RU2261595C1 - Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c - Google Patents
Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c Download PDFInfo
- Publication number
- RU2261595C1 RU2261595C1 RU2004101597/15A RU2004101597A RU2261595C1 RU 2261595 C1 RU2261595 C1 RU 2261595C1 RU 2004101597/15 A RU2004101597/15 A RU 2004101597/15A RU 2004101597 A RU2004101597 A RU 2004101597A RU 2261595 C1 RU2261595 C1 RU 2261595C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- preserving
- temperature
- leukocyte
- protective solution
- Prior art date
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и физиологии и касается создания средства - протекторного раствора для консервирования лейкоцитов при температуре переохлаждения и сохранения их в физиологически активном состоянии после выхода из холодового гипобиоза. Раствор содержит в оптимальном соотношении глицерин, оксиметилэтилпиримидина сукцинат, модежель. Его рН составляет 7,0-7,4. Протекторный раствор обеспечивает сохранность высокого процента функционально активных лейкоцитарных клеток. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и физиологии и касается создания протекторного раствора для консервирования лейкоцитов при температуре -10°С.
В качестве прототипа нами использована работа В.М.Трошиной и соавт. "Применение диметилацетамида в качестве криопротектора при замораживании гранулоцитов" (ж. Проблемы гематологии и переливания крови. М.: Медицина. - 1977. - №5. - с.50-54). Существенным недостатком прототипа является то, что предложенный его авторами ограждающий раствор не содержит мембраностабилизирующего и антиоксидантного вещества - оксиметилэтилпиридина сукцината, восстанавливающего нарушенные функции мембран клеток и тормозящего процессы перекисного окисления липидов (Справочник ВИДАЛЬ. Лекарственные препараты в России: Справочник. М.: АстраФармСервис. - 2001. - С.348-349). В прототип не входят также тропный к тканям и клеткам организма человека глицерин и препарат модежель, применяемый для консервирования и ресуспендирования эритроцитов при положительной температуре, состоящий в основном из модифицированного желатина с молекулярной массой 13000-20000 (Аграненко В.А., Тибилова Н.Н. Консервирующие растворы для крови и ее компонентов. Справочник "Кровезаменители, консерванты крови и костного мозга" под ред. Хлябича Г.Н. М.: Медицина. - 1997. - С.144-145).
Техническим результатом настоящего изобретения является создание протекторного раствора для консервирования лейкоцитов при температуре -10°С. Данный протекторный раствор обеспечивает сохранность высокого процента функционально активных лейкоцитарных клеток и может быть использован в учреждениях криобиологического и медицинского профиля, обеспеченных бытовыми электроморозильниками на -10°С.
Технический результат достигается тем, что в предложенный протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°С включены хладоограждающие вещества: глицерин высшего сорта, производное янтарной кислоты - оксиметилэтилпиридина сукцинат (кратко ОМЭПС), обладающий антиоксидантным и мембраностабилизирующим действием, восстанавливает нарушенные функции мембран клеток, тормозит перекисное окисление липидов, Сукцинат участвует в энергетическом обмене клетки (Мецлер Д. Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Т.2. - М.: Мир, 1980. - С.317-319 и с.321-322). В качестве компонента в Протекторный раствор введен модежель - препарат, состоящий из модифицированного желатина с м.м. - 13000-20000, натрия гидроцитрата двузамещенного, натрия гидрокарбоната, натрия хлорида и воды для инъекций (Аграненко В.А., Тибилова Н.Н. Консервирующие растворы для крови и ее компонентов. Справочник "Кровезаменители, консерванты крови и костного мозга" под ред. Хлябича Г.Н. М.: Медицина. - 1997. - С.144-145). Протекторный раствор имеет рН среды 7,0-7,4, самый благоприятный для клеток крови. Ингредиенты в данном растворе тропны лейкоцитарным клеткам и производятся в России.
Пример получения протекторного раствора (№2) для консервирования лейкоцитов при -10°С.
В стерильном боксе при температуре+22°С в мерную колбу на 100 мл наливают 70 мл модежеля, к нему, используя градуированные пипетки, добавляют 7 мл глицерина (ч.д.а.), 6 мл 5% раствора оксиметилпиримидина сукцината при постоянном перемешивании. В смесь по каплям добавляют 1 М раствор гидроксида натрия до достижения рН среды 7,0-7,4. С помощью модежеля доводят объем раствора до 100 мл. Тщательно перемешивают, производят контроль рН среды. рН должен находиться в интервале 7,0-7,4.
Приготовленный таким образом протекторный раствор в количестве 5 мл отправляют на бакконтроль. Все ингредиенты, лабораторная посуда, а также перчатки, халат, бахилы, маска, шапочка лаборанта должны быть стерильными.
Флакон с протекторным раствором герметично укупоривают, этикируют и хранят до применения при комнатной температуре в защищенном от света месте.
При отсутствии бактериальной контаминации протекторный раствор может быть использован для консервирования лейкоцитов при -10°С.
ПРИМЕР ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СРЕДСТВА
Протекторный раствор, включающий глицерин в концентрации 7%, оксиметилэтилпиридина сукцинат 0,3%, модежель до 100 мл, гидроокись натрия 1 М раствор до рН 7,0-7,4, смешивают в равных количествах (1:1) с лейкоцитным концентратом в полимерном контейнере "Компопласт". Смесь выдерживают 20 мин при комнатной температуре и помещают на 24 часа в электрический морозильник (в 3-литровую ванну с этиловым 96° спиртом, охлажденным до -10°С). Следует отметить, что как протекторный раствор, так и смесь его с лейкоконцентратом в соотношении 1:1 при -10°С не замерзают. Согревание смеси осуществляют в 20-литровой водяной ванне, нагретой до +38°С в течение 2-3 секунд при интенсивном покачивании контейнера. Температура оттаянного лейкоконцентрата в контейнере должна быть в пределах +2÷+4°С. Далее исследуют морфологическую сохранность размороженных лейкоцитарных клеток, их жизнеспособность по витальному красителю (с 1% раствором эозина) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом (по Потаповой С.Г. и соавт., ж. Проблемы гематологии и переливания крови. - 1977. - N9. - С 58-59). Результаты выражают в процентах в сравнении с аналогичными показателями форменных элементов до замораживания.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Экспериментальные исследования выполнены на базе лаборатории криофизиологии крови Института физиологии Коми НЦ УрО РАН и консервирования крови и тканей ГУ Кировского НИИ гематологии и переливания крови.
Изучению были подвергнуты три варианта протекторного раствора для лейкоцитного концентрата, различающихся по концентрации включенных в них ингредиентов. Состав растворов представлен в табл. 1.
После смешивания 1:1 с лейкоконцентратом конечная концентрация веществ, которые входят в состав растворов N1, N2 и N3 становилась в 2 раза ниже исходной (табл.2); рН среды оставалась в пределах 7,0-7,4.
При введении лейкоцитов в холодовой гипобиоз (-10°С) изучена их морфологическая сохранность и функциональная активность (табл.3).
Биологическое состояние лейкоцитов и прежде всего нейтрофилов, определяет их фагоцитарная активность. Этот показатель, надежно характеризующий биологическую полноценность клеток, был лучшим после охлаждения-согревания при применении протекторного раствора с оптимальным соотношением его ингредиентов.
Оптимальный протекторный раствор прозрачен, без цвета, без запаха, рН=7,0-7,4, смешивается легко с лейкоцитным концентратом, не вызывает образование конгломератов клеток и обеспечивает их высокую функциональную и морфологическую сохранность до и после охлаждения-согревания. Раствор проявляет четкое криозащитное свойство при охлаждении лейкоцитов с +10°С до -10°С.
Таким образом, разработанный протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре переохлаждения обеспечил сохранность высокого процента функционально активных лейкоцитарных клеток. Он может быть использован в учреждениях криобиологического и медицинского профиля, где имеются обычные бытовые электрохолодильники с морозильными камерами на -10°С.
Claims (1)
- Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°С, характеризующийся тем, что он содержит глицерин, оксиметилэтилпиримидина сукцинат, модежель при следующем соотношении ингредиентов, %:
Глицерин высшего сорта 5,0-9,0 Оксиметилэтилпиримидина сукцинат 0,075-0,3 Модежель до 100 мл Гидроокись натрия 1 М раствор до рН 7,0-7,4
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004101597/15A RU2261595C1 (ru) | 2004-01-19 | 2004-01-19 | Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004101597/15A RU2261595C1 (ru) | 2004-01-19 | 2004-01-19 | Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2004101597A RU2004101597A (ru) | 2005-06-20 |
RU2261595C1 true RU2261595C1 (ru) | 2005-10-10 |
Family
ID=35835596
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004101597/15A RU2261595C1 (ru) | 2004-01-19 | 2004-01-19 | Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2261595C1 (ru) |
-
2004
- 2004-01-19 RU RU2004101597/15A patent/RU2261595C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
АГРАНЕНКО В.А. и др. Консервирующие растворы для крови и ее компонентов. Кровезаменители, консерванты крови и костного мозга. Справочник. /Под ред. Г.Н.Хлябича. М.: Медицина, 1997, с.144-145. * |
ТРОШИНА В.М. и др. Применение диметилацетамида в качестве криопротектора при замораживании гранулоцитов. Проблемы гематологии и переливания крови. М.: Медицина, 1977, №5, с.50-54. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2004101597A (ru) | 2005-06-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Amidi et al. | Effects of cholesterol-loaded cyclodextrin during freezing step of cryopreservation with TCGY extender containing bovine serum albumin on quality of goat spermatozoa | |
ES2588438T3 (es) | Materiales y métodos para la recogida hipotérmica de sangre entera | |
Lomeo et al. | ‘Water‐test’: a simple method to assess sperm‐membrane integrity | |
US8865397B2 (en) | Method for cooling an organ with a transparent cooling gel | |
RU2624214C1 (ru) | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток | |
US20230028798A1 (en) | Adipose tissue cryopreservation protective agent | |
CN103999849B (zh) | 一种哺乳动物睾丸组织冷冻保存的抗冻剂及冷冻-解冻方法 | |
RU2261595C1 (ru) | Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c | |
Şahin et al. | Effect of different extenders and storage periods on motility and fertilization rate of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) semen | |
RU2464991C1 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови | |
CN112752505A (zh) | 用于细胞和/或组织的运输和/或冷冻保存的组合物 | |
RU2301524C1 (ru) | Криоконсервант для лейкоцитов | |
CN115005199A (zh) | 一种自然杀伤细胞的冻存液、冻存方法和应用 | |
CN103238586A (zh) | 一种心肌脏器保存液制备方法 | |
RU2439877C2 (ru) | Криопротекторный раствор для консервирования лейкоцитов при умеренно-низкой температуре (-40°c) | |
RU2240000C2 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания лейкоцитов при субумеренно-низкой температуре | |
RU2303631C1 (ru) | Среда для криоконсервирования мезенхимальных стволовых клеток и биотрансплантат с ее использованием | |
Suprayogi et al. | The Addition of L-Arginine in Capacitation Media to Motility, Viability, and Spermatozoa Capacity of Goats | |
RU2621295C2 (ru) | Раствор для консервирования клеточных взвесей | |
RU2184449C1 (ru) | Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре | |
NL2034495A (en) | Stem cell cryopreservation protective agent, preparation method, and application thereof | |
SU609524A1 (ru) | Раствор дл замораживани костного мозга | |
RU2530149C1 (ru) | Криоконсервант для замораживания ядерных клеток крови | |
RU2816446C1 (ru) | Криопротектор для цельной крови | |
RU2230454C2 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100120 |