RU2351356C2 - Средство, содержащее fgf2 в качестве активного ингредиента, для лечения или профилактики астмы и хронических обструктивных заболеваний легких - Google Patents
Средство, содержащее fgf2 в качестве активного ингредиента, для лечения или профилактики астмы и хронических обструктивных заболеваний легких Download PDFInfo
- Publication number
- RU2351356C2 RU2351356C2 RU2006143763/15A RU2006143763A RU2351356C2 RU 2351356 C2 RU2351356 C2 RU 2351356C2 RU 2006143763/15 A RU2006143763/15 A RU 2006143763/15A RU 2006143763 A RU2006143763 A RU 2006143763A RU 2351356 C2 RU2351356 C2 RU 2351356C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fgf2
- asthma
- mice
- ifn
- ahr
- Prior art date
Links
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 title claims abstract description 193
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 77
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title abstract 3
- 101150019331 FGF2 gene Proteins 0.000 title description 5
- YSFTYXKQUONNFY-NQXPEFQPSA-N fgf2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 YSFTYXKQUONNFY-NQXPEFQPSA-N 0.000 title 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims abstract description 214
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims abstract description 212
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims abstract description 127
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims abstract description 122
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims abstract description 94
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims abstract description 94
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 claims abstract description 73
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 claims abstract description 73
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims abstract description 60
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims abstract description 60
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 34
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims abstract description 28
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 21
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 claims 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 claims 1
- 229940099456 transforming growth factor beta 1 Drugs 0.000 abstract description 69
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 145
- 208000002200 Respiratory Hypersensitivity Diseases 0.000 description 117
- 230000010085 airway hyperresponsiveness Effects 0.000 description 117
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 67
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 64
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 42
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 39
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 37
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 36
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 32
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 26
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 description 24
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 22
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- NZWOPGCLSHLLPA-UHFFFAOYSA-N methacholine Chemical compound C[N+](C)(C)CC(C)OC(C)=O NZWOPGCLSHLLPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229960002329 methacholine Drugs 0.000 description 21
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 19
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 19
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 19
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 19
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 19
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 18
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 18
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 17
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 15
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 15
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 14
- 101710098275 C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 14
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 14
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 14
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 14
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 13
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 12
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 description 11
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 10
- 208000037883 airway inflammation Diseases 0.000 description 10
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 10
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 9
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 9
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 9
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 9
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 9
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 9
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 8
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 8
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 7
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 7
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 7
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 7
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 5
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 5
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 5
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 5
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 5
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000036065 Airway Remodeling Diseases 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000003087 receptor blocking agent Substances 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000036428 airway hyperreactivity Effects 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N (4s,4ar,5s,5ar,6r,12ar)-4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@H](C)[C@@H]([C@H](O)[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@H]3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N 0.000 description 2
- 208000000884 Airway Obstruction Diseases 0.000 description 2
- 206010007522 Cardiac asthma Diseases 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 208000004327 Paroxysmal Dyspnea Diseases 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000003434 inspiratory effect Effects 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 2
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 2
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 2
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000006444 vascular growth Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTAPDZBZLSXHQQ-UHFFFAOYSA-N 8-methyl-3,7-dihydropurine-2,6-dione Chemical class N1C(=O)NC(=O)C2=C1N=C(C)N2 RTAPDZBZLSXHQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010006448 Bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 102000006579 Chemokine CXCL10 Human genes 0.000 description 1
- 108010008978 Chemokine CXCL10 Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101100384805 Homo sapiens ARCN1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029888 Obliterative bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 230000037453 T cell priming Effects 0.000 description 1
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000048 adrenergic agonist Substances 0.000 description 1
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 229940127225 asthma medication Drugs 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000000233 bronchiolar non-ciliated Anatomy 0.000 description 1
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 1
- 201000003848 bronchiolitis obliterans Diseases 0.000 description 1
- 208000023367 bronchiolitis obliterans with obstructive pulmonary disease Diseases 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 229940124630 bronchodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000000168 bronchodilator agent Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002664 inhalation therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000004199 lung function Effects 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000031990 negative regulation of inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000004526 pharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108091006082 receptor inhibitors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 102000035025 signaling receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091005475 signaling receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000013125 spirometry Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/08—Bronchodilators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5437—IL-13
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/57—IFN-gamma
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/05—Animals modified by non-integrating nucleic acids, e.g. antisense, RNAi, morpholino, episomal vector, for non-therapeutic purpose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/10—Animals modified by protein administration, for non-therapeutic purpose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/20—Animal model comprising regulated expression system
- A01K2217/203—Animal model comprising inducible/conditional expression system, e.g. hormones, tet
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0368—Animal model for inflammation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к созданию средства для лечения или профилактики астмы или хронических обструктивных заболеваний легких (ХОЗЛ). Средство для лечения и профилактики астмы содержит FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качеств активного ингредиента, причем астма вызвана сверхэкспрессией IL-13 (интерлейкин-13) или сверхэкспрессией IFN-γ (интерферон-γ), где FGF2 ингибирует активность IL-13, FGF2 ингибирует активность VEGF и FGF2 ингибирует активность TGF-β1 (трансформирующий фактор роста-β1). Средство для лечения или профилактики хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), содержащее FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента, где хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ) вызвано сверхэкспрессией IFN-γ (интерферон-γ). Ингибитор активности IL-13, содержащий FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента. Ингибитор активности VEGF, содержащий FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента. Ингибитор активности TGF-β1, содержащий FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента. 5 н. и 3 з.п. ф-лы, 31 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к средству, содержащему FGF2 (фактор роста фибробластов-2, или основной фактор роста фибробластов, bFGF) в качестве активного ингредиента, для профилактики и лечения астмы и хронических обструктивных заболеваний легких (ХОЗЛ). Настоящее изобретение также относится к модели ХОЗЛ и Th1 астмы, индуцированной яичным белком (ОА) и двухцепочечной РНК (dsRNA), у мышей.
Уровень техники
В последние 20 лет распространенность астмы увеличилась почти вдвое и на сегодняшний день астмой страдает 8-10% населения планеты. Астма представляет собой хроническое воспалительное заболевание дыхательных путей и характеризуется гиперреактивностью дыхательных путей (AHR) на неспецифические раздражители и перестройкой дыхательных путей, что связано с изменением структуры и функции затрагиваемых элементов, таких как фибробласты и миофибробласты. Астму, главным образом, разделяют на бронхиальную астму и сердечную астму, но, как правило, под астмой пронимают лишь бронхиальную астму.
Одним из наиболее характерных заболеваний легких, наряду с астмой, является хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), которое отличается от астмы сопутствующей обструкцией дыхательных путей. ХОЗЛ занимает 4-е место среди причин смерти во всем мире и темпы роста только ХОЗЛ среди 10 наиболее значимых заболеваний увеличивается. ХОЗЛ вызывают патологические изменения в бронхиолах и паренхиме, возникающие в результате длительного воспаления в дыхательных путях и паренхиме и, таким образом, оно характеризуется облитеративным бронхиолитом и легочной эмфиземой (деструкцией паренхимы). В качестве примеров хронических обструктивных заболеваний легких можно привести обструктивный бронхит, хронический бронхиолит и эмфизему.
Лечение астмы и таких хронических обструктивных заболеваний легких основано на использовании противовоспалительных агентов или бронхорасширяющих средств. Глюкокортикоиды, модификаторы лейкотриенов и теофиллины являются характерными противовоспалительными агентами. Хотя глюкокортикоиды обладают выраженной лечебным эффектом, они влияют не на конкретную мишень, а ингибируют все иммунные и противовоспалительные ответы, что означает, что они ингибируют и необходимые иммунные ответы, и, кроме того, они обладают серьезными побочными эффектами, и, поэтому, используются в качестве ингаляционной терапии. Модификаторы лейкотриенов имеют меньше побочных эффектов, но их лечебный эффект ограничен, так как они не могут контролировать астму независимо и могут быть использованы лишь как вспомогательное средство. Применение теофиллина также ограничено из-за слабого лечебного действия и побочных эффектов.
Поэтому, необходимо создание средства для лечения астмы с выраженным действием, но с меньшим количеством побочных эффектов. Для создания таких средств необходимо полное понимание механизмов развития астмы.
Согласно общепринятой теории Т-хелперы 1 типа (Th1) или Т-хелперы 2 типа (Th2) сектерируют цитокины, которые играют важную роль в развитии астмы, конкретно, дисбаланс цитокинов Th1 и Th2 вызывает астму (гипотеза Th1/Th2) (Mosmann et al., J. Immunol., 136: 2348-57, 1986; Robinson et al., N.Engl.J.Med., 326: 298-304, 1992; Grunig et al., Science, 282: 2261-3, 1998; Richter et al., Am.J.Respir. Cell Mol.Biol., 25: 385-91, 2001). Однако, точный механизм развития астмы, индуцированной цитокинами, до сих пор не был разъяснен.
Интерлейкин-13 (IL-13), продуцируемый активированными T2-хелперными клетками, является ключевым цитокином в патогенезе астмы (Grunig et al., Science, 282: 2261-3, 1998). Подтверждением этого утверждения является обнаружение того, что гиперреактивность дыхательных путей ингибируется подавлением экспрессии IL-13 на модели аллергической астмы у животных, но вновь возникала при введении рекомбинантного IL-13 через дыхательные пути (Marsha et al., Science, 282: 2258-2261,1998).
Гистологические результаты, показанные у трансгенных по IL-13 мышей, были сходны с результатами, наблюдаемыми у больных астмой и сверхэкспрессия IL-13 вызывала воспаление дыхательных путей, увеличение секреции слизи и фиброза эпителиальных клеток (Zhu et al., J.Clin.Invest., 103:779-788,1999). Предположение о том, что IL-13 может усиливать AHR, вызывая инфильтрацию воспалительных клеток, особенно эозинофилов, остается самой известной (Hargreave et al., J. Allergy clin. Immunol., 78: 825-32, 1986). Однако на основании последних данных можно предположить, что индукция AHR может возникать в отсутствие инфильтрации эозинофилами (Venkayya et al., Am.J.Respir. Cell Mol. Biol. 26: 202-8, 2002).
Известно, что трансформирующий фактор роста β1 (TGF-β1) или эндотелиальный фактор роста сосудов (VEGF) вовлечены в патогенез астмы, индуцированной IL-13 (Lee et al., Nat.Med., 10: 1095-1103, 2004).
TGF-β1, как ключевой элемент заживления ран тканей, индуцирует фиброз тканей, который является основным патологическим изменением в перестраиваемых дыхательных путях. Конкретно, TGF-β1 преобразует фибробласты в миофибробласты, после чего миофибробласты секретируют больше коллагена, чем покоящиеся фибробласты, что приводит к перестройке дыхательных путей посредством фиброза тканей (Vignola et al., Am. J. espir. Crit. Care Med., 156: 591-599, 1997). Эта последовательность событий согласуется с данными предшествующего исследования, когда фиброз в легких трансгенных по IL-13 мышей индуцировался главным образом за счет TGF-β1-зависимого пути (Lee et al., J. Exp. Med., 194: 809-21, 2001).
В процессе фиброза ткани, TGF-β1 индуцирует секрецию фактора роста фибробластов-2 (FGF2 или основной фактор роста фибробластов, bFGF) и его рецептора-1 (FGFR-1) или рецептора FGF2 (FGFR-2). Известно, что FGF2 связан с пролиферацией эндотелиальных клеток или гладкомышечных клеток и также играет важную роль в ангиогенезе (Nugent et al., Int. J. Biochem. Cell Biol. 32: 115-20, 2000). Однако роль FGF2 в патогенезе астмы и AHR до сих пор обсуждается.
Эндотелиальный фактор роста сосудов (VEGF) является разновидностью цитокинов, которые увеличивают проникновение белков плазмы через капилляры крови, стимулируют дифференцировку и миграцию клеток и индуцируют секрецию протеаз, преобразующих клетку. VEGF также вовлечен в поддержание новых кровеносных сосудов, ингибируя апоптоз, в регуляцию иммунного ответа посредством подавления нейронального антигена и в индукцию роста и деления клеток. Авторы настоящего изобретения показали, что существует положительная обратная связь между IL-13 и VEGF в отношении иммунного ответа против антигенов и инородных веществ (Lee et al., Nat. Med., 10: 1095-1103, 2004). Тем не менее, роль FGF2 в патогенезе астмы, опосредованной VEGF, не изучена.
Интерферон-γ (IFN-γ) является еще одним ключевым цитокином, секретируемым Th1, вовлеченным в патогенез астмы. Конкретно, IFN-γ является веществом, секретируемым Т1-хелперными клетками в качестве защитного средства против патогена (Fong et al., J. Immunol., 143:2887-93,1989) и известно, что он ингибирует продукцию цитокина Th2 (Mosann et al., J. Immunol., 136: 2348-57,1986).На основании гипотезы Th1/Th2, полагают, что IFN-γ ингибирует развитие астмы, но это утверждение по прежнему противоречиво. В соответствии с предыдущими противоречивыми исследованиями, перестройка дыхательных путей, подобная той, которая наблюдается у больных астмой, происходит у трансгенных по IFN-γ мышей (Wang et al., J. Exp. Med., 192: 1587-1600, 2000) и в частности, тяжесть астмы вероятней всего связана с повышением IFN-γ (Corrogan et al., Lancet 1: 1129-32, 1988; Mognan et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 161: 1790-6, 2000).
Такое противоречивое предположение согласуется с данными, что широко используемые средства для лечения астмы, такие как кортикостероиды, β2-адренергические агонисты и производные метилксантина в большей степени ингибируют иммунный ответ Th1, чем иммунный ответ Th2. Следовательно, объяснение патогенеза астмы гипотезой Th1/Th2, ограничено акцентом на важность стимуляции иммунного ответа Th2.
Тем временем, вовлечение ХОЗЛ в патогенез астмы также не было освещено. То есть развитие и прогрессирование ХОЗЛ не было объяснено, и поэтому требуется полное объяснение точного механизма вышеуказанного процесса перед созданием терапевтического средства для ХОЗЛ.
На основании результатов последних исследований на трансгенных мышах, было доказано, что IFN-γ (Wang et al., J. Exp. Med., 192: 1587-600, 2000) и IL-13 (Zheng et al., J. Clin. Invest., 106: 1081-93, 2000) вовлечены в патогенез астмы, и они являются элементами, вызывающими патологический феномен, сходный с таковым при ХОЗЛ человека. Как указано выше, цитокины в большом количестве секретируются иммунными клетками, что дает основания предположить, что иммунный ответ играет ключевую роль в патогенезе ХОЗЛ. IFN-γ и IL-13 являются важными факторами, облегчающими воспаление в дыхательных путях и паренхиме. Для заживления ран, инициированных воспалением, баланс между атакующими и защищающими факторами во время восстановления эпителиальных клеток дыхательных путей и легких является особенно важным (Lee et al., J. Exp. Med., 200: 377-89, 2004), что означает, что высокая активность атакующих факторов или слабая активность защищающих факторов может вызвать ХОЗЛ.
Авторы настоящего изобретения изучали роль FGF2 в патогенезе астмы и ХОЗЛ, опосредованных IL-13, TGF-β1, VEGF и IFN-γ, и подтвердили, что FGF2 подавляет AHR, вызванную VEGF, стимулированным IL-13, или вызванную IFN-γ, и ингибирует развитие легочной эмфиземы, инициированную воспалением дыхательных путей и паренхимы, поэтому FGF2 может эффективно использоваться для профилактики и лечения астмы и ХОЗЛ. Авторы настоящего изобретения осуществили настоящее изобретение, создав модель Th1 астмы и ХОЗЛ, индуцированных яичным белком и двухцепочечной ДНК, у животных, делая возможными проведение результативных и эффективных экспериментов для создания средств для лечения астмы и ХОЗЛ.
Описание
Техническая проблема
Задачей настоящего изобретения является создание средства, содержащего FGF2 в качестве активного ингредиента, для профилактики и лечения астмы и ХОЗЛ.
Еще одной задачей настоящего изобретения является создание модели Th1 астмы или ХОЗЛ, индуцированных аллергенами, такими как яичный белок (ОА) и двухцепочечная РНК (dsRNA), у мышей.
Техническое решение
Настоящее изобретение относится к средству для профилактики и лечения астмы, содержащему FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение относится к средству для профилактики и лечения астмы, для которой характерна индукция сверхэкспрессией IL-13 (интерлейкин-13).
Настоящее изобретение относится к средству для профилактики и лечения астмы, для которой характерна индукция сверхэкспрессией IFN-γ (интерферон-γ).
Настоящее изобретение относится к средству для профилактики и лечения астмы, содержащему FGF2, для ингибирования активности IL-13.
Настоящее изобретение относится к средству для профилактики и лечения астмы, содержащему FGF2, для ингибирования активности VEGF.
Настоящее изобретение относится к средству для профилактики и лечения астмы, содержащему FGF2, для подавления активности TGF-β1 (трансформирующего фактора роста-β1).
Настоящее изобретение относится к средству для профилактики и лечения ХОЗЛ, содержащему FGF2 (фактор роста фибробласта-2) в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение относится к средству для профилактики и лечения ХОЗЛ, обычно индуцируемых сверхэкспрессией IFN-γ (интерферон-γ).
Настоящее изобретение относится к способу создания моделей Th1 астмы и ХОЗЛ у животных, который характеризуется непосредственным введением аллергенов, таких как яичный белок и двухцепочечная РНК, в дыхательные пути.
Настоящее изобретение относится к способу создания моделей Th1 астмы и ХОЗЛ у животных, где животным является мышь.
Настоящее изобретение относится к способу создания моделей Th1 астмы и ХОЗЛ у животных, предусматривающему следующие стадии:
(1) Сенсибилизация мышей BALB/c четырехразовым интраназальным введением 5-15 мкг полиинозиновой-полицитидиловой кислоты, двухцепочечной РНК, и 50-100 мкг яичного белка; и
(2) Сенсибилизация мышей введением 25-75 мкг яичного белка через 10 дней после первой сенсибилизации.
Настоящее изобретение относится к способу создания моделей Th1 астмы и ХОЗЛ у животных, где в вышеуказанной стадии (1) для сенсибилизации животного использовали 10 мкг двухцепочечной РНК.
Настоящее изобретение относится к способу создания моделей Th1 астмы и ХОЗЛ у животных, где в вышеуказанной стадии (1) для сенсибилизации животного использовали 75 мкг яичного белка и в вышеуказанной стадии (2) 10 дней спустя для сенсибилизации животного использовали 50 мкг яичного белка.
Настоящее изобретение относится к способу создания моделей Th1 астмы и ХОЗЛ у животных, где астма является не-эозинофильной.
Настоящее изобретение относится к модели Th1 астмы или ХОЗЛ у животных, созданной способом по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение относится к модели Th1 астмы или ХОЗЛ у животных, где животным является мышь.
Настоящее изобретение относится к ингибитору IL-3, VEGF или TGF-β1, содержащему FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение относится к ингибитору фиброза, воспаления дыхательных путей, AHR или перестройки дыхательных путей, содержащему FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента.
Далее настоящее изобретение описано более подробно.
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения астмы, содержащей FGF2 в качестве активного ингредиента. Конкретно, настоящее изобретение относится к средству для профилактики и лечения астмы, для которой характерна индукция сверхэкспрессией IL-13 (интерлейкин-13) или IFN-γ (интерферон-γ). Для средства по настоящему изобретению характерно то, что оно ингибирует активность IL-13 (интерлейкин-13), VEGF или TGF-β1 (трансформирующий фактор роста-β1). Астму разделяют на бронхиальную астму, сердечную астму и тому подобное, но под астмой понимают просто бронхиальную астму. Астма характеризуется гиперреактивностью дыхательных путей и перестройкой дыхательных путей.
Перестройка дыхательных путей запускается повышенным иммунным ответом на аллерген, воспаление или раздражитель. При повышении иммунного ответа, Т-клетки секретируют цитокин, внутриклеточный переносчик сигнала. Секретируемый цитокин вызывает миграцию воспалительных клеток в ткани, вызывая хроническое воспаление дыхательных путей, что приводит к структурным нарушениям дыхательных путей.
Также полагают, что AHR является важным фактором для патогенеза астмы, который отличает астму от других респираторных заболеваний. AHR сопровождается гиперплазией гладкомышечных клеток дыхательных путей, сокращением и фиброзом эпителиальных клеток и легочной паренхимы, что характерно для перестройки дыхательных путей. Следовательно, воспаление дыхательных путей, AHR и перестройка дыхательных путей тесно связаны друг с другом, а именно, лечение одного из этих симптомов может приводить к неожиданному эффекту на другие симптомы и одно и то же средство может воздействовать как на воспаление дыхательных путей, так и на AHR, и перестройку дыхательных путей.
Как было показано уровень AHR у Th2 цитокин IL-4 трансгенных по Th2 цитокину IL-4 мышей (IL-4 TG(+)) был сходен с уровнем из контрольных мышей дикого типа (WT) (фиг.1А), тогда как уровень AHR у трансгенных по Th2 цитокину IL-4 мышей (IL-9(+)/IL-13(+/+)) был повышен по сравнению с уровнями у контрольных мышей дикого типа. Однако, AHR была ингибирована у мышей, нокаутированных по IL-13 (IL-9(+)/IL-13(-/-), что наводит на мысль о том, что астма, индуцированная сверхэкспрессией IL-9, была опосредована IL-13 (см. фиг.1В).
Для подтверждения вышеуказанного были созданы трансгенные по IL-13 мыши для исследования взаимосвязи между гиперреактивностью дыхательных путей и TGF-β1 и VEGF, известными как сверхэкспрессирующиеся под действием IL-13. В результате, AHR усиливалась у трансгенных по IL-13 мышей, по сравнению с контрольными мышами дикого типа (см. фиг.2).
В бронхоальвеолярном лаваже (BAL) трансгенных по IL-13 мышей, также повышались концентрации TGF-β1 и VEGF, что означает, что AHR, индуцированная IL-13, контролируется молекулами, такими как TGF-β1 и VEGF, образующимися под действием IL-13 на следующих этапах сигнального пути.
Контроль AHR, опосредованной IL-13, молекулами VEGF был подтвержден тем фактом, что AHR, опосредованная IL-13, ингибируется под действием SU1498, сигнальным блокатором рецептора 2 (см. фиг.4).
Роль FGF2 в патогенезе астмы, опосредованной IL-13, не была освещена. Таким образом, авторами настоящего изобретения была сделана попытка объяснить роль FGF2 и, наконец, подтвердить, что FGF2 является эффективным для лечения характерных симптомов астмы, индуцированной действием VEGF и TGF-β1, уровни которых контролируются IL-13. Ингибирование FGF2 приводило к повышению концентрации VEGF (см. фиг.5) на модели животных и затем вызывало AHR (см. фиг.6). Эти результаты соответствуют данным других экспериментов, в которых блокада VEGF приводила к ингибированию AHR (см. фиг.6) у мышей, дефицитных по FGF2. Фармацевтический эффект FGF2 на астму, вызванную активностью IL-13 или VEGF, подтверждается следующими данными.
Животным с моделью Th2 астмы, опосредованной IL-13, вводили интраназально FGF2, с последующим изучением эффекта FGF2. В результате введения FGF2 гиперреактивность дыхательных путей на метахолин уменьшалась (см. фиг.20), уменьшалось количество воспалительных клеток в бронхоальвеолярном лаваже (BAL) (см. фиг.21) и подавлялась экспрессия IL-13 и VEGF (см. фиг.22), обоих ключевых медиаторов Th2 астмы. Результаты гистологического исследования подтвердили, что FGF2 уменьшал гипертрофию и облитерацию бронхиальной стенки почти до нормального состояния легочной ткани (см. фиг.23). Суммируя, было сделано подтверждение, что FGF2 ингибирует экспрессию VEGF и IL-13, приводя к подавлению AHR и уменьшению воспаления. Следовательно, FGF2 может эффективно использоваться для лечения астмы.
Что касается TGF-β1, молекулы, образующейся на последующих этапах сигнального пути в патогенезе IL-13 опосредованной астмы, то в предшествующих исследованиях было показано, что перестройка дыхательных путей у трансгенных по TGF-β1 мышей (Lee et al., J. Exp. Med., 200: 377-389, 2004) и бронхиальный фиброз, вызваннй IL-13, зависит от TGF-β1 (Lee et al., J. Exp. Med.,194: 809-821, 2001). TGF-β1 значительно индуцировал резистентность и облитерацию дыхательных путей у трансгенных по TGF-β1 мышей (см. фиг.7) и AHR подавлялась метахолином (см. фиг.8).
Для подтверждения взаимосвязи FGF2 и TGF-β1 при IL-13 опосредованной астме, AHR измеряли у мышей, нокаутированных по FGF2. В результате, у мышей, нокаутированных по FGF2 не было отмечено ингибирование AHR под действием TGF-β1 (см. фиг.9). Результаты показывают, что ингибирование AHR происходит не самим TGF-β1, а посредством FGF2, экспрессирующимся вместе с TGF-β1. То есть, увеличение TGF-β1 в присутствии FGF2 снижает AHR, но TGF-β1 не может подавлять повышение AHR в отсутствие FGF2.
На основании вышеуказанных результатов была подтверждена связь FGF2 c TGF-β1, как указано далее; при повреждении тканей дыхательных путей активируется иммунная система. Гладкомышечные клетки и фибробласты дыхательных путей трансформируются в миофибробласты, что приводит к развитию фиброза. В то же время, FGF2 индуцирует пролиферацию гладкомышечных клеток и фибробластов дыхательных путей и восполняет дефицит TGF-β1, а также индуцирует трансформацию миофибробластов в гладкомышечные клетки и фибробласты дыхательных путей. Суммируя, FGF2 индуцирует трансформацию миофибробластов в фибробласты, снижая количество миофибробластов, и, таким образом, FGF2 ингибирует перестройку дыхательных путей и одновременно ингибирует AHR.
Для объяснения механизма ингибирования перестройки дыхательных путей посредством FGF2, у мышей, нокаутированных по FGF2 измеряли концентрацию коллагена и AHR. В результате, количество фибробластов, секретирующих коллаген, в легких мышей, нокаутированных по FGF2, было ниже, чем у контрольных мышей дикого типа (см. фиг.10). Результат показывает, что количество фибробластов было снижено, так как FGF2 не индуцировал пролиферацию клеток, и поэтому концентрация коллагена, секретируемого этими клетками, также была понижена. Также исследовали эффект метахолина на AHR. В результате, метахолин не оказывал значительного влияния на AHR у мышей дикого типа, но резко повышал AHR у мышей, нокаутированных по FGF2 (см. фиг.9). Эти результаты показывают, что дефицит FGF2 в пути от IL-13 до TGF-β1 блокирует пролиферацию фибробластов и трансформацию миофибробластов в фибробласты, приводящую к перестройке дыхательных путей. И, кроме того, количество фибробластов, чувствительных в отношении метахолина постепенно снижалось, повышая AHR. Следовательно, FGF2 может эффективно использоваться для лечения астмы, опосредованной IL-13 и TGF-β1.
Кроме IL-13, IFN-γ, в патогенезе астмы важную роль играет цитокин Th1. Ряд предшествующих экспериментов подтвердил предположение, что Th1 цитокин, особенно IFN-γ, тесно связан с патогенезом астмы. Однако до настоящего времени не существовало модели астмы, опосредованной Th1. Этот пробел был связан с тем, что большинство исследований астмы было сфокусировано на гипотезе Th1/Th2, выделяющей важность активации Th2 в патогенезе астмы. Так, на сегодняшний день были созданы модели астмы посредством сверхэкспрессии эозинофилов или иммуноглобулина Е (IgE).
Напротив, в соответствии с последними данными, AHR может быть индуцирована вне зависимости от эозинофильного воспаления (Venkayya R., Am. J. Respir. Cell Mol Biol 2002; 26: 202-8) и количество больных неэозинофильной астмой составляет больше половины всех больных астмой (Douwes et al., Thorax, 57: 643-8, 2002). Следовательно, для изучения астмы требуется создание модели астмы типа Th1.
Поэтому, авторами настоящего изобретения была создана модель Th1 астмы или ХОЗЛ, индуцированных IFN-γ, на животных, и с помощью нее изучена роль FGF2. В результате авторами настоящего изобретения было обнаружено, что FGF2 может быть эффективно использован для лечения астмы и ХОЗЛ, опосредованных IFN-γ. Следовательно, авторы настоящего изобретения получили средство для профилактики и лечения ХОЗЛ, а также средство для профилактики и лечения астмы, содержащее FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента. ХОЗЛ может быть индуцирована сверхэкспрессией IFN-γ (интерферона-γ).
Сначала была изучена взаимосвязь между IFN-γ и FGF2 при астме, индуцированной IFN-γ. Экспрессию FGF2 в легких трансгенных по IFN-γ мышей измеряли с помощью ОТ-ПЦР. В результате, экспрессия FGF2 была заметно ингибирована у трансгенных мышей, в отличие от контрольных мышей дикого типа (см. фиг.13). Результат показывает, что экспрессия FGF2 ингибируется посредством IFN-γ-сигнального пути.
Затем была изучена роль FGF2 в патогенезе воспаления дыхательных путей и AHR, индуцированной IFN-γ. У трансгенных по IFN-γ мышей (IFN-γ(+)/FGF2(+/+)) удаляли ген FGF2 и затем оценивали AHR. Также измеряли количество воспалительных клеток и уровень воспалительных цитокинов. В результате, у трансгенных по IFN-γ мышей, дефицитных по гену FGF2 (IFN-γ(+)/FGF2(+/+)) были заметно повышены AHR и воспаление (см. фиг.14А и 14В). Был сделан вывод, что повышенный уровень VEGF играет важную роль в увеличении AHR и воспалении, индуцированном дефицитом FGF2 у трансгенных по IFN-γ мышей (см. фиг.14С). Вышеуказанные результаты показывают, что FGF2 также может быть эффективно использован для лечения воспаления дыхательных путей и AHR, индуцированных IFN-γ.
Активность FGF2 исследовали на модели Th1 астмы, опосредованной IFN-γ. В результате, FGF2 снижал AHR на метахолин (см. фиг.27), и было сделано предположение, что FGF2 может быть эффективно использован для лечения IFN-γ-опосредованной астмы.
FGF2 вводили мышам с Th1 астмой и ХОЗЛ, с последующим определением у них лечебного эффекта FGF2.
Введение мышам FGF2 снижало количество воспалительных клеток в BAL (см. фиг.26) и AHR в ответ на метахолин (см. фиг.36).
Кроме AHR у мышей наблюдали апоптоз паренхиматозных клеток, характерный симптом ХОЗЛ. На AHR и апоптоз паренхиматозных клеток влияло присутствие или отсутствие FGF2. После введения FGF2, у IFN-γ-мышей снижалась не только AHR (см. фиг.27), но также деструкция паренхиматозных клеток (см. фиг.28 и 29), индуцированные IFN-γ. Введение FGF2 также снижало повреждение ткани и деструкцию альвеол или эмфизему легких, индуцированных IFN-γ (см. фиг.30 и 31).
Как объяснялось выше, на моделях астмы и ХОЗЛ, FGF2 снижал AHR и ингибировал деструкцию альвеол, что, таким образом, предполагает эффективное использование FGF2 в качестве средства для профилактики и лечения астмы и ХОЗЛ.
Средство для профилактики и лечения астмы и ХОЗЛ по настоящему изобретению, содержащее FGF2 в качестве активного ингредиента, может включать активный ингредиент в количестве 0,0001 - 50 мас.% от общей массы композиции.
Терапевтическое средство по настоящему изобретению кроме FGF2 может включать один или несколько активных ингредиентов, имеющих такую же или подобную функцию в отношении FGF2.
Терапевтическое средство по настоящему изобретению кроме вышеуказанного активного ингредиента может включать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей для введения. Фармацевтически приемлемые носители могут быть выбраны или получены путем смешивания более одного ингредиента, выбранного из группы, состоящей из солевого раствора, стерильной воды, раствора Рингера, буферного солевого раствора, раствора декстрозы, раствора мальтодекстрозы, глицерина и этанола. Могут быть добавлены другие обычно используемые добавки, такие как антиоксидантные средства, буферный раствор, бактериостатическое средство и тому подобное. Для получения растворов для инъекций, пилюль, капсул, гранул или таблеток также могут быть добавлены разбавители, диспергирующие средства, поверхностно-активные вещества, вяжущие вещества и смазывающие вещества. Композиция по настоящему изобретению может, кроме того, быть получена в подходящих для каждого заболевания или в зависимости от ингредиентов формах, следуя способам, изложенным в Remington's Pharmaceutical Science (новейшее издание), Mack Publishing Company, Easton PA.
Терапевтическое средство по настоящему изобретению может быть введен перорально или парентерально (например, внутривенной, подкожной, интраперитонеальной, местной или интраназальной инъекцией). Парентеральное введение является предпочтительным и интраназальное введение является более предпочтительным. Эффективная доза композиции может быть определена в зависимости от массы, возраста, пола, состояния здоровья, диеты, частоты введения, способа введения, экскреции и тяжести заболевания.
Эффективная доза терапевтического средства по настоящему изобретению составляет 0,005~10 мг/кг в сутки и, предпочтительно, 0,05~1 мг/кг в сутки. Частота введения составляет один раз в сутки или, предпочтительно, несколько раз в сутки.
Терапевтическое средство по настоящему изобретению может вводиться самостоятельно или при хирургической операции, наряду с гормональной терапией, химиотерапией и регулятором биологических реакций, для профилактики и лечения астмы и ХОЗЛ.
Для исследования токсичности мышам интраназально вводили FGF2 по настоящему изобретению. В результате, оно было определено как безопасное, так как его вычисленное значение LD50 у мышей было гораздо выше, чем 1000 мг/кг.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к способу создания модели Th1 астмы или ХОЗЛ у животных, который характеризуется непосредственным введением аллергенов, таких как яичный белок и двухцепочечная РНК, в дыхательные пути.
Способ получения предусматривает следующие стадии:
(1) Сенсибилизация мышей BALB/c четырехразовым интраназальным введением 5-15 мкг полиинозиновой-полиситидиловой кислоты, двухцепочечной РНК и 50-100 мкг яичного белка; и
(2) Сенсибилизация мышей введением 25-75 мкг яичного белка через 10 дней после первой сенсибилизации. На вышеуказанной стадии (1) количество двухцепочечной РНК для сенсибилизации предпочтительно составляет 10 мкг, а количество яичного белка составляет предпочтительно 75 мкг. На вышеуказанной стадии (2), количество яичного белка, вводимое через 10 дней для второй сенсибилизации, предпочтительно составляет 50 мкг.
Астма, упомянутая в настоящем описании, может быть не-эозинофильной.
Настоящее изобретение относится к модели Th1 астмы или ХОЗЛ у животных, полученной вышеописанным способом.
К животным могут относиться все млекопитающие, подходящие для биологических экспериментов, но мыши являются предпочтительными.
Что касается создания модели Th1 астмы или ХОЗЛ у животных, то двухцепочечная РНК (dsRNA), полученная при репликации вируса, активно индуцирует интерфероны IFN-α и IFN-γ типа 1, проявляя противовирусную активность in vivo (Guidotti et al., Annu. Rev. Immunol., 19:65-91, 2001). Интерфероны типа 1 запускают продукцию IL-12 и IFN-γ и способны индуцировать требуемый иммунный ответ, стимулируя примирование Т-клеток и созревание дендритных клеток (Londhe et al., FEBS Lett., 553: 33-8, 2003). Следовательно, авторами настоящего изобретения была создана модель астмы, индуцированной по Th1 пути после обработки dsRNA, у животных.
Последовательность и длина dsRNA, используемой для создания модели у животных, не ограничены при условии, что такое dsRNA может индуцировать Th1 астму. dsRNA может быть приобретена, предпочтительной является полиинозиновая-полицитидиловая кислота (полил:С).
У мышей с астмой, индуцированной по Th1 пути, была повышена AHR (см. фиг.15) и было повышено число лимфоцитов, нейтрофилов и макрофагов. Но число эозинофилов повышено не было. В качестве медиатора был заметно повышен только IP-10, который связан с Th1 активностью (см. фиг.16 и 17). Вышеуказанные результаты показывают, что не-эозинофильное воспаление дыхательных путей индуцируется ОА и dsRNA. Также был повышен уровень IFN-γ в бронхоальвеолярном лаваже (BAL) и уровень антиген-специфических IgG1 и IgG2 в крови (см. фиг.18 и 19). Суммируя, сенсибилизация дыхательных путей ОА и dsRNA была вызвана IFN-γ, а антиген-специфические IgG2a и антиген-специфические IgE вовлечены не были. Вышеуказанные результаты подтвердили успешное получение модели Th1 астмы у животных.
Благодаря модели на животных по настоящему изобретению также показали симптомы ХОЗЛ. А именно, размер и объем легких был увеличен, альвеолы разрушены и из-за увеличения содержания коллагена был индуцирован выраженный фиброз (см. фиг.28-фиг.31). Вышеуказанные результаты подтвердили, что мыши с Th1 астмой по настоящему изобретению также могут быть использованы в качестве модели ХОЗЛ.
Модель на животных по настоящему изобретению была подтверждена как модель Th1 или не-эозинофильной астмы, вызванной введением аллергенов (яичный белок, ОА) и двухцепочечной РНК (dsRNA) непосредственно в дыхательные пути и может эффективно использоваться для создания средства для лечения астмы и ХОЗЛ.
Описание чертежей
На фиг.1А представлена группа графиков, на которых продемонстрирована AHR, наблюдаемая у IL-4 трансгенных мышей.
На фиг.1В представлен график, на котором показана AHR, наблюдаемая у IL-9(-)/IL-13(+/+), IL-9(-)/IL-13(-/-), IL-9(+)/IL-13(+/+) и IL-9(+)/IL-13(-/-) трансгенных мышей.
На фиг.2 представлен график, на котором показано сравнение AHR трансгенных по IL-13 мышей и контрольными мышами дикого типа.
На фиг.3 представлен график, на котором показано сравнение уровней экспрессии VEGF и TGF-β1 в бронхоальвеолярном лаваже (BAL) трансгенных по IL-13 мышей и контрольными мышами дикого типа.
На фиг.4 представлен график, на котором показана AHR, наблюдаемая после введения ингибитора рецептора VEGF-2 SU 1498, у трансгенных по IL-13 мышей и у контрольных мышей дикого типа.
На фиг.5 представлен график, на котором показано сравнение уровней экспрессии VEGF и TGF-β1 в бронхоальвеолярном лаваже (BAL) мышей, нокаутированных по FGF2, и контрольными мышами дикого типа.
На фиг.6 представлен график, на котором показана AHR, наблюдаемая у мышей, нокаутированных по FGF2, или по FGF2 и VEGF.
На фиг.7 представлен график, на котором показано сравнение AHR TGF-β1 трансгенных мышей и контрольными мышами дикого типа.
На фиг.8 представлен график, на котором показаны наблюдаемые изменения AHR в соответствии со временем, у TGF-β1 трансгенных мышей и контрольных мышей дикого типа.
На фиг.9 представлен график, на котором показаны изменения AHR, наблюдаемые после введения TGF-β1, в зависимости от времени у контрольных мышей дикого типа или у мышей, нокаутированных по FGF2.
На фиг.10 представлен график, на котором показано сравнение содержания коллагена в легочной ткани мышей, нокаутированных по FGF2 и контрольными мышами дикого типа.
На фиг.11 представлен график, на котором показано сравнение AHR IFN-γ трансгенных мышей и контрольными мышами дикого типа.
На фиг.12 представлен график, на котором показаны уровни экспрессии VEGF в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), TGF-β1 и IP-10 трансгенных по IFN-γ мышей и контрольными мышами дикого типа.
На фиг.13 представлена фотография агарозного геля, на которой видны уровни экспрессии FGF2 в ткани легких у трансгенных по IFN-γ мышей и контрольных мышей дикого типа.
На фиг.14 представлен график, на котором показано количество всех клеток (Т), количество макрофагов (М), количество лейкоцитов (L), количество нейтрофилов (N) и количество эозинофилов (Е) в бронхоальвеолярном лаваже (BAL) у IFN-γ(-)/FGF2(+/+), IFN-γ(-)/FGF2(-/-), IFN-γ(+)/FGF2(+/+) или IFN-γ(+)/FGF2(-/-) трансгенных мышей.
На фиг.14В представлен график, на котором показана метахолин-зависимая AHR, наблюдаемая у IFN-γ(-)/FGF2(+/+), IFN-γ(-)/FGF2(-/-), IFN-γ(+)/FGF2(+/+) или IFN-γ(+)/FGF2(-/-) трансгенных мышей.
На фиг.14С представлен график, на котором показаны уровни экспрессии VEGF, TGF-β1 и IP-10 в бронхоальвеолярном лаваже у IFN-γ(-)/FGF2(+/+), IFN-γ(-)/FGF2(-/-), IFN-γ(+)/FGF2(+/+) или IFN-γ(+)/FGF2(-/-) трансгенных мышей.
На фиг.15 представлен график, на котором показаны изменения AHR в ответ на метахолин после введения аллергена (ОА) и dsRNA по отдельности или вместе.
На фиг.16 представлен график, на котором показано количество всех клеток, количество макрофагов, количество лимфоцитов, количество нейтрофилов и количество эозинофилов в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), измеряемое после введения аллергена (ОА) и dsRNA по отдельности или вместе.
На фиг.17 представлен график, на котором показаны уровни экспрессии цитокинов (VEGF, IL-5, IL-13 и IP-10) в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), наблюдаемые после введения аллергена (ОА) и dsRNA по отдельности или вместе.
На фиг.18 представлен график, на котором показан уровень экспрессии IFN-γ в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), наблюдаемый после введения аллергена (ОА) и dsRNA по отдельности или вместе.
На фиг.19 представлен график, на котором показана продукция антиген-специфических антител (IgG1 и IgG2a) в сыворотке после введения аллергена (ОА) и dsRNA по отдельности или вместе.
На фиг.20 представлен график, на котором показана AHR, зависимая от дозы метахолина, наблюдаемая после введения рекомбинантного FGF2(rFGF2) на модели Th2 астмы у мышей и у контрольных мышей дикого типа.
На фиг.21 представлен график, на котором показано количество всех клеток, количество макрофагов, количество лимфоцитов, количество нейтрофилов и количество эозинофилов в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), измеряемое после введения рекомбинантного FGF2 (rFGF2) мышам с Th2 астмой и у контрольных мышей дикого типа.
На фиг.22 представлен график, на котором показаны концентрации цитокинов (VEGF, IL-5, IL-13 и IP-10) в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), наблюдаемые после введения рекомбинантного FGF2 (rFGF2) мышам с Th2 астмой и контрольным мышами дикого типа.
На фиг.23 показана фотография патологии ткани легких у мышей с Th2 астмой и у контрольных мышей дикого типа до и после введения рекомбинантного FGF2 (rFGF2).
На фиг.24 представлен график, на котором показано соотношение эозинофильного и не-эозинофильного компонента в индуцированной мокроте больного тяжелой астмой.
На фиг.25 представлен характер экспрессии IL-4 и IFN-γ в индуцированной мокроте больного астмой в зависимости от тяжести заболевания.
На фиг.26 представлен график, на котором показано количество всех клеток, количество макрофагов, количество лимфоцитов, количество нейтрофилов и количество эозинофилов в бронхоальвеолярном лаваже в присутствии или отсутствие индуктора сверхэкспрессии доксициклина у временно трансгенных по IFN-γ мышей и у контрольных мышей дикого типа.
На фиг.27 представлен график, на котором показана метахолин-зависимая AHR у IFN-γ(-)/FGF2(+/+), IFN-γ(-)/FGF2(-/-), IFN-γ(+)/FGF2(+/+) или IFN-γ(+)/FGF2(-/-) трансгенных мышей.
На фиг.28 представлена фотография, на которой показан размер легкого у трансгенных по IFN-γ мышей под воздействием FGF2 или в отсутствие воздействия FGF2.
На фиг.29 представлен график, на котором показано изменение объема легких трансгенных по IFN-γ мышей в зависимости от присутствия или отсутствия FGF2.
На фиг.30 представлен график, на котором показана степень фиброза легких у трансгенных по IFN-γ мышей в зависимости от присутствия или отсутствия FGF2.
На фиг.31 представлен ряд гистологических исследований ткани легких, показывающих распад паренхимы у трансгенных по IFN-γ мышей в зависимости от присутствия или отсутствия FGF2.
Вариант осуществления изобретения
Осуществленные на практике и в настоящее время предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения являются иллюстративными и приведены в следующих примерах.
Однако понятно, что специалист в области техники на основании описания настоящего изобретения, может осуществить модификации и уточнения, не выходя за рамки и сущности настоящего изобретения.
Пример 1. Астма, индуцированная сверхэкспрессией IL-13 и значимость VEGF и TGF-β1
Для изучения развития астмы под действием IL-13, были созданы трансгенные по IL-13 мыши и у каждой из них измеряли AHR. Также изучали эффект сверхэкспрессии IL-13 на экспрессию TGF-β1 и VEGF.
1-1. Создание трансгенных по IL-13 мышей
Трансгенных по IL-13 мышей создавали обычным способом (Zhou Zhu et al., J. Clin. Invest., 103: 779-788, 1999; Tang et al., J. Clin. Invest., 98: 2845-2853, 1996; Ray et al., J. Clin. Invest., 100: 2501-2511, 1997). Для селективной экспрессии гена-кандидата IL-13 использовали конструкцию, включающую ген-кандидат IL-13, связанный с промотором (B. Stripp and J.Whitsett, University of Cincinnati), индуцирующим экспрессию 10 кДа белка клеток Clara (СС10). Для получения индуцибельной трансгенной мыши, у которой экспрессия встроенного чужеродного гена может внешне контролироваться, получали pKS-CC10-rtTA-hGH связыванием СС10 промотора с реверсивным трансактиватором тетрациклина (rtTA) и геном гормона роста человека (hGH) (Ray et al., J. Clin. Invest., 98: 2501-2511, 1997). Плазмидную ДНК очищали на колонке Elutip-D (Schleicher and Schuell Inc, USA) и проводили диализ с микроинъекционным буфером (0,5 мМ Tris-HCl, 25 мМ ЭДТА, рН 7,5). Скрещивание мышей CBA и C57BL/6 проводили микроинъекцией интрапронуклеуса согласно литературным ссылкам, приведенным в настоящем описании, и вышеуказанную плазмидную ДНК встраивали в полученную яйцеклетку F2, что давало трансгенную мышь. Трансгенным мышам и контрольным мышам дикого типа случайным образом вводили 0,5 мг/мл доксициклина (dox) в воде и затем у каждой из них отбирали бронхоальвеолярный лаваж (BAL) для изучения уровня IL-13 и трансформации.
1-2. AHR у трансгенных по IL-13 мышей
Для подтверждения развития астмы у трансгенных по IL-13 мышей наблюдали один из наиболее характерных симптомов астмы, AHR. AHR может быть оценена на основании уклона кривой доза-эффект (DRS, Pediatric Allergy and Immunology, 14; 193, 2003) и повышенной паузы (Penh, Mckinley et al., Clinical & Experimental Immunology, 136: 224-231, 2004) согласно обычным способам, хорошо известным в этой области. Penh рассчитывается как указано далее; максимальное давление выдоха (PEP) делят на максимальное давление вдоха (PIP) и затем вычисленное значение умножают на паузу. В частности, AHR индуцировали у трансгенных мышей, полученных в примере выше (1-1), посредством распыления метахолина в течение трех минут через 24 и 48 часов после второй сенсибилизации. Максимальное давление выдоха и максимальное давление вдоха измеряли на основании общей плетизмографии каждые 10 секунд в течение 3 минут и данные усредняли (фиг.2.) На фигуре 2 показаны результаты исследования AHR у трансгенных по IL-13 мышей и у контрольных мышей дикого типа.
Как показано на фиг.2, AHR была повышена у трансгенных по IL-13 мышей по сравнению с контрольными мышами дикого типа.
1-3. Эффект сверхэкспрессии IL-13 на экспрессию VEGF и TGF-β1
Приведенные далее эксперименты проводили для изучения соответствия AHR, индуцированной сверхэкспрессией IL-13, с помощью модуляторов, образующихся на последующих этапах сигнального пути IL-13, т.е. VEGF и TGF-β1. С помощью пробирки SP45 проводили катетеризацию дыхательных путей трансгенных мышей, полученных в примере выше (1-1) для получения бронхоальвеолярного лаважа (BAL), который промывали стерилизованным физиологическим раствором, содержащим 0,1% BSA и 0,05 мм ЭДТА и затем центрифугировали. В полученном супернатанте BAL, измеряли уровень VEGF и TGF-β1 с использованием набора ELISA (CalBiotech, USA) (фиг.3). На фигуре 3 представлен график, на котором показан уровень экспрессии VEGF и TGF-β1 в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), взятом у трансгенных по IL-13 мышей и от контрольных мышей дикого типа.
Как показано на фиг.3, концентрации VEGF и TGF-β1 были повышены в BAL, полученном у трансгенных мышей с AHR, индуцированной сверхэкспрессией IL-13. Результаты показывают, что AHR, индуцированная IL-13, контролируется модуляторами TGF-β1 и VEGF, что подтверждают результаты нижеследующего примера (1-4).
1-4. Подавление AHR блокатором VEGF
Для подтверждения результатов вышеуказанного примера (1-3) в брюшную полость мыши, полученной в примере (1-1) один раз в сутки вводили, 10 мг/кг блокатора рецептора VEGF-2 SU1498 (EMD Bioscience, USA) (фиг.4). На фигуре 4 представлен график, на котором показана AHR, наблюдаемая у трансгенных по IL-13 мышей и у контрольных мышей дикого типа после введения блокатора рецептора VEGF-2 SU1498.
Как показано на фиг.4, AHR, индуцированная IL-13, подавляется блокатором рецептора VEGF-2, что указывает на то, что AHR, индуцированная IL-13, возникает в результате передачи сигнала через VEGF.
Пример 2. Роль FGF2 в патогенезе астмы, индуцированной IL-13
Для изучения роли FGF2 в патогенезе астмы, индуцированной IL-13, и действия модуляторов, образуемых на последующих этапах сигнального пути, т.е. TGF-β1 и VEGF, у мышей, нокаутированных по FGF2 (-/-), наблюдали AHR и перестройку дыхательных путей.
2-1. AHR, индуцированная дефицитом FGF2
Следующие эксперименты проводили для изучения связи FGF2 и AHR. Мышей, нокаутированных по FGF2, покупали у Jackson Lab (CA, USA). AHR (DRS) в ответ на метахолин и концентрации VEGF и TGF-β1, которые, как было показано, увеличены у трансгенных мышей, изучали в BAL по аналогии с методикой, описанной в примере (1-2) и примере (1-3) (фиг.5 и 6). На фигуре 5 представлен график, на котором показан уровень экспрессии VEGF и TGF-β1 в BAL, полученном у мышей, нокаутированных по FGF2, и у контрольных мышей дикого типа. На фигуре 6 представлен график, на котором показана AHR, наблюдаемая у мышей, нокаутированных по FGF2, и мышей, нокаутированных по FGF2, которым вводили блокатор VEGF, как описано в примере (1-4).
Как показано на фигуре 5 концентрация VEGF была увеличена у мышей, нокаутированных по FGF2, по сравнению с контрольными мышами дикого типа, что указывает на усиление AHR, что согласуется с результатами, представленными на фиг.6.
Как показано на фигуре 6, AHR была повышена у мышей, нокаутированных по FGF2, и могла быть подавлена блокатором VEGF. Результаты показывают, что AHR, индуцированная дефицитом FGF2, контролируется VEGF, а именно, введение FGF2 ингибирует экспрессию VEGF, делая его представляющим интерес кандидатом средства для профилактики и лечения астмы, опосредованной путем VEGF.
2-2. Перестройка дыхательных путей, инициированная дефицитом FGF2
Для изучения связи FGF2 с перестройкой дыхательных путей проводили следующие эксперименты, в том числе измерение пролиферации и трансформации клеток, которые сопровождались перестройкой дыхательных путей.
Мышей, нокаутированных по FGF2, покупали у Jackson Lab (CA, USA). Ткань легких получали обычным способом и анализировали концентрацию коллагена в тканях, что может быть индексом для оценки пролиферации и трансформации клеток, с использованием набора анализа Sircol Collagen (Biocolor assay, Nothern Ireland) в соответствии с инструкциями производителя (фиг.10). На фигуре 10 представлен график, на котором показана концентрация коллагена в ткани легких мышей, нокаутированных по FGF2, и контрольных мышей дикого типа. Как показано на фиг.10, концентрация коллагена была гораздо ниже у мышей, нокаутированных по FGF2, чем у контрольных мышей дикого типа.
Суммируя, в легких у мышей, нокаутированных по FGF2, снижалось количество фибробластов, секретирующих коллаген, что происходило из-за того, что фибробласты трансформировались в миофибробласты и затем мигрировали, снижая количества фибробластов. В результате, индуцировалась перестройка дыхательных путей.
На основании вышеуказанных результатов было подтверждено, что FGF2 ингибирует перестройку дыхательных путей и AHR, поэтому он может эффективно использоваться для лечения астмы.
Пример 3. Возникновение астмы под действием TGF-β1
Для изучения патогенеза астмы, опосредованной экспрессией TGF-β1, индуцированной IL-13, были созданы трансгенные по TGF-β1 мыши по аналогии с процедурой, как описано в примере (1-1), и проводили следующие эксперименты.
(3-1) Перестройка дыхательных путей, под действием TGF-β1
AHR, возникшую в результате перестройки дыхательных путей, изучали методикой, аналогичной описанной в примере выше (1-2) (фиг.7). На фигуре 7 представлен график, на котором показано сравнение AHR трансгенных по TGF-β1 мышей и контрольными мышами дикого типа в зависимости от времени. На фигуре 8 представлен график, на котором показано сравнение AHR в ответ на метахолин у трансгенных по TGF-β1 мышей и контрольных мышей дикого типа в зависимости от времени.
Как показано на фиг.7 значительная резистентность дыхательных путей индуцировалась под действием TGF-β1, что соответствует результат Penh. Как показано на фиг.8, тем не менее, AHR ингибировалась в ответ на метахолин. Такой результат показывает, что сверхэкспрессия TGF-β1 вовлечена лишь в перестройку дыхательных путей, а не в другие характерные симптомы астмы.
3-2. Роль FGF2 в ингибировании AHR под действием TGF-β1
Как объясняется в примере выше (3-1), у мышей, нокаутированных по FGF2, измеряли AHR, изучая роль FGF2 в ингибировании AHR под действием TGF-β1 (фиг.9). На фигуре 9 представлен график, на котором показана AHR, наблюдаемая у мышей, нокаутированных по FGF2, и у контрольных мышей дикого типа в зависимости от времени, после введения TGF-β1 (система R&D, USA).
Как показано на фигуре 9, ингибирование AHR под действием TGF-β1 было слабее у мышей, нокаутированных по FGF2, что указывает на то, что ингибирование AHR под действием TGF-β1 не происходит непосредственно из-за TGF-β1, а из-за FGF2, который экспрессируется совместно с TGF-β1. То есть, ингибирование AHR в результате стимуляции TGF-β1 связано с FGF2.
Пример 4. Развитие астмы, вызванное IFN-γ, и роль в FGF2
Была создана модель астмы, вызванной IFN-γ, ключевым медиатором ХОЗЛ и тяжелой астмы. С целью подтверждения роли FGF2 были проведены следующие эксперименты на трансгенных по IFN-γ мышам по аналогии с методикой, описанной в примере 1.
4-1. Увеличение AHR при сверхэкспрессии IFN-γ
Измеряли AHR у трансгенных мышей методикой, используемой в примере 1-2 выше (фиг.11). Затем измеряли уровень AHR, VEGF, TGF-β1 и белка IP-10, экспрессия которых индуцировалась IFN-γ в BAL таким же способом, который использовали в примерах 1-3 выше (фиг.12). На фигуре 11 представлен график, на котором показано сравнение AHR трансгенных по IFN-γ мышей и контрольных мышей дикого типа.
Как показано на фиг.11, у трансгенных по IFN-γ мышей AHR была однородно повышена. Как показано на фиг.12 концентрации VEGF и TGF-β1, индуцированные IL-13, экспрессируемым в Th2, не были повышены у трансгенных мышей, но был повышен белок IP-10 (интерферон-индуцибельный белок 10), который не связан с Th2. Результаты показывают, что AHR, индуцированная у трансгенных мышей в этом примере, является IFN-γ-специфичной.
4-2. Роль FGF2 в развитии AHR, индуцированной сверхэкспрессией IFN-γ
Эффект сверхэкспрессии IFN-γ на экспрессию FGF2
Для изучения роли FGF2 в развитии AHR, вызванной сверхэкспрессией IFN-γ, у трансгенных по IFN-γ мышей измеряли уровень экспрессии FGF2 (фиг.13). РНК экстрагировали из ткани легких мышей дикого типа и у трансгенных мышей обычным способом, с последующим проведением ОТ (обратной транскриптазной)-ПЦР. Вкраце, все количество РНК экстрагировали из 1 г легочной ткани, взятой от каждой мыши дикого типа и трансгенной мыши с использованием TRIzol Reagent (Life Technology, USA) в соответствии с инструкциями производителя. ОТ-ПЦР проводили с использованием выделенной РНК в качестве матрицы для синтеза кДНК с использованием набора ОТ-ПЦР (Promega, USA). ПЦР проводили с верхним праймером (5'-ACTCACATTCGAAACCCCAAAC-3') и нижним праймером (5'-CGTCAGATCGCTGGAGAC-3') с использованием 1 мкг синтезированной кДНК в качестве матрицы для амплификации FGF2-специфичной кДНК. ПЦР проводили как указано далее; предварительная денатурация при 95°С в течение 8 минут, денатурация при 95°С в течение 1 минуты, отжиг при 56°С в течение 1 минуты, полимеризация при 72°С в течение 1 минуты, 35 циклов от денатурации до полимеризации и конечной элонгации при 72°С в течение 10 минут. На фигуре 13 представлена фотография агарозного геля, на которой показана амплификация кДНК, специфичной к FGF2 легочной ткани трансгенных по IFN-γ мышей и контрольных мышей дикого типа.
Как показано на фиг.13, у трансгенных по IFN-γ мышей ингибировалась экспрессия FGF2, что указывает на то, что экспрессия FGF2 ингибируется IFN-γ.
Роль FGF2 в AHR, индуцированной сверхэкспрессией IFN-γ
Для изучения роли FGF2 в патогенезе воспаления дыхательных путей и AHR, индуцированной IFN-γ, измеряли количество воспалительных клеток и уровень белка, вовлеченного в воспаление, в BAL у мышей с различными генотипами (фиг.14). Мышей получали, как описано ранее (Zhou Zhu et al., J. Clin. Invest., 103:779-788, 1999; Tang et al., J. Clin. Invest., 98: 2845-2853, 1996; Ray et al., J. Clin. Invest., 100: 2501-2511, 1997). На фиг.14 “+” обозначает мышь с повышенной экспрессией мишеневого гена, “-” обозначает мышь, дефицитную по мишеневому гену. На фигуре 14А представлен график, на котором показано количество всех клеток (Общее количество), количество макрофагов (М), количество лимфоцитов (L), количество нейтрофилов (N) и количество эозинофилов (Е) в бронхоальвеолярном лаваже, взятом от IFN-γ(-)/FGF2(+/+), IFN-γ (-)/FGF2(-/-), IFN-γ(+)/FGF2(+/+) и IFN-γ(+)/FGF2(-/-) трансгенных мышей. На фигуре 14В представлен график, на котором показана метахолин-зависимая AHR у IFN-γ(-)/FGF2(+/+), IFN-γ (-)/FGF2(-/-), IFN-γ(+)/FGF2(+/+) и IFN-γ(+)/FGF2(-/-) трансгенных мышей. На фигуре 14С представлен график, на котором показан уровень экспрессии VEGF, TGF-β1 и IP-10 в бронхоальвеолярном лаваже (BAL) у IFN-γ(-)/FGF2(+/+), IFN-γ(-)/FGF2(-/-), IFN-γ(+)/FGF2(+/+) и IFN-γ(+)/FGF2(-/-) трансгенных мышей.
Как показано на фигуре 14, дефицит FGF2 гена у трансгенных по IFN-γ мышей приводит к повышению AHR, индуцированной IFN-γ, и увеличению плотности воспалительных клеток, ухудшая воспаление дыхательных путей. Такой результат показывает, что FGF2 может эффективно использовать для лечения астмы, индуцированной IFN-γ.
Пример 5. Ингибирование IL-13 опосредованной Th2 астмы введением FGF2
Для изучения ингибирующего эффекта белка FGF2 на IL-13 опосредованную Th2 астму проводили следующие эксперименты.
Рекомбинантный белок FGF (rFGF) покупали у Pharmacia-Upjohn Co (Италия). Для создания модели AHR у мышей, мышей BALB/c (Jackson Lab, США) дважды сенсибилизировали внутрибрюшинной инъекцией 75 мкг яичного белка (ОА) и 2 мг квасцов и через 10 дней мышей снова сенсибилизировали интраназальным введением 50 мкг яичного белка, для того, чтобы вызвать астму. Полученных мышей обозначали мышами с Th2 астмой.
Трансгенным мышам и контрольным мышам дикого типа интраназально вводили 10 мкг/мышь rFGF2 один раз в сутки в течение 4 дней или не вводили FGF2 (этой группе вводили только солевой раствор) с последующим измерением уровня AHRв ответ на метахолин (фиг.20), количество воспалительных клеток (фиг.21) и концентрации медиаторов, таких как VEGF, IL-13, IL-5 и IP-10 (фиг.22) в соответствии с методикой, описанной ранее в вышеуказанных примере (1-2) и примере (1-3).
На фигуре 20 представлен график, на котором показана AHR, зависимая от дозы метахолина, наблюдаемая у мышей с Th2 астмой и у контрольных мышей дикого типа после введения рекомбинантного FGF2. На фигуре 21 представлен график, на котором показано количество всех клеток, количество макрофагов, количество лимфоцитов, количество нейтрофилов и количество эозинофилов в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), измеряемое после введения рекомбинантного FGF2 (rFGF2) у мышей с Th2 астмой и контрольных мышей дикого типа. На фигуре 22 представлен график, на котором показаны концентрации цитокинов (VEGF, IL-13, IL-5 и IP-10) в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), наблюдаемые после введения рекомбинантного FGF2 (rFGF2) у мышей с Th2 астмой и у контрольных мышей дикого типа.
Как показано на фиг.20, ингибирующий эффект на AHR в ответ на метахолин, был значительней у мышей с Th2 астмой, которым вводили rFGF2, по сравнению с мышами с Th2 астмой, которым не вводили rFGF2. Как показано на фиг.21, количество воспалительных клеток в BAL было значительно ниже у мышей с Th2 астмой, которым вводили rFGF2, чем у мышей с Th2 астмой, которым не вводили rFGF2. Как показано на фиг.22, концентрации IL-13 и VEGF, ключевых медиаторов Th2 астмы, были значительно снижены у мышей с Th2 астмой, которые получали rFGF2, чем у мышей с Th2 астмой, которые не получали rFGF2. При этом экспрессия IL-5 и IP-10, о которых известно, что они не связаны с Th2 астмой, не изменялась.
Также проводили гистологический анализ бронхиальной стенки мышей с астмой после введения rFGF2 (фиг.23). На фигуре 23 представлена патологическая фотография ткани легких мышей с Th2 астмой и контрольных мышей дикого типа до (А) и после (В) введения рекомбинантного FGF2 (rFGF2).
Как показано на фиг.23, как результат гистологического анализа (В) стенки бронха мышей, которым вводили rFGF2, гипертрофия и облитерация стенки бронха были снижены введением rFGF2 до нормального уровня (С).
На основании вышеприведенных результатов, было подтверждено, что FGF2 ингибирует экспрессию VEGF и IL-13, и таким образом, ингибирует AHR и воспаление дыхательных путей, опосредованных Th2. Следовательно, FGF2 можно эффективно использовать для профилактики и лечения астмы.
Пример 6. Ингибирование Th1 астмы и ХОЗЛ, опосредованных IFN-γ, введением FGF2
Для изучения ингибирующей активности FGF2 у мышей с Th1 астмой, опосредованной IFN-γ проводили следующие эксперименты
Рекомбинантный белок FGf2 покупали у Pharmacia-Upjohn Co. (Италия). Мышей с Th1 астмой, опосредованной IFN-γ, получали, как указано далее.
6-1. Создание моделей Th1 астмы и ХОЗЛ у животных с использованием яичного белка и двухцепочечной РНК
Мышей BALB/c (Jackson Lab, США) интраназально сенсибилизировали четырехразовым введением 10 мкг синтезированной dsRNA полиинозиновой-полицитидиловой кислоты (PolylC, Sigma,USA) и 75 мкг яичного белка (ОА), по отдельности или вместе. Через 10 дней мышам интраназально вводили 50 мкг ОА для индукции астмы. Полученных мышей называли мышами с Th1 астмой. Мышам отрицательного контроля вводили только фосфатный буферный раствор (PBS).
1) Подтверждение характеристик Th1 астмы
Для подтверждения индукции Th1 астмы у мышей, оценивали AHR в ответ на метахолин (фиг.15), количество воспалительных клеток в BAL (фиг.16) и концентрации медиаторов, таких как VEGF, IL-13, IL-5 и IP-10 (фиг.17) в соответствии с методикой, описанной в примере (1-2) и в примере (1-3). На фигуре 15 представлен график, на котором показано изменение AHR в ответ на метахолин после введения аллергена (ОА) и dsRNA по отдельности или вместе. На фигуре 16 представлен график, на котором показано количество всех клеток, количество макрофагов, количество лимфоцитов, количество нейтрофилов и количество эозинофилов в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), измеренное после введения аллергена (ОА) и dsRNA по отдельности или вместе. На фигуре 17 представлен график, на котором показан уровень экспрессии цитокинов (VEGF, IL-13, IL-5 и IP-10) в бронхоальвеолярном лаваже (BAL), наблюдаемый после введения аллергена (ОА) и dsRNA по отдельности или вместе.
Как показано на фигуре 15, AHR в ответ на метахолин была повышена у мышей с астмой, индуцированной ОА и dsRNA.
Как показано на фигуре 16, количество лимфоцитов, нейтрофилов и макрофагов у мышей было повышено, а количество эозинофилов не изменялось.
Как показано на фигуре 17, у мышей был существенно повышен только медиатор IP-10. Вышеуказанные результаты показывают ОА и dsRNA индуцировали не-эозинофильное воспаление дыхательных путей.
Кроме того, для подтверждения того, что IFN-γ индуцирует вышеуказанную Th1 астму, измеряли уровни IgG1 и IgG2a IFN-γ в бронхоальвеолярном лаваже (BAL) (фиг.18 и фиг.19). На фигуре 18 представлен график, на котором показан уровень экспрессии IFN-γ в BAL, когда ОА и dsRNA вводили по отдельности или вместе. На фигуре 19 представлен график, на котором показана продукция антител, специфичных к антигену (IgG1 и IgG2a) в сыворотке, когда ОА и dsRNA вводили по отдельности или вместе.
Как показано на фигуре 18 и фигуре 19, уровень IFN-γ в BAL был по меньшей мере в три раза выше и уровни IgG1 и IgG2 в сыворотке были также повышены. Вышеуказанные результаты показывают, что астма, индуцированная OV и dsRNA, была связана с IFN-γ и антиген-специфическими IgG2a и не была связана с IgE, который вовлечен в Th2 астму.
(2) Подтверждение характеристик ХОЗЛ
Для подтверждения индукции ХОЗЛ у вышеуказанных мышей, измеряли размер и объем легких и концентрацию коллагена (фиг.28, фиг.29 и фиг.30). На фигуре 28D представлен график, на котором показан размер легких у мышей. На фигуре 29D представлен график, на котором показан объем легких у мыши. На фигуре 30D представлен график, на котором показан уровень фиброза в легких трансгенных мышей.
Как показано на фиг.28D, фиг.29D и фиг.30D размер и объем легких и концентрация коллагена была заметно повышена у мышей с Th1 астмой, что делает возможным предположить, что мыши имеют признаки ХОЗЛ. При увеличении размера и объема легких и концентрации коллагена повреждение легочной ткани, деструкция альвеол и эмфизема легких являются характерными симптомами ХОЗЛ, которые также присутствовали у мышей, как показано на фиг.31.
На фигуре 31А представлена фотография патологической ткани легких с деструкцией паренхимы у мышей с Th1 астмой. Как показано на фиг.31, в легких трансгенных по IFN-γ мышей наблюдали увеличение площади альвеол, вызванное деструкцией паренхимы, что является одним из характерных симптомов ХОЗЛ.
Увеличение размера и объема легких и апоптоза в альвеолах наряду с увеличением содержания коллагена подтверждало серьезный фиброз.
На основании вышеприведенных результатов, было подтверждено, что мышей с Th1 астмой можно эффективно использовать в качестве модели ХОЗЛ, демонстрирующей патогенез ХОЗЛ.
6-2. Ингибирование Th1 астмы введением FGF2
Нижеприведенные эксперименты проводили для изучения может ли белок FGF2 ингибировать астму у мышей с Th1 астмой, опосредованной IFN-γ. Мышей, полученных в примере выше (6-1) обозначали как экспериментальная группа мышей с Th1 астмой. Мышам с Th1 астмой, полученным в примере (6-1), и контрольным мышам дикого типа вводили рекомбинантный FGF2 в соответствии с методикой, которую использовали в примере 5. Затем измеряли AHR в ответ на метахолин в обеих группах, следуя методике, описанной в примере (1-2).
На фигуре 27 представлен график, на котором показана AHR, зависимая от дозы метахолина, наблюдаемая у мышей с Th1 астмой и у контрольных мышей дикого типа, после введения rFGF2.
Как показано на фигуре 27, AHR в ответ на метахолин была значительно ниже у мышей, которым вводили rFGF2, чем у мышей, которым не вводили rFGF2.
На фигуре 28 представлена фотография, на которой показано сравнение размера легких у мышей с Th1 астмой, получавших rFGF2 и мышами, не получавших rFGF2.
Как показано на фигуре 28, размер легких мышей, получавших rFGF2 был меньше, чем у мышей с Th1 астмой, не получавших rFGF2.
Вышеуказанные результаты показывают, что FGF2 уменьшает характерные симптомы астмы у трансгенных по IFN-γ мышей, поэтому его можно эффективно использовать для лечения астмы, индуцированной IFN-γ.
(6-3). Ингибирование ХОЗЛ введением FGF2
Нижеприведенные эксперименты проводили для изучения эффекта ингибирования FGF2 на ХОЗЛ. Рекомбинантный FGF2 вводили трансгенным мышам, полученным в примере выше (6-1), и контрольным мышам дикого типа в соответствии с методикой, описанной в примере 5. Затем измеряли размер и объем легких и концентрацию коллагена, которые являются главным показателем ХОЗЛ у мышей (фиг.28, фиг.29 и фиг.30). На фигурах 28А, В, С и D показан размер легких и нормальных мышей и мышей с ХОЗЛ, объем легких показан на графике фиг.29. На фигурах 30А, В, С и D представлены графики, на которых показан уровень фиброза легких у контрольных мышей дикого типа и мышей с ХОЗЛ после введения rFGF2 или при отсутствии его введения. На фигуре 31 представлен ряд фотографий патологической ткани легких, на которых видна деструкция паренхимы у трангенных по IFN-γ мышей в зависимости от наличия или отсутствия FGF2.
Как показано на фиг.28С и D и на фиг.29С и D, после введения rFGF2 объем легких был заметно снижен. Как показано на фиг.30С и D при введении rFGF2 мышам с ХОЗЛ концентрация коллагена также была снижена. Снижение размера и объема легких и снижение содержания коллагена означает, что rFGF2 можно эффективно использовать для лечения ХОЗЛ, как показано на фигуре 31.
На фигуре 31 представлена серия фотографий патологической ткани легких, на которых видна деструкция паренхимы у мышей с ХОЗЛ. Как показано на фиг.31А, увеличение площади альвеол, вызванное апоптозом паренхимы, характерный симптом у пациентов с ХОЗЛ, наблюдали в легких мышей, не получавших rFGF2 (В), в отличие от легких группы, получавших rFGF2 (А), что означает, что введение rFGF2 эффективно для лечения ХОЗЛ.
Вышеуказанные результаты подтвердили, что размер и объем легких, апоптоз в альвеолах и содержание коллагена вовлечены в фиброз у мышей с ХОЗЛ, и введение FGF2 эффективно для лечения таких патологических симптомов.
Пример 7. Сверхэкспрессия IFN-γ на модели астмы у человека
Нижеприведенные эксперименты проводили для изучения может ли астма у человека быть индуцирована сверхэкспрессией IFN-γ и не-эозинофильных клеток. Мокроту получали у 215 взрослых людей, больных астмой, была показана обратимая обструкция дыхательных путей и проведено измерение жизненной емкости легких с использованием спирометрии в соответствии с обычным способом.
Также на бронхи воздействовали метахолином для изучения функции легких (фиг.24). На фигуре 24 представлен график, на котором показано соотношение эозинофилов и не-эозинофилов в мокроте пациента с тяжелой астмой. Как показано на фиг.24, более чем у половины пациентов была подтверждена не-эозинофильная астма, а не-эозинофильная астма. С целью подтверждения факторов, опосредующих астму, измеряли уровень IL-4 и IFN-γ (фиг.25). На фигуре 25 представлен график экспрессии IL-4 и IFN-γ в мокроте больного с астмой в зависимости от тяжести заболевания.
Как показано на фиг.25, экспрессия IFN-γ, которая связана с Th1 астмой, была повышена у пациентов с тяжелой астмой, при этом экспрессия IL-4, которая связана с Th2 астмой, не изменялась. Результаты показывают, что пациенты с астмой, в частности с тяжелой астмой, имеют IFN-γ-опосредованную не-эозинофильную Th1 астму.
Промышленная применимость
Как объяснено выше, терапевтическое средство по настоящему изобретению, содержащее FGF2 в качестве активного ингредиента, может эффективно использоваться для профилактики и лечения фиброза, воспаления дыхательных путей, повышенной реактивности дыхательных путей, перестройки дыхательных путей, астмы и ХОЗЛ. Кроме того, модели астмы и ХОЗЛ у животных, разработанные с использованием яичного белка и двухцепочечной РНК также могут эффективно использоваться для создания терапевтического средства для лечения астмы и ХОЗЛ.
Специалисту в данной области техники понятно, что мысли и специфические варианты осуществления изобретения, концепция и конкретные варианты осуществления, описанные в вышеуказанном описании могут быть легко использованы в качестве основы для модификации или создания других вариантов осуществления изобретения для достижения целей настоящего изобретения. Специалисту в данной области техники также понятно, что такие эквивалентные варианты осуществления изобретения не выходят за рамки и сущность изобретения как указано в прилагаемой формуле изобретения.
Claims (8)
1. Средство для лечения или профилактики астмы, содержащее FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента, причем астма вызвана сверхэкспрессией IL-13 (интерлейкин-13) или сверхэкспрессией IFN-γ (интерферон-γ).
2. Средство для лечения или профилактики астмы по п.1, где FGF2 ингибирует активность IL-13.
3. Средство для лечения или профилактики астмы по п.1, где FGF2 ингибирует активность VEGF.
4. Средство для лечения или профилактики астмы по п.1, где FGF2 ингибирует активность TGF-β1 (трансформирующий фактор роста-(31).
5. Средство для лечения или профилактики хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), содержащее FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента, где хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ) вызвано сверхэкспрессией IFN-γ (интерферон-γ).
6. Ингибитор активности IL-13, содержащий FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента.
7. Ингибитор активности VEGF, содержащий FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента.
8. Ингибитор активности TGF-β1, содержащий FGF2 (фактор роста фибробластов-2) в качестве активного ингредиента.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20040033261 | 2004-05-12 | ||
| KR1020040033261 | 2004-05-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006143763A RU2006143763A (ru) | 2008-06-20 |
| RU2351356C2 true RU2351356C2 (ru) | 2009-04-10 |
Family
ID=35320043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006143763/15A RU2351356C2 (ru) | 2004-05-12 | 2005-05-12 | Средство, содержащее fgf2 в качестве активного ингредиента, для лечения или профилактики астмы и хронических обструктивных заболеваний легких |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8030274B2 (ru) |
| EP (1) | EP1773374A4 (ru) |
| JP (1) | JP4669512B2 (ru) |
| KR (3) | KR100785969B1 (ru) |
| CN (1) | CN1953765B (ru) |
| AU (1) | AU2005239957B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0511030A2 (ru) |
| CA (1) | CA2566400A1 (ru) |
| MX (1) | MXPA06013025A (ru) |
| NZ (1) | NZ551950A (ru) |
| RU (1) | RU2351356C2 (ru) |
| WO (1) | WO2005107794A1 (ru) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20090022908A (ko) * | 2007-08-31 | 2009-03-04 | 동아제약주식회사 | 섬유모세포 성장인자 2를 유효성분으로 함유하는 천식 및만성폐쇄성 폐질환 치료 또는 예방을 위한 흡입용 약제학적조성물 |
| AU2008308697A1 (en) * | 2007-10-01 | 2009-04-09 | Anticancer, Inc. | Imageable rodent model of asthma |
| KR101965396B1 (ko) * | 2008-03-28 | 2019-04-03 | 주식회사 라보 쥬?사 | 피부의 노화 치료제 |
| CN102548554B (zh) | 2009-08-31 | 2014-04-23 | 浦项工科大学校产学协力团 | 通过抑制血管内皮生长因子受体治疗Th17炎症疾病的方法以及用于此方法的药物组合物 |
| KR101427290B1 (ko) | 2012-03-22 | 2014-08-06 | 경희대학교 산학협력단 | 죽여 추출물을 유효성분으로 함유하는 만성폐쇄성 폐질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 |
| CN105451757B (zh) * | 2013-08-09 | 2018-07-20 | 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 | 成纤维细胞生长因子2的新用途 |
| CN106110301A (zh) * | 2016-07-17 | 2016-11-16 | 李静 | 一种改进的治疗哮喘和慢性阻塞性肺病的药物 |
| US11471493B2 (en) * | 2017-09-15 | 2022-10-18 | Cynata Therapeutics Limited | Method for treating allergic airways disease (AAD)/asthma |
| KR102077762B1 (ko) * | 2018-07-27 | 2020-02-17 | 강원대학교산학협력단 | ＰＴＤ―ｂＦＧＦ 또는 ＰＴＤ―ｂＦＧＦ에 의해 생성이 증가된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 만성폐쇄성 폐질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR102301000B1 (ko) | 2018-12-10 | 2021-09-15 | (의료)길의료재단 | 5-하이드록시메틸-2-푸르알데히드 비스(5-포르밀푸르푸릴)아세탈을 포함하는 만성 폐쇄성폐질환 예방 및 치료용 조성물 |
| WO2020159243A1 (ko) | 2019-01-30 | 2020-08-06 | 한양대학교 산학협력단 | 폐 섬유화 질환 진단 또는 치료를 위한, m-csf 또는 g-csf의 이용 |
| CN110476880B (zh) * | 2019-08-26 | 2021-12-03 | 安徽理工大学 | 一种矽肺病小鼠模型的制备方法 |
| KR102166453B1 (ko) | 2020-02-03 | 2020-10-15 | 중앙대학교 산학협력단 | Hapln1을 포함하는 폐질환 예방 또는 치료용 조성물 |
| CN115354020A (zh) * | 2022-08-18 | 2022-11-18 | 江西中洪博元生物技术有限公司 | 大鼠气道平滑肌细胞哮喘模型及其构建方法与应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2108277A1 (en) * | 1992-02-14 | 1993-08-15 | Mitsuru Watanuki | Preparation for the therapy of respiratory tract diseases |
| US20030040496A1 (en) * | 1994-03-15 | 2003-02-27 | Chandler Lois Ann | Methods for halting unwanted cell growth, such as using ligand-directed nucleic acid delivery vehicles |
| JP3703909B2 (ja) * | 1996-05-27 | 2005-10-05 | 三井造船株式会社 | スプレッダ |
| GB0129270D0 (en) * | 2001-12-06 | 2002-01-23 | Pfizer Ltd | Pharmaceutical combination |
| NZ573064A (en) * | 2002-04-04 | 2011-02-25 | Coley Pharm Gmbh | Immunostimulatory G,U-containing oligoribonucleotides |
| CN1267151C (zh) * | 2003-02-27 | 2006-08-02 | 珠海亿胜生物制药有限公司 | 碱性成纤维细胞生长因子膜剂及其制备方法 |
-
2005
- 2005-05-11 KR KR1020050039405A patent/KR100785969B1/ko active IP Right Grant
- 2005-05-12 JP JP2007513067A patent/JP4669512B2/ja active Active
- 2005-05-12 BR BRPI0511030-0A patent/BRPI0511030A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2005-05-12 US US11/568,896 patent/US8030274B2/en active Active
- 2005-05-12 EP EP05764757A patent/EP1773374A4/en not_active Withdrawn
- 2005-05-12 MX MXPA06013025A patent/MXPA06013025A/es not_active Application Discontinuation
- 2005-05-12 AU AU2005239957A patent/AU2005239957B2/en not_active Ceased
- 2005-05-12 RU RU2006143763/15A patent/RU2351356C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2005-05-12 NZ NZ551950A patent/NZ551950A/en unknown
- 2005-05-12 CA CA002566400A patent/CA2566400A1/en not_active Abandoned
- 2005-05-12 CN CN2005800153913A patent/CN1953765B/zh active Active
- 2005-05-12 WO PCT/KR2005/001390 patent/WO2005107794A1/en active Application Filing
-
2007
- 2007-09-21 KR KR1020070096662A patent/KR20070112086A/ko not_active Application Discontinuation
-
2009
- 2009-07-14 KR KR1020090063996A patent/KR20090114341A/ko not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Wang et al., J. Exp.Med, 192: 1587-600, 2000. Zheng et al., J. Clin. Invest, 106: 1081-93, 2000. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ551950A (en) | 2009-06-26 |
| RU2006143763A (ru) | 2008-06-20 |
| AU2005239957B2 (en) | 2008-10-30 |
| AU2005239957A1 (en) | 2005-11-17 |
| CA2566400A1 (en) | 2005-11-17 |
| CN1953765A (zh) | 2007-04-25 |
| MXPA06013025A (es) | 2007-02-12 |
| KR20090114341A (ko) | 2009-11-03 |
| CN1953765B (zh) | 2011-02-09 |
| JP2007537245A (ja) | 2007-12-20 |
| KR100785969B1 (ko) | 2007-12-14 |
| US20080172751A1 (en) | 2008-07-17 |
| EP1773374A1 (en) | 2007-04-18 |
| EP1773374A4 (en) | 2010-08-04 |
| WO2005107794A1 (en) | 2005-11-17 |
| KR20070112086A (ko) | 2007-11-22 |
| US8030274B2 (en) | 2011-10-04 |
| BRPI0511030A2 (pt) | 2009-09-29 |
| KR20060047776A (ko) | 2006-05-18 |
| JP4669512B2 (ja) | 2011-04-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2351356C2 (ru) | Средство, содержащее fgf2 в качестве активного ингредиента, для лечения или профилактики астмы и хронических обструктивных заболеваний легких | |
| Kim et al. | Astrocyte CCL2 sustains immune cell infiltration in chronic experimental autoimmune encephalomyelitis | |
| O’Reilly et al. | Interleukin-6, its role in fibrosing conditions | |
| Duan et al. | An anti-inflammatory role for a phosphoinositide 3-kinase inhibitor LY294002 in a mouse asthma model | |
| Cursiefen et al. | Roles of thrombospondin-1 and-2 in regulating corneal and iris angiogenesis | |
| US6846486B1 (en) | Method of treating allergy by administering an anti-histamine antibody | |
| Ramaprakash et al. | Targeting ST2L potentiates CpG-mediated therapeutic effects in a chronic fungal asthma model | |
| Stern et al. | Epidermal growth factor is critical for intestinal adaptation following small bowel resection | |
| Zipp et al. | Cytokines as emerging regulators of central nervous system synapses | |
| Zhang et al. | Therapeutic efficacy of a co-blockade of IL-13 and IL-25 on airway inflammation and remodeling in a mouse model of asthma | |
| Inoue et al. | High levels of serum IL-18 promote cartilage loss through suppression of aggrecan synthesis | |
| US20130072441A1 (en) | Protease Inhibitors and Preventives or Remedies for Disease | |
| Huang et al. | FGL2 deficiency alleviates maternal inflammation-induced blood-brain barrier damage by blocking PI3K/NF-κB mediated endothelial oxidative stress | |
| Mommsen et al. | Productive capacity of alveolar macrophages and pulmonary organ damage after femoral fracture and hemorrhage in IL-6 knockout mice | |
| AU2004206868A1 (en) | Use of TFF2, or agents inducing TFF2, in the therapy of allergies | |
| JP2009545624A (ja) | 自己免疫またはアレルギー疾患の治療における線形動物由来のシスタチン | |
| Aloe et al. | Nerve growth factor: basic findings and clinical trials | |
| US20210228685A1 (en) | Improved weight loss therapy | |
| Bi et al. | Effects of leukotriene B4 on interleukin-32, interferon-γ and chemokines in rats with rheumatoid arthritis | |
| WO2023222051A1 (zh) | Mif和ripk1在围术期缺血性脑损伤中的应用 | |
| CN109200287A (zh) | 直接或间接调控yb-1磷酸化的物质在制备治疗炎性因子所致疾病的药物方面的应用 | |
| Feng et al. | Serum amyloid A aggravates endotoxin‐induced ocular inflammation through the regulation of retinal microglial activation | |
| JP2007295808A (ja) | 気管支喘息発症モデル動物およびその作製方法、並びにその利用 | |
| Gerdes | The role of the pro-inflammatory cytokine Interleukin-18, its processing enzyme Caspase-1, and potential alternative IL-18-activating pathways in atherosclerosis | |
| ZHANG et al. | NAIBING GU1*, GUANNAN KANG1*, CHANG’E JIN1, YONGJIAN XU1 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120513 |