RU2171580C1 - Штамм гриба trichoderma sp. мг-97, используемый для защиты сеянцев хвойных от фузариозов - Google Patents
Штамм гриба trichoderma sp. мг-97, используемый для защиты сеянцев хвойных от фузариозовInfo
- Publication number
- RU2171580C1 RU2171580C1 RU99126556A RU99126556A RU2171580C1 RU 2171580 C1 RU2171580 C1 RU 2171580C1 RU 99126556 A RU99126556 A RU 99126556A RU 99126556 A RU99126556 A RU 99126556A RU 2171580 C1 RU2171580 C1 RU 2171580C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- trichoderma
- protection
- fungus
- fungus trichoderma
- Prior art date
Links
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 title abstract description 5
- 208000004770 Fusariosis Diseases 0.000 title abstract description 4
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 title description 5
- 241000894007 species Species 0.000 title 1
- 241001557886 Trichoderma sp. Species 0.000 claims abstract description 15
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims abstract description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 4
- 210000004215 spores Anatomy 0.000 abstract description 7
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 abstract description 6
- 244000052769 pathogens Species 0.000 abstract description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003032 phytopathogenic Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 11
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 3
- 229940045184 Malt extract Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 2
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OXOBKZZXZVFOBB-UHFFFAOYSA-N 2-Diphenylmethylpyrrolidine Chemical compound C1CCNC1C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OXOBKZZXZVFOBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000122692 Fusarium avenaceum Species 0.000 description 1
- 241000223192 Fusarium sporotrichioides Species 0.000 description 1
- MQHWFIOJQSCFNM-UHFFFAOYSA-L Magnesium salicylate Chemical compound [Mg+2].OC1=CC=CC=C1C([O-])=O.OC1=CC=CC=C1C([O-])=O MQHWFIOJQSCFNM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000223196 Microdochium nivale Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 1
- HNEGCRMUYSKRRR-IKIFYQGPSA-N Trichodermin Chemical compound C([C@@]12[C@@]3(C)[C@@]4(C)CCC(C)=C[C@H]4O[C@@H]1C[C@H]3OC(=O)C)O2 HNEGCRMUYSKRRR-IKIFYQGPSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000005824 corn Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001340 slower Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000001052 yellow pigment Substances 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к области микробиологии, касается нового штамма Trichoderma sp. МГ-97 и может быть использовано для защиты сеянцев хвойных от фузариозов. Штамм Trichoderma sp. МГ-97 выделен из почвы лесопитомника. Депонирован в коллекции промышленных микроорганизмов под F-765. Штамм обладает высокой антагонистической активностью в отношении фитопатогенных микроорганизмов из рода Fusarium - возбудителей полегания сеянцев хвойных. Штамм гриба Trichoderma sp. МГ-97 используется для защиты сеянцев хвойных от фузариозов. Особенностью штамма является высокая конкурентоспособность и скорость роста. Кроме того, для изолята характерно быстрое накопление биомассы и активное спорообразование. 6 ил.
Description
Изобретение относится к области микробиологии, касается нового штамма гриба Trichoderma МГ-97 и может быть использовано для защиты сеянцев хвойных от фузариозов.
Грибы рода Trichoderma используются в практике защиты растений более 20 лет. Имеющиеся экспериментальные данные свидетельствуют о большом наборе штаммов, используемых в качестве биопродуцента при производстве триходерминов. Однако отсутствие единой оценки комплекса возбудителей болезней растений зачастую создает затруднения в выборе того или иного штамма Trichoderma в отношении конкретного патогена [1, 2].
Учреждениями-разработчиками: ВНИИБМЗР и БелНИИЗРом рекомендованы соответственно штаммы-продуценты Trichoderma harzianum ТФ-17 и Trichoderma lignorum- 205-М-10, обладающие широким спектром борьбы с комплексом болезней овощных культур [3, 4].
В настоящее время микробиологической промышленностью выпускаются триходермины, использующиеся для защиты овощных культур в закрытых и открытых грунтах, и не освоено производство триходерминов для защиты сеянцев хвойных от почвенных патогенов.
Техническим результатом изобретения является штамм гриба Trichoderma sp. МГ-97 ВКПМ F-765, обладающий высокой антагонистической активностью в отношении фитопатогенных микроорганизмов из рода Fusarium - возбудителей полегания сеянцев хвойных.
Технический результат достигается использованием штамма гриба Trichoderma sp. МГ-97 ВКПМ F-765 для защиты сеянцев хвойных от фузариозов. Особенностью штамма является высокая конкурентоспособность и скорость роста. Кроме того, для изолята характерно быстрое накопление биомассы и активное спорообразование.
Предлагается применение этого штамма в качестве биопродуцента для создания на его основе экологически безопасных биопрепаратов.
Штамм выделен из почв Маганского лесопитомника Красноярского края (56o04' с.ш.; 92o42' в.д.) в 1997 году.
Штамм характеризуется следующими признаками:
Морфологические признаки: Формирует относительно медленно растущие колонии, которые достигают 2-3,5 см в диаметре на 4 сутки (при 20oC), цвет воздушного мицелия от белого до слегка сероватого, при температуре выше 30oC наращивании субстратного мицелия замедляется, происходит резкое снижение роста колоний и гриб переходит к стадии конидиегенеза. Спороношение начинается на 5-7 сут., обильное на 12-15 сутки (фиг. 1).
Морфологические признаки: Формирует относительно медленно растущие колонии, которые достигают 2-3,5 см в диаметре на 4 сутки (при 20oC), цвет воздушного мицелия от белого до слегка сероватого, при температуре выше 30oC наращивании субстратного мицелия замедляется, происходит резкое снижение роста колоний и гриб переходит к стадии конидиегенеза. Спороношение начинается на 5-7 сут., обильное на 12-15 сутки (фиг. 1).
При росте на картофельно-декстрозном агаре штамм дает тускло-желтый пигмент (фиг. 2).
Изолят формирует прозрачные гладкостенные гифы до 3-8 мкм в диаметре. Конидиеносцы тоже прозрачные, утолщенные у основания, просто ветвящиеся. Размер 3-4 мкм на большей части. У основания размер главной оси до 6-8 мкм в диаметре. Первичные отростки сравнительно одинаковые по длине, расположены в парах на одинаковом расстоянии. Верхушки конидиеносцев имеют 2-4 отростка. Отростки конидиеносцев формируют мутовки из 6-7 фиалид, иногда могут образовываться комбинации из фиалид и вторичных отростков (фиг. 3).
Конидии варьируют по форме: от яйцевидных до широко эллиптических со слегка заостренными основаниями, зеленоватые. Размеры конидий: 1,5-2,0 x 2,5-4,5 мкм. Очертания конидий шероховатые, с выемкой в середине. Конидии соседних фиалид объединяются в крупные слизистые массы (фиг. 4).
Культуральные признаки:
Хорошо растет на жидкой синтетической среде Чапека; плотных питательных средах: натуральных (сусло-агар и картофельно-декстрозный агар) и полусинтетической мальт-экстракт агар.
Хорошо растет на жидкой синтетической среде Чапека; плотных питательных средах: натуральных (сусло-агар и картофельно-декстрозный агар) и полусинтетической мальт-экстракт агар.
Среда Чапека (г/л): глюкоза - 30; NaNO3 - 3; KH2PO4 - 1; MgSO4 - 0,5; KCl - 0,5; FeSO4 - 0,01.
Сусло-агар: пивное сусло (9oБ) -1 л; агар - 15 г
Мальт - экстракт агар (г/л): мальт-экстракт Difco - 15; агар - 15 г.
Мальт - экстракт агар (г/л): мальт-экстракт Difco - 15; агар - 15 г.
По заключению специалистов Красноярской краевой ветеринарной лаборатории данный штамм авирулентен, нетоксичен, не токсикогенен в отношении теплокровных организмов и не вызывает инфекционных заболеваний.
На фиг. 1-6 представлены следующие иллюстрации:
фиг. 1 - спороношение гриба Trichoderma sp. штамм МГ-97 на мальт-агаре;
фиг. 2 - образование диффузного пигмента гриба Trichoderma sp. штамм МГ- 97;
фиг. 3 - строение конидиеносных форм гриба Trichoderma sp.штамм МГ-97;
фиг. 4 - строение конидий гриба Trichoderma sp. штамм МГ-97;
фиг. 5 - культивирование штамма МГ-97 на среде Захарченко;
фиг. 6 - антибиотическая активность гриба Trichoderma sp. штамм МГ-97.
фиг. 1 - спороношение гриба Trichoderma sp. штамм МГ-97 на мальт-агаре;
фиг. 2 - образование диффузного пигмента гриба Trichoderma sp. штамм МГ- 97;
фиг. 3 - строение конидиеносных форм гриба Trichoderma sp.штамм МГ-97;
фиг. 4 - строение конидий гриба Trichoderma sp. штамм МГ-97;
фиг. 5 - культивирование штамма МГ-97 на среде Захарченко;
фиг. 6 - антибиотическая активность гриба Trichoderma sp. штамм МГ-97.
Реализация использования Trichoderma sp. МГ-97 как продуцента биопрепарата для защиты сеянцев хвойных от полегания.
Пример 1. Технология поверхностного периодического культивирования включает несколько этапов:
Посев гриба производят споровой культурой конидий из расчета 1 x 107 на 1 мл питательной среды. В качестве посевного материала используют споровую культуру штамма, выращенную на косяках с сусло-агаром. Из пробирок делают смыв в колбы со стерильной водой, затем определяют концентрацию конидий в полученной суспензии в камере Горяева или методом Брида; и методом пересчета на весь объем питательной среды используют необходимое количество суспензии для засева. Засев производят в колбы Эрленмейера объемом на 250 мл на 100 мл питательной среды. Для максимального спороношения выращивание производят на оптимизированной среде Захарченко следующего состава (г/л): сахароза - 25,44; кукурузный экстракт - 31,8; KH2PO4 -3,14; MgSO4 - 0,645; культивируют штамм в течение 15 суток при 28oC (фиг.5).
Посев гриба производят споровой культурой конидий из расчета 1 x 107 на 1 мл питательной среды. В качестве посевного материала используют споровую культуру штамма, выращенную на косяках с сусло-агаром. Из пробирок делают смыв в колбы со стерильной водой, затем определяют концентрацию конидий в полученной суспензии в камере Горяева или методом Брида; и методом пересчета на весь объем питательной среды используют необходимое количество суспензии для засева. Засев производят в колбы Эрленмейера объемом на 250 мл на 100 мл питательной среды. Для максимального спороношения выращивание производят на оптимизированной среде Захарченко следующего состава (г/л): сахароза - 25,44; кукурузный экстракт - 31,8; KH2PO4 -3,14; MgSO4 - 0,645; культивируют штамм в течение 15 суток при 28oC (фиг.5).
После окончания культивирования мицелиальную пленку отделяют от питательной среды, высушивают до постоянного веса и измельчают на гомогенизаторе; при такой форме биопрепарата отсутствует питательная среда, на которой выращивался гриб.
Полученный биопрепарат представляет собой сухой порошок темно-зеленого цвета, с титром спор 2 x 1011 спор/г.
Пример 2. Споры Trichoderma sp. МГ-97 с твердой среды засевают в жидкую питательную среду Чапека и культивируют при 28oC. Через 5 и 10 суток культивирования отбирают пробы культуральной жидкости, которые фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор N 8. Затем культуральной жидкостью смачивают стерильные бумажные диски диаметром 5 мм. Высушенные диски раскладывают на питательную среду в чашках Петри, предварительно засеянную "газоном" тест-организмов: Fusarium avenaceum, Fusarium sporotrichiella v. poae, Fusarium momliforme v. lactis; Fusarium nivale, Fusarium gibbosum. Чашки инкубируют в термостате при 26-28oC в течение 5-7 суток. Контролем служат бумажные диски, смоченные стерильной водой.
Отсутствие роста тест-организма вокруг бумажного диска свидетельствует о наличие антибиотических свойств у гриба Trichoderma sp. МГ-97. По оси ординат откладывают зону отсутствия роста тест-организма в мм. Так, все исследуемые возбудители фузариозного полегания сеянцев хвойных обладали средней и высокой чувствительностью к действию метаболитов штамма (фиг. 6).
Таким образом, штамм Trichoderma sp. МГ-97 может быть использован в качестве продуцента биопрепарата триходермина для биологического контроля возбудителей фузариозного полегания сеянцев хвойных.
Источники информации
1. Третьяков А.П., Щербаков Г.Я., Стирманова Н.И. Штамм микромицета Trichoderma lignorum для производства препарата против фитопатогенных грибов: Пат. 2034468 Россия, МКИ6 A 01 N 63/04, C 12 N 1/14 - N 93028450/13. Заявл. 21.06.93, опубл. 10.05.95. Бюл. N 13.
1. Третьяков А.П., Щербаков Г.Я., Стирманова Н.И. Штамм микромицета Trichoderma lignorum для производства препарата против фитопатогенных грибов: Пат. 2034468 Россия, МКИ6 A 01 N 63/04, C 12 N 1/14 - N 93028450/13. Заявл. 21.06.93, опубл. 10.05.95. Бюл. N 13.
2. Kubota Т. Trichoderma harzianum SK-55 fungus, fungicide containin it, and method of manufacture of the same and its use: Patent 5422107 USA, M.KИ. 6 A 01 N 63/00, A 01 N 1/00. Hokkaido Green Kosan, Inc. N 172273; 23.12.1993; N 4-359484.
3. Гринько Н. Н. Применение триходермина в овощеводстве защищенного грунта. - Минск: БелНИИИНТИ. 1992. - 60 с.
4. Штаммы грибов, рекомендуемых для производства препаратов в биолабораториях // Защита растений. - 1989. -N 12. - С. 56-57.
Claims (1)
- Штамм гриба Trichoderma sp. МГ-97 ВКПМ F 765 (Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов), используемый для защиты сеянцев хвойных от фузариозов.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2171580C1 true RU2171580C1 (ru) | 2001-08-10 |
Family
ID=
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475528C2 (ru) * | 2011-03-24 | 2013-02-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | ШТАММ Trichoderma harzianum Rifai - ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА ВИРУСА КОЛЬЦЕВОЙ ПЯТНИСТОСТИ ТАБАКА (Tobacco ringspot virus) |
| MD4249C1 (ru) * | 2012-10-12 | 2014-03-31 | Институт По Защите Растений И Экологического Сельского Хозяйства Анм | Питательная среда для культивирования штамма грибов Trichoderma virens CNMN-FD-13 |
| RU2634415C1 (ru) * | 2016-08-02 | 2017-10-26 | Общество с ограниченной ответственностью "Органик парк" | Штамм гриба Trichoderma asperellum для получения биопрепарата комплексного действия для растениеводства |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475528C2 (ru) * | 2011-03-24 | 2013-02-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | ШТАММ Trichoderma harzianum Rifai - ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА ВИРУСА КОЛЬЦЕВОЙ ПЯТНИСТОСТИ ТАБАКА (Tobacco ringspot virus) |
| MD4249C1 (ru) * | 2012-10-12 | 2014-03-31 | Институт По Защите Растений И Экологического Сельского Хозяйства Анм | Питательная среда для культивирования штамма грибов Trichoderma virens CNMN-FD-13 |
| RU2634415C1 (ru) * | 2016-08-02 | 2017-10-26 | Общество с ограниченной ответственностью "Органик парк" | Штамм гриба Trichoderma asperellum для получения биопрепарата комплексного действия для растениеводства |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fisher et al. | Location of fungal endophytes in tissues of Suaeda fruticosa: a preliminary study | |
| Azcón | Germination and hyphal growth of Glomus mosseae in vitro: effects of rhizosphere bacteria and cell-free culture media | |
| CN103160442B (zh) | 一株对柑橘木虱具强致病力的淡紫拟青霉菌株 | |
| CN104560827B (zh) | 一种防治烟草青枯病的生防放线菌菌株及其应用 | |
| CN105039414B (zh) | 一种防治烟草黑胫病的青霉菌发酵液的制备方法 | |
| CN114164137B (zh) | 一种抗香蕉枯萎病的淀粉酶产色链霉菌及其应用 | |
| CN103382447A (zh) | 一种绿蓝链霉菌Sv-29及其应用 | |
| Costa et al. | Investigations on some of the mechanisms by which bioenhanced mulches can suppress Phytophthora root rot of avocado | |
| CN109735457B (zh) | 一株诱变尖角突脐孢菌及其在防治稗草中的应用 | |
| CN111778174A (zh) | 一种对柑橘砂皮病有抑制作用的枯草芽孢杆菌及其筛选方法 | |
| CN104560740B (zh) | 一株防治油茶象幼虫的金龟子绿僵菌及其应用 | |
| RU2171580C1 (ru) | Штамм гриба trichoderma sp. мг-97, используемый для защиты сеянцев хвойных от фузариозов | |
| Antropova et al. | Report of Quambalaria cyanescens in association with the birch (Betula pendula) | |
| CN110724640B (zh) | 番茄根结线虫生防菌、其制剂及其应用 | |
| CN113046249A (zh) | 一株蜡蚧轮枝菌ll-01及其生防应用 | |
| CN108395994B (zh) | 一株白僵菌及其在防治南方蓝莓蛴螬中的应用 | |
| CN107603904B (zh) | 一种链霉菌及其应用 | |
| Willetts | A comparison between Ophiobolus graminis and Ophiobolus graminis var. avenae | |
| Stewart et al. | Sporulation of Botrytis cinerea in the dark | |
| CN112646733B (zh) | 一种柽柳内生拮抗真菌及其分离方法和应用 | |
| KR100347388B1 (ko) | 토양으로부터 분리한 식물기생성 토양선충에 대한포식능을 갖는 미생물 및 이의 배양방법 | |
| CN115340961B (zh) | 拮抗水稻细菌性条斑病菌的沙阿霉素链霉菌及其应用 | |
| LU502326B1 (en) | Isaria javanica strain for preventing and treating citrus pests and use thereof | |
| CN107603903B (zh) | 一种链霉素及其应用 | |
| AU657279B2 (en) | Inoculum from ectomycorrhizal fungi forming endomycorrhizal infection with herbaceous plants |