RU2223114C2 - Способ получения сибиреязвенного нативного протективного антигена - Google Patents
Способ получения сибиреязвенного нативного протективного антигена Download PDFInfo
- Publication number
- RU2223114C2 RU2223114C2 RU2000117710/13A RU2000117710A RU2223114C2 RU 2223114 C2 RU2223114 C2 RU 2223114C2 RU 2000117710/13 A RU2000117710/13 A RU 2000117710/13A RU 2000117710 A RU2000117710 A RU 2000117710A RU 2223114 C2 RU2223114 C2 RU 2223114C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fermenter
- cultivation
- gas
- protective antigen
- anthracic
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Глубинное анаэробное культивирование штамма В. anthracis на питательной среде, содержащей бикарбонат натрия, осуществляют в ферментере, непрерывно аэрируя культуральную жидкость газом или смесью нескольких газов (аргоном, гелием, азотом и т.п.). При этом нативный протективный антиген можно получать в ферментерах с перемешиванием мешалкой и поверхностной аэрацией культуральной жидкости (КЖ) различными газами или только при барботажном способе перемешивания КЖ. При этом расход газа составляет 0,05-0,40 л/мин на один литр КЖ. Способ позволяет в 2-4 раза повысить выход сибиреязвенного антигена и сократить сроки его накопления на стадии культивирования до 15-20 ч. 2 табл.
Description
Изобретение относится к лекарственным препаратам, содержащим антигены, в частности к производству сибиреязвенных вакцин, и может быть использовано в медицине и ветеринарии.
Уровень техники
Известны способы получения сибиреязвенного нативного протективного антигена (НПА) при глубинном аэробном и анаэробном культивировании В. anthracia /1-4/. Наиболее распространенным способом получения НПА является глубинное анаэробное культивирование некапсулирующих, непротеолитических и авирулентных штаммов. В. anthracis на питательной среде (ПС) с бикарбонатом натрия в атмосфере азота.
Известны способы получения сибиреязвенного нативного протективного антигена (НПА) при глубинном аэробном и анаэробном культивировании В. anthracia /1-4/. Наиболее распространенным способом получения НПА является глубинное анаэробное культивирование некапсулирующих, непротеолитических и авирулентных штаммов. В. anthracis на питательной среде (ПС) с бикарбонатом натрия в атмосфере азота.
Недостатком этого способа являются значительные различия в выходе НПА в аппаратах с различным способом перемешивания жидкости (шуттель-аппараты, аппараты с перемешиванием мешалкой) и в различных по вместимости аппаратах /2-3/.
Прототипом изобретения может служить способ получения НПА /2/ при глубинном анаэробном культивировании штамма В. anthracis на ПС с бикарбонатом натрия в аппарате, снабженном мешалкой в атмосфере азота, который через стерилизующий фильтр подается в ферментер, пока давление не будет равным 0,35 кг/см2. Газ поступает непосредственно к поверхности среды в течение 25 мин. Воздух из полости ферментера удаляется через верхний клапан, после чего клапан закрывается до конца процесса культивирования. Длительность процесса культивирования составляет около 26 ч.
Недостатком этого способа является относительно низкий выход НПА.
Сущность изобретения
Заявляемое изобретение направлено на повышение производительности стадии культивирования за счет увеличения выхода сибиреязвенного НПА в процессе глубинного анаэробного культивирования В. anthracis и сокращения длительности этого процесса.
Заявляемое изобретение направлено на повышение производительности стадии культивирования за счет увеличения выхода сибиреязвенного НПА в процессе глубинного анаэробного культивирования В. anthracis и сокращения длительности этого процесса.
Поставленная цель достигается тем, что предложен способ получения сибиреязвенного НПА, отличающийся тем, что в процессе анаэробного культивирования В. anthracis на ПС, содержащей бикарбонат натрия, культуральную жидкость в ферментере в течение всего процесса культивирования непрерывно аэрируют (продувают, вентилируют) воздухом или любым инертным газом (аргоном, гелием, азотом и т.п.). При атом аэрацию культуральной жидкости осуществляют с удельным расходом газа 0,05-0,040 л/(л•мин).
Указанный способ позволяет в 2-4 раза повысить выход НПА и сократить продолжительность процесса его накоплений до 15-20 ч.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Пример 1. Получение сибиреязвенного НПА в ферментерах 0,5 м3 с перемешиванием мешалкой и поверхностной аэрацией КЖ различными газами.
Пример 1. Получение сибиреязвенного НПА в ферментерах 0,5 м3 с перемешиванием мешалкой и поверхностной аэрацией КЖ различными газами.
В качестве исходной культуры для получения НПА используют эталонный вакцинный, некапсулирующий, непротеолитический сибиреязвенный штамм СТИ-1. Стерильная питательная среда на основе 3%-ного соляно-кислотного гидролизата рыбной муки, кукурузного экстракта с добавлением бикарбоната натрия и других солей вводится в ферментер вместимостью 0,5 м3 (один из вариантов), и в нее добавляется посевной материал в количестве (3-5)•105 спор на 1 мл. Включается мешалка и на поверхность культуральной жидкости (КЖ) в течение всего процесса культивирования подается через стерилизующий фильтр воздух или азот с удельным расходом 0,2 л/(л•мин). Показатели процесса культивирования и накопления НПА в аппарате 0,5 м3 при поверхностной аэрации КЖ воздухом и азотом приведены в табл. 1.
Пример 2. Получение сибиреязвенного НПА в ферментерах 0,5 м3 при барботажном способе перемешивания КЖ воздухом.
Условия проведения культивирования те же, что и в примере 1. Отличие заключается в том, что в ферментере перемешивание мешалкой и поверхностная аэрация заменены на барботажное перемешивание (аэрацию) КЖ воздухом. Показатели процесса культивирования и накопления НПА в аппарате 0,5 м3 при барботажном способе перемешивания КЖ приведены в табл. 2.
Как видно из данных, приведенных в табл. 1 и 2, предложенный способ получения НПА позволяет значительно повысить выход сибиреязвенного антигена (до 1:8) и сократить сроки его накопления на стадии культивирования примерно до l5-20 ч. При этом необходимо отметить, процесс развития культуры СТИ-1 и накопления НПА в ферментере 0,5 м3 при барботажном способе перемешивания КЖ воздухом был несколько продолжительнее и наблюдался более высокий выход биомассы (см. табл. 2), чем в ферментере с перемешиванием мешалкой и поверхностной аэрацией КЖ (см. табл. 1). Это было связано с тем, что в примере 2 в ПС для ферментера 0,5 м3 вносилось несколько больше глюкозы, чем ПС в примере 1.
Полученный при культивировании вакцинного штамма СТИ-1 в ферментерах вместимостью 0,5 м3 НПА концентрировался, и из него готовилась адсорбированная химическая сибиреязвенная вакцина.
Все серии полученной вакцины удовлетворяли требованиям ГИСК им. Л.А.Тарасевича /5/ по содержанию общего азота и сорбента Аl2О3 на одну человекодозу ((35±5) мышиных ИД50), которое составляло в среднем 0,15 и 1,6 мг соответственно.
По физико-химическим свойствам - молекулярному весу, устойчивости к прогреву и к действию протеолитических ферментов, по антигенному составу - полученные препараты не отличались.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Puziss M,. Howard M.B- Studies on Immunity in Anthrax. XI. Control of Сellular Permeability by Bicarbonate Ion in Relation to Protective Antigen Elaboration // J. Bacteriol. - 1963, - Vol. 85, N 1 - P.237-243.
1. Puziss M,. Howard M.B- Studies on Immunity in Anthrax. XI. Control of Сellular Permeability by Bicarbonate Ion in Relation to Protective Antigen Elaboration // J. Bacteriol. - 1963, - Vol. 85, N 1 - P.237-243.
2. Puziss M., Manning L.C., Lynch J.W. et al. Larse-Scale Production of Protective Antigen of Bacillus anthracis in Anaerobic Cultures // Appl. Microbiol. -1963. - Vol. 11, N4, - P.330-334.
3. Wright C.G., Angelety L.H. Effect of the Method of Agitation on the Accumulation of Protective Antigen in Cultures of Bacillus anthracis // Appl. Microbiol. - 1971. - Vol. 22. N1. - P.135-136.
4. Александров Н.И., Гефен H.Е., Езепчук Ю.В. и др. Изучение оптимальных условий образования сибиреязвенного внеклеточного защитного антигена молочной среде //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1962. - 4 - С.9-13.
5. ВФС 42-198ВС-92. Вакцина сибиреязвенная очищенная адсорбированная химическая жидкая, 1992.
Claims (1)
- Способ получения сибиреязвенного нативного протективного антигена при глубинном анаэробном культивировании В. anthracis в ферментере на питательной среде, содержащей бикарбонат натрия, отличающийся тем, что в ферментер в течение всего процесса культивирования на поверхность при постоянном механическом перемешивании мешалкой или под поверхность культуральной жидкости без перемешивания мешалкой непрерывно подают газ или смесь нескольких газов с расходом 0,05-0,40 л/мин на один литр культуральной жидкости для обеспечения в ферментере оптимального уровня массообмена диоксида углерода на границе раздела фаз газ-жидкость.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000117710/13A RU2223114C2 (ru) | 2000-07-04 | 2000-07-04 | Способ получения сибиреязвенного нативного протективного антигена |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000117710/13A RU2223114C2 (ru) | 2000-07-04 | 2000-07-04 | Способ получения сибиреязвенного нативного протективного антигена |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2000117710A RU2000117710A (ru) | 2002-08-27 |
RU2223114C2 true RU2223114C2 (ru) | 2004-02-10 |
Family
ID=32171892
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000117710/13A RU2223114C2 (ru) | 2000-07-04 | 2000-07-04 | Способ получения сибиреязвенного нативного протективного антигена |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2223114C2 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2492241C1 (ru) * | 2012-07-10 | 2013-09-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕКТИВНОГО АНТИГЕНА И БЕЛКА S-СЛОЯ EA1 ИЗ АСПОРОГЕННОГО РЕКОМБИНАНТНОГО ШТАММА B. anthracis 55ΔТПА-1Spo- |
RU2599035C1 (ru) * | 2015-07-13 | 2016-10-10 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Способ получения эритроцитарного сибиреязвенного антигена, способ получения контрольной положительной сыворотки для набора определения антител в сыворотке крови животных, вакцинированных против сибирской язвы, в реакции непрямой гемагглютинации и набор для определения антител |
-
2000
- 2000-07-04 RU RU2000117710/13A patent/RU2223114C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
PUZISS M., MANNING L.C., et al., Zarge-Scale Production of Protective Antigen of Bacillus anthracis in Anaerobic Cultures, Appl. Microbiol, 1963, vol, 11, № 4, р.330-334. Пяткин К.Д. Микробиология. - М.: Медицина, 1971, с.64 и 65. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2492241C1 (ru) * | 2012-07-10 | 2013-09-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕКТИВНОГО АНТИГЕНА И БЕЛКА S-СЛОЯ EA1 ИЗ АСПОРОГЕННОГО РЕКОМБИНАНТНОГО ШТАММА B. anthracis 55ΔТПА-1Spo- |
RU2599035C1 (ru) * | 2015-07-13 | 2016-10-10 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Способ получения эритроцитарного сибиреязвенного антигена, способ получения контрольной положительной сыворотки для набора определения антител в сыворотке крови животных, вакцинированных против сибирской язвы, в реакции непрямой гемагглютинации и набор для определения антител |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0983342B1 (en) | Culture medium with soy bean extract as aminoacid source and no protein complexes of animal origin | |
JP4917087B2 (ja) | ジフテリア毒素生産のための発酵方法 | |
JP2022024051A (ja) | 微生物の改善された発酵プロセス | |
CN109153966A (zh) | 生产丙烯酰胺的生物技术方法及相关新菌株 | |
CN107119103A (zh) | 一种厌氧产氢菌与好氧菌呼吸互作好氧产氢方法 | |
RU2223114C2 (ru) | Способ получения сибиреязвенного нативного протективного антигена | |
CN102876745A (zh) | 一种发酵生产利普司他汀的方法 | |
CN105925517B (zh) | 马链球菌兽疫亚种无血清厌氧高密度发酵培养工艺 | |
US11149293B2 (en) | Fermentation method for producing gellan gum | |
US9284526B2 (en) | Culture medium with yeast or soy bean extract as amino acid source and no protein complexes of animal origin | |
CN113174342B (zh) | 高效降解氨基甲酸乙酯的菌株及其应用 | |
CN113337417B (zh) | 一种高效降解氨基甲酸乙酯的农杆菌及其应用 | |
TW200303363A (en) | Process to prepare and isolate geldanamycin | |
RU2085212C1 (ru) | Способ изготовления единого бруцеллезного антигена для ра, рск и рдск | |
EP1074612A1 (en) | Use of vegetal peptones for DNA vaccine production | |
RU2198921C2 (ru) | Способ получения нативной споровой суспензии для приготовления сибиреязвенных вакцин | |
RU2270857C2 (ru) | Среда для выращивания кишечной палочки и способ получения колибактериозного анатоксина | |
SI9600120A (en) | New and improved fermentative procedure for the production of clavulanic acid and its salts | |
CN1182242C (zh) | 一种生态安全型根瘤菌制剂生产工艺与方法 | |
RU2414929C1 (ru) | Вакцина против пастереллеза животных | |
RU2311199C1 (ru) | Вакцина против пастереллеза животных | |
SU923186A1 (ru) | Способ получени уридин-5 @ -монофосфата и урацила | |
CN118240723A (zh) | 一种通过发酵产生细菌外膜囊泡的方法 | |
RU2340356C2 (ru) | Способ получения сибиреязвенного протективного антигена | |
SU1735369A1 (ru) | Способ получени аминогликозидного антибиотического комплекса |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20121206 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180705 |