RU2284993C2

RU2284993C2 - Соли 2-этил-6-метил-3-оксипиридина с органическими карбоновыми кислотами, обладающие анксиолитической, антидепрессивной, противогипоксической, антиамнестической и антиоксидантной активностью, и способ их получения

Info

Publication number: RU2284993C2
Application number: RU2002115704/04A
Authority: RU
Inventors: Леонид Дмитриевич Смирнов (RU); Леонид Дмитриевич Смирнов; Тать на Александровна Воронина (RU); Татьяна Александровна Воронина
Original assignee: Леонид Дмитриевич Смирнов; Татьяна Александровна Воронина
Priority date: 2002-06-14
Filing date: 2002-06-14
Publication date: 2006-10-10

Abstract

Изобретение относится к фармацевтически приемлемым солям 2-этил-6-метил-3-оксипиридина с органическими карбоновыми кислотами общей формулы I-VI:

где R=-CH2-OH (I); R=-CH2-COOH (II); R=-(CH2)3-COOH (III); R=-(CH2)4-COOH (IV); R=-CH(OH)-CH(OH)-COOH (V); R=-CH(NH2)-CH2-COOH (VI), обладающие анксиолитической, антидепрессивной, противогипоксической, антиамнестической и антиоксидантной активностью и имеющие при этом меньшую токсичность. Также изобретение относится к способу получения солей и фармацевтической композиции. 3 н.п. ф-лы, 10 табл.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к новым биологически активным соединениям, конкретно к солям 2-этил-6-метил-3-оксипиридина с органическими карбоновыми кислотами общей формулы:

где

R=-CH2-OH	(I);
R=-CH2-COOH	(II);
R+-(CH2)3-COOH	(III);
R=-(CH2)4-COOH	(IV);
R=-CH(OH)-CH(OH)-COOH	(V);
R=-CH(NH2)-CH2-COOH	(VI),

обладающим анксиолитической, антидепрессивной, противогипоксической, антиамнестической и антиоксидантной активностью.

Указанные свойства предполагают применение соединений для профилактики и лечения невротических и неврозоподобных состояний, депрессий, ишемической болезни мозга и сердца, нарушений памяти различного генеза, в том числе при старении и болезни Альцгеймера.

Известными анксиолитическими средствами являются производные бензодиазепинового ряда, в частности, диазепам. Однако наряду с анксиолитической активностью диазепам обладает выраженными побочными эффектами - вызывает миорелаксацию, снижение мышечного тонуса, общее седативное действие, дневную сонливость, нарушение памяти, а при длительном применении - лекарственную зависимость. Диазепам не обладает антидепрессивным и противоалкогольным зависимость. Диазепам не обладает антидепрессивным и противоалкогольным действием и в противоположность новым соединениям нарушает память (Машковский М.Д., Лекарственные средства, ч.2. 1993б Москва, с.186; Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств - 14 вып. / Гл. ред. Г.Л.Вышковский. - М., РЛС - 2006. - с.488-489).

По химической структуре близким к новым структурам является препарат мексидол(2-этил-6-метил-3-оксипиридин сукцинат). Однако в отличие от новых соединений мексидол не обладает антидепрессивным действием и имеет большую токсичность (Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств - 14 вып. / Гл. ред. Г.Л.Вышковский. - М., РЛС - 2006, - с.488-489).

Задачей настоящего изобретения явилось создание новых высокоэффективных и малотоксичных соединений, обладающих анксиолитической, антидепрессивной, противоалкогольной, противогипоксической, антиамнестической и антиоксидантной активностью и лишенных вышеуказанных недостатков известных лекарственных средств.

Эта задача решена путем создания новых соединений, а именно солей 2-этил-6-метил-3-оксипиридина с органическими карбоновыми кислотами (I-VI) обозначенной общей формулы, которые и обладают вышеуказанными свойствами.

Фармацевтическая композиция, содержащая соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель, представляет собой желатиновую капсулу, в которой в качестве вспомогательных веществ включены такие ингредиенты, как крахмал картофельный, поливинилпирролидон, магний стеариновокислый, микрокристаллическая целлюлоза, сахар молочный.

Пример 1. Способ получения солей 2-этил-6-метил-3-оксипиридина с карбоновыми кислотами (Соединения I-VI).

Соли 2-этил-6-метил-3-оксипиридина с органическими карбоновыми кислотами получают нагреванием смеси 2-этил-6-метил-3-оксипиридина и карбоновой кислоты в растворителе с последующим выделением целевого продукта. Полученные таким образом соли (I-VI) представляют собой белые кристаллические вещества, растворимые в воде и спирте.

К раствору 4,11 г.(0,03 м) 2-этил-6-метил-3-оксипиридина в 30 мл спирта при нагревании и перемешивании добавляют порциями раствор 0,03 М карбоновой кислоты в 25 мл спирта. Реакционную массу перемешивают при кипении 1 час в колбе с обменным холодильником, растворитель отгоняют в вакууме до 1/3 объема. Остаток охлаждают, выпавшие кристаллы отделяют, перекристаллизовывают из спирта с добавкой активированного угля, фильтруют, охлаждают, выпавший осадок отделяют, промывают ацетоном, сушат, получают соли 2-этил-6-метил-3-оксипиридина с карбоновыми кислотами I-VI. Физико-химические данные и результаты анализа приведены в таблице 1, а данные спектров ЯМР - в таблице 2.

Пример 2. Анксиолитическое действие в условиях методики конфликтной ситуации (Таблица 3).

Исследование проводили на беспородных белых крысах массой 200-250 г по стандартной методике оценки анксиолитического эффекта - конфликтной ситуации Vogel (Воронина Т.А., Середенин С.Б. Методические указания по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М. Медицина., 2005, с.253-263; Молодавкин Г.М., Воронина Т.А. Многоканальная установка для поиска транквилизаторов и изучения механизмов их действия по методу конфликтной ситуации. Эксперим. и клин. фармакол., 1995, т.58, №2, с 54-56; Vogel J., Beer В., ClodV T. A simple and reliable conflict procedure for testing antianxiety agents. Psychopharmacologia, 1971, Vol.21, p.1-7). Этот метод, основанный на наказуемом поведении, является базисным при исследовании веществ с анксиолитическим эффектом и отражает их влияние на состояние общей тревоги и страха. Метод состоит в создании у животного конфликтной ситуации путем столкновения двух мотиваций - стремления удовлетворить чувство жажды, полученной в результате лишения животного воды, и стремления избежать наказания - удара электрического тока, получаемого каждый раз при попытке удовлетворить питьевую мотивацию. Опыт проводится в течение 3-х дней. В первый день животных полностью лишают воды, а на второй день помещают в экспериментальные камеры, в которых в течение 5 мин осуществляют выработку навыка взятия воды из поилки - стеклянного сосуда с соском из нержавеющей стали, введенным в экспериментальную камеру. На третий день животных снова помещают в камеры и затем, через 10 сек после первого взятия воды, на поилку и электродный пол камеры подается электроток (0,25 мА), что приводит к тому, что каждое взятие воды из поилки становится наказуемым. Мерой выраженности эффекта по этому тесту является повышение числа наказуемых взятий воды под влиянием вещества по сравнению с животными контрольной группы, получавшими физиологический раствор.

Установлено, что анксиолитическое действие в условиях методики конфликтной ситуации оказывают все заявляемые соединения, о чем свидетельствует существенное повышение числа наказуемых взятий воды после введения соединений по сравнению с контрольной группой. Наиболее выраженный достоверный эффект отмечается у соединений II, III, IV и V. Так, соединение II в дозе 50 мг/кг повышает число наказуемых реакций по сравнению с контролем в 4,6 раза, соединение III - в 3,8 раза, соединение IV - в 2,5 раза, соединение V - в 5,2 раза. По анксиолитической активности соединения II, III, IV и V не уступают мексидолу. Соединения I и VI также повышают число наказуемых реакций, однако их анксиолитический эффект выражен в меньшей степени.

Пример 3. Анксиолитическое действие в условиях методики приподнятого крестообразного лабиринта (Таблица 4).

Метод приподнятого крестообразного лабиринта моделирует страх норных животных (мыши, крысы) открытого пространства и высоты (Воронина Т.А., Середенин С.Б. Методические указания по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М. Медицина, 2005, с.253-263; Pellow S., File S.E. Anxiolytic and anxiogenic drugs effects on exploratory activity in an elevated plus maze. A novel test of anxiety in the rat. Pharmacology, Biochemistry and Behavior, 1986, Vol.24, P.525-529). Работу проводили на беспородных белых крысах массой 200-250 г. Лабиринт представляет собой 2 доски шириной 15 см и длиной 1 м, скрепленные под прямым углом в середине. 2 противоположных рукава лабиринта имеют стенки размерами 40×40 см (они являются закрытыми), а два других - стенок не имеют (они считаются открытыми). Все устройство устанавливается на высоте 1 м над уровнем пола. Крыс помещали в центр лабиринта и визуально оценивали число заходов в открытые и закрытые рукава лабиринта, время пребывания в них и число свешиваний с открытой части лабиринта.

Установлено, что в методике приподнятого крестообразного лабиринта наиболее отчетливой анксиолитической активностью обладает соединение III в дозе 50 мг/кг и соединение IV в дозах 50 и 100 мг/кг, под влиянием которых наблюдается значительное повышение длительности пребывания животных в открытых рукавах лабиринта и увеличение числа свешиваний с открытых площадок лабиринта. Первый из этих показателей (время пребывания в открытых рукавах), отражающий страх открытого пространства, увеличивается под влиянием соединений III и IV в 3-4 раза, а число свешиваний, характеризующее страх высоты, повышается в 2-3 раза, что свидетельствует об анксиолитической активности новых соединений. Мексидол не обладает активностью по этому тесту.

Пример 4. Антидепрессивное действие в условиях методики вынужденного плавания по Nomura (Таблица 5).

Исследование проводили на беспородных белых крысах массой 200-250 г, которых через 40-50 мин после введения соединения помещали в сосуд с водой, в котором размещаются колеса. Крысы после помещения их в воду стараются из нее выбраться с помощью свободновращающихся колес, осуществляя вынужденное плавание (Воронина Т.А., Молодавкин Г.М., Мдзинаришвили Л.А. Особенности влияния фармакологических веществ разных классов на вынужденное плавание у крыс. Эксперим. и клин. фармакол., 1994, т.57, №1, с.3-5; Nomura S., Shimizu J., Kinjo М. et al. A new behavioral test for antidepressant drugs, Eur. J. Pharmacol., 1982, Vol.83, P.171-175). Но поскольку колеса вращаются свободно, эти попытки становятся безуспешными, и у животных развивается депрессивно-подобное состояние, мерой которого является число оборотов колеса (чем ниже число оборотов, тем более выражено это состояние). Число оборотов регистрируется с помощью специального герконового датчика. Вещества с антидепрессивной активностью облегчают это состояние, повышая число оборотов колеса. Установлено, что наиболее выраженной антидепрессивной активностью по методике Nomura обладают соединение II в дозе 100 мг/кг и соединение IV в дозе 50 мг/кг. Мексидол не обладает антидепрессивной активностью по данному тесту.

Пример 5. Антидепрессивное действие в условиях методики вынужденной беспомощности по Porsolt (Таблица 6).

Исследование проводили на беспородных белых крысах массой 200-250 г., которых через 40-50 мин после введения соединения помещали в цилиндрический сосуд с водой диаметром 40 см и глубиной 60 см, из которого невозможно выбраться. Температура воды поддерживалась на уровне 25°С, опыты проводили с 12 до 16 часов. Сначала, при поиске выхода из этой аверсивной (неприятной) ситуации, животные начинают проявлять бурную двигательную активность, но затем, убедившись в тщетности своих попыток, крысы оставляют их и зависают в воде в характерной позе, оставаясь полностью неподвижными или совершая незначительные движения, необходимые для поддержания морды над поверхностью воды. Это состояние вынужденной беспомощности оценивается как депрессивноподобное, и показателем его выраженности является длительность неподвижности (иммобилизации) в этих условиях. Вещества с антидепрессивной активностью облегчают вынужденную беспомощность, уменьшая длительность иммобилизации (Porsolt R.D., Anton G., Blavet N., Jalfre M. - Eur. J. PharmacoL, 1978, Vol.47, P.379-391).

Состояние иммобилизации оценивали визуально с определением ее длительности в течение 10 мин наблюдения. Подсчитывали средние значения и их стандартные отклонения для каждой группы. Достоверность различий между опытными и контрольной группой рассчитывали с помощью дисперсионного анализа. Было установлено, что по этому тесту проявляет активность соединение II в дозе 100 мг/кг, на что указывает значительное снижение длительности иммобилизации под его влиянием.

Пример 6. Противогипоксическое действие (Таблица 7).

Противогипоксическое действие соединений I-IV изучали на беспородных белых крысах-самцах массой 175-200 г. с использованием модели гипобарической гипоксии (Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропного действия фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. M. Медицина., с.308-320. (2005). Для этого животных группами по 4 особи (2 контрольные и 2 с введенным соединением) помещали в барокамеру, соединенную с насосом, и «поднимали» на высоту 11,5 тыс. м со скоростью 1000 м/мин. По достижении этой высоты производили экспозицию с неизменной высотой в течение 10 мин, а затем осуществляли спуск до нормального давления в течение 3 мин. Для каждой дозы исследуемых соединений использовали по 5 таких групп (10 на веществе и 10 опытных). Состояние животных оценивали визуально через иллюминаторы барокамеры и определяли общее число выживших животных в обеих группах (контрольной и опытной) после спуска и вскрытия барокамеры. Статистическую обработку проводили с использованием метода хи-квадрат. Соединения вводили внутрибрюшинно за 40 мин до начала подъема в дозах 50 и 100 мг/кг.

Установлено, что соединения I, II, IV обладают высокой противогипоксической активностью, повышая устойчивость животных к гипоксическому воздействию. По выраженности противогипоксического эффекта соединения I, II, IV не уступают мексидолу. По сравнению с контролем, для которого процент выживших после проведения гипоксии животных составляет 10-20%, новые соединения достоверно повышают процент выживших животных. Так, после введения соединения IV в дозе 50 мг/кг выживают 70% животных, а в дозе 100 мг/кг - 90% животных. Введение соединения II в дозе 100 мг/кг повышает этот показатель до 90%, а соединения I до 70%. Умеренную противогипоксическую активность имеет соединение III.

Пример 7. Антиамнестическая активность соединений (Таблица 8).

Исследование ноотропного антиамнестического действия проводили в соответствие с методикой, представленной в Методических рекомендациях по экспериментальному изучению препаратов с ноотропным типом действия (Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропного действия фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М. Медицина, 2005, с.308-320).

Работа проводилась на беспородных белых крысах-самцах массой 200-250 г., которых предварительно в случайном порядке делили на 6 групп по 10 животных. Далее у всех крыс вырабатывали навык пассивного избегания опасного пространства с помощью прибора для выработки условного рефлекса пассивного избегания производства фирмы Lafayette Instr. Co., США (Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропного действия фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М. Медицина, 2005, с.308-320; Ader R., Weijnen J.A., Moleman P. Retention of a passive avoidance response as a function of the intensity and duration of electric shock. Psychol. Sc., 1972, v.26, 125-128). Прибор представляет собой темную камеру (50×50×50 см) и открытую площадку (5×10 см), освещенную лампой мощностью 25 Вт, укрепленной на высоте 50 см над площадкой. Между камерой и площадкой имеется проход (5×5 см).

Крыс первой группы (чистый контроль) помещали на открытую площадку, и они, в силу инстинкта, с коротким латентным периодом устремлялись в темную камеру. Крысы второй группы получали болевое раздражение (0,45 мА) через пол в темной камере и выходили из нее на открытую площадку (обучение - пассивный контроль). Крыс второй группы (пассивный контроль) подвергали наказанию в темной камере и процедуре наложения корнеальных электродов без пропускания тока и, следовательно. без вызова судорог. Крыс третьей группы, служившей активным контролем, сразу после обучения (наказания) рефлексу подвергали процедуре максимального электрошока (120 мА, 300 мсек) через корнеальные электроды, который оказывал амнезирующее действие. Крысы четвертой группы получали наказание и максимальный электрошок, но после выработки рефлекса (перед процедурой электрошока) и перед тестированием на следующий день (за 60 мин до него) им внутрибрюшинно вводили вещество II в дозе 100 мг/кг. Крысам пятой группы аналогичным образом вводили вещество III в той же дозе, а группам шестой группы - мексидол. Другим группам животных вводили соединения I, IY, Y и YI. У всех животных через 24 часа после обучения проводили тестирование сохранения рефлекса. Для этого крыс снова помещали на открытую площадку камеры и в течение 3 мин регистрировали латентный период первого захода в темную камеру и длительность пребывания в ней. Кроме того, в каждой группе учитывали число животных с выработанным условным рефлексом пассивного избегания, то есть не заходивших в темную камеру в день тестирования.

Максимальный электрошок вызывает выраженную амнезию, что выражается в том, что практически все крысы третьей группы (8 из 10 или 80%) заходят в темный опасный отсек с коротким латентным периодом и проводят в нем значительную часть времени. Соединение II в дозе 100 мг/кг при внутрибрюшинном введении препятствует развитию амнезии, вызванной максимальным электрошоком. Действительно, число животных, вошедших в темную камеру, снижается с 8 до 3, т.е. до 30%. Кроме того, увеличиваются латентные периоды захода животных в темный отсек и снижается средняя длительность пребывания в нем. Аналогичное действие оказывает и соединение III в дозе 100 мг/кг. При этом по основному показателю - латентному периоду захода в темную камеру-эффект этого вещества был менее выражен, чем у вещества II в той же дозе. Таким образом, соединения II и III оказывают отчетливое ноотропное действие. Соединения I, IY, Y и YI также обладают антиамнестическим эффектом, что выражается в способности уменьшать число животных, вошедших в опасную камеру (соединения IY и Y), увеличивать латентный период захода в темную опасную камеру (соединения IY и YI) и уменьшать длительность пребывания в темной камере (соединение I). По выраженности и глубине антиамнестическою эффектов новые соединения II и III имеют равную активность с мексидолом, а остальные уступают ему по активности.

Пример 8. Изучение миорелаксантного действия соединений.

Изучение возможного миорелаксантного действия соединений I-VI проводили в опытах на белых беспородных крысах с использованием методик вращающегося стержня и удерживания на перевернутой сетчатой платформе. Соединения вводили внутрибрюшинно в дозах 50, 100, 200 и 250 мг/кг за 40 минут до эксперимента. В используемых дозах соединения не вызывали нарушения координации движений и падения животных с вращающегося стержня или перевернутой сетчатой платформы, что свидетельствует об отсутствии у них миорелаксантного действия.

Пример 9. Антиоксидантная активность соединений (Таблица 9).

Антиоксидантное действие соединений исследовали с использованием системы НАДФН-зависимого перекисного окисления липидов (ПОЛ), содержащей ПОЛ-активирующие ингредиенты (1,2 мкМ FeSO₄, 0,77 мМ НАДФН) и гомолизат крови в 50 мМ Трис-HCL буфере (рН 7.4) по методу Noguchi Т., Nokano M. (Noguchi Т., Nakano М. Biochem. BiophVs. Acta. 1974. v.368, р.446-455). Добавление в эту систему 12 мкМ этилендиамин тетрауксусную кислоты (ЭДТА) повышает редокс потенциал Fe²⁺. В качестве индекса ПОЛ использовали уровень малонового диальдегида (МДА). Исследуемая концентрация соединений составляла 10 мг/мл и в 5 раз повышала физиологически активную. Предварительно соединения смешивались в равных объемах с гемолизатом крови, затем в эквивалентном соотношении с активирующей смесью. После инкубации при 37°С в течение 20 минут образовавшийся МДА связывался с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) в реакционной смеси (30% трихлоруксусная кислота, 5 М HCL, 0,75% ТБК) при 100°С в течение 15 минут с последующим центрифугированием (10 минут при 6000 об/мин). Уровень МДА определяли спектрофотометрически при 535 нм (ε=1,56 10⁵ М^-1. см^-1) в единицах измерения нмоль/г гемоглобина (Hb). Содержание Hb определяли согласно методу Evallo С.(Evallo С.Toxicological stress indicators in human red blood cells. - Maastricht. - 1994, p.58-61).

Установлено, что введение соединений 1-VI в систему НАДФН-зависимого перекисного окисления липидов (ПОЛ) статистически достоверно снижает развитие перекисного окисления линидов на 19-30%, что свидетельствует о том, что данные соединения обладают выраженной антиоксидантной активностью.

Пример 10. Острая токсичность соединений (Таблица 10).

Острую токсичность соединений I-VI изучали на беспородных белых крысах-самцах массой 170-200 г, которых группами по 6 животных высаживали в пеналы из органического стекла. Животным вводили вещества в нарастающих дозах так, что в каждой группе из 6 крыс они получали одну и ту же дозу. На следующий день отмечали число животных, погибших в каждой группе, и с помощью программы Pharmstat определяли ЛД₅₀, дозу, от которой гибнет 50% животных. Чем она ниже, тем токсичнее вещество.

Установлено, что все новые соединения имеют низкую токсичность, приблизительно в 10 раз превышающую диапазон исследованных эффективных доз. Токсичность новых соединений меньше токсичности мексидола.

Заключение

Таким образом, соединения I-VI обладают поликомпонентным спектром фармакологических эффектов. Соединения оказывают выраженное анксиолитическое и антидепрессивное действие, обладают антиамнестическим и противогипоксическим эффектами.

Существенным преимуществом соединений I-VI перед известными анксиолитическими средствами является то, что они имеют незначительные побочные эффекты и низкую токсичность. В сравнение с транквилизаторами бензодиазепинового ряда (диазепам, оксазепам, лоразепам и др.) у новых соединений I-VI отсутствуют традиционные для этих анксиолитиков побочные эффекты (седация, миорелаксация, нарушение памяти, лекарственная зависимость). Под влиянием соединений не нарушается адекватность реагирования в экстремальных ситуациях. Соединения даже в верхнем диапазоне терапевтических доз не угнетают ориентировочно-исследовательскою поведения, не вызывают дневной сонливости, а при увеличении средней терапевтической дозы в 4-6 раз не обладают миорелаксантным действием. В отличие от мексидола новые соединения обладают антидепрессивной активностью и имеют меньшую токсичность.

Механизм действия соединений I-VI связан с их антиоксидантными свойствами, способностью стабилизировать биомембраны клеток.

Таким образом, соединения I-VI являются высокоэффективными и нетоксичными транквилизаторами - антидепрессантами, у которых анксиолитический и антидепрессивный эффекты осуществляются без побочных (седативного, миорелаксантного и амнезирующего) проявлений и дополняются противогипоксическим и антиамнестическим эффектами.

Таблица 1. Физико-химические характеристики и данные элементного анализа солей 2-этил-6-метил-3-оксипиридина
Соединение	Выход	Т.пл., °С	Найдено, %			Брутто формула	Вычислено
Соединение	Выход	Т.пл., °С	С	H	N	Брутто формула	С	11	N
I	73.5	112-114	56.01	6.98	6.12	C10H15O4N	56.34	7.04	6.57
II	79.3	130-132	54.37	6.03	5.31	С11H15O5N	54.77	6.23	5.81
III	85.2	104-105	57.53	7.26	5.01	С13H19O5N	57.99	7.06	5.20
IV	81.5	119-121	59.12	7.09	4.21	C14H21O5N	59.36	7.43	4.59
V	74.6	119-121	50.02	5.57	4.45	C12H17O7N	50.17	5.92	4.90
VI	87.2	>123-125 разлагается	53.14	6.35	10.02	С12H18O5N2	53.35	6.66	10.37

Таблица 3. Анксиолитическое действие соединений I-VI в условиях методики конфликтной ситуации
Соединения	Дозы, мг/кг	Число наказуемых взятий воды
Контроль	-	124.7±34.19
I	50	223.1±79.13
I	100	512±253.6
II	50	570.4±88.74*
II	100	194.7±96.04
III	50	480.9±97.39*
III	100	265.4±92.19
IV	50	65.5±49.81
IV	100	317.4±63.96*
V	50	657.9±254.25*
V	100	117.9±48.61
VI	50	374.9±289,53
Мексидол	100	510.4±45.83
Примечание * - различие с контролем достоверно при Р<0.05.

Таблица 4. Анксиолитическая активность соединений I-VI в приподнятом крестообразном лабиринте
Соединения	Дозы, мг/кг	Число вых. в откр. рукава	Число вых. в закр. рукава	Число неполн. выходов	Время в открыт.рукавах	Число свешиваний
Контроль		1±0.35	1.8±0.8	3.1±1.33	19.1±9.44	1.5±0.43
I	100	1.2±1.1	1.6±1.5	3.4±2.5	22.4±19.8	2.3±1.8
II	50	0.3±0.48	1.3±0.48	1±0.94	6±.47	0.4±0.7
II	100	0.6±0.7	1.6±0.7	2.2±1.55	11.1±17.53	1.6±1.51
III	50	0.6±0.7	1.8±0.92	1.7±1.34	7.8±8.73	2.5±3.03
III	100	0.9±0.74	1.4±0.7	1.1±1.2	71.1±27.46*	5.5±2.13*
IV	50	1.4±0.9*	1.8±1.23	0.2±0.42	84.6±21.83*	3.5±1.37*
IV	100	1.9±1.1*	2.7±0.95	0.6±0.7	55.2±16.75*	3.9±1.13*
V	100	1.0+0.9	0.9±0.7	3.0±2.8	29.8±22.4	1.7±1.54
VI	100	0.9±0.7	1.3±1.1	2.9±2.5	19.9±15.3	2.4±2.2
Мексидол	100	1.5±0.64	1.9±1.4	2.5±1.8	68.4±21.5	4.1±1.8
Примечание * - различие с контролем достоверно при Р<0,05.

Таблица 5. Антидепрессивная активность соединений I-VI по тесту вынужденного плавания по Nomura
Соединения	Дозы, мг/кг	Число оборотов колеса
Контроль		65.2±19.07
I	50	64.1±7.28
I	100	49.9±21.03
II	50	69.8±12.49
II	100	105.7±25.19*
III	50	67.2±10.98
III	100	62.4±12.82
IV	50	97.4±17.33*
IV	100	61.5±10.05
V	50	69.3±18.74
V	100	54.3±22.37
VI	50	78.3±17.16
VI	100	48.4±7.95
Мексидол	100	70.3±21.5
Примечание * - различие с контролем достоверно при Р<0,05.

Таблица 6. Антидепрессивная активность соединений по методике вынужденной беспомощности по Porsolt
Соединения	Дозы, мг/кг	Длительность неподвижности
Контроль		342.5±93.09
II	100	174.8±74.44*
III	100	408.4±46.45
IV	100	351.4±44.2
Примечание: * - различие с контрольной группой достоверно при Р<0,05.

Таблица 7. Противогипоксическая активность соединений I-VI
Соединения	Дозы, мг/кг	Число выживш. жив.	Число погибш. жив.	Достоверность
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
I	50	4 (40%)	6 (60%)	Р=0,626
Контроль		1 (10%)	9 (90%)
I	100	7 (70%)	3 (30%)	Р=0,022*
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
II	50	1 (10%)	9 (90%)	Р=1,000
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
II	100	9 (90%)	1 (10%)	Р=0,00*
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
III	50	5 (50%)	5 (50%)	Р=0,05*
Контроль		1 (10%)	9 (90%)
III	100	2 (20%)	8 (80%)	Р=1,000
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
IV	50	7 (70%)	3 (30%)	Р=0,072
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
IV	100	9 (90%)	1 (10%)	Р=0,05*
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
V	50	3 (30%)	7 (70%)	Р=0,626
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
V	100	2 (20%)	8 (80%)	Р=1,000
Контроль		1 (10%)	9 (90%)
VI	50	2 (20%)	8 (80%)	Р=0,731
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
VI	100	3 (30%)	7 (70%)	Р=0,731
Контроль		2 (20%)	8 (80%)
Мексидол	100	8 (80%)	2 (20%)	Р=0,05
Примечание * - различие с контролем достоверно.

Таблица 8. Антиамнестическое действие веществ II и III по методике шоковой амнезии условного рефлекса пассивного избегания
Группы животных	Дозы, мг/кг	Отношение числа животных, вошедших в темную камеру, к их общему числу	Латентный период захода в темную камеру (сек)	Длительность пребывания в темной камере(сек)
Чистый контроль (без наказания и МЭШ)	-	10/10 (100%)	14,72±4,31	131,52±27,74
Пассивный контроль (наказание, без МЭШ)	-	2/10 (20%)*	169,42±23,75*	10,64±8,71
Активный контроль (наказание + МЭШ)	-	8/10 (80%)&	30,52+12,96&	138,75±19,24&
Наказание + МЭШ + соединение II	100	3/10 (30%)*#	103,25±32,99*#&	71,25±35,06*#&
Наказание + МЭШ + соединение III	100	3/10 (30%)*#	88,45±28,89*#&	87,63±23,77*#&
Наказание + МЭШ + Мексидол	100	4/10 (40%)*#	77,34+19,84*#&	74,28±22,14*#&
Наказание + МЭШ + соединение I	100	6/10 (60%)	55,21±22,63&	69,38±18,21*#&
Наказание + МЭШ + соединение IY	100	5/10 (50%)*	72,5±18,39*&	107,3±37,54&
Наказание + МЭШ + соединение Y	100	5/10 (50%)*	63,45±34,76&	97,35±25,56&
Наказание + МЭШ + соединение YI	100	6/10 (60%)	64,6+18,29*#&	101,3±33,17&
Примечание: * - различие с группой чистого контроля достоверно при Р<0,05; & - различие с группой пассивного контроля достоверно при Р<0,05; # - различие с группой активною контроля достоверно при Р<0,05

Таблица 9. Антиоксидантная активность соединений
Соединения	Уровень малонового диальдегида, нмоль/г Hb
Контроль	5.4±0.08
I	3.9±0.07
II	4.3±0.09*
III	4.4±0.07*
IV	4.1±0.06*
V	4.2±0.08
VI	3.8±0.09
* Р<0,05 - уровень достоверности по отношению к контролю.
Таблица 10. Острая токсичность соединений
Соединения	ЛД₅₀, мг/кг
I	>1000
II	898.0279 (758.8381÷1062.749)
III	984.1248 (800.222÷1210.291)
IV	1057.201 (848.7498÷1316.847)
V	>1000
VI	>1000
Мексидол	820.18 (625.65÷1025.24)

Claims

1. Фармацевтически приемлемые соли 2-этил-6-метил-3-оксипиридина с органическими карбоновыми кислотами общей формулы 1-VI:

где R=-CH2-OH (I);

R=-CH2-COOH (II);

R=-(CH2)3-COOH (III);

R=-(CH2)4-COOH (IV);

R=-CH(OH)-CH(OH)-COOH (V);

R=-CH(NH2)-CH2-COOH(VI),

обладающие анксиолитической, антидепрессивной, противогипоксической, антиамнестической и антиоксидантной активностью и имеющие при этом меньшую токсичность.

2. Способ получения солей по п.1, включающий взаимодействие 2-этил-6-метил-3-оксипиридина с органической карбоновой кислотой в среде спирта при перемешивании реагентов и кипячении, с последующей отгонкой растворителя охлаждением остатка и перекристаллизацией выпавшего целевого продукта.

3. Фармацевтическая композиция, обладающая анксиолитической, антидепрессивной, противогипоксической, антиамнестической и антиоксидантной активностью и содержащая соль по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.