RU2318019C2 - Днк-вакцина против пролиферирующих эндотелиальных клеток и способы ее применения - Google Patents
Днк-вакцина против пролиферирующих эндотелиальных клеток и способы ее применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2318019C2 RU2318019C2 RU2004129332/13A RU2004129332A RU2318019C2 RU 2318019 C2 RU2318019 C2 RU 2318019C2 RU 2004129332/13 A RU2004129332/13 A RU 2004129332/13A RU 2004129332 A RU2004129332 A RU 2004129332A RU 2318019 C2 RU2318019 C2 RU 2318019C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- dna
- mammal
- seq
- tumor
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 101
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 36
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 46
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 102000016549 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 22
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 18
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 101100381481 Caenorhabditis elegans baz-2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 101100372762 Rattus norvegicus Flt1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 claims abstract description 5
- BJHCYTJNPVGSBZ-YXSASFKJSA-N 1-[4-[6-amino-5-[(Z)-methoxyiminomethyl]pyrimidin-4-yl]oxy-2-chlorophenyl]-3-ethylurea Chemical compound CCNC(=O)Nc1ccc(Oc2ncnc(N)c2\C=N/OC)cc1Cl BJHCYTJNPVGSBZ-YXSASFKJSA-N 0.000 claims abstract 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 45
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 claims description 34
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 34
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 23
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 19
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 9
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 9
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 9
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 6
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 claims description 6
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 2
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 claims description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 2
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 claims description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 claims description 2
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 claims description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 2
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 claims description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 57
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 42
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 14
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 108010041308 Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 abstract 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 39
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 12
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 11
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 10
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 10
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 8
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 7
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 6
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 6
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 6
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 6
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 6
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 6
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 5
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 5
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 4
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 3
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 3
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 3
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 3
- -1 Second Edition Proteins 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 102000055590 human KDR Human genes 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 2
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 102000016663 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-3 Human genes 0.000 description 2
- 108010053100 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-3 Proteins 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940124676 vascular endothelial growth factor receptor Drugs 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 101100481408 Danio rerio tie2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 101100372766 Mus musculus Kdr gene Proteins 0.000 description 1
- 101100481410 Mus musculus Tek gene Proteins 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 208000034038 Pathologic Neovascularization Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102100040681 Platelet-derived growth factor C Human genes 0.000 description 1
- 101000852966 Rattus norvegicus Interleukin-1 receptor-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 229940100514 Syk tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 108010073925 Vascular Endothelial Growth Factor B Proteins 0.000 description 1
- 108010073923 Vascular Endothelial Growth Factor C Proteins 0.000 description 1
- 108010073919 Vascular Endothelial Growth Factor D Proteins 0.000 description 1
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 description 1
- 102100038217 Vascular endothelial growth factor B Human genes 0.000 description 1
- 102100038232 Vascular endothelial growth factor C Human genes 0.000 description 1
- 102100038234 Vascular endothelial growth factor D Human genes 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003975 animal breeding Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008206 lipophilic material Substances 0.000 description 1
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000010046 negative regulation of endothelial cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N peptide a Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCCCC[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C/C=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C\C1=CC=CC=C1 LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010017992 platelet-derived growth factor C Proteins 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000021625 positive regulation of cell division Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 125000004417 unsaturated alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
ДНК-вакцина, эффективная для ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток, включает ДНК-конструкцию, оперативно кодирующую рецепторный белок фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF), выбранный из группы, состоящей из VEGFR-2 (KDR; SEQ ID NO: 2), VEGFR-1 (Flt-1; SEQ ID NO: 4) или Flk-1 (мышиный гомолог KDR, SEQ ID NO: 6) и их функционального эквивалента, гомологичного приблизительно на 80%. Кодирующие рецепторные белки ДНК-последовательности представлены в SEQ ID NO: 1, 3 и 5 в тексте описания. Описаны способы применения ДНК-вакцин для ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток у млекопитающего путем введения ДНК-вакцины для стимуляции иммунного ответа в отношении пролиферирующих эндотелиальных клеток, в частности, для ингибирования ангиогенеза и опухолевого роста. Описана также готовая форма ДНК-вакцины с информацией, необходимой для индивидуального введения пациенту. В результате использования ДНК-вакцины по изобретению достигается эффект антиангиогенеза и последующее снижение роста и распространения опухоли. 5 н. и 9 з.п. ф-лы, 11 ил., 5 табл.
Description
ПРАВИТЕЛЬСТВЕННЫЕ ПРАВА
Настоящее изобретение было сделано при поддержке правительства, в соответствии с контрактом No. 5-70373-COLON, Национальными Институтами Здоровья. Правительство обладает определенными правами на данное изобретение.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Данное изобретение связано с вакцинами дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), кодирующей соответствующие молекулы, эффективные для получения иммунного ответа против пролиферирующих эндотелиальных клеток. Более конкретно, настоящее изобретение связано с вакцинами ДНК, кодирующими рецептор фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF).
Данное изобретение связано также со способами применения ДНК-вакцин для ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток сосудов, опухолевого роста и ангиогенеза.
ОСНОВА СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Вакцины используются для обеспечения долговременной защиты против целого ряда болезненных состояний путем весьма ограниченного введения профилактического агента, который стимулирует иммунную систему организма к разрушению болезнетворных патогенов прежде, чем они смогут начать пролиферировать и вызвать патогенный эффект. Различные подходы к вакцинам и вакцинациям описаны у Bernard R. Glick и Jack J. Pasternak, Molecular Biotechnology, Principles and Applications of Recombinant ДНК, Second Edition, ASM Press pp. 253-276 (1998).
Вакцинация является средством индуцирования собственной системы организма, в результате чего организм сможет распознать и разрушить инфицирующий агент прежде, чем тот вызовет патологическую реакцию. Обычно вакцины являются либо живыми, но аттенюированными инфекционными агентами (вирусами или бактериями), либо убитой формой этого агента. Вакцина, состоящая из живых бактерий или вирусов, должна быть непатогенной. Обычно бактериальную или вирусную культуру аттенюируют (ослабляют) путем физической или химической обработки. Полученный агент, хоть и не является вирулентным, однако все еще способен вызывать иммунную реакцию у субъекта, обработанного такой вакциной.
Иммунный ответ вызывается антигенами, являющимися либо специфическими макромолекулами, либо инфекционными агентами. Такие антигены обычно являются либо белками, полисахаридами, липидами, либо гликолипидами, которые распознаются как "чужеродные" лимфоцитами, которые известны как B-клетки и T-клетки. Выдерживание (экспозиция) обоих типов лимфоцитов с антигенами вызывает быстрый ответ в виде стимуляции деления клеток и их дифференцировки, что приводит к образованию клонов экспонированных лимфоцитов. B-клетки продуцируют плазматические клетки, которые, в свою очередь, продуцируют белки, называемые антителами (Ab), которые выборочно связываются с антигенами, присутствующими на инфекционном агенте, таким образом нейтрализуя, или инактивируя, патоген (гуморальный иммунитет). В некоторых случаях для развития B-клеточного ответа требуется помощь со стороны CD4-хелперных Т-клеток.
Специализированный Т-клеточный клон, который образуется в ответ на экспонирование с антигеном, представляет собой цитотоксические Т-лимфоциты (CTL), которые способны связываться с патогенами и тканями, на которых присутствует антиген, и вызывать их элиминацию (клеточно-опосредованный или клеточный иммунитет). В некоторых случаях антигенпредставляющие клетки (АПК), такие как дендритные клетки, обволакивают патоген или иную чужеродную клетку путем эндоцитоза. Затем АПК подвергают эти антигены процессингу и выставляют их на своей поверхности, представляя в виде комплекса из молекулы гистосовместимости и пептида T-клеточному рецептору (TCR) на поверхности цитотоксических лимфоцитов CTL, вызывая таким образом стимуляцию иммунного ответа.
Гуморальный иммунитет, характеризующийся образованием специфических анител, обычно является более эффективным против острых бактериальных инфекций и повторных вирусных инфекций, тогда как клеточно-опосредованный иммунитет является наиболее эффективным против вирусной инфекции, хронической внутриклеточной бактериальной инфекции и грибковой инфекции. Клеточный иммунитет также известен в качестве защиты против рака, и он же ответственен за отторжение органных трансплантатов.
Антитела против антигенов, связанных с предшествующими инфекциями, остаются детектируемыми в крови в течение долгого периода времени, что позволяет, таким образом, определить факт осуществления прежнего, более раннего, контакта с патогеном. При повторной встрече с тем же самым патогеном иммунная система эффективно предотвращает повторное инфицирование тем же самым патогеном путем элиминации патогенного агента еще до того, как он начнет пролиферировать и продуцировать патогенную реакцию.
Тот же самый иммунный ответ, который мог бы возникнуть под действием патогена, может иногда быть вызван также и непатогенным агентом, который присутствует на том же самом антигене, что и патоген. Таким образом, субъект может быть защищен от дальнейшего контакта с патогеном без предварительной борьбы с ним.
Однако не все инфекционные агенты могут быть успешно культивированы и инактивированы, как это требуется для образования вакцин. Современные технологии рекомбинантных ДНК создали возможность конструирования новых вакцин в попытке обойти это ограничение. Можно создать инфекционные агенты, в которых отсутствуют патогенные гены, что позволяет, таким образом, использовать невирулентные формы организмов в качестве вакцины. Возможно также сконструировать относительно непатогенный организм, такой как E. coli, для представления антигенов клеточной поверхности патогенного носителя. Иммунная система субъекта, обработанного таким трансформированным носителем, "обманным путем" начинает продуцировать антитела против указанного патогена. Антигенные белки патогенного агента могут быть сконструированы и экспрессированы у непатогенных видов, и эти антигенные белки могут быть выделены и очищены для получения "субъединичной вакцины". Субъединичные вакцины имеют преимущества, связанные с их стабильностью, надежностью, а также с тем, что они хорошо охарактеризованы химически; однако их продукция может быть чрезвычайно дорогостоящей.
Новый подход к вакцинам, в общем называемый генетической иммунизацией, появился в последние годы. В этом подходе ген, кодирующий антиген патогенного агента, оперативно встроен в клетку субъекта, который подлежит иммунизации. Обработанные клетки трансформированы и продуцируют антигенные белки патогена. Затем эти продуцируемые in vivo антигены запускают в организме хозяина требуемый иммунный ответ. Генетический материал, используемый в таких генетических вакцинах, может являться либо ДНК-, либо РНК-конструктом. Часто полинуклеотид, кодирующий антиген, вводят в комбинации с другими промоторными полинуклеотидными последовательностями для улучшения встраивания, репликации или экспрессии гена.
ДНК-вакцины, кодирующие антигенные гены, могут быть введены в хозяйские клетки субъекта с помощью различных экспрессирующих систем. Такие экспрессирующие системы включают в себя экспрессирующие системы прокариот, млекопитающих и дрожжей. Например, одним из подходов является использование вирусного вектора, такого как вирус коровьей оспы, включающего в себя новый генетический материал, для инокуляции в хозяйские клетки. Альтернативно, генетический материал может быть встроен в вектор или может быть напрямую доставлен в хозяйские клетки в виде "голого" полинуклеотида, т.e. просто в виде очищенной ДНК. Кроме того, ДНК может быть стабильно трансфицирована в аттенюированные бактерии, такие как Salmonella typhimurium. Когда пациента перорально вакцинируют трансформированной Salmonella, эти бактерии транспортируются к Пейеровым бляшкам в пищеварительном канале (т.e. вторичным лимфоидным тканям), которые затем стимулируют иммунную систему.
ДНК-вакцины предоставляют возможность иммунизировать против болезненных состояний, которые не вызываются традиционными патогенами, таких как генетические заболевания и рак. Обычно в генетической противораковой вакцине антигены к специфическому типу опухолевой клетки должны быть выделены, а затем введены в вакцину. Эффективная общая вакцина против ряда раковых заболеваний может, таким образом, послужить основой для развития целого ряда индивидуальных вакцин для каждого типа раковых клеток, против которых должна быть произведена иммунизация.
Один из общих подходов для лечения опухолей включает в себя введение пациенту с растущими опухолями соединений, ингибирующих ангиогенез. Ангиогенезом называется процесс образования новых капилляров и кровеносных сосудов. Ангиогенез играет важную роль в период эмбрионального развития, роста тканей, репарации тканей и регенерации тканей. Помимо этих нормальных и основополагающих процессов, ангиогенез вовлечен также и во многие аномальные патологические процессы, такие как опухолевый рост, опухолевое метастазирование и заболевания сосудов глаза, такие как диабетическая ретинопатия.
Ангиогенез вовлечен в целый ряд взаимозависимых процессов, включая (a) активацию сосудистых эндотелиальных клеток, (b) разрушение белков клеточного матрикса под действием эндотелиальных клеток, экспрессирующих протеиназную активность, (c) миграцию эндотелиальных клеток к сайтам потенциального роста, (d) пролиферацию эндотелиальных клеток, (e) образование протоков в результате дифференцировки эндотелиальных клеток. Каждый из этих процессов находится под влиянием различных промоторных веществ, таких как фактор роста фибробластов (FGF), фактор роста, полученный из тромбоцитов (PDGF), и факторы роста сосудистого эндотелия (VEGF). Факторы роста сосудистого эндотелия (коллективно обозначаемые VEGF) играют ключевую роль в процессах роста и дифференцировки. VEGF действует путем связывания с рецептором тирозиновых протеинкиназ, присутствующим в мембранах эндотелиальных клеток, который, в свою очередь, инициирует каскад реакций передачи сигнала, которые стимулируют клеточный рост.
Ингибирование патологического ангиогенеза было предложено в качестве подхода для лечения опухолей. См., например, Folkman et al. Science, 221, 719 (1983). Основной концепцией такого лечения является то, что, поскольку опухоли, для того чтобы расти, нуждаются в прорастании кровеносных сосудов, ингибирование образования кровеносных сосудов путем введения соединений, ингибирующих ангиогенез, будет предотвращать опухолевый рост путем истощения опухоли, не снабжаемой кровью. Недостатком этого подхода является то, что ингибиторы ангиогенеза, для того чтобы предотвратить опухолевый рост, должны вводиться в относительно непрерывном режиме. Прекращение введения и доставки инибитора может привести к возобновлению опухолевого роста. Вакцина, эффективная для ингибирования ангиогенеза, могла бы быть весьма привлекательным превентивным средством против образования опухоли.
Существует неослабевающая потребность в вакцине с широким спектром эффективности для иммунизации против ангиогенеза, которая могла бы также ингибировать рост различных опухолей, чтобы не было необходимости нацеливания ее на специфические опухолевые антигены. Настоящее изобретение удовлетворяет указанным требованиям.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ДНК-вакцина, эффективная для ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток, включает в себя ДНК-конструкцию, которая оперативно кодирует белок рецептора фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF). ДНК-вакцина включает в себя полинуклеотид, который кодирует белок, осуществляющий рецепцию VEGF, такой как VEGFR-2 (KDR; последовательность SEQ ID NO: 2), VEGFR-1 (Flt-1; последовательность SEQ ID NO: 4) и Flk-1 (последовательность SEQ ID NO: 6; мышиный гомолог KDR), например ДНК-последовательности SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO 5 соответственно. Такая вакцина может включать в себя линейную нуклеиновую кислоту, такую как очищенный ДНК-конструкт или ДНК-конструкт, встроенный в плазмидный вектор. ДНК-вакцины согласно изобретению стимулируют образование цитотоксических лимфоцитов (CTL), активных против пролиферирующих эндотелиальных клеток, которые в повышенном количестве экспрессируют VEGFR-2.
Эндотелиальные клетки образуют выстилку ткани сосудов у млекопитающих. Пролиферация эндотелиальных клеток является ключевым процессом ангиогенеза. Вакцины согласно изобретению обеспечивают способ обеспечения долговременного ингибирования ангиогенеза в организме, обработанном такой вакциной, путем стимуляции иммунного ответа против пролиферирующих эндотелиальных клеток. На непролиферирующих эндотелиальных клетках, таких как выстилка сформированных кровеносных сосудов, представлены незначительные количества антигенов рецептора VEGF, и, таким образом, эти клетки остаются незатронутыми цитотоксическими лимфоцитами, которые продуцируются в ответ на введение вакцины.
В методическом аспекте согласно изобретению ДНК-вакцина используется для обеспечения долговременного ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток у вакцинированного пациента. В одном из методических аспектов согласно изобретению ДНК-вакцину, включающую в себя полинуклеотидную конструкцию, оперативно кодирующую белок рецептора VEGF, вводят перорально пациенту, в случае необходимости ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток, в количестве, достаточном для стимуляции иммунного ответа против пролиферирующих эндотелиальных клеток.
Настоящее изобретение обеспечивает также способ ингибирования ангиогенеза у пациентов, вакцинированных ДНК-вакциной. При таком воплощении способа согласно изобретению пациенту, страдающему заболеванием, связанным с ангиогенезом, вводят количество вакцины, которое вызывает иммунный ответ, причем вакцина включает в себя ДНК-конструкцию, оперативно кодирующую белок рецептора VEGF.
При другом воплощении способа согласно изобретению опухолевый рост ингибируется в результате вакцинирования пациента вакциной ДНК. При таком воплощении способа пациенту, у которого имеется растущая опухоль, вводят эффективное количество вакцины, которое вызывает иммунный ответ, причем эта вакцина включает в себя ДНК-конструкцию, оперативно кодирующую белок рецептора VEGF. Вакцинация приводит к остановке роста опухоли. Деструкция пролиферирующих эндотелиальных клеток под действием иммунных клеток пациента предотвращает васкуляризацию опухоли, что по существу приводит к истощению опухоли и ее гибели.
В методических аспектах согласно изобретению, ДНК-вакцины могут быть введены энтерально, например, путем перорального введения или парентерально, например, путем инъекции или внутривенной инфузии.
Вакцины согласно изобретению используются для лечения или предотвращения целого ряда болезненных состояний. Например, у пациентов, страдающих от рака, диабетической ретинопатии и тому подобного, может наступить улучшение под действием иммунизации вакцинами согласно изобретению.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг. 1 приведена последовательность ДНК, кодирующая KDR человека, SEQ ID NO:1;
на фиг. 2 приведена белковая последовательность KDR человека, SEQ ID NO:2;
на фиг. 3 приведена последовательность ДНК, кодирующая Flt-1 человека, SEQ ID NO:3;
на фиг. 4 приведена белковая последовательность Flt-1 человека, SEQ ID NO:4;
на фиг. 5 приведена последовательность ДНК, кодирующая Flk-1 мыши, SEQ ID NO: 5;
на фиг. 6 приведена белковая последовательность Flt-1 мыши, SEQ ID NO: 6;
фиг. 7 представляет собой иллюстративное представление мышиных легких с различной степенью опухолевого поражения, составляющего от > 50% поражения (отмечено цифрой 3) до < 10% поражения (отмечено цифрой 1);
фиг. 8 представляет собой графическое представление данных, показывающих, что у мышей, вакцинированных ДНК-вакциной согласно изобретению (сплошная, толстая черная линия), которым путем внутривенной инъекции переносили клетки карциномы кишечника CT-26, наблюдали значительное снижение смертности по сравнению с двумя контрольными группами мышей (необработанные вакциной (наивные) мыши: сплошная тонкая линия; мыши, обработанные контрольной вакциной: пунктирная линия);
фиг. 9 представляет собой графическое представление данных, свидетельствующих о супрессии опухолевого роста карциномы легких Льюиса D121 у мышей, вакцинированных ДНК-вакциной согласно изобретению (pcDNA3.1-FLK-1), по сравнению с двумя контрольными группами мышей;
фиг. 10 представляет собой графическое представление данных, свидетельствующих о супрессии опухолевого роста меланомы B16 у мышей, вакцинированных ДНК-вакциной согласно изобретению (•), по сравнению с контрольной группой (o); и
фиг. 11 представляет собой графическое представление данных, свидетельствующих о повышающей регуляции CD25-, CD69- и CD2-положительных CD8+-T-клеток у мышей, вакцинированных ДНК-вакциной согласно изобретению, по сравнению с контрольной группой мышей.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВОПЛОЩЕНИЙ
ДНК-вакцина, эффективная для ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток, включает в себя ДНК-конструкцию, которая оперативно кодирует рецепторный белок фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF). Используемый здесь в описании и в прилагаемой формуле изобретения термин "ДНК-конструкция", или "ДНК-конструкт", означает искусственную структуру ДНК, которая может быть транскрибирована в клетках-мишенях. Эта конструкция может включать в себя линейную нуклеиновую кислоту, такую как очищенная ДНК или, предпочтительно, ДНК, встроенная в плазмидный вектор. ДНК может также быть встроена в вирусный или бактериальный вектор, предпочтительно аттенюированный вирусный или бактериальный вектор, который не является патогенным. Подходящими являются такие ДНК, которые кодируют рецепторный белок VEGF, такой как VEGFR-2 (KDR; SEQ ID NO: 2), VEGFR-1 (Fit-1; SEQ ID NO: 4) и Flk-1 (SEQ ID NO: 6), например последовательности ДНК SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO 5 соответственно.
Было идентифицировано пять подтипов VEGF, включая VEGF-1 (известный также как VEGF-A), VEGF-2 (известный также как VEGF-C), VEGF-B, VEGF-D и VEGF-E. См., например, патент США No. 6,235,713 выданный на имя Achen et al., и цитируемые здесь ссылки. Рецепторы VEGF представляют собой белковые тирозинкиназы, специфичные в отношении эндотелиальных клеток. Было идентифицировано несколько рецепторных белковых тирозинкиназ, специфичных в отношении эндотелиальных клеток, включая Flt-1 (рецептор 1 VEGF; VEGFR-1), KDR (VEGFR-2), Flk-1 (мышиный гомолог KDR), Flt-4 (VEGFR-3), Tie, Tie-2 и Tek, из которых несколько представляют собой рецепторы VEGF.
ДНК-вакцины согласно изобретению стимулируют образование цитотоксических лимфоцитов, CTL, которые являются активными против пролиферирующих эндотелиальных клеток, которые экспрессируют повышенные количества VEGFR-2. Поскольку рецепторы VEGF в существенном количестве экспрессированы только на поверхности пролиферирующих эндотелиальных клеток, цитотоксические лимфоциты, которые образуются в ответ на введение вакцины, будут в основном нацелены только на те ткани, в которых происходит активный ангиогенез (например, васкуляризация). Непролиферирующие эндотелиальные клетки, такие как клетки, выстилающие сформированные кровеносные сосуды, являются в основном лишенными антигенов рецептора VEGF и являются, таким образом, не подверженными действию CTL, продуцируемых под действием вакцинации.
В предпочтительном воплощении ДНК-вакцина включает в себя полинуклеотидную последовательность, которая оперативно кодирует белок рецептора VEGF. Эта вакцина может стимулировать активацию «наивных» T-клеток, как напрямую, так и опосредованно, через вмешательство дендритных клеток.
Здесь под термином "иммунитет" подразумевается долговременная иммунологическая защита против вирулентной формы инфекционного агента или опухолевого антигена. Под термином "иммунизация" подразумевается профилактическое контактирование с антигеном патогенного агента, полученного из невирулентного источника, что приводит к развитию у субъекта, подвергнутого иммунизации, иммунитета против патогена.
ДНК-конструкция согласно изобретению предпочтительно включает в себя нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок рецептора VEGF, оперативно связанную с регуляторными элементами, необходимыми для экспрессии гена.
Используемые ДНК-конструкции предпочтительно включают в себя регуляторные элементы, необходимые для экспрессии нуклеотидов. Такие элементы включают в себя, например, промотор, инициирующий кодон, стоп-кодон и сигнал полиаденилирования. Кроме того, для экспрессии последовательности, которая кодирует иммуногенный белок-мишень, часто требуются энхансеры. Как известно в данной области, предпочтительно, чтобы эти элементы были оперативно связаны с последовательностью, которая кодирует нужный белок. Предпочтительно выбирают такие регуляторные элементы, которые оперативны у видов, которым эти регуляторные элементы предполагается вводить.
Инициирующие кодоны и стоп-кодоны предпочтительно включаются как часть нуклеотидной последовательности, которая кодирует белок рецептора VEGF в генетической вакцине согласно изобретению. Инициирующий и терминирующий кодоны должны быть в одной рамке считывания с кодирующей последовательностью.
Промоторы и сигналы полиаденилирования, включенные в вакцину согласно изобретению, предпочтительно отбираются таким образом, чтобы они были функциональными в клетках субъекта, которого предполагается иммунизировать.
Примеры промоторов, используемых в вакцинах согласно изобретению, особенно при получении генетических вакцин для человека, включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, промоторы из обезьяньего вируса 40 (SV40), промотор вируса опухоли молочной железы мыши (MMTV), промотор вируса иммунодефицита человека (HIV), такой как промотор длинного концевого повтора (LTR) вируса иммунодефицита человека, вируса Молони, цитомегаловируса (CMV), такого как немедленный ранний промотор CMV, вируса Эпштейна-Барр (EBV), вируса саркомы Рауса (RSV), а также промоторы из других человеческих генов, таких как человеческий актин, человеческий миозин, человеческий гемоглобин, человеческий креатин мышц и человеческий металлотионеин.
Примеры сигналов полиаденилирования, используемые в вакцинах согласно изобретению, особенно при получении генетических вакцин для человека, включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, сигналы полиаденилирования SV40 и сигналы полиаденилирования LTR.
Помимо регуляторных элементов, необходимых для экспрессии ДНК, в молекулу ДНК могут быть включены также и другие элементы. Такие дополнительные элементы включают в себя энхансеры. Энхансером может быть, например, человеческий актин, человеческий миозин, человеческий гемоглобин, человеческий креатин мышц и вирусные энхансеры, такие как энхансеры из CMV, RSV и EBV.
Регуляторные последовательности и кодоны обычно зависят от вида, поэтому в целях максимального увеличения продукции белка, регуляторные последовательности и кодоны предпочтительно отбирают таким образом, чтобы они были максимально эффективными у видов, подлежащих иммунизации. Рядовой специалист в данной области может получить конструкции ДНК, которые будут функциональными у субъекта данного вида.
ДНК-конструкции вакцин согласно изобретению могут представлять собой "голые" ДНК, как определено в публикации Restifo et al. Gene Therapy 7, 89-92 (2000), соответствующие фрагменты которой включены в данное описание в виде ссылки. Альтернативно ДНК могут быть оперативно встроены в вектор. Полезные векторы для доставки включают в себя биодеградируемые микрокапсулы, иммуностимулирующие комплексы (ISCOM) или липосомы и полученные генно-инженерным путем аттенюированные живые векторы, такие как вирусы или бактерии.
Примеры соответствующих аттенюированных живых бактериальных векторов, как известно в данной области, включают в себя Salmonella typhimurium, Salmonella typhi, Shigella, Bacillus, Lactobacillus, Bacille Calmette-Guerin (BCG), Escherichia coli, Vibrio cholerae, Campylobacter или любой другой подходящий бактериальный вектор. Способы трансформации живых бактериальных векторов экзогенными ДНК-конструкциями хорошо известны в данной области. См., например, Joseph Sambrook and David W. Russell, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (2001).
Предпочтительные вирусные векторы включают в себя бактериофаги, вирус герпеса, аденовирус, полиовирус, вирус коровьей оспы и Avipox-вирус. Способы трансформации вирусных векторов экзогенными ДНК-конструкциями также хорошо известны в данной области. См., например, Sambrook and Russell, выше.
Липосомные векторы представляют собой униламеллярные или мультиламеллярные везикулы, имеющие образованную липофильным материалом мембранную часть и внутреннюю водную часть. В настоящем изобретении водная часть используется для того, чтобы в ней содержался полинуклеотидный материал, который должен быть доставлен к клеткам-мишеням. Обычно предпочтительно, чтобы образующие липосому материалы имели катионную группу, такую как группа четвертичного аммония, и одну или более липофильных групп, таких как насыщенные или ненасыщенные алкильные группы, имеющие приблизительно от 6 и приблизительно до 30 атомов углерода. Группа подходящих материалов описана в Европейской патентной публикации No. 0187702 и дополнительно обсуждается в патенте США No. 6228844, выданном на имя Wolff et al., описание соответствующей части которого включено здесь посредством ссылки. Многие другие подходящие образующие липосому катионные липидные соединения описаны в литературе. См., например, L. Stamatatos, et al., Biochemistry 27: 3917-3925 (1988); и H. Eibl, et al., Biophysical Chemistry 10: 261-271 (1979). Альтернативно можно использовать микросферы, такие как биодеградируемые полиактид-когликолидные микросферы. Конструкция нуклеиновой кислоты инкапсулируется в липосомы или микросферы или иным способом образует с ними комплекс для доставки нуклеиновой кислоты к ткани, как это практикуется в данной области.
Методические аспекты согласно изобретению включают в себя стадию введения полинуклеотидов ДНК в ткань млекопитающего, такого как человек. В некоторых предпочтительных воплощениях полинуклеотиды ДНК вводят перорально, внутримышечно, интраназально, внутрибрюшинно, подкожно, внутрикожно или местно.
В методических аспектах согласно изобретению ДНК-вакцина может быть использована для обеспечения долговременного ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток у пациента, которому введена вакцина. В одном из предпочтительных воплощений данного способа ДНК-вакцина, содержащая полинуклеотидную конструкцию, оперативно кодирующую рецепторный белок VEGF, вводится млекопитающему в случае необходимости ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток в количестве, которого достаточно для того, чтобы вызвать иммунный ответ против пролиферирующих эндотелиальных клеток.
Настоящим изобретением обеспечивается также способ ингибирования ангиогенеза у млекопитающего, которому введена ДНК-вакцина. В таком воплощении способа вакцина, содержащая ДНК-конструкцию, оперативно кодирующую рецепторный белок VEGF, вводится млекопитающему, страдающему от связанного с ангиогенезом заболевания, в количестве, которого достаточно для того, чтобы вызвать иммунный ответ против пролиферирующих эндотелиальных клеток.
В другом методическом аспекте согласно изобретению опухолевый рост ингибируется путем введения млекопитающему ДНК-вакцины. В таком методическом аспекте вызывающее иммунный ответ количество вакцины, содержащей конструкцию ДНК, оперативно кодирующую рецепторный белок VEGF, вводится млекопитающему, у которого наблюдается опухолевый рост. Обработка такой вакциной приводит к остановке опухолевого роста под действием иммунизации млекопитающего против пролиферирующих эндотелиальных клеток. Разрушение пролиферирующих эндотелиальных клеток под воздействием иммунной системы млекопитающего предотвращает или по меньшей мере минимизирует васкуляризацию опухоли.
В методических воплощениях согласно изобретению вакцины могут быть введены энтерально, например, путем перорального введения или путем внутримышечной инъекции. В предпочтительном варианте осуществления млекопитающее, которому вводится вакцина согласно изобретению, является человеком.
У пациента, страдающего от злокачественной опухоли, такой как карцинома легкого или кишечника, или же от опухолей предстательной железы, диабетической ретинопатии и тому подобного, может настать улучшение от иммунизации вакцинами согласно изобретению.
Вакцины согласно изобретению предпочтительно составлены с фармацевтически приемлемыми носителями или эксципиентами, такими как вода, физиологический раствор, декстроза, глицерин и тому подобное, а также с их комбинациями. Вакцины могут содержать также и дополнительные вещества, такие как увлажняющие агенты, эмульсифицирующие агенты, буферы и тому подобное.
Вакцины согласно изобретению предпочтительно вводят млекопитающему, такому как человек, перорально, в виде раствора или суспензии в фармацевтически приемлемом носителе, с концентрацией ДНК в области приблизительно от 1 до 10 микрограммов на миллилитр. Приблизительная дозировка будет зависеть от конкретного субъекта, которого предстоит вакцинировать, и отчасти - от практикующего медицинского работника, производящего вакцинацию или назначающего введение вакцины.
Вакцины согласно изобретению могут быть запакованы в соответствующие стерилизованные контейнеры, такие как ампулы, бутылки или флаконы, либо во многократной, либо в единичной лекарственной формах. Предпочтительно контейнеры запечатываются герметично после их заполнения вакцинным препаратом. Предпочтительно, когда вакцины упакованы в контейнеры, которые снабжены надписью, позволяющей идентифицировать вакцину, а также несущей информацию в виде этикетки правительственной организации, такой как Управление по контролю за продуктами и лекарствами США, отражающую факт одобрения и защиты применения вакцины соответствующими законами, информацию о дозировке и т.д. Этикетка предпочтительно содержит информацию о вакцине, которая используется для профессионального введения вакцины для поддержания здоровья пациента. Предпочтительно также, чтобы на упаковке были напечатаны информационные материалы относительно введения вакцины, инструкции, указания и любые требуемые необходимые предостережения.
Предпочтительно, чтобы вакцины согласно изобретению содержали конструкции ДНК, которые кодируют один или более рецепторных белков VEGF, таких как тирозинкиназа, специфичная в отношении эндотелиальных клеток, включая, например, Flt-1, KDR, Flk-1 и их функциональные гомологи. Функциональные гомологи предпочтительно имеют по меньшей мере 80% гомологию с вышеуказанными рецепторными белками VEGF.
Аминокислотные последовательности рецепторных белков VEGF описаны в данной области так же, как и последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие эти белки. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая KDR (фиг. 1, SEQ ID NO: 1), и соответствующая ей белковая последовательность (фиг. 2, SEQ ID NO: 2) были опубликованы Yu et al. в базе данных EMBL Европейского Института Биоинформатики, Wellcome Trust Genome Campus, Hinxton, Cambridge CB10 1SD, UK (регистационный номер EMBL следующий - EMBL: AF063658), описание которой включено в настоящее описание в виде ссылки. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая Flt-1 (фиг. 3, SEQ ID NO: 3), и соответствующая ей белковая последовательность (фиг. 4, SEQ ID NO: 4) были опубликованы Yu et al. в базе данных EMBL Европейского Института Биоинформатики, Wellcome Trust Genome Campus, Hinxton, Cambridge CB10 1SD, UK (регистационный номер EMBL следующий - EMBL: AF063657), описание которой включено в настоящее описание в виде ссылки. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая Flk-1, и соответствующая ей белковая последовательность были опубликованы Mathews et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1991, 88: 9026-9030, а структуры были откорректированы Quinn et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1991, 90: 7533-7537, релевантные описания которой включены в данное описание в виде ссылки. Правильная последовательность ДНК Flk-1 приведена на фиг. 5 как SEQ ID NO: 5, а откорректированная белковая последовательность Flk-1 приведена на фиг. 6 как SEQ ID NO: 6.
Из-за вырожденности генетического кода другие последовательности ДНК, которые кодируют по существу такую же самую или функционально эквивалентную аминокислотную последовательность рецепторных белков VEGF, таких как KDR, Flk-1 и Flt-1, могут быть использованы при практиковании настоящего изобретения. Такие последовательности ДНК включают в себя такие последовательности, которые способны гибридизоваться также и с последовательностями рецептора VEGF. Предпочтительно функционально эквивалентные гомологи ДНК рецепторных белков VEGF имели по меньшей мере 80% гомологию с ДНК, кодирующей указанные выше рецепторные белки VEGF.
Измененные последовательности ДНК, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, включают в себя делеции, добавки или замены различных нуклеотидных остатков, что в результате приводит к образованию последовательности, которая кодирует тот же самый или функционально эквивалентный продукт гена. Как таковой этот продукт гена может содержать внутри рецепторных последовательностей VEGF делеции, добавки или замены аминокислотных остатков, которые приводят к "молчащим" изменениям, и, таким образом, к продуцированию функционально эквивалентных рецепторных белков VEGF. Такие аминокислотные замены могут быть произведены на основе сходства в полярности, заряде, растворимости, гидрофобности, гидрофильности и/или амфипатической природы вовлеченных остатков. Например, отрицательно заряженные аминокислоты включают в себя аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту; положительно заряженные аминокислоты включают в себя лизин и аргинин; аминокислоты с незаряженными полярными боковыми группами, имеющие сходные величины гидрофильности, включают в себя следующие: лейцин, изолейцин, валин; глицин, аланин; аспарагин, глутамин; серин, треонин; фенилаланин, тирозин. Здесь термин "функционально эквивалентный рецептор VEGF" относится к рецептору, который связывается с VEGF или его фрагментом, но не обязательно с той же самой аффинностью связывания, что и с его нативными аналогами KDR, Flk-1 или Flt-1.
Последовательности ДНК согласно изобретению могут быть получены генноинженерным путем, чтобы получить измененную последовательность, кодирующую рецептор VEGF, для различных целей, включая, но не ограничиваясь этим, изменения, которые модифицируют процессинг и экспрессию продукта гена. Например, мутации могут быть встроены с помощью технологий, которые хорошо известны в данной области, например, путем сайтнаправленного мутагенеза, для включения новых рестрикционных сайтов, для изменения характера гликозилирования, фосфорилирования и т.д.
Мышиный Flk-1 (SEQ ID NO: 6) имеет приблизительно 85% гомологию с человеческим KDR (SEQ ID NO: 2) и играет роль в физиологии мыши, аналогичную таковой KDR у человека. Фактически VEGFR-2 часто относят к KDR/Flk-1, что отражает тесную аналогию между этими двумя гомологами рецептора VEGF. По этой причине обработку мышей ДНК-вакциной согласно изобретению, кодирующей Flk-1 (например, ДНК с последовательностью SEQ ID NO: 5), выбрали в качестве подходящей модели для человеческих ДНК-вакцин, кодирующих KDR.
Следующие примеры приведены для дальнейшей иллюстрации признаков и воплощений настоящего изобретения, а не для ограничения ими данного изобретения.
Материалы. Методы и примеры.
Материалы. Мыши C57/BL/6J и Balb/C были получены из Научно-Исследовательского института Scripps по разведению животных. Для оценки использовали линии мышиных опухолевых клеток, включая линию клеток меланомы B16 и линию клеток карциномы кишечника CT26, все из которых были получены у доктора I. J. Fidler, MD Anderson Cancer Center, Houston, TX. Линия клеток D121 мышиной легочной карциномы Льюиса были получены у доктора Lea Eisenbach, Weizmann Institute, Rehovot, Israel. ДНК, кодирующая Flk-1, была любезно предоставлена доктором Lemischka (Princeton University, Princeton, NJ) и клонирована в эукариотический экспрессирующий вектор pcDNA3.1, предоставленный Invitrogen, Huntsville, Alabama, с использованием рестрикционных сайтов KpnI и Xbal. Аттенюированный штамм Salmonella typhimurium был предоставлен B. A. D. Stocker (Stanford University, Stanford, CA).
Антитела были получены от компании BD Biosciences, Bedford, MA. Культуральная добавка T-STIM была получена от компании BD Biosciences, Bedford, MA. Флуоресцеин-изотиоцианат (FITC) и R-Фикоэритрин (PE) были получены от компании Molecular Probes, Eugene, OR. FITC-меченые и PE-меченые антитела были получены в соответствии с методиками, рекомендуемыми изготовителем.
ПРИМЕР 1. Получение ДНК-вакцины, кодирующей Flk-1.
Вектор pcDNA3.1, содержащий ДНК Flk-1 (SEQ ID NO: 5; приблизительно от 10 пг и приблизительно до 0,1 мкг рДНК), был электропорирован в свежепрепарированную аттенюированную Salmonella typhimurium, с использованием устройства Bio-Rad Pulser при 2,5 кВ, 25 мкФ и 200 Ом, в соответствии с процедурами, рекомендованными изготовителем. Salmonella, содержащие вектор, были отобраны и помещены в ампициллин-содержащие планшеты. Колонии собирали на следующий день, и культивировали их в течение ночи в бульоне LB (EM Science, Gibbstown, NJ) с добавками ампициллина. Бактерии выделяли и промывали в растворе фсфатного буфера (PBS). Отмытые бактерии затем суспендировали в среде PBS в концентрации приблизительно 1 x 109 рекомбинантных Salmonella на миллилитр PBS, с образованием вакцинного раствора для дальнейшего использования. Вакцину хранили в запаянных ампулах вплоть до использования. "Контрольная вакцина", состоящая из Salmonella, трансформированных одним только вектором pcDNA3.1 (без ДНК Flk-1), была также получена в соответствии с той же самой методикой. Плазмидную ДНК до трансформации Salmonella хранили приблизительно при -80оC.
ПРИМЕР 2. Вакцинация мышей ДНК-вакциной, кодирующей Flk-1.
Мышей Balb/C (приблизительно по 6 мышей на опытную группу) вакцинировали ДНК-вакциной, полученной в соответствии с примером 1 (приблизительно 1 x 108 рекомбинантных Salmonella приблизительно на 100 микролитров PBS), путем перорального кормления с помощью зонда, три раза с двухнедельными интервалами. Другую группу мышей вакцинировали контрольной вакциной (состоящей из аттенюированной Salmonella, содержащей пустой вектор), в соответствии с той же схемой, что и мышей, вакцинированных вакциной согласно изобретению.
ПРИМЕР 3. Оценка резистентности к опухоли у вакцинированных мышей.
Приблизительно через две недели после третьей вакцинации мышам Balb/C из Примера 2 (приблизительно по 6 мышей на опытную группу) переносили либо приблизительно 1 x 105 клеток B16 меланомы (подкожно), либо приблизительно 1 x 105 клеток D121 легочной карциномы Льюиса (подкожно), либо приблизительно 7,5 x 104 клеток CT26 карциномы кишечника (внутривенно). Подкожные опухоли легких Льюиса хирургически удаляли приблизительно после двухнедельного роста, создавая условия для спонтанного диссеминирования в легкие.
Подкожный опухолевый рост через день измеряли в двух проекциях, и объем опухоли рассчитывали для каждой опухоли в соответствии с формулой: объем =(ширина 2) (длина ÷ 2). Количество спонтанных метастазов D121 в легкие оценивали приблизительно через 30 дней после удаления первичной подкожной опухоли. Мышей забивали и делали вскрытие, и опухолевый нарост легких оценивали в соответствии с процентом легочной поверхности, которая была покрыта опухолью, причем за "0" принимали отсутствие опухоли, за "1" - состояние, при котором опухолью покрыто приблизительно менее 20% легочной поверхности, за "2" - состояние, при котором опухолью покрыто приблизительно от 20 и приблизительно до 30% легочной поверхности, а за "3" - приблизительно более чем 50% легочной поверхности. На фиг. 7 приведена картина легких трех мышей после переноса им клеток D121 легочной карциномы Льюиса. Самое нижнее легкое было классифицировано как 1, тогда как два верхних легких были классифицированы как 3, поскольку там большая часть легочной поверхности была покрыта опухолями. Животные, которые погибли до 30-го дня оценки развития опухолей, были отмечены как "+".
Результаты этих оценок приведены в Таблицах 1-4 и на фиг. 8-10, подробно обсуждаемых ниже.
Таблица 1. Опухолевые метастазы у мышей Balb/C, которым переносили клетки D121 легочной карциномы Льюиса. |
|
Группа вакцинации мышей | Оценки метастазирования |
Контроль - вакцинация | |
нетрансформированными Salmonella | 3, 3, 3, 3, +, + |
Контроль - вакцинация контрольной | |
вакциной (содержащей пустой вектор) | 3, 3, 3, 3, +, + |
Вакцинация ДНК-вакциной Примера 1 | |
(содержащей Flk-1) | 0, 0, 1, 1, 1, 2, 2 |
У мышей Balb/C, которым путем внутривенной инъекции вводили клетки CT-26 карциномы кишечника, смертность оценивали в течение периода более 63 дня (7 недель). Информация о смертности этих мышей представлена в Таблице 2 ниже и графически проиллюстрирована на фиг. 8.
На фиг. 8 процент выживших мышей, обработанных вакциной согласно изобретению из Примера 1, показан жирной сплошной линией, соответствующей 100% выживаемости. Процент выживших "наивных" (невакцинированных) мышей, которым вводили клетки C26, показан тонкой сплошной линией, тогда как процент выживших мышей, обработанных контрольной вакциной (не содержащей ДНК Flk-1), показан прерывистой пунктирной линией.
Таблица 2. Супрессия смертности у мышей Balb/C, которых иммунизировали вакциной из Примера 1 и которым вводили клетки карциномы CT 26 |
|||
% выживания на день 30 |
% выживания на день 36 |
% выживания на день 63 |
|
Обработка | |||
Контроль, без вакцины | 50 | 0 | 0 |
Контрольная вакцина | 33 | 0 | 0 |
Вакцина Примера 1 | 100 | 100 | 100 |
Супрессию роста первичной (подкожной) опухоли у мышей Balb/C, которым переносили клетки D121, оценивали путем определения объема первичной опухоли на день 14 после заражения. Результаты представлены в Таблице 3 ниже и графически проиллюстрированы на фиг. 9.
На фиг. 9 первый столбец, отмеченный как "PBS", относится к мышам, которые не были вакцинированы ("наивные" мыши), средний столбец, отмеченный как "пустой вектор", относится к мышам, которые были обработаны контрольной вакциной, и третий столбец, отмеченный как "pcDNA3.1-FLK1", относится к мышам, которые были иммунизированы вакциной согласно изобретению, из Примера 1.
Таблица 3 Супрессия опухолевого развития подкожной карциномы D121 у мышей Balb/C, иммунизированных вакциной из Примера 1 |
||
Объем опухоли мм3 |
Стандартное отклонение |
|
Обработка | ||
Контроль, без вакцины | 665 | 227 |
Контрольная вакцина | 641 | 157 |
Вакцина Примера 1 | 183 | 35 |
Супрессию опухолевого роста подкожной меланомы B16 оценивали путем мониторинга объема подкожной опухоли приблизительно в течение 17-дневного периода после переноса опухолевых клеток. Результаты представлены в Таблице 4 и графически проиллюстрированы на фиг. 10 ниже. На фиг. 10 приведены данные, соответствующие среднему размеру опухоли, причем (•) относится к мышам, иммунизированным вакциной согласно изобретению из Примера 1, тогда как данные, отмеченные (o), относятся к мышам, обработанным контрольной вакциной.
Таблица 4 Супрессия опухолевого развития подкожной меланомы В16 у мышей Balb/C, иммунизированных вакциной из Примера 1. |
||||
Объем опухоли (мм3) | ||||
Обработка | День 0 | День 9 | День 14 | День 17 |
Контрольная вакцина | 0 | 907 | 1273 | 4213 |
Вакцина Примера 1 | 0 | 447 | 462 | 1063 |
% опухолевой супрессии | --- | 51% | 64% | 75% |
ПРИМЕР 4. Положительная регуляция маркеров активации CD25, CD69 и CD2 в спленоцитах (CD8+ T-клетках), полученных из вакцинированных мышей.
Мышей C5/7BL/6J (приблизительно по 4 мыши на опытную группу) вакцинировали ДНК-вакциной из Примера 1 и контрольной вакциной (без Flk-1), как описано в Примере 2. Спленоциты выделяли из иммунизированных мышей и из контрольной группы мышей приблизительно через шесть недель после третьей вакцинации. Клетки-спленоциты культивировали в течение 24 часов вместе с клетками линии B16 клеток меланомы, трансдуцированными для экспрессии Flk-1, и с нетрансформированными клетками B16 в T-клеточной среде (приблизительно 5 мл на культуру), содержащей приблизительно 4% по объему культуральной добавки T-STIM (Cat.# 354115, BD Biosciences, Bedford, MA). Затем клетки окрашивали FITC-конъюгированным CD8+-антителом и PE-конъюгированными антителами против CD25, CD69 и CD2. Клеточные суспензии оценивали с помощью установки Becton Dickenson FAC scan для определения процента CD8+-T-клеток, положительных в отношении CD25 и CD69, для каждой комбинации спленоцит/клетка B16 меланомы. Результаты представлены в Таблице 5 и графически проиллюстрированы на фиг. 11.
Таблица 5 Положительная регуляция маркеров активации CD25, CD69 и CD2 в спленоцитах, полученных из вакцинированных мышей |
|||
Обработка | % CD25 положительн. |
% CD69 положительн. |
CD2-положительн. средн.флуоресценц. |
Контрольн.вакцина + | |||
Клетки B16-Flk-1 | 9 | 18 | 570 mfu |
ДНК-вакцина + | |||
клетки B16 | 12 | 29 | 550 mfu |
ДНК-вакцина + | |||
клетки B16-Flk-1 | 21 | 35 | 700 mfu |
mfu = средние единицы флуоресценции. |
Результаты, приведенные в Таблицах 1-5 и на фиг. 8-11, показывают, что ДНК-вакцина из Примера 1, содержащая ДНК, кодирующую Flk-1, мышиный аналог KDR, может эффективно иммунизировать мышей против целого ряда образующих опухоль раковых клеток. Хоть авторы и не желают связывать себя определенной теорией, тем не менее очевидно, что вакцина действует таким образом, что ингибирует ангиогенез в опухоли, т.е. предотвращает образование новых кровеносных сосудов и способствует эффективному истощению опухоли.
Данные, представленные в Таблице 1, показывают, что вакцина согласно изобретению из Примера 1 приводит к супрессии опухолевых метастазов в легкие мышей, зараженных клетками D121 легочной карциномы Льюиса. Ни одна из мышей, иммунизированных вакциной из Примера 1, не умерла, и у всех этих мышей наблюдали приблизительно менее чем 50% поражение легких опухолью (у 2 животных оно составляло < 20%). И наоборот, по 2 мыши умерли в каждой из контрольных групп, и у всех из оставшихся мышей область легких, пораженная опухолью, составляла приблизительно более 50%.
Вакцина согласно изобретению из Примера 1 также способствовала значительному снижению смертности мышей Balb-C, которым внутривенно были введены клетки CT-26 карциномы кишечника, как показывают данные, приведенные в Таблице 2 и на фиг. 8. Все мыши, иммунизированные вакциной из Примера 1, выживали в течение всего 63-дневного периода наблюдения после заражения. В контрольных группах, однако, все мыши погибли к 36-му дню после заражения.
Как показывают данные, приведенные в Таблице 3 и на фиг. 9, подкожный опухолевый рост клеток D121 легочной карциномы Льюиса в несколько раз тормозился под действием иммунизации вакциной согласно изобретению из Примера 1 - приблизительно от 4,3 до 4,5 раз по сравнению с контрольными группами мышей, не обработанных вакцинами или же обработанных контрольной вакциной.
Сходным образом, как показано в Таблице 4 и на фиг. 10, подкожный опухолевый рост клеток B16 меланомы тормозился приблизительно в 4 раза у мышей, иммунизированных вакциной согласно изобретению из Примера 1, по сравнению с опухолевым ростом в контрольной группе.
Данные, приведенные в Таблице 5 и на фиг. 11, показывают, что спленоциты, выделенные у мышей C57/BL/6J, вакцинированных ДНК-вакциной из Примера 1, вызывали положительную регуляцию маркеров активации CD2, CD25 и CD69, по сравнению с контрольной группой мышей, когда культивировались с клетками B16 меланомы, трансформированными для представления антигена Flk-1.
Множество вариаций и модификаций описанных выше воплощений может быть осуществлено в рамках объема настоящего изобретения. Совершенно очевидно, что примеры специфических воплощений изобретения приведены для иллюстрации изобретения и никоим образом не подразумевают его ограничения. Подразумеваются, конечно, всевозможные модификации из тех, которые заключены в рамках объема, охватываемого прилагаемой формулой изобретения.
Claims (14)
1. ДНК-вакцина, эффективная для ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток, содержащая ДНК-конструкт, оперативно кодирующий рецепторный белок VEGF, встроенный в аттенюированный бактериальный вектор, где рецепторный белок VEGF, кодируемый ДНК-конструктом, выбран из группы, состоящей из VEGFR-2 (KDR; SEQ ID NO: 2), VEGFR-1 (Flt-1; SEQ ID NO: 4), Flk-1 (SEQ ID NO: 6) и их функционального эквивалента, который приблизительно на 80% им гомологичен.
2. ДНК-вакцина по п.1, где аттенуированный бактериальный вектор выбран из группы, состоящей из аттенуированных Salmonella typhimurium, Salmonella typhi, Shigella, Bacillus, Lactobacillus, BCG, Escherichia coli, Vibrio cholerae и Campylobacter.
3. ДНК-вакцина по п.1, где аттенуированный бактериальный вектор представляет собой аттенуированную Salmonella typhimurium.
4. ДНК-вакцина по любому из пп.1-3, где ДНК-конструкт содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 и их функционального гомолога, который, по меньшей мере, приблизительно на 80% им гомологичен.
5. Способ ингибирования пролиферации эндотелиальных клеток у млекопитающего, включающий в себя стадию введения млекопитающему эффективного для стимуляции иммунного ответа количества ДНК-вакцины, охарактеризованной в любом из пп.1-4, при этом у указанного млекопитающего проявляется иммунный ответ, вызванный вакциной и специфичный в отношении пролиферирующих эндотелиальных клеток.
6. Способ по п.5, где млекопитающим является человек.
7. Способ по любому из пп.5 и 6, согласно которому вакцину вводят перорально.
8. Способ ингибирования ангиогенеза у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему иммунологически эффективного количества ДНК-вакцины по любому из пп.1-4, при этом у указанного млекопитающего проявляется иммунный ответ, вызванный вакциной и специфичный в отношении пролиферирующих эндотелиальных клеток, приводящий к ингибированию образования кровеносных сосудов.
9. Способ по п.8, где млекопитающим является человек.
10. Способ по любому из пп.8 и 9, согласно которому вакцину вводят перорально.
11. Способ ингибирования опухолевого роста у млекопитающего, включающий в себя введение указанному млекопитающему иммунологически эффективного количества ДНК-вакцины по любому из пп.1-4, при этом у указанного млекопитающего проявляется иммунный ответ, вызванный вакциной и специфичный в отношении пролиферирующих эндотелиальных клеток, приводящий в результате к остановке опухолевого роста, уменьшению размеров опухоли или ингибированию распространения опухоли.
12. Способ по п.11, где млекопитающим является человек.
13. Способ по любому из пп.11 и 12, согласно которому вакцину вводят перорально.
14. Готовая форма ДНК-вакцины по любому из пп.1-4, запакованной в герметически запаянный стерильный контейнер, имеющий прикрепленную к нему этикетку, на которой напечатан материал, идентифицирующий вакцину и обеспечивающий информацию, используемую для индивидуального введения указанной вакцины пациенту.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US10/090,183 | 2002-03-02 | ||
US10/090,183 US7094410B2 (en) | 2002-03-02 | 2002-03-02 | DNA vaccine against proliferating endothelial cells and methods of use thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2004129332A RU2004129332A (ru) | 2005-05-27 |
RU2318019C2 true RU2318019C2 (ru) | 2008-02-27 |
Family
ID=27787599
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004129332/13A RU2318019C2 (ru) | 2002-03-02 | 2003-02-28 | Днк-вакцина против пролиферирующих эндотелиальных клеток и способы ее применения |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US7094410B2 (ru) |
EP (1) | EP1487482B1 (ru) |
JP (1) | JP4598401B2 (ru) |
KR (1) | KR100979898B1 (ru) |
CN (1) | CN1293917C (ru) |
AT (1) | ATE528015T1 (ru) |
AU (1) | AU2003228229B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0308103B8 (ru) |
CA (1) | CA2477406C (ru) |
CY (1) | CY1112663T1 (ru) |
DK (1) | DK1487482T3 (ru) |
ES (1) | ES2371870T3 (ru) |
MX (1) | MXPA04008468A (ru) |
PL (1) | PL213364B1 (ru) |
PT (1) | PT1487482E (ru) |
RU (1) | RU2318019C2 (ru) |
SI (1) | SI1487482T1 (ru) |
WO (1) | WO2003073995A2 (ru) |
ZA (1) | ZA200406988B (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2636348C2 (ru) * | 2012-07-05 | 2017-11-22 | Ваксимм Аг | Днк-вакцина для применения у пациентов с раком поджелудочной железы |
WO2021206587A1 (en) * | 2020-04-10 | 2021-10-14 | Genetic Diagnostics And Therapy 21 Ltd | Sars-cov-2 dna vaccine based on gene therapy dna vector gdtt1.8nas12 |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1595548A3 (en) * | 2001-03-07 | 2006-02-22 | Mannkind Corporation | Anti-neovasculature preparations for treating cancer |
US7094410B2 (en) * | 2002-03-02 | 2006-08-22 | The Scripps Research Institute | DNA vaccine against proliferating endothelial cells and methods of use thereof |
CU23178A1 (es) * | 2002-04-15 | 2006-09-22 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | INMUNOTERAPIA ACTIVA ANTIANGIOGéNICA |
KR100614220B1 (ko) | 2004-11-08 | 2006-08-21 | 고려대학교 산학협력단 | Flt3 리간드 유전자를 발현하는 살모넬라 균주 및 이를함유하는 항암 치료용 조성물 |
CN101766818B (zh) * | 2008-12-30 | 2013-05-22 | 陕西北美基因股份有限公司 | 多糖金磁复合微粒载药体及其制备方法 |
JP5539411B2 (ja) * | 2009-03-04 | 2014-07-02 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | 血管新生因子を含む組成物およびその使用方法 |
US9492523B2 (en) | 2011-12-09 | 2016-11-15 | The Board Of Regents For Oklahoma State University | Broadly protective Shigella vaccine based on type III secretion apparatus proteins |
ES2650269T3 (es) * | 2011-12-22 | 2018-01-17 | Vaximm Ag | Método para producir cepas atenuadas de salmonela de alto rendimiento |
WO2014034735A1 (ja) | 2012-08-31 | 2014-03-06 | 国立大学法人 大阪大学 | Vegf及び/又はアンギオポエチン-2の特異的エピトープを含むdnaワクチン |
US10548962B2 (en) | 2012-10-22 | 2020-02-04 | The Board Of Regents For Oklahoma State University | Use of the salmonella SPP type III secretion proteins as a protective vaccination |
US9950053B2 (en) | 2012-10-22 | 2018-04-24 | The Board Of Regents For Oklahoma State University | Use of the Salmonella SPP type III secretion proteins as a protective vaccination |
US20180153976A1 (en) | 2015-06-18 | 2018-06-07 | Vaximm Ag | Novel cmv pp65 targeting dna vaccine for cancer immunotherapy |
JP6947649B2 (ja) | 2015-06-18 | 2021-10-13 | バクシム アクチェンゲゼルシャフト | 複合治療のためのvegfr−2標的化dnaワクチン |
US10973908B1 (en) | 2020-05-14 | 2021-04-13 | David Gordon Bermudes | Expression of SARS-CoV-2 spike protein receptor binding domain in attenuated salmonella as a vaccine |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6214804B1 (en) * | 1989-03-21 | 2001-04-10 | Vical Incorporated | Induction of a protective immune response in a mammal by injecting a DNA sequence |
US6228844B1 (en) * | 1991-11-12 | 2001-05-08 | Vical Incorporated | Stimulating vascular growth by administration of DNA sequences encoding VEGF |
US6177401B1 (en) * | 1992-11-13 | 2001-01-23 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften | Use of organic compounds for the inhibition of Flk-1 mediated vasculogenesis and angiogenesis |
US5741492A (en) * | 1996-01-23 | 1998-04-21 | St. Jude Children's Research Hospital | Preparation and use of viral vectors for mixed envelope protein vaccines against human immunodeficiency viruses |
US5939400A (en) * | 1996-02-26 | 1999-08-17 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | DNA vaccination for induction of suppressive T cell response |
CA2310252A1 (en) * | 1998-03-06 | 1999-09-10 | Imclone Systems Incorporated | Active immunization against angiogenesis-associated antigens |
WO2000014244A2 (en) * | 1998-09-04 | 2000-03-16 | Connaught Laboratories Limited | Treatment of cervical cancer |
AU2001271976A1 (en) * | 2000-07-07 | 2002-01-21 | Corixa Corporation | Microspheres and adjuvants for dna vaccine delivery |
US7094410B2 (en) * | 2002-03-02 | 2006-08-22 | The Scripps Research Institute | DNA vaccine against proliferating endothelial cells and methods of use thereof |
-
2002
- 2002-03-02 US US10/090,183 patent/US7094410B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-02-28 EP EP03726007A patent/EP1487482B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-28 PL PL372314A patent/PL213364B1/pl unknown
- 2003-02-28 MX MXPA04008468A patent/MXPA04008468A/es active IP Right Grant
- 2003-02-28 KR KR1020047013668A patent/KR100979898B1/ko active IP Right Grant
- 2003-02-28 RU RU2004129332/13A patent/RU2318019C2/ru active
- 2003-02-28 SI SI200332080T patent/SI1487482T1/sl unknown
- 2003-02-28 PT PT03726007T patent/PT1487482E/pt unknown
- 2003-02-28 CA CA2477406A patent/CA2477406C/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-28 BR BRPI0308103A patent/BRPI0308103B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-02-28 CN CNB038099470A patent/CN1293917C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-28 DK DK03726007.2T patent/DK1487482T3/da active
- 2003-02-28 WO PCT/US2003/006256 patent/WO2003073995A2/en active Application Filing
- 2003-02-28 JP JP2003572517A patent/JP4598401B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-28 AU AU2003228229A patent/AU2003228229B2/en not_active Expired
- 2003-02-28 ES ES03726007T patent/ES2371870T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-28 AT AT03726007T patent/ATE528015T1/de active
-
2004
- 2004-09-01 ZA ZA2004/06988A patent/ZA200406988B/en unknown
-
2006
- 2006-08-21 US US11/507,298 patent/US8048428B2/en active Active
-
2011
- 2011-10-25 US US13/280,855 patent/US8241637B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2011-12-20 CY CY20111101264T patent/CY1112663T1/el unknown
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2636348C2 (ru) * | 2012-07-05 | 2017-11-22 | Ваксимм Аг | Днк-вакцина для применения у пациентов с раком поджелудочной железы |
WO2021206587A1 (en) * | 2020-04-10 | 2021-10-14 | Genetic Diagnostics And Therapy 21 Ltd | Sars-cov-2 dna vaccine based on gene therapy dna vector gdtt1.8nas12 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8241637B2 (en) | DNA composition encoding an immunogenic VEGF receptor peptide and methods of use thereof | |
US9655815B2 (en) | DNA vaccines against tumor growth and methods of use thereof | |
US7279464B2 (en) | DNA vaccines encoding CEA and a CD40 ligand and methods of use thereof | |
JP2009541328A (ja) | 腫瘍間質抗原fapに対するdna組成物及びその使用方法 | |
AU2007314433B9 (en) | DNA composition for eliciting an immune response against tumor-associated macrophages | |
US8053421B2 (en) | DNA vaccines against tumor growth and methods of use thereof | |
Bronte | Genetic vaccination for the active immunotherapy of cancer |