
описанное в материалах 218-го ACS (Нью-Орлеан), 1999, MEDI 200.
3) PD 146176, разработанное фирмой Parke Davis (в настоящее время Pfizer)
4) А 78773 (фирма Abbott), описанное в WO 92/1682
5) QA-208-199 (фирма Novartis)
описанное в материалах 6-ой Int Conf Prostaglandins (Флоренция), 1986, 328 Связанный с этим объект настоящего изобретения относится к методам совместной терапии с использованием ингибиторов 15-липоксигеназы для увеличения образования костной ткани и других действующих веществ, таких как бисфосфонаты, эстроген, ИМРЭ (избирательные модуляторы рецептора эстрогена), кальцитонины или с использованием анаболиков. Примерами бисфосфонатов являются алендронат, ибандронат, памидронат, этидронат и ризедронат. Примерами ИМРЭ являются ралоксифен, дигидроралоксифен и лазофоксифен. Кальцитонины включают человеческий и лососевый кальцитонин. В качестве анаболиков можно применять паратиреоидные гормоны (РТН), например, hPTH(1-34), PTH(1-84), и протеин, связанный с паратиреоидным гормоном (РТНгР), и его аналоги. Конкретные аналоги PTHrP описаны в "Mono- and Bicyclic Analogs of Parathyroid Hormone-Related Protein. 1. Synthesis and Biological Studies," Michael Chorev и др. Biochemistry, 36: ее. 3293-3299, 1997 и "Cyclic analogs of РТН and PTHrP," в WO 96/40193 и U.S. No. 5589452 и WO 97/07815. Другое действующее вещество можно вводить одновременно, до или после введения ингибитора 15-липоксигеназы и его можно вводить с помощью другого метода введения. Предпочтительно сначала вводят ингибитор 15-липоксигеназы. Продолжительность такого введения может быть любой, но, как правило, она составляет от 6 до 24 месяцев. После этого лечения осуществляют лечение с помощью антирезорбтивного агента, например бисфосфоната, ИМРЭ, кальцитонина или с использованием гормонзаместительной терапии.
Так, предпочтительно можно применять композицию, содержащую описанный выше ингибитор 15-липоксигеназы и дополнительное действующее вещество. Таким образом, в описанном выше способе предпочтительно применяют дополнительное действующее вещество. Более предпочтительно указанное действующее вещество, которое используют или применяют согласно способу, предлагаемому в изобретении, является активным регулятором резорбции кальция из костной ткани. Наиболее предпочтительно указанное действующее вещество представляет собой вещество, выбранное из ряда, включающего эстроген, кальцитонин, бисфосфонат и IGF.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения ингибитор 15-липоксигеназы, используемый в способах или применениях, изложенных в настоящем описании, выбирают из ряда, включающего синтетические органические молекулы, природные продукты и антитела к 15-липоксигеназе. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения ингибитор 15-липоксигеназы выбирают из ряда, включающего 3-(2-нон-1-инилфенил)пропионовую кислоту, 6,11-дигидро-5-тиа-11-азабензо[а]флуорен, 3-амино-N-(3,4-дихлорфенил)-4-метоксибензамид, транс-3-(2-окт-1-инилфенил)акриловую кислоту и изобутиловый эфир [[[5-(5,6-дифтор-1Н-индол-2-ил)-2-метоксифенил]амино]сульфонил]карбаминовой кислоты.
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения способ, предлагаемый в изобретении, заключается в том, что осуществляют введение терапевтически эффективного количества антисмыслового олигонуклеотида, имеющего последовательность, которая обладает способностью специфически связываться с любыми последовательностями молекулы геномной ДНК или мРНК, кодирующей 15-липоксигеназу, вследствие чего предотвращается транскрипция или трансляция мРНК 15-липоксигеназы. Понятие "антисмысловой" относится к композиции, которая содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную "смысловой" цепи конкретной нуклеотидной последовательности. После интродукции в клетку комплементарные нуклеотиды объединяются с эндогенными последовательностями, продуцируемыми клетками, в результате чего образуются дуплексы и происходит блокирование либо транскрипции, либо трансляции (см., например, Antisense Therapeutics, Humana Press Inc., под ред. Agrawal S., 1996, Totawa N.J.; Alama и др. Pharmacol. Res. 36: cc.171-178, 1997; Crooke S.T. Adv. Pharmacol. 40: cc.1-49, 1997; и Lavrosky и др. Biochem. Mol. Med. 62(1): cc.11-22, 1997). Антисмысловые последовательности могут представлять собой любые нуклеотидные последовательности, включая ДНК, РНК или любые миметики или аналоги нуклеиновых кислот (см., например, Rossi и др. Antisense Res. Dev. 1: cc.285-288, 1991; Pardridge и др. Proc. Nat. Acad. Sci. 92: cc.5592-5596, 1995; Nielsen и Haaima Chem. Soc. Rev. 96: cc.73-78, 1997; и Lee и др. Biochemistry 37: cc.900-1010, 1998). Введение антисмысловых последовательностей можно осуществлять различными путями, например, путем введения в клетку с помощью рекомбинантного вектора.
Как правило, предпочтительно используют антисмысловые олигонуклеотиды, состоящие из примерно 15-25 нуклеотидов, поскольку их легко синтезировать и они обладают способностью оказывать требуемое ингибирующее действие. Для этой цели можно применять также молекулярные аналоги антисмысловых олигонуклеотидов, что может давать дополнительные преимущества в отношении стабильности, распределения или снижения токсичности фармацевтического продукта. Кроме того, к антисмысловым олигонуклеотидам можно присоединять группы, обладающие химической реакционной способностью, такие как связанная с железом этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК-Fe), что приводит к расщеплению РНК в сайте гибридизации. Эти и другие методы ингибирования in vitro трансляции генов с использованием антисмысловых последовательностей хорошо известны в данной области (см., например, Marcus-Sakura, Anal. Biochem. 172: с.289, 1988).
Хотя многие ингибиторы 15-липоксигеназы являются известными и они указаны в настоящем описании, следует понимать, что в способах, предлагаемых в изобретении, можно использовать многие другие ингибиторы. Подразумевается, что в представленных в настоящем описании способах можно применять как известные в настоящее время ингибиторы 15-липоксигеназы, так и те, которые будут выявлены позднее. Представленные в настоящем описании методы анализа и другие методы, известные специалисту в данной области, позволяют легко идентифицировать и получать другие ингибиторы 15-липоксигеназы, которые можно применять для предупреждения или лечения потери костной ткани.
Как проиллюстрировано в примерах, генетические аномалии или алдели были обнаружены в хромосоме 11 и положение аллеля соответствует положению гена 15-липоксигеназы. Таким образом, ингибирование или индукцию 15-липоксигеназы можно применять в различных ситуациях. Возможно, что путем внутриклеточного ингибирования 15-липоксигеназы можно уменьшать обмен костной ткани и тем самым увеличивать минеральную плотность костной ткани и качество костной ткани. Таким образом, ингибирование 15-липоксигеназы можно использовать в способе лечения или предупреждения избыточной резорбции костной ткани, которая происходит при остеопорозе и остеоартрите.
Ингибиторы 15-липоксигеназы, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять также для стимулирования роста костеобразующих (остеогенных) клеток или их предшественников или для индукции дифференцировки предшественников костеобразующих клеток либо in vitro, либо ex vivo. Более конкретно ингибиторы 15-липоксигеназы можно применять для стимулирования популяции клеток, включающей мезенхимальные клетки костного мозга, увеличивая тем самым количество остеогенных клеток в популяции клеток. В предпочтительном варианте способа гематопоэтические клетки удаляют из популяции клеток либо до, либо после обработки ингибиторами 15-липоксигеназы. С помощью таких методов можно размножать остеогенные клетки. Размноженные остеогенные клетки можно вводить путем инфузии (или повторной инфузии) позвоночному животному, нуждающемуся в этом. Например, мезенхимальные стволовые клетки из организма самого индивидуума можно подвергать воздействию ех vivo соединений, предлагаемых в изобретении, и образовавшиеся остеогенные клетки можно вводить путем инфузии или непосредственно в требуемую область тела индивидуума, где дальнейшая пролиферация и/или дифференцировка остеогенных клеток может происходить без иммунного отторжения. В альтернативном варианте популяция клеток, подвергаемая действию ингибиторов 15-липоксигеназы, может представлять собой иммортализованные остеобластные или остеогенные клетки эмбриона человека. Если такие клетки вводят путем инфузии или имплантации в организм позвоночного животного, то может оказаться целесообразным для обеспечения иммунной защиты этих неаутологичных клеток или иммунной супрессии (предпочтительно местной) реципиента для повышения эффективности трансплантации и восстановления костной ткани или хряща.
Эффективность лечения можно оценивать путем мониторинга эффективности применения и способов, представленных выше в настоящем описании, для индивидуума, которые заключаются в измерении уровня 15-липоксигеназы в организме индивидуума, который также является объектом настоящего изобретения.
Можно применять также различные методы для идентификации классов ингибиторов 15-липоксигеназы, которые могут предупреждать потерю костной ткани и/или стимулировать образование костной ткани. Один из методов, которые можно применять для идентификации соединений, ингибирующих активность 15-липоксигеназы, заключается в том, что клетки, ткани или предпочтительно экстракт клеток или иной препарат, содержащий 15-липоксигеназу, приводят в контакт с несколькими известными концентрациями тестируемого соединения в буфере, не оказывающего влияния на активность 15-липоксигеназы. Уровень активности 15-липоксигеназы для каждой концентрации тестируемого соединения измеряют путем количественной оценки полученного в результате ферментативной реакции продукта и с помощью стандартных методов определяют значения IC50 (концентрация тестируемого соединения, при которой обнаруживаемая активность образца препарата уменьшается на половину от ее исходного или контрольного значения). Специалисту в данной области известны другие методы определения концентрации соединения, предлагаемого в изобретении, при которой происходит ингибирование 15-липоксигеназы, и, как это следует из приведенного описания, их можно применять для этой цели. Конкретные методы анализа, которые можно применять для идентификации ингибиторов 15-липоксигеназы, описаны в US № 626887B1 и 5958950 (анализ, основанный на использовании кроличьих ретикулоцитов) и US № 4623661 (анализ, основанный на использовании радиоактивномеченной арахидоновой кислоты в клетках линии RBL-1).
Например, как правило, антагонисты можно выявлять, если известна структура лиганда. В настоящее время благодаря разработке высокоавтоматизированных методов анализа с использованием клеток, дающих физиологический ответ, можно осуществлять тестирование потенциальных аналогов лигандов. В частности, с помощью представленных в настоящем описании методов скрининга можно выявлять новые агонисты и антагонисты.
Согласно другому способу для идентификации соединений, трехмерная структура которых комплементарна активному сайту 15-липоксигеназы, можно применять научно-обоснованное создание лекарственного средства на основе структурных исследований молекулярных форм хемокинов, других эффекторов или аналогов. Такие соединения можно выявлять различными методами, включая молекулярно-механические расчеты, молекулярно-динамические расчеты, молекулярно-динамические расчеты с учетом ограничений, где ограничения определяют на основе ЯМР-спектроскопии, дистанционной геометрии, где дистанционную матрицу частично определяют с помощью методов ЯМР-спектроскопии, дифракции рентгеновских лучей или дифракции нейтронов. При использовании всех этих методов структуру можно определять на основе сравнения данных, полученных в присутствии любого из лигандов, который, как известно, обладает способностью взаимодействовать с 15-липоксигеназой, или без него.
Такие компьютерные программы включают (но, не ограничиваясь ими) AMBER (которую можно получить из Калифорнийского университета (University of California), Сан-Франциско), CHARMM (Chemistry at HARvard Molecular Mechanics, которую можно получить из Гарвардского университета (Harvard University)), MM2, SYBYL (фирма Trypos Inc.), CHEMX (фирма Chemical Design), MACROMODEL, GRID (фирма Molecular Discovery Ltd) и Insight II (фирма Accelryl). Подразумевается, что такие программы можно применять для оценки химического взаимодействия между двумя молекулами, либо изолированными, либо находящимися в окружении молекул растворителя, таких как молекулы воды, или для расчетов, основанных на приблизительном учете влияния сольватации взаимодействующих молекул. Относительную ориентацию двух молекул можно определять вручную путем визуального наблюдения или с использованием других компьютерных программ, которые генерируют многочисленные возможные ориентации. Примерами компьютерных программ (но, не ограничиваясь ими) являются DOCK и AutoDOCK. С помощью компьютерных программ каждую ориентацию можно тестировать в отношении степени ее комплементарности. Таким путем можно создавать новые соединения, обладающие способностью ингибировать 15-липоксигеназу.
Другой способ идентификации соединений, обладающих способностью ингибировать 15-липоксигеназу, заключается в применении таких методов, как спектроскопия в УФ-лучах или видимом спектре, полариметрия, цифровая спектроскопия кристаллов (ЦС) или цифровая рамановская спектроскопия (ЦРС), инфракрасная спектроскопия или спектроскопия комбинационного рассеяния (Рамановская спектроскопия), спектроскопия ядерного магнитного резонанса, флуоресцентная спектроскопия, ЖХВР, гель-электрофорез, капиллярный гель-электрофорез, диализ, рефрактометрия, кондуктометрия, микроскопия на основе атомного взаимодействия, полярография, диэлектрометрия, калориметрия, измерение растворимости, ЭПР (электронный парамагнитный резонанс)- или масс-спектроскопия. Эти методы можно применять непосредственно для прямой оценки взаимодействия соединений с 15-липоксигеназой или косвенным образом, когда определенный агент, обладающий спектроскопическими свойствами, используют в качестве зонда для оценки способности других соединений связываться с 15-липоксигеназой; например, на основе замещения или тушения флуоресценции.
Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ идентификации соединений, которые повышают минеральную плотность костной ткани, заключающийся в том, что соединение приводят в контакт с 15-липоксигеназой и определяют, ингибирует ли соединение активность 15-липоксигеназы. Предпочтительно, чтобы, кроме того, в способе было предусмотрено тестирование соединения с помощью функционального анализа для оценки действия соединения в отношении образования костной ткани. Более конкретно функциональный анализ заключается в том, что соединение приводят в контакт с человеческими мезенхимальными стволовыми клетками и определяют дифференцировку клеток в костеобразующие клетки. В другом более предпочтительном варианте осуществления изобретения функциональный анализ заключается в том, что соединение вводят животному, кроме человека, и измеряют индекс образования костной ткани. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения измеряемый индекс представляет собой минеральную плотность костной ткани. В другом наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения индекс представляет собой биомеханический параметр костной ткани.
В другом наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения функциональный анализ заключается в том, что соединение приводят в контакт с человеческими мезенхимальными стволовыми клетками и оценивают дифференцировку в костеобразующие клетки путем анализа активности щелочной фосфатазы, анализа содержания кальция, анализа общей ДНК в препаратах или их комбинаций.
В еще одном варианте осуществления изобретения предложен способ идентификации соединений, которые обладают способностью увеличивать минеральную плотность костной ткани, где способ заключается в том, что ингибитор 15-липоксигеназы приводят в контакт с человеческими мезенхимальными стволовыми клетками и оценивают дифференцировку клеток в клетки, образующие костную ткань. Предпочтительно оценку дифференцировки клеток осуществляют путем анализа активности щелочной фосфатазы, анализа содержания кальция, анализа общей ДНК в препаратах или их комбинаций
Идентифицированные или созданные таким образом ингибиторы 15-липоксигеназы можно затем тестировать в отношении их способности предупреждать потерю костной ткани и/или стимулировать образование костной ткани. В одном из вариантов осуществления изобретения применяют описанные выше компьютерные методы. В другом варианте способа соединения тестируют с точки зрения их способности воздействовать на известные мишени, связанные с потерей костной ткани, такие, например, как рецепторы эстрогена, рецептор фактора некроза опухоли, рецептор интегрина и т.п. Согласно еще одному варианту способа соединения тестируют в отношении их способности дифференцировать стволовые клетки в клетки костной ткани.
Согласно способам, представленным в настоящем описании, фармацевтические композиции, содержащие описанные выше молекулы, применяют в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями и необязательно другими терапевтическими и/или профилактическими ингредиентами. Такими носителями являются жидкости, такие как вода, физиологический раствор, глицерин, полиэтиленгликоль, гиалуроновая кислота, этанол и т.д. Специалисту в данной области известны также пригодные носители для композиций не жидкого типа. В композициях, предлагаемых в настоящем изобретении, можно применять фармацевтически приемлемые соли, которые включают, например, соли минеральных кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаты и т.п.; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т.п. Подробное описание фармацевтически приемлемых эксципиентов и солей можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-е изд. (Истон, шт.Пенсильвания, изд-во Mack Publishing Company, 1990).
Кроме того, в составе таких носителей могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как смачивающие или эмульгирующие агенты, биологические забуферивающие вещества, поверхностно-активные вещества и т.п. Биологический буфер может представлять собой практически любой раствор, который является фармакологически приемлемым и с помощью которого обеспечивают требуемое значение рН композиции, т.е. значение рН в физиологически приемлемом диапазоне. Примерами буферных растворов являются физиологический раствор, забуференный фосфатом физиологический раствор, забуференный трис физиологический раствор, забуференный соляной раствор Хэнкса и т.п.
В зависимости от предполагаемого пути введения фармацевтические композиции могут представлять собой твердые, полутвердые или жидкие лекарственные формы, такие, например, как таблетки, суппозитории, пилюли, капсулы, порошки, жидкости, суспензии, кремы, мази, лосьоны или т.п., предпочтительно в виде стандартных доз, предназначенных для однократного введения точной дозы. Композиции должны содержать эффективное количество требуемого лекарственного средства в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем и, кроме того, могут содержать другие фармацевтические агенты, адъюванты, разбавители, буферы и т.д.
Для твердых композиций стандартными нетоксическими твердыми носителями являются, например, имеющие фармацевтическую чистоту маннит, лактоза, крахмал, стеарат магния, сахарин натрия, тальк, целлюлоза, глюкоза, сахароза, карбонат магния и т.п. Вводимые жидкие фармацевтические композиции можно приготавливать, например, путем растворения, диспергирования и т.д. указанного в настоящем описании действующего вещества и необязательных фармацевтических адъювантов в эксципиенте, таком, например, как вода, физиологический раствор, водная декстроза, глицерин, этанол и т.п., получая раствор или суспензию. При необходимости предназначенная для введения фармацевтическая композиция может содержать также небольшие количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, забуферивающие агенты для регулирования значения рН и т.п., например ацетат натрия, сорбитанмонолаурат, триэтаноламинацетат натрия, триэтаноламинолеат и т.д. Применяемые на практике методы получения таких лекарственных средств являются известными или они очевидны специалистам в данной области (см., например, цитированный выше справочник).
Предназначенная для орального введения композиция, как правило, находится в форме таблетки, капсулы, мягкой гелевой капсулы или может находиться в форме водного или неводного раствора, суспензии или сиропа. Предпочтительными формами для орального введения являются таблетки и капсулы. Таблетки и капсулы для орального введения, как правило, содержат один или несколько стандартных носителей, таких как лактоза и кукурузный крахмал. Как правило, добавляют замасливатели, такие как стеарат магния. Если применяют жидкую суспензию, то действующее вещество можно объединять с эмульгирующими и суспендирующими агентами. При необходимости можно добавлять также корригенты, красители и/или подслащивающие вещества. Другие необязательные компоненты, которые могут входить в оральную композицию, включают (но, не ограничиваясь ими) консерванты, суспендирующие агенты, загустители и т.п.
Парентеральные композиции можно приготавливать в стандартных формах либо в виде жидких растворов или суспензий, твердых форм, пригодных для солюбилизации или суспендирования перед инъекцией, либо в виде эмульсий. Предпочтительно с помощью методов, известных в данной области, приготавливают стерильные суспензии для инъекции с использованием пригодных носителей, диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов. Стерильная композиция для инъекции может представлять собой также стерильный раствор или суспензию для инъекции в нетоксическом приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе. К приемлемым носителям и растворителям, которые можно применять, относятся вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителей или суспендирующих сред, как правило, применяют стерильные жирные масла, эфиры жирных кислот или полиолы. Кроме того, парентеральное введение можно осуществлять с использованием системы с замедленным высвобождением или пролонгированным высвобождением так, чтобы поддерживать постоянный уровень дозы лекарственного средства.
В альтернативном варианте фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, можно вводить в форме суппозиториев для ректального введения. Их можно приготавливать путем смешения действующего вещества с пригодным не вызывающим раздражения эксципиентом, который находится в твердом состоянии при комнатной температуре, но превращается в жидкость при температуре в прямой кишке и поэтому расплавляется в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. К таким материалам относятся кокосовое масло, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.
Фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, можно вводить также с помощью назального аэрозоля или путем ингаляции. Такие композиции получают с помощью методов, хорошо известных в области приготовления фармацевтических композиций и их можно приготавливать в виде растворов в физиологическом растворе с использованием бензилового спирта или других приемлемых консервантов, стимуляторов абсорбции для повышения биологической доступности, пропеллентов, таких как фторированные углеводороды или азот, и/или других стандартных солюбилизирующих или диспергирующих агентов.
Предпочтительными композициями для местного применения лекарственного средства являются мази и кремы. Мази представляют собой полутвердые препараты, как правило, на основе вазелина или других петролейных производных. Кремы, содержащие выбранное действующее вещество, как известно в данной области, представляют собой вязкую жидкость или полутвердые эмульсии либо типа масло-в-воде, либо типа вода-в-масле. Основы кремов могут смываться водой и, как правило, они содержат масляную фазу, эмульгатор и водную фазу. Масляная фаза, которую иногда называют также "внутренней" фазой, как правило, состоит из вазелина и жирного спирта, такого как цетиловый или стеариловый спирт; водная фаза, как правило, хотя это и не является необходимым, превосходит по объему масляную фазу и, как правило, содержит увлажнитель. Эмульгатор в композиции в виде крема, как правило, представляет собой неионогенное, анионогенное, катионогенное или амфотерное поверхностно-активное вещество. В качестве конкретной основы, предназначенной для приготовления мази или крема, как это должно быть очевидно специалистам в данной области, следует применять такой продукт, который обеспечивает оптимальное введение лекарственного средства. Так же, как и другие носители или наполнители, основа для приготовления мази должна быть инертной, стабильной, не вызывать раздражение и сенсибилизацию.
Композиции для буккального введения представляют собой таблетки, пастилки, гели и т.п. В альтернативном варианте буккальное введение можно осуществлять с использованием известной специалистам в данной области системы введения через слизистую оболочку. Соединения, предлагаемые в изобретении, можно вводить также через кожу или слизистую ткань с помощью стандартных систем трансдермального введения лекарственного средства, т.е. трансдермальных "бляшек", в которых действующее вещество, как правило, содержится в ламинированной структуре, служащей в качестве устройства для введения лекарственного средства, которую прикрепляют к поверхности тела. В такой структуре композиция лекарственного средства, как правило, содержится в слое или "резервуаре", расположенном под верхним защитным слоем. Ламинированное устройство может содержать один резервуар или оно может содержать несколько резервуаров. В одном из вариантов осуществления изобретения резервуар представляет собой полимерный матрикс из фармацевтически приемлемого обеспечивающего контакт адгезива, который служит для прикрепления системы к коже в процессе введения лекарственного средства. Примерами пригодных обеспечивающих контакт с кожей адгезивов являются (но, не ограничиваясь ими) полиэтилены, полисилоксаны, полиизобутилены, полиакрилаты, полиуретаны и т.п. В альтернативном варианте содержащий лекарственное средство резервуар и обеспечивающий контакт с кожей адгезив представляют собой раздельные и имеющие различную структуру слои, причем адгезив, который находится под резервуаром, в этом случае может представлять собой описанный выше полимерный матрикс или может представлять собой содержащий жидкость или гель резервуар, или может иметь какую-то иную форму. Защитный слой в таких слоистых конструкциях, который служит в качестве верхней поверхности устройства, играет роль основного структурного элемента ламинированной структуры и придает устройству основную часть гибкости. Материал, который выбирают для защитного слоя, должен быть практически непроницаемым для действующего вещества и других присутствующих продуктов.
Пациенту следует вводить фармацевтически или терапевтически эффективное количество композиции. Точное эффективное количество должно варьироваться от индивидуума к индивидууму и должно зависеть от вида, возраста, размеров индивидуума и его состояния здоровья, природы и серьезности подлежащего лечению состояния, рекомендаций лечащего врача и лекарственных средств или комбинации лекарственных средств, выбранных для лечения. Эффективное количество в конкретной ситуации можно выбирать с помощью стандартных экспериментов. Для цели настоящего изобретения терапевтическое количество, как правило, составляет от примерно 0,05 до примерно 40 мг/кг веса тела, более предпочтительно от примерно 0,5 до примерно 20 мг/кг, в виде по меньшей мере одной дозы. Для крупных млекопитающих показанные суточные дозы могут составлять от примерно 1 до 100 мг, которые вводят один или несколько раз в день, более предпочтительно от примерно 10 до 50 мг. Индивидууму можно вводить такое количество доз, которое требуется для уменьшения и/или облегчения признаков, симптомов или причин рассматриваемого нарушения или для любого иного требуемого изменения биологической системы.
Введение полинуклеотидов, например введение антисмысловых олигонуклеотидов 15-липоксигеназы можно осуществлять с использованием любой описанной выше композиции или с использованием рекомбинантных экспрессионных векторов с применением в качестве носителей вирусов или частиц или без них. Такие методы известны в данной области (см., например, U.S. №6214804; 6147055; 5703055; 5589466; 5580859; Slater и др., J._Allergy Clin. Immunol. 102: cc.469-475, 1998). Например, введение полинуклеотидных последовательностей можно осуществлять с помощью различных вирусных векторов, включая ретровирусные и аденоассоциированные вирусные векторы (см., например. Miller A.D., Blood 76: с.271, 1990; и Uckert и Walther, Pharmacol. Ther. 63: cc.323-347, 1994). Векторы, которые можно применять для антисмысловой генной терапии, включают (но, не ограничиваясь ими) аденовирусы, вирусы герпеса, вирус коровьей оспы или предпочтительно РНК-овые вирусы, такие как ретровирусы. Другие механизмы введения генов, которые можно применять для введения полинуклеотидных последовательностей в клетки-мишени, включают коллоидную дисперсию и системы на основе липосом, искусственные вирусные оболочки и другие системы, доступные специалисту в данной области (см., например, Rossi, J.J., Br. Med. Bull. 51: cc.217-225, 1995; Morris и др., Nucl. Acids Res. 25: cc.2730-2736, 1997; и Boado и др., J. Pharm. Sci. 87: cc.1308-1315, 1998). Например, в качестве систем введения можно применять комплексы макромолекул, нанокапсулы, микросферы, гранулы и основанные на липидах системы, включая эмульсии типа масло-в-воде, мицеллы, смешанные мицеллы и липосомы.
Как указано выше, фармацевтические композиции могут содержать одно или несколько действующих веществ, обладающих способностью эффективно регулировать гомеостаз кальция. Дополнительное действующее вещество может представлять собой (но, не ограничиваясь ими) эстроген, кальцитонин, бисфосфонат (например, алендронат, резидронат, золендронат и ибандронат), витамин D3 или его аналог, андроген, соль фтора, паратиреоидный гормон или его аналог, или IGF, агенты, которые изменяют регуляцию транскрипции встречающихся в естественных условиях регуляторов гормонов, которые участвуют в метаболизме костной ткани, и их комбинации. Такое дополнительное действующее вещество можно вводить индивидууму до, одновременно или после введения ингибитора 15-липоксигеназы, предлагаемого в настоящем изобретении.
Другой объект настоящего изобретения основан на открытии корреляции между полиморфизмом гена 15-липоксигеназы и минеральной плотностью костной ткани, причем было установлено, что наличие определенных полиморфизмов коррелирует с уменьшенной минеральной плотностью костной ткани. Еще один объект изобретения заключается в том, что генотип коррелирует с предрасположенностью к остеопорозу. Преимуществом изобретения является то, что путем скрининга в отношении наличия определенного генотипа можно выявлять индивидуумов, которые, по-видимому, имеют такую генетическую предрасположенность. Таким образом, следующим объектом изобретения является способ терапевтического лечения, заключающийся в том, что осуществляют скрининг в отношении предрасположенности индивидуума к потере костной ткани и, если предрасположенность выявлена, то такого индивидуума лечат с целью замедления или уменьшения или предупреждения потери костной ткани.
Согласно способу диагностики и прогнозирования, предлагаемому в настоящем изобретении, выявляют изменения, включая делеции, инсерции и точечные мутации в кодирующих и некодирующих областях локуса 15-липоксигеназы дикого типа. Так, например, у мышей предпочтительно выявляют изменения на хромосоме 11, тогда как у людей выявляют изменения на хромосоме 17. Кроме того, способ можно осуществлять путем выявления локуса 15-липоксигеназы дикого типа и подтверждения отсутствия предрасположенности к нарушениям, обусловливающим потерю костной ткани, которые вызываются локусом 15-липоксигеназы. Наличие таких мутаций у индивидуумов может как сопровождаться симптомами потери костной ткани, так и не сопровождаться ими. Кроме того, могут существовать различия в реакции на лекарственное средство или прогнозе симптомов у индивидуумов, которые несут мутации в локусе 15-липоксигеназы, по сравнению с теми, которые не имеют таких мутаций.
Таким образом, одним из объектов изобретения является способ диагностики, заключающийся в том, что определяют генотип гена 15-липоксигеназы. Как правило, согласно способу определяют, является ли индивидуум гомозиготным или гетерозиготным в отношении полиморфизма гена 15-липоксигеназы. Как правило, способ, предлагаемый в изобретении, осуществляют путем анализа in vitro клеток индивидуума с целью определения генотипа, указанного индивидуума в локусе гена 15-липоксигеназы.
Диагностические методы, которые можно применять, включают (но, не ограничиваясь ими) анализ микрорядов, флуоресцентную гибридизацию in situ (FISH), непосредственное секвенирование ДНК, PFGE-анализ, анализ методом Саузерн-блоттинга, одноцепочечный конформационный анализ (SSCA), анализ защиты от РНКазы, анализ с использованием аллель-специфического олигонуклеотида (АСО), анализ методом дот-блоттинга и ПЦР-SSCP, которые известны в данной области.
Предрасположенность к заболеванию, сопровождающемуся потерей костной ткани, можно оценивать путем тестирования любой ткани индивидуума, такого как больной человек, в отношении мутаций гена 15-липоксигеназы. Например, индивидуум, несущий врожденную мутацию 15-липоксигеназы в зародышевой линии, может быть предрасположен к развитию заболевания, сопровождающегося потерей костной ткани. Это можно определять путем тестирования ДНК из любой ткани организма индивидуума. Наиболее просто отбирать образцы крови и экстрагировать ДНК из клеток крови. Кроме того, можно осуществлять пренатальный диагноз путем тестирования клеток эмбриона, клеток плаценты или амниотических клеток в отношении мутации гена 15-липоксигеназы. С помощью любого из изложенных в настоящем описании методов можно обнаруживать изменение аллеля 15-липоксигеназы дикого типа, обусловленные, например, точечной мутацией или делецией.
Существует несколько методов, которые можно применять для обнаружения вариации последовательности ДНК. Вариацию последовательности можно обнаруживать прямым секвенированием ДНК, либо секвенированием, осуществляемым вручную, либо автоматизированным флуоресцентным секвенированием. Другим подходом является одноцепочечный конформационный анализ (SSCA), в котором секвенируют фрагменты со смещенной подвижностью на гелях для SSCA для определения истинной природы вариации последовательности ДНК. Другие подходы, основанные на обнаружении участка с неспаренными основаниями для двух комплементарных цепочек ДНК, включают пульсирующий денатурирующий градиентный гель-электрофорез (CDGE), анализ гетеродуплексов (НА) и химическое расщепление в сайтах ошибочных нуклеотидов (CMC). Если мутация известна, то для быстрого скрининга большого количества образцов в отношении именно этой мутации можно использовать специфичный в отношении аллеля метод обнаружения, такой как гибридизация аллель-специфических олигонуклеотидов (АСО) (см., например, Saiki и др., Proc. Nad. Acad. Sci. USA 86: cc.6230-6234, 1989).
Обнаружение точечных мутаций можно осуществлять путем молекулярного клонирования аллеля(ей) 15-липоксигеназы и секвенирования аллеля(ей) с помощью известных в данной области методов. В альтернативном варианте последовательности генов можно амплифицировать с помощью известных методов непосредственно с использованием препаратов геномной ДНК из ткани. Затем можно определять последовательность ДНК амплифицированных последовательностей. Присутствие аллеля можно подтверждать с помощью одноцепочечного конформационного анализа (SSCA), денатурирующего градиентного гель-электрофореза (DGGE или CDGE), анализа защиты от РНКазы, использования аллель-специфических олигонуклеотидов (АСО), аллель-специфической ПЦР или анализа удлинения на один нуклеотид, известных в данной области.
Согласно предпочтительному методу аллели идентифицируют с помощью метода микрочипов. Согласно этому методу тысячи различных олигонуклеотидных зондов или генов можно синтезировать (U.S. No. 5412087 на имя McGall и др.) или наносить рядами в виде капель (U.S. No. 6110426 на имя Shalon и др.) на силиконовый или стеклянный чип. Предназначенную для анализа нуклеиновую кислоту, как правило флуоресцентно метят и гибридизуют с зондами на чипе. В качестве других меток могут служить 32Р и биотин. С использованием таких рядов микрорядов капель можно изучать также взаимодействия нуклеиновая кислота-протеин. С помощью этого метода выявляют наличие мутаций в гене 15-липоксигеназы.
Присутствие измененного (или мутантного) гена 15-липоксигеназы коррелирует с повышенным риском заболевания, связанного с потерей костной ткани. Для обнаружения мутации гена 15-липоксигеназы приготавливают биологический образец и анализируют в отношении различия между последовательностью подлежащего анализу аллеля 15-липоксигеназы и последовательностью аллеля 15-липоксигеназы дикого типа. Затем мутантные аллели можно подвергать секвенированию для идентификации специфических мутаций конкретного мутантного аллеля. После этого мутации гена 15-липоксигеназы, конкретно на хромосоме 11 мыши и хромосоме 17 человека используют в методах диагностики и прогнозирования, предлагаемых в настоящем изобретении.
Таким образом, объектом настоящего изобретения является также способ диагностики предрасположенности к потере костной ткани у индивидуума, заключающийся в том, что выявляют полиморфизм человеческой хромосомы 17, где полиморфизм является критерием предрасположенности к потере костной ткани. В предпочтительном варианте осуществления изобретения для обнаружения используют генотипирование. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения генотипирование включает использование микросателлитных маркеров или одного или нескольких однонуклеотидных полиморфизмов.
Другим объектом настоящего изобретения является способ диагностики предрасположенности к потере костной ткани у индивидуума, заключающийся в том, что у индивидуума выявляют полиморфизм гена 15-липоксигеназы.
В настоящем изобретении предложены ингибиторы 15-липоксигеназы для применения в качестве терапевтических действующих веществ для предупреждения потери костной ткани. Объектом изобретения являются также соединения, идентифицированные с помощью описанных выше способов. Кроме того, предложена фармацевтическая композиция, предназначенная, в частности, для предупреждения потери костной ткани, которая содержит описанное выше соединение и носитель. Предложен также набор для диагностики предрасположенности к потере костной ткани, содержащий по меньшей мере один олигонуклеотид, предназначенный для обнаружения полиморфизма гена 15-липоксигеназы, связанного с потерей костной ткани.
Наконец, объектами изобретения являются также соединения, способы, применения, композиция и набор, в основном представленные в настоящем описании, прежде всего в предшествующих примерах.
На фиг.1 проиллюстрировано сравнение основанного на генотипировании SNP пулированных образцов ДНК с полученными микросателлитным генотипированием образцами ДНК для обнаружения полиморфизмов, связанных с минеральной плотностью костной ткани. Статистическую значимость каждого различия встречаемости аллеля рассчитывали с использованием z-критерия и строили график зависимости логарифма отношения вероятностей (LOD) для всех хромосом. Штриховая линия, соответствует величине LOD 3,3, которая была выбрана в качестве предельного значения для определения статистически достоверного различия геномов.
На фиг.2 - количественная оценка экспрессии гена Alox15 в почке мыши, полученная на основе анализа полной РНК почки, где экспрессию гена анализировали с использованием микрорядов.
На фиг.3 - количественная оценка экспрессии гена ALox15 в первичных мышиных остеобластах в зависимости от возрастающих концентраций IL-4, вводимого in vitro.
На фиг.4 - положение полиморфизмов отдельного нуклеотида (SNP), идентифицированных в гене ALox15 мышей.
На фиг.5 - количественная оценка активности щелочной фосфатазы в человеческих мезенхимальных стволовых клетках (hMSC) при воздействии ингибиторов 15-липоксигеназы, представляющих собой соединение 1 или соединение 2, в сравнении с воздействием только растворителя (ДМСО).
На фиг.6 - количественная оценка активности щелочной фосфатазы в hMSC при использовании ингибиторов 15-липоксигеназы соединения 3 или соединения 2 и в качестве контролей ДМСО или 1,25-витамина D3.
На фиг.7 - количественная оценка содержания общего кальция в hMSC при использовании ингибиторов 15-липоксигеназы соединения 3 или соединения 2 и в качестве контролей ДМСО или 1,25-витамина D3.
На фиг.8 - количественная оценка активности щелочной фосфатазы в hMSC после культивирования в течение 9 дней в присутствии ингибиторов 5-ЛО Zileuton, AA-861 и Rev-5901 в сравнении с одним растворителем (ДМСО), применяемым в качестве контроля. Отсутствие реакции представляет собой характерное отличие от случаев применения ингибиторов 15-липоксигеназы.
На фиг.9 - количественная оценка содержания общего кальция в hMSC при культивировании в течение 16 дней в присутствии ингибиторов 5-ЛО Zileuton, AA-861 и Rev-5901 в сравнении с одним растворителем (ДМСО) или 1,25-витамина D3 в качестве контролей. В отличие от случаев применения ингибиторов 15-липоксигеназы реакция отсутствует.
Ниже описаны конкретные примеры осуществления настоящего изобретения. Примеры приведены только с целью иллюстрации и никоим образом не направлены на ограничение объема настоящего изобретения.
Соединение № | Структура | IC50 для 15-ЛО |
1 | 1-3 мкМ | |
2 | ~200 нМ | |
3 | ~10 нМ | |
4 | 1-3 мкМ | |
5 | Отрицательный контроль | |
6 | 25-83 нМ |
Соединение 1, представляющее собой 3-(2-нон-1-инилфенил)пропионовую кислоту, описанное в U.S. №5972980.
Соединение 2, представляющее собой 6,11-дигидо-5-тиа-11-аза-бензо[а]флуорен, описанное в WO 97/12613.
Соединение 3, представляющее собой 3-амино-N-(3,4-дигидрофенил)-4-метоксибензамид, описанное в WO 99/32433.
Соединение 4, представляющее собой транс-3-(2-окт-1-инилфенил)акриловую кислоту, описанное в U.S. №4713486.
Соединение 5, представляющее собой Zilueton, описанное в U.S. №4873259.
Соединение 6, представляющее собой изобутиловый эфир [[[5-(5,6-дифтор-1Н-индол-2-ил)-2-метоксифенил]амино]сульфонил]карбаминовой кислоты, описанное в WO 01/96298.
Были предприняты усилия для обеспечения точности указанных в описании численных значений (например, количеств, температур и т.д.), однако, конечно, следует иметь в виду, что допустимы некоторые экспериментальные погрешности и отклонения.
Пример 1
Модели генотипирования полиморфизма отдельного нуклеотида (SNP).
Микросателлиты (которые называют также полиморфизмами одиночного тандемного повтора или одиночными полиморфизмами длины последовательности) представляют собой наиболее изученную категорию генетических маркеров. Они включают малые ряды тандемных повторов небольших последовательностей (ди-, три-, тетра-нуклеотидные повторы), которые обладают большой степенью полиморфизма длины, что обеспечивает высокий уровень информации. В человеческом геноме расположено немного более 5000 микросателлитов, которые легко типировать с помощью методов на основе ПЦР (Dib и др., Nature 380: cc.152, 1996).
Как правило, применяют метод, описанный Grupe и др., Science 292: cc.1915-1918, 2001. Для идентификации генетических факторов, регулирующих МПК, осуществляли сканирование генома на 1000 представителях поколения F2 интеркросса C57BL/6 × DBA/2 (фирма Jackson Labs, Бар Харбор, шт.Мэн) 16-недельного возраста. Поколение F2 имело не сцепленное с полом нормальное распределение МПК (Grupe и др., Science, 292, cc.1915-1918, 2001). Обладающих экстремальным фенотипом представителей потомства F2 с наибольшим (n=145) и наименьшим (n=149) МПК (в пределах 15% от высшей и низшей оценок) подвергали полному сканированию генома для выявления связи МПК путем генотипирования индивидуальных образцов ДНК с использованием 100 микросателлитных маркеров. Кроме того, путем отбора равных количеств ДНК из представителей потомства F2 с высокой и низкой величиной МПК получали два пула. Для 109 SNP, обнаруженных в базе данных mSNP, измеряли с помощью аллель-специфической кинетической ПЦР частоты встречаемости аллелей в образцах, входящих в пулы. Для каждого маркера оценивали разницу в частоте встречаемости аллелей в двух экстремальных пулах. Если маркер не связан с МПК, то его ожидаемая частота составляет 50% для обоих экстремальных пулов. Статистическую значимость каждой разницы частоты встречаемости аллеля рассчитывали с использованием z-критерия и строили график зависимости логарифма отношения вероятностей (LOD) (фиг.1). Для четырех областей, расположенных на хромосомах 1, 2, 4 и 11, с помощью методов, основанных на использовании микросателлитов и генотипирования SNP, была выявлена статистически значимая связь (балл LOD>3,3).
Таким образом, с помощью метода SNP-генотипирования выявляли гены-кандидаты, которые могут обусловливать МПК.
Пример 2
Модели с использованием животных
Для идентификации гена внутри выявленной области на хромосоме 11, который регулирует МПК, осуществляли с использованием микрорядов анализ разницы экспрессии гена в организме мышей штамма DBA/2, C57BL6/J (фирма Jackson Labs, Бар Харбор, Майн) и конгенного штамма мышей (D2.B6chr11, полученного от Oregon Health Sciences University). Конгенные мыши линии D2.B6chr11 несли участок от сМ20 до сМ50 хромосомы 11 C57BL/6J, интрогрессированный в основу геномной линии DBA2/J. Микроряды, содержащие гены мышиного генома, гибридизовали с меченой кРНК, полученной из целых почек, культивированных первичных остеобластов и первичных хондроцитов. Гибридизацию осуществляли с кРНК, полученной из мышей индивидуальных линий DBA/2J, C57BL/6J и конгенных мышей линии B6.D2chr11. Осуществляли выделение мРНК (2х ро1у(А)+), синтез кРНК и гибридизацию. Дифференциальную экспрессию оценивали путем парного сравнения мышей линий DBA/2J и C57BL/6 и путем парного сравнения мышей линии DBA/2J и конгенной линии B6.D2chr11.
Для дальнейшего определения характеристик выбирали дифференцирование экспрессируемые гены, кодируемые внутри интервала сМ20-сМ50 на хромосоме 11. Было установлено существенное различие экспрессии индивидуального гена (ALox15, расположенный в сМ 40 на хромосоме 11) двумя изученными линиями (фиг.2). Для линии DBA/2J были характерны повышенные уровни экспрессии ALox15 по сравнению с линией D2.B6chr11 и мышами линии C57BL/6J, а также пониженный уровень МПК по сравнению с обеими другими линиями. Таким образом, повышенная экспрессия ALox15 у мышей линии DBA/2J связана с пониженной минеральной плотностью костной ткани.
Дифференциальную экспрессию мРНК ALox15 в остеобластах оценивали с помощью ПЦР в реальном времени. Клетки получали из мышей линий DBA/2J, C57BL/6J и D2.B6chr11 (фиг.3). Общую РНК обрабатывали ДНКазой I для удаления примеси геномной ДНК. РНК выдерживали при 65°С в течение 10 мин для инактивации ДНКазы I. Все ПЦР осуществляли в объеме 100 мкл. РНК (100 нг) подвергали ОТ-ПЦР с использованием ДНК-полимеразы rTh (2 единицы) (фирма Perkin Elmer) в реакционной смеси, содержащей 5×EZ-буфер, Mn(ОАс) (3 мМ), этидийбромид (1 мкг/мкл), дНТФ (200 мкМ), прямой праймер (200 нМ) и обратный праймер (200 нМ). кДНК получали путем инкубации образцов в течение 30 мин при 60°С. После этого осуществляли 60 циклов ПЦР (95°С, 20 с; 58°С, 20 с) и затем инкубировали в течение 20 мин при 72°С. Флуоресценция на каждом цикле связана с количеством образовавшегося продукта и ее измеряли с помощью кинетической термоячейки и анализировали с использованием имеющегося программного обеспечения (Germer и Higuchi, Genome Research, 9, cc.72-78, 1999). Кроме клеток почек остеобласты мышей линии DBA/2J продуцировали также повышенные уровни мРНК ALox15 по сравнению с мышами линии C57BL/6J. РНК ALox15 индуцировалась с помощью IL-4 в остеобластах мышей линии C57BL/6 в большей степени, чем у мышей линии DBA/2 (фиг.3).
Для выявления молекулярной основы штаммоспецифической разницы экспрессии ALoxl5 осуществляли с помощью методов, известных в данной области, секвенирование геномной ДНК гена ALox15 мышей линий DBA/2J и C57BL6/J. Были выявлены 14 полиморфизмов последовательности ДНК, характеризующих различия двух штаммов (представлены в виде диаграммы на фиг.4 и в таблице 1 ниже). Ген Ensembi 15LO обозначен как ENSMUSG000000 18924. Генная последовательность, простирающаяся от положения 70929619 до 70937482 мышиного генома, представлена в Seq ID № 1. Первый SNP в таблице 1, имеющий положение 70938498 в последовательности мышиного генома, локализован в положении 541 последовательности, помещенной в Genbank под регистрационным номером № U04332, которая представлена в Seq ID № 2.
Таблица 1 | |||
Сравнение SNP Alox15, идентифицированных у мышей линии DBA/2J, с мышами линии C57BL/6J. | |||
Положение SNP в мышином геноме (пары оснований) | Замена нуклеотида C57BL/6J_DBA2/J | Интрон/экзон | Положение аминокислот |
70938498 | C_G | ~1 т.п.н. против хода транскрипции относительно ТАТА-бокса в 5' utr | |
70937181 | A_G | Интрон 1 | |
70936977 | Т_С | Интрон 1 | |
70936975 | A_T | Интрон 1 | |
70936918 | С_Т | Интрон 1 | |
70936336 | T_C | Экзон 2 | 62/Phe(TTT)_Phe(TTC) |
70936248 | G_A | Экзон 2 | 91/Ser(TCG)_Ser(TCA) |
70936136 | G_A | Интрон 2 | |
70935775 | G_A | Интрон 3 | |
70935765 | С_Т | Интрон 3 | |
70931174 | А_G | Интрон 10 | |
70930258 | А_G | Интрон 13 | |
70930156 | С_Т | Экзон 14 | 616/Pro(CCA)_Ser(TCA) |
70930151 | C_T | Экзон 14 | 617/Asn(AAC)_.Asn(AAT) |
70929999 | Делец. Т в DBA/2J DBA/2J | 11-е основание 3' utr |
Пример 3
Способность ингибиторов 15-липоксигеназы увеличивать образование костной ткани
Для определения способности ингибиторов 15-липоксигеназы стимулировать образование костной ткани и накопление костной ткани в опытах in vitro оценивали способность ингибиторов 15-ЛО увеличивать уровень дифференцировки стволовых клеток в костеобразующие клетки (остеобласты). В частности, с помощью измерения двух маркеров дифференцировки в остеобласты, активности клеточной щелочной фосфатазы и содержания кальция в культуре оценивали способность трех ингибиторов, а именно соединения 1-3-(2-нон-1-инилфенил)пропионовая кислота), соединения 2 (6,11-дигидро-5-тиа-11-азабензо [а]флуорен) и соединения 3 (3-амино-N-(3,4-дихлорфенил)-4-метоксибензамид), полученных согласно методам, описанным в литературе, стимулировать дифференцировку человеческих мезенхимальных стволовых клеток в остеобласты.
В целом метод заключался в том, что человеческие мезенхимальные клетки (hMSC, линия Poietics №РТ-2501, фирма Bio Whittaker) культивировали в 12-луночных покрытых коллагеном планшетах с плотностью 3100 клеток на 1 см2 в 1 мл культуральной среды (фирма Clonetics, каталожный номер РТ-4105), дополненной индукторами остеобластов (100 нМ Dex, 0,05 мМ L-аскорбиновая кислота-2-фосфат, 10 мМ бетаглицеринфосфат). К каждой культуре добавляли индивидуально три ингибитора 15-ЛО за исключением контрольных лунок, в которые добавляли 0,1% ДМСО (отрицательный контроль) или 1 нМ 1,25-витамин D3 (положительный контроль). Использовали следующие концентрации ингибиторов: для соединения 1 - 3 и 30 мкМ; для соединения 2 - 0,1, 0,2, 0,3 или 1,0 мкМ и для соединения 3 - 3, 10 или 30 мкМ. Для каждого уровня дозы приготавливали от 4 до 8 независимых репликативных культур. По окончании эксперимента выращенные клетки собирали путем соскабливания из лунок и вносили в соответствующую среду для проведения дальнейшего анализа либо активности щелочной фосфатазы (фирма Sigma, набор №104-LL), либо содержания клеточного кальция (фирма Sigma, набор №587-М). Культуры, предназначенные для анализа щелочной фосфатазы, собирали путем соскабливания клеток и ресуспендировали в 250 мкл забуференного Трис 0,1%-ного тритона Х-100 и затем подвергали анализу либо в свежем виде, либо после оттаивания замороженных культур. Отдельно отбирали культуры, предназначенные для анализа содержания общего кальция и ресуспендировали в 250 мкл 0,5М HCL. Результаты этих анализов стандартизовали по отношению к содержанию общей клеточной ДНК, стандартизуя тем самым различия пролиферации клеток. Одновременно путем соскабливания клеток собирали раздельно репликативные культуры, предназначенные для анализа щелочной фосфатазы и кальция, и ресуспендировали их в 250 мкл сбалансированного солевого раствора Хэнкса и оценивали количество клеток с помощью ДНК (набор DNeasy Tissue Kit, фирма Qiagen, каталожный номер 69506).
Количественная оценка дифференцировки в остеобласты in vitro.
Для количественной оценки активности щелочной фосфатазы приготавливали ингибиторы в 0,1% ДМСО и добавляли к культурам в день 1 и после этого в течение 14-16 дней через каждые 2-3 дня. Проводили три различные серии экспериментов.
В первой серии экспериментов в качестве ингибиторов использовали соединение 1 или соединение 2 (0,2 или 1 мкМ) и растворитель (ДМСО) в качестве отрицательного контроля, и для каждого уровня дозы приготавливали по четыре независимые репликативные культуры. Планшеты культивировали в течение 14 дней. Стандартизованная по ДНК активность щелочной фосфатазы представлена в виде графика на фиг.5.
Во второй серии экспериментов использовали по восемь репликативных культур и соединение 3 (3, 10 и 30 мкМ) или соединение 2 (0,1, 0,3, 1,0 мкМ) в качестве ингибиторов 15-ЛО. Ингибиторы добавляли либо в день 1, либо в день 11. В качестве отрицательного контроля использовали ДМСО, а 1,25-витамин D3 в качестве положительного контроля индукции дифференцировки в остеобласты. Стандартизованная активность щелочной фосфатазы и содержание кальция представлены в виде графиков на фиг.6 и 7 соответственно. Соединение 2 обладало наиболее высокой эффективностью при его добавлении в день 1, а соединение 3 обладало наибольшей эффективностью при его добавлении в день 11.
Для контроля специфичности ингибирования 15-ЛО в отношении индукции дифференцировки в остеокласты in vitro, в третьей серии экспериментов исследовали 8 образцов стандартных ингибиторов липоксигеназы, которые, как было установлено, обладают большей специфичностью в отношении фермента 5-ЛО, чем в отношении фермента 15-ЛО. Каждые 2-3 дня приготавливали свежие препараты Zileuton (1, 10, 50 мкМ, который получали от фирмы Roche), представляющий собой соединение 5, АА-861 (1, 10, 50 мкМ, фирма Sigma, №А3711) и Rev-5901 (15 мкМ, фирма Sigma, № R5523) и тестировали с использованием человеческих клеток-предшественников остеобластов. Было установлено, что ингибиторы 5-ЛО теряли способность индуцировать активность щелочной фосфатазы на день 9 или отложение кальция в культуре после культивирования в течение 16 дней, что проиллюстрировано на фиг.8 и 9 соответственно.
Результаты количественной оценки маркеров дифференцировки в остеобласты в культурах hMSC, стимулированных в отношении дифференцировки в остеобласты, проведенной как путем определения активности щелочной фосфатазы, так и содержания кальция в культуре, продемонстрировали, что специфические ингибиторы 15-липоксигеназы стимулируют дифференцировку человеческих костеобразующих клеток in vitro.
Кроме того, проводили оценку способности ингибиторов 15-липоксигеназы стимулировать образование костной ткани и отложение костной ткани с помощью клоногенных анализов, в которых определяли клоногенный потенциал клеток-предшественников клеток костного мозга. Клетки остеобластов и остеокластов обрабатывали ингибиторами 15-липоксигеназы. Согласно одному из методов клетки и ингибиторы инкубировали in vitro. В другом методе млекопитающему вводили ингибитор, выделяли клетки-предшественники клеток костного мозга и высевали. В обоих методах измеряли колониеобразующие единицы, образовавшиеся из этих клеток костного мозга. Можно осуществлять скрининг соединений в отношении их способности увеличивать минеральную плотность костной ткани, если установлено, что они увеличивают клоногенный потенциал костного мозга в отношении остеобластов или снижают клоногенный потенциал костного мозга в отношении остеокластов.
Пример 4
Нарушение гена 15-липоксигеназы приводит к увеличению минеральной плотности костной ткани бедренной кости
Первоначально было выявлено, что у мышей с дефицитом 15-ЛО имеются небольшие фенотипические изменения, но затем на модели с использованием таких же мышей было установлено, что они частично защищены от к атеросклеротических повреждений (Sun и Funk, J. Biol. Chem., 271, cc.24055-24062, 1996; Cyrus и др., J. Clin. Invest, 103, cc.1597-1604, 1999). При этом у мышей с дефицитом 15-ЛО не измеряли МПК. Для исследования влияния генетического нарушения 15-ЛО на минеральную плотность костной ткани, мышей с дефицитом ("knock-out") 15-ЛО (15-ЛО-КО) сравнивали с исходной линией мышей с точки зрения минеральной плотности костной ткани. Измерения минеральной плотности костной ткани проводили методом двойной абсорбциометрии энергии рентгеновских лучей (DEXA). Все исследования проводили с использованием денситометра типа Lunar PIXImus (фирма Lunar Corp., Мэдисон, шт.Висконсин). Денситометрические анализы всего тела проводили на анестезированных мышах возрастом 4 месяца, когда заканчивалось накопление массы зрелой кости. Глобальное окно представляло собой изображение всего тела за исключением свода черепа, нижней челюсти и зубов. После умерщвления правую бедренную кость тщательно выделяли и перед осуществлением DEXA-сканирования очищали от присоединенных к ней тканей. Не было обнаружено существенных различий минеральной плотности костной ткани всего тела у мышей линии 15-ЛО-KO и исходной линии мышей C57BL/6 (49,8+/-0,6 мг/см2 по сравнению с 49,5+/-0,4 мг/см2). Однако важно, что МПК бедренной кости оказалась существенно большей у мышей с дефицитом 15-ЛО по сравнению с исходной линией C57BL/6 (54,0+/-1,2 мг/см2 по сравнению с 49,7+/-0,7 мг/см2). Эти результаты демонстрируют, что нарушение 15-ЛО приводит к увеличению минеральной плотности костной ткани бедренной кости.
Пример 5
Ингибиторы 15-липоксигеназы стимулируют образование костной ткани in vivo
Способность ингибиторов 15-липоксигеназы стимулировать образование костной ткани in vivo оценивали путем измерения способности ингибиторов улучшать параметры костной ткани при моделировании остеопороза на мышах. Конститутивная экспрессия трансгена интерлейкина-4 под контролем промотора гена Lck (Lck-IL4) в мышах линии C57BL/6 приводила к фенотипу костной ткани, имитирующему серьезный остеопороз (Lewis и др., Proc. Natl. Acad. Sci., 90, cc.11618-11622, 1993), и таких мышей использовали для демонстрации влияния обработки ингибиторами 15-ЛО на массу костной ткани.
Четыре группы, на которых проводили эксперимент, представлены в таблице 2. В период отъема от грудного молока мышам линии дикого типа C57BL/6 или трансгенной линии Lck-IL4 вводили ежедневно дважды в день вместе с кормом в течение 84 дней по 150 мг/кг соединения 2 PD 146176 (корм 5001: 23% протеина, 10% жира, 0,95% кальция и 0,67% фосфора; фирма PMI Feeds, Inc., Сент-Луис, шт.Миссури). Мышам дважды в день приблизительно с 12-часовыми интервалами давали доступ к половине суточного рациона и ежедневно наблюдали за приемом корма. Они имели доступ к воде без ограничения. Контрольным группам давали такой же корм, не содержащий соединение 2. Животные во всех группах в процессе эксперимента поглощали корм одинаковым образом.
Таблица 2 | |||
C57BL/6 | Трансгенная линия Lck-IL4 | ||
контроль | Соединение 2 | контроль | соединение 2 |
n=17 (8F/9M) | n=18 (9F/9M) | n=20 (11F/9M) | n=22 (11F/11M) |
Таблица 2. Экспериментальные группы, на которых проводили исследование ингибитора in vivo. После отъема (приблизительно в возрасте 28 дней), мышам в течение 84 дней давали корм, содержащий ингибитор 15-ЛО (соединение 2), или без него. Количество самок (F) и самцов (М) в группах было примерно одинаковым.
Влияния сверхэкспрессии IL4 ингибирования 15-ЛО на общие параметры тела, МПК бедренной кости и ее геометрию и биомеханические характеристики бедренной кости представлены в таблице 3. Сверхэкспрессия IL4 приводила к существенному уменьшению МПК всего тела, массы тела и гематокрита и увеличению процентного содержания жира в организме. Сверхэкспрессия IL4 приводила также к уменьшению МПК бедренной кости, кортикальной площади, момента инерции и кортикальной толщины по сравнению с мышами линии C57BL/6 дикого типа. Установлено, что увеличение площади костного мозга у мышей линии Lck-IL4 коррелировала с уменьшенным гематокритом и связанной с этим анемией. Кроме того, сверхэкспрессия IL4 оказывала существенное влияние на биомеханические характеристики бедренной кости, включая уменьшение нагрузки, приводящей к перелому, жесткости кости и прочности кости (таблица 3). У мышей, которым вводили ингибитор 15-ЛО (соединение 2), выявлена частичная реверсия разрушительных воздействий на костную ткань всего тела и бедренную кость (таблица 3). У обработанных лекарственным средством мышей было выявлено существенное увеличение МПК всего тела, гематокрита, МПК бедренной кости и кортикальной толщины по сравнению с контрольными мышами, несущими трансген Lck-IL4. Важно, что у обработанных ингибитором 15-ЛО мышей было выявлено существенное увеличение биомеханических характеристик бедренной кости, включая нагрузку, приводящую к перелому, жесткость и прочность. Это имеет особенное значение для остеопороза, поскольку уровень прочности кости и нагрузки, приводящей к перелому, являются важными детерминантами для пациентов, для которых возрастает вероятность возникновения переломов. В целом результаты, полученные на модели остеопороза с использованием животных, свидетельствуют о том, что ингибирование 15-ЛО in vivo приводит к более высоким уровням МПК и более высокой прочности костной ткани.
Таблица 3 | ||||
Все тело | ||||
фенотип | Влияние сверхэкспрессии IL-4 | Значение р | Влияние сверхэкспрессии IL-4 + соединения 2 | Значение p |
Вес тела | -7% | 0,042 | н.о. | ns |
Содержание жира в организме, % | +19% | 0,007 | н.о. | ns |
гематокрит | -25% | 2×10-9 | +20% | 2×10-5 |
BMD всего тела | -11% | 2×10-9 | +5% | 7×10-5 |
BMD и геометрия бедренной кости | ||||
Фенотип | Влияние сверхэкспрессии IL-4 | Значение р | Влияние сверхэкспрессии IL-4 + соединения 2 | Значение p |
BMD | -17% | 4×10-12 | +9% | 3×10-6 |
Длина | н.о. | н.д. | н.о. | н.д. |
Общая площадь | н.о. | н.д. | -4% | 0.035 |
Кортикальная площадь | -25% | 6×10-12 | н.о. | Ns |
Площадь костного мозга | +16% | 4×10-7 | -7% | 7×10-5 |
Момент инерции | -17% | 7×10-5 | н.о. | н.д. |
Кортикальная толщина | -27% | 9×10-10 | +6% | 0,037 |
Биомеханические характеристики бедренной кости | ||||
Фенотип | Влияние сверхэкспрессии IL-4 | Значение р | Влияние сверхэкспрессии IL-4 + соединения 2 | Значение p |
Нагрузка, приводящая к перелому | -45% | 6×10-13 | +18% | 0,003 |
Жесткость | -48% | 3×10-11 | +11% | 0,09 |
Прочность | -34% | 2×10-12 | +22% | 2×10-4 |
Таблица 3. Влияния сверхэкспрессии IL4 и ингибитора 15-ЛО на параметры всего тела и бедренной кости. Параметры всего тела и бедренной кости измеряли у мышей, несущих трансген Lck-IL4, который вызывает сверхэкспрессию IL4, и сравнивали с мышами линии C57BL/6, используемыми в качестве контролей. Указанные параметры измеряли также у мышей линии Lck-IL4, которым вводили ингибитор 15-ЛО, представляющий собой соединение 2, и сравнивали с параметрами необработанных мышей линии Lck-IL4, используемых в качестве контролей, н.о. обозначает, что не обнаружено различий между группами, н.д. обозначает, что значение p не является достоверным.
Животные
Всех мышей, которых использовали в экспериментах in vivo, выращивали в идентичных условиях в ветеринарном институте Портланда, шт.Вирджиния, из линии, первоначально полученной от Джексоновской лаборатории (Jackson Laboratory) (Бар Харбор, штат Мэн). Из исходной линии, полученной из Джексоновской лаборатории, поддерживали не более трех поколений мышей. После отъема мышей содержали группами (по 9-10 животных на клетку) при световом цикле 12 ч света/темноты (с 6:00 до 18:00 ч) при 21±2°С. Все процедуры были утверждены государственным комитетом по содержанию и использованию животных шт.Вирджиния (VA Institutional Animal Care and Use Committee) и их осуществляли согласно руководствам по содержанию и использованию животных при проведении исследований, утвержденных Национальным институтом здравоохранения.
Денситометрия костной ткани
Измерения минерального содержания костной ткани осуществляли с помощью двойной абсорбциометрии энергии рентгеновских лучей (DEXA). Все исследования проводили с использованием денситометра типа Lunar PIXImus (фирма Lunar Corp., Мэдисон, штат Висконсин). Денситометрические анализы всего тела проводили на анестезированных мышах возрастом 4 месяца, когда заканчивалось накопление массы зрелой кости. Глобальное окно представляло собой изображение всего тела за исключением свода черепа, нижней челюсти и зубов. После умерщвления правую бедренную кость тщательно выделяли и перед осуществлением DEXA-сканирования очищали от присоединенных к ней тканей.
Обработка образцов
Взрослых мышей (возрастом 16 недель) подвергали эвтаназии путем ингаляции СО2 и взвешивали с точностью до 0,1 г. Сразу после умерщвления спускали кровь из сердца и небольшие аликвоты цельной крови сохраняли для определения гематокрита. Сразу выделяли поясничные позвонки и обе бедренные кости, завертывали в стерильную марлю, пропитанную забуференным фосфатом физиологическим раствором, и хранили в замороженном состоянии при температуре не менее примерно -20°С для дальнейших анализов.
Геометрия стержня бедренной кости
Геометрические параметры поперечного сечения средней части диафиза бедренной кости определяли с помощью переносного рентгеновского микротомографа (модель 1074, фирма Skyscan, Антверпен, Бельгия). Сканирование осуществляли с интервалами по 40 мм и на срезах, находящихся в средней части бедренной кости, анализировали общую площадь (FCSA), кортикальную площадь (Ct Ar) и площадь модулярного канала (Ма Ar). Кроме того, на основе количества пикселов, находящихся в кортикальной области цифрового изображения, вычисляли радиус от центроида поперечного сечения до наружного волокнистого слоя в переднезадней плоскости, статический момент инерции площади сечения (Ixx) в плоскости изгиба и среднюю кортикальную толщину (Ct Th).
Исследование биомеханических характеристик
Бедренную кость исследовали в отношении перелома путем изгиба при приложении усилия в трех точках с использованием высокоточного устройства для исследования характеристик материалов (модель Instron 4442, Кантон, шт.Миннесота). Нагрузку, приводящую к перелому, и жесткость определяли с помощью системного программного обеспечения. Затем с использованием данных проведенных ранее измерений площади поперечного сечения рассчитывали прочность на изгиб.
Анализ данных
Все данные анализировали с помощью двунаправленного дисперсионного анализа (ANOVA) с использованием пакета программ JMP (институт SAS).
Пример 6
Способность ингибитора 15-липоксигеназы увеличивать образование костной ткани in vivo
Для определения способности ингибиторов 15-липоксигеназы стимулировать образование костной ткани и накопление костной ткани получали согласно методу, описанному в WO 0196298, изобутиловый эфир [[[5-(5,б-дифтор-1Н-индол-2-ил)-2-метоксифенил]амино]сульфонил]карбаминовой кислоты, т.е. соединение 6, и тестировали согласно стандартному методу анализа остеопении на подвергнутых овариэктомии (Ovx) крысах с дефицитом эстрогена.
Крыс возрастом 3 месяца подвергали овариэктомии (Ovx) и вводили орально с помощью желудочного зонда 1 мг/кг/день соединение 6 или 0,1 мкг/кг/день 1,25-дигидроксивитамин D3 (положительный контроль, сокращенное обозначение в таблице вит.D) один раз в день, начиная со второй недели после овариэктомии, и продолжали в течение 7 недель. Дозу увеличивали до 2 мг/кг/день и продолжали до окончания 11-недельного периода. Крысам в контрольных группах, как в группах животных-имитаторов (крыс, которых не подвергали овариэктомии), так и в Ovx-группе, вводили только носитель. Минеральную плотность костной ткани позвоночника и правого бедра оценивали с использованием пакета программ High Resolution с помощью денситометра костной ткани типа QDR-4500 (фирма Hologic, Валтан, шт.Миннесота). Животных подвергали сканированию, помещая их в положение лежа на спине, таким образом, чтобы правое бедро было перпендикулярно корпусу тела и большеберцовая кость была перпендикулярна бедру. Минеральная плотность костной ткани (г минералов/см2) в большеберцовой кости и позвоночнике при использовании соединений представлена в таблице 4. У животных, обработанных ингибитором 15-ЛО, выявлено увеличение МПК в позвоночнике в период времени >3 недель и в проксимальной части бедренной кости в период времени >7 недель. Результаты приведены в таблице 4.
Величины в скобках представляют собой значения p по отношению к OVX-контролю в тот же момент времени, н.о.=данные отсутствуют.
Пример 7
Генная манипуляция с целью уменьшения экспрессии гена 15-липоксигеназы у лабораторных мышей приводит к увеличению массы и прочности костной ткани.
Для изучения связи между экспрессией 15-липоксигеназы и образованием костной ткани создавали генетически гетерогенную популяцию F2 из двух штаммов-предшественников (линий), B6.129S2-Alox15tm1Fun (с дефицитом Alox15 или 15LOKO) и DBA/2 (D2), которые получали от Джексоновской лаборатории (Бар Харбор, шт.Мэн). Мыши линии B6.129S2-Alox15tm1Fun (15LOKO) были гомозиготными по целевой мутации в гена Alox15 и поэтому у них не могла происходить экспрессия арахидоната под воздействием 15-липоксигеназы. В отличие от этого у мышей линии D2 обнаружены высокие уровни Alox15. Мышей поколения F1 линии 15LOKO-D2 разводили в лаборатории, где проводили опыты, из родительских линий, полученных от Джексоновской лаборатории, и подвергали интеркроссу, получая в общей сложности 292 особи поколения F2 мышей линии 15LOKO-D2. После отъема мышей содержали группами (по 2-5 животных на клетку) при световом цикле 12 ч света/темноты (с 6:00 до 18:00 ч) при 21±2°С, при этом животные имели свободный доступ к воде и корму для лабораторных грызунов (диета 5001: 23% протеина, 10% жира, 0,95% кальция и 0,67% фосфора; фирма PMI Feeds, Inc., Сент-Луис, шт.Миссури).
Все мыши, на которых проводили опыты, имели возраст 4 месяца, когда заканчивается накопление массы костной ткани (28). Измерения минеральной плотности костной ткани производили с использованием денситометра с узким лучом типа Hologic QDR 1500 (фирма Hologic, Валтам, шт.Миннесота), который ежедневно калибровали с использованием гидроксиапатитного фантома поясничного отдела позвоночника человека. Анализ осуществляли с использованием программного обеспечения для анализа всего тела мыши (версия 3.2), любезно предоставленного производителем (фирма Hologic, Валтам, шт.Миннесота). Денситометрический анализ осуществляли на анестезированных мышах. Кормление прекращали в ночь перед проведением исследования (для того, чтобы исключить влияние непереваренного корма для грызунов на оценку минеральной плотности костной ткани, которое может исказить результаты), при этом мышей анестезировали путем ингаляции изофураном. Животных взвешивали с точностью до 0,1 г и затем подвергали сканированию для определения плотности костной ткани. Мышей подвергали эвтаназии путем ингаляции СО2 и в асептических условиях выделяли селезенки и бедренные кости и затем сразу замораживали для дальнейшего анализа. Все процедуры были утверждены государственным комитетом по содержанию и использованию животных шт.Вирджиния (VA Institutional Animal Care and Use Committee) и их осуществляли согласно руководствам по содержанию и использованию животных при проведении исследований, утвержденных Национальным институтом здравоохранения.
Структуру бедренной кости (площадь средней части кортикальной области кости и кортикальную толщину) измеряли с помощью настольного микротомографического рентгеновского сканера (модель Sky Scan 1074, Аартзелаар, Бельгия). Левую бедренную кость исследовали в отношении перелома путем изгиба при приложении усилия в трех точках с использованием высокоточного устройства для исследования характеристик материалов (модель Instron 4442, Кантон, шт.Миннесота). Присоединяли экстензометр (модель 2630-113, фирма Instron Corp.) и использовали системное программное обеспечение (серии IX для Windows 95, фирма Instron Corp.) для перемещения силового привода со скоростью деформации 0,5%/с до тех пор, пока не происходил перелом. Регистрировали данные о нагрузке и перемещении (измеряемые с помощью экстензометра) и с помощью системного программного обеспечения рассчитывали нагрузку, приводящую к перелому (F), и прочность (k, определяемую на основе зависимости линейной составляющей нагрузки от перемещения).
Геномную ДНК выделяли из селезенок индивидуальных мышей согласно методу высаливания. Мышей генотипировали согласно протоколу полимеразной цепной реакции (ПЦР), разработанному Джексоновской лабораторией (http://aretha.jax.org/pub-cgi/protocols/protocols.sh?objtype=protocol&protocol_id=304), разработанному для создания имеющих различные размеры продуктов гена ALox15 дикого типа (266 пар оснований) и мутантного гена (172 пары оснований). Амплификацию проводили в термоячейке типа Perkin-Elmer 9700 (Бранчбург, шт.Нью-Джерси). ПЦР-продукты разделяли на 4%-ных агарозных гелях и осуществляли визуализацию путем окрашивания бромидом этидия.
Популяция поколения F2 15LOKO-D2 состояла из примерно равного количества самцов (n=141) и самок (n=151) и, как проиллюстрировано в таблице 5, частота встречаемости генотипа ALox15 согласуется с критерием ожидания Харди-Вайнберга у 70 (24%) гомозиготных мышей «с дефицитом» (отсутствием аллеля 15-ЛО), у 153 (52%) гетерозиготных мышей (один аллель 1 5-ЛО из линии D2) и у 69 (24%) гомозиготных мышей линии D2 мышей (оба аллеля 15-ЛО из линии D2). Хотя не было обнаружено разницы в весе тела, у мышей поколения F2, гомозиготных по дефициту ALox15, была выявлена большая величина МПК всего тела по сравнению с гомозиготными мышами линии D2 или гетерозиготными мышами (р=0,006 по результатам дисперсионного анализа (ANOVA)). Кроме того, у мышей линии F2, гомозиготных по дефициту ALox15, выявлены повышенные количества кортикальной костной ткани стержня бедра (кортикальной площади и кортикальной толщины) и существенно более высокие структурные характеристики, о чем свидетельствуют полученные путем измерений более высокая величина нагрузки, приводящей к перелому, и прочность (таблица 6).
Таблица 5 | ||||
Корреляция 15LO-генотипа с МПК в популяции мышей поколения F2 линии 15LOKO-D2 | ||||
Количество аллелей 15LO D2 | ANOVA значение p | |||
0 | 1 | 2 | ||
Количество мышей | 69 | 127 | 70 | |
Вес тела, г | 28,2±0,61 | 27,5±0,43 | 29,2±0,64 | н.д. |
МПК, г/см2 | 66,1±0,33 | 64,9±0,25 | 65,0±0,31 | р=0,006 |
Таблица 6 | ||||
Корреляция 5LO-генотипа с массой и прочностью бедренной кости в популяции мышей поколения F2 линии 15LOKO-D2 | ||||
Количество аллелей 15LO D2 | ||||
0 | 1 | 2 | значение p | |
Количество мышей | 15 | 15 | 15 | |
Вес тела, г | 23,3±0,54 | 23,9±0,45 | 23,7±0,40 | Alox15 |
МПК, г/см2 | 65,6±0,46 | 64,8±0,95 | 63,4±0,65 | р=0,005 |
Площадь Ct, мм | 0,76±0,03 | 0,78±0,03 | 0,70±0,02 | р=0,046 |
Толщина Ct, мм | 0,193±0,005 | 0,200±0,006 | 0,176±0,004 | р=0,006 |
Нагрузка, | 20,5±0,8 | 20,3±0,8 | 18,0±0,6 | р=0,013 |
приводящая к перелому, Н | ||||
жесткость, Н/мм | 126,5±4,6 | 108,7±5,1 | 110,3±3,3 | р=0,004 |
(МПК=МПК всего тела; площадь Ct=кортикальная площадь стержня бедренной кости; толщина Ct=кортикальная толщина стержня бедренной кости).
Таким образом, в описании представлены новые способы лечения или предупреждения потери костной ткани, увеличения минеральной плотности костной ткани и увеличения образования и отложения костной ткани. Хотя в заявке подробно описаны предпочтительные варианты осуществления изобретения, следует понимать, что могут быть сделаны очевидные вариации без отклонения от сущности и объема изобретения, которые определяются прилагаемой формулой изобретения.
Claims (7)
1. Способ идентификации соединений, которые обладают способностью увеличивать минеральную плотность костной ткани, заключающийся в том, что соединение приводят в контакт с 15-липоксигеназой и определяют, обладает ли соединение активностью в отношении ингибирования 15-липоксигеназы.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что соединение тестируют с помощью функционального анализа, который позволяет определять эффективность соединения в отношении формирования костной ткани.
3. Способ по п.2, в котором функциональный анализ заключается в том, что соединение приводят в контакт с человеческими мезенхимальными стволовыми клетками и определяют дифференцировку клеток в костеобразующие клетки.
4. Способ по п.2, в котором функциональный анализ заключается в том, что соединение вводят животному, кроме человека, и измеряют индекс костеобразования.
5. Способ по п.4, в котором измеряемый индекс представляет собой минеральную плотность костной ткани.
6. Способ по п.4, в котором индекс представляет собой биомеханический параметр кости.
7. Способ по п.3, в котором для определения дифференцировки клеток проводят анализ щелочной фосфатазы, анализ содержания кальция, анализ общей ДНК препарата или их комбинацию.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US35525502P | 2002-02-08 | 2002-02-08 | |
US60/355,255 | 2002-02-08 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004127131/15A Division RU2319483C2 (ru) | 2002-02-08 | 2003-02-03 | Способ лечения и предупреждения потери костной ткани |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2007132977A RU2007132977A (ru) | 2009-03-10 |
RU2358728C2 true RU2358728C2 (ru) | 2009-06-20 |
Family
ID=27734489
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004127131/15A RU2319483C2 (ru) | 2002-02-08 | 2003-02-03 | Способ лечения и предупреждения потери костной ткани |
RU2007132981/15A RU2007132981A (ru) | 2002-02-08 | 2007-09-03 | Способ лечения и предупреждения потери костной ткани |
RU2007132977/15A RU2358728C2 (ru) | 2002-02-08 | 2007-09-03 | Способ лечения и предупреждения потери костной ткани |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004127131/15A RU2319483C2 (ru) | 2002-02-08 | 2003-02-03 | Способ лечения и предупреждения потери костной ткани |
RU2007132981/15A RU2007132981A (ru) | 2002-02-08 | 2007-09-03 | Способ лечения и предупреждения потери костной ткани |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20030175680A1 (ru) |
EP (3) | EP1634618B1 (ru) |
JP (1) | JP2005531498A (ru) |
KR (2) | KR100589819B1 (ru) |
CN (3) | CN1287789C (ru) |
AT (1) | ATE385835T1 (ru) |
AU (1) | AU2003206822C1 (ru) |
BR (1) | BR0307522A (ru) |
CA (2) | CA2697599A1 (ru) |
DE (1) | DE60319156T2 (ru) |
ES (1) | ES2299923T3 (ru) |
MX (1) | MXPA04007611A (ru) |
PL (1) | PL372228A1 (ru) |
RU (3) | RU2319483C2 (ru) |
WO (1) | WO2003066048A2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2517037C1 (ru) * | 2013-02-08 | 2014-05-27 | Евгений Викторович Ларионов | Способ получения костного минерального компонента и костный минеральный компонент для замещения и восстановления дефектов костной ткани |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7660453B2 (en) | 2000-10-11 | 2010-02-09 | Imaging Therapeutics, Inc. | Methods and devices for analysis of x-ray images |
US8639009B2 (en) * | 2000-10-11 | 2014-01-28 | Imatx, Inc. | Methods and devices for evaluating and treating a bone condition based on x-ray image analysis |
EP1389947B1 (en) | 2001-05-25 | 2009-08-26 | Imaging Therapeutics, Inc. | Methods to diagnose treat and prevent bone loss |
US7840247B2 (en) | 2002-09-16 | 2010-11-23 | Imatx, Inc. | Methods of predicting musculoskeletal disease |
US8965075B2 (en) * | 2002-09-16 | 2015-02-24 | Imatx, Inc. | System and method for predicting future fractures |
WO2004086972A2 (en) | 2003-03-25 | 2004-10-14 | Imaging Therapeutics, Inc. | Methods for the compensation of imaging technique in the processing of radiographic images |
US20080058613A1 (en) * | 2003-09-19 | 2008-03-06 | Imaging Therapeutics, Inc. | Method and System for Providing Fracture/No Fracture Classification |
GB0410103D0 (en) * | 2004-05-06 | 2004-06-09 | Biolipox Ab | New method |
WO2005123130A2 (en) * | 2004-06-17 | 2005-12-29 | Osteologix A/S | Improved treatments of rheumatic and arthritic diseases comprising combinations of a 5-lipoxygenase inhibitor |
CA2580726A1 (en) | 2004-09-16 | 2006-03-30 | Imaging Therapeutics, Inc. | System and method of predicting future fractures |
US20070036770A1 (en) * | 2005-08-12 | 2007-02-15 | Wagner Darrell O | Biologic device for regulation of gene expression and method therefor |
JP2009504776A (ja) | 2005-08-18 | 2009-02-05 | アクセラロクス, インコーポレイテッド | アラキドン酸代謝経路またはシグナル伝達経路を調節することによる骨を処置するための方法 |
EP2035573B1 (en) * | 2006-06-27 | 2010-08-18 | Biolipox AB | Methods for identifying modulators of eoxin formation |
US20080076836A1 (en) * | 2006-09-01 | 2008-03-27 | Cardiac Pacemakers, Inc | Method and apparatus for using light to enhance cell growth and survival |
US20080200425A1 (en) * | 2007-02-16 | 2008-08-21 | Kurtz Seymour J | Methods and compositions for regulating bone mineral density |
CA2683816A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-11-06 | President And Fellows Of Harvard College | Assays for the identification of compounds that modulate bone formation and mineralization |
WO2009105723A2 (en) * | 2008-02-22 | 2009-08-27 | Accelalox, Inc. | Novel methods for bone treatment by modulating an arachidonic acid metabolic or signaling pathway |
US8939917B2 (en) | 2009-02-13 | 2015-01-27 | Imatx, Inc. | Methods and devices for quantitative analysis of bone and cartilage |
US20110136728A1 (en) * | 2009-12-09 | 2011-06-09 | Patricia Grasso | Methods of increasing bone formation using leptin-related peptides |
WO2011088163A1 (en) | 2010-01-14 | 2011-07-21 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for modulating skeletal remodeling and patterning by modulating shn2 activity, shn3 activity, or shn2 and shn3 activity in combination |
CN102138961A (zh) * | 2010-02-02 | 2011-08-03 | 北京绿色金可生物技术股份有限公司 | 黑豆皮提取物在预防和治疗骨关节炎的产品中的应用 |
KR101474053B1 (ko) | 2011-04-08 | 2014-12-19 | 울산대학교 산학협력단 | 골다공증 또는 골다공성 골절 발생 위험도 예측용 다형성 마커 |
CA2924141C (en) | 2013-08-22 | 2022-06-07 | The General Hospital Corporation | 5-amino 4-cyano substituted oxazole and thiazole derivatives as inhibitors of human 12/15-lipoxygenase |
EP3159003A3 (en) * | 2015-10-23 | 2017-07-19 | Universiti Putra Malaysia | Composition for enhancing bone growth, preventing bone resorption disorders and for joint health |
CN106405064B (zh) * | 2016-08-30 | 2018-10-26 | 嘉兴行健生物科技有限公司 | 一种40岁以上女性骨转换率的评估方法 |
CN108251454A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-07-06 | 温州医科大学附属第医院 | 一种脂氧合酶基因修饰间充质干细胞的获取方法及其应用 |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ZA838339B (en) * | 1982-11-11 | 1985-06-26 | Beecham Group Plc | Novel arachidonic acid analogues and pharmaceutical compositions containing them |
DE3360677D1 (en) * | 1982-11-11 | 1985-10-03 | Beecham Group Plc | Arachidonic acid analogues, processes for their preparation and their use in medicine |
US4605669A (en) | 1985-04-26 | 1986-08-12 | Abbott Laboratories | Lipoxygenase inhibiting naphthohydroxamic acids |
US4623661A (en) * | 1985-04-26 | 1986-11-18 | Abbott Laboratories | Lipoxygenase inhibiting compounds |
US4761403A (en) * | 1986-04-09 | 1988-08-02 | Abbott Laboratories | Lipoxygenase inhibiting compounds |
US4873259A (en) | 1987-06-10 | 1989-10-10 | Abbott Laboratories | Indole, benzofuran, benzothiophene containing lipoxygenase inhibiting compounds |
JPH0819069B2 (ja) * | 1990-07-25 | 1996-02-28 | アボツト・ラボラトリーズ | リポキシゲナーゼ阻害活性を有するアセチレン誘導体 |
US5478579A (en) * | 1991-02-06 | 1995-12-26 | Biodyn Medical Research, Inc. | Method for treatment of osteoporosis |
US5977070A (en) | 1992-07-14 | 1999-11-02 | Piazza; Christin Teresa | Pharmaceutical compositions for the nasal delivery of compounds useful for the treatment of osteoporosis |
US5641747A (en) * | 1994-07-25 | 1997-06-24 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Treatment of osteopetrotic diseases |
US5620997A (en) * | 1995-05-31 | 1997-04-15 | Warner-Lambert Company | Isothiazolones |
US5717062A (en) | 1995-06-07 | 1998-02-10 | Beth Israel Hospital Association | Cyclic analogs of PTH and PTHrP |
AU6966696A (en) * | 1995-10-05 | 1997-04-28 | Warner-Lambert Company | Method for treating and preventing inflammation and atherosclerosis |
US5972980A (en) * | 1995-10-05 | 1999-10-26 | Warner-Lambert Company | Method for treating and preventing inflammation and atherosclerosis |
AU1529799A (en) * | 1997-12-23 | 1999-07-12 | Warner-Lambert Company | Thiourea and benzamide compounds, compositions and methods of treating or preventing inflammatory diseases and atherosclerosis |
CA2411495A1 (en) * | 2000-06-14 | 2001-12-20 | Warner-Lambert Company | 1,2,4-trisubstituted benzenes as inhibitors of 15-lipoxygenase |
-
2003
- 2003-02-03 CN CNB038035375A patent/CN1287789C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-02-03 KR KR1020047012298A patent/KR100589819B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2003-02-03 RU RU2004127131/15A patent/RU2319483C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-02-03 CA CA2697599A patent/CA2697599A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-03 EP EP05014630A patent/EP1634618B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-03 BR BR0307522-2A patent/BR0307522A/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-02-03 EP EP05014631A patent/EP1666883A1/en not_active Withdrawn
- 2003-02-03 EP EP03704519A patent/EP1476153A2/en not_active Withdrawn
- 2003-02-03 JP JP2003565472A patent/JP2005531498A/ja not_active Ceased
- 2003-02-03 CA CA002474431A patent/CA2474431A1/en not_active Abandoned
- 2003-02-03 ES ES05014630T patent/ES2299923T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-03 PL PL03372228A patent/PL372228A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2003-02-03 MX MXPA04007611A patent/MXPA04007611A/es active IP Right Grant
- 2003-02-03 WO PCT/EP2003/001033 patent/WO2003066048A2/en active Application Filing
- 2003-02-03 CN CNA2006101078189A patent/CN1936023A/zh active Pending
- 2003-02-03 AU AU2003206822A patent/AU2003206822C1/en not_active Ceased
- 2003-02-03 AT AT05014630T patent/ATE385835T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-02-03 DE DE60319156T patent/DE60319156T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-03 CN CNB2006101000659A patent/CN100410388C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-02-03 KR KR1020067005947A patent/KR100653017B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2003-02-07 US US10/361,093 patent/US20030175680A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-11-23 US US11/286,237 patent/US20060079488A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-09-03 RU RU2007132981/15A patent/RU2007132981A/ru unknown
- 2007-09-03 RU RU2007132977/15A patent/RU2358728C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
CORNICELLI J.A., TRIVEDI B.K. 15-Lipoxygenase and its inhibition: a novel therapeutic target for vascular disease. Curr. Pharm. Des. 1999 Jan; 5(1):11-20. BENDIXEN A.C. et. al. IL-4 inhibits osteoclast formation through a direct action on osteoclast precursors via peroxisome proliferator-activated receptor gammal. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 2001 Feb. 27; 98(5):2443-8. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2517037C1 (ru) * | 2013-02-08 | 2014-05-27 | Евгений Викторович Ларионов | Способ получения костного минерального компонента и костный минеральный компонент для замещения и восстановления дефектов костной ткани |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2358728C2 (ru) | Способ лечения и предупреждения потери костной ткани | |
Motyl et al. | Streptozotocin, type I diabetes severity and bone | |
Kaplan et al. | Heterotopic ossification | |
Jadhav et al. | Statins and osteoporosis: new role for old drugs | |
Moffett et al. | Association of the G‐174C variant in the interleukin‐6 promoter region with bone loss and fracture risk in older women | |
Otaify et al. | Gnathodiaphyseal dysplasia: Severe atypical presentation with novel heterozygous mutation of the anoctamin gene (ANO5) | |
Lau et al. | Transforming growth factor-β1 gene polymorphisms and bone turnover, bone mineral density and fracture risk in southern Chinese women | |
Li et al. | Naringin protects against bone loss in steroid-treated inflammatory bowel disease in a rat model | |
US20120164637A1 (en) | Susceptibility to bone damage | |
Xu et al. | Small molecule natural compound targets the NF‐κB signaling and ameliorates the development of osteoarthritis | |
Sibonga et al. | Ovarian status influences the skeletal effects of tamoxifen in adult rats | |
US7326733B2 (en) | Methods for increasing bone density | |
Glowacki et al. | Osteoporosis and mechanisms of skeletal aging | |
Radeef et al. | Biochemical and molecular assessment of irisin and DIO2 in pre and post thyroidectomy patients. | |
US7354712B2 (en) | Estrogen receptor alleles that are predictive of increased susceptibility to bone fracture | |
Yoshikawa et al. | Missouri-Kansas City, USA, 6Texas A&M Health Science Center, USA, 7Metabolic Disease Branch, National Institute of Diabetes & Digestive & Kidney Diseases, National Institute of Health, USA, 8National Institute of Diabetes & Digestive & Kidney Diseases, USA, 9Beth Israel Deaconess Medical Center, USA, 10Massachusetts General Hospital, USA | |
Vaes et al. | 11th Annual Meeting of the Dutch Bone and Mineral Society | |
Shore et al. | Extraskeletal Bone Formation | |
OSTEOCLASTS | Bone and Tooth Society Annual Meeting 4-5 July 2005 Birmingham, UK IS1 | |
Lips | INVITED AND CONTRIBUTED PRESENTATIONS |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110204 |