RU2238977C1 - Рекомбинантная плазмидная днк рвмс-rt(a)m-1, используемая для экспрессии обратной транскриптазы (rt) вируса иммунодефицита человека в клетках высших эукариот - Google Patents
Рекомбинантная плазмидная днк рвмс-rt(a)m-1, используемая для экспрессии обратной транскриптазы (rt) вируса иммунодефицита человека в клетках высших эукариот Download PDFInfo
- Publication number
- RU2238977C1 RU2238977C1 RU2003116167/13A RU2003116167A RU2238977C1 RU 2238977 C1 RU2238977 C1 RU 2238977C1 RU 2003116167/13 A RU2003116167/13 A RU 2003116167/13A RU 2003116167 A RU2003116167 A RU 2003116167A RU 2238977 C1 RU2238977 C1 RU 2238977C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- human immunodeficiency
- pbmc
- immunodeficiency virus
- plasmid
- reverse transcriptase
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, в частности к генетической инженерии и иммунологии. Предложена рекомбинантная плазмидная ДНК pBMC-RT(A)m-1. Плазмида содержит в своем составе ген обратной транскриптазы вируса иммунодефицита человека типа 1 субтипа А, в последовательности нуклеотидов которого в кодонах с преобладанием аденина и/или тимина аденин и/или тимин частично заменены на гуанин и/или цитозин. Плазмида обеспечивает высокий уровень экспрессии обратной транскриптазы вируса иммунодефицита человека в эукариотических клетках. Предложенная плазмида может быть использована для иммунизации против вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1) субтипа А. 3 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, в частности к генетической инженерии и иммунологии, и может быть использовано для иммунизации против вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1) субтипа А.
Известна рекомбинантная плазмидная ДНК рНР 102, размером 7170 п.о., содержащая BamHI Pst фрагмент ДНК вектора pEL5B, ген бетагалактозидазы Е.соli размером 6400 п.о., а также Pst Bam HI фрагмент ДНК вируса иммунодефицита человека 1 типа, кодирующий полипептид Р102, размером 770 п.о. Данная плазмидная ДНК обеспечивает синтез в бактериальных клетках гибридного полипептида, способного связывать антитела к обратной транскриптазе вируса иммунодефицита человека 1 типа, RU 207152.
Данное техническое решение позволяет осуществить синтез полипептида, кодируемого геном роl вируса иммунодефицита человека 1 типа, в виде гибридного белка в бактериальных клетках. Однако синтез обратной транскриптазы ВИЧ-1 в клетках высших эукариот не осуществляется.
В основу настоящего изобретения положено решение задачи создания рекомбинантной плазмидной ДНК, которая обеспечивает экспрессию обратной транскриптазы (RT), кодируемой геном роl ВИЧ-1 субтипа А в клетках высших эукариот.
Согласно изобретению эта задача решается за счет того, что рекомбинантная плазмидная ДНК pBMC-RT(A)m-1, используемая для экспрессии обратной транскриптазы (RT) вируса иммунодефицита человека в клетках высших эукариот, содержит ген обратной транскриптазы вируса иммунодефицита человека типа 1 субтипа А, представленный на фиг.2.
Сущность изобретения поясняется чертежами, на которых представлены:
на фиг.1 - последовательность нуклеотидов природного гена RT российского варианта субтипа А ВИЧ-1;
на фиг.2 - последовательность нуклеотидов в модифицированном гене RT российского варианта субтипа А ВИЧ-1. Замены оснований подчеркнуты;
на фиг.3 - структура плазмидной ДНК pBMC-RT(A)m-1.
Обозначения: RT(A)mod - фрагмент ДНК, содержащий измененные нуклеотиды, blа - ген беталактамазы, Ori - репликатор, Р - промотор предранних генов белков цитомегаловируса, ВGН - участок терминации транскрипции и полиаденилирования.
Получение плазмидной ДНК pBMC-RT(A)m-1 осуществляется следующим образом. Фрагмент ДНК, кодирующий ген RT ВИЧ-1 субтипа А, выделяли при помощи полимеразной цепной реакции, матрицей в которой служила ДНК из лимфоцитов периферической крови пациента, инфицированного вирусом иммунодефицита человека первого типа субтипа А. Данный фрагмент клонировали в вектор рВМС, получив плазмиду pBMC-RT(A), содержащую природный ген RT. Далее выделяли полученную плазмиду pBMC-RT(A) и вводили в ее последовательность известным способом фрагменты, содержащие последовательность Козака, инициирующий и терминирующие кодоны с получением плазмиды pBMC-RT(A)-1. Далее выделяли плазмиду pBMC-RT(A)-1 и производили в гене RT необходимые замены нуклеотидов известным способом, получив в результате плазмиду pBMC-RT(A)m-1.
Изучение синтеза обратной транскриптазы в эукариотических клетках происходит следующим путем. Культуру клеток 3Т3 мыши трансформировали ДНК плазмид рВМС, pBMC-RT(A)-1 и pBMC-RT(A)m-1 (по 1 микрограмму каждой плазмидной ДНК), после чего клетки инкубировали в течение 48 часов при температуре +37°С и содержании СО2 в воздухе, равном 5%, лизировали и анализировали белки клеточных лизатов с помощью электрофореза в ПААГ с последующим иммуноблоттингом с сывороткой пациента, инфицированного ВИЧ-1 субтипа А. Интенсивность окраски полос, соответствующих белку RT, анализировали с помощью компьютизированной видеосистемы. Установлено, что в культуре клеток, трансформированных плазмидой pBMC-RT(A)m-1, синтез белка RT в 10-15 раз выше, чем в клетках, трансформированных плазмидой pBMC-RT(A)-1.
Использование плазмидной ДНК pBMC-RT(A)m-1 для иммунизации организма иллюстрируется следующим примером. Лабораторным мышам линии BALB/c вводили внутримышечно по 10 и 25 микрограмм плазмидных ДНК pBMC-RT(A)-1 и pBMC-RT(A)m-1 согласно настоящему изобретению. Иммунизацию повторяли через четыре недели и еще через две недели собирали сыворотки крови иммунизированных животных и определяли в них титр антител к рекомбинантному белку RT субтипа А известным способом. Результаты приведены в таблице.
Claims (1)
- Рекомбинантная плазмидная ДНК pBMC-RT(A)m-1, используемая для экспрессии обратной транскриптазы (RT) вируса иммунодефицита человека в клетках высших эукариот, отличающаяся тем, что она содержит ген обратной транскриптазы вируса иммунодефицита человека типа 1 субтипа А, представленный на фиг.2.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003116167/13A RU2238977C1 (ru) | 2003-05-22 | 2003-05-22 | Рекомбинантная плазмидная днк рвмс-rt(a)m-1, используемая для экспрессии обратной транскриптазы (rt) вируса иммунодефицита человека в клетках высших эукариот |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003116167/13A RU2238977C1 (ru) | 2003-05-22 | 2003-05-22 | Рекомбинантная плазмидная днк рвмс-rt(a)m-1, используемая для экспрессии обратной транскриптазы (rt) вируса иммунодефицита человека в клетках высших эукариот |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2238977C1 true RU2238977C1 (ru) | 2004-10-27 |
RU2003116167A RU2003116167A (ru) | 2004-12-10 |
Family
ID=33538036
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003116167/13A RU2238977C1 (ru) | 2003-05-22 | 2003-05-22 | Рекомбинантная плазмидная днк рвмс-rt(a)m-1, используемая для экспрессии обратной транскриптазы (rt) вируса иммунодефицита человека в клетках высших эукариот |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2238977C1 (ru) |
-
2003
- 2003-05-22 RU RU2003116167/13A patent/RU2238977C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
DATABASE NCBI (MEDLINE) SEQUENCE VIEWER AF413987, HIV-1 ISOLATE 98UA0116 FROM UKRAINE, 18.02.2002. U 2071502, 10.01.1997. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111603557A (zh) | 一种包膜替换型病毒载体疫苗及其构建方法 | |
Sandefur et al. | Mapping and characterization of the N-terminal I domain of human immunodeficiency virus type 1 Pr55Gag | |
Sathaliyawala et al. | Assembly of human immunodeficiency virus (HIV) antigens on bacteriophage T4: a novel in vitro approach to construct multicomponent HIV vaccines | |
EP1328653B1 (en) | Highly expressible genes | |
Ahmed et al. | The HTLV-I Rex response element mediates a novel form of mRNA polyadenylation | |
KR20220154114A (ko) | 백신 및 SARS-CoV2에 대한 면역 반응을 유도하기 위한 그의 용도 | |
Tusup et al. | Design of in vitro transcribed mRNA vectors for research and therapy | |
CN110950934B (zh) | 一种腺相关病毒衣壳蛋白、载体及其构建方法与应用 | |
KR20160102024A (ko) | 아데노바이러스 및 상응하는 플라스미드의 제조 방법 | |
CN112575008A (zh) | 编码新型冠状病毒的结构蛋白的核酸分子以及新型冠状病毒疫苗 | |
CN1653085A (zh) | Hiv调节/辅助蛋白的融合蛋白 | |
CN112442514B (zh) | 慢病毒包装载体系统、慢病毒及其构建方法、试剂盒 | |
WO2023227124A1 (zh) | 一种构建mRNA体外转录模板的骨架 | |
US20210024586A1 (en) | Human papillomavirus vaccines and uses of the same | |
JPH06509237A (ja) | ワクチンとしてのネコ白血病ウィルスgp70からの融合蛋白質 | |
RU2238977C1 (ru) | Рекомбинантная плазмидная днк рвмс-rt(a)m-1, используемая для экспрессии обратной транскриптазы (rt) вируса иммунодефицита человека в клетках высших эукариот | |
WO1994002612A1 (en) | Anti-feline immunodeficiency virus (fiv) vaccines | |
RU2229518C1 (ru) | Рекомбинантная плазмидная днк рвмс-nef(a)m-1, экспрессирующая белок nef вируса иммунодефицита человека типа 1 в эукариотических клетках | |
RU2241752C1 (ru) | Рекомбинантная плазмидная днк pbmc-gag(a)mod для экспрессии белка gag вируса иммунодефицита человека в эукариотических клетках | |
RU2227161C1 (ru) | Рекомбинантная плазмидная днк рвмс-qp120(a)m-1 для иммунизации против вируса иммунодефицита человека | |
CN102643335A (zh) | 重组轮状病毒vp6载体蛋白及其制备 | |
KATOH et al. | The bovine leukemia virus X region encodes a trans-activator of its long terminal repeat | |
RU2345138C2 (ru) | ЭКСПРЕССИОННАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК р-ВМС-gag(A)-hum ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ БЕЛКА р55 ВИЧ-1 В КЛЕТКАХ ЭУКАРИОТ | |
Mölder et al. | Elicitation of broad CTL response against HIV-1 by the DNA vaccine encoding artificial multi-component fusion protein MultiHIV—Study in domestic pigs | |
McGirr et al. | Tax and rex sequences of bovine leukaemia virus from globally diverse isolates: rex amino acid sequence more variable than tax |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070523 |