RU2285535C2

RU2285535C2 - Косточковое масло из косточек плодов растений, способ его экстрагирования, фармацевтические композиции и их применение

Info

Publication number: RU2285535C2
Application number: RU2002109742/15A
Authority: RU
Inventors: Дапенг ЛИ (CN); Дапенг ЛИ
Original assignee: Дапенг ЛИ
Priority date: 2002-04-12
Filing date: 2002-04-12
Publication date: 2006-10-20

Abstract

Изобретение относится фармацевтической промышленности и используется для улучшения иммунологической функции, повышения содержания сывороточных белков и задерживания роста опухоли. Косточковое масло, экстрагированное из косточек финика опушенного, желтого дерева или грецкого ореха, содержащее определенное количество триглицеридов, диглицеридов, моноглицеридов, ситостеринов и циклоланостерина. Способ экстрагирования косточкового масла, включающий отжимание косточек или косточек, измельченных в порошок, экстрагирование органическим растворителем или селективно при помощи жидкости в надкритическом состоянии с получением сырого масла; обесцвечивание сырого масла адсорбирующим обесцвечивающим веществом; растворение обесцвеченного масла в петролейном эфире, добавление стехиометрического количества NaOH при перемешивании, отстаивание и расслаивание, промывку органической фазы теплой водой с получением эмульсии; добавление ацетона к эмульсии при перемешивании, разделение слоев и получение масляной фазы в верхнем слое; обработку масляной фазы с целью абсорбции последовательно нейтральным оксидом алюминия и каолином, удаление после фильтрования органического растворителя из фильтрата в атмосфере азота, промывку масляной фазы теплой водой, нагревание масляной фазы в атмосфере азота для ее обезвоживания, адсорбирование нейтральным оксидом алюминия. Способ экстрагирования косточкового масла, включающий отжимание косточек или косточек, измельченных в порошок, экстрагирование органическим растворителем или селективно при помощи жидкости в надкритическом состоянии с получением сырого масла; перемешивание и нагревание сырого масла, добавление фосфорной кислоты для обеспечения полноты обессмолевания; добавление к обессмоленному маслу раствора NaOH или Na₂СО₃ при той же температуре для обеспечения полноты каустической очистки, отстаивание и расслоение смеси с получением таким образом очищенного масла; промывку очищенного каустической очисткой масла чистой водой с получением масла, промытого водой; добавление адсорбента в промытое водой масло, или нагревание промытого водой масла в вакууме для удаления воды с получением таким образом прозрачного обезвоженного масла; обесцвечивание обезвоженного масла адсорбирующим обесцвечивающим веществом при нагревании под вакуумом; нагревание обесцвеченного масла под вакуумом и с перемешиванием в атмосфере азота с повышением температуры масла до определенной температуры, пропускание водяного пара из чистой воды при определенной температуре и выдерживание в течение определенного времени, затем прекращение подачи очищенного водяного пара и пропускание азота с перемешиванием для удаления влаги из масла. Фармацевтическая композиция, улучшающая иммунологическую функцию, повышающая содержание сывороточных белков и задерживающая рост опухолей, содержащая терапевтически эффективное количество косточкового масла и один или несколько фармацевтически приемлемых адъювантов. Косточковое масло эффективно улучшает иммунологическую функцию, повышает содержание сывороточных белков и задерживает рост опухоли. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 5 табл.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к фармацевтической химии природных соединений, в частности к косточковым маслам, экстрагируемым из косточек плодов растений, конкретнее относится к косточковым маслам, экстрагируемым из финика опушенного (spine date) (Semen ziziphi spinosae), желтого дерева (flatspine pricklyash) и грецкого ореха (Semen persicae), способу их получения, фармацевтическим композициям, содержащим такие масла, и их применению в медицине.

Уровень техники

Косточки плодов финика опушенного и желтого дерева являются средствами традиционной китайской медицины как для медицинских целей, так и для целей питания, имеющими такие функции, как питание печени, успокаивающее действие на сердце, сдерживание потоотделения, образование жидкости, согревание "внутренней" грелки для облегчения боли, уничтожение паразитов и успокоение зуда.

Ядро грецкого ореха является одним из средств традиционной китайской медицины как для медицинских целей, так и для целей питания, и имеет такие функции как питание почек, согревающее действие на легкие и увлажнение кишечника. Однако масло из ядер грецкого ореха, как правило, используют в качестве пищевого масла, и нет сообщений о нем как о питательном веществе для парентерального введения. Препарат из обычного орехового масла не выгоден для поглощения в организме человека, и его применение в медицине ограничено, так как оно с трудом удовлетворяет клиническим требованиям к эмульсии для внутривенного введения. Известная в технике технология экстракции и разделения приводит к несоответствию требованиям по физическим и химическим свойствам (таким как кислотное число) и высокому содержанию примесей.

Как известно из уровня техники для пополнения организма человека питательными веществами и энергией обычно используют жировые эмульсии, полученные из соевого масла, хлопкового масла и красного цветочного масла. Более широко используются жировые эмульсии, полученные из соевого масла. Однако в настоящее время не имеется сообщений об улучшении иммунологических функций, повышения содержания сывороточных белков, подавления пересаженной опухоли, экспериментального рака легких Льюиса и рака печени крыс НАС, питания и функционирования почек, согревания легких, послабления кишечника при исследовании жировой эмульсии из соевого масла.

Сущность изобретения

Таким образом, в своем первом аспекте изобретение относится к косточковому маслу из косточек плодов растений, которое можно применять для получения новой эмульсии для внутривенного введения с функциями пополнения питательными веществами, улучшения иммунологической функции и повышения содержания сывороточных белков.

Во втором аспекте изобретение относится к двум специальным технологическим способам экстрагирования косточкового масла по изобретению.

В третьем аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей косточковое масло по изобретению, включая эмульсию для внутривенного введения и капсулы для перорального введения. Указанная эмульсия для внутривенного введения может пополнять питательные вещества, улучшать иммунологическую функцию и повышать содержание сывороточных белков. Указанная эмульсия также имеет функцию питания почек, согревания легких и послабления кишечника. Кроме того, она достаточно дешевая.

В четвертом аспекте изобретение относится к применению косточкового масла по изобретению при получении лекарств для лечения болезней, таких как опухоли, СПИД и понижение иммунитета и т.п.

Косточковое масло, экстрагированное из косточек плодов растений, согласно первому аспекту изобретения, содержит 90-99,9% триглицеридов, 0-5% диглицеридов, 0-3% моноглицеридов, 0,1-2,5% ситостеринов и 0-1% циклоланостерина.

Один из способов экстрагирования косточкового масла по изобретению включает стадии:

1) экстракции сырья: отжимание косточек/измельченных в порошок косточек или экстрагирование органическим растворителем или селективно при помощи жидкости в надкритическом состоянии с получением сырого масла;

2) обесцвечивания: обесцвечивание сырого масла адсорбирующим обесцвечивающим веществом с получением обесцвеченного масла;

3) каустической очистки: растворение обесцвеченного масла в петролейном эфире, добавление стехиометрического количества NaOH при перемешивании, отстаивание и расслоение смеси с последующим промыванием органической фазы с образованием таким образом эмульсии;

4) разрушения эмульсии: добавление ацетона к эмульсии при перемешивании, разделение слоев и получение масляной фазы в верхнем слое;

5) адсорбции и промывки водой: обработка с целью абсорбции масляной фазы последовательно нейтральным оксидом алюминия и каолином, фильтрация, последующее удаление органического растворителя из фильтрата в атмосфере азота и промывка масляной фазы теплой водой, сушка, последующая обработка оксидом алюминия с получением таким образом очищенного масла.

Другой способ экстрагирования косточкового масла по изобретению включает стадии:

2) обессмоливания: перемешивание и нагревание сырого масла с последующим добавлением фосфорной кислоты для обеспечения полноты реакции;

3) каустической очистки: добавление к обессмоленному маслу раствора NaOH или Na₂CO₃ при той же температуре для обеспечения полноты реакции, затем отстаивание и расслоение смеси с получением таким образом очищенного масла;

4) промывки водой: промывка очищенного каустической очисткой масла чистой водой с получением масла, промытого водой;

5) обезвоживания: добавление адсорбента в масло, промытое водой, или нагревание промытого водой масла в вакууме для удаления воды с получением таким образом прозрачного обезвоженного масла;

6) обесцвечивания: обесцвечивание обезвоженного масла адсорбирующим обесцвечивающим веществом с получением обесцвеченного масла;

7) дезодорирования: нагревание обесцвеченного масла при перемешивании в вакууме в атмосфере азота с повышением температуры масла до 120-160°С, подача чистого водяного пара для дальнейшего нагревания до 160-260°С и выдержка в течение 0,5-2 часов, затем резкое отключение чистого водяного пара и удаление таким образом влаги из масла с получением дезодорированного масла.

Фармацевтическая композиция по изобретению содержит терапевтически эффективное количество косточкового масла, экстрагированного из косточек плодов растений, и фармацевтически приемлемый носитель и один или несколько адъювантов.

Изобретение также относится к применению косточкового масла из косточек плодов растений при получении лекарств для лечения опухолей, СПИДа, пониженного иммунитета, нарушения питания у детей, применения после операций и при болезнях, при которых требуется поступление жировых элементов.

Экстрагированное из косточек плодов растений косточковое масло по изобретению представляет собой светло-желтую маслянистую жидкость, содержащую 90-99,9% триглицеридов, 0-5% диглицеридов, 0-3% моноглицеридов, 0,1-2,5% ситостеринов и 0-1% циклоланостерина.

Липолиз указанного косточкового масла дает следующие жирные кислоты: гексадекановую кислоту (5-8%), октадекановую кислоту (1-3%), октадеценовую кислоту (18-30%), октадекадиеновую кислоту (50-65%) и календовую кислоту (6-14%).

Косточковое масло по изобретению обладает указанными далее физическими свойствами, проверенными для жирного масла: относительная плотность 0,920-0,930, показатель преломления 1,470-1,480, кислотное число <0,80, йодное число 120,0-155,0, число омыления 180,0-200,0, пероксидное число <30,0 мэкв. кг^-1, зольный остаток 0,01-0,04%, мышьяковые соли <2 ч/млн, тяжелые металлы <10 ч/млн и средняя молекулярная масса 873,96.

Предпочтительными вариантами косточковых масел по изобретению являются масла, экстрагированные из косточек плодов финика опушенного, желтого дерева и грецкого ореха.

В случае ядра грецкого ореха, например, первый способ экстрагирования косточковых масел включает стадии:

первичной экстракции - отжимание ядер/измельченных в порошок ядер или экстрагирование органическим растворителем или селективно при помощи жидкости в надкритическом состоянии с получением сырого орехового масла;

обесцвечивания - добавление соответствующего количества петролейного эфира к сырому маслу и тщательное перемешивание его, добавление соответствующего количества активированного угля для инъекций, поддержание постоянной температуры, фильтрация смеси и удаление петролейного эфира и получение таким образом обесцвеченного масла;

каустической очистки - загрузка обесцвеченного масла и соответствующего количества петролейного эфира в реактор, добавление при перемешивании 2% раствора NaOH в количестве, рассчитанном с учетом кислотного числа и количества обесцвеченного масла, отстаивание и удаление нижнего слоя жидких отходов, затем добавление при перемешивании двукратного количества теплой дистиллированной воды, снова отстаивание и удаление нижнего слоя жидких отходов, затем промывание еще раз таким же способом, длительность и температура воды - как указано выше, и получение верхнего слоя эмульсии;

разрушения эмульсии - определение объема и перенос эмульсионного слоя в сепаратор и добавление ацетона в заданном соотношении к количеству эмульсионного слоя при постоянном перемешивании, после отстаивания и разделения слоев удаление нижнего слоя жидких отходов и получение таким образом масляной фазы в верхнем слое;

промывки водой - добавление нейтрального оксида алюминия в количестве, основанном на количестве масла, для проведения адсорбции, тщательное перемешивание, отстаивание и фильтрация с образованием прозрачного масла, затем предварительное нагревание отмеренного количества прозрачного масла в реакторе, добавление при перемешивании необходимого количества активированного нагреванием белого бола (каолина) и продолжение нагревания, фильтрация в вакууме, нагревание фильтрата в промывочном сосуде, удаление органического растворителя в атмосфере азота, добавление теплой дистиллированной воды исходя из количества масла, тщательное перемешивание, отстаивание и удаление нижнего слоя жидких отходов, затем нагревание масляного слоя в атмосфере азота для удаления воды и сушка его до тех пор, пока масляный слой не станет прозрачным, затем добавление нейтрального оксида алюминия в адекватном количестве, тщательное перемешивание, отстаивание и осуществление фильтрации для стерилизации с получением таким образом очищенного масла.

Целью защиты азотом в описанном выше способе является, главным образом, улучшение качества масла за счет предотвращения окисления жиров и регулирования пероксидного числа.

При необходимости косточковое масло из ядер грецкого ореха, полученное так, как описано выше, фасуют и стерилизуют. Им заполняют специальные емкости, стерилизуют и получают таким образом косточковое масло для инъекций.

1) экстракции сырья: отжимание косточек/измельченных в порошок косточек или селективное экстрагирование при помощи жидкости в надкритическом состоянии с получением прозрачного сырого масла;

2) обессмоливания: помещение сырого масла в реактор, заполнение азотом, перемешивание, нагревание, добавление соответствующего количества фосфорной кислоты и быстрое перемешивание для обеспечения полноты реакции;

3) каустической очистки: непосредственное добавление раствора NaOH или Na₂CO₃ к обессмоленному маслу в атмосфере азота при той же температуре, быстрое перемешивание для создания возможности жирным кислотам реагировать полностью, затем отстаивание для разделения слоев в условиях нагревания и подачи азота, удаление мыла и получение очищенного масла;

4) промывки водой: добавление соответствующего количества раствора хлорида натрия к маслу после каустической очистки, затем промывка два раза чистой водой таким же способом, при той же длительности и температуре, какие описаны выше, отстаивание для разделения слоев и удаление нижнего слоя жидких отходов с получением масла, промытого водой;

5) обезвоживания: добавление соответствующего количества активированного оксида алюминия к маслу, промытому водой, отстаивание и фильтрация с получением прозрачного обезвоженного масла;

6) обесцвечивания; добавление обезвоженного масла в реактор, нагревание масла до 140°С при перемешивании в вакууме в атмосфере азота, добавление соответствующего количества смеси активированного угля и активированного каолина, тщательное перемешивание в вакууме при 80-90°С, охлаждение, фильтрация и получение таким образом обесцвеченного масла;

7) дезодорирования: загрузка обесцвеченного масла в реактор из нержавеющей стали, нагревание обесцвеченного масла до 140°С при перемешивании в вакууме в атмосфере азота, затем подача чистого водяного пара вместо азота для дальнейшего нагревания обесцвеченного масла до 190°С и выдержка при этой же температуре в течение 1,5 часов, затем прекращение подачи чистого водяного пара и снова перемешивание в атмосфере азота, охлаждение масла с получением таким образом дезодорированного масла.

При необходимости полученное дезодорированное масло можно также стерилизовать. Дезодорированное масло загружают в сосуд для стерилизации из нержавеющей стали и нагревают до 160°С при перемешивании в вакууме. После выдержки при указанной температуре в течение 2 часов масло охлаждают и асептически фильтруют, затем в атмосфере азота заполняют им емкости и запаивают и получают, таким образом, косточковое масло для инъекций.

Фармацевтическая композиция по изобретению содержит терапевтически эффективное количество косточкового масла, по изобретению экстрагированного так, как описано выше, и один или несколько фармацевтически приемлемых адъювантов.

Фармацевтически приемлемыми адъювантами в композиции изобретения являются один или несколько адъювантов, выбранных из группы, состоящей из эмульгатора, солюбилизатора, инертного растворителя, регулятора изотоничности, антиоксиданта и стабилизатора.

Фармацевтическая композиция изобретения также может содержать другие активные лекарственные средства, выбранные среди противоопухолевых средств, средств против СПИДа, иммуномодуляторов и питательных веществ.

Фармацевтическая композиция изобретения также может содержать одно или несколько растительных масел, например кокосовое масло из копры, арахисовое масло и т.п.

Фармацевтическая композиция изобретения может представлять собой жировую эмульсию, такую как жировая эмульсия для внутривенного введения или жировая эмульсия для перорального введения. Она также может представлять собой мягкую капсулу или йодированное масло и т.п.

Одним из предпочтительных вариантов фармацевтической композиции изобретения является жировая эмульсия, где указанные фармацевтически приемлемые адъюванты представляют собой эмульгатор и регулятор изотоничности. Более предпочтительным вариантом является жировая эмульсия для внутривенного введения с ореховым маслом.

Предпочтительно, жировая эмульсия орехового масла для внутривенного введения содержит, в расчете на общий объем 100 мл, от 5 г до 30 г, предпочтительнее от 10 г до 30 г, наиболее предпочтительно 20 г, орехового масла для парентерального введения (орехового масла для инъекций).

Эмульгатором, применимым в данном изобретении, может являться фосфатид (в том числе, соевый лецитин, желтковый лецитин и соевый фосфатид), плюроник, полиглицерилдипальмитат и т.п. В жировой эмульсии для внутривенного введения предпочтительно использовать природный эмульгатор, например соевый лецитин или желтковый лецитин, в количестве, примерно 1,0-3,0 г, предпочтительнее 1,0-2,0 г, и наиболее предпочтительно 1,2 г в расчете на общий объем эмульсии 100 мл.

Изотонический агент, используемый в изобретении, может представлять собой глицерин, сорбит, ксилит и глюкозу и т.п., предпочтительно глицерин, в количестве от 1,5 г до 3,0 г, предпочтительнее 2,5 г в расчете на общий объем эмульсии 100 мл.

Далее изобретение описывается с помощью примеров, представленных с целью пояснения, но не ограничения.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Пример 1

Отжимают 1000 г ядер грецкого ореха и получают 450 г сырого орехового масла.

К сырому маслу добавляют петролейный эфир в количестве примерно 40% от количества сырого масла и тщательно перемешивают, затем добавляют активированный уголь в количестве примерно 1% от количества сырого масла. После выдержки при 45°С в течение 30 минут смесь фильтруют, и петролейный эфир извлекают из фильтрата, посредством чего получают 428 г обесцвеченного масла.

Обесцвеченное масло и петролейный эфир в количестве примерно 50% от обесцвеченного масла загружают в реактор, и в эмульсионный слой при перемешивании добавляют тонкой струйкой 307 мл 2% раствора NaOH, с учетом кислотного числа и количества обесцвеченного масла. Смесь перемешивают еще в течение 10 минут и оставляют в спокойном состоянии на 24 часа, затем нижний слой жидких отходов удаляют. Добавляют при перемешивании двукратное количество воды, подогретой до 45°С, затем смесь оставляют в спокойном состоянии еще на 24 часа, после чего удаляют нижний слой жидких отходов. Осуществляют вторую промывку тем же способом, такой же продолжительностью и при температуре воды, указанными выше, за исключением того, что количество воды в 1,5 раза больше количества эмульсионного слоя, и затем оставляют в спокойном состоянии на 48 часов.

Нижний слой жидких отходов удаляют и получают 342 г верхнего эмульсионного слоя. Эмульсионный слой переносят в сепаратор, быстро при перемешивании добавляют 342 мл ацетона и оставляют в спокойном состоянии на 3 часа. Нижний слой жидких отходов удаляют, получая таким образом верхний слой масляной фазы.

Добавляют оксид алюминия, активированный нагреванием при температуре 160°С в течение 2 часов в количестве приблизительно 5% от количества масла, после тщательного перемешивания оставляют в спокойном состоянии на 30 минут, затем смесь фильтруют и получают прозрачное масло. Замеряют объем прозрачного масла и загружают масло в реактор, где его предварительно нагревают до 40°С. Добавляют при перемешивании белый бол (каолин), активированный нагреванием при температуре 160°С в течение 2 часов, в количестве приблизительно 3% от количества масла, и смесь выдерживают при 50°С и перемешивании в течение 30 минут, затем фильтруют под вакуумом, и фильтрат загружают в промывочный сосуд и нагревают до 60°С. Органический растворитель удаляют в атмосфере азота и быстро доливают дистиллированную воду, нагретую до 45°С, в количестве, равном количеству масла. После перемешивания еще в течение 15 минут и отстаивания в течение 30 минут нижний слой жидких отходов удаляют. Масляный слой нагревают до 80°С в атмосфере азота для удаления воды и сушат до тех пор, пока масляный слой не станет прозрачным. Добавляют активированный нейтральный оксид алюминия, и смесь тщательно перемешивают и затем оставляют в спокойном состоянии. Очищенное масло получают после стерилизации фильтрацией.

Очищенное масло, полученное так, как описано выше, разливают в специальные емкости, проводят стерилизацию и получают таким образом 328 г орехового масла для парентерального введения.

Пример 1А. Экстракция органическим растворителем

Измельчают 500 г косточек орехов и экстрагируют эфиром в течение 7 часов в установке Soxhiet. После удаления эфира получают 270 г неочищенного косточкового масла орехов. Неочищенное масло используют для получения косточкового масла по изобретению.

Пример 1Б. Экстракция жидкостью в надкритическом состоянии

Измельчают 500 г косточек орехов и экстрагируют методом экстракции жидкостью в надкритическом состоянии (экстракция двуокисью углерода в надкритическом состоянии) при следующих условиях: скорость подачи СО₂ - 4-5 кг/ч, температура при экстракции - 35°С, давление при экстракции - 21-22 мПА, продолжительность экстракции - 3 ч. Получают 108 г неочищенного косточкового масла орехов. Неочищенное масло используют для получения косточкового масла по изобретению.

Пример 2

1. Экстракция сырья. Отжимают 30 кг ядер грецкого ореха и получают сырое масло, затем сырое масло фильтруют и получают 13,1 кг прозрачного сырого масла.

2. Обессмоливание. Сырое масло загружают в реактор и нагревают до температуры от 30°С до 35°С при перемешивании в атмосфере азота, добавляют к маслу 13,1 кг 85% фосфорной кислоты и смесь быстро перемешивают в течение 0,5 часов.

3. Каустическая очистка. Добавляют 717 г 5% раствора NaOH при той же температуре, какая указана выше, и в атмосфере азота, непосредственно в обессмоленное масло, смесь быстро перемешивают в течение 30 минут и затем быстро нагревают до температуры 60-65°С при медленном перемешивании. Медленное перемешивание продолжают в течение 15 минут и затем прекращают. После отстаивания при той же температуре и в атмосфере азота слои разделяют. Мыльный слой удаляют и получают 12,8 кг очищенного масла.

4. Промывка водой. При той же температуре к маслу после каустической очистки, полученному выше, при перемешивании добавляют 1,9 кг 0,2% раствора хлорида натрия. Смесь оставляют в спокойном состоянии и слои разделяют, сохраняя нагревание. Нижний слой жидких отходов отбрасывают. Промывку проводят дважды тем же способом, такой же продолжительностью и при той же температуре, за исключением того, что раствор хлорида натрия заменяют на чистую воду. После отстаивания слои разделяют. Нижний слой жидких отходов отбрасывают и получают 12,6 кг масла, промытого водой.

5. Обезвоживание. К маслу, промытому водой, полученному выше, добавляют 1,3 кг оксида алюминия, активированного при 160°С в течение 2 часов. Смесь тщательно перемешивают, оставляют в спокойном состоянии по меньшей мере на 0,5 часа, затем фильтруют и получают таким образом 12,0 кг обезвоженного масла.

6. Обесцвечивание. Обезвоженное масло, полученное выше, загружают в реактор и нагревают до 80-90°С при перемешивании в вакууме 0,082 МПа. При нормальном давлении добавляют смесь 22,5 г активированного угля и 337,5 г каолина, активированного при 160°С в течение 2 часов. Смесь тщательно перемешивают в течение 20 минут при 80-90°С и вакууме 0,082 МПа, затем охлаждают до 40°С и фильтруют. Таким образом получают 11,0 кг обесцвеченного масла.

7. Дезодорирование. Полученное выше обесцвеченное масло загружают в реактор из нержавеющей стали и нагревают до 140°С при перемешивании в вакууме 0,082 МПа. Затем вместо азота подают чистый водяной пар и масло нагревают до 190°С. Такую температуру сохраняют в течение 1,5 часов для поддержания нагревания. Затем пар перекрывают и снова при перемешивании подают азот. После охлаждения получают 10,6 кг дезодорированного масла.

8. Стерилизация. Дезодорированное масло загружают в сосуд для стерилизации и нагревают до 160°С при перемешивании в вакууме 0,082 МПа. Такую температуру поддерживают в течение 2 часов, затем масло охлаждают, стерилизуют фильтрацией, упаковывают в емкости в атмосфере азота и емкости запаивают. Таким образом получают 9,6 кг орехового масла для парентерального введения.

Далее для иллюстрации изобретения приведены примеры состава различных композиций по изобретению.

Композиция 1

Ореховое масло для инъекций	5-30 г
Лецитин для инъекций	1,0-3,0 г
Глицерин для инъекций	1,5-3,0 г
Витамин Е	0-0,15 г
Вода для инъекций	до 100 мл

Композиция 2

Ореховое масло для инъекций	20 г
Соевый лецитин для инъекций	1,2 г
Глицерин для инъекций	2,5 г
Витамин Е	0,06 г
Вода для инъекций	до 100 мл

Композиция 3

Фторурацил	1,0-5,0 г
Ореховое масло для инъекций	5,0-30 г
Соевый лецитин для инъекций	1,0-3,0 г
Глицерин для инъекций	1,5-3,0 г
Витамин Е	0-0,15 г
Вода для инъекций	до 100 мл

Композиция 4

Паклитаксел (таксол)	10-60 мг
Кокосовое масло	5-15 г
Ореховое масло для инъекций	5-15 г
Лецитин для инъекций	1,0-3,0 г
Глицерин для инъекций	1,5-3,0 г
Витамин Е	0-0,15 г
Вода для инъекций	до 100 мл

Композиция 5

Паклитаксел (таксол)	10-60 мг
Полиоксиэтилированное касторовое масло	1-5 г
Ореховое масло для инъекций	5-30 г
Лецитин для инъекций	1,0-3,0 г
Глицерин для инъекций	1,5-3,0 г
Витамин Е	0-0,15 г
Вода для инъекций	до 100 мл

Композиция 6

Гомогаррингтонин	0,05-0,2 г
Ореховое масло для инъекций	5,0-30 г
Соевый лецитин для инъекций	1,0-3,0 г
Глицерин для инъекций	1,5-3,0 г
Витамин Е	0-0,15 г
Вода для инъекций	до 100 мл

Композиция 7

Циклофосфамид	0,2-1,2 г
Ореховое масло для инъекций	5,0-30 г
Лецитин для инъекций	1,0-3,0 г
Глицерин для инъекций	1,5-3,0 г
Витамин Е	0-0,15 г
Вода для инъекций	до 100 мл

Пример 3

К 25 мл воды добавляют 1,2 г соевого лецитина и 2,5 г глицерина. Смесь перемешивают при 5000 об/мин до образования гомогенной полупрозрачной коллоидной дисперсии, затем добавляют 20 г орехового масла для инъекций и добавляют воду до общего объема 100 мл и таким образом получают первичную эмульсию. Регулируют рН первичной эмульсии до величины 6-9 с помощью раствора NaOH, и затем эмульсию переносят в гомогенизатор. Соответственно эмульсию гомогенизируют при низком давлении 10~20 МПа и высоком давлении 40~60 МПа, при температуре 60-80°С. Гомогенизацию повторяют 6 раз при тех же условиях, какие описаны выше. Полученную эмульсию фильтруют, разливают по емкостям и стерилизуют, в результате получают 20% жировую ореховую эмульсию для внутривенного введения.

Пример 4

К 20 мл воды добавляют 1,0 г желткового лецитина и 1,5 г глицерина. Смесь перемешивают при скорости, указанной выше, до образования гомогенной полупрозрачной коллоидной дисперсии, затем добавляют 10 г орехового масла для инъекций и добавляют воду до общего объема 100 мл и таким образом получают первичную эмульсию. Регулируют рН первичной эмульсии до величины 6-9, эмульсию гомогенизируют, фильтруют, разливают по емкостям и стерилизуют, в результате получают 10% жировую ореховую эмульсию для внутривенного введения.

Пример 5

К 30 мл воды добавляют 2,0 г соевого лецитина и 3,0 г глицерина. Смесь перемешивают при скорости, указанной выше, до образования гомогенной полупрозрачной коллоидной дисперсии, затем добавляют 30 г орехового масла для инъекций и добавляют воду до общего объема 100 мл и таким образом получают первичную эмульсию. Регулируют рН первичной эмульсии до величины 6-9, эмульсию гомогенизируют, фильтруют, разливают по емкостям и стерилизуют, в результате получают 30% жировую ореховую эмульсию для внутривенного введения.

Пример 6

Жировую эмульсию композиции 3 получают таким же способом, как в примере 3, за исключением того, что сначала растворяют фтор-урацил в адекватном количестве воды.

Пример 7

Жировую эмульсию композиции 4 получают таким же способом, как в примере 3, за исключением того, что паклитаксел сначала растворяют в кокосовом масле и затем смешивают с ореховым маслом для инъекций.

Пример 8

Жировую эмульсию композиции 5 получают таким же способом, как в примере 3, за исключением того, что паклитаксел сначала растворяют в полиоксиэтилированном касторовом масле и затем смешивают с ореховым маслом для инъекций.

Пример 9

Жировую эмульсию композиции 6 получают таким же способом, как в примере 3, за исключением того, что сначала растворяют гомогаррингтонин в адекватном количестве воды.

Пример 10

Жировую эмульсию композиции 7 получают таким же способом, как в примере 3 за исключением того, что в воду добавляют циклофосфамид вместе с соевым лецитином и глицерином и гомогенизируют.

Пример 11

Получают капсулы по изобретению для перорального введения, как описано далее.

В 900 г косточкового масла из косточек плодов финика опушенного или желтого дерева или ядер грецких орехов при перемешивании при комнатной температуре растворяют 0,675 г витамина Е как антиоксиданта и получают светлый и прозрачный раствор.

Взвешивают желатин, воду, глицерин и консервант в соотношении 1:1:0,4:0,001. В реактор загружают большую часть дистиллированной воды и нагревают до температуры 50-60°С, затем при перемешивании добавляют желатин, глицерин и консервант. Емкости промывают оставшейся дистиллированной водой, и промывочные воды выливают в реактор. Смесь в реакторе постепенно нагревают до тех пор, пока она не станет однородной и не растворятся полностью все вещества, затем реактор закрывают и включают вакуумный насос, чтобы остаточное давление составляло 0,065-0,080 МПа в течение 30-60 минут. Шлам фильтруют через сито 120 меш в сосуд для хранения и держат при температуре 50-60°С.

Получают 1000 капсул путем прессования в формах №8 при следующих условиях: комнатная температура 21-24°С, относительная влажность <40%, температура в камере для склеивания 50-60°С, напряжение делителя 110-150 В, температура склеивающего слоя 10-15°С, толщина клеевого шва 0,8-1,0 мм. Загружаемое количество содержимого регулярно проверяют. Через 4 часа после прессования капсулы вытирают для удаления масла и сушат в течение 8 часов, затем промывают петролейным эфиром (30-50°С) и снова сушат. Капсулы после изъятия некачественных капсул упаковывают.

Пример испытаний 1

Мышам вида Kunming (40 особей) массой 19-21 г, самцам и самкам в равном количестве, инъецировали в хвостовую вену эмульсию по изобретению в количестве 0,5 мл на массу тела 20 г. Инъекцию повторяли 3 раза в сутки с интервалом 4 часа. Максимальная переносимая доза составляла 75 мл/кг. За животными наблюдали в течение 7 дней. За время испытания не наблюдалось ни инверсного действия, ни гибели животных и не обнаруживалось анатомических нарушений в органах.

Гемолитические испытания проводили обычными способами проверки гомолитического действия. Гемолиза не наблюдали. Количественная оценка выраженности аллергических реакций на морских свинках не показана явной анафилаксии, вызываемой эмульсией изобретения.

Кроликам вводили эмульсию по изобретению в вену края уха медленно один раз в сутки в течение 7 дней при дозе 15 мл/кг и, мл/кг соответственно. Никоих явных раздражений в области вены на краю уха у кроликов не наблюдали.

Пример испытаний 2

Теплотворная способность орехового масла, по изобретению измеренная согласно GB384-81, составляла 37599 кДж/кг, что эквивалентно теплотворной способности сои (37243 кДж/кг), а теплотворная способность эмульсии орехового масла составляла 6303 кДж/кг.

Пример испытаний 3. Испытания на переносимость аноксии и утомляемость на мышах

Здоровых самцов мышей (40 особей) произвольно распределяли в 4 группы, основываясь на массе тела, по 10 особей в каждой группе. Три группы получали эмульсию орехового масла в дозах 25 мл/кг, 12,5 мл/кг и 6,25 мл/кг соответственно. Группа "стандартного физиологического раствора (NS)" получала такие же объемы стандартного физиологического раствора. Все испытываемые вещества инъецировали в хвостовую вену один раз в сутки в течение 7 дней, испытания проводили через 2 часа после последней инъекции.

Испытание на переносимость аноксии

Каждую подопытную мышь помещали в 250-мл бесцветную широкогорлую бутыль, содержащую 10 г натронной извести. Измеряли время от момента помещения мыши в бутыль до остановки дыхания. Вычисляли среднее время выживания (мин) и сравнивали различия между группами, получавшими эмульсию, и группой, получавший стандартный физиологический раствор.

Испытание на утомляемость

Мышей взвешивали. Каждой мыши давали нагрузку на хвост в размере 5% от массы тела и погружали в большой бак с водой, температура которой 25°С, толщина слоя воды 40 см. Мышей заставляли плавать до тех пор, пока они не погружались на дно и не погибали. Регистрировали продолжительность плавания каждой мыши (мин). Результаты анализировали статистически с использованием t-теста. Сравнивали различия между группами, получавшими эмульсию, и группой, получавшей стандартный физиологический раствор.

Таблица 1.
Влияние эмульсии орехового масла, вводимой внутривенно в разных дозах, на переносимость аноксии и утомляемость у мышей
Испытание - плавание с нагрузкой			Испытания на переносимость аноксии в атмосфере
Группа	Доза (мл/кг)	Продолжит. (мин) (x±SD)	Коэф. пролонг. (%)	Время выживания (мин) (х±80)	Коэф. пролонг. (%).
NS		9,18±5,0		30,46±5,33
Эмульсия	6,25	18,13±16,64	97,58	34,91±7,59	14,61
орехов.	12,5	19,96±9,65**	17,56	41,77±9,38**	37,13
масла	25	22,88±7,89**	149,31	43,73±5,37**	43,56
Сравнение со стандартным физиологическим раствором, Р<0,05, *Р<0,01

Здесь и далее: SD = средне-квадратичное отклонение

Результаты испытаний приводятся в табл.1. Статистический анализ испытания на переносимость аноксии показывает весьма существенное различие между средним временем выживания мышей, которым инъецирована эмульсия орехового масла как в высоких, так и в средних дозах, и мышей, которым инъецирован стандартный физиологический раствор (Р<0,01). Приведенные выше результаты также показывают, что влияние эмульсии орехового масла на переносимость аноксии и неспецифическую эрготропию мышей зависит от ее дозы.

Статистический анализ испытания на утомляемость показывает весьма существенное различие между продолжительностью плавания мышей, которым инъецирована эмульсия орехового масла как в высоких, так и в средних дозах, и мышей, которым инъецирован стандартный физиологический раствор (Р<0,01). Приведенные выше результаты также показывают, что эмульсия орехового масла при дозе 25 мл/кг вызывает заметную, зависящую от дозы пролонгацию продолжительности плавания мышей и заметное зависящее от дозы увеличение периода до наступления усталости.

Пример испытаний 4. Влияние на иммунные функции у мышей

Влияние на пролиферацию лимфоцитов

Мышей C57BL/6 (30 особей) произвольно распределяют в 5 групп (по 6 особей в каждой), которым вводят эмульсию орехового масла - 25 мл/кг, 12,5 мл/кг и 6,25 мл/кг; интралипид - 12,5 мл/кг и стандартный физиологический раствор (0,5 мл/мышь). Все композиции вводят внутривенно один раз в сутки в течение 7 дней. Животных умерщвляют после последнего введения, извлекают селезенки в асептических условиях и получают суспензии спленоцитов.

Спленоциты подсчитывают и доводят их содержание до 1×10⁷ клеток/мл. В каждую лунку 96-луночного микропланшета добавляют 100 мкл клеточной суспензии, 50 мкл ConA и 50 мкл среды RPMI-1640 при трехкратном повторе. Планшет инкубируют в течение 48 часов при 37°С в атмосфере с 5% СО₂. Затем добавляют ³H-TdR в количестве 0,5 мкКи на лунку, и планшет инкубируют еще в течение 18 часов. Клетки собирают с помощью устройства для сбора клеток и определяют СРМ (число импульсов в минуту) с помощью жидкостного сцинтиллционного счетчика. Сравнивают результаты для групп, получавших интралипид и стандартный физиологический раствор, и обработанных групп и контрольных групп.

Влияние на активность NK-клеток у мышей

Спленоциты считают и с помощью среды RPMI-1640 (производство Difco, содержит 15% бычьей сыворотки, меркаптоэтанол, Hepes и т.п.) доводят их концентрацию как эффекторных клеток до 1×10⁶ клеток/мл.

Концентрацию клеток YAC-1 как клеток-мишеней, инкубированных в течение 24 часов, доводят с помощью среды RPMI-1640 до 1×10⁴ клеток/мл.

В лунки 96-луночного микропланшета добавляют 100 мкл эффекторных клеток и 100 мкл клеток-мишеней и добавляют по 0,5 мкКи ³H-TdR в каждую лунку. Тесты повторяют три раза. Планшет инкубируют при 37°С в атмосфере с 5% СО₂, и клетки собирают. Определяют СРМ, и вычисляют специфическое ингибирование в процентах (Pi), представляющее активность NK-клеток.

Влияние на IL-2 у мышей

Суспензии спленоцитов доводят с помощью среды RPMI-1640 (производство Difco, содержит 15% бычьей сыворотки, меркаптоэтанол, Hepes и т.п.) до концентрации 1×10⁷ клеток/мл.

В каждую лунку 24-луночного планшета добавляют 2 мл клеток и 5 мкг/мл ConA. Планшет инкубируют при 37°С в атмосфере с 5% СО₂ в течение 24 часов и затем собирают супернатант. Активность IL-2 определяют методом введения ³H-TdR с использованием IL-2-зависимого клона CTLL. В каждую лунку 96-луночного титрационного микропланшета добавляют 100 мкл суспензии клеток CTLL при содержании 1×10⁵ клеток/мл, 20 мкл ³H-TdR и 100 мкл супернатанта. Определяют СРМ и проводят сравнение различий между обработанными группами и контролем.

сравнивают действие эмульсии орехового масла и интралипида.

Приведенные выше результаты показывают, что эмульсия орехового масла, вводимая i.v. при дозе 25, 12,5 или 6,25 мл/кг в течение 7 дней, явно может промотировать пролиферацию лимфоцитов, повышать активность естественных клеток-киллеров (NK-клеток) и промотировать образование IL-2 у мышей, т.е. влияние эмульсии изобретения на иммунные функции существенно превосходит влияние эмульсии соевого масла.

Пример испытаний 5

Мышей (40 особей) произвольно распределяют в 4 группы. Животным инъецируют 10 мл/кг стандартного физиологического раствора, эмульсию орехового масла 6,25 мл/кг, 12,5 мл/кг и 25 мл/кг соответственно, внутривенно в течение 7 дней. Животных умерщвляют после последнего введения и берут образцы крови для проверки на общий сывороточный белок.

Результаты приводятся в табл.3.

Пример испытаний 6. Подавление рака печени НАС и рака легких Льюиса у мышей

Собирают перитонеальные жидкости при хорошо развившемся НАС, разбавляют стандартным физиологическим раствором в соотношении 1:4 и получают клеточные суспензии. Каждой мыши инокулируют подкожно 0,2 мл клеточной суспензии подмышку. Животных произвольно распределяют в 4 группы: группу, получающую стандартный физиологический раствор, и группы, получающие эмульсию орехового масла - 25 мл/кг, 12,5 мл/кг и 6,25 мл/кг. На следующий день начинают введение внутривенно в течение 7 дней. Через десять дней после инокуляции животных умерщвляют путем смещения в шейном отделе позвоночника. Опухоли извлекают и сравнивают массы опухолей. Коэффициент подавления опухоли вычисляют с использованием формулы, приведенной далее. Результаты показаны в табл.4.

Собирают массу хорошо развившейся опухоли рака легких Льюиса, гомогенизируют в стандартном физиологическом растворе в соотношении 1:4 и получают клеточные суспензии. Каждой мыши инокулируют подкожно 0,2 мл клеточной суспензии подмышку. Животных произвольно распределяют в 4 группы: группу, получающую стандартный физиологический раствор, и группы, получающие эмульсию орехового масла - 25 мл/кг, 12,5 мл/кг и 6,25 мл/кг. На следующий день начинают введение внутривенно в течение 7 дней. Через десять дней после инокуляции животных умерщвляют путем смещения в шейном отделе позвоночника. Опухоли извлекают и сравнивают их массы. Коэффициент подавления опухоли вычисляют с использованием формулы, приведенной далее.

Результаты показаны в табл.5.

Из табл.4 и табл.5 видно, что эмульсия орехового масла в указанных выше дозах может, до некоторой степени, подавлять рак печени НАС и рак легких Льюиса у мышей.

При дальнейших исследованиях обнаружено, что эмульсия, полученная из орехового масла, также обладает указанными выше свойствами при использовании в качестве источника энергии. Это можно связать с ее функциями питания почек, согревания легких и послабления кишечника.

Возможность промышленного применения

Эмульсия орехового масла по изобретению для парентерального введения имеет постоянную композицию, а используемый эмульгатор является безопасным и заслуживающим доверия. Кроме функций снабжения питательными веществами и энергией, переносимости аноксии и повышения выносливости, усиления иммунных функций и повышения общего сывороточного белка, эмульсия также до некоторой степени подавляет рак печени НАС и рак легких Льюиса у мышей. Кроме того, эмульсия обладает функциями питания почек, согревания легких и послабления кишечника, которыми обладает исходное для нее вещество. Она является энергетической эмульсией с разнообразной эффективностью и может применяться для лечения опухолей, венерических болезней, СПИДа, пониженного иммунитета, недостатков питания у детей, после операций и при заболеваниях, при которых требуется поступление жировых элементов.

Экстракция по способу изобретения обеспечивает хорошее качество эмульсии с высоким выходом, и полученный экстракт оказывает нужное медицинское действие. В частности, за счет введения азота для защиты масла от окисления эффективно повышается качество косточковых масел.

Самым большим достоинством второго способа по изобретению является то, что не используется органический растворитель, так что устраняются загрязнения. Пероксидное число косточкового масла, экстрагированного с использованием указанного способа, может достигать величины менее 6,0 мэкв. кг^-1.

Claims

1. Косточковое масло, экстрагированное из косточек финика опушенного, желтого дерева или грецкого ореха, содержащее 90-99,9% триглицеридов, 0-5% диглицеридов, 0-3% моноглицеридов, 0,1-2,5% ситостеринов и 0-1% циклоланостерина.

2. Косточковое масло по п.1, характеризующееся тем, что при липолизе указанного косточкового масла образуются следующие жирные кислоты:

гексадекановая кислота (5-8%), октадекановая кислота (1-3%), октадеценовая кислота (18-30%), октадекадиеновая кислота (50-65%) и календовая кислота (6-14%).

3. Косточковое масло по п.1, характеризующееся тем, что оно обладает физическими свойствами жирного масла, а именно: относительной плотностью 0,920-0,930, показателем преломления 1,470-1,480, кислотным числом 0,80, йодным числом 120,0-155,0, числом омыления 180,0-200,0, пероксидным числом <30,0 мэкв. кг^-1, при этом зольный остаток составляет 0,01-0,04%, мышьяковые соли составляют <2 ч/млн, тяжелые металлы составляют <10 ч/млн и средняя мол. масса составляет 873,96.

4. Способ экстрагирования косточкового масла, охарактеризованного в пп.1-3, включающий отжимание косточек или косточек, измельченных в порошок, экстрагирование органическим растворителем или селективно при помощи жидкости в надкритическом состоянии с получением сырого масла; обесцвечивание сырого масла адсорбирующим обесцвечивающим веществом; растворение обесцвеченного масла в петролейном эфире, добавление стехиометрического количества NaOH при перемешивании, отстаивание и расслаивание, промывку органической фазы теплой водой с получением эмульсии; добавление ацетона к эмульсии при перемешивании, разделение слоев и получение масляной фазы в верхнем слое; обработку масляной фазы с целью абсорбции последовательно нейтральным оксидом алюминия и каолином, удаление после фильтрования органического растворителя из фильтрата в атмосфере азота, промывку масляной фазы теплой водой, нагревание масляной фазы в атмосфере азота для ее обезвоживания, адсорбирование нейтральным оксидом алюминия.

5. Способ экстрагирования косточкового масла, охарактеризованного в пп.1-3, включающий отжимание косточек или косточек, измельченных в порошок, экстрагирование органическим растворителем или селективно при помощи жидкости в надкритическом состоянии с получением сырого масла; перемешивание и нагревание сырого масла, добавление фосфорной кислоты для обеспечения полноты обессмолевания; добавление к обессмоленному маслу раствора NaOH или Na₂СО₃ при той же температуре для обеспечения полноты каустической очистки, отстаивание и расслоение смеси с получением таким образом очищенного масла; промывку очищенного каустической очисткой масла чистой водой с получением масла, промытого водой; добавление адсорбента в промытое водой масло или нагревание промытого водой масла в вакууме для удаления воды с получением таким образом прозрачного обезвоженного масла; обесцвечивание обезвоженного масла адсорбирующим обесцвечивающим веществом при нагревании под вакуумом; нагревание обесцвеченного масла под вакуумом и с перемешиванием в атмосфере азота с повышением температуры масла до 120-160°С, пропускание водяного пара из чистой воды при 160-260°С и выдерживание в течение 0,5-2 ч, затем прекращение подачи очищенного водяного пара и пропускание азота с перемешиванием для удаления влаги из масла.

6. Фармацевтическая композиция, улучшающая иммунологическую функцию, повышающая содержание сывороточных белков и задерживающая рост опухолей, содержащая терапевтически эффективное количество косточкового масла, охарактеризованного в пп.1-3, и один или несколько фармацевтически приемлемых адъювантов.

7. Фармацевтическая композиция по п.6, дополнительно содержащая одно или несколько противоопухолевых средств.

8. Фармацевтическая композиция по п.6, дополнительно содержащая одно или несколько растительных масел.

9. Фармацевтическая композиция по п.6, отличающаяся тем, что указанные фармацевтически приемлемые носители включают одно или несколько веществ, выбранных из группы, состоящей из эмульгатора, солюбилизатора, инертного растворителя, регулятора изотоничности, антиоксиданта и стабилизатора.

10. Фармацевтическая композиция по п.9, содержащая, г:

Ореховое масло для инъекций 5-30 Лецитин для инъекций 1,0-3,0 Глицерин для инъекций 1,5-3,0 Витамин Е 0-0,15 Вода для инъекций, мл До 100

11. Фармацевтическая композиция по п.10, содержащая, г:

Ореховое масло для инъекций 20 Соевый лецитин для инъекций 1,2 Глицерин для инъекций 2,5 Витамин Е 0,06 Вода для инъекций, мл До 100

12. Фармацевтическая композиция по п.7 или 9, содержащая, г:

Фторурацил 1,0-5,0 Ореховое масло для инъекций 5,0-30 Соевый лецитин для инъекций 1,0-3,0 Глицерин для инъекций 1,5-3,0 Витамин Е 0-0,15 Вода для инъекций, мл До 100

13. Фармацевтическая композиция по любому из пп.7-9, содержащая, г:

Паклитаксел (таксол) 10-60 Кокосовое масло 5-15 Ореховое масло для инъекций 5-15 Соевый лецитин для инъекций 1,0-3,0 Глицерин для инъекций 1,5-3,0 Витамин Е 0-0,15 Вода для инъекций, мл До 100

14. Фармацевтическая композиция по п.6, отличающаяся тем, что она изготовлена в виде капсулы, содержащей косточковое масло, охарактеризованное в пп.1-3.