RU2180342C2 - Способ получения метилового эфира феофорбида (а) - Google Patents

Способ получения метилового эфира феофорбида (а) Download PDF

Info

Publication number
RU2180342C2
RU2180342C2 RU99106221A RU99106221A RU2180342C2 RU 2180342 C2 RU2180342 C2 RU 2180342C2 RU 99106221 A RU99106221 A RU 99106221A RU 99106221 A RU99106221 A RU 99106221A RU 2180342 C2 RU2180342 C2 RU 2180342C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
chloroform
methanol
pheophorbid
methyl ester
pheophorbide
Prior art date
Application number
RU99106221A
Other languages
English (en)
Other versions
RU99106221A (ru
Inventor
А.В. Кучин
Л.П. Карманова
Д.В. Белых
Original Assignee
Институт химии Коми научного центра УрО РАН
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт химии Коми научного центра УрО РАН filed Critical Институт химии Коми научного центра УрО РАН
Priority to RU99106221A priority Critical patent/RU2180342C2/ru
Publication of RU99106221A publication Critical patent/RU99106221A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2180342C2 publication Critical patent/RU2180342C2/ru

Links

Images

Abstract

Изобретение относится к химии природных соединений, а именно к получению метилового эфира (МЭ) феофорбида (а), променяемого в отраслях медицины, парфюмерии, косметики и др. Способ включает извлечение производных хлорофиллов (а) и (б) из сырья растительного происхождения, их метилирование кипячением в 5%-ном растворе концентрированной серной кислоты в метаноле, хроматографическое разделение МЭ феофорбидов (а) и (б). При этом в качестве сырья используют липофильную фракцию экстрактивных веществ серпухи венценосной (Serratula coronata L.). Извлечение производных хлорофиллов (а) и (б) проводят путем обработки фракции хлороформом с последующим переосаждением производных хлорофиллов (а) и (б) из хлороформенного раствора в гептан. После метилирования осуществляют выделение МЭ феофорбидов (а) и (б) кристаллизацией их из смешанного растворителя: хлороформ - метанол (1 : 1, по объему), а после хроматографического разделения МЭ феофорбидов (а) и (б) проводят очистку МЭ феофорбида (а) кристаллизацией из смешанного растворителя: хлороформ - метанол (1 : 1,5, по объему). Способ позволяет выделить МЭ феофорбида (а) с чистотой 95-97% из липофильной фракции экстрактивных веществ серпухи венценосной (Serratula coronata L.) - отходов производства концентрата экдистероидов. 2 табл.

Description

Изобретение относится к химии природных соединений, а именно к получению метилового эфира феофорбида (а) из растительного сырья для медицины, парфюмерии, косметики и др.
Производные хлорофилла, в частности феофорбид (а) и его метиловый эфир (М. Э. ), используются во всем мире в составе лекарственных препаратов, пищевых и косметических композициях, в качестве биодобавок, пищевых красителей и др. Интерес к получению индивидуальных хлорофиллов и их производных был поначалу связан с важной ролью этих пигментов в природе. Для изучения процесса фотосинтеза было важно установить структуру этих пигментов. Кроме того, производные хлорофилла используются для получения модельных соединений, при помощи которых изучают протекание фотосинтеза. До относительно недавнего времени других применений производные хлорофилла как индивидуальные соединения не находили. Однако оказалось, что производные хлорофилла в силу своих спектральных свойств перспективны как фотосенсибилизаторы (ФС) для фотодинамической терапии (ФДТ), в частности терапии злокачественных новообразований. Эти же вещества могут использоваться и как диагностические препараты в онкологии. Так, натриевая соль феофорбида (а) показала хорошую фотосенсибилизирующую активность. Аргинил-хлорин e6 и лизил-хлорин р6 запатентованы как ФС для ФДТ рака [Pat. 5,378, 835 (01/1995) USA / Nakazato M. Method of Producing Water-soluble Sodium Pheophorbide a. // C.A. - 1993. - V. 117. - 178303y;
R. K. Pandey, F. Y. Shiau, A.B. Sumlin, T.J. Dougherty and K.M. Smith, Structure/activity relationship among photosensitizers related topheophorbides and bacteriopheophorbides. // Bioorg. and Med. Chem. Lett. - 1992. - V.2/5. - p.491-496].
Несмотря на то, что все эти вещества находятся еще на различных стадиях испытания, считается весьма вероятным, что препараты, полученные на основе производных феофорбида (а) и хлоринов e6 и р6, найдут применение в клинической практике наряду с такими препаратами как "Фотофрин" и другие.
Таким образом, поиск новых доступных источников природного сырья и получение из них индивидуальных производных хлорофилла в больших количествах является актуальной задачей.
Известен способ получения смеси метиловых эфиров (МЭ) феофорбидов (а) и (б) из крапивы [Порфирины: структура, свойства, синтез. / Н.С. Ениколопян ред. // М. : Наука, 1985, с. 191; Координационные соединения порфиринов и фталлоцианина. /Березин Б.Д. // М.: Наука, 1978, c.l7; Scheer H., Gross E., Nitsche В., et al. // Photochem. Photobiol, 1986, vol. 43, N 5, pp. 559-571] , включающий экстракцию измельченных листьев крапивы 96%-ным этанолом, получение из экстракта смеси производных хлорофилла - феофитинов (а) и (б) путем обработки экстракта НСl, отделения образовавшихся феофитинов (а) и (б) фильтрованием, промывания их этанолом и высушивания в темноте, последующее метилирование смеси феофитинов (а) и (б) 5%-ным раствором концентрированной серной кислоты в метаноле при перемешивании в течение 15 ч, получение смеси метиловых эфиров (а)+(б) путем разбавления смеси, полученной после метилирования, хлороформом с последующей промывкой и упариванием, растворение полученной после упаривания смеси в метиленхлориде, переосаждение из метиленхлорида в метанол и отделение фильтрованием выпавшего осадка.
Известен также способ получения метилового эфира феофорбида (a) [Scheer Н. , Gross E., Nitsche В., et. al. // Photochem. Photobiol., 1986, vol. 43, 5, pp. 559-571], выбранный нами за прототип, включающий экстракцию измельченных листьев крапивы 96%-ным этанолом, извлечение из экстракта смеси производных хлорофилла - феофитинов (а) и (б) путем обработки экстракта НСl, отделения образовавшихся феофитинов (а) и (б) фильтрованием, промывания их этанолом и высушивания в темноте, последующее метилирование смеси феофитинов кипячением с обратным холодильником в течение 30 мин в 5%-ном растворе концентрированной серной кислоты в метаноле, выделение м. э. феофорбида (а) из смеси М. Э. феофорбидов (а) и (б), путем ее двухстадийного разделения: колоночной хроматографией на силикагеле (элюент - ССl4:ацетон 96:4) и тонкослойной хроматографией (ТСХ) на силикагеле (элюент - ССl4: ацетон 9:1).
Недостатком этого способа является необходимость предварительного получения производных хлорофиллов - феофитинов с минимальным количеством примесей непосредственно из растительного сырья.
Задачей настоящего изобретения является разработка способа выделения М. Э. феофорбида (а) из липофильной фракции - отхода переработки растения серпухи венценосной (Serratula coronata L.) после извлечения экдистероидов.
При переработке серпухи венценосной (Serratula coronata L.), которая используется для получения препаратов на основе экдистероидов [Особенности технологии получения экдистероидов растения Serratula coronata L /Пунегов В. В. , Мишуров В.П., Никитина Л.П. и др.// Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования: Тез. Докл. II Междун. Симпозиума. Пущино, 16-20 июня 1999 г. - Том II. - С.79-81], отходом производства является липофильная фракция, содержащая помимо других веществ производные хлорофилла и которая может быть использована в качестве сырья для получения метилового эфира феофорбида (а).
Способ получения концентрата экдистероидов из серпухи венценосной (Serratula coronata L.) состоит в следующем: наземная часть растения экстрагируется 70%-ным водным этанолом, полученный экстракт упаривается на роторном испарителе при температуре 40-55oС до 20% от исходного объема.
Технический результат заключается в том, что предлагаемое изобретение позволяет выделить М. Э. феофорбида (а) с чистотой 95-97% из липофильной фракции экстрактивных веществ серпухи венценосной (Serratula coronata L.) - отхода производства концентрата экдистероидов.
Общим с выбранным прототипом является то, что способ получения метилового эфира феофорбида (а) включает извлечение производных хлорофиллов (а) и (б) из сырья растительного происхождения, их метилирование кипячением в 5%-ном растворе концентрированной серной кислоты в метаноле, хроматографическое разделение М.Э. феофорбидов (а) и (б).
Отличительным является то, что в качестве сырья используют липофильную фракцию экстрактивных веществ серпухи венценосной (Serratula coronata L.), извлечение производных хлорофиллов (а) и (б) проводят путем обработки фракции хлороформом с последующим переосаждением производных хлорофиллов (а) и (б) из хлороформенного раствора в гептан, после метилирования осуществляют выделение М.Э. феофорбидов (а) и (б) кристаллизацией их из смешанного растворителя: хлороформ - метанол (1:1, по объему), а после хроматографического разделения М. Э. феофорбидов (а) и (б) проводят очистку М.Э. феофорбида (а) кристаллизацией из смешанного растворителя: хлороформ - метанол (1:1.5, по объему).
Получение концентрата экдистероидов серпухи венценосной состоит в следующем. 6 кг наземной части сухого растения экстрагируют 75 л 70% этанола. Полученный экстракт упаривают до 15% от исходного объема. При этом в растворе содержатся экдистероиды, а в осадок выпадает липофильная фракция, содержащая производные хлорофиллов (а) и (б), липиды и бесцветные примеси. Эта неиспользуемая ранее липофильная фракция экстрактивных веществ серпухи венценосной (Serratula coronata L.) после отделения экдистероидов и служит сырьем для получения производных хлорофиллов.
Способ получения М.Э. феофорбида (а) осуществляют следующим образом.
Из липофильной фракции экстрактивных веществ серпухи венценосной (Serratula coronata L.), содержащей производные хлорофилла и примеси, извлекают производные хлорофилла, очищая от примесей. Для этого липофильную фракцию смешивают с хлороформом при расходе хлороформа 800-1000 мл на 100 г фракции, нерастворимые в хлороформе примеси отделяют фильтрованием, а полученный хлороформенный раствор упаривают до объема 50-80 мл, затем приливают гептан (200-300 мл). При этом в осадок выпадают производные хлорофиллов, а в растворе остаются липиды. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают на фильтре гептаном (50-70 мл).
Полученный осадок, содержащий производные хлорофиллов:
феофорбиды (а) и (б) и их этиловые эфиры метилируют 5%-ным раствором концентрированной H2SO4 в метаноле кипячением с обратным холодильником в течение 0,5-1 ч.
Затем выделяют смесь метиловых эфиров. Для этого реакционную смесь охлаждают, разбавляют хлороформом и промывают водой до рН 5-7. Хлороформенный раствор смешивают с метанолом при объемном соотношении 1:1 соответственно, затем смесь упаривают и получают кристаллический порошок, представляющий собой по данным ТСХ и ВЭЖХ смесь М.Э. феофорбидов (а) и (б).
Полученную смесь М.Э. феофорбидов (а) и (б) разделяют колоночной хроматографией на оксиде алюминия L40/250 (элюент бензол-хлороформ 100:5). Выделяют хроматографическую фракцию, состоящую по данным высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) из двух компонентов - М.Э. феофорбида (а) и М.Э. феофорбида (а') в соотношении 4:1.
Выделение М. Э. феофорбида (а) из хроматографической фракции, состоящей из двух компонентов - М.Э. феофорбидов (а) и (а'), осуществляют кристаллизацией из смешанного растворителя хлороформ-метанол при объемном соотношении 1: 1.5. Для этого полученные соединения растворяют в хлороформе, к раствору прибавляют метанол, при этом в осадок выпадает М.Э. феофорбида (а) с чистотой 95-97% (данные ВЭЖХ).
Пример 1
450 г липофильной фракции смешивают с 4,5 л хлороформа, нерастворимые в хлороформе примеси отделяют фильтрованием, полученный хлороформенный раствор упаривают до объема 80 мл, затем приливают 250 мл гептана. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают на фильтре 60 мл гептана.
Полученный осадок (около 15 г), содержащий производные хлорофиллов: феофорбиды (а) и (б) и их этиловые эфиры, метилируют следующим образом: осадок растворяют в смеси 50 мл метанола и 2,5 мл концентрированной H2SO4, раствор кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч.
Реакционную смесь охлаждают, разбавляют 100 мл хлороформа и промывают водой до рН 6. 100 мл хлороформенного раствора смешивают со 100 мл метанола, затем смесь упаривают до 40 мл, получают 3,5 г кристаллического порошка, представляющего собой по данным ТСХ и ВЭЖХ смесь М.Э. феофорбидов (а) и (б).
Полученную смесь М. Э. феофорбидов (а) и (б) разделяют колоночной хроматографией на оксиде алюминия L40/250 (элюент бензол-хлороформ 100:5). Выделяют хроматографическую фракцию (около 850 мг), состоящую по данным ВЭЖХ из двух компонентов - М.Э. феофорбида (а) и М.Э. феофорбида (а') в соотношении 4:1.
Хроматографическую фракцию растворяют в 20 мл хлороформа, к раствору прибавляют 30 мл метанола, при этом в осадок выпадает около 500 мг М.Э. феофорбида (а) с чистотой 95-97% (данные ВЭЖХ).
Пример 2
Выделение М.Э. феофорбида (а) проводят так же, как в примере 1, за исключением хроматографического разделения. Полученную смесь М.Э. феофорбидов (а) и (б) разделяют колоночной хроматографией на силикагеле L40/100 (элюент CCL4 - ацетон 10:1). Выход около 500 мг М.Э. феофорбида (а) с чистотой 95-97% (данные ВЭЖХ).
Figure 00000001

R1=СООСН3, R2=H метиловый эфир феофорбида (а')
R1=H, R2=COOCH3 метиловый эфир феофорбида (а')
Структурная формула метиловых эфиров феофорбида
Анализ метилового эфира феофорбида (а).
ВЭЖХ:
Милихром Al, Silosorb 600; бензол-пропанол 100:7; λ=360 нм.
ЯМР 1H и 13С:
Bruker AM 300, 300 МГц, CDCl3. Величины химических сдвигов в спектрах ЯМР 1Н и 13С полученного М.Э. феофорбида (а) соответствуют литературным данным:
- Electrophylic reactions of chlorin derivatives and a comprehensive collection of 13С data of these products and closely related compounds./ Wray V., Jurgens U., Brocmann Jr.// Tetragedron. (1979), vol. 35, pp.2275-2283;
- Clorophyllonic acid (a) methyl ester, a new chlorophyll (a) related compound, isolated as an antioxidant from short-necked clam Ruditapes philippinarum. / Yamamoto K. , Sakata K., Watanabe N., Brinen L.S. et. al. // Tetragedron. Lett. (1992) vol. 33, pp. 2587-2588.
Химические сдвиги атомов С7 и С10 М. Э. феофорбидов (а) и (а+а') в спектрах ЯМР 13С приведены в табл. 1. Спектр ПМР М.Э. феофорбида (а) представлен в табл. 2.

Claims (1)

  1. Способ получения метилового эфира (МЭ) феофорбида (а), включающий извлечение производных хлорофиллов (а) и (б) из сырья растительного происхождения, их метилирование кипячением в 5%-ном растворе концентрированной серной кислоты в метаноле, хроматографическое разделение МЭ феофорбидов (а) и (б), отличающийся тем, что в качестве сырья используют липофильную фракцию экстрактивных веществ серпухи венценосной (Serratula coronata L. ), извлечение производных хлорофиллов (а) и (б) проводят путем обработки фракции хлороформом с последующим переосаждением производных хлорофиллов (а) и (б) из хлороформенного раствора в гептан, после метилирования осуществляют выделение МЭ феофорбидов (а) и (б) кристаллизацией из смешанного растворителя: хлороформ-метанол (1: 1, по объему), а после хроматографического разделения МЭ феофорбидов (а) и (б) проводят очистку МЭ феофорбида (а) кристаллизацией из смешанного растворителя: хлороформ-метанол (1: 1,5 по объему).
RU99106221A 1999-03-24 1999-03-24 Способ получения метилового эфира феофорбида (а) RU2180342C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99106221A RU2180342C2 (ru) 1999-03-24 1999-03-24 Способ получения метилового эфира феофорбида (а)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99106221A RU2180342C2 (ru) 1999-03-24 1999-03-24 Способ получения метилового эфира феофорбида (а)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU99106221A RU99106221A (ru) 2001-03-20
RU2180342C2 true RU2180342C2 (ru) 2002-03-10

Family

ID=20217737

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU99106221A RU2180342C2 (ru) 1999-03-24 1999-03-24 Способ получения метилового эфира феофорбида (а)

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2180342C2 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2490273C1 (ru) * 2012-02-27 2013-08-20 Оскар Иосифович Койфман Способ получения метилфеофорбида (а)
RU2496813C2 (ru) * 2011-12-22 2013-10-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханский государственный технический университет" ФГБОУ ВПО АГТУ Способ получения хлорофилла из высших водных растений
RU2673888C1 (ru) * 2018-03-01 2018-12-03 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ивановский государственный химико-технологический университет" (ИГХТУ) ПРОИЗВОДНЫЕ ХЛОРОФИЛЛА α, МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ФРАГМЕНТАМИ МИРИСТИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Sherr H., Gross E., Nitsche B., et al. Photochem. Photobid., 1986, vol. 43. № 5, pp. 559-571. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2496813C2 (ru) * 2011-12-22 2013-10-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханский государственный технический университет" ФГБОУ ВПО АГТУ Способ получения хлорофилла из высших водных растений
RU2490273C1 (ru) * 2012-02-27 2013-08-20 Оскар Иосифович Койфман Способ получения метилфеофорбида (а)
RU2673888C1 (ru) * 2018-03-01 2018-12-03 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ивановский государственный химико-технологический университет" (ИГХТУ) ПРОИЗВОДНЫЕ ХЛОРОФИЛЛА α, МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ФРАГМЕНТАМИ МИРИСТИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0210785B1 (en) Process for obtaining proanthocyanidine a2, pharmaceutical compositions and their therapeutic use
CN102229632B (zh) 矢车菊-3-o-葡萄糖苷的制备方法
EP0426998A2 (fr) Procédé d'obtention d'isoflavones
PL173993B1 (pl) Sposób otrzymywania 10-dezacetylobakatyny III
WO2010076879A1 (ja) 硫酸化c-配糖体及びその単離方法並びに合成方法
CN105585571A (zh) 一种周边单取代的酞菁锌配合物及其阿霉素偶联物
KR101180695B1 (ko) 클로로필 추출물로부터 고순도 클로로필과 클로린 e6의 제조방법
CN101092421A (zh) 一种芝麻素提取新工艺
RU2180342C2 (ru) Способ получения метилового эфира феофорбида (а)
CN102351811B (zh) 一枝蒿酮酸酯类衍生物及其制备方法和用途
KR19980044054A (ko) 신규한 트리테르펜 글리코사이드 화합물, 그의 제조방법 및 그를 함유하는 항암제 조성물
CN1022562C (zh) 一种消瘤药——甲硝唑氨酸的合成方法
RU2330037C1 (ru) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХЛОРИНА e6
CN109575061B (zh) 一种水溶性的抗癌光敏剂及其制备和应用
RU2144538C1 (ru) Способ получения водорастворимых хлоринов
CA2093914C (en) Antineoplastic drug of plant extraction and process for the preparation thereof
FI101042B (fi) Menetelmä kasviperäisten, antineoplastisten, kemoterapeuttisten aineid en valmistamiseksi
CN110835315A (zh) 一种枸杞红素的制备方法
CN105037313B (zh) 一种分离杨梅树皮中杨梅苷和儿茶素类化合物的方法
CN1356974A (zh) 皮肤增白剂
KR20190141118A (ko) 클로로필 함유 천연물로부터 고순도 페오피틴의 제조방법 및 그 페오피틴을 이용한 클로린 e6, 클로린 e6와 PVP(polyvinylpyrrolidone)의 복합체 제조방법
JP3937188B2 (ja) ルトナリンの製造方法
JP4431301B2 (ja) 癌細胞のアポトーシス誘導剤、その製造方法、それを有効成分とする抗癌剤、食品製剤及び化粧品
CN103012524B (zh) 一种半合成制备漆叶苷的方法
CN103012359A (zh) (2′s)-南五味子木质素j及其制备方法