RU2272807C2

RU2272807C2 - Новые производные амидинов, их получение и их использование в качестве лекарственных средств

Info

Publication number: RU2272807C2
Application number: RU2002115868/04A
Authority: RU
Inventors: ДЕ ЛАССОНЬЕР Пьер-Этьенн ШАБРИЕ (FR); ДЕ ЛАССОНЬЕР Пьер-Этьенн ШАБРИЕ; Джеремиа ХАРНЕТТ (FR); Джеремиа Харнетт
Original assignee: Сосьете Де Консей Де Решерш Э Д`Аппликасьон Сьентифик (С.К.Р.А.С.)
Priority date: 1999-11-16
Filing date: 2000-11-15
Publication date: 2006-03-27
Also published as: US20040225008A1; EP1233957B1; HUP0203557A2; PL355677A1; FR2801053A1; JP2003514811A; WO2001036407A1; US7019025B2; ATE318265T1; CA2391598A1; ES2258984T3; CZ20021645A3; RU2002115868A; US6770669B1; AU1712601A; EP1233957A1; DE60026161T2; HUP0203557A3; DE60026161D1; FR2801053B1

Abstract

Изобретение относится к новым производным амидинов общей формулы I:

в которой R¹ обозначает алкил; R² обозначает алкил, алкенил, алкинил или цианоалкил; R³ обозначает водород; n обозначает 0 или 1; Х обозначает -(СН₂)_m-, где m есть 0 или 1; А обозначает гетероциклический 5-членный арильный радикал, содержащий атом S; или к солям этих соединений, их получению и их использованию в качестве лекарственных средств. Более конкретно, оно относится к применению названных производных для получения лекарственного средства, предназначенного для ингибирования NO-синтаз (NOS) и/или моноаминооксидаз (МАО). 3 н. и 3 з.п. ф-лы.

Description

Настоящее изобретение относится к новым производным амидинов, их получению и их использованию в качестве лекарственных средств. Более конкретно, оно относится к применению названных производных для получения лекарственных средств, предназначенных для ингибирования NO-синтаз (NOS) и/или моноаминооксидаз (МАО).

С учетом потенциальной роли NOS и МАО в физиопатологии описанные новые производные, отвечающие общей формуле I, могут оказывать благотворное или благоприятное влияние на лечение патологий, в которые вовлечены два названных фермента. Речь, в частности, идет о следующих патологиях:

- расстройства центральной или периферической нервной системы, такие, например, как неврологические, из которых можно, в частности, назвать болезнь Паркинсона, травмы головного или спинного мозга, размягчение головного мозга, субарахноидальное кровоизлияние, эпилепсия, старение, старческое слабоумие, болезнь Альцгеймера, хорея Гентингтона, боковой амиотрофический склероз, периферические невропатии, боль;

- шизофрения, депрессии, психозы;

- нарушения памяти и настроения;

- патологии такого рода, как мигрень;

- нарушения поведения, булимия и анорексия;

- аутоиммунные и вирусные заболевания, такие, например, как волчанка, СПИД, паразитарные и вирусные инфекции, диабет и его осложнения (в частности, обусловленная диабетом импотенция), рассеянный склероз;

- наркотическая зависимость;

- патологии воспалительного и пролиферативного характера;

- и, в более общем случае, все патологии, характеризующиеся избыточной продукцией NOS и/или участием МАО.

Существуют экспериментальные свидетельства, подтверждающие участие NOS (J. Med. Chem. (1995), 38, 4343-4362), а также участие МАО (Goodman & Gilman's: The pharmacological basis of therapeutics, 9^th ed., 1995, 431-519) в совокупности названных патологий.

Авторами изобретения уже описаны в предыдущих патентах ингибиторы NO-синтаз и их применение (US 5081148, US 5360925). В патентной заявке РСТ WO 95/05363 описаны некоторые производные амидинов и их применение в качестве ингибиторов NO-синтаз. Заявитель сам несколько позднее описывает другие производные амидинов, которые ингибируют NO-синтазы и/или перехватывают реактивные формы кислорода (ROS, т.е. Reactive oxygen species) (см. в частности патентные заявки РСТ WO 98/42696, WO 98/58934, WO 00/02860, WO 00/17190 и WO 00/17191).

В настоящее время заявителем неожиданным образом обнаружено, что производные амидинов, отвечающие определенной ниже формуле I, являются ингибиторами NOS и/или МАО.

Соединения по изобретению отвечают общей формуле I

в которой:

R¹ и R² независимо обозначают атом водорода или алкил, циклоалкил, алкенил, алкинил, алленил, алленилалкил, цианоалкил, -(СН₂)_g-Z¹R⁴ или (CH₂)_k-COR⁵;

Z¹ обозначает -О-, -NR⁶-, S или химическую связь;

R⁴ и R⁶ независимо обозначают атом водорода или алкил, алкенил, алленилалкил, алкинил, алкокси или цианоалкил;

R⁵ обозначает алкил, алленил, алленилалкил, алкенил, алкинил, цианоалкил, алкокси или NR⁷R⁸;

R⁷ и R⁸ независимо обозначают атом водорода или алкил, алленил, алленилалкил, алкенил, алкинил, цианоалкил или алкокси; или R¹ и R² образуют вместе с атомом азота неароматический 4-8-членный гетероцикл, в котором элементы цепи выбраны из группы, в которую входят -CH(R⁹)-, NR¹⁰-, -О-, -S-, -СО-, причем гетероцикл может быть замещен одним или несколькими заместителями -(CH₂)_k-Z²R¹¹ или (CH₂)_k-COR¹², например, гетероциклом может быть азетидин, пиперазин, гомопиперазин, 3,5-диоксопиперазин, пиперидин, пирролидин, морфолин или тиоморфолин;

Z² обозначает -О-, -NR¹³-, S или химическую связь;

R¹¹, в тех случаях, когда он присутствует, независимо обозначает атом водорода или алкил, алкенил, алкинил, алкокси, алленил, алленилалкил или цианоалкил;

R¹³, в тех случаях, когда он присутствует, независимо обозначает атом водорода или алкил, алкенил, алкинил, алкокси, алленил, алленилалкил или цианоалкил;

R¹², в тех случаях, когда он присутствует, обозначает алкил, алленил, алленилалкил, алкенил, алкинил, цианоалкил, алкокси или NR¹⁴R¹⁵;

R¹⁴ и R¹⁵, в тех случаях, когда они присутствуют, независимо обозначают атом водорода или алкил, алкокси, алленил, алленилалкил, алкенил, алкинил или цианоалкил;

R⁹ и R¹⁰, в тех случаях, когда они присутствуют, независимо обозначают атом водорода, -(CH₂)_k-Z³R¹⁶ или (СН₂)_k-COR¹⁷;

Z³ обозначает -О-, -NR¹⁸-, S или химическую связь;

R¹⁸ независимо обозначает атом водорода или алкил, алкенил, алленил, алленилалкил, алкинил, алкокси или цианоалкил;

R¹⁶, в тех случаях, когда он присутствует, независимо обозначает атом водорода, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, алленил, алленилалкил или цианоалкил;

R¹⁷, в тех случаях, когда он присутствует, независимо обозначает алкил, алленил, алленилалкил, алкенил, алкинил, цианоалкил, алкокси или NR¹⁹R²⁰;

R¹⁹ и R²⁰, в тех случаях, когда они присутствуют, независимо обозначают атом водорода или алкил, алкокси, алленил, алленилалкил, алкенил, алкинил или цианоалкил;

Х обозначает радикал -СО- или -(СН₂)_m-;

R³ обозначает атом водорода или линейный или разветвленный алкил или алкокси, имеющие от 1 до 6 атомов углерода;

А обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, или карбоциклический или гетероциклический 5- или 6-членный арильный радикал, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из О, S и N, в частности, радикалы тиофен, фуран, пиррол или тиазол, причем арил может быть замещен одной или несколькими группами, выбранными из линейных или разветвленных алкила, алкенила или алкокси, имеющих от 1 до 6 атомов углерода;

g, в тех случаях, когда он присутствует, независимо обозначает целое число от 1 до 6;

m, k и n, в тех случаях, когда они присутствуют, независимо обозначают целые числа от 0 до 6;

при условии, что когда R³ обозначает атом водорода или линейный или разветвленный алкильный радикал, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, R¹ и R² не могут независимо обозначать атом водорода или алкил, a NR¹R², кроме того, не могут быть ни одной из следующих групп: незамещенные пиперидинил, морфолинил, пирролидинил или пиперазинильная группа, возможно замещенная в положении 4 алкильным радикалом, содержащим от 1 до 6 атомов углерода.

Под алкилом, если не дано уточнения, подразумевается линейный или разветвленный алкильный радикал, содержащий от 1 до 6 атомов углерода. Под циклоалкилом, если не дано уточнения, подразумевается моноциклическая углеродная система, содержащая от 3 до 7 атомов углерода. Под алкенилом, если не дано уточнения, подразумевается линейный или разветвленный алкильный радикал, содержащий от 1 до 6 атомов углерода и обладающий по меньшей мере одной ненасыщенностью (двойной связью). Под алкинилом, если не дано уточнения, подразумевается линейный или разветвленный алкильный радикал, содержащий от 1 до 6 атомов углерода и обладающий по меньшей мере одной двойной ненасыщенностью (тройной связью). Под алленилом подразумевается радикал -СН=С=СН₂. Под карбоциклическим или гетероциклическим арилом подразумевается карбоциклическая или гетероциклическая система, содержащая по меньшей мере один ароматический цикл, причем эту систему называют гетероциклической, когда по крайней мере один из образующих ее циклов содержит гетероатом (О, N или S). Под гетероциклом подразумевается моно- или полициклическая система, содержащая по меньшей мере один гетероатом, выбранный из О, S и N и которая может быть насыщенной, частично или полностью ненасыщенной или ароматической. Под галогеналкилом подразумевается алкил, у которого по меньшей мере один из атомов водорода (возможно все атомы водорода) заменен атомом галогена.

Под радикалами алкилтио, алкокси, галогеналкил, галогеналкокси, аминоалкил, алкенил, алкинил, цианоалкил и арилалкил подразумеваются, соответственно, радикалы алкилтио, алкокси, галогеналкил, галогеналкокси, аминоалкил, алкенил, алкинил, цианоалкил и арилалкил, у которых алкил имеет указанное выше значение.

Под гетероциклом подразумеваются, в частности, тиофен, пиррол, пирролидин, фуран, тетрагидрофуран, пиперидин, пиперазин, хинолин, индолин и индол. Под линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода, подразумеваются, в частности, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, вторбутил и третбутил, пентил, неопентил, изопентил, гексил и изогексил. Наконец, под галогеном подразумеваются атомы фтора, хлора, брома или йода.

В некоторых случаях соединения согласно настоящему изобретению могут содержать асимметрические атомы углерода. Благодаря этому соединения согласно настоящему изобретению обладают двумя возможными энантиомерными формами, т.е. конфигурациями "R" и "S". Настоящее изобретение включает обе энантиомерные формы и любые комбинации этих форм, включая рацемические смеси "RS". В целях простоты, когда в структурных формулах не обозначена никакая специфическая конфигурация, следует понимать, что представлены обе энантиомерные формы и их смеси.

Изобретение относится, в частности, к соединениям определенной выше общей формулы I, которые независимо обладают по крайней мере одним из следующих признаков:

- R¹ обозначает определенный выше алкил, и R² обозначает один из определенных выше радикалов: алкил, циклоалкил, алкенил, алкинил, алленил, алленилалкил, цианоалкил, -(CH₂)_g-Z¹R⁴ или (CH₂)_k-COR⁵;

- R¹ и R² образуют вместе с атомом азота неароматический 4-8-членный гетероцикл, в котором элементы цепи выбраны из группы, в которую входят -CH(R⁹)-, NR¹⁰- и -О-;

R⁹ и R¹⁰ независимо обозначают атом водорода или радикал -(CH₂)_k-Z³R¹⁶ или (CH₂)_k-COR¹⁷;

Z³ обозначает химическую связь;

R¹⁶ независимо обозначает атом водорода, алкил, алкенил, алкинил, алленил, алленилалкил или цианоалкил;

R¹⁷ независимо обозначает алкил, алленил, алленилалкил, алкенил, алкинил или цианоалкил;

- n обозначает 0 или 1;

- k обозначает целое число от 1 до 6;

- Х обозначает -(CH₂)_m-, где m есть 0 или 1.

Предпочтительно, соединения определенной выше общей формулы I обладают независимо по крайней мере одним из следующих признаков:

- R¹ обозначает алкил и R² обозначает один из радикалов: алкил, алкенил, алкинил, алленил, алленилалкил или цианоалкил;

- R¹ и R² образуют вместе с атомом азота неароматический 4-8-членный гетероцикл, в котором элементы цепи выбраны из группы, в которую входят -CH(R⁹)- и NR¹⁰-,

R⁹ и R¹⁰ независимо обозначают атом водорода или радикал -(CH₂)_k-Z³R¹⁶,

Z³ обозначает химическую связь,

R¹⁶ независимо обозначает атом водорода или алкил, алкинил или цианоалкил;

- n обозначает 0 или 1;

- k обозначает целое число от 1 до 3;

- Х обозначает -(СН₂)_m-, где m обозначает 0 или 1.

Наиболее предпочтительными соединениями общей формулы I являются:

-N'-(4-{[метил(2-пропинил)амино]метил}фенил)-2-тиофенкарбоксимидамид;

-N'-(4-{[метил(цианометил)амино]метил}фенил)-2-тиофенкарбоксимидамид;

-N'-(4-{[метил(пропил)амино]метил}фенил)-2-тиофенкарбоксимидамид;

-N'-(4-{[метил(3-цианоэтил)амино]метил}фенил)-2-тиофенкарбоксимидамид;

-N'-(4-{[метил(4-пентинил)амино]метил}фенил)-2-тиофенкарбоксимидамид;

и соли этих соединений.

Наконец, особо предпочтительным является N'-(4-{[метил(2-пропинил)амино]метил}фенил)-2-тиофенкарбоксимидамид или соли этого соединения.

Изобретение относится также к соединениям общей формулы I или их фармацевтически приемлемым солям в качестве лекарственных средств. Предметом изобретения являются наряду с этим фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного начала соединение общей формулы I или фармацевтически приемлемую соль соединения общей формулы I, а также применение соединений общей формулы I для получения лекарственных средств, предназначенных для ингибирования NO-синтаз и/или моноамин-оксидаз, в частности, моноамин-оксидазы В.

Соединения общей формулы I могут быть, в частности, использованы для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения одного из следующих расстройств или болезней: болезнь Паркинсона, старческое слабоумие, болезнь Альцгеймера, хорея Гентингтона, боковой амиотрофический склероз, шизофрения, депрессии, психозы.

Под фармацевтически приемлемой солью подразумеваются, в частности, солевые аддукты с неорганическими кислотами, такие как гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, сульфат, фосфат, дифосфат и нитрат, или с органическими кислотами, такие как ацетат, малеат, фумарат, тартрат, сукцинат, цитрат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, памоат и стеарат. В область настоящего изобретения входят также (если они пригодны для использования) соли, образуемые с основаниями, такими как гидроксид натрия или калия. В отношении других примеров фармацевтически приемлемых солей можно обратиться к работе "Salts selection for basic drugs". Int. J. Pharm. (1986), 33, 201-217.

Фармацевтическая композиция может находиться в твердой форме, например, в виде порошков, гранул, таблеток, желатиновых капсул, липосом, суппозиториев. Подходящими твердыми носителями могут быть, например, фосфат кальция, стеарат магния, тальк, сахара, лактоза, декстрин, крахмал, желатин, целлюлоза, метилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза, поливинилпирролидон и воск.

Фармацевтические композиции, содержащие соединение по изобретению, могут быть также представлены в жидкой форме, например, в виде растворов, эмульсий, суспензий или сиропов. Подходящими жидкими носителями могут быть, например, вода, органические растворители, такие как глицерин или гликоли, а также их смеси в различных соотношениях в воде.

Применение лекарственного средства по изобретению может производиться местно, перорально, парентерально, путем внутримышечных инъекций и т.д.

Предполагаемая доза вводимого лекарственного средства по изобретению лежит в пределах от 0,1 мг до 10 г в зависимости от типа используемого активного соединения.

Согласно настоящему изобретению, соединения общей формулы I могут быть получены с помощью описанного ниже способа.

ПОЛУЧЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ

Соединения общей формулы I могут быть получены из промежуточных соединений общей формулы II по схеме 1, где А, X, R¹, R², R³ и n определены выше, a Gp является защитной группой карбаматного типа.

Производные анилинов общей формулы II могут быть подвергнуты конденсации с соединениями общей формулы III, у которых L обозначает уходящую группу (радикал алкокси, алкилтио, сульфоновую кислоту, галогенид, ариловый спирт или тозил), с получением в виде конечных продуктов соединений общей формулы I типа замещенного амидина (см. схему 1). В том случае, например, когда А=тиофен, производные общей формулы II можно подвергнуть конденсации с гидройодидом S-метилтиофен-тиокарбоксамида, полученного по известному из литературы методу (Ann.Chim. (1962), 7, 303-337). Конденсация может быть проведена путем нагревания в спирте (например, в этиловом или изопропиловом спирте), возможно в присутствии ДМФ, при температуре преимущественно в пределах от 50 до 100°С в течение времени как правило от нескольких часов до продолжительности одной ночи.

В том случае, когда А представляет собой амин, конечными соединениями общей формулы I являются гуанидины. Последние могут быть получены, например, конденсацией аминов общей формулы II с производными общей формулы IV или IV. Реагирующие вещества общей формулы IV, у которых L обозначает, например, пиразольный цикл, конденсируют с анилинами общей формулы II в условиях, описанных в литературе (J. Org. Chem. (1992), 57, 2497-2502). Также действуют в отношении реагентов общей формулы IV', в которых L обозначает, например, пиразольный цикл, a Gp обозначает группу tBuOCO (Tetrahedron Lett. (1993) 34(21), 3389-3392), или когда L обозначает группу -N-SO₂-CF₃, а Gp - группу tBuOCO (J.Org.Chem. (1998)63, 3804-3805). В последней стадии синтеза удаление гуанидиновой группы проводят в присутствии сильной кислоты, такой, например, как трифторуксусная кислота.

Получение соединений общей формулы II

Промежуточные соединения общей формулы II получают, например, восстановлением предшественника типа нитро, как это иллюстрируется на приведенной ниже схеме синтеза 2.

Восстановление предшественника типа нитро

Восстановление нитро-функции промежуточных соединений общей формулы V (схема 2), у которых R¹, R², R³, Х и n определены выше, обычно производят путем каталитического гидрирования в этаноле в присутствии Pd/C за исключением случая молекул, чувствительных к этим условиям, в которых нитро-группа селективно восстанавливается, например, нагреванием соединения в подходящем растворителе, таком как этилацетат, с небольшим количеством этанола в присутствии SnCl₂ (J. Heterocyclic Chem. (1987), 24, 927-930; Tetrahedron Letters (1984), 25 (8), 839-842), в присутствии SnCl₂/Zn (Synthesis (1996), 9, 1076-1078) или же с помощью NaBH₄-BiCl₃ (Synth. Com. (1995) 25 (23), 3799-3803) в растворителе, таком как этанол, или с использованием Ni Рэнея с добавкой гидразингидрата (Monatschefte fur Chemie, (1995), 126, 725-732).

Получение соединений общей формулы V

Синтез карбоксамидов

Карбоксамиды общей формулы V (схема 3), у которых R¹, R², R³, m и n определены выше, получают конденсацией кислот общей формулы VI с аминами общей формулы VII (Схема 3) или кислот общей формулы VIII с аминами общей формулы IX (Схема 3бис) в классических условиях пептидного синтеза (M.Bodanszky и A.Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, 145 (Springer Verlag, 1984)), в частности в ТГФ, дихлорметане или ДМФ в присутствии сочетающего агента,такого как дициклогексилкарбодиимид (DCC), 1,1'-карбонил-диимидазол (CDI) (J. Med. Chem. (1992), 35 (23), 4464-4472) или гидрохлорид 1(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид (EDC или WSCI) (John Jones, The chemical synthesis of peptides, 54 (Clarendon Press, Oxford, 1991)).

Синтез аминов общей формулы V

Амины общей формулы V (схема 4), у которых R¹, R², R³, m и n определены выше, могут быть получены в одну стадию конденсацией аминов общей формулы VII с галогенсодержащими производными общей формулы Х (Hal обозначает атом галогена) в присутствии основания, такого, например, как К₂СО₃ и/или триэтиламин, в растворителе, таком, например, как ацетонитрил.

В том случае, когда R¹, R², R³, m и n такие, как определены выше, амины общей формулы V могут быть также получены из галогенсодержащих производных формулы XI (Hal обозначает атом галогена) и аминов общей формулы IX (схема 5) в присутствии основания, такого, например, как К₂СО₃ и/или триэтиламин, в растворителе, таком, например, как ацетонитрил.

Синтез аминов методом восстановительного аминирования

Амины общей формулы V (схема 6), у которых R¹, R², R³, m и n определены выше, могут быть получены конденсацией альдегида общей формулы XII с амином общей формулы VII в восстановительной среде. Реакция протекает в спиртовом растворителе, таком, например, как метанол, в присутствии предварительно активированного порошкообразного молекулярного сита 4 Å и восстанавливающего агента/ такого, например, как NaBH₄ или NaBH₃CN.

Амины общей формулы V (схема 7), у которых R¹, R², R³, и n определены выше, могут быть также получены конденсацией аминов общей формулы IX с альдегидами общей формулы XIII в восстановительной среде в описанных выше условиях.

Если не оговорено особо, все используемые здесь технические и научные термины имеют то же самое значение, какое им обычно придают рядовые специалисты в области, к которой принадлежит настоящее изобретение. Далее, все упомянутые публикации, патентные заявки, все патенты и все остальные ссылки введены в качестве ссылочного материала.

Приведенные ниже примеры даны с целью проиллюстрировать названные выше экспериментальные методы и ни в коем случае не должны рассматриваться как ограничение объема изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: N'-(4-{[метил(2-пропинил)амино]метил}фенил-2тиофенкар-боксимидамид

1.1. N-метил-N-(4-нитробензил)-1-аминопропин-2

К раствору 1 г (1,45 ммоль) N-метилпропаргиламина в 15 мл дихлорметана и 3,1 мл триэтиламина прибавляют по каплям при 0°С 3,72 г (22,0 ммоль) п-нитробензилхлорида в 20 мл дихлорметана. После перемешивания в течение ночи реакционную смесь досуха упаривают в вакууме и разбавляют остаток дихлорметаном и 40 мл насыщенного раствора NaCl. После перемешивания и разделения фаз органическую фазу высушивают над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Целевой продукт получают хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя (20%-ным этилацетатом в гексане) чистые фракции, которые после упаривания дают твердое вещество каштанового цвета с т.пл. 47-49°С, выход 80%.

МН+=205,20.

1.2. 4-{[метил(2-пропинил)амино]метил}анилин

К раствору 0,5 г (2,442 ммоль) промежуточного продукта 1.1 в смеси 12,0 мл ледяной уксусной кислоты и 1,5 мл HCl (12 н.) последовательно добавляют 1,4 г (6,11 ммоль) SnCl₂, 2H₂O и 0,4 г (6,11 ммоль) Zn. Полученную смесь перемешивают 18 час при 20°С и затем подщелачивают добавкой 30%-ного водного раствора NaOH. Продукт дважды экстрагируют 50 мл CH₂Cl₂. Органический раствор промывают 50 мл рассола, высушивают над MgSO₄, фильтруют и упаривают в вакууме. Получают бледно-желтое масло с выходом 90%. Остаток используют в следующей стадии без дальнейшей очистки. МН+=175,10.

1.3. N'-(4-([метил(2-пропинил)амино]метил}фенил-2-тиофенкарбоксимидамид

В 25 мл колбе растворяют 0,315 г (1,80 ммоль) промежуточного продукта 1.2 и 0,77 г (2,70 ммоль) гидройодида S-метил-2-тиофентиокарбоксимида в 15 мл изопропилового спирта. Реакционную смесь перемешивают 20 час при температуре 80°С, упаривают в вакууме и забирают остаток 25 мл смеси (1/1) насыщенного раствора NaHCO₃ и дихлорметана. После разделения фаз органическую фазу промывают 2×25 мл рассола. Органический раствор высушивают над сульфатом магния, фильтруют, упаривают в вакууме и очищают на колонке с силикагелем (элюент: дихлорметан + 3% этанола). Собирают чистые фракции и упаривают в вакууме, получая белое твердое вещество с т.пл. 109-110°С, выход 38%.

МН+=284,10.

Используя последовательность операций, аналогичную описанной в примере 1, могут быть получены следующие соединения.

Пример 2: N'-(4-{[метил(цианометил)амино]метил}фенил)-2-тиофенкарбоксимидамид

(в первой стадии N-метилпропаргиламин заменяют метиламиноацетонитрилом)

Пример 3: N'-(4-{[метил(пропил)амино]метил)фенил)-2-тиофенкарбоксимидамид

(в первой стадии N-метилпропаргиламин заменяют N-метил-N-пропиламином)

Пример 4: N'-(4-{[метил(3-цианоэтил)амино]метил}фенил)-2-тио-фенкарбоксимидамид

(в первой стадии N-метилпропаргиламин заменяют N-метил-β-аланиннитрилом)

Пример 5: N'-(4-{[метил(4-пентинил)амино]метил}фенил-2-тиофенкарбоксимидамид

(в первой стадии N-метилпропаргиламин заменяют N-метил-N-пент-4-иниламином (получен по методу Tetrahedron Letters (1992), 33 (45), 6835-6838 и Heterocycles (1996), 42 (1), 385-396)).

Фармакологическое исследование соединений по изобретению

Изучение влияния на конститутивную нейронную NO-синтазу из мозжечка крысы

Ингибиторную активность соединений по изобретению определяют путем измерения их влияния на превращение с помощью NO-синтазы [³H]L-аргинина в [³H]L-цируллин по модифицированному методу Brendt и Snyder (Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (1990), 87: 682-685). Мозжечки крыс Sprague-Dawley (300 г - Charles River) быстро забирают, препарируют при 4°С и гомогенизируют в некотором объеме экстракционного буфера (50 мМ HEPES, 1 мМ EDTA, рН 7,4, 10 мг/мл пепстатина А, 10 мг/мл лейпептина). После этого гомогенаты центрифугируют в течение 15 мин со скоростью 21000 g при 4°С. Измерение проводят в стеклянных пробирках, в которые помещают по 100 μл инкубационного буфера, содержащего 100 мМ HEPES (рН 7,4), 2 мМ EDTA, 2,5 мМ CaCl₂, 2 мМ восстановленного НАДФ и 10 μг/мл кальмодулина. Добавляют 25 μл раствора, содержащего 100 нМ [³Н]L-аргинина (удельная активность: 56,4 кюри/ммоль, Amersham) и 40 μМ нерадиоактивного L-аргинина. Реакцию инициируют добавкой 50 μл гомогената, в результате чего конечный объем составляет 200 μл (недостающие 25 μл занимает либо вода, либо тестируемый продукт). Через 15 мин реакцию останавливают 2 мл стопорного буфера (20 мМ HEPES, рН 5,5; 2 мМ EDTA). После пропускания образцов через колонку с 1 мл смолы DOWEX количественно измеряют радиоактивность на сцинтилляционном жидкостном спектрометре. Соединение описанного выше примера 1 обладает CI₅₀ ниже 3,5 μМ.

Изучение влияния на связывание специфичного для МАО-В лиганда [³H]Ro 19-6327

Ингибиторную активность соединений изобретения определяют путем измерения их влияния на связь специфичного для МАО-В лиганда [³H]Ro 19-6327.

a) Митохондриальный препарат коры головного мозга крыс

Митохондриальный препарат коры головного мозга крыс приготовляют по методу, описанному Cesura A.M., Galva M.D., Imhof R. и Da Prada M., J. Neurochem. 48 (1987), 170-176. Крыс декапитируют, забирают кору их головного мозга, гомогенизируют ее в 9 объемах 0,32 М сахарозного буфера, рН которого доведен до 7,4 с помощью 5 мМ HEPES и центрифугируют 20 мин при 800 g. Отделяют супернатанты и остатки 2 раза промывают 0,32 М сахарозным буфером как выше. Собранные супернатанты центрифугируют 20 мин при 10000 g. Полученные остатки суспендируют в Трис-буфере (50 мМ Tris, 130 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 0,5 мМ EGTA, 1 мМ MgCl₂, pH 7,4) и центрифугируют 20 мин при 10000 g. Эту операцию повторяют 2 раза и сохраняют конечный остаток, соответствующий митохондриальной фракции, в Трис-буфере при -80°С. Содержание белка в препарате определяют по методу Lowry.

b) Связывание [³Н]Ro 19-6327

Сто микролитров митохондриального препарата (2 мг белка в 1 мл) инкубируют в пробирке Эппендорфа в течение 1 часа при 37°С в присутствии 100 μл [³H]Ro 19-6327 (конечная концентрация 33 нМ) и 100 μл Трис-буфера, содержащего или не содержащего ингибиторы. Реакцию останавливают добавлением в каждую пробирку по 1 мл холодного Трис-буфера, после чего образцы центрифугируют в течение 2 мин при 12000 g. Супернатанты отсасывают и остатки промывают 1 мл Трис-буфера. После этого остатки растворяют в течение 2 ч в 200 μл додецилсульфата натрия (20% мас/об) час при 70°С. Радиоактивность определяют подсчетом сцинтилляций в жидких образцах.

с) Результаты

Соединение описанного выше примера 1 обладает значением Ci₅₀ ниже 25 μМ.

Claims

1. Производные амидинов общей формулы I

в которой R¹ обозначает алкил;

R² обозначает алкил, алкенил, алкинил или цианоалкил;

R³ обозначает водород;

n обозначает 0 или 1;

Х обозначает -(СН₂)_m-, где m есть 0 или 1;

А обозначает гетероциклический 5-членный арильный радикал, содержащий атом S,

или соли этого соединения.

2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что оно представляет собой N^/-(4-{[метил(2-пропинил)амино]метил}фенил)-2-тиофенкарбоксимидамид, или соль этого соединения.

3. Соединение по любому из пп. 1 и 2 в качестве лекарственного средства, обладающего свойством ингибировать NO-синтазу (NOS) и моноаминоксидазу (МАО).

4. Фармацевтическая композиция, обладающая свойством ингибировать NO-синтазу (NOS) и моноаминоксидазу (МАО), содержащая в качестве активного начала соединение по любому из пп. 1 и 2 или фармацевтически приемлемую соль такого соединения и фармацевтически приемлемый носитель.

5. Лекарственное средство для лечения патологий, в которых участвуют NO-синтазы и/или моноаминоксидазы, содержащее соединение по любому из пп. 1-3 и фармацевтически приемлемый носитель.

6. Лекарственное средство по п. 5, отличающееся тем, что патологию, в которой участвуют NO-синтазы и/или моноаминоксидазы, выбирают из болезни Паркинсона, старческого слабоумия, болезни Альцгеймера, хореи Гентингтона, бокового амиотрофического склероза, шизофрении, депрессий, психозов, нарушений памяти и настроения, нарушений поведения, булимии и анорексии.