RU2184449C1 - Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре - Google Patents
Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре Download PDFInfo
- Publication number
- RU2184449C1 RU2184449C1 RU2001110726/14A RU2001110726A RU2184449C1 RU 2184449 C1 RU2184449 C1 RU 2184449C1 RU 2001110726/14 A RU2001110726/14 A RU 2001110726/14A RU 2001110726 A RU2001110726 A RU 2001110726A RU 2184449 C1 RU2184449 C1 RU 2184449C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- cryoprotective solution
- low temperature
- freeze
- moderate
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к созданию криозащитных растворов для замораживания лейкоцитов. Криозащитный раствор содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину 24,0-36,0%, фумарат натрия 2,4-3,2%, лимонную кислоту 0,03-0,09% и воду для инъекций - до 100 мл. Технический результат: криозащитный раствор обеспечивает высокий процент физиологически полноценных клеток при замораживании лейковзвеси до -50oС. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и физиологии и касается создания средства - криозащитного раствора для замораживания лейкоцитов, в частности человека.
В качестве прототипа использована работа В.А. Аграненко и соавт. (1986) Криоконсервирование гранулоцитов с раствором "Лейкокриодмац" [Аграненко В.А. , Абезгауз Н. Н. , Трошина В.М. и др. Криоконсервирование гранулоцитов с раствором "Лейкокриодмац"// Гематол. и трансфузиол. - 1986. - 12. - с.26-29] .
Существенным недостатком прототипа является то, что диметилацетамид (ДМАЦ), использованный в растворе для криоконсервирования гранулоцитов, обладает выраженной токсичностью. По данным А.А.Цуцаевой [Цуцаева А.А., Аграненко В. А. , Федорова Л.И. и др. Криоконсервирование клеточных суспензий// Под общ. ред. А.А. Цуцаевой. - Киев: Наукова Думка, 1983 - 240 с.], ЛД50 ДМАЦ составляет 4,2 г/кг массы мыши. Кроме того, "Лейкокриодмац" не содержит в своем составе антиоксиданта, который способствует быстрому восстановлению энергетических процессов в клетке после ее выхода из холодового анабиоза. Надо отметить, что "Лейкокриодмац" для замораживания лейкоцитов до -50oС не использовался, т.к. этот метод не был разработан: охлаждение производилось жидким азотом по линейной программе до -196oС. К тому же вещество ДМАЦ в России не производится.
В криозащитном растворе для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре применен отечественный криопротектор - гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина (кратко ГМБТОЭМ), имеющий наименьшую токсичность из всех эффективных протекторов: его ЛД50 равна 15,5±0,6 г/кг массы мыши [Сведенцов Е. П. Получение и криоконсервирование костного мозга для клинического применения// Автореферат дисс. доктора мед. наук. - Л., 1987. - 45 с. ДСП]; по сравнению с ДМАЦ ГМБТОЭМ имеет меньшую токсичность в 3,7 раза. В раствор включен антиоксидант - фумарат натрия. Известно [Несмеянов А.Н., Несмеянов Н.А. Начало органической химии. Книга 1. - М.: Химия, 1974. - с.314-315, с.436-437] , что фумаровая кислота, наряду с лимонной участвует в цикле Кребса, обеспечивающим жизнедеятельность клетки. рН раствора составляет 7,0-7,4, что является физиологической нормой для лейкоцитарных клеток. Для поддержания рН на указанном уровне в раствор введена лимонная кислота. Все ингредиенты, использованные в криозащитном растворе, производятся в РФ.
Пример
Криозащитный раствор, содержащий ГМБТОЭМ в концентрации 30%, фумарат натрия 2,8%, лимонную кислоту 0,06%, воду для инъекций до 100 мл и имеющий рН 7,0-7,4 в отношении 1: 1, смешивают с лейкоконцентратом в полимерном контейнере "Компопласт". Смесь выдерживают 20 мин при комнатной температуре, а затем охлаждают по экспоненциальной программе в электрическом морозильнике в 4-х литровой спиртовой ванне до -28oС в течение 15-20 мин. После этого этапа биоматериал переносят в камеру электроморозильника до -50oС. Термограмму записывают по датчику, установленному в контейнере "Компопласт" с испытуемым раствором. Размораживание проводят в 20-литровой водяной ванне при температуре +38oС в течение 45-60 с при покачивании контейнера 3-4 раза в сек. Далее определяют морфологическую сохранность размороженных лейкоцитов, их жизнеспособность по витальному красителю (проба Шрека) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом. Расчет делают в процентах в сравнении с подобными показателями клеток до замораживания.
Криозащитный раствор, содержащий ГМБТОЭМ в концентрации 30%, фумарат натрия 2,8%, лимонную кислоту 0,06%, воду для инъекций до 100 мл и имеющий рН 7,0-7,4 в отношении 1: 1, смешивают с лейкоконцентратом в полимерном контейнере "Компопласт". Смесь выдерживают 20 мин при комнатной температуре, а затем охлаждают по экспоненциальной программе в электрическом морозильнике в 4-х литровой спиртовой ванне до -28oС в течение 15-20 мин. После этого этапа биоматериал переносят в камеру электроморозильника до -50oС. Термограмму записывают по датчику, установленному в контейнере "Компопласт" с испытуемым раствором. Размораживание проводят в 20-литровой водяной ванне при температуре +38oС в течение 45-60 с при покачивании контейнера 3-4 раза в сек. Далее определяют морфологическую сохранность размороженных лейкоцитов, их жизнеспособность по витальному красителю (проба Шрека) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом. Расчет делают в процентах в сравнении с подобными показателями клеток до замораживания.
Экспериментальные исследования проведены на базе лаборатории криофизиологии крови Института физиологии Коми НЦ УрО РАН и консервирования крови и тканей Кировского НИИ гематологии и переливания крови.
Приготовлены три варианта криозащитных растворов для лейкоконцентрата, различающихся по процентному содержанию входящих в него ингредиентов. Состав растворов представлен в табл. 1.
При смешивании 1:1 с лейкоцитами из крови донора конечная концентрация веществ, входящих в состав растворов 1, 2 и 3, оказывалась в 2 раза ниже исходной (табл. 2), рН среды не изменялась, оставалась в пределах 7,0-7,4.
Охлаждение производят по двухступенчатой экспоненциальной программе: на первом этапе погружают контейнер с лейкоконцентратом в 4-литровую спиртовую ванну, охлажденную до -28oС, через 15-20 мин контейнер с биообъектом вынимают из ванны и помещают в камеру электроморозильника для замораживания до -50oС, на что тратилось 8-10 мин. Контроль замораживания осуществляют по термограмме, записываемой по датчику, находящемуся в контейнере с имитатором-раствором криоконсерванта с конечной концентрацией его ингредиентов. Размораживание производят в 20-литровой водяной ванне, нагретой до +38oС. Контейнер с лейковзвесью отогревают до +2oС - +4oС в течение 45-60 с. Производили исследования лейкоцитов на морфологическую сохранность и функциональную активность (см. табл.3).
Самым надежным тестом биологической полноценности лейкоцитов, в частности нейтрофилов, является определение их фагоцитарной активности. Этот показатель физиологического свойства клеток оказался лучшим после замораживания - оттаивания при оптимальном соотношении ингредиентов криозащитного раствора.
Готовый раствор прозрачен, с легким желтоватым оттенком, без запаха, рН 7,0-7,4. Он хорошо смешивается с взвесью лейкоцитов, предотвращает их конгломерацию, обеспечивает морфологическую сохранность при положительной температуре. Раствор обладает выраженным хладоограждающим действием при замораживании лейкоцитов до -50oС по двухступенчатой экспоненциальной программе: на первом этапе от +20 до -28oС, на втором этапе с -29 до -50oС. Размораживают лейковзвесь в водяной ванне при температуре +38oС в течение 45-60 с до температуры биообъекта в контейнере +2oС - +4oС. После отогрева сохраняются 76±5% физиологически активных лейкоцитарных клеток.
Таким образом, предлагаемый криозащитный раствор позволил сохранить при замораживании лейковзвеси до -50oС высокий процент физиологически полноценных клеток. Он найдет применение в медицинских учреждениях, где имеются отделения длительного хранения крови и электрохолодильники на -50oС.
Claims (1)
- Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно низкой температуре, отличающийся тем, что содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, фумарат натрия, лимонную кислоту и воду при следующем соотношении ингредиентов, %:
Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина - 24,0-36,0
Фумарат натрия - 2,4-3,2
Лимонная кислота - 0,03-0,09
Вода для инъекций - До 100 мл
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001110726/14A RU2184449C1 (ru) | 2001-04-18 | 2001-04-18 | Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001110726/14A RU2184449C1 (ru) | 2001-04-18 | 2001-04-18 | Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2184449C1 true RU2184449C1 (ru) | 2002-07-10 |
Family
ID=20248713
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2001110726/14A RU2184449C1 (ru) | 2001-04-18 | 2001-04-18 | Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2184449C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2816446C1 (ru) * | 2023-10-20 | 2024-03-29 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Кавказский федеральный университет" | Криопротектор для цельной крови |
-
2001
- 2001-04-18 RU RU2001110726/14A patent/RU2184449C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
АГРАНЕНКО В.А. и др. Криоконсервирование гранулоцитов с раствором "Лейкокриодмац". Гематология и трансфузиология. 1986, №12, с. 26-29. * |
АГРАНЕНКО В.А. и др. Кровезаменители, консерванты крови и костного мозга. - М.: Медицина, 1997, с.159-161. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2816446C1 (ru) * | 2023-10-20 | 2024-03-29 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Кавказский федеральный университет" | Криопротектор для цельной крови |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ma et al. | Advanced biomaterials in cell preservation: Hypothermic preservation and cryopreservation | |
Balint et al. | The cryopreservation protocol optimal for progenitor recovery is not optimal for preservation of marrow repopulating ability | |
ES2588438T3 (es) | Materiales y métodos para la recogida hipotérmica de sangre entera | |
Gaucher et al. | Viability of cryopreserved human skin allografts: effects of transport media and cryoprotectant | |
CN112841174A (zh) | 一种用于人脐带间充质干细胞长期保存的冻存液 | |
CN113174362B (zh) | 一种卵巢组织的冻存复苏液 | |
CN105211051A (zh) | 一种培养后的nk细胞的冻存液及其制备方法 | |
CN112889810A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞注射液冻存液及其制备方法 | |
RU2624214C1 (ru) | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток | |
EP1244353A1 (en) | Compositions for the storage of platelets | |
RU2184449C1 (ru) | Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре | |
Hubel et al. | Cryopreservation of cord blood after liquid storage | |
RU2464991C1 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови | |
RU2230454C2 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре | |
CA3107967A1 (en) | Compositions for transportation and/or cryopreservation of cells and/or tissues | |
RU2290808C2 (ru) | Криопротекторный раствор для замораживания лейкоцитов при низкой температуре | |
Fleming et al. | Cryopreservation of hematopoietic stem cells: emerging science, technology and issues | |
Balint et al. | for cryopreservation | |
RU2301524C1 (ru) | Криоконсервант для лейкоцитов | |
RU2439877C2 (ru) | Криопротекторный раствор для консервирования лейкоцитов при умеренно-низкой температуре (-40°c) | |
CN111972397A (zh) | 一种皮肤冷藏保存液及其应用 | |
RU2240000C2 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания лейкоцитов при субумеренно-низкой температуре | |
RU2261595C1 (ru) | Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c | |
RU2711152C1 (ru) | Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80 oC с раствором Гекмолит | |
RU2720771C1 (ru) | Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80оС с раствором Гемжел |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060419 |