RU2229129C1 - Способ получения сорбента для определения гликозилированных белков крови - Google Patents
Способ получения сорбента для определения гликозилированных белков крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2229129C1 RU2229129C1 RU2002124296/15A RU2002124296A RU2229129C1 RU 2229129 C1 RU2229129 C1 RU 2229129C1 RU 2002124296/15 A RU2002124296/15 A RU 2002124296/15A RU 2002124296 A RU2002124296 A RU 2002124296A RU 2229129 C1 RU2229129 C1 RU 2229129C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sorbent
- solution
- immobilization
- polyvinyl alcohol
- condensing agent
- Prior art date
Links
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к химии и медицине, точнее к способам получения сорбента для определения гликозилированных белков крови. Способ включает стабилизацию поливинилового спирта глютаровым альдегидом и иммобилизацию раствором аминофенилборной кислоты, при этом стабилизированный поливиниловый спирт окисляют перманганатом щелочного металла в щелочной среде, а затем иммобилизацию раствором аминофенилборной кислоты ведут в присутствии конденсирующего агента. Технический результат: сорбент характеризуется высокой разделительной способностью и повышенной устойчивостью к окислению. 2. з.п. ф-лы, 1 табл.
Description
Изобретение относится к области химии, в частности к способам получения аффинных сорбентов и их использованию в хроматографии.
Известен способ получения сорбента для аффинного определения гликозилированного гемоглобина, в соответствии с которым раствор поливинилового спирта (ПВС) окисляют перйодатом натрия и проводят реакцию с раствором глутарового альдегида при рН 1 и температуре 37°С в течение 48 ч. Полученный продукт обрабатывают раствором аминофенилборной кислоты (АФБК) в карбонатном буфере при рН 9,6 в течение 18 часов при комнатной температуре (патент РФ №2093525, опубл. 20.10.97, МПК6 C 08 F 30/60).
Недостатками известного способа являются сложность и длительность процесса, а также способность полученного сорбента окисляться и окрашиваться в процессе использования, что не позволяет осуществлять визуальный контроль разделения гликозилированного и негликозилированного гемоглобина.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ (прототип) получения сорбента, включающий смешение 8-12% раствора поливинилового спирта с 26% водным раствором глутарового альдегида при их объемном соотношении (4,5-5,5):1, добавление концентрированной соляной кислоты до рН 1,0±0,1, обработку полученного носителя раствором аминофенилборной кислоты в фосфатном буфере при рН 7,4±0,5, в течение 10-14 часов, добавление боргидрида натрия в течение 4 часов, добавление хлоргидратагидроксиламина, выдержку в течение 10-14 часов и отделение сорбента. При этом процесс ведут до содержания связанного бора в сорбенте 0,37-0,45 мас.% (патент РФ №2094117, опубл. 1997.10.27, МПК6 B 01 J 20/30).
Недостатками способа-прототипа являются длительность процесса, использование повышенного количества АФБК, а также появление окраски на сорбенте в процессе использования за счет протекания процесса окисления, что не позволяет осуществлять более 20 анализов на 1 мл сорбента.
Задачей изобретения является разработка способа получения сорбента для определения гликозилированных белков крови на основе поливинилового спирта, сшитого глутаровым альдегидом с иммобилизованной аминофенилборной кислотой, характеризующегося высокой разделительной способностью и обладающего повышенной устойчивостью к окислению, а также сокращение расхода АФБК.
Поставленная задача решается описываемым способом получения сорбента, включающим стабилизацию ПВС водным раствором глутарового альдегида, окисление полученного продукта перманганатом щелочного металла в щелочной среде и последующую иммобилизацию раствором аминофенилборной кислоты в присутствии конденсирующего агента.
При этом окисление ПВС, стабилизированного глутаровым альдегидом, проводят перманганатом щелочного металла, взятым в количестве 2,5-12,5 мас.% относительно исходного ПВС в течение 10-14 часов, а модификацию окисленного продукта ведут раствором АФБК (взятой в количестве 3-15 мас.% относительно исходного ПВС) в присутствии конденсирующего агента (1-60 мас.% относительно исходного ПВС) в слабокислой среде.
В качестве конденсирующего агента используют N,N'-дициклогексилкарбодиимид, 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимид мето-п-толуолсульфонат или хлоргидрат, 1,1'-карбодиимидазол, 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид или N-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолин, а для иммобилизации используют раствор аминофенилборной кислоты в воде, органическом растворителе или их смеси.
Выше приведены предпочтительные соотношения между компонентами, конкретные условия проведения процесса иммобилизации определяются, в частности, выбором конденсирующего агента.
Сущность процесса заключается в том, что в результате сшивки поливинилового
спирта [-СН2-СН(ОН)-]n с глутаровым альдегидом СНО-(СН2)3-СНО получают фрагмент матрицы носителя, содержащей, наряду с мостиковыми сшивками глутарового альдегида, остатки глутарового альдегида, прореагировавшего только одной альдегидной группой. Последующее окисление этих альдегидных групп и присутствующих в исходном поливининиловом спирте фрагментов с расположеннными рядом гидроксильными группами, перманганатом щелочного металла приводит к образованию на их месте карбоксильных групп. Затем на носитель иммобилизуют с помощью конденсирующего агента аминофенилборную кислоту:
[-СООН+NН2-(С6Н4)-В(ОН)2 конденсирующий агент]-СО-NН-(С6Н4)-В(ОН)2+Н2O
Заявляемый способ позволяет получить устойчивый к окислению сорбент, который, несмотря на небольшое содержание бора (0,08-0,2 мас.%), позволяет обеспечить высокую разделительную способность при определении гликозилированных белков крови, например, гемоглобина или альбумина, минимизируя при этом затраты АФБК.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1
а. Получение ПВС, стабилизированного глутаровым альдегидом.
К 100 г ПВС-16/1 приливают 1000 мл воды и нагревают при перемешивании при 80°С до полного растворения ПВС, после чего раствор охлаждают при перемешивании.
К раствору ПВС добавляют соляную кислоту до рН 1 и помещают в колбу с мешалкой, а затем начинают интенсивно перемешивать. При интенсивном перемешивании добавляют 350 мл 25% раствора глутарового альдегида. Смесь интенсивно перемешивают 12 часов, затем отфильтровывают полимер, промывают его водой до исчезновения запаха альдегида.
Полученный полимер дробят, промывают водой до нейтральной реакции, растирают на 0,1 мм сите и отфильтровывают через плотный фильтр.
б. Окисление ПВС, стабилизированного глутаровым альдегидом.
К полученному продукту приливают 400 мл 0.1М КМnO4 (3 г) и 150 мл 2М NaOH, перемешивают в течение 2 ч, фильтруют через стеклянный фильтр и промывают водой. Получают 750 мл окисленного ПВС - матрицы сорбента.
в. Модификация окисленного ПВС аминофенилборной кислотой.
15 г АФБК растворяют в 1200 мл воды, раствор подщелачивают до рН 6 и охлаждают до 5°С. В раствор вносят весь полимер, при перемешивании устанавливают рН 6 и вносят 30 г конденсирующего агента 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимида мето-п-толуолсульфоната. Перемешивают 4 часа, затем промывают сорбент водой, 5% содой и снова водой. Содержание бора в полученном образце составляет 0,2%.
Пример 2
Аналогично примеру 1, но используют 3 г АФБК, процесс иммобилизации ведут при рН 4, а в качестве конденсирующего агента используют 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимид гидрохлорид в количестве 10 г. Получают продукт с содержанием бора 0,08%.
Пример 3
Аналогично примеру 1, но для окисления используют NaMnO4, процесс иммобилизации ведут при рН 5, а в качестве конденсирующего агента используют 1,1'-карбонилдиимидазол. Содержание бора 0,15%.
Пример 4
Аналогично примеру 1, но для окисления используют 1667 мл 0,1М КМnO4 (12,5 г), а в качестве конденсирующего агента используют 1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимид. Содержание бора 0,15%.
Пример 5
Аналогично примеру 1, но в качестве конденсирующего агента используют N-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолин. Содержание бора 0,18%.
Пример 6
Аналогично примеру 1, но в качестве конденсирующего агента используют дициклогексилкарбодиимид, а процесс иммобилизации ведут в присутствии 500 мл диметилформамида. Содержание бора в продукте составляет 0,15%.
Пример 7
Аналогично примеру 1, но на стадии иммобилизации АФБК в качестве растворителя используют диоксан в количестве 1000 мл. Содержание бора 0,2%.
Пример 8
Аналогично примеру 1, но на стадии иммобилизации 10 г АФБК моногидрата растворяют в смеси 600 мл воды с 600 мл диметилформамида, подщелачивают до рН 5, охлаждают до 5°С. В раствор вносят весь полимер, при перемешивании устанавливают рН 5 и через каждый час порциями по 5 г вносят 25 г 1,1'-карбонилдиимидазола, поддерживая рН в области 5-6 и температуру реакционной смеси около 5°С. Перемешивают 6 часов и оставляют на ночь. На следующий день промывают сорбент водой, 5% содой и снова водой. Содержание бора 0,14%.
Определение гликозилированного гемоглобина.
Сорбенты, полученные в условиях примеров 1-8, использовали для проведения анализов с использованием стандарта - “Контрольный образец”, 11,0-14,0% HbA (содержание гликозилированного гемоглобина - GHb - 15%).
Для определения гликозилированного гемоглобина в микроколонку, снабженную фильтром, загружают 1 мл полученного сорбента, вносят 10 мл рабочего буфера 1 и дают жидкости стечь в емкость для сбора негликозилированного гемоглобина (емкость А).
На верхний фильтр наносят 0,05 мл исследуемых гемолизатов, выдерживают 1-2 мин, затем в микроколонку вносят 0,05 мл рабочего буфера 1, выдерживают 5-10 мин, добавляют 10 мл рабочего буфера 1 и собирают жидкость в ту же емкость А.
Затем заменяют емкость, вносят в микроколонку 5 мл рабочего буфера 2 и дают жидкости стечь в емкость для сбора гликозилированного гемоглобина (емкость Б).
Рабочий буфер 1: ацетат аммония 0,25 М; хлорид магния 50 мМ; азид натрия 8 мМ, рН 8,1±0,1.
Рабочий буфер 2: ацетат аммония 0,25 М; хлорид магния 50 мМ; сорбитол 0,2 М; азид натрия 8 мМ, рН 8,1±0,1.
Для регенерации сорбента микроколонку промывают 5 мл регенерирующего раствора (уксусная кислота, 0,5%), а затем 5 мл дистиллированной воды (или 5 мл рабочего буфера 1). Микроколонка готова для проведения следующего анализа.
Содержание гликозилированного гемоглобина (GHb) вычисляют по следующей формуле:
%GHb=100×5×D414(Б)/(5×D414(Б)+20,1×D414(A))
или
%GHb=(100×D414(Б)/D414(Б)+4,02 D414(A)),
где: D414(Б) - оптическая плотность фракции Б при 414 нм;
D414(A) - оптическая плотность фракции А при 414 нм;
20,1; 5 - объемы фракции А и Б соответственно;
100 - пересчетный коэффициент для вычисления процентного содержания.
Результаты анализов с использованием стандарта - “Контрольный образец”, 11,0-14,0% HbA1 (GHb 15%) представлены в таблице.
Аналогичным образом получаемый заявляемым способом патент может быть использован для анализа других гликозилированных белков крови, а также сахаров и их производных.
Таким образом, сорбент, получаемый предложенным способом, обладает высокой разделительной способностью при определении гликозилированных белков крови и повышенной устойчивостью к окислению и появлению окраски. Это позволяет использовать визуальный контроль за процессом разделения гемоглобина, а также увеличить количество анализов на единицу (1 мл) сорбента до 50.
При этом способ отличается простотой и позволяет уменьшить расход АФБК почти в 2 раза.
Claims (3)
1. Способ получения сорбента для определения гликозилированных белков крови, включающий стабилизацию поливинилового спирта глютаровым альдегидом и иммобилизацию раствором аминофенилборной кислоты, отличающийся тем, что стабилизированный поливиниловый спирт окисляют перманганатом щелочного металла в щелочной среде, а затем иммобилизацию раствором аминофенилборной кислоты ведут в присутствии конденсирующего агента.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для иммобилизации используют раствор аминофенилборной кислоты в воде, органическом растворителе или их смеси.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве конденсирующего агента используют N,N'-дициклогексилкарбодиимид, 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимид, мето-п-толуолсульфонат или хлоргидрат, 1,1'-карбонилдиимидазол, 1-этил-3(3-диметиламинопропил) карбодиимид или N-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолин.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002124296/15A RU2229129C1 (ru) | 2002-09-12 | 2002-09-12 | Способ получения сорбента для определения гликозилированных белков крови |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002124296/15A RU2229129C1 (ru) | 2002-09-12 | 2002-09-12 | Способ получения сорбента для определения гликозилированных белков крови |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2002124296A RU2002124296A (ru) | 2004-03-20 |
RU2229129C1 true RU2229129C1 (ru) | 2004-05-20 |
Family
ID=32678913
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2002124296/15A RU2229129C1 (ru) | 2002-09-12 | 2002-09-12 | Способ получения сорбента для определения гликозилированных белков крови |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2229129C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10640580B2 (en) | 2015-12-22 | 2020-05-05 | Ddp Specialty Electronic Materials Us 8, Llc | Method of suspension polymerization of droplets distributed in an aqueous medium |
US10654951B2 (en) | 2015-12-22 | 2020-05-19 | Ddp Specialty Electronic Materials Us 8, Llc | Droplets distributed in an aqueous medium |
US10662271B2 (en) | 2015-12-22 | 2020-05-26 | Ddp Specialty Electronic Materials Us 8, Llc | Droplets distributed in an aqueous medium |
-
2002
- 2002-09-12 RU RU2002124296/15A patent/RU2229129C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10640580B2 (en) | 2015-12-22 | 2020-05-05 | Ddp Specialty Electronic Materials Us 8, Llc | Method of suspension polymerization of droplets distributed in an aqueous medium |
US10654951B2 (en) | 2015-12-22 | 2020-05-19 | Ddp Specialty Electronic Materials Us 8, Llc | Droplets distributed in an aqueous medium |
US10662271B2 (en) | 2015-12-22 | 2020-05-26 | Ddp Specialty Electronic Materials Us 8, Llc | Droplets distributed in an aqueous medium |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2002124296A (ru) | 2004-03-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7740763B2 (en) | Capillary-channeled polymeric fiber as solid phase extraction media | |
CN108117544B (zh) | 一种可逆二氧化硫/亚硫酸(氢)盐的荧光探针 | |
EP1979746A2 (en) | Nanoporous substrates for analytical methods | |
Di Bello et al. | Towards a new strategy of a chitosan‐based molecularly imprinted membrane for removal of 4‐nitrophenol in real water samples | |
CN101058058A (zh) | 一种表面固定牛磺酸配基的多孔膜材料、制备方法及其在血脂吸附分离中的应用 | |
RU2229129C1 (ru) | Способ получения сорбента для определения гликозилированных белков крови | |
CN114199845A (zh) | 一种血清素荧光传感器及其智能检测方法与应用 | |
CN109293595B (zh) | 一种检测硫化氢的近红外荧光探针及其制备方法和应用 | |
JP3198147B2 (ja) | 蛋白質と炭素鎖が結合した担体による低分子医薬の分析方法 | |
CN104310522A (zh) | 一种超痕量Hg(Ⅱ)去除方法 | |
CN111778015A (zh) | Zr4+诱导的金属有机凝胶荧光开关传感材料及其制备方法和应用 | |
Guo et al. | Removal of endotoxin from aqueous solutions by affinity membrane | |
Li et al. | Facile synthesis of highly luminescent rod-like terbium-based metal–organic frameworks for sensitive detection of olaquindox | |
RU2094117C1 (ru) | Сорбент и способ его получения | |
JP5505604B2 (ja) | シュウ酸含有溶液からのインジウムの回収方法 | |
RU94008432A (ru) | Гидрогели метилкремневой кислоты с высокой сорбционной емкостью и селективностью по отношению к среднемолекулярным токсическим метаболитам (энтерогель - супер) в качестве адсорбентов и способ их получения | |
RU2108859C1 (ru) | Композиционный гуминокремнеземный сорбент | |
JP3069292B2 (ja) | カテコール化合物及びバニリル化合物の蛍光検出用固相化試薬および検出方法 | |
CN113929842A (zh) | 一种白僵菌素的磁性分子印迹材料及其应用 | |
Chen et al. | Carbazole as fluorescence carrier for preparation of doxycycline sensor | |
RU2192300C1 (ru) | Способ концентрирования и разделения ионов металлов | |
SU1759234A3 (ru) | Способ получени полимерной композиции | |
SU1402938A1 (ru) | Способ определени воды в пластических смазках | |
SU1301482A1 (ru) | Способ получени гидроксида циркони | |
SU891141A1 (ru) | Способ получени активизированного сорбента на основе гидролизного лигнина |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040913 |