CN1927281A - 一种防治兔、鸡球虫病的中草药缓释注射剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防治兔、鸡球虫病的中草药缓释注射剂及其制备方法，属于畜、禽寄生虫药物防治技术领域。该缓释注射剂的组分与重量含量为：青蒿、苦参各3～6份，白头翁、仙鹤草、柴胡各2～5份，包合剂β－环糊精2～4份；原料药经二次95％乙醇浸提后，制成乙醇提取液A1，残渣经二次水提取后，制成水提取液A2；用热冷交替法分别除去A1和A2中的鞣质；再与β－环糊精包合，最终制成每毫升药液中含有相当于原料生药1.0g的缓释注射剂。该药不经口服用，给药的剂量准确，每只病兔、鸡注射2ml，可大大降低药物的用量，易于吸收，作用迅速，有效防治时间长达2个月以上，降低了用药成本，无毒副作用，并延缓球虫耐药性产生的速度，保持了一些抗球虫药的敏感性，进一步延缓球虫抗药性的产生。该药可用于兔、鸡生产中的球虫病防治。

Description

一种防治兔、鸡球虫病的中草药缓释注射剂及其制备方法

                        技术领域

本发明涉及畜禽寄生虫药物防治技术领域，尤其涉及一种防治兔、鸡球虫病的中草药缓释注射剂及其制备方法。

                        背景技术

球虫病是对养兔业、养鸡业危害最严重的一种寄生虫病。球虫病对兔的病死率可达40～80％，我国每年用于抗球虫药物的费用高达数十亿元。

截止目前，控制球虫病的主要手段仍然依赖于抗球虫药的化学防治。由于抗球虫药，例如地克珠利、氯羟吡啶的长期使用，球虫对药物产生耐药性成了无法避免的严重问题，目前市售的任何一种抗球虫药在使用一定时间后，都会引起球虫的耐药性。

由于球虫耐药菌株日益增多，便使许多抗球虫药的防治效果显著降低，甚至完全失效，即使是提高药物浓度也无济于事，反而导致药物在动物体内的残留，影响食品安全。进入上世纪七十年代，抗球虫新药的开发速度已经赶不上耐药虫株出现的速度，尤其是球虫的多重耐药性虫株的出现，更是给球虫病有效的药物防治提出了难题。

球虫耐药虫株的产生，一般认为是球虫自发突变个体在药物重复选择压力的相互作用下逐渐形成的。尤其需要特别注意的是，人们普遍认为，药物剂量大不易形成耐药虫(菌)株，只有少量多次接触，方易形成的观点，但这对球虫耐药虫株的产生却不适用，有证据表明球虫耐药性产生的速度与药物浓度的选择压力成正比(Chpman，1976)。甘德培等(1998)，以初始诱导剂量0.7mg/kg的地克珠利，经过10次继代，诱导出了1.25mg/kg的地克珠利耐药虫株；而使用75mg/kg的初始诱导剂量，只须经过6代就能诱导出150mg/kg的地克珠利耐药虫株。

因此，合理用药是延缓球虫耐药性产生的有力措施。人们在实践中以穿梭用药、轮换用药等措施来延缓抗药性虫株的产生，但这两种使用方法也存在潜在的危险性，前者可能会使球虫产生多重耐药虫株，后者可能会导致球虫产生交叉耐药性。对付耐药性形成比较有效的策略是联合用药，即将两种或多种抗球虫药按最佳比例配合使用，既可提高疗效，又可降低单一药物的使用浓度，在一定程度上延缓球虫耐药性产生的速度，保持了一些抗球虫药的敏感性。

中草药种类很多，每种中草药的成分均很复杂，一种药物中往往又含有多种有效成分，多种功能，中草药组成复方后成分更加复杂，是名符其实的联合用药。所以，球虫不容易对其产生耐药性。另外，中草药为纯天然物质，经精选组方的中草药抗球虫药物安全性高，越来越受到人们的重视与欢迎。但目前中草药抗球虫药多数为散剂或煎饮剂，后者不宜长期保存，多用于爆发球虫病后的治疗；前者容易加工和保存，使用比较方便，混入饲料既可作治疗药也可作预防药，但用量较大，一般要占饲料量的1％～5％。通常治疗用量较高，并需连续服用数天；预防剂量稍低，混入饲料长期连续服用，成本较高。从上可见，当前绝大多数的抗球虫中草药，无论是煎饮剂或是粉剂，都是通过口服方式给药，但当鸡或兔发生球虫病较严重时，食欲减退乃至废绝，动物不能通过口服而获得应达到的治疗剂量，结果防治效果就大受影响。同时，虽然普遍认为中草药抗球虫药比较安全，但还是有报道证明某些抗球虫中草药与化学抗球虫药一样，服用后对动物的生长有一些抑制作用，因此，目前抗球虫中草药在生产的应用还存在用量大、贮存难、不安全及防治疗效不稳定，不显著，成本过高等问题急需研究解决。

                            发明内容

本发明的目的是针对上述存在问题，提出一种把中草药活性成分提取物制成注射型缓释剂，使给药的剂量准确，并可大大降低药物的用量，延长有效防治时间，降低成本，同时不受受体动物食欲的影响，进一步延缓球虫抗药性产生的防治兔、鸡球虫病的中草药缓释注射剂；本发明的另一目的是提出该中草药缓释注射剂的制备方法。

本发明抗球虫中草药缓释注射剂选择青蒿、苦参、白头翁、仙鹤草、柴胡进行组合，使得各药物功效产生协同作用，从而能有效防治兔、鸡球虫病，并延缓球虫抗药性的产生。其中，青蒿清热凉血，含有青蒿素、苦味质和挥发油等药用成分，青蒿素有强力抗原虫作用。苦参清热燥湿、袪风杀虫，含有苦参碱、氧化苦参碱等生物碱及黄酮类物质，有抗原虫和杀灭蛲虫的作用，据文献报道，青蒿对球虫子孢子和第一、二代裂殖体具有一定的抑制作用。白头翁清热解毒、凉血止痢，含有白头翁素、三萜皂苷等药用成分，具有抗阿米巴原虫作用，并有明显杀灭阴道滴虫(一种原虫)作用。青蒿、苦参和白头翁在体外试验中均有较强的抑制球虫卵囊孢子化作用。柴胡解表退热、疏肝解郁、升提阳气，含有柴胡苷、柴胡醇及α-波菜甾醇等挥发油，具有抑制结核杆菌、多种病毒及疟原虫的作用。仙鹤草收敛止血、补虚、杀虫，含仙鹤草素、仙鹤草内酯、鞣质、甾醇、有机酸、皂苷等，有抗病毒和原虫作用，根芽有驱除绦虫作用。从上可见五种有效成分各异但均具有抗原虫作用。

为了达到更好的防治效果，本发明药物还与石榴皮、地榆、黄柏、秦皮、白芍、当归、甘草进行组合。这是因为石榴皮涩肠止泻、止血、杀虫疗癣，含没食子酸、石榴皮鞣素、熊果酸、桦皮素、异槲皮苷及生物碱等，有治久痢便血和杀绦虫及蛔虫等寄生虫作用。地榆凉血止血、清热解毒，含鞣质、三萜皂苷和维生素A等，主治血痢菌痢、消化道出血等。黄柏清热燥湿、泻火解毒、清虚热、杀虫安蚘，含有小蘖碱、黄柏碱、黄柏酮、掌叶防己碱等生物碱及甾醇类物质，主治目赤便秘、水泻热痢等症，具有广谱的抗菌作用。秦皮清热燥湿、涩肠止泻、清肝明目，含秦皮素、秦皮苷等，对痢疾杆菌、阿米巴滋养体、皮肤真菌均有抑制作用，在体外有抑制球虫卵囊化作用。白芍养血敛阴、泻肝安脾，主要含含芍药苷、牡丹酚、芍药花苷、苯甲酸、芍药碱、鞣质、挥发油等，主治胸腹胁肋疼痛、泻痢腹痛、阴虚发热等，具有镇静、镇痛、延长睡眠时间、提高动物抗应激能力作用，对痢疾杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌、溶血链坏菌、肺炎双球菌等有较强的抑制作用，其醇提取物对网状内皮系统吞噬功能和腹腔巨噬细胞吞噬功能有显著的增强作用。当归养血生肌、腓脓内托、润肠胃、泽皮肤、补血活血，主要含藁本内酯、正丁烯酜内酯、阿魏酸、当归多糖等，有促进血红蛋白及红细胞生成，抗贫血与造血作用，有显著提高单核吞噬细胞和腹腔巨噬细胞吞噬异物能力与其它药物配伍可治疗虚寒性结肠炎等疾病。甘草补中益气、清热解毒、润肺止咳、缓急止痛、调和药性，主要含甘草甜素、甘草苷及类肾上腺皮质激素等成分，可用于脾虚气弱，少食腹泻、脘腹拘挛疼痛、胃寒腹痛、泄泻等，还具有解百药毒，与不同药物配伍，均能协调一致发挥其效能的作用。以上药物有的是治疗球虫病血便的治标药物，增强动物造血机能，防止因失血、贫血而对动物机体产生不利影响；有的是防治球虫病继发或并发其它细菌性疾病(如痢疾杆菌病、大肠杆菌病等)；有的是增强机体免疫功能，发挥动物自身对球虫的免疫作用；有的是为了消除药物可能有的副作用。以上药物协同主药标本兼治，以发挥最佳的整体抗球虫效果。

在明确上述各原料药作用的基础上，提出以下实现本发明目的的技术方案：

一种防治兔、鸡球虫病的中草药缓释注射剂，它由下列重量份的原料药及辅剂组成：青蒿、苦参各3～6份，白头翁、仙鹤草、柴胡各2～5份，包合剂β-环糊精2～4份，其含药量为每毫升注射剂中含有相当于原生药量1.0g。

所述的缓释注射剂，其中各原料药的优选用量为青蒿4份、苦参4份、白头翁3份、仙鹤草3份、柴胡2份和β-环糊精2.4份。

所述缓释注射剂的制备方法，包括下列步骤：

(1)称取青蒿、苦参、仙鹤草、白头翁、柴胡原料药，在45～50℃下干燥，分别粉碎、混合，备用；

(2)将步骤(1)粉状混合物加95％乙醇浸提二次，每次加乙醇量以超过药面1～2cm为宜，浸泡时间2～3天，分离提取液，把两次提取液合并为乙醇提取液A1；再把第二次醇提取后的残渣加蒸馏水提取2次，每次加水量以没过药面为宜，浸泡时间2～3天，分离提取液，把两次提取液合并为水提取液A2；

(3)用热冷交替法，分别除去乙醇提取液A1和水提取液A2中的鞣质；提取液呈暗绿色澄清液体即为醇提取液A1；提取液呈暗褐色澄清液体即为水提取液A2；

(4)称取β-环糊精，加入步骤(3)后的乙醇提取液A1中，研磨，在洁净的室内乙醇挥发至提取液和β-环糊精的包合物呈稠糊状；

(5)将步骤(4)稠糊状包合物加入步骤(3)后的水提取液A2中，搅拌，如果水提取液过多，在洁净室内蒸发减少；如果体积不够，可添加消毒过的生理盐水以补足相应的体积，200目筛布过滤(防止有大的颗粒或沉淀堵塞针头)，最终使每毫升药液中含有相当于原料生药1.0g的均匀注射用悬浊液；

(6)按量灌装，密封，冷藏储存即成缓释注射剂产品。

为了达到更好的防治效果，所述的缓释注射剂，其中原料药还有：石榴皮2～4份，黄柏、地榆、秦皮、当归各2～3份，白芍、甘草各1～2份。

所述的缓释注射剂，其中各原料药的优选用量为：青蒿4份、苦参4份、白头翁3份、仙鹤草3份、柴胡2份、石榴皮3份，黄柏2份、地榆2份、秦皮2份、当归2份，白芍1份、甘草1份和β-环糊精4份。

所述缓释注射剂的制备方法，它包括下列步骤：

(1)称取青蒿、苦参、仙鹤草、白头翁、柴胡、石榴皮、黄柏、地榆、秦皮、当归、白芍、甘草原料药，在45～50℃下干燥，分别粉碎，混合，备用；

(2)将步骤(1)粉状混合药物用95％乙醇浸提二次，每次加乙醇量以超过药面1～2cm为宜，浸泡时间2～3天，分离提取液，把两次提取液合并为乙醇提取液B1；再把第二次醇提取后的残渣加蒸馏水提取2次，每次加水量以没过药面为宜，浸泡时间2～3天，分离提取液，把两次提取液合并为水提取液B2；

(3)用热冷交替法，分别除去乙醇提取液B1和水提取液B2中的鞣质；提取液呈暗绿色澄清液体即为醇提取液B1；提取液呈暗褐色澄清液体即为水提取液B2；

(4)称取β-环糊精，加入步骤(3)后的乙醇提取液B1中，研磨，在洁净的室内乙醇挥发至提取液和β-环糊精的包合物呈稠糊状；

(5)将步骤(4)稠糊状包合物加入步骤(3)后的水提取液B2，搅拌，如果水提取液过多，在洁净室内蒸发减少；如果体积不够，可添加消毒过的生理盐水以补足相应的体积，液内不得有肉眼可见的沉淀或颗粒，最终使每毫升药液中含有相当于原料生药1.0g的均匀注射用悬浊液；

(6)按量灌装，密封，冷藏储存即成缓释注射剂产品。

上述的两种制备方法中，在步骤(2)中加乙醇浸提时，第一次加乙醇液量为药物重量的2～3倍(ml/g)，第二次为1～2倍量；加水液量均为药物重量的1～1.5倍；要求容器密封，以防液体挥发和微生物污染。

本发明的有益效果是：

1、本发明配方所选药物主要具备有抗原虫与止血痢的效用，主药、副药协同作用，标本兼治，发挥最佳的整体抗球虫效果。经试验例7：中草药抗球虫缓释剂的临床治疗试验表明，每只病兔注射中草药抗球虫缓释剂2ml，第三天拉痢停止，兔的食欲恢复，第7天检查粪便球虫卵囊，多数兔为阴性，少数兔粪便中尚有少数几个卵囊，基本上已达到痊愈的目的。

2、本发明制备工艺是在探明药物活性成分先用醇提取，再用水提取比单独用水或醇提取效果最好的基础上(试验例3)，进而与包合剂β-环糊精包合，制成缓释抗球虫注射剂，符合对付耐药性形成比较有效的联合用药的策略，在一定程度上延缓球虫耐药性产生的速度，保持了一些抗球虫药的敏感性，进一步延缓球虫抗药性的产生。

3、本发明防治兔、鸡球虫病的中草药缓释注射剂，不经口服用，防治效果可不受食欲影响，给药的剂量准确，作用迅速，控制释放，用药剂量较粉剂拌料饲用方式大大降低(仅为口服中草药用量的1/10左右，见试验例8)，有效防治时间长达2个月以上，该药成本降低，据初步试验，并无毒副作用。

4、本发明中草药缓释注射剂，以每只兔、鸡注射2.0ml的效果较好，该产品经贮藏试验，在室温下2个月，冰箱冷藏6个月，可满足一般的使用要求，达到了发明目的。

                        具体实施方式

以下通过实施例对本发明所述的防治兔、鸡球虫病的中草药缓释注射剂及其制备方法作进一步的详细说明。

实施例1：(中草药抗球虫缓释注射剂的制备方法1)

(1)各种市售的原料药在45～50℃鼓风烘箱中干燥4小时以上，分别用中药粉碎机粉碎成细粉状，称取已粉碎的原料药青蒿50g、苦参50g、白头翁37.5g、仙鹤草37.5g、柴胡25g，混合，备用；

(2)将步骤(1)药物混合物加95％乙醇(约400ml)浸泡，乙醇的加入量以能浸没药面以上1cm左右为宜，容器密封以防乙醇挥发，浸泡过程中每天搅拌1～2次，48小时后，离心分离提取液，沉渣再加95％乙醇浸泡，乙醇加入量以能没过药面1cm左右为宜，容器密封，浸泡过程中每天搅拌1～2次，48小时后，离心分离提取液，并与第一次提取液合并为乙醇提取液A1；药渣加蒸馏水浸泡，蒸馏水的量以刚能没过药面为宜，容器密封，浸泡过程中每天搅拌1～2次，48小时后，离心分离提取液；药渣再加蒸馏水浸泡，加水量的原则及处理同上述，离心分离提取液，与第一次水提取液合并为水提取液A2；两种提取液放在冰箱中保存；

(3)用热冷交替法分别除去乙醇提取液A1和水提取液A2中的鞣质。乙醇提取液A1在水浴上加热蒸馏回收乙醇，使乙醇提取液的体积缩小至约一半，提取液在4℃冰箱中冷却过夜，离心除去沉淀，提取液呈暗绿色澄清液体即为提纯后的醇提取液A1。水提取液A2加热至沸1～3min，冷却至室温后，放置4℃冰箱中过夜，离心除去沉淀，提取液呈暗褐色澄清液体即为提纯后的水提取液A2；

(4)称取β-环糊精30g，加入步骤(3)后的乙醇提取液A1中，研磨15分钟，以后每天研磨2～3次，在洁净的室内乙醇挥发至提取液和β-环糊精的包合物呈稠糊状；

(5)将步骤(3)后的水提取液A2加入到步骤(4)稠糊状包合物中，仔细研磨搅拌，如果水提取液过多，在洁净室内蒸发减少；如果体积不够，可添加消毒过的生理盐水以补足相应的体积，200目筛布过滤，最终使每毫升药液中含有相当于原料生药1.0g的均匀注射用悬浊液，此药液即为本发明最基本的抗球虫缓释注射剂，具有较强的抗球虫作用；

(6)按量灌装，密封，冷藏储存，即制成缓释注射剂产品200ml。

实施例2：(中草药抗球虫缓释注射剂的制备方法2)

(1)将市售的原料药在45～50℃鼓风烘箱中干燥4小时以上，分别用中药粉碎机粉碎成细粉状，称取粉状的青蒿50g、苦参50g、仙鹤草37.5g、白头翁37.5g、柴胡25g、石榴皮37.5g、黄柏25g、地榆25g、秦皮25g、当归25g、白芍12.5g、甘草12.5g，混合，备用；

(2)将步骤(1)药物混合物加95％乙醇浸泡，乙醇的加入量以能浸没药面以上2cm左右为宜，容器密封以防乙醇挥发，浸泡过程中每天搅拌1～2次，72小时后，离心分离提取液，沉渣再加95％乙醇浸泡，乙醇加入量以能没过药面2cm左右为宜，容器密封，浸泡过程中每天搅拌1～2次，72小时后，离心分离提取液，并与第一次提取液合并为乙醇提取液B1；药渣加蒸馏水浸泡，蒸馏水的量以刚能没过药面为宜。容器密封，浸泡过程中每天搅拌1～2次，72小时后，离心分离提取液；药渣再加蒸馏水浸泡，加水量的原则及处理同上述，离心分离提取液，与第一次水提取液合并为水提取液B2；两提取液置冰箱中保存；

(3)用冷热交替法分别除去乙醇提取液B1和水提取液B2中的鞣质等沉淀。乙醇提取液B1在水浴上蒸馏回收乙醇，使乙醇提取液的体积缩小至约一半，提取液在4℃冰箱中冷却过夜，离心除去沉淀，提取液呈暗绿色澄清液体即为提纯后的醇提取液B1。水提取液B2加热至沸1～3min，冷却至室温后，放置4℃冰箱中过夜，离心除去沉淀，提取液呈暗褐色澄清液体即为提纯后的水提取液B2；

(4)称取β-环糊精50g，加入步骤(3)后的乙醇提取液B1中，研磨15分钟，以后每天研磨2～3次，在洁净的室内乙醇挥发至提取液和β-环糊精的包合物呈稠糊状；

(5)将步骤(3)后的水提取液B2加入到步骤(4)稠糊状包合物中，研磨，如果水提取液过多，在洁净室内蒸发减少；如果体积不够，可添加消毒过的生理盐水以补足相应的体积，200目筛布过滤，最终使每毫升药液中含有相当于原料生药1.0g的均匀注射用悬浊液；

(6)按量灌装，密封，冷藏储存，即制成缓释注射剂产品362.5ml。

实施例3：(中草药抗球虫缓释注射剂的制备方法3)

本实施例加工工艺均同于实施例1；并采用实施例1所制备的乙醇提取液A1与水提取液A2。

(1)将市售的原料药在45～50℃鼓风烘箱中干燥4小时以上，分别用中药粉碎机粉碎成细粉状，称取粉状的石榴皮37.5g、黄柏25g、地榆25g、秦皮25g、当归25g、白芍12.5g、甘草12.5g，混合，备用；

(2)将步骤(1)药物混合物加工成乙醇提取液C1与水提取液C2；

(3)用热冷交替法分别除去乙醇提取液C1和水提取液C2中的鞣质，离心，上清液备用；

(4)称取β-环糊精50g，加入到实施例1乙醇提取液A1与本实施例C1的混合液中，研磨15分钟，以后每天研磨2～3次，在洁净的室内乙醇挥发至提取液和β-环糊精的包合物呈稠糊状；

(5)将实施例1水提取液A2与本实施例C2的混合液加入到步骤(4)稠糊状包合物中，最终使每毫升药液中含有相当于原料生药1.0g的均匀注射用悬浊液；

(6)按量灌装，密封，冷藏储存，即制成缓释注射剂产品362.5ml。

试验例1：(水煎、水浸泡、乙醇浸泡和醇提后水浸泡对提取液物理性状的影响)

相同的药物配比，以水煎、水浸泡、乙醇浸泡和先用乙醇浸泡再用水浸泡四种提取方法对提取液物理性状的影响进行比较。水煎提取液外观混浊，需要去除鞣质和蛋白后才变澄清，而且浓缩后特别粘稠，制成注射液后注射器容易被粘住，造成注射困难；用乙醇浸泡，药物中的蛋白质被乙醇凝固，所以提取液最澄清，浓缩后液体的粘稠度也最小。醇提取后的残渣再用水浸泡提取时，蛋白质不会被提取出来，所以先用乙醇浸泡再用水浸泡的方法可以省略去除蛋白的步骤，制成注射液后性状也比较理想；水浸泡提取液的性状稍优于水煎提取液而劣于先醇提取后水提取的提取液液。综合药效试验结果，最后确定采用先醇提取后用水提取的有效成分提取方法。

试验例2：(原料药与β-环糊精重量比对药效持续时间的影响)

30日龄的獭兔32只，粪便检查均带有球虫卵囊，均分4组，每组8只，分别以本发明中草药原料药与β-环糊精重量比为9∶1、7∶1和5∶1制成的3种缓释剂(依次称之为缓释剂1、缓释剂2和缓释剂3)防治兔球虫病，每只兔(体重约1kg)注射2ml，另外设不注射任何药作对照，分别于第0天、7天、14天、21天、28天、35天、45天和60天早晨采集兔粪便，用盐水漂浮法检查球虫卵囊数，即称取粪便样品3克，置于50ml烧杯中，加15ml饱和生理盐水，搅拌均匀，用40目铜筛过滤，滤液倒入10ml青霉素瓶静置20分钟以上，用盖玻片沾取表面少量液体，置载玻片上，在10×10倍显微镜下计数5个视野中球虫的卵囊总数，作为该兔的球虫卵囊数，计算出各组球虫卵囊平均数及减卵率，结果见下表1。

表1  注射不同中草药缓释剂后兔粪便中的球虫卵囊数

组别	指标	注射后时间(天)
										0	7	14	21	28	35	45	60
		缓释剂1	卵囊数	248	3	19	22	25	31									39	53
减卵率％	0									98.8	92.3	91.1	89.9	87.5	84.3	78.6
			缓释剂2	卵囊数	242	3	4	7	8								11	14	23
减卵率％	0	98.8								98.3	97.1	96.7	95.5	94.2	90.5
				缓释剂3	卵囊数	239	5	7	10							13	16	31	43
减卵率％	0	97.9	97.1							95.8	94.6	93.3	87.0	82.0
					不用药对照组	卵囊数	235	243	369						517	631	692	705	753
减卵率％	0	+3.4	+57.0	+120.0						+168.5	+194.5	+200.0	+220.4

由上表可见，当原料药与β-环糊精重量比为9∶1时，第一周兔粪便的球虫卵囊数在四个组中是最低的，但从第二周开始，球虫卵囊数迅速增多，超过了原料药与β-环糊精重量比为7∶1和5∶1的两个组，说明药物提取液中的有效成分没有被β-环糊精充分包被，有相当部分的药物提取物是呈游离状态，所以第一周其作用最强，但随后因为被β-环糊精包被的药物可以释放出来的剂量不足，不能很好抑制球虫的繁殖，所以球虫卵囊增多。而缓释剂2组和缓释剂3组的药物缓释效果相近，不过原料药与β-环糊精重量比为5∶1时，药液太稠，注射不够顺畅，加上β-环糊精含量增加的同时也相应增加了成本，因此原料药与β-环糊精的重量比以7∶1左右为好。

试验例3：(药物有效成分提取方式对缓释剂抗球虫效果的影响)

相同配方和同样重量的药物混合粉剂三份，分别以蒸馏水、95％乙醇、以及先用95％乙醇后用蒸馏水三种方式浸泡提取有效成分，去除鞣质和蛋白，用相同比例的β-环糊精等包被制成缓释剂(分别称为缓释剂W、缓释剂A和缓释剂AW)。

选择有球虫卵囊排出的30日龄肉兔24只，均分4组，每组6只，分别注射以蒸馏水提取、95％乙醇提取和先用95％乙醇提取后用蒸馏水提取三种不同提取方式制备的中草药缓释剂2ml，设不注射任何药为对照组，分别在0天、7天、14天、21天、28天、35天、45天和60天采集兔粪便样品，按上面介绍的饱和盐水漂浮法，镜检计数球虫卵囊数，计算组球虫卵囊平均数及减卵率，结果见表2。

由表2可见，以中草药水提取物制备的缓释剂W前二周对球虫抑制效果比较好，但3周以后，抗球虫效果明显减弱，说明β-环糊精对中草药的水提取组分的包合性能不尽如人意，分析原因可能是因为β-环糊精中间的空穴具有疏水性，水溶性物质不能很好地进入空穴所致。β-环糊精对中草药醇提取物的包合性能较好。相比之下又以先用醇提取，再用水提取的提取方式制备的缓释剂抗球虫效果比单独用醇提取的要更好一些，可能是因为用两种溶剂提取，被提取出来的有效成分更多之故。

            表2  注射有效成分不同提取方式制备的缓释剂

                 对肉兔粪便中的球虫卵囊数的影响

组别	指标	注射后时间(天)
										0	7	14	21	28	35	45	60
		缓释剂W	卵囊数	213	11	18	46	79	110									125	152
减卵率％	0									94.8	91.5	78.4	62.9	48.4	41.3	28.6
			缓释剂A	卵囊数	212	33	21	8	22								28	43	59
减卵率％	0	84.4								90.1	96.2	89.6	86.8	79.7	72.2
				缓释剂AW	卵囊数	230	5	6	8							9	11	19	25
减卵率％	0	97.8	97.4							96.5	96.1	95.2	91.7	89.1
					对照	卵囊数	193	215	237						259	372	407	463	521
减卵率％	0	+11.4	+22.8	+34.2						+92.7	+110.9	+139.9	+169.9

试验例4：(中草药抗球虫缓释剂的剂量效应)

中草药先用醇提取再用水提取方式制备缓释剂。

选择带有球虫卵囊，平均体重约1kg的家兔24只，均分4组(每组6只)，分别注射中草药抗球虫缓释剂1.0ml/只、1.5ml/只和2.0ml/只，并设不注射药物为对照组。分于0天、7天、14天、21天、28天、35天、45天和60天采集兔粪便，以饱和盐水漂浮法检查球虫卵囊，计算组球虫卵囊平均数及减卵率。结果见表3。

表3  中草药抗球虫缓释剂不同注射剂量

                            对兔粪球虫卵囊数的影响

剂量(ml/只)	指标	注射后时间(天)
										0	7	14	21	28	35	45	60
		1.0	卵囊数	201	21	26	33	42	73									85	137
减卵率％	0									89.6	87.1	83.6	79.1	63.7	57.7	31.8
			1.5	卵囊数	203	16	17	18	21								25	33	61
减卵率％	0	92.1								91.6	91.1	89.7	87.7	83.7	70.0
				2.0	卵囊数	204	3	2	3							2	4	7	15
减卵率％	0	98.5	99.0							98.5	99.0	98.0	96.6	92.6

由表3可见，随着中草药缓释剂注射剂量的增加，兔粪便中排出的球虫卵囊数减少。这与一些口服中草药随剂量增加，抗球虫指数也增加的趋势一致。在本试验中以每只兔注射中草药抗球虫缓释剂2.0ml(即相当于2ml/kg体重)的效果较好。

试验例5：(中草药抗球虫缓释剂的急性毒性试验)

体重约1kg的肉兔6只，每只分二点皮下注射中草药抗球虫缓释剂共4ml，观察注射后48小时兔的局部和全身反应，注射后二个月随机抽取4只兔解剖检查注药部位吸收情况，观察组织有无增生、坏死等。

结果注射后1小时，虽然还可触摸到注射部位微隆的小包，局部皮肤无红肿，体温、呼吸、心跳正常，对兔的活动和食欲无影响。经二个月饲养，体增重正常，毛色光亮，解剖后未见内脏器官的病理变化，注射部位无异常。说明在常用最大剂量2倍的注射剂量情况下，本发明中草药抗球虫缓释剂对兔也是安全的。

体重1.5kg的蛋鸡、体重约1kg的肉鸡，注射本发明中草药抗球虫缓释剂2ml，对蛋鸡产蛋性能，对肉鸡生长性能也均无不利影响，一个月后可以看出外观体况比不注射的更好。本品对鸡也是安全的。

试验例6：(中草药抗球虫缓释剂的保质期试验)

中草药抗球虫缓释剂分装在密封的塑料瓶(橡胶瓶塞，蜡封)中，分别放置于8～26℃的室温和4～8℃的冰箱中保存，每隔半个月检查缓释剂的性状看有无发霉、变质或异味产生，结果室温放置2个月，冰箱冷藏6个月(还在继续)没有发现异样。用室温保存2个月和冰箱冷藏6个月的缓释剂抽样防治兔球虫病，其防治效果与刚制备的缓释剂没有实质性差别。说明中草药抗球虫缓释剂的保质期能满足一般的使用要求。

试验例7：(中草药抗球虫缓释剂的临床治疗试验)

表现食欲减退、精神沉郁、拉痢、腹部膨胀、频频排尿，个别粘膜黄染，粪检可见大量球虫卵囊的病兔50只，每只兔注射中草药抗球虫缓释剂2ml，第三天拉痢停止，兔的食欲恢复，第7天检查粪便球虫卵囊，多数兔为阴性，少数兔粪便中尚有少数几个卵囊，基本上达到痊愈的目的。

试验例8：(中草药抗球虫缓释剂防治兔球虫病的成本)

选择粪便中带有球虫卵囊的断奶仔兔48只，均分4组，第1组饲喂不含任何抗球虫药的基础日粮，在试验开始时注射一针本发明的中草药抗球虫缓释剂(2ml/只)；第2组饲喂含1％抗球虫中草药添加剂(配方与注射型中草药抗球虫缓释剂相同)的日粮；第3组饲喂含地克珠利2mg/kg或者含0.0125％氯羟吡啶的对照日粮(两种上抗球虫药轮换使用)；第4组只饲喂不含任何抗球虫药的基础日粮。试验期2个月。观察各组的增重、死亡率，计算各组的防治费用。

结果第1、2、3、4组的平均增重分别为1.48±0.11kg、1.30±0.14kg、1.31±0.10kg和0.73±0.18kg，注射中草药抗球虫缓释剂组比不加药对照组提高增重102.7％，比口服中草药组和化药组提高13.8％和13.0％(P＞0.05)。各组的死亡率分别为0、0、0和58.3％。

按照药店中药饮片零售价计算，中草药抗球虫缓释剂组的防治成本每只兔为0.07元，中草药添加剂组为0.19元，化药组为0.05元(批发价)。中草药组成本还是高于化药组。但中草药原料如果来自批发市场，成本可下降近1倍；如果再去掉或者用其他较便宜的药替代占成本一半的柴胡，成本会进一步下降。最终中草药抗球虫缓释剂的防治成本估计可以做到与化药组相当。中草药缓释剂的实际用药量仅有口服中草药用量的1/10左右。

Claims (8)

1、一种防治兔、鸡球虫病的中草药缓释注射剂，其特征在于它由下列重量份的原料药及辅剂组成：青蒿、苦参各3～6份，白头翁、仙鹤草、柴胡各2～5份，包合剂β-环糊精2～4份，其含药量为每毫升注射剂中含有相当于原生药量1.0g。

2、根据权利要求1所述的缓释注射剂，其中各原料药的用量为青蒿4份、苦参4份、白头翁3份、仙鹤草3份、柴胡2份和β-环糊精2.4份。

3、权利要求1或2所述缓释注射剂的制备方法，其特征在于包括下列步骤：

(1)称取青蒿、苦参、白头翁、仙鹤草、柴胡原料药，在45～50℃下干燥，分别粉碎、混合，备用；

(2)将步骤(1)粉状混合物加95％乙醇浸提二次，每次加乙醇量以超过药面1～2cm为宜，浸泡时间为2～3天，分离提取液，把两次提取液合并为乙醇提取液A1；再把第二次醇提取后的残渣加蒸馏水提取2次，每次加水量以没过药面为宜，浸泡时间为2～3天，分离提取液，把两次提取液合并为水提取液A2；

(3)用热冷交替法分别除去乙醇提取液A1和水提取液A2中的鞣质；

(4)称取β-环糊精，加入步骤(3)后的乙醇提取液A1，研磨，在洁净的室内让乙醇挥发至提取液和β-环糊精的包合物呈稠糊状；

(5)将步骤(3)后的水提取液A2加入到步骤(4)稠糊状包合物中，研磨，在洁净室内蒸发或添加消毒生理盐水，最终使每毫升药液中含有相当于原料生药1.0g的均匀注射用悬浊液；

(6)按量灌装，密封，冷藏储存即成缓释注射剂产品。

4、根据权利要求1所述的缓释注射剂，其中原料药还有：石榴皮2～4份，黄柏、地榆、秦皮、当归各2～3份，白芍、甘草各1～2份。

5、根据权利要求4所述的缓释注射剂，其中各组分的重量用量为：青蒿4份、苦参4份、白头翁3份、仙鹤草3份、柴胡2份、石榴皮3份，黄柏2份、地榆2份、秦皮2份、当归2份，白芍1份、甘草1份和β-环糊精4份。

6、权利要求4或5所述缓释注射剂的制备方法，它包括下列步骤：

(1)称取青蒿、苦参、白头翁、仙鹤草、柴胡、石榴皮、黄柏、地榆、秦皮、当归、白芍、甘草原料药，在45～50℃下干燥，分别粉碎，混合，备用；

(2)将步骤(1)粉状混合药物用95％乙醇浸提二次，每次加乙醇量以超过药面1～2cm为宜，浸泡时间为2～3天，分离提取液，把两次提取液合并为乙醇提取液B1；再把第二次醇提取后的残渣加蒸馏水提取2次，每次加水量以没过药面为宜，浸泡时间为2～3天，分离提取液，把两次提取液合并为水提取液B2；

(3)用热冷交替法分别除去乙醇提取液B1和水提取液B2中的鞣质；

(4)称取β-环糊精，加入步骤(3)后的乙醇提取液B1中，研磨，在洁净的室内乙醇挥发至提取液和β-环糊精的包合物呈稠糊状；

(5)将步骤(4)稠糊状包合物加入步骤(3)后的水提取液B2中，搅拌，在洁净室内蒸发或添加生理盐水，最终使每毫升药液中含有相当于原料生药1.0g的均匀注射用悬浊液；

(6)按量灌装，密封，冷藏储存即成缓释注射剂产品。

7、根据权利要求3所述的制备方法，其中在步骤(2)中加乙醇浸提时，第一次加乙醇液量为药物重量的2～3倍，第二次为1～2倍量；加水液量均为药物重量的1～1.5倍；要求容器密封。

8、根据权利要求6所述的制备方法，其中在步骤(2)中加乙醇浸提时，第一次加乙醇液量为药物重量的2～3倍，第二次为1～2倍量；加水液量均为药物重量的1～1.5倍；要求容器密封。