CN106727915B - 一种稳定高效提高记忆的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种稳定高效提高记忆的组合物。尤其涉及元宝枫籽油、磷虾油、脂溶性迷迭香提取物配伍组合物及其制备方法和应用。所述组合物以重量份数49～90份的元宝枫籽油，重量份数10～51份的磷虾油，重量份数0.01～0.03份的脂溶性迷迭香提取物组成。其中，元宝枫籽油神经酸含量≥5％；磷虾油DHA含量在4.5％～6％之间；脂溶性迷迭香提取物鼠尾草酸含量在10％～20％之间。试验表明：本发明所提供的组合物在稳定性、吸收利用率、改善记忆及认知功能障碍等方面显著优于组合前各组成物质，对于开发利用元宝枫籽油、磷虾油、迷迭香提取物等新资源食品及食品添加剂具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种显著提高稳定性、吸收利用率及生物活性，用于改善记忆及认知功能障碍的组合物，尤其涉及一种元宝枫籽油、磷虾油、脂溶性迷迭香提取物的配伍组合物。
技术背景
记忆功能是人类获取知识、经验和从事不同作业活动的生理基础，是衡量智能发育的重要指标。记忆能力下降的诱因可分为两类:一类是由于衰老导致脑部生理功能减退造成的记忆能力下降，常见的有老年性痴呆、更年期等；另一类是由于应激损伤造成的记忆能力下降，常见的有心理应激、作业疲劳、脑外伤等。
记忆能力的下降甚至退化与人体健康状况、大脑生理老化、大脑创伤以及病理性变化等有着密切的关系。除此之外，经济、社会飞速发展所带来的压力也会导致不同年龄阶层的人出现记忆紊乱，从而影响正常生活。目前针对因生理性老化或疾病而导致记忆退化改善的理论研究已有许多，同时针对改善记忆功能的药物研究非常活跃，但由于这些药物靶点单一、缺乏足够的有效性且毒副作用较大、不易透过血脑屏障、吸收利用率低等，目前大多仅用于缓解症状，使得临床及普通人群的使用受到一定限制。
元宝枫籽油为国家卫计委(原卫生部)批准的新资源食品(公告2011年第9号)，公告规定的生产工艺以元宝枫种仁为原料，经压榨、脱色、脱臭等制成，神经酸含量≥3％。磷虾油为国家卫计委(原卫生部)批准的新资源食品(公告2013年第16号)，公告规定的生产工艺以南极大磷虾为原料，经水洗、破碎、提取、浓缩、过滤等步骤制得，DHA含量≥3％。迷迭香提取物收载入食品安全国家标准《食品添加剂使用标准》(GB 2760-2014)中，可添加到植物油脂、动物油脂中作为食品添加剂使用，其中植物油脂中最大使用限量为0.7g/kg、动物油脂中最大使用限量为0.3g/kg。
一种提高免疫力、治疗三高的磷虾油复方制剂(专利申请公布号：CN105146543A)公开了一种提高免疫力、治疗三高的磷虾油复方制剂。该制剂由磷虾油78-85份、芥蓝籽油12-18份、元宝枫籽油3-6份、美藤果油2-5份、长柄扁桃油4-9份、维生素E1-0.7份、蜂蜡2-7份组成。说明书记载的组成物质除磷虾油中要求总磷脂含量大于30％、EPA含量大于8％、DHA大于6％外，并无其他组成物质的工艺及质量要求。
本发明所述组合物由重量份数49～90份的元宝枫籽油、10～51份的磷虾油、0.01～0.03份的脂溶性迷迭香提取物组成。其中，元宝枫籽油系采用元宝枫种仁为原料，经85～90℃蒸炒40min、物理压榨、真空过滤得到，神经酸含量≥5％；磷虾油系采用南极大磷虾为原料，经破碎、CO2超临界抽提(添加浓度为95％、比例为虾粉质量10％的乙醇作夹带剂、35℃、30MPa连续萃取1h)得到，DHA含量在4％～6％之间；脂溶性迷迭香提取物系采用迷迭香茎、叶为原料，经粉碎、CO2超临界抽提(采用95％乙醇与迷迭香叶质量比2：5为夹带剂、50℃、20MPa连续萃取4h)得到，鼠尾草酸含量在10％～20％之间。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种显著提高稳定性、吸收利用率及生物活性的组合物。第二目的在于提供该组合物的制备方法及应用。
本发明的目的是采用以下技术方案来实现的。
一方面，本发明提供一种显著提高稳定性、吸收利用率及生物活性的组合物，所述组合物由重量份数49～90份的元宝枫籽油，重量份数10～51份的磷虾油，重量份数0.01～0.03份的脂溶性迷迭香提取物组成。
优选地，所述组合物由重量份数54～76份的元宝枫籽油，重量份数24～46份的磷虾油，重量份数0.013～0.027份的脂溶性迷迭香提取物组成。
进一步优选，所述组合物由重量份数60～67份的元宝枫籽油，重量份数33～40份的磷虾油，重量份数0.016～0.024份的脂溶性迷迭香提取物组成。
最优选，所述组合物由重量份数62～65份的元宝枫籽油，重量份数35～38份的磷虾油，重量份数0.018～0.022份的脂溶性迷迭香提取物组成。
另一方面，本发明提供该组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
步骤1：采用元宝枫种仁为原料，经加热至85～90℃蒸炒40min，选用95型螺旋榨油机(配真空挤压式过滤机)物理压榨，得元宝枫籽油。检测神经酸的含量≥5％。
步骤2：以南极大磷虾为原料，破碎后置HL-ⅡA型超临界(CO2)流体萃取装置中，选用浓度为95％、比例为虾粉质量10％的乙醇作为夹带剂，在萃取温度35℃、萃取压力30MPa下连续萃取1h，得磷虾油。检测DHA含量在4％～6％之间。
步骤3：以迷迭香茎、叶为原料，粉碎后置HL-ⅡA型超临界(CO2)流体萃取装置中，选用浓度为95％、与迷迭香茎叶质量比为2：5的乙醇作为夹带剂，在萃取温度50℃、萃取压力20MPa下连续萃取4h，得脂溶性迷迭香提取物。其中，鼠尾草酸的含量在10％～20％之间。
步骤4：按本发明重量份数及优选重量份数称取步骤1～3制备的元宝枫籽油、磷虾油、脂溶性迷迭香提取物，置洁净不锈钢容器中，充分搅拌混合均匀，即得所述组合物。
此外，本发明还提供了上述组合物在制备用于改善记忆及认知功能障碍的药品、保健食品、功能性普通食品、特殊医学食品、特殊膳食食品等方面的应用。
与现有技术相比：本发明步骤1～3制备的元宝枫籽油、磷虾油、脂溶性迷迭香提取物来源于新资源食品/食品添加剂但高于新资源食品/食品添加剂质量要求，通过本发明组合物组成比例、优选组成比例及具体实验数据验证，达到显著提高稳定性、吸收利用率、改善记忆及认知功能障碍的技术效果，具有显著进步和实质性意义。
具体实施方式：
下面通过具体实施例对本发明作进一步说明，但不以任何方式对本发明限制，基于本发明教导所作的任何变化或替换，均属本发明保护范围。
实施例1：组合物料的制备
元宝枫籽油：取元宝枫种仁2000g，置蒸汽加热炒锅中加热蒸炒40min，温控85～90℃。取出置于95型螺旋榨油机(配备真空挤压式过滤机装置)物理压榨，得元宝枫籽油720g，得率为36％，检测神经酸含量为6.0％。
磷虾油：取南极大磷虾1500g，置HL-ⅡA型超临界(CO2)流体萃取装置萃取釜中，连好管路，添加95％乙醇150g作为夹带剂，开启设备，设置萃取温度为35℃，萃取压力30MPa，待工艺参数稳定后，连续萃取1h，收集萃取磷虾油765g，得率为51％，检测DHA含量为5.0％。
脂溶性迷迭香提取物：取2000g迷迭香茎叶粗粉，置HL-ⅡA型超临界(CO2)流体萃取装置的萃取釜中，连好管路，添加95％乙醇800g作为夹带剂，设置萃取温度50℃，萃取压力20MPa，开启设备待工艺参数稳定后，连续萃取4h，收集萃取物得脂溶性迷迭香提取物224g，得率为11.2％，检测鼠尾草酸的含量为15.0％。
实施例2：组合物制备
取实施例1制备的元宝枫籽油49g、磷虾油51g、脂溶性迷迭香提取物0.01g，置洁净不锈钢容器中，充分搅拌使混合均匀，即得。
实施例3：组合物制备
取实施例1制备的元宝枫籽油54g、磷虾油46g、脂溶性迷迭香提取物0.013g，置洁净不锈钢容器中，充分搅拌使混合均匀，即得。
实施例4：组合物制备
取实施例1制备的元宝枫籽油60g、磷虾油40g、脂溶性迷迭香提取物0.016g，置洁净不锈钢容器中，充分搅拌使混合均匀，即得。
实施例5：组合物制备
取实施例1制备的元宝枫籽油62g、磷虾油38g、脂溶性迷迭香提取物0.022g，置不锈钢容器中，充分搅拌使混合均匀，即得。
实施例6：组合物制备
取实施例1制备的元宝枫籽油76g、磷虾油24g、脂溶性迷迭香提取物0.027g，置不锈钢容器中，充分搅拌使混合均匀，即得。
实施例7：组合物制备
取实施例1制备的元宝枫籽油90g、磷虾油10g、脂溶性迷迭香提取物0.03g，置不锈钢容器中，充分搅拌使混合均匀，即得。
实施例8：不添加辅料的软胶囊制备
取实施例5制备的组合物以明胶、甘油和水作为囊材制备成改善记忆力的软胶囊。
实施例9：添加辅料的软胶囊制备
取实施例5制备的组合物，添加大豆油、玉米油、红花油、橄榄油等植物油脂中的一种或几种，并以明胶、甘油和水作为囊材制备成提高记忆和改善认知功能障碍的软胶囊。
实施例10：滴丸的制备
取实施例5制备的组合物，添加硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、蜂蜡、氢化植物油中的一种或几种作为基质，并以水或不同浓度乙醇作为冷凝介质制备成改善认知功能障碍的滴丸。
实施例11：胶囊剂、颗粒剂、片剂等固体口服制剂的制备
取实施例5制备的组合物，添加a-环糊精、β-糊精、羧甲基纤维素钠、明胶、聚维酮、PEG-4000、PEG-6000等中的一种或几种，通过包合、微囊化、固体分散技术中的一种或几种，可制成提高记忆和改善认知功能障碍的胶囊剂、颗粒剂、片剂等固体口服制剂。
为了更进一步对本发明组合物技术效果进行说明，本发明选取实施例5所制备的组合物作为试验样品，编号为⑤。选取实施例1制备的元宝枫籽油、磷虾油、脂溶性迷迭香提取物以及三者非本发明组合物比例制备的组合物(由实施例1制备的元宝枫籽油50g、磷虾油100g、脂溶性迷迭香提取物0.05g混合制成)作为对照样品，编号为依次为①、②、③、④。开展加速稳定性、吸收利用率、水迷宫、跳台、短暂性脑缺血所致记忆障碍的改善等比较试验，结果如下：
1.加速稳定性试验
考察指标确定：一方面，本发明组合物及其组成物质均为植物/动物油脂，根据食品安全国家标准及相关行业标准，推荐选用过氧化值、碘值作为植物/动物油脂酸败程度及不饱和程度的稳定性考察指标【备注：鉴于脂溶性迷迭香提取物(样品③)主要含萜类、酚类化合物，不适宜用过氧化值和碘值作为考察指标，故本试验未开展所述指标稳定性考察】。另一方面，本发明组合物组成物质均限制了功能成分含量限度，为充分验证加速试验条件下功能成分含量的稳定性，本试验还选取组合物及各组成物质所对应的功能成分含量作为稳定性考察指标。
试验方案设计：分别取编号为①、②、③、④、⑤的试验样品各100g，置于洁净透明玻璃瓶中，按原料药物与制剂稳定性试验指导原则(《中国药典》2015版四部9001)，置温度为40℃士2℃、相对湿度75％士5％的条件下放置6个月，分别于0个月、1个月、2个月、3个月、6个月取样测定过氧化值、碘值、组合物及组成物质对应的功能成分含量，试验数据见表1、表2。
表1：过氧化值、碘值稳定性考察结果
表2：对应功能成分含量稳定性考察结果
由表1、表2看出：经6个月加速试验后，样品①过氧化值增大约4.5倍，碘值降低约50％，功能成分神经酸衰竭率为53％；样品②过氧化值增大约3.3倍，碘值降低约50％，功能成分DHA衰竭率为56％；样品③功能成分鼠尾草酸衰竭率为58％；样品④过氧化值增大约2.5倍，碘值降低约1/3，组合物功能成分神经酸衰竭率为36％、DHA衰竭率为38％、鼠尾草酸衰竭率60％；样品⑤过氧化值、碘值未出现明显变化，功能成分神经酸衰竭率为2.2％、DHA衰竭率为7.3％、鼠尾草酸衰竭率6.1％。
试验结论：经6个月加速稳定性考察，样品①～④均出现明显酸败/不饱和程度降低、功能成分含量明显衰竭；样品⑤(本发明所述组合物)酸败/不饱和程度、功能成分含量变化不明显，质量稳定。
2.吸收利用率试验
监测指标确定：以各组成物质及其组合物对应的功能成分为监测指标，考察灌胃给予试验样品后被吸收进入血液的功能成分浓度，从而计算吸收利用率。
试验方案设计：采用体重约3kg的健康家兔5只，随机分为5组，预先禁食12h后，分别灌胃给予①～⑤号样品各0.2g。给予样品后3h从耳静脉采血，检测血液中各样品对应功能成分含量，按下述公式计算吸收利用率，结果见表3。
表3：试验样品功能成分吸收利用率检测结果
由表3看出：样品①～③所对应的功能成分吸收利用率均未超过30％；样品④虽有所提高，但未超过55％，接近一半功能成分未被吸收利用；样品⑤功能成分吸收利用率达到80％。
试验结论：样品⑤中功能成分神经酸吸收利用率为样品①的2.9倍、为样品④的1.6倍；DHA的吸收利用率为样品②的2.9倍、样品④的1.6倍；鼠尾草酸的吸收利用率为样品③的3.4倍、样品④的1.6倍。说明通过本发明制备的组合物，其功能成分吸收利用率较组合前各组成物质显著提高。
3.水迷宫试验
试验动物及剂量：采用昆明种小鼠共50只，体重18～22g，雌雄各半。随机分为5组，每组10只，雌雄各5只。根据60kg成年人神经酸日推荐剂量为0.125g这一公知常识，计算样品①～⑤给样剂量如下：小鼠神经酸折算剂量为125mg/60kg×9.01＝18.7mg/kg，每只小鼠(平均体重20g)神经酸折算剂量为0.374mg/只。据此：折算成样品①的给样剂量为6.23mg/只、折算成④的给样剂量为18.71mg/只、折算成样品⑤的给样剂量为10.052mg/只。根据样品⑤的给样剂量折算样品②的给样剂量为3.82mg/只、样品③的给样剂量为0.002mg/只。
试验方案设计：各样品组动物连续给样四周，末次给样后次日开始训练，训练期间继续给样，水迷宫由直径为250cm，高60cm的圆形水池构成，水深15cm，水温保持在25℃，距迷宫周边50cm处有黄色帘布围住迷宫，帘布上悬挂4个黑色标示物分别对应一个象限，在任一象限的水面下置一高11cm，面积为13cm×13cm的有机玻璃平台供动物逃避溺水，每次在水槽同一点释放小鼠，记录小鼠到达平台的潜伏时间(s)，时间限定为120s，在120s内未到达终点的动物均计为120s，以此作为训练成绩，每日训练四次，共训练11天，前7天为不可见平台训练，即平台被淹没在水中，后4天为可见平台训练，在平台上树立一标志物，以便小鼠能够确定平台位置，试验数据经统计学处理后，结果见表4。
表4：小鼠水迷宫试验结果
样品⑤相较于样品①～④，潜伏时间统计学比较P值均小于0.01，具有高度的统计学意义。
试验结论：表4看出，样品①、②、④潜伏时间统计学处理结果显示一定记忆改善作用，但改善的统计学差异不明显；样品③潜伏时间统计学处理结果接近120s，未显示记忆改善作用；样品⑤相较于样品①、②、③、④潜伏时间显著下降，显示出良好的记忆改善作用。说明本发明所述的组合物对小鼠的学习记忆和空间记忆有显著的改善作用。
4.跳台试验
试验动物及剂量：采用昆明种小鼠共50只，体重18～22g，雌雄各半。随机分为5组，每组10只，雌雄各5只。根据60kg成年人神经酸日推荐剂量为0.125g这一公知常识，计算样品①～⑤给样剂量如下：小鼠神经酸折算剂量为125mg/60kg×9.01＝18.7mg/kg，每只小鼠(平均体重20g)神经酸折算剂量为0.374mg/只。据此：折算成样品①的给样剂量为6.23mg/只、折算成④的给样剂量为18.71mg/只、折算成样品⑤的给样剂量为10.052mg/只。根据样品⑤的给样剂量折算样品②的给样剂量为3.82mg/只、样品③的给样剂量为0.002mg/只。
实验方案设计：各样品组动物连续给样四周，末次给样后次日开始训练，训练期间继续给样。实验装置为一长方形反射箱，大小为10cm×10cm×60cm，用黑色塑料板分割成5间。地面铺以铜栅，间距为0.5cm，可以通电，每间左后角置一高和直径为4.5cm的平台。将动物放入反应箱内适应环境3min，然后立即通以36V交流电。动物受到电击，其正常反应是跳回平台躲避伤害性刺激。多数动物可能再次跳回至铜栅上，受到电击后又迅速跳回平台，如此训练5min，并记录每只鼠受到电击的次数(错误次数)，以此作为学习成绩。24h后重新作测验，即记忆保持测验。记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和5min内的错误总数，试验数据经统计学处理后，结果见表5。
表5：小鼠跳台试验统计学结果
样品⑤相较于样品①～④各组，其学习潜伏时间、学习错误次数、记忆潜伏时间、记忆潜伏期、记忆错误次数P值均小于0.01，具有高度的统计学意义。
试验结论：表5看出，样品⑤相较于样品①～④，其小鼠应激学习记忆改善作用具有高度统计学差异，说明本发明所述的组合物对小鼠的应激学习记忆有显著的改善作用。
5.短暂性脑缺血所致的记忆障碍改善试验
试验动物及剂量：昆明种6周龄雄性小鼠共50只，体重18～22g，随机分为5组，每组10只。根据60kg成年人神经酸日推荐剂量为0.125g这一公知常识，计算样品①～⑤试验剂量如下：小鼠神经酸折算剂量为125mg/60kg×9.01＝18.7mg/kg，每只小鼠(平均体重20g)神经酸折算剂量为0.374mg/只。据此：折算成样品①的给样剂量为6.23mg/只、折算成④的给样剂量为18.71mg/只、折算成样品⑤的给样剂量为10.052mg/只。根据样品⑤的给样剂量折算样品②的给样剂量为3.82mg/只、样品③的给样剂量为0.002mg/只。手术前3天按推荐的给样剂量开始分别灌胃样品至试验结束。以5％的水合氯醛作为麻醉剂，用量300mg/kg。
试验方案设计：以5％的水合氯醛腹腔注射(300mg/kg)麻醉，待小鼠无翻正反射后仰卧固定于手术台上，保持呼吸通畅，常规消毒，经颈部做0.8～1cm正中切口，切开皮肤和皮下组织，钝性分离二腹肌和胸锁乳突肌，暴露颈动脉鞘，然后小心分离双侧颈总动脉及迷走神经约0.5～1cm，并于颈总动脉下穿零号丝线，备用。提拉丝线，以无创伤性微动脉夹夹闭颈总动阻断血流15min，然后去除，恢复灌注15min，如此反复3次，最后缝合皮肤，消毒，以青霉素肌注抗炎。
术后第5天灌胃1h后进行避暗试验：将小鼠尾部朝向暗室放入避暗箱明室，小鼠进入暗室会受到1～2次电击，如小鼠不进入，则驱入暗室，使之产生记忆，共5min。第2天进行测试，记录小鼠四肢全部进入暗室的次数，进入暗室的时间为潜伏期，如果300s小鼠未进入暗室，错误次数计为0次，潜伏期计为300s。试验数据经统计学处理后，结果见表6。
表6：短暂性脑缺血所致的记忆障碍改善试验结果
样品⑤相较于样品①～④，其潜伏时间、错误次数统计学处理结果P值均小于0.01，具有高度的统计学意义。
试验结论：表6看出，样品⑤相较于样品①～④，其小鼠因短暂性缺血所致记忆障碍改善均具有高度统计学差异，说明本发明所述的组合物对小鼠因短暂性缺血所致的记忆障碍有显著的改善作用。
Claims (5)
1.一种提高稳定性、吸收利用率及生物活性，用于改善记忆及认知功能障碍的组合物，其特征在于：所述组合物由重量份数49～90份的元宝枫籽油，重量份数10～51份的磷虾油，重量份数0.01～0.03份的脂溶性迷迭香提取物组成；所述元宝枫籽油系采用元宝枫种仁为原料，经85～90℃蒸炒40min，物理压榨制得，神经酸含量≥5.0％；所述磷虾油系采用破碎的南极大磷虾为原料，以用量为原料质量10％、浓度为95％乙醇为夹带剂，在萃取温度35℃、萃取压力30MPa条件下经CO2超临界萃取制得，DHA含量在4.0％～6.0％之间；所述脂溶性迷迭香提取物鼠尾草酸含量在10.0％～20.0％之间。
2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于：所述组合物由重量份数54～76份的元宝枫籽油，重量份数24～46份的磷虾油，重量份数0.013～0.027份的脂溶性迷迭香提取物组成。
3.根据权利要求1所述组合物，其特征在于：所述组合物由重量份数60～67份的元宝枫籽油，重量份数33～40份的磷虾油，重量份数0.016～0.024份的脂溶性迷迭香提取物组成。
4.根据权利要求1所述组合物，其特征在于：所述组合物由重量份数62～65份的元宝枫籽油，重量份数35～38份的磷虾油，重量份数0.018～0.022份的脂溶性迷迭香提取物组成。
5.根据权利要求1～4任意一项所述组合物，其特征在于：所述组合物添加或不添加药品、保健食品、特殊医学配方食品、特殊膳食食品可接受的辅料，制成滴丸、片剂、颗粒剂、胶囊剂用于药品、保健食品、特殊医学配方食品、特殊膳食食品。
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